KR102512833B1 - 신규 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 - Google Patents

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히로키 시라이
가즈노리 히라야마
나오미 호소가이
히토시 도이하라
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아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

[과제] 암의 진단 및/또는 치료, 특히 유방암 또는 방광암의 진단 및/또는 치료에 유용할 것이 기대되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트, 및 당해 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체를 사용한 진단 수단 및/또는 치료 수단의 제공.
[해결 수단] 서열 번호 8 또는 10으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트, 및 당해 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체.

Description

신규 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트
본 발명은, 신규 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 진단용 및/또는 치료용 조성물, 및 당해 Fab 프래그먼트를 사용하여 암을 진단 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
뮤신 1(Mucin 1: MUC1)은 유선, 기관 및 소화관 등의 상피 조직을 구성하는 상피 세포의 내강측에 발현하는 막 결합형 당단백질이다(Nat. Rev. Cancer, 2004 Jan; 4(1): 45-60.). MUC1은 유방암(Mod. Pathol., 2005 Oct; 18(10): 1295-304.), 폐암(Hum. Pathol., 2008 Jan; 39(1): 126-36.), 대장암(Int. J. Oncol., 2000 Jan; 16(1): 55-64.), 방광암(PLoS One, 2014 Mar; 9(3): e92742.), 피부암(Histopathology, 2000 Sep; 37(3): 218-23.), 갑상선암(J. Pathol., 2003 Jul; 200(3): 357-69.), 위암(J. Pathol., 2000 Mar; 190(4): 437-43.), 췌장암(Int. J. Oncol., 2004 Jan; 24(1): 107-13.), 신장암(Mod. Pathol., 2004 Feb; 17(2): 180-8.), 난소암(Gynecol. Oncol., 2007 Jun; 105(3): 695-702.) 및 자궁경부암(Am. J. Clin. Pathol., 2004 Jul; 122(1): 61-9.) 등의 암 세포에서 과잉으로 발현하고 있으며, MUC1은 암 병소를 검출하기 위한 표적 분자로서 유용하다(Nat. Rev. Cancer, 2004 Jan; 4(1): 45-60., Pathol. Res. Pract., 2010 Aug 15; 206(8): 585-9.).
MUC1은 세포 외 도메인에 존재하는 20 아미노산의 탠덤 리피트 서열인 HGVTSAPDTRPAPGSTAPPA(서열 번호 15)의 9번째의 트레오닌이 O-글리코실화된다. 암 세포에서는 이 O-글리코실화가 불완전하고, T(Galβ1-3GalNAcα1-O-Ser/Thr), Tn(GalNAcα1-O-Ser/Thr) 및 2,3ST(Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα-O-Ser/Thr) 등의 O-글리코실화가 암 특이적으로 일어나는 것이 알려져 있다(특허문헌 1, 비특허문헌 1). 정상 조직의 MUC1은, 이들 암 특이적인 O-글리코실화는 받지 않기 때문에, 인간 암 특이적 MUC1은 인간에서의 각종 암을 치료하기 위한 표적 분자로서 특히 유용하다.
이러한 항인간 암 특이적 MUC1 항체로서, 예를 들어 1B2 항체(특허문헌 1), PankoMab 항체(비특허문헌 2), 5E5 항체(특허문헌 2) 등이 알려져 있다. 이 항체 중, 1B2 항체는 PankoMab 항체에 비교하여 인간 암 특이적 MUC1에 대한 특이성이 높은 것이 보고되어 있다(특허문헌 1). 또한, 1B2 항체의 해리 상수는 3.7×10-10M(특허문헌 1)이며, 5E5 항체의 해리 상수는 1.7×10-9M(비특허문헌 1)인 것이 보고되어 있다.
한편, 암 병소의 가시화에도 큰 요구가 있다. 먼저, 암 병소의 조기 발견에 요구가 있다. 현재의 X선 촬상이나 에코, 컴퓨터 단층 촬영(Computed Tomography: CT), 핵자기 공명 이미징(Magnetic Resonance Imaging: MRI), 양전자 방출 단층 촬영(Positron Emission Tomography: PET), 단일 광자 에미션 단층 촬영(Single Photon Emission Computed Tomography: SPECT) 등의 진단 모달리티에서는, 미소암을 양호한 감도로 검출할 수 없다. 미소암을 검출할 수 있으면, 원발암이면 수술이나 방사선 요법에 의해 치유할 수 있고, 전이암이어도 조기의 약제 개입에 의해 연명, 치유할 수 있다. 이어서, 암 병소와 양성 병변의 감별에 요구가 있다. 현재의 진단 모달리티에서는, 양성 병변을 암 병소라고 오진해버리는 일이 많다. 암 병소와 양성 병변을 감별할 수 있으면, 불필요한 생검을 감소시킬 수 있다. 또한, 수술 중의 암 병소의 가시화에 요구가 있다. 현재로는, 유방암 및 방광암, 피부암을 비롯한 암의 수술 중에 있어서, 암 병소의 위치나 확대를 정확하게 파악할 수 없기 때문에, 암 병소를 완전히 절제할 수 없어, 암 세포가 남겨진 채 수술을 종료해버릴 위험이 있다. 또한, 정확한 암 병소의 위치 파악에 대한 요구가 있다. 혈 중의 종양 마커 상승으로, 수술 후의 재발 및 전이가 의심되어도, 현재의 진단 모달리티로는 미소한 전이암을 가시화할 수 없기 때문에, 정말로 전이되어 있는지, 어느 장기에 전이되어 있는지 알 수 없어, 최적의 치료의 선택을 할 수 없다. 따라서, 인간 암 특이적 MUC1에 특이적으로 결합하는 항체를 체내 진단약으로서 사용하여, 형광 이미징 및 γ선 이미징(PET, SPECT) 등의 분자 이미징의 기법에 의해 암 병소를 가시화하는 것도 유용하다. 그러나 현재까지의 항인간 암 특이적 MUC1 항체를 체내 진단약으로서 사용된 예는, 알려져 있지 않다.
또한, 항체와 암 치료약을 결합시킨 항체 의약에 대한 요구가 있다. 항체 의약은 특이적으로 암 병소에 암 치료제를 송달할 수 있는 점에서 부작용이 적은 암 치료 방법으로서 기대되고 있으며, 방사성 동위 원소를 결합시킨 항체를 사용하는 방사 면역 요법(츠루오 다카시 저서, 「암의 분자 표적 치료」 난잔도 출판, 2008년 9월 15일 발행, p.332 내지 336, J. Nucl. Med., 2016 Jul; 57(7): 1105-11., Nucl. Med. Biol., 2010 Nov; 37(8): 949-55.)이나, IRDye700DX를 결합시킨 항체를 사용하는 광면역 요법(Nat. Med., 2011 Dec; 17(12): 1685-91.) 등이 보고되어 있다. IRDye700DX는 진단에도 사용할 수 있는 근적외 형광 색소이며, 이것을 암 세포막에 발현하는 항원에 대한 항체에 결합시켜, 암 조직에 특이적으로 집적시킨 후에 근적외광을 조사함으로써, IRDye700DX에 의한 광독성 효과에 의해, 암 특이적으로 세포사를 유도할 수 있는 것이 보고되어 있다(Nat. Med., 2011 Dec; 17(12): 1685-91.). 그러나 현재까지, 항인간 암 특이적 MUC1 항체를 암 치료약과 결합시킨 항체 의약을 임상 응용한 예는, 알려져 있지 않다.
일반적으로 항체는 혈중 반감기가 길고, 체 내에 투여 후, 암을 가시화하기에 충분한 시그널 대 백그라운드비를 부여하는 종양 대 혈액비에 달하는 데 4일 내지 5일의 긴 기간을 필요로 한다(Clin. Pharmacol. Ther., 2010 May; 87(5): 586-92.). 또한 항체의 Fc 영역은, 항체 의존성 세포 장애(Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity: ADCC)나 보체 의존성 세포 장애(Complement-Dependent Cytotoxicity: CDC)의 약리 작용을 야기한다(비특허문헌 1, Curr. Opin. Biotechnol., 2002 Dec; 13(6): 609-14.). 또한 항체는 표적에 관계없이 간장에 고집적되지만, 유방암 등의 암 세포는 간장으로 전이하는 경우가 많아, 원격 전이에 의한 전신의 암 병소를 진단할 때에 간 전이의 검출에 방해가 된다(Clin. Pharmacol. Ther., 2010 May; 87(5): 586-92.).
예를 들어, Fab, scFV, 다이아바디, 미니바디와 같은 저분자화된 재조합 항체 프래그먼트는, 조직 침투성이 높기 때문에 병소에 도착하기 쉽고, 대장균이나 효모에서의 발현계를 사용한 저비용에 의한 제조를 기대할 수 있는 점에서 치료용 항체로서 이용되는 한편, 혈중 반감기가 짧고, 신장 배설되는 특징을 갖는 점에서, 진단약으로서의 이용도 보고되어 있다(Nat. Biotechnol., 2005 Sep; 23(9): 1126-36.).
WO2010/050528 WO2008/040362
Glycoconj. J., 2013 Apr; 30(3): 227-36. Cancer Immunol Immunother, 2006 Nov; 55(11): 1337-47.
1가의 Fab 프래그먼트는 분자량 약 50kDa이며, 약 150kDa의 항체보다 작고, 신장 배설되며, 혈중 반감기도 짧다. 그 때문에, 투여 후 2 내지 32시간 이내에 암을 가시화하기에 충분한 시그널 대 백그라운드비를 부여하는 종양 대 혈액비에 달한다. Fc 영역이 없기 때문에 ADCC나 CDC를 야기하는 일도 없다. Fab 프래그먼트는 주로 신장 배설이기 때문에, 간 전이의 검출의 방해가 되는 일도 없다. 이러한 특징으로부터, 항체와 비교하여, Fab 프래그먼트는 체내 진단약으로서 보다 유효한 것을 기대할 수 있다.
그러나 Fab 프래그먼트에서는, 2가로부터 1가가 되기 때문에, 그의 결합 활성이 감약되는 경우가 많다. 또한 항체를 체내 진단약이나 광면역 요법에서 사용하는 약제로서 이용하기 위해서는, 형광 색소 또는 조영제 등의 검출되는 물질로 표식해야 하지만, 그러한 물질로 표식됨으로써, 그의 결합 활성이 감약된다는 과제가 있다.
본 발명의 과제는, 우수한 결합 활성을 가지며, 또한 투여 후 일정 시간(예를 들어, 24시간) 사이에 암 병소에 집적될 것이 기대되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 제공하는 데 있다. 또한, 본 발명의 과제는, 당해 Fab 프래그먼트를 포함하는 진단용 조성물 및 그것을 이용한 진단 방법을 제공하는 것, 및 당해 Fab 프래그먼트를 포함하는 치료용 조성물 및 그것을 이용한 치료 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명자들은, 인간 암 특이적 MUC1에 대한 우수한 결합 활성을 갖는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 제작에 있어서 상당한 예의 검토를 거듭한 결과, 서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 제작하고(실시예 1), 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 인간 암 특이적 MUC1에 대한 우수한 결합 활성을 갖고(실시예 3), 형광 표식화 및 킬레이트제 표식화에 의해 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성이 감약되지 않는 것(실시예 5 및 실시예 7), 그리고 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체는, 암의 진단에 유용한 것(실시예 8, 실시예 12 및 실시예 13), 및 피하 담암 모델에 있어서 항종양 효과를 나타내는 것(실시예 15)을 발견하였다.
이 결과, 상기 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트, 및 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체를 사용한 진단 수단 및 치료 수단을 제공하였다.
본 발명은, 의학상 또는 산업상 유용한 물질·방법으로서 이하의 발명을 포함하는 것이다.
즉, 일 형태에 있어서, 본 발명은 하기와 같으면 된다.
[1] 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
(a) 서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
(b) 서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 8 또는 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
[2] 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는, 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
(a) 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
(b) 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 2 또는 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
[3] 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는, 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
(a) 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
(b) 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
[4] 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는, 상기 [3]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
(a) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
(b) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
[5] 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [4]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
[6] 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [4]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
[7] 1 이상의 표식부와, 상기 [1] 내지 [6] 중 어느 하나에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체.
[8] 표식부가 (i) 배위자 및 링커, (ii) 배위자, (iii) 형광 색소 및 링커, 또는 (iv) 형광 색소인, 상기 [7]에 기재된 복합체.
[9] 표식부가 (i) 배위자 및 링커 또는 (ii) 배위자인, 상기 [8]에 기재된 복합체.
[10] 배위자가 하기 식 (A)로 표시되는 배위자인, 상기 [9]에 기재된 복합체:
Figure 112019042161154-pct00001
식 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 또는 링커로의 결합을 나타낸다.
[11] 표식부가 하기 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커인, 상기 [10]에 기재된 복합체:
Figure 112019042161154-pct00002
식 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타낸다.
[12] 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=S)기의 탄소 원자와 결합하고 있는, 상기 [11]에 기재된 복합체.
[13] 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 복합체:
(a) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [12]에 기재된 복합체;
(b) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 상기 [6]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [12]에 기재된 복합체; 및
(c) 상기 (a) 및 상기 (b)의 혼합물인 복합체.
[14] 추가로 금속을 포함하는, 상기 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 기재된 복합체.
[15] 금속이 금속 방사성 동위 원소인, 상기 [14]에 기재된 복합체.
[16] 금속이 89Zr인, 상기 [15]에 기재된 복합체.
