KR102508649B1 - 사멸 수용체 작용제로 전신성 경화증 완화 - Google Patents

사멸 수용체 작용제로 전신성 경화증 완화 Download PDF

Info

Publication number
KR102508649B1
KR102508649B1 KR1020187020296A KR20187020296A KR102508649B1 KR 102508649 B1 KR102508649 B1 KR 102508649B1 KR 1020187020296 A KR1020187020296 A KR 1020187020296A KR 20187020296 A KR20187020296 A KR 20187020296A KR 102508649 B1 KR102508649 B1 KR 102508649B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
agonist
trail
peg
antibodies
ssc
Prior art date
Application number
KR1020187020296A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20180095013A (ko
Inventor
이슬기
마틴 지. 폼퍼
박종성
오유민
마그달레나 스컬리
모린 호튼
Original Assignee
더 존스 홉킨스 유니버시티
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 더 존스 홉킨스 유니버시티 filed Critical 더 존스 홉킨스 유니버시티
Publication of KR20180095013A publication Critical patent/KR20180095013A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102508649B1 publication Critical patent/KR102508649B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명은 전신 경화증(SSc; scleroderma)과 같은 자가 면역 섬유증을 치료 및/또는 예방하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 상기 방법은 그것을 필요로 하는 대상에게 유효량의 사멸 수용체 작용제를 투여하는 것을 포함한다. 적합한 사멸 수용체 작용제는 종양 괴사 인자(TNF)-관련 세포 자멸 유발 리간드 (TRAIL), 작용성 사멸 수용체 항체 및 이의 변이체, 유사체 또는 유도체를 포함한다. 사멸 수용체 작용제의 투여는 섬유아세포 또는 섬유생물세포 활성화를 차단하고/하거나 근섬유 아세포를 감소시키거나 고갈시킴으로써 전신 경화증을 감소시키거나 예방한다.

Description

사멸 수용체 작용제로 전신성 경화증 완화
관련 출원의 참조
본 출원은 35U.S.C. §119(e)에 따라 2015년 12월 17일에 출원된 미국 가출원 제62/268,637호의 우선권을 주장하고, 본 출원에 참조로서 통합된다.
연방 후원 연구에 관한 진술
본 발명은 국방부(Department of Defense)가 수여하는 CA130460에 따른 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 발명에 대해 특정 권리를 가지고 있다.
서열목록 참조
2016년 12월 14일에 작성되고, 2,872바이트의 크기를 갖는 "JHU_C_13722_ST25.txt" 라는 텍스트 파일로 제출된 서열 목록은 37C.F.R. §1.52(e)(5)에 따라 본 명세서에 참조로 통합된다.
본 발명은 일반적으로 사멸 수용체 작용제로써 자가 면역 섬유성 질환을 치료하는 조성물 및 방법에 관한 것이다.
섬유증은 콜라겐과 같은 조직 성분을 포함하는 결합 조직의 덩어리가 증가되고, 정상 조직이 결합 조직으로 대체되는, 조직 경화증으로 인한 정상 기능 상실로 인한 상태를 의미한다. 섬유증은 간, 폐, 신장, 심장, 피부 및 다른 조직에서 발생할 수 있다.
피부 경화증(scleroderma)라고도 알려진 전신성 경화증(SSc)은 희귀성 자가 면역 및 류마티스 질환이다(McMahan ZH et al., Nat Rev Rhuematol; 9(2):90-100 (20130 and Varga J et al., J. Clin Invest;117(3):557-567 (2007)).
SSc는 섬유증에 의해 결합 조직의 경화를 유도하며(Ho YY et al., Nat Rev Rheumatol;10(7):390-402 (20140 and Bhattacharyya S et al., Nat Rev Rheumatol;8(1):42-54 (2012)), 얼굴과 손과 같이 가장 눈에 띄는 신체 부위의 피부에 영향을 미치는 세포 외 기질(ECM) 단백질의 축적은 심한 역기능 및 폐, 심장, 신장 및 위를 포함한 거의 모든 내부 장기의 기능 상실을 유발할 수 있다. 따라서, 이 면역 질환의 증상으로는 간, 폐, 신장, 위장관 및 심장을 포함하는 피부 및 내장 기관의 섬유증이 포함된다. 이러한 증상은 종종 환자에게 쇠약해 질 수 있다. SSc 유병률은 전 세계적으로 250 만명으로 추정된다. 치료 표준이 없는 류마티스 질환 중 사망률이 가장 높다 (Nikpour M et al., Curr Opin Rheumatol;26(2):131-137 (2014)).