[17] 추가로 89Zr을 포함하는, 상기 [13]에 기재된 복합체.
[18] 표식부가 (i) 형광 색소 및 링커 또는 (ii) 형광 색소인, 상기 [8]에 기재된 복합체.
[19] 형광 색소가 하기 식 (B) 및 하기 식 (C)로 이루어지는 군에서 선택되는 형광 색소인, 상기 [18]에 기재된 복합체:
Figure 112019042161154-pct00003
Figure 112019042161154-pct00004
식 (B) 및 (C) 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 또는 링커로의 결합을 나타낸다.
[20] 파선이 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타내고, 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=O)기의 탄소 원자와 결합하고 있는, 상기 [19]에 기재된 복합체.
[21] 표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소인, 상기 [20]에 기재된 복합체.
[22] 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 복합체:
(a) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [21]에 기재된 복합체;
(b) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 상기 [6]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [21]에 기재된 복합체; 및
(c) 상기 (a) 및 상기 (b)의 혼합물인 복합체.
[23] 표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소인, 상기 [20]에 기재된 복합체.
[24] 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 복합체:
(a) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [23]에 기재된 복합체;
(b) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 상기 [6]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, 상기 [23]에 기재된 복합체; 및
(c) 상기 (a) 및 상기 (b)의 혼합물인 복합체.
[25] 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(a) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
(b) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
[26] 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(a) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
(b) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
[27] 이하의 (a) 및/또는 (b)를 포함하는 발현 벡터:
(a) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
(b) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
[28] 이하의 (a) 및/또는 (b)를 포함하는 발현 벡터:
(a) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
(b) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
[29] 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포:
(a) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(c) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(d) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
[30] 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 숙주 세포:
(a) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(c) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(d) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
[31] 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법:
(a) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(c) 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 및 상기 [1]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
[32] 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법:
(a) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(c) 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 및 상기 [5]에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
[33] 상기 [31] 또는 [32]에 기재된 방법에 의해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정을 포함하는, 표식부와 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체를 생산하는 방법.
[34] Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정이, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정인, 상기 [33]에 기재된 복합체를 생산하는 방법.
[35] 추가로, 당해 복합체의 배위자를 금속 방사성 동위 원소로 표식시키는 공정을 포함하는, 상기 [34]에 기재된 복합체를 생산하는 방법.
[36] Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정이, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 형광 색소와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 형광 색소와 직접 공유 결합시키는 공정인, 상기 [33]에 기재된 복합체를 생산하는 방법.
[37] 1종 이상의 상기 [7] 내지 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 진단용 조성물.
[38] 복합체가 상기 [17], [22] 및 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체인, 상기 [37]에 기재된 진단용 조성물.
[39] 복합체가 상기 [17]에 기재된 복합체인, 상기 [38]에 기재된 진단용 조성물.
[40] 복합체가 상기 [22]에 기재된 복합체인, 상기 [38]에 기재된 진단용 조성물.
[41] 복합체가 상기 [24]에 기재된 복합체인, 상기 [38]에 기재된 진단용 조성물.
[42] 인간 MUC1을 발현하는 암의 진단에 사용하는, 상기 [37] 내지 [41] 중 어느 하나에 기재된 진단용 조성물.
[43] 암이 유방암 또는 방광암인, 상기 [42]에 기재된 진단용 조성물.
[44] 1종 이상의 상기 [7] 내지 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 의약 조성물.
[45] 복합체가 상기 [17], [22] 및 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체인, 상기 [44]에 기재된 의약 조성물.
[46] 복합체가 상기 [24]에 기재된 복합체인, 상기 [45]에 기재된 의약 조성물.
[47] 인간 MUC1을 발현하는 암을 치료하기 위한 의약 조성물인, 상기 [44] 내지 [46] 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물.
[48] 암이 유방암 또는 방광암인, 상기 [47]에 기재된 의약 조성물.
[49] 유방암 또는 방광암의 진단용 조성물 및/또는 유방암 또는 방광암을 치료하기 위한 의약 조성물의 제조를 위한, 상기 [7] 내지 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체의 사용.
[50] 유방암 또는 방광암의 진단 및/또는 치료에 있어서 사용하기 위한, 상기 [7] 내지 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체.
[51] 상기 [7] 내지 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체를 수술 전 또는 수술 중에 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 유방암 또는 방광암의 진단 방법.
[52] 상기 [7] 내지 [24] 중 어느 하나에 기재된 복합체의 치료 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 유방암 또는 방광암의 치료 방법.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 인간 암 특이적 MUC1에 대한 우수한 결합 활성을 가지고, 유방암 등의 암의 진단 및/또는 치료에 유용한 것이 기대된다.
도 1은, P10-1 Fab, P10-2 Fab 및 비교예인 1B2 Fab의 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 나타내는 그래프 및 표이다.
도 2는, P10-1 Fab Dye, P10-2 Fab Dye 및 비교예인 1B2 Fab Dye의 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 나타내는 그래프 및 표이다.
도 3은, P10-2 Fab DFO 및 P10-2 Fab의 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 나타내는 그래프 및 표이다.
도 4는, P10-2 Fab의 인간 암 특이적 MUC1을 발현하는 유방암 세포주 MDA-MB-468 세포(MM-468 세포라고도 칭함) 및 방광암 세포주 647-V 세포에 대한 결합 활성을 나타내는 그래프이다. 횡축은 P10-2 Fab의 농도(Log(mg/mL))를, 종축은 발광량(Luminescense)을 나타낸다.
도 5a는, 피하 담암 모델에 P10-2 Fab Dye를 3mg/kg 정맥 투여하고, 투여 6시간 후에 통상적인 카메라(좌측), 및 근적외 형광 카메라(중앙, 우측)로 촬상한 대표적인 사진이다.
도 5b는, 종양 부분(Tumor) 및 종양 주위의 정상 부분(Background)의 형광 휘도비(Tumor/Background Ratio)를 정량화한 그래프이며, 평균값+표준 오차를 나타낸다. 횡축은 P10-2 Fab Dye의 투여량 및 투여 후의 시간을 나타낸다.
도 6은, MM-468 세포를 이식한 마우스에 P10-2 Fab IR700을 투여하고, 투여 2시간 후에 동물을 안락사시켜, 종양을 적출하고, IVIS SPECTRUM으로 촬상하고, 종양 부분의 발광량을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다. 종축은 발광량을 나타낸다.
도 7은, MM-468 세포, 647-V 세포 또는 비교예인 CHO-K1 세포에 대하여, P10-2 Fab IR700을 반응시킨 후, 광 조사를 행하고, 세포 장애성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다. 각 그래프의 횡축은 상단이 P10-2 Fab IR700의 농도를, 하단이 광 조사량을 각각 나타낸다. 종축은 발광량이며, 평균값+표준 오차를 나타낸다.
도 8은, MM-468 세포를 이식한 누드 마우스를 사용하여, P10-2 Fab IR700 투여 시의 광 조사 유무(0J 또는 200J)에 의한, 항종양 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다. 횡축은, 종양 체적이 300mm3이 된 것을 1일로 하였을 때의 일수(days)를 나타낸다. 종축은 종양 체적(volume(mm3))이며, 평균값+표준 오차를 나타낸다.
이하에, 본 발명에 대하여 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 명세서에서 특별에 정의되지 않는 한, 본 발명에 관련하여 사용되는 과학 용어 및 기술 용어는, 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 것으로 한다.
본 발명자들은, 항인간 암 특이적 MUC1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 제작에 있어서 상당의 창의적 검토를 거듭한 결과, 암 특이적 MUC1에 대한 강한 결합능을 가진 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 제작하는 것에 성공하였다.
항체 분자의 기본 구조는, 각 클래스 공통으로 분자량 5만 내지 7만의 중쇄와 2 내지 3만의 경쇄로 구성된다. 중쇄는 통상적으로 약 440개의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드쇄로 이루어지며, 클래스마다 특징적인 구조를 가지고, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE에 대응하여 γ, μ, α, δ, ε쇄라고 불린다. 또한 IgG에는, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4가 존재하고, 각각 γ1, γ2, γ3, γ4라고 불리고 있다. 경쇄는 통상적으로 약 220개의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드쇄로 이루어지며, L형과 K형의 2종이 알려져 있고, 각각 λ, κ쇄라고 불린다. 항체 분자의 기본 구조의 펩티드 구성은, 각각 상동인 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄가, 디술피드 결합(S-S 결합) 및 비공유 결합에 의해 결합되고, 분자량 15만 내지 19만이다. 2종의 경쇄는 어느 중쇄와도 쌍을 이룰 수 있다. 개개의 항체 분자는 항상 동일한 경쇄 2개와 동일한 중쇄 2개로 이루어질 수 있다.
쇄 내 S-S 결합은, 중쇄에 4개(μ, ε쇄에는 5개), 경쇄에는 2개 있고, 아미노산 100 내지 110 잔기마다 하나의 루프를 이루고, 이 입체 구조는 각 루프간에서 유사하고, 구조 단위 또는 도메인이라 불린다. 중쇄, 경쇄 모두 N 말단에 위치하는 도메인은, 동종 동물의 동일 클래스(서브클래스)로부터의 표품이어도, 그의 아미노산 서열이 일정하지 않고, 가변 영역이라 불리며, 각 도메인은 각각 중쇄 가변 영역(VH 도메인) 및 경쇄 가변 영역(VL 도메인)이라 불리고 있다. 이로부터 C 말단측의 아미노산 서열은, 각 클래스 또는 서브클래스마다 거의 일정하여 정상 영역이라고 불리고 있고, 각 도메인은 각각 CH1, CH2, CH3 또는 CL이라 표시된다.
항체와 항원의 결합의 특이성은, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 의해 구성되는 부분의 아미노산 서열에 의한다. 한편, 보체나 각종 세포의 결합과 같은 생물학적 활성은 각 클래스 Ig의 정상 영역의 구조의 차를 반영하고 있다. 중쇄와 경쇄의 가변 영역의 가변성은, 어느 쇄에도 존재하는 3개의 작은 초가변 영역에 거의 한정되는 것을 알았으며, 이 영역을 상호 보완성 결정 영역(CDR; 각각 N 말단측으로부터 CDR1, CDR2, CDR3)이라 부르고 있다. 가변 영역의 나머지 부분은 프레임워크 영역(FR)이라 불리고, 비교적 일정하다.
항체의 중쇄 정상 영역의 CH1 도메인과 CH2 도메인 사이에 있는 영역은 힌지 영역이라고 불리고, 이 영역은 프롤린 잔기를 많이 포함하고, 2개의 중쇄를 연결하는 복수의 쇄간 S-S 결합을 포함한다. 예를 들어, 인간의 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4의 각 힌지 영역에는, 중쇄간의 S-S 결합을 구성하고 있는, 각각 2개, 4개, 11개, 2개의 시스테인 잔기를 포함한다. 힌지 영역은, 파파인이나 펩신 등의 단백질 분해 효소에 대한 감수성이 높은 영역이다. 항체를 파파인으로 소화한 경우, 힌지 영역의 중쇄간 S-S 결합보다도 N 말단측의 위치에서 중쇄가 절단되어, 2개의 Fab 프래그먼트와 1개의 Fc 프래그먼트로 분해된다. Fab 프래그먼트는, 경쇄와, 중쇄 가변 영역, CH1 도메인과 힌지 영역의 일부를 포함하는 중쇄 프래그먼트로 구성된다. Fab 프래그먼트는 가변 영역을 포함하고, 항원 결합 활성을 갖는다.
<본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트>
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 이하의 특징을 갖는 Fab 프래그먼트이다:
서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 정상 영역으로서는, Igγ1, Igγ2, Igγ3 또는 Igγ4 등의 어느 정상 영역도 선택 가능할 수 있다. 하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 정상 영역은, 인간 Igγ1 정상 영역이다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄 정상 영역으로서는, Igλ 또는 Igκ의 어느 정상 영역도 선택 가능할 수 있다. 하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄 정상 영역은, 인간 Igκ 정상 영역이다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 이하의 Fab 프래그먼트이다:
서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다.
Fab 프래그먼트를 포함하고, 항체를 세포에서 발현시키는 경우, 항체가 번역 후에 수식을 받는 것이 알려져 있다. 번역 후 수식의 예로서는, 중쇄 C 말단의 리신의 카르복시펩티다아제에 의한 절단, 중쇄 및 경쇄 N 말단의 글루타민 또는 글루탐산의 피로글루타밀화에 의한 피로글루탐산으로의 수식, 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 당화 등을 들 수 있고, 다양한 항체에 있어서 이러한 번역 후 수식이 발생하는 것이 알려져 있다(J. Pharm. Sci., 2008; 97: 2426-47.).
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트에는, 번역 후 수식에 의해 발생한 Fab 프래그먼트도 포함될 수 있다. 번역 후 수식에 의해 발생할 수 있는 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 예로서는, 중쇄 N 말단의 피로글루타밀화한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 들 수 있다. 이러한 N 말단의 피로글루타밀화에 의한 번역 후 수식은, 항체의 활성에 영향을 미치지 않는 것은 당해 분야에서 알려져 있다(Anal. Biochem., 2006; 348: 24-39).
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 다음의 특징을 갖는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다: 서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 8 또는 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
어떤 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 다음의 특징을 갖는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다: 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
다른 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 다음의 특징을 갖는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다: 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 2 또는 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
어떤 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 다음의 특징을 갖는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다: 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 인간 암 특이적 MUC1에 결합한다. 암 특이적 MUC1은 유방암, 폐암, 대장암, 방광암, 피부암, 갑상선암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암 또는 자궁경부암 등의 암에 있어서 발현하고 있다. 얻어진 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 측정하는 방법으로서는, ELISA나 FACS 등의 방법이 있다. 예를 들어, ELISA를 사용하는 경우, 인간 암 특이적 MUC1 양성 세포(예를 들어, T-47D 세포)를 ELISA 플레이트에 고정화하고, 이에 대하여 Fab 프래그먼트를 첨가하여 반응시킨 후, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제 등으로 표식한 항Igκ 항체 등을 반응시킨 후, 그의 활성을 검출하는 시약(예를 들어, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제 표식의 경우, 화학 발광 호스 래디쉬 퍼옥시다아제 기질) 등을 사용한 활성 측정에 의해, 2차 항체의 결합을 동정한다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 본 명세서에 개시되는, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트 및 경쇄의 서열 정보에 기초하여, 당해 분야에서 공지된 방법을 사용하여, 당업자에 의해 용이하게 제작될 수 있다. 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어 후술하는 <본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법>에 기재된 방법에 따라서 제조할 수 있다.
<본 발명의 복합체>
본 발명의 복합체는, 표식부와 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체이다.
「표식부」란, (i) 배위자 및 링커, (ii) 배위자, (iii) 형광 색소 및 링커, 또는 (iv) 형광 색소이다. 어떤 형태로서는, (i) 배위자 및 링커, 또는 (ii) 배위자를 들 수 있다. 어떤 형태로서는, (i) 형광 색소 및 링커, 또는 (ii) 형광 색소를 들 수 있다. 「표식부」의 배위자는 추가로 금속을 포함하고 있어도 되고, 어떤 형태로서는, 금속을 포함하는 (i) 배위자 및 링커 또는 (ii) 배위자이며, 바꾸어 말하면, (i) 금속과 킬레이트 착체를 형성한 배위자 및 링커, 또는 (ii) 금속과 킬레이트 착체를 형성한 배위자이다.
금속 또는 형광 색소를 포함하는 본 발명의 복합체는, 각종 조영제 및/또는 암의 치료제에 사용할 수 있고, 예를 들어 MRI 조영제, PET 트레이서, 형광 표식된 분자 이미징제, 광면역 요법에 사용되는 약제 등에 사용된다.
본 명세서에 있어서, 「금속」은 상자(常磁)성 금속 이온 또는 금속 방사성 동위 원소를 의미한다.
상자성 금속 이온은 MRI 조영제에 적합하게 사용된다. 상자성 금속 이온의 형태로서는, Fe2 +, Fe3 +, Cu2 +, Ni2 +, Rh2 +, Co2 +, Gd3 +, Eu3 +, Dy3 +, Tb3 +, Pm3 +, Nd3 +, Tm3 +, Ce3+, Y3+, Ho3 +, Er3 +, La3 +, Yb3 +, Mn3 + 또는 Mn2 +를 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 어떤 형태로서는, Gd3 +, Mn3 +, Mn2 +, Fe2 + 또는 Fe3 +를 들 수 있다. 어떤 형태로서는, Mn3 + 또는 Mn2 +를 들 수 있다. 이 경우, 복합체에는 카운터 음이온으로서 할로겐 등 사용할 수 있다. 또한, 카운터 음이온은 배위자의 C(=O)O-여도 되고, 추가로 복합체는 Na+등의 카운터 양이온을 갖고 있어도 된다.
금속 방사성 동위 원소는, 예를 들어 PET 트레이서 등에 사용된다. 어떤 형태로서는, 89Zr, 51Mn, 52Fe, 60Cu, 67Ga, 68Ga, 72As, 99mTc 또는 111In을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 어떤 형태로서는, 89Zr, 60Cu, 67Ga, 68Ga, 99mTc 또는 111In을 들 수 있다. 어떤 형태로서는, 지르코늄의 방사 동위체를 들 수 있다. 어떤 형태로서는 89Zr을 들 수 있다.
「배위자」란, 복합체에 있어서 금속과 킬레이트 착체를 형성할 수 있는 부분이며, 킬레이트제로 구성되는 기를 의미한다. 구성되는 기란, 킬레이트제로부터 프로톤이 제거되어, 결합손을 갖는 기이다.
「킬레이트제」란, 금속과 배위 결합할 수 있는 화합물이다.
「킬레이트제」로서는, 시데로포어와 비시데로포어를 들 수 있다. 시데로포어로서는, 히드록삼산형, 카테콜형 또는 혼합 배위자형을 들 수 있다. 히드록삼산형 시데로포어로서는, 예를 들어 페리크롬, 하기 식:
Figure 112019042161154-pct00005
로 표시되는 데페록사민(DFO), 프사리닌 C, 오르니박틴, 로도토루르산을 들 수 있다. 카테콜형 시데로포어로서는, 예를 들어 엔테로박틴, 바실리박틴, 비브리오박틴을 들 수 있다. 혼합 배위자형 시데로포어로서는, 예를 들어 아조토박틴, 피요베르딘, 에르시니아박틴을 들 수 있다. 또한, 상기 시데로포어의 경우, DFO는 그의 반응성 관능기인 -NH2를 통해 링커 또는 Fab 프래그먼트와 반응시킬 수 있고, DFO 이외의 시데로포어의 경우에는, 카르복시기, 수산기, 아미노기 등의 반응성 관능기를 통해, 당업자가 통상 사용하는 방법으로 링커 또는 Fab 프래그먼트와 반응시킬 수도 있다.
비시데로포어로서는, DTPA(디에틸렌트리아민오아세트산, CAS 번호: 67-43-6), DTPA-BMA(1,7-비스(메틸카르바모일메틸)-1,4,7-트리아자헵탄-1,4,7-삼아세트산, CAS 번호: 119895-95-3), EOB-DTPA(에톡시벤질기가 결합된 DTPA, CAS 번호: 158599-72-5), TTHA(트리에틸렌테트라민육아세트산, CAS 번호: 869-52-3), DO3A(1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-삼아세트산, CAS 번호: 217973-03-0), HP-DO3A(10-(2-히드록시프로필)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-삼아세트산, CAS 번호: 120041-08-9), DOTA(1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산, CAS 번호: 60239-18-1), 및 이들의 공지된 반응성 유도체를 들 수 있다.
또한, 본 명세서 중의 화합물 및 복합체는, 특별히 기재되지 않는 한 프리체 및 그의 염도 포함한다. 여기에 「그의 염」이란, 그 화합물 및 복합체의 치환기의 종류에 따라서, 산부가염 또는 염기와의 염을 형성하는 경우가 있고, 그 화합물 및 복합체가 형성할 수 있는 염이다. 구체적으로는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 무기산이나, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 말산, 만델산, 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산, 구연산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 아스파라긴산, 글루탐산 등의 유기산과의 산부가염, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 알루미늄 등의 무기 염기, 메틸아민, 에틸아민, 에탄올아민, 리신, 오르니틴 등의 유기 염기와의 염, 아세틸류신 등의 각종 아미노산 및 아미노산 유도체와의 염이나 암모늄염 등을 들 수 있다. 예를 들어, DFO는 데페록사민메탄술폰산염으로서도 존재하고, 다른 염으로서도 존재한다. DTPA는 프리체와 함께 나트륨염으로서도 존재한다.
MRI 조영제에 사용하는 「킬레이트제」의 어떤 형태로서는, 상기 시데로포어 및 비시데로포어 킬레이트제이다.
PET 트레이서에 사용하는 「킬레이트제」의 어떤 형태로서는, 상기 시데로포어 및 비시데로포어 킬레이트제이며, 또한 어떤 형태로서는, MAG3(머캅토-아세틸-글리신-글리신-글리신, CAS 번호: 66516-09-4)이다. 어떤 형태로서는 DFO이다.
본 발명의 복합체에 포함되는 배위자를 형성하는 「킬레이트제」의 어떤 형태로서는 DFO, DTPA, DTPA-BMA, EOB-DTPA, DO3A, HP-DO3A, DOTA를 들 수 있다. 어떤 형태로서는 DFO, DTPA, DOTA를 들 수 있다. 어떤 형태로서는 DFO를 들 수 있다.
「링커」란, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트와 배위자 사이에 거리를 만드는 기이다. 복합체에 있어서의 「링커」의 어떤 형태로서는,
하기 식:
Figure 112019042161154-pct00006
(이하, -C(=S)-NH-(1,4-페닐렌)-NH-C(=S)-라 표기함), -CH2-(1,4-페닐렌)-NH-C(=S)-, -C(=O)-(C1- 20알킬렌)-C(=O)-를 들 수 있다. 여기서 「C1- 20알킬렌」이란, 직쇄 또는 분지의 탄소수 1 내지 20의 알킬렌이다. C1 - 20알킬렌의 어떤 형태로서는, C1- 10알킬렌, C1- 2알킬렌을 들 수 있다. C1 - 20알킬렌의 어떤 형태로서는, 에틸렌을 들 수 있다. 어떤 형태로서는, -C(=S)-NH-(1,4-페닐렌)-NH-C(=S)-를 들 수 있다. 어떤 형태로서는, -C(=O)-C2H4-C(=O)-를 들 수 있다. 링커로서 사용할 수 있는 시약으로서는, HO-C(=O)-(C1- 20알킬렌)-C(=O)-OH, 숙신산, p-디NCS-벤젠(p-디이소티오시아노벤젠) 등을 들 수 있다.
형광 색소를 포함하는 본 발명의 복합체는, 형광 표식된 분자 이미징제, 광면역 요법에 사용되는 약제, 또는 형광 표식된 분자 이미징제 및 광면역 요법에 사용되는 약제로서 사용할 수 있다.
본 발명의 복합체에 사용하는 형광 색소로서는, 광 이미징에 통상 사용되는 근적외 파장(650 내지 1000nm)에 흡수 극대 및 발광 극대가 있는 색소를 사용할 수 있다. 형광 색소의 어떤 형태로서는, 시아닌 또는 인도시아닌 화합물을 들 수 있다. 어떤 형태로서는, IRDye800CW 및 IRDye700DX(LI-COR Biosciences사), Cy(Molecular Probe사), Alexa Fluor, BODIPY, 및 DyLight(Thermo Fisher Scientific사), CF790(Biotium사), DY(DYOMICS GMBH사), HiLyte Fluor680, 및 HiLyte Fluor750(Anaspec사), PULSAR650 및 QUASAR670(Biosearch Technologies사) 등을 들 수 있다. 어떤 형태로서는, 이하의 식로 표시되는 IRDye800CW
Figure 112019042161154-pct00007
및 이하의 식로 표시되는 IRDye700DX
Figure 112019042161154-pct00008
를 들 수 있다. 또한, 형광 색소는, 그의 카르복시기, 수산기, 아미노기 등을 통하거나, 또는 당업자가 통상 사용하는 방법으로 활성화기를 도입하고, Fab 프래그먼트 또는 링커와 반응시킬 수 있다. 활성화기가 도입된 형광 색소의 어떤 형태로서는, N-히드록시숙신이미드(NHS)기로 에스테르화된 형광 색소를 들 수 있다. 예를 들어, 상술한 IRDye800CW 및 IRDye700DX의 NHS 에스테르는 시판되고 있으며, 그들을 이용 가능하다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트와, 표식부의 결합은, 공지된 방법에 의해 당업자가 적절히 행할 수 있다. 예를 들어, 표식부를 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 1 이상의 아미노기(예를 들어, N 말단 아미노기나 아미노산 측쇄의 아미노기), 1 이상의 티올기(예를 들어, 아미노산 측쇄의 티올기), 또는 1 이상의 카르복실기(예를 들어, C 말단이나 아미노산의 측쇄 카르복실기)에 결합시킬 수 있다. 어떤 형태로서, 본 발명의 복합체는, 표식부가 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 1 이상의 아미노기에 결합된 복합체이다.
본 발명의 복합체는 표식부가 배위자 및 링커인 경우, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트와 링커를 반응시켜 얻어진 물질에 킬레이트제를 반응시켜 제조할 수도 있다. 킬레이트제에 링커를 반응시켜 얻어진 물질에 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 반응시켜 제조할 수도 있다. 반응예로서는, 킬레이트제의 아미노기와 링커를 반응시켜 얻어진 물질을, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 1 이상의 아미노기(예를 들어, N 말단 아미노기나 리신 측쇄의 아미노기)와 반응시킬 수도 있다. 복합체의 제조에는, 아민에 이소티오시아네이트를 첨가하여 티오우레아를 합성하는 반응이나, 아민과 카르복실산을 첨가하여 아미드를 합성하는 반응 등을 사용할 수 있다. 반응은 당업자에게 공지된 방법을 적용함으로써 행할 수 있다. 또한, 원료로서 미리 킬레이트제와 링커가 결합된 화합물을 사용할 수도 있다. 킬레이트제와 링커가 결합된 화합물의 예로서는, 이하의 식으로 표시되는 p-SCN-Bn-DFO(p-이소티오시아노페닐아미노티오카르보닐기가 결합된 DFO, CAS 번호: 1222468-90-7),
Figure 112019042161154-pct00009
p-이소티오시아노벤질기가 결합된 DTPA(p-NCS-Bn-DTPA, CAS 번호: 102650-30-6), p-이소티오시아노벤질기가 결합된 DOTA(p-NCS-Bn-DOTA, CAS 번호: 127985-74-4), 및 p-SCN-Bn-CHX-A"-DTPA([(R)-2-아미노-3-(4-이소티오시아네이트페닐)프로필]-트랜스-(S,S)-시클로헥산-1,2-디아민-오아세트산, CAS 번호: 157380-45-5)를 들 수 있다.