여기에 개시되기에 앞서, SSc에 의해 영향을 받는 내부 장기의 피부 섬유증 및 섬유증을 개선 및/또는 예방하는 치료법은 없었다. 따라서 약물이 출현하지 않았기 때문에 SSc 요법에 대한 충족되지 않은 요구가 있다.
본 발명은 적어도 부분적으로 전신성 경화증(SSc)과 같은 섬유성 자가 면역 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 조성물 및 방법의 확인에 기초한다.
이론에 얽매이기를 바라지 않고, 본 발명의 방법 및 조성물은 섬유 아세포의 형성 및/또는 진행에 관여하는 주요 세포인 근섬유 아세포(예를 들어, 활성화된 섬유 아세포)를 선택적으로 표적화함으로써 작용할 것으로 생각되며, 간, 폐, 신장, 심장, 위장관, 피부의 섬유증 상태를 포함하지만, SSc와 같은 조건과 선택적으로 관련되는 그러한 섬유증 상태를 포함한다. 본 명세서에서 제시된 치료 전략은 합성 효소뿐만 아니라 사멸 수용체(DR)작용제, 변이체 및/또는 유도체인 제제 및 임의로 자연 발생 DR 작용제의 다른 모방체의 확인 및 사용에 기초한다.
한 측면에서, 본 발명은 대상체의 섬유증을 감소 또는 예방하는 데 효과적인 양의 사멸 수용체 작용제를 포유동물 대상체에 투여함으로써, 대상체의 자가 면역 질환 또는 장애를 치료함으로써, 포유 동물 대상의 섬유성 자가 면역 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
한 실시예에서, 본 출원은 포유 동물 대상에서의 섬유성 자가 면역 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 대상에 사멸 수용체 작용제를 투여하여 섬유 아세포 활성화(근섬유 아세포로의 전이)를 억제 및 차단하거나, 활성화된 섬유 아세포 및/또는 프로파이브로제닉 세포상의 상향 조절된 사멸 수용체를 표적화하여 활성화된 근섬유 아세포를 고갈시키는 것을 포함한다. 사멸 수용체 작용제의 예는 TRAIL 및 작용성 사멸 수용체 항체 뿐만 아니라 이들의 유사체, 변이체, 단편 및 유도체를 포함한다. 활성화된 섬유 모세포 및/또는 섬유 모세포의 예로는 질병 진행 중에 혈관 주위 세포 및 섬유 아세포가 포함된다.
한 실시예에서, 섬유증성 자가 면역 질환은 전신 경화증 (SSc)이다. 추가의 실시예에서, SSc는 한정된 경피증 또는 확산성 경피증이다.
특정 실시예에서, DR 작용제는 종양 괴사인자 (TNF) - 관련 세포 자멸 - 유발 리간드(TRAIL), TRAIL 유사체, DR 작용 항체 또는 그의 유도체이거나 또는 그를 포함한다. 추가의 실시예에서, DR 작용제는 인간 재조합 TRAIL, 인간 TRAIL 유사체 또는 이의 유도체이거나 또는 천연 TRAIL, 천연 TRAIL 유사체 또는 이의 유도체를 포함하거나 포함한다. 또 다른 실시예에서, DR 작용제는 항체, 키메라 항체, 항체 단편, 융합 단백질 및 다가 제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 DR4 또는 DR5 작용제를 포함한다.
본 출원의 또 다른 실시예는 중합체에 부착된 DR 작용제를 제공한다. 관련된 실시예에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 이의 유도체이다. PEG 또는 그 유도체는 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙시니미딜 프로피오네이트, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트 N-히드록시숙시니미드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드 및 메톡시폴리에틸렌 글리콜 말레이미드일 수 있다. PEG 및 그 유도체는 선형 및/또는 다중 분지형일 수 있다. 분지형 중합체는 2 분지, 3 분지, 다중-분지, 이량체 및 삼량체를 포함한다.
PEG 또는 이의 유도체는 약 1,000 Da 내지 100,000 Da의 분자량을 갖는다. 추가의 실시예에서, PEG 또는 이의 유도체는 약 5,000 내지 50,000의 분자량을 갖는다. PEG 또는 이의 유도체의 분자량은 약 5,000 내지 70,000 Da, 또는 약 20,000 내지 50,000 Da 또는 1,000 Da 내지 100,000 Da의 범위 내에 있는 임의의 분자량일 수 있다.
DR 작용제는 전신적으로, 장내로, 비경구적으로, 국소적으로, 또는 협측 전달을 통해 투여될 수 있다. DR 작용제는 국부적으로 또는 피하 등 국소 투여될 수 있다.