상기 제조 방법에 의해 제조한, 1 이상의 표식부가 결합된 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트에 금속(상자성 금속 이온 또는 금속 방사성 동위 원소)을 첨가하고, 금속을 포함하는 본 발명의 복합체를 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 복합체는, Fab 프래그먼트의 1 이상의 아미노기(예를 들어, N 말단 아미노기나 아미노산의 측쇄 아미노기)와, N-히드록시숙신이미드(NHS)로 활성화된 카르복실기나 이소티오시안산기를 갖는 표식부를 반응시켜, 아미노기를 통해 1 이상의 표식부가 결합된 Fab 프래그먼트인 복합체를 제조할 수도 있다.
본 발명의 복합체는, 1 이상의 표식부와, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체이다. 어떤 형태로서는, 1 내지 27의 표식부와 결합한, 어떤 형태로서는, 1 내지 23의 표식부와 결합한, 어떤 형태로서는 1 내지 15의 표식부와 결합한, 어떤 형태로서는 1 내지 11의 표식부와 결합한, 어떤 형태로서는 1 내지 9의 표식부와 결합한, 어떤 형태로서는 1 내지 7의 표식부와 결합한, 어떤 형태로서는 1 내지 5의 표식부와 결합한, 또한 어떤 형태로서는 1 내지 4의 표식부와 결합한, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다. 어떤 형태로서는, 추가로 금속을 포함하는, 1개 이상의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다.
하나의 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는, 표식부가 (i) 배위자 및 링커, (ii) 배위자, (iii) 형광 색소 및 링커, 또는 (iv) 형광 색소인 복합체이다.
본 발명의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 이하의 것을 들 수 있다:
(1) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체.
(2) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (1)의 복합체.
(3) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체.
(4) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (2)의 복합체.
(5) 표식부가 (i) 배위자 및 링커, 또는 (ii) 배위자인, (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 복합체.
(6) 배위자가 DFO, DTPA, DTPA-BMA, EOB-DTPA, DO3A, HP-DO3A 및 DOTA로 이루어지는 군에서 선택되는 킬레이트제로 구성되는 기이며, 링커가 -C(=S)-NH-(1,4-페닐렌)-NH-C(=S)-, -CH2-(1,4-페닐렌)-NH-C(=S)- 및 -C(=O)-(C1- 20알킬렌)-C(=O)-로 이루어지는 군에서 선택되는 링커인, (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 복합체.
(7) 배위자가 DFO, DTPA 및 DOTA로 이루어지는 군에서 선택되는 킬레이트제로 구성되는 기인, (6)의 복합체.
(8) 배위자가 DFO로 구성되는 기이며, 링커가 -C(=S)-NH-(1,4-페닐렌)-NH-C(=S)-인, (6)의 복합체.
(9) 추가로 금속을 포함하는, (5) 내지 (8) 중 어느 하나의 복합체.
(10) 금속이 금속 방사성 동위 원소인, (9)의 복합체.
(11) 금속이 89Zr인, (10)의 복합체.
어떤 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는, 표식부가 (i) 배위자 및 링커, 또는 (ii) 배위자인 복합체이다.
어떤 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는,
배위자가 하기 식 (A)로 표시되는 배위자인 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00010
식 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 또는 링커로의 결합을 나타낸다.
배위자가 식 (A)로 표시되는 배위자인 본 발명의 복합체의 어느 실시 형태로서는,
표식부가 하기 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커인 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00011
식 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타내고,
항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=S)기의 탄소 원자와 결합하고 있다.
어떤 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는, 표식부가 (i) 배위자 및 링커, 또는 (ii) 배위자인 복합체이며, 추가로 금속을 포함하는 복합체이다. 금속의 어떤 형태로서는, 금속 방사성 동위 원소를 들 수 있다. 금속 방사성 동위 원소의 어떤 형태로서는, 89Zr을 들 수 있다.
또 다른 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는, 표식부가 (i) 형광 색소 및 링커, 또는 (ii) 형광 색소인 복합체이다.
표식부에 형광 색소를 포함하는 본 발명의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 형광 색소가 하기 식 (B) 및 하기 식 (C)로 이루어지는 군에서 선택되는 형광 색소인 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00012
Figure 112019042161154-pct00013
식 (B) 및 (C) 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 또는 링커로의 결합을 나타낸다.
표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소인 본 발명의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 식 중, 파선이 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타내고, 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=O)기의 탄소 원자와 결합하고 있는 복합체이다.
표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소인 본 발명의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 식 중, 파선이 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타내고, 당해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=O)기의 탄소 원자와 결합하고 있는 복합체이다.
새로운, 본 발명의 복합체의 어느 실시 형태를 이하에 나타낸다:
(1) 표식부가 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체.
(2) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (1)의 복합체.
(3) 표식부가 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체.
(4) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (3)의 복합체.
(5) 1 내지 11의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (2) 또는 (4)의 복합체.
(6) 1 내지 4의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (2) 또는 (4)의 복합체.
(7) 추가로 금속을 포함하는, (1) 내지 (6) 중 어느 하나의 복합체.
(8) 금속이 금속 방사성 동위 원소인, (7)의 복합체.
(9) 금속이 89Zr인, (8)의 복합체.
(10) 표식부가 식 (B) 또는 식 (C)로 표시되는 형광 색소이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체.
(11) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (10)의 복합체.
(12) 표식부가 식 (B) 또는 식 (C)로 표시되는 형광 색소이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체.
(13) 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (12)의 복합체.
(14) 표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소인, (10) 내지 (13) 중 어느 하나의 복합체.
(15) 1 내지 11의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (14)의 복합체.
(16) 1 내지 5의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (15)의 복합체.
(17) 표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소인, (10) 내지 (13) 중 어느 하나의 복합체.
(18) 1 내지 11의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (17)의 복합체.
(19) 1 내지 5의 표식부와 결합한 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인, (18)의 복합체.
다른 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는 하기 식 (I)로 표시되는 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00014
식 중, Ab는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 나타내고,
L은 (i) 배위자, 또는 (ii) 형광 색소를 나타내고,
X는 링커 또는 결합을 나타내고,
p는 1 내지 27의 자연수이며, p의 어떤 형태로서는 1 내지 23의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 15의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 11의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 9의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 7의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 5의 자연수이며, 또한 어떤 형태로서는 1 내지 4의 자연수이다.
어떤 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는 식 (I)의 복합체이며, 추가로 금속을 포함하는 복합체이다. 금속의 어떤 형태로서는, 금속 방사성 동위 원소를 들 수 있다. 금속 방사성 동위 원소의 어떤 형태로서는, 89Zr을 들 수 있다.
식 (I)의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 표식부가 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커인 본 발명의 복합체를 들 수 있고, 당해 복합체의 어느 실시 형태로서는,
하기 식 (II)로 표시되는 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00015
식 중, Ab는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 나타내고,
p는 1 내지 27의 자연수이며, p의 어떤 형태로서는 1 내지 23의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 15의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 11의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 9의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 7의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 5의 자연수이며, 또한 어떤 형태로서는 1 내지 4의 자연수이며,
Ab는 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=S)기의 탄소 원자와 결합하고 있다.
어떤 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는 식 (II)의 복합체이며, 추가로 금속을 포함하는 복합체이다. 금속의 어떤 형태로서는, 금속 방사성 동위 원소를 들 수 있다. 금속 방사성 동위 원소의 어떤 형태로서는, 89Zr을 들 수 있다.
식 (I)의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소인 본 발명의 복합체를 들 수 있고, 당해 복합체의 어느 실시 형태로서는,
하기 식 (III)으로 표시되는 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00016
식 중, Ab는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 나타내고,
p는 1 내지 27의 자연수이며, p의 어떤 형태로서는 1 내지 23의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 15의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 11의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 9의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 7의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 5의 자연수이며, 또한 어떤 형태로서는 1 내지 4의 자연수이며,
Ab는 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=O)기의 탄소 원자와 결합하고 있다.
식 (I)의 복합체의 어느 실시 형태로서는, 표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소인 본 발명의 복합체를 들 수 있고, 당해 복합체의 어느 실시 형태로서는
하기 식 (IV)로 표시되는 복합체이다:
Figure 112019042161154-pct00017
식 중, Ab는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 나타내고,
p는 1 내지 27의 자연수이며, p의 어떤 형태로서는 1 내지 23의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 15의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 11의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 9의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 7의 자연수이며, 어떤 형태로서는 1 내지 5의 자연수이며, 또한 어떤 형태로서는 1 내지 4의 자연수이며,
Ab는 그의 아미노기를 통해, 표식부 말단 C(=O)기의 탄소 원자와 결합하고 있다.
어떤 실시 형태로서, 본 발명의 복합체는, 검출 가능 분자로 표식된 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트이다. 검출 가능 분자로 표식된 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트란, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트와, 검출 가능 분자가, 직접 또는 적절한 링커를 통해 공유 결합적으로 연결된 것이다. 본 명세서에 있어서 검출 가능 분자란, 당해 기술 분야에서 공지된 이미징 진단 기술에 있어서 검출 가능한 모든 부분을 의미한다. 예를 들어, 이미징 진단 기술이 형광 이미징인 경우, 검출 가능 분자는 형광 색소이다. 이미징 진단 기술이 PET인 경우, 검출 가능 분자는 PET에 의한 이미징이 가능한 화합물이며, 어떤 형태로서는, 방사성 핵종에 의해 표식된 배위자를 포함하는 화합물, 또는 비금속 방사성 핵종에 의해 표식된 당 잔기를 들 수 있다. 방사성 핵종에 의해 표식된 배위자를 포함하는 화합물의 어떤 형태로서는, 금속 방사성 동위 원소와 킬레이트 착체를 형성한 배위자를 들 수 있다. 이미징 진단 기술이 MRI인 경우, 검출 가능 분자는 MRI 기술에 의해 검출 가능한 화합물이며, 어떤 형태로서는, 상자성 금속 이온을 갖는 표식된 배위자를 포함하는 화합물을 들 수 있다. 상자성 금속 이온을 갖는 표식된 배위자를 포함하는 화합물의 어떤 형태로서는, 상자성 금속 이온과 킬레이트 착체를 형성한 배위자를 들 수 있다.
검출 가능 분자로 표식된 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트에 있어서, 검출 가능 분자의 의미로 사용하는 경우, PET에 의한 이미징이 가능한 화합물을 PET 트레이서라고 칭하고, MRI 기술에 의해 검출 가능한 화합물을 MRI 조영제라고 칭한다.
검출 가능 분자로 표식된 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 어느 실시 형태로서는, 이하의 것을 들 수 있다.
(1) 검출 가능 분자가 형광 색소, PET 트레이서 또는 MRI 조영제인 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
(2) 검출 가능 분자가 형광 색소인, (1)의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
(3) 검출 가능 분자가 식 (B)로 표시되는 형광 색소인, (2)의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
(4) 검출 가능 분자가 식 (C)로 표시되는 형광 색소인, (2)의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
(5) 검출 가능 분자가 PET 트레이서 또는 MRI 조영제인, (1)의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
(6) 검출 가능 분자가 식 (A)로 표시되는 배위자 및 상자성 금속 이온을 포함하는 MRI 조영제이거나, 또는 동 배위자 및 금속 방사성 동위 원소를 포함하는 PET 트레이서인 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
(7) 검출 가능 분자 및 링커가 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커 그리고 상자성 금속 이온을 포함하는 MRI 조영제이거나, 또는 동 배위자 및 링커 그리고 금속 방사성 동위 원소를 포함하는 PET 트레이서인, (6)의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트와, 검출 가능 분자의 연결은, 전술한 방법을 이용할 수 있다.
본 발명의 복합체에는, 복수종의 본 발명의 복합체 혼합물인 복합체도 포함된다. 예를 들어, 표식부와 번역 후 수식을 받지 않은 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체, 및 표식부와 상기 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 번역 후 수식에 의해 발생한 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체의 혼합물인 복합체도, 본 발명의 복합체에 포함된다.
복수종의 본 발명의 복합체 혼합물인 본 발명의 복합체의 어느 실시 형태를 이하에 나타낸다:
(1) 표식부가 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체, 그리고 표식부가 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체의 혼합물인 복합체.
(2) 추가로 금속을 포함하는, (1)의 복합체.
(3) 금속이 금속 방사성 동위 원소인, (2)의 복합체.
(4) 금속이 89Zr인, (3)의 복합체.
(5) 표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체, 그리고 표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체의 혼합물인 복합체.
(6) 표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체, 그리고 표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소이며, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체의 혼합물인 복합체.
<본 발명의 폴리뉴클레오티드>
본 발명의 폴리뉴클레오티드에는, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 포함된다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 8에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 8에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어 서열 번호 7에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다. 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어 서열 번호 9에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 2에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 2에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어 서열 번호 1에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다. 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어 서열 번호 3에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어 서열 번호 11에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어 서열 번호 5에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트 및 경쇄의 아미노산 서열에 기초하여 디자인된 염기 서열에 기초하여, 당해 기술 분야에서 공지된 유전자 합성 방법을 이용하여 합성하는 것이 가능하다. 이러한 유전자 합성 방법으로서는, 국제 공개 제90/07861호에 기재된 항체 유전자의 합성 방법 등의 당업자에게 공지된 다양한 방법이 사용될 수 있다.
<본 발명의 발현 벡터>
본 발명의 발현 벡터에는, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 그리고 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 포함된다.
바람직한 본 발명의 발현 벡터에는, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 그리고 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 포함된다.
본 발명의 발현 벡터는, 원핵 세포 및/또는 진핵 세포의 각종 숙주 세포 중에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 코딩되는 폴리펩티드를 산생할 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않는다. 이러한 발현 벡터로서는, 예를 들어 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터(예를 들어, 아데노바이러스, 레트로바이러스) 등을 들 수 있고, 바람직하게는 pEE6.4나 pEE12.4(Lonza사)를 사용할 수 있다.
본 발명의 발현 벡터는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 중쇄 프래그먼트 및/또는 경쇄를 코딩하는 유전자에 기능 가능하게 연결된 프로모터를 포함할 수 있다. 숙주 세포 중에서 본 발명의 Fab 프래그먼트를 발현시키기 위한 프로모터로서는, 숙주 세포가 에셰리키아속균의 경우, 예를 들어 Trp 프로모터, lac 프로모터, recA 프로모터, λPL 프로모터, lpp 프로모터, tac 프로모터 등을 들 수 있다. 효모 중에서의 발현용 프로모터로서는, 예를 들어 PH05 프로모터, PGK 프로모터, GAP 프로모터, ADH 프로모터를 들 수 있고, 바실루스속균에서의 발현용 프로모터로서는, SL01 프로모터, SP02 프로모터, penP 프로모터 등을 들 수 있다. 또한, 숙주가 포유 동물 세포 등의 진핵 세포인 경우, CMV, RSV, SV40 등의 바이러스 유래의 프로모터, 레트로바이러스의 프로모터, 액틴 프로모터, EF(elongation factor) 1α 프로모터, 히트 쇼크 프로모터 등을 들 수 있다.
본 발명의 발현 벡터는, 숙주 세포로서 세균, 특히 대장균을 사용하는 경우, 개시 코돈, 종지 코돈, 터미네이터 영역 및 복제 가능 단위를 더 포함할 수 있다. 한편, 숙주로서 효모, 동물 세포 또는 곤충 세포를 사용하는 경우, 본 발명의 발현 벡터는 개시 코돈, 종지 코돈을 포함할 수 있다. 또한, 이 경우, 인핸서 서열, 본 발명의 중쇄 프래그먼트 및/또는 경쇄를 코딩하는 유전자의 5'측 및 3'측의 비번역 영역, 분비 시그널 서열, 스플라이싱 접합부, 폴리아데닐레이션 부위, 또는 복제 가능 단위 등을 포함하고 있어도 된다. 또한, 목적에 따라서 통상 사용되는 선택 마커(예를 들어, 테트라사이클린 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 디히드로엽산 환원 효소 유전자)를 포함하고 있어도 된다.
<본 발명의 형질 전환된 숙주 세포>
본 발명의 형질 전환된 숙주 세포에는, 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 본 발명의 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포가 포함된다:
(a) 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(c) 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(d) 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포는, 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 본 발명의 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포이다:
(a) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(c) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(d) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
형질 전환하는 숙주 세포로서는, 사용하는 발현 벡터에 적합하고, 해당 발현 벡터로 형질 전환되어, Fab 프래그먼트를 발현할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않고, 본 발명의 기술 분야에 있어서 통상 사용되는 천연 세포 또는 인공적으로 수립된 세포 등 다양한 세포(예를 들어, 세균(에셰리키아속균, 바실루스속균), 효모(사카로마이세스속, 피키아속 등), 동물 세포 또는 곤충 세포(예를 들어, Sf9) 등), 포유 동물 세포주(예를 들어, CHO-K1SV 세포, CHO-DG44 세포, 293 세포 등의 배양 세포)가 예시된다. 형질 전환 자체는, 예를 들어 인산칼슘법, 일렉트로포레이션법 등 공지된 방법에 의해 행해질 수 있다.
<본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법>
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함한다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법에 있어서 배양하는 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포는, 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택된다:
(a) 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 본 발명의 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 본 발명의 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(c) 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
어떤 형태로서는, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법에 있어서 배양하는 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포는, 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택된다:
(a) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
(b) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
(c) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
바람직하게는, 사용되는 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포는, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 또는 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포이다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법에 있어서, 형질 전환된 숙주 세포는 영양 배지 중에서 배양될 수 있다. 영양 배지는, 형질 전환된 숙주 세포의 생육에 필요한 탄소원, 무기 질소원 또는 유기 질소원을 포함하는 것이 바람직하다. 탄소원으로서는, 예를 들어 글루코오스, 덱스트란, 가용성 전분, 자당 등이, 무기 질소원 또는 유기 질소원으로서는, 예를 들어 암모늄염류, 질산염류, 아미노산, 옥수수 침지액, 펩톤, 카제인, 고기 엑기스, 콩깻묵, 바레이쇼 추출액 등이 예시된다. 또한 원하는 경우에 다른 영양소(예를 들어, 무기염(예를 들어, 염화칼슘, 인산이수소나트륨, 염화마그네슘), 비타민류, 항생 물질(예를 들어, 테트라사이클린, 네오마이신, 암피실린, 카나마이신 등) 등)을 포함하고 있어도 된다.
형질 전환된 숙주 세포의 배양 자체는 공지된 방법에 의해 행해진다. 배양 조건, 예를 들어 온도, 배지의 pH 및 배양 시간은 적절히 선택된다. 예를 들어, 숙주가 동물 세포인 경우, 배지로서는, 약 5 내지 20％의 태아 소 혈청을 포함하는 MEM 배지(Science; 1952; 122: 501), DMEM 배지(Virology; 1959; 8: 396-97.), RPMI1640 배지(J. Am. Med. Assoc.; 1967; 199: 519-24.), 199 배지(Proc. Soc. Exp. Biol. Med.; 1950; 73: 1-8) 등을 사용할 수 있다. 배지의 pH는 약 6 내지 8인 것이 바람직하고, 배양은 통상 약 30 내지 40℃에서 약 15 내지 336시간 행해지고, 필요에 따라서 통기나 교반을 행할 수도 있다. 숙주가 곤충 세포인 경우, 예를 들어 태아 소 혈청을 포함하는 Grace's 배지(PNAS; 1985; 82: 8404-8.) 등을 들 수 있고, 그의 pH는 약 5 내지 8인 것이 바람직하다. 배양은 통상 약 20 내지 40℃에서 15 내지 100시간 행해지고, 필요에 따라서 통기나 교반을 행할 수도 있다. 숙주가 세균, 방선균, 효모, 사상균인 경우, 예를 들어 상기 영양원을 함유하는 액체 매개가 적당하다. 바람직하게는 pH가 5 내지 8인 배지이다. 숙주가 E.coli인 경우, 바람직한 배지로서 LB 배지, M9 배지(Miller 등, Exp. Mol. Genet, Cold Spring Harbor Laboratory; 1972: 431) 등이 예시된다. 이러한 경우, 배양은 필요에 따라서 통기, 교반하면서, 통상 14 내지 43℃, 약 3 내지 24시간 행할 수 있다. 숙주가 바실루스속균인 경우, 필요에 따라서 통기, 교반을 하면서, 통상 30 내지 40℃, 약 16 내지 96시간 행할 수 있다. 숙주가 효모인 경우, 배지로서, 예를 들어 Burkholder 최소 배지(PNAS; 1980; 77: 4505-8.)를 들 수 있고, pH는 5 내지 8인 것이 바람직하다. 배양은 통상 약 20 내지 35℃에서 약 14 내지 144시간 행해지고, 필요에 따라서 통기나 교반을 행할 수도 있다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정에 더하여, 발현시킨 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 회수, 바람직하게는 단리, 정제하는 공정을 포함할 수 있다. 단리, 정제 방법으로서는, 예를 들어 염석, 용매 침전법 등의 용해도를 이용하는 방법, 투석, 한외 여과, 겔 여과, 도데실황산나트륨-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동 등 분자량의 차를 이용하는 방법, 이온 교환 크로마토그래피나 히드록실아파타이트 크로마토그래피 등의 하전을 이용하는 방법, 어피니티 크로마토그래피 등의 특이적 친화성을 이용하는 방법, 역상 고속 액체 크로마토그래피 등의 소수성의 차를 이용하는 방법, 등전점 전기 영동 등의 등전점의 차를 이용하는 방법 등을 들 수 있다.
<본 발명의 복합체를 생산하는 방법>
본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를, 표식부와 공유 결합시키는 공정을 포함한다. 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은 또한, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트와 표식부를 공유 결합시키는 공정을 포함하고 있어도 된다. 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은 또한, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트와 표식부를 공유 결합시키는 공정을 포함하고 있어도 된다. 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은 추가로 금속을 첨가하는 공정을 포함해도 된다. 사용되는 링커, 킬레이트제, 금속, 또는 형광 색소 등 및 연결의 방법은, <본 발명의 복합체>에 기재된 것을 사용할 수 있다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정을 포함하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정을 포함하는 방법이다.
어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정을 포함하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정을 포함하는 방법이다.
어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정, 및 당해 복합체의 배위자를 금속으로 표식시키는(즉, 킬레이트 착체를 형성시키는) 공정을 포함하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정, 및 당해 복합체의 배위자를 금속으로 표식시키는 공정을 포함하는 방법이다.
어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정, 및 당해 복합체의 배위자를 금속 방사성 동위 원소로 표식시키는(즉, 킬레이트 착체를 형성시키는) 공정을 포함하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정, 및 당해 복합체의 배위자를 금속 방사성 동위 원소로 표식시키는 공정을 포함하는 방법이다.
어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 i) 형광 색소와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 형광 색소와 직접 공유 결합시키는 공정을 포함하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 i) 형광 색소와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 형광 색소와 직접 공유 결합시키는 공정을 포함하는 방법이다.
어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 검출 가능 분자로 표식하는 공정을 포함하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질 전환된 숙주 세포를 배양하고, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정, 발현시킨 당해 Fab 프래그먼트를 회수하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 검출 가능 분자로 표식하는 공정을 포함하는 방법이다.
본 발명의 복합체를 생산하는 방법은, 상기에서 특정하는 2 이상의 공정을 일련의 공정으로서 포함하는 방법으로서 실시할 수도 있고, 상기에서 특정하는 적어도 하나의 공정을 포함하는 방법으로서 실시할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 표식부와 결합시키는 공정을 포함하는 방법, 및 표식부를 결합시킨 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트에 금속으로 표식하는 공정을 포함하는 방법도 또한, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법에 포함된다. 또한, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법에는, 공정의 순서가 다른 방법도 포함된다. 예를 들어, 킬레이트제에 금속을 표식한 후에, 당해 킬레이트제를 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트와 공유 결합시키는 방법도, 본 발명의 복합체를 생산하는 방법에 포함된다.
<진단용 조성물·진단 방법>
본 발명은, 금속 또는 형광 색소를 포함하는 본 발명의 복합체(이하, 검출 가능한 본 발명의 복합체라고 칭한다.)를 포함하는 진단용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 진단용 조성물은 본 발명의 복합체를 1종 이상 포함하는 것이어도 된다. 즉, 본 발명의 진단용 조성물은 본 발명의 복합체를 1종 포함하는 것이어도 되고 또는 2종류 이상의 본 발명의 복합체의 조합을 포함하는 것이어도 된다. 검출 가능한 본 발명의 복합체는 통상법에 따라서 제제화되어, 조기 진단약, 병기 진단약 또는 수술 중 진단약(특히 암의 진단약)으로서 이용할 수 있다. 수술 중 진단약이란, 외과 수술이나 내시경 수술 등의 수술 중에, 병변부를 특정하고, 그 성질을 검사하는 것이 가능한 진단약을 의미한다. 본 발명의 진단용 조성물을 수술 중 진단약으로서 사용하는 경우, 당해 진단용 조성물은, 예를 들어 수술의 2 내지 32시간 전, 어떤 형태로서는 6 내지 24시간 전, 또 다른 형태로서는 2시간 전에 환자에게 투여된다.
조기 진단약이란, 병상이 관찰되지 않거나, 또는 병기의 조기 단계에서 진단을 행하는 것을 목적으로 하는 진단약을 의미한다. 예를 들어, 암에 있어서는, 병상이 관찰되지 않거나, 스테이지 0 또는 스테이지 1의 단계에서 사용하는 진단약을 의미한다.
병기 진단약이란, 병상이 어느 정도 진행되어 있는지를 검사하는 것이 가능한 진단약을 의미한다. 예를 들어, 암에 대해서는, 그의 스테이지를 검사하는 것이 가능한 진단약을 의미한다.
본 발명의 진단용 조성물에 의해 진단할 수 있을 것이 기대되는 암은, 인간 MUC1을 발현하는 암이다. 어떤 형태로서는, 유방암, 폐암, 대장암, 방광암, 피부암, 갑상선암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암 또는 자궁경부암을 들 수 있다. 바람직하게는, 당해 암은 유방암 또는 방광암이다.
본 발명의 진단용 조성물의 제제화 시에 본 발명의 복합체의 첨가량은, 환자의 증상의 정도나 연령, 사용하는 제제의 제형, 또는 Fab 프래그먼트의 결합 역가 등에 따라서 상이하지만, 예를 들어 환자의 단위 체중당 Fab 프래그먼트의 질량 베이스로 0.001mg/kg 내지 100mg/kg 정도를 사용하면 된다.