한 실시예에서, 피부 두께, 피부 콜라겐, TGF-β, PDGF, PDGF 수용체, CTGF 및/또는 α-SMA + 섬유 모세포 세포의 수준은 적절한 대조군에 비하여 피험자의 정상 수준으로 감소되거나 유지되거나 정상 수준으로 회복된다.
또 다른 실시예에서, 상기 사멸 수용체 작용제는 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg 사이의 투여량, 예컨대, 0.1 내지 50 mg/kg, 예를 들면 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 또는 50 mg/kg의 투여량으로 환자에게 투여된다.
특정 실시예에서, 상기 사멸 수용체 작용제는 하나 이상의 투여량으로 투여된다. 선택적으로, 상기 사멸 수용체 작용제는 1일 이상 동안, 예를 들면, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 10일, 15일, 20일, 25일, 1개월, 2개월, 3개월 6개월, 1년, 또는 그 이상 동안 상기 대상에게 투여된다.
일부 경우, 사멸 수용체 작용제는 매일 투여된다. 다른 경우, 사멸 수용제 작용제는 격일로 투여된다.
또 다른 실시예에서, 대상은 인간이다. 어떤 경우에는, 대상은 섬유성 자가 면역 질환 또는 장애를 앓고 있거나 발병할 위험이 있는 것으로 확인된다.
본 발명은 또한 0.1 내지 50 mg/kg 또는 0.001 % 내지 50 % 농도의 사멸 수용체 작용제 및 약학 적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 포유 동물 대상에서의 전신성 섬유성 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 주사가능한 약제학적 조성물을 제공한다.
도 1은 블레오마이신-유발 전신 경화증의 생체내 마우스 모델 연구를 위한 개략적인 연구 계획을 설명한다.
도 2는 피부 두께의 정량적 평가를 보여주는 막대 그래프이다. 피부의 진피 두께는 건강한 피부에 비해 부레오마이신에 의한 피부 섬유화의 70% 이상 증가했다. TRAILPEG는 피부 두께의 증가를 약화시키고 정상 수준으로 되돌려 놓았다. ### P <0.001 vs. 정상, * P <0.05 대 비히클, *** P <0.001 대 비히클.
도 3은 실시간 PCR에 의해 정량화된 병변 피부에서의 Col1A1 mRNA 발현을 나타내는 막대 그래프이다. 정상 마우스와 비교하여 블레오마이신으로 처리된 마우스에서 Col1A1 및 Col1A2 mRNA의 수준의 3배 증가가 관찰되었다. TRAILPEG 처리는 콜라겐 mRNA의 상향 조절을 현저하게 감소시켰다. ### P <0.001 대 정상, *** P <0.001 대 비히클.
도 4는 실시간 PCR에 의해 정량화된 병변 피부에서의 형질전환 성장인자-베타1 (TGF-β1) mRNA 발현을 나타내는 막대 그래프이다. TRAILPEG 투여는 TGF-β1 mRNA의 상향 조절을 실질적으로 방지하였다; #p <0.05 대 정상; *p<0.05 대 비히클.
도 5는 실시간 PCR에 의해 정량화된, 유도된 폐섬유증에서의 Col1A1 mRNA 발현을 나타내는 막대 그래프이다. 결과는 정상 쥐와 비교하여 블레오 마이신으로 치료 한 마우스에서 Col1A1 mRNA의 수준이 50 % 이상 증가한 것을 보여주었다. #p <0.05, ### p <0.001 대 정상; ** p <0.01, *** p <0.001 대 비히클.
도 6a는 실시간 PCR에 의해 정량화된 블레오마이신 유도된 폐에서 혈소판-유도 성장 인자(PDGF)-α mRNA 발현을 나타내는 막대 그래프를 도시한다. 결과는 정상 마우스와 비교하여 블레마이신으로 처리된 마우스에서 PDGF-α mRNA의 수준이 증가함을 보여 주었다. TRAILPEG 처리는 PDGF-α mRNA의 상향 조절을 현저하게 약화 시켰으며; #p <0.05, ### p <0.001 대 정상; * p <0.05, *** p <0.001 대 비히클.
도 6b는 실시간 PCR에 의해 정량화된, 블레오마이신 유도된 폐에서 PDGF-β mRNA 발현을 나타내는 막대 그래프를 도시한다. 결과는 정상 마우스와 비교하여 블레오마이신으로 처리된 마우스에서 PDGF-β mRNA의 수준이 증가함을 보여 주었다. TRAILPEG 처리는 PDGF-β mRNA의 상향 조절을 현저하게 약화시켰으며; #p <0.05, ### p <0.001 대 정상; * p <0.05, *** p <0.001 대 비히클.