본 발명의 진단용 조성물의 제형의 예로서는, 주사제, 점적용제 등의 비경구제를 들 수 있고, 정맥내 주사, 표적 조직 국소에의 근육내 주사, 피하 주사, 방광내 투여 등에 의해 투여할 수 있다. 또한, 제제화 시에는, 약학적으로 허용되는 범위에서, 이들 제형에 따른 담체나 첨가제를 사용할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체나 첨가제의 종류는 특별히 한정되지 않고, 당업자에게 주지된 담체나 첨가제를 사용할 수 있다.
본 발명은 또한, 암의 조기 진단용 조성물, 병기 진단용 조성물 또는 수술 중 진단용 조성물의 제조를 위한, 검출 가능한 본 발명의 복합체 사용에 관한 것이다. 본 발명은, 암의 조기 진단, 병기 진단 또는 수술 중 진단에 있어서 사용하기 위한, 검출 가능한 본 발명의 복합체에도 관한 것이다.
그리고, 본 발명은, 검출 가능한 본 발명의 복합체를, 수술 전 또는 수술 중에 대상에게 투여하는 것을 포함하는 암의 진단 방법에도 관한 것이다. 여기에 있어서 「대상」이란, 그 진단을 받을 것을 필요로 하는 인간 또는 기타 포유 동물이며, 어떤 형태로서는, 그 진단을 받을 것을 필요로 하는 인간이다. 본 발명의 진단 방법에 있어서의 검출 가능한 본 발명의 복합체의 유효량은 상기 제제화 시에 본 발명의 복합체의 유효량과 동일한 양이어도 된다. 본 발명의 진단 방법에 있어서, 검출 가능한 본 발명의 복합체는, 표적 조직 국소에의 근육내 주사, 피하 주사 등에 의해 투여하는 것이 바람직하다. 본 발명의 진단 방법에 있어서, 본 발명의 복합체를 수술 전에 투여하는 경우, 당해 복합체는, 예를 들어 수술의 2 내지 48시간 전, 어떤 형태로서는 6 내지 24시간 전, 또 다른 형태로서는 2시간 전에 환자에게 투여된다.
다른 실시 형태에 있어서, 본 발명은, 본 발명의 복합체의 제조를 위한, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 사용에도 관한 것이다. 어떤 형태로서는, 본 발명은, 본 발명의 복합체를 포함하는 진단용 조성물의 제조를 위한, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 사용에도 관한 것이다.
또한, 금속 방사성 동위 원소를 포함하는 본 발명의 진단용 조성물이 제공될 때의 형태로서는, 사용 직전에 금속 방사성 동위 원소로 표식되어도 되고, 금속 방사성 동위 원소를 포함하는 진단용 조성물로서 제공되어도 된다.
<치료용 조성물·치료 방법>
본 발명에는, 1종 이상의 본 발명의 복합체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 의약 조성물이 포함된다. 즉, 본 발명의 치료용 조성물은, 본 발명의 복합체를 1종 포함하는 것이어도 되고 또는 2종류 이상의 본 발명의 복합체의 조합을 포함하는 것이어도 된다. 본 발명의 복합체는, 당해 분야에 있어서 통상 사용되고 있는 부형제, 즉, 약제용 부형제나 약제용 담체 등을 사용하여, 통상 사용되는 방법에 의해 의약 조성물의 조제에 사용할 수 있다. 이들 의약 조성물의 제형의 예로서는, 예를 들어 주사제, 점적용제 등의 비경구제를 들 수 있고, 정맥내 투여, 피하 투여, 방광내 투여 등에 의해 투여할 수 있다. 제제화 시에는, 약학적으로 허용되는 범위에서, 이들 제형에 따른 부형제, 담체, 첨가제 등을 사용할 수 있다.
상기 제제화 시에 본 발명의 복합체의 첨가량은, 환자의 증상의 정도나 연령, 사용하는 제제의 제형, 또는 Fab 프래그먼트의 결합 역가 등에 따라서 상이하지만, 예를 들어 환자의 단위 체중당 Fab 프래그먼트의 질량 베이스로 0.001mg/kg 내지 100mg/kg 정도를 사용할 수 있다.
본 발명의 복합체를 포함하는 의약 조성물은, 암의 치료를 위해 사용할 수 있다. 본 발명의 복합체를 포함하는 의약 조성물에 의해 치료할 수 있을 것이 기대되는 암은, 인간 MUC1을 발현하는 암이며, 예를 들어 유방암, 폐암, 대장암, 방광암, 피부암, 갑상선암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암 또는 자궁경부암을 들 수 있다.
어떤 형태로서는, 본 발명의 복합체를 포함하는 의약 조성물은, 형광 색소를 포함하는 복합체를 포함하는 의약 조성물이며, 광면역 요법에 적용하여 암의 치료에 사용할 수 있다. 광면역 요법은, 형광 색소를 포함하는 복합체를 암 조직에 특이적으로 집적시킨 후에, 당해 복합체에 포함되는 형광 색소를 여기하는 파장의 광을 조사하고, 당해 형광 색소에 의한 광독성 효과에 의해, 암 특이적으로 세포사를 유도하는 방법이다. 형광 색소를 포함하는 본 발명의 복합체를 광면역 요법에 사용하는 경우, 조사하는 광의 파장은 근적외 파장(650 내지 1000nm)이면 된다.
본 발명에는 본 발명의 복합체를 포함하는, 유방암 또는 방광암을 치료하기 위한 의약 조성물이 포함된다. 또한, 본 발명에는, 본 발명의 복합체의 치료 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 유방암 또는 방광암을 치료하는 방법이 포함되고, 당해 공정에 더하여, 근적외 파장(650 내지 1000nm, 예를 들어 660 내지 740nm, 예를 들어 680nm)의 광을 조사하는 공정을 포함할 수 있다. 어떤 형태로서는, 광을 조사하는 선량은 적어도 1J/cm2이며, 어떤 형태로서는 적어도 10J/cm2이며, 어떤 형태로서는 적어도 100J/cm2이며, 어떤 형태로서는 1 내지 500J/cm2이며, 어떤 형태로서는 50 내지 200J/cm2이다. 어떤 실시 형태에 있어서는, 본 발명의 복합체를 투여 후에, 복수회에 걸쳐 조사를 실시할 수도 있다. 또한, 본 발명에는, 본 발명의 복합체 치료 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 유방암 또는 방광암의 암 세포의 세포사를 유도하는 방법이 포함된다.
암을 치료하기 위한 의약 조성물은, 암의 진단에도 사용할 수 있다. 예를 들어, 유방암 또는 방광암을 치료하기 위한 의약 조성물을, 당해 암의 진단에도 사용할 수도 있다.
또한, 본 발명에는, 유방암 또는 방광암의 치료에 사용하기 위한, 본 발명의 복합체가 포함된다. 또한, 본 발명에는, 유방암 또는 방광암을 치료하기 위한 의약 조성물의 제조를 위한, 본 발명의 복합체의 사용이 포함된다.
다른 실시 형태에 있어서 본 발명은, 본 발명의 복합체를 포함하는 의약 조성물의 제조를 위한, 본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 사용에도 관한 것이다.
본 발명에 대하여 전반적으로 기재하였지만, 더욱 이해를 얻기 위해 참조하는 특정한 실시예를 여기에 제공한다. 그러나, 이들은 예시를 목적으로 하는 것으로서, 본 발명을 한정하는 것은 아니다.
실시예
(실시예 1: 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 제작)
P10-1 Fab 및 P10-2 Fab라고 칭하는 2종류의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 제작하였다.
P10-1 Fab 및 P10-2 Fab의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, 구체적으로는 마우스 유래의 항인간 암 특이적 MUC1 항체인 1B2 항체를 문헌(Front Biosci., 2008 Jan 1; 13: 1619-33)에 기재된 방법을 참고로 하여 인간화 후, 문헌(Proteins, 2014 Aug; 82(8): 1624-35)에 준하여 구축한 인간화 항체의 분자 모델을 사용하여, 친화성의 향상 및 표식부를 결합시켜도 친화성이 감약되지 않을 것이 기대되는 서열을 설계하였다.
P10-1 Fab 및 P10-2 Fab의 각 중쇄 가변 영역 유전자의 5'측에 시그널 서열(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS(서열 번호 13))을 코딩하는 유전자를, 그리고 3'측에 인간 Igγ1의 정상 영역 유전자(서열 번호 1 및 3의 염기 번호 355로부터 669까지의 염기 서열로 이루어짐)를 각각 연결시킬 수 있는 중쇄 프래그먼트 유전자가 삽입된 GS 벡터 pEE6.4(Lonza사)를 제작하였다. 여기서, Fab 프래그먼트로서 발현시키기 위해서, 중쇄 정상 영역 유전자에 있어서, Kabat 등에 의한 EU 인덱스에 기초하는 221번째의 Asp(후술하는 서열 번호 2 및 4의 아미노산 서열 중의 222번째의 Asp에 대응)의 코돈 후에 정지 코돈을 삽입하였다. 또한, P10-1 Fab 및 P10-2 Fab 공통의 경쇄 가변 영역 유전자의 5'측에 시그널 서열(MSVPTQVLGLLLLWLTDARC(서열 번호 14))을 코딩하는 유전자를, 그리고 3'측에 인간 κ쇄의 정상 영역 유전자(서열 번호 5의 염기 번호 340으로부터 660까지의 염기 서열로 이루어짐)를 각각 연결시킬 수 있는 경쇄 유전자가 삽입된 GS 벡터 pEE12.4(Lonza사)를 제작하였다.
일과성 발현의 방법으로 Fab 프래그먼트의 발현을 행하였다. Expi293 Expression Medium(Thermo Fisher Scientific사)에서 약 250만개/mL로 배양된 Expi293F 세포(Thermo Fisher Scientific사)에 대하여, 전술한 중쇄 프래그먼트 및 경쇄의 GS 벡터를 ExpiFectamine 293 Transfection Kit(Thermo Fisher Scientific사)를 사용하여 트랜스펙트하고, 8일간 배양하였다. 발현시킨 후, 배양 상청을 KappaSelect(GE Healthcare사)를 사용하여 정제하고, 각 Fab 프래그먼트를 얻었다.
P10-1 Fab의 중쇄 프래그먼트의 염기 서열을 서열 번호 1에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 2에 각각 나타낸다. P10-1 Fab의 중쇄 가변 영역의 염기 서열을 서열 번호 7에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 8에 각각 나타낸다.
P10-2 Fab의 중쇄 프래그먼트의 염기 서열을 서열 번호 3에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 4에 각각 나타낸다. P10-2 Fab의 중쇄 가변 영역의 염기 서열을 서열 번호 9에, 그에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 10에 각각 나타낸다.
P10-1 Fab 및 P10-2 Fab의 경쇄는 공통이며, 그의 염기 서열은 서열 번호 5에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 서열 번호 6에 각각 나타낸다. P10-1 Fab 및 P10-2 Fab의 경쇄 가변 영역의 염기 서열을 서열 번호 11에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 12에 각각 나타낸다.
(실시예 2: Fab 프래그먼트의 아미노산 수식 분석)
정제한 P10-2 Fab의 아미노산 수식을 분석한 결과, 정제 항체의 대부분에 있어서, 중쇄 N 말단의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식되어 있는 것이 시사되었다.
(실시예 3: Fab 프래그먼트의 결합 활성 평가)
전술한 방법으로 발현시킨 P10-1 Fab 및 P10-2 Fab에 대하여, 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 Cell ELISA법에 의해 키메라 1B2 항체 Fab 프래그먼트(이하, 1B2 Fab라 표기하는 경우가 있다. 1B2 항체(특허문헌 1)의 VH 도메인 및 VL 도메인(서열 정보는 특허문헌 1로부터 인용)에, 인간 IgG1의 CH1 도메인, κ쇄의 CL 도메인을 각각 연결하여 제작하였다. CH1 도메인 및 CL 도메인을 연결하는 사정상, VH 도메인의 Kabat 등에 의한 EU 인덱스에 기초하는 113번째의 알라닌 잔기가 세린 잔기로, VL 도메인의 Kabat 등에 의한 EU 인덱스에 기초하는 109번째의 알라닌 잔기가 트레오닌 잔기로 치환되어 있다.)와 비교하였다. 즉, 인간 암 특이적 MUC1을 발현하는 유방암 세포주 T-47D 세포(ATCC로부터 구입 가능; HTB-133)를 1웰당 0.75×104 세포, 콜라겐 I로 코팅한 96웰 ELISA 플레이트에 파종하고, 밤새 배양 후, 세포를 포르말린으로 고정화하고, 그것에 대하여 상기 P10-1 Fab, P10-2 Fab 또는 1B2 Fab를 반응시킨 후, 2차 항체로서 서양 고추냉이 퍼옥시다아제(Horseradish Peroxidase: HRP) 표식 염소 항인간 Igκ항체(Southern Biotechnology Associates사)를 반응시켜, ECL Prime Western Blotting Detection Reagent(GE Healthcare사)를 첨가하여 발광시키고, 그의 발광도를 조사하였다. 그 결과, 도 1에 도시한 것과 같이 P10-1 Fab 및 P10-2 Fab는 1B2 Fab의 약 10배 이상의 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 갖는 것이 확인되었다.
(실시예 4: Fab 프래그먼트의 형광 표식화)
그 다음으로, 본 발명자들은 전술한 P10-1 Fab, P10-2 Fab 및 1B2 Fab에 대하여 형광 색소의 도입을 행하였다.
구체적으로는, 인산 완충 생리 식염수(pH 7.4)로 약 1mg/mL로 조정한 Fab 프래그먼트 용액에, 1/10양의 1M 인산수소이칼륨 용액(pH 9)을 첨가하여 pH 8.5로 조정하였다. 이것에 최종 농도 310.8μg/mL가 되게 IRDye800CW NHS Ester(LI-COR Biosciences사)를 첨가하고, 실온 및 차광에서 2시간 교반하였다. IRDye800CW NHS Ester는 N-히드록시숙신이미드기를 갖고 있으므로, Fab 프래그먼트의 Lys와 빠르게 반응한다. 이것을 아미콘 울트라 3K-0.5mL 원심식 필터(Merck Millipore사)로 회수하고, 형광 표식화한 Fab 프래그먼트를 정제하였다. 이 형광 색소를 도입한 P10-1 Fab, P10-2 Fab 및 1B2 Fab를, P10-1 Fab Dye, P10-2 Fab Dye 및 1B2 Fab Dye라고 칭한다.
(실시예 5: 형광 표식화 Fab 프래그먼트의 결합 활성 평가)
전술한 방법으로 표식한 P10-1 Fab Dye 및 P10-2 Fab Dye에 대하여, 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 Cell ELISA법에 의해 1B2 Fab Dye와 비교하였다. 즉, 인간 암 특이적 MUC1을 발현하는 유방암 세포주 T-47D 세포를 1웰당 0.75×104 세포, 콜라겐 I로 코팅한 96웰 ELISA 플레이트에 파종하고, 밤새 배양 후, 세포를 포르말린으로 고정화하고, 그것에 대하여 상기 P10-1 Fab Dye, P10-2 Fab Dye 또는 1B2 Fab Dye를 반응시킨 후, 2차 항체로서 HRP 표식 염소 항인간 Igκ항체(Southern Biotechnology Associates사)를 반응시키고, ECL Prime Western Blotting Detection Reagent(GE Healthcare사)를 첨가하여 발광시키고, 그의 발광도를 조사하였다. 그 결과, 도 2에 도시한 것과 같이 1B2 Fab Dye는 표식에 의해 결합 활성이 감약되는 것에 비해, P10-1 Fab Dye 및 P10-2 Fab Dye는 표식에 의해 결합 활성이 감약되지 않는 것이 확인되었다.
(실시예 6: Fab 프래그먼트의 킬레이트제 표식화)
그 다음으로, 본 발명자들은 전술한 P10-2 Fab에 대하여 킬레이트제의 도입을 행하였다.
구체적으로는, 인산 완충 생리 식염수(pH 7.4)로 12.5mg/mL로 조정한 Fab 프래그먼트 용액에, 10mM이 되게 100mM 탄산나트륨 용액을 첨가하여 pH 9.0으로 조정하였다. 이것에 최종 농도 1mM이 되게 p-SCN-Bn-데페록사민(Macrocyclics사)를 첨가하고, 37℃에서 2시간 반응하였다. p-SCN-Bn-데페록사민은 이소티오시아네이트기를 갖고 있으므로, Fab 프래그먼트의 Lys와 빠르게 반응한다. 이것을 아미콘 울트라 10K-0.5mL 원심식 필터로 회수하고, 킬레이트제 표식화한 Fab 프래그먼트를 정제하였다. 이 킬레이트제 표식화한 P10-2 Fab를, P10-2 Fab DFO라고 칭한다.
(실시예 7: 킬레이트제 표식화 Fab 프래그먼트의 결합 활성 평가)
전술한 방법으로 표식한 P10-2 Fab DFO에 대하여, 인간 암 특이적 MUC1에 대한 결합 활성을 Cell ELISA법에 의해 P10-2 Fab와 비교하였다. 즉, 인간 암 특이적 MUC1을 발현하는 T-47D 세포를 0.75×104 세포, 콜라겐 I로 코팅한 96웰 ELISA 플레이트에 파종하고, 밤새 배양 후, 세포를 포르말린으로 고정화하고, 그것에 대하여 상기 P10-2 Fab DFO 또는 P10-2 Fab를 반응시킨 후, 2차 항체로서 HRP 표식 염소 항인간 Igκ 항체(Southern Biotechnology Associates사)를 반응시키고, ECL Prime Western Blotting Detection Reagent(GE Healthcare사)를 첨가하여 발광시키고, 그의 발광도를 조사하였다. 그 결과, 도 3에 도시한 것과 같이 P10-2 Fab DFO와 P10-2 Fab의 결합 활성은 동등하고, P10-2 Fab는 킬레이트제 표식에 의해 결합 활성이 감약되지 않는 것이 확인되었다.
(실시예 8: 인간 방광암 조직 샘플에 있어서의 P10-2의 반응성)
인간 방광암에 있어서의 P10-2 Fab의 반응성을 검토하기 위해서, 인간 방광암 조직 어레이(US Biomax사 BC12011b)를 사용한 면역 염색법으로 검토하였다. P10-2 Fab를 1차 항체로서 사용하면, 2차 항체로서 사용하는 항인간 항체가 인간 조직에 교차되어버리기 때문에, 1차 항체에는 마우스 키메라 P10-2 IgG(P10-2 Fab의 VH 도메인 및 VL 도메인에, 마우스 IgG2a의 CH1 내지 3 도메인 및 마우스 κ쇄의 CL 도메인을 각각 융합한 항체)를 제작하여 사용하였다. 인간 방광암 조직 어레이 샘플을 3％의 과산화수소 용액에서 5분간 반응 후, pH 7.4의 인산 완충 생리 식염수로 세정하였다. 그 후, 마우스 키메라 P10-2 IgG(0.25μg/mL)를 반응시킨 후, 2차 항체로서 One-Step Polymer-HRP 항체(Biogenex사)를 반응시켜, Super Sensitive DAB(Biogenex사)를 첨가하여 발색시켰다. 암 조직에 대한 염색의 양성 반응의 판정은 ±: 매우 경도의 양성, +: 양성, ++: 중등도의 양성, +++: 고도의 양성이라고 하고, 암 조직이 명확하지 않은 일례를 제외하였다. 그 결과, ±는 11예, +는 24예, ++는 17예, +++는 5예이며, 검토한 59예 중 57예에서 양성 반응을 확인할 수 있었다(양성율 97％).
(실시예 9: 킬레이트제 표식화 Fab 프래그먼트의 89Zr 표식화)
89Zr은 1M 옥살산 수용액에 용해시킨 89Zr-Oxalate(오카야마 대학)로서 제조한 것을 사용하였다. 20μL의 89Zr-Oxalate(21.4MBq)를 10μL의 2M 탄산나트륨 수용액으로 중화한 후, 250mM 아세트산나트륨 수용액에 용해시킨 5mg/mL 겐티딘산 용액을 70μL 첨가하였다. 또한, 0.1％ 폴리소르베이트 80 및 20％ 글리세롤을 포함하는 500mM HEPES(4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산) 수용액을 200μL 첨가하였다. 이 89Zr을 포함하는 용액에 9.5mg/mL의 P10-2 Fab DFO를 100μL 첨가하고, 실온에서 30분간 반응시켰다. 얻어진 반응 혼합물을 아미콘 울트라 10K-0.5mL 원심식 필터(Merck Millipore사)를 사용하여 정제하고, 또한 멤브레인 필터(Millex-GV 0.22㎛ 13mm; Merck Millipore사)로 여과함으로써 목적의 P10-2 Fab DFO의 89Zr 표식체(16.1MBq)를 얻었다. 이 89Zr 표식한 P10-2 Fab DFO를 P10-2 Fab DFO 89Zr이라 칭한다. 얻어진 P10-2 Fab DFO 89Zr 용액을 고속 액체 크로마토그래피(20AD 시리즈; 시마즈 세이사쿠쇼)를 사용하여 분석하고, P10-2 Fab DFO의 유지 시간(UV: 10.192분)과 P10-2 Fab DFO 89Zr의 유지 시간(UV: 10.178분, RI: 10.515분)을 비교하여, 각각의 유지 시간이 동등하였던 점에서 P10-2 Fab DFO가 89Zr에 의해 표식되어 있음을 확인하였다. HPLC 분석은 이하의 조건에서 실시하였다. 칼럼: BioSep SEC s3000 300×7.8mm(Phenomenex사), 칼럼 온도: 실온, UV 검출기 파장: 280nm, 이동상: 인산 완충액(Gibco사, 10010-023), 유속: 1mL/min
(실시예 10: Fab 프래그먼트에의 IRDye700DX 부가)
IRDye700DX의 P10-2 Fab에의 부가에는, IRDye700DX NHS Ester(LI-COR Biosciences사)를 사용하였다.
구체적으로는, 인산 완충 생리 식염수(pH 7.4)로 1mg/mL로 조정한 P10-2 Fab 용액에, 1/10양의 1M 인산수소이칼륨 용액(pH 9)을 첨가하였다. 이것에 최종 농도 154μg/mL가 되게 IRDye700DX NHS Ester를 첨가하고, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 후, 아미콘 울트라 10K-15mL 원심식 필터(Merck Millipore사)로 회수하고, IRDye700DX를 부가한 P10-2 Fab를 정제하였다. 이렇게 IRDye700DX를 부가한 P10-2 Fab를 P10-2 Fab IR700이라고 칭한다.
(실시예 11: Fab 프래그먼트의 유방암 세포주 및 방광암 세포주에 대한 결합 활성 평가)
인간 유방암 및 방광암에 있어서의 P10-2 Fab의 결합 활성을 검토하였다.
구체적으로는, 인간 암 특이적 MUC1을 발현하는 인간 유방암 세포주 MDA-MB-468 세포(ATCC로부터 구입 가능; HTB-132, 이하 MM-468 세포) 및 인간 방광암 세포주 647-V 세포(DSMZ로부터 구입 가능; ACC414)를 96웰 플레이트의 1웰당 1×104 세포 파종하고, 밤새 배양 후, 상기 P10-2 Fab를 0.0000003-0.001mg/mL의 농도에서 반응시킨 후, 2차 항체로서 서양 고추냉이 퍼옥시다아제(Horseradish Peroxidase: HRP) 표식 염소 항인간 IgG 항체(Medical & Biological Laboratories사)를 반응시켜, ECL Prime Western Blotting Detection Reagent(GE Healthcare사)를 첨가하여 발광시키고, 그의 발광도를 조사하였다. 그 결과, 도 4에 도시한 것과 같이 P10-2 Fab는 인간 유방암 세포주 MM-468 세포 및 인간 방광암 세포주 647-V 세포에 결합 활성을 갖는 것이 나타났다.
(실시예 12: 피하 담암 모델에 있어서의 형광 표식화 Fab 프래그먼트의 조영 평가)
면역 부전 마우스(SCID 마우스; 닛본 찰스·리버사)의 우측 배면부의 피하에 인간 암 특이적 MUC1 양성 세포로서 인간 유방암 세포주 MM-468 세포를 3×106 세포 이식하였다. 이식 후 약 1개월에 종양 형성된 마우스를 선별하고, 인산 완충 생리 식염수(pH 7.4)에 용해시킨 P10-2 Fab Dye를 0.1, 0.3, 1 또는 3mg/kg의 용량으로 정맥 투여하였다(0.1mg/kg 투여군은 N=2로, 0.3, 1 및 3mg/kg 투여군은 N=3으로 실시함). P10-2 Fab Dye 투여 6시간 후 및 24시간 후에 통상적인 카메라 및 근적외 형광 카메라(Fluobeam(800nm 필터); Fluoptics사)로 촬상하고, 적외 형광 카메라로 촬상한 도면의 종양 부분(Tumor) 및 종양 주위의 정상 부분(Background)의 형광 휘도를 측정하였다. 그 결과, 도 5a에 나타내는 바와 같이 P10-2 Fab Dye는, 투여 6시간 후에 있어서, 인간 암 특이적 MUC1 양성 MM-468 종양 부위에 집적되어 형광 화상에서 명료하게 시인되는 것이 나타났다. 또한, 도 5b에 나타내는 바와 같이 0.1 내지 3mg/kg의 범위에 있어서 P10-2 Fab Dye 투여 용량 의존적으로 종양 부위 형광 휘도/정상 부위 형광 휘도비가 상승하는 것이 나타났다. 또한 그 효과는 투여 24시간 후에 있어서도 지속되고 있음이 밝혀졌다. 이 결과로부터, P10-2 Fab Dye는 투여 6시간 후로부터 24시간 후에 있어서, 인간 MUC1 양성의 암 세포를 검출할 수 있는 것이 밝혀졌다.
(실시예 13: IRDye700DX 부가 Fab 프래그먼트에 의한 종양의 검출)
면역 부전 마우스(누드 마우스; 닛본 찰스·리버사)의 우측 배면부의 피하에 MM-468 세포를 5×106 세포 이식하였다. 본 시험은 N=2로 실시하였다. 이식 40일 후, P10-2 Fab IR700(3mg/kg) 또는 Vehicle(인산 완충 생리 식염수)을 정맥 투여하였다. P10-2 Fab IR700 투여 2시간 후에 동물을 안락사시켜, 종양을 적출하고, IVIS SPECTRUM(Perkin Elmer사)으로 675nm의 파장에서 여기하여 740nm의 파장에서 검출하고, 종양 부분의 발광량을 측정하였다. 그 결과, 도 6에 나타내는 바와 같이 P10-2 Fab IR700은, 투여 2시간 후에 있어서 MM-468 세포에 집적되는 것이 나타났다.
(실시예 14: IRDye700DX 부가 Fab 프래그먼트의 세포 장애성 평가)
P10-2 Fab IR700의 암 치료에의 이용을 검토하기 위해서, 광면역 요법에 의한 세포 장애성을 평가하였다.
구체적으로는, 인간 유방암 세포주 MM-468 세포, 인간 방광암 세포주 647-V 세포 또는 비교예로서 CHO-K1 세포(ATCC로부터 구입 가능; CCL-61)를 384웰 백색 플레이트의 1웰당 5×103 세포 파종하고, 밤새 배양 후, P10-2 Fab IR700을 0, 0.01, 0.1 또는 1μg/mL로 반응시킨 후, 파장 680nm의 광을 0 내지 30J/cm2가 되게 조사하였다. 광 조사 후, 밤새 배양하고, CellTiter-Glo(Promega사) 가하여 발광시켜, 발광량을 측정함으로써 세포의 생세포수를 측정하였다. 또한, 본 시험은 조건마다 각각 3웰씩 실시하였다. 그 결과, 도 7에 도시한 바와 같이, P10-2 Fab IR700은, 광 조사에 의해, 인간 암 특이적 MUC1의 발현 특이적으로 세포 장애성을 나타내는 것이 명확해졌다.
(실시예 15: IRDye700DX 부가 Fab 프래그먼트의 항종양 활성 평가)
면역 부전 마우스(누드 마우스; 닛본 찰스·리버사)의 우측 배면부의 피하에 MM-468 세포를 5×106 세포, 이식하였다. 본 시험은 N=4로 실시하였다. 종양 체적이 300mm3가 된 후, P10-2 Fab IR700(0.3, 1 또는 3mg/kg)을 1, 5, 8, 12 및 15일째에 정맥 투여하였다. Vehicle군에는 인산 완충 생리 식염수를 동일하게 투여하였다. 약물 투여 다음날에 파장 680nm의 광을 0 또는 200J/cm2가 되게 조사하고, 경일적으로 종양 체적을 측정하였다. 그 결과, 도 8에 나타내는 바와 같이, P10-2 Fab IR700은, 투여량 및 광 조사 의존적으로 항종양 효과를 나타내는 것이 명확해졌다.
본 발명의 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 유방암, 폐암, 대장암, 방광암, 피부암, 갑상선암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암 또는 자궁경부암 등의 암의 진단 및/또는 치료에 유용할 것이 기대된다.
서열 번호 1: P10-1 Fab 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 DNA의 염기 서열
서열 번호 2: P10-1 Fab 중쇄 프래그먼트의 아미노산 서열
서열 번호 3: P10-2 Fab 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 DNA의 염기 서열
서열 번호 4: P10-2 Fab 중쇄 프래그먼트의 아미노산 서열
서열 번호 5: 항체 경쇄를 코딩하는 DNA의 염기 서열
서열 번호 6: 항체 경쇄의 아미노산 서열
서열 번호 7: P10-1 Fab 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA의 염기 서열
서열 번호 8: P10-1 Fab 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 9: P10-2 Fab 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA의 염기 서열
서열 번호 10: P10-2 Fab 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 11: 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA의 염기 서열
서열 번호 12: 항체 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 13: 중쇄 시그널 서열
서열 번호 14: 경쇄 시그널 서열
서열 번호 15: MUC1의 세포 외 도메인의 탠덤 리피트 서열
SEQUENCE LISTING <110> Astellas Pharma Inc. <120> NOVEL ANTI-HUMAN MUC1 ANTIBODY FAB FRAGMENT <130> A17011A00 <150> JP2016-224811 <151> 2016-11-18 <160> 15 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA encoding P10-1 Fab heavy chain fragment <400> 1 caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac caggcgccag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactacggcc tgagctgggt gcgccaggct 120 cctggacagg gactggaatg gatgggcgag aaccaccctg gcagcggcat catctaccac 180 aacgagaagt tccggggcag agtgaccctg accgccgacc ggagcaccag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaagcagc 300 ggcaccagag gctttgccta ttggggacag ggcaccctcg tgaccgtgtc ctcagcctcc 360 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctta gtagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 660 tgtgactga 669 <210> 2 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P10-1 Fab heavy chain fragment <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn His Pro Gly Ser Gly Ile Ile Tyr His Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ser Gly Thr Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 <210> 3 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA encoding P10-2 Fab heavy chain fragment <400> 3 caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac caggcgccag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactacggcc tgagctgggt gcgccaggct 120 cctggacagg gactggaatg gatgggcgag aaccaccctg gcagcggcat catctaccac 180 aacgagaagt tccggggcag agtgaccctg accgccgacc ggagcaccag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaagcagc 300 ggcaccagag gctttgacta ttggggacag ggcaccctcg tgaccgtgtc ctcagcctcc 360 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctta gtagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 660 tgtgactga 669 <210> 4 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P10-2 Fab heavy chain fragment <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn His Pro Gly Ser Gly Ile Ile Tyr His Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ser Gly Thr Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 <210> 5 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA encoding antibody light chain <400> 5 gacgtcgtga tgacccagac ccctctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60 atcagctgca gatccagcca gagcatcgtg cacagcaacg gcaacaccta cctggaatgg 120 tatctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acagggtgtc caaccggttc 180 agcggcgtgc ccgacagatt ttctggcagc ggctccggca ccgacttcac cctgaagatc 240 tcccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgtt ttcaaggcag ccacggcccc 300 tggacctttg gccagggaac aaagctggaa atcaagcgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 6 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody light chain <400> 6 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Gly Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 7 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA encoding P10-1 Fab heavy chain variable region <400> 7 caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac caggcgccag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactacggcc tgagctgggt gcgccaggct 120 cctggacagg gactggaatg gatgggcgag aaccaccctg gcagcggcat catctaccac 180 aacgagaagt tccggggcag agtgaccctg accgccgacc ggagcaccag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaagcagc 300 ggcaccagag gctttgccta ttggggacag ggcaccctcg tgaccgtgtc ctca 354 <210> 8 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P10-1 Fab heavy chain variable region <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn His Pro Gly Ser Gly Ile Ile Tyr His Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ser Gly Thr Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA encoding P10-2 Fab heavy chain variable region <400> 9 caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac caggcgccag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactacggcc tgagctgggt gcgccaggct 120 cctggacagg gactggaatg gatgggcgag aaccaccctg gcagcggcat catctaccac 180 aacgagaagt tccggggcag agtgaccctg accgccgacc ggagcaccag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaagcagc 300 ggcaccagag gctttgacta ttggggacag ggcaccctcg tgaccgtgtc ctca 354 <210> 10 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P10-2 Fab heavy chain variable region <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn His Pro Gly Ser Gly Ile Ile Tyr His Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ser Gly Thr Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA encoding antibody light chain variable region <400> 11 gacgtcgtga tgacccagac ccctctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60 atcagctgca gatccagcca gagcatcgtg cacagcaacg gcaacaccta cctggaatgg 120 tatctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acagggtgtc caaccggttc 180 agcggcgtgc ccgacagatt ttctggcagc ggctccggca ccgacttcac cctgaagatc 240 tcccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgtt ttcaaggcag ccacggcccc 300 tggacctttg gccagggaac aaagctggaa atcaagcgt 339 <210> 12 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody light chain variable region <400> 12 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Gly Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 13 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain signal sequence <400> 13 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain signal sequence <400> 14 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys 20 <210> 15 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Tandem repeat sequence of an extracellular domain of MUC1 <400> 15 His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr 1 5 10 15 Ala Pro Pro Ala 20

Claims (52)

  1. 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
    (a) 서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
    (b) 서열 번호 8 또는 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 8 또는 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
  2. 제1항에 있어서, 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
    (a) 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
    (b) 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 2 또는 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
  3. 제1항에 있어서, 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
    (a) 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
    (b) 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역이며, 서열 번호 10의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
  4. 제3항에 있어서, 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트:
    (a) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트; 및
    (b) 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
  5. 제4항에 있어서, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
  6. 제4항에 있어서, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트.
  7. 1 이상의 표식부와, 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체.
  8. 제7항에 있어서, 표식부가 (i) 배위자 및 링커, (ii) 배위자, (iii) 형광 색소 및 링커, 또는 (iv) 형광 색소인 복합체.
  9. 제8항에 있어서, 표식부가 (i) 배위자 및 링커 또는 (ii) 배위자인 복합체.
  10. 제9항에 있어서, 배위자가 하기 식 (A)로 표시되는 배위자인 복합체:
    Figure 112022111123951-pct00031

    식 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 또는 링커로의 결합을 나타낸다.
  11. 제10항에 있어서, 표식부가 하기 식 (A')로 표시되는 배위자 및 링커인 복합체:
    Figure 112022111123951-pct00032

    식 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타낸다.
  12. 제11항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가, 그의 아미노기를 통해 표식부 말단 C(=S)기의 탄소 원자와 결합하고 있는 복합체.
  13. 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 복합체:
    (a) 제12항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체;
    (b) 제12항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가
    서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체; 및
    (c) 상기 (a) 및 상기 (b)의 혼합물인 복합체.
  14. 제9항에 있어서, 추가로 금속을 포함하는 복합체.
  15. 제14항에 있어서, 금속이 금속 방사성 동위 원소인 복합체.
  16. 제15항에 있어서, 금속이 89Zr인 복합체.
  17. 제13항에 있어서, 추가로 89Zr을 포함하는 복합체.
  18. 제8항에 있어서, 표식부가 (i) 형광 색소 및 링커 또는 (ii) 형광 색소인 복합체.
  19. 제18항에 있어서, 형광 색소가, 하기 식 (B) 및 하기 식 (C)로 이루어지는 군에서 선택되는 형광 색소인 복합체:
    Figure 112022111123951-pct00033

    Figure 112022111123951-pct00034

    식 (B) 및 (C) 중, 파선은 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트 또는 링커로의 결합을 나타낸다.
  20. 제19항에 있어서, 파선이 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트로의 결합을 나타내고, 상기 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트는, 그의 아미노기를 통해 표식부 말단 C(=O)기의 탄소 원자와 결합하고 있는 복합체.
  21. 제20항에 있어서, 표식부가 식 (B)로 표시되는 형광 색소인 복합체.
  22. 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 복합체:
    (a) 제21항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체;
    (b) 제21항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체; 및
    (c) 상기 (a) 및 상기 (b)의 혼합물인 복합체.
  23. 제20항에 있어서, 표식부가 식 (C)로 표시되는 형광 색소인 복합체.
  24. 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 복합체:
    (a) 제23항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체;
    (b) 제23항에 있어서, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트가 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 프래그먼트이며, 서열 번호 4의 아미노산 번호 1의 글루타민이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 프래그먼트, 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트인 복합체; 및
    (c) 상기 (a) 및 상기 (b)의 혼합물인 복합체.
  25. 이하의 (a) 및 (b)를 포함하는 폴리뉴클레오티드:
    (a) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
    (b) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  26. 이하의 (a) 및 (b)를 포함하는 폴리뉴클레오티드:
    (a) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
    (b) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  27. 이하의 (a) 및 (b)를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
    (b) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  28. 이하의 (a) 및 (b)를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
    (b) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  29. 이하의 (c) 및 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포:
    (c) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
    (d) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
  30. 이하의 (c) 및 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포:
    (c) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
    (d) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
  31. 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포를 배양하고 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법:
    (a) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
    (b) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
    (c) 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 및 제1항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
  32. 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 숙주 세포를 배양하고 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는, 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 방법:
    (a) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포;
    (b) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포; 및
    (c) 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 중쇄 프래그먼트를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 및 제5항에 기재된 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
  33. 제31항 또는 제32항에 기재된 방법에 의해 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 생산하는 공정, 및 당해 Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정을 포함하는, 표식부와 항인간 MUC1 항체 Fab 프래그먼트를 포함하는 복합체를 생산하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정이, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 배위자와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 배위자와 직접 공유 결합시키는 공정인, 복합체를 생산하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 추가로, 당해 복합체의 배위자를 금속 방사성 동위 원소로 표식시키는 공정을 포함하는, 복합체를 생산하는 방법.
  36. 제33항에 있어서, Fab 프래그먼트를 표식부와 공유 결합시키는 공정이, 당해 Fab 프래그먼트를 i) 형광 색소와 링커를 통해 결합시키거나 또는 ii) 형광 색소와 직접 공유 결합시키는 공정인, 복합체를 생산하는 방법.
  37. 1종 이상의 제7항 내지 제24항 중 어느 한 항에 기재된 복합체, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암 진단용 조성물.
  38. 제17항, 제22항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된 복합체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암 진단용 조성물.
  39. 제17항에 기재된 복합체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암 진단용 조성물.
  40. 제22항에 기재된 복합체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암 진단용 조성물.
  41. 제24항에 기재된 복합체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암 진단용 조성물.
  42. 제37항에 있어서, 암이 유방암 또는 방광암인 진단용 조성물.
  43. 1종 이상의 제7항 내지 제24항 중 어느 한 항에 기재된 복합체, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암을 치료하기 위한 의약 조성물.
  44. 제17항, 제22항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된 복합체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암을 치료하기 위한 의약 조성물.
  45. 제24항에 기재된 복합체를 포함하는 인간 MUC1을 발현하는 암을 치료하기 위한 의약 조성물.
  46. 제43항에 있어서, 암이 유방암 또는 방광암인 의약 조성물.
  47. 제7항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 유방암 또는 방광암의 진단 또는 치료에 있어서 사용하기 위한 복합체.
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