I. 정의
본 출원에서 사용된 "섬유성 자가 면역 질환 또는 장애"는 섬유증을 특징으로 하는 임의의 자가 면역 질환 또는 장애를 지칭한다. 전신 경화증(SSc; 경피증)은 간, 폐, 신장, 심장, 위장관, 피부 등의자가 면역 매개 섬유화와 마찬가지로 섬유성 자가 면역 질환 또는 장애의 예시적인 형태이다.
용어 "항체"는 다클론 항혈청 또는 단일 클론 항체를 지칭할 수 있다. 본 출원에 기재된 항체는 손상되지 않은 단클론 항체뿐만 아니라 면역학적으로 활성 인 항체 단편, 예를 들어, Fab 또는 (Fab)2 단편; 조작된 단일 사슬 FV 분자; 또는 키메라 분자, 예를 들어 마우스와 같은 하나의 항체의 결합 특이성 및 인간 기원의 다른 항체의 잔존 부분을 함유하는 항체일 수 있다. 본 출원에 기술된 항체는 또한 사람에서 자연적으로 생성된 항체 변이체와의 유사성을 증가시키기 위해 그의 단백질 서열이 변형된 비인간 종으로부터의 항체인 인간화 항체를 포함한다. 일반적으로, 인간화 항체는 비인간인 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 본 출원에서 일반적으로 "수입"항체 도메인, 특히 가변 도메인으로부터 취하는 "수입" 잔기로 언급된다.
본 출원에 사용된 "작용제"(agonist)는 단백질의 생물학적 기능을 향상시키는 분자이다. 그로 인해 작용제는 그의 기능을 유도하기 위해 표적 단백질에 결합할 수 있다. 그러나, 단백질에 결합하지 않는 작용제도 또한 구상된다. 작용제는 단백질의 생물학적 기능을 직접적으로 또는 간접적으로 강화 또는 활성화시킬 수 있다. 특정 유전자의 발현을 증가시키는 작동 제는 본 출원의 특정 실시 양태의 범위 내에서 계획된다. 적절한 작용제는 당업자에게 명백할 것이다. 본 출원에서, 작용제는 표적 단백질의 기능을 직접적으로 강화시킬 필요는 없다. 오히려, 작용제는 또한 표적 단백질의 활성화를 궁극적으로 유도하는 경로에서 하나 이상의 단백질 상류의 기능을 안정화시키거나 향상시키는 것으로 계획된다. 대안으로, 작용제는 표적 단백질의 음성 전사 조절 인자의 기능을 억제할 수 있으며, 여기서 전사 조절 인자는 표적 단백질의 전사를 최종적으로 억제하는 경로의 상류에서 작용한다.
"사멸 수용체"는 8개의 구성원을 포함하는 종양 괴사 인자 수용체(TNFR: Tumor Necrosis Factor Receptor) 수퍼 패밀리의 하위 클래스를 형성한다: Fas, TNFRl, 뉴로트로핀 수용체(neurotrophin receptor) (p75NTR), 엑토디스플라신-A 수용체(ectodysplasin-A receptor (EDAR)), 사멸 수용체3 (death receptor 3, DR3), 사멸 수용체 4(DR4), 사멸 수용체5(DR5), 및 사멸 수용체6(DR6).
대부분의 사멸 수용체는 확인된 그들의 상응하는 천연 리간드를 가진다: TNFR1은 TNF에 의해 활성화될 수 있고, Fas는 Fas리간드(FasL)에 의해 활성화되며, p75NTR은 신경 성장인자(NGF, 유전자 ID: 4803)에 의해 활성화된다.
EDAR에 대한 하나의 리간드는 엑토디스플라신-A(EDA, 유전자 ID: 1896)이다. DR3는 Apo3L(TWEAK/TNFSF12, 유전자 ID: 8742), TL1A/VEGI (혈관 내피 성장 억제제/TNFSF15, 유전자 ID: 9966)에 의해 활성화될 수 있는 반면, DR4 및 DR5는 TNF-관련 세포 자멸-유발 리간드(TRAIL)를 공유한다.
DR6에 대한 리간드는 확인되지 않았다. 이들 리간드, 이의 변이체 또는 천연 리간드의 효과를 모방하는 임의의 분자는 사멸 수용체 작용제로 간주된다. 이들 천연 리간드 및 이의 항진제는 모두 사멸 수용체 작용제로 간주된다.
"사멸 수용체 작용제"는 하나 이상의 사멸 수용체를 통해 친-세포 사멸 신호전달(signaling)을 유도할 수 있는 임의의 분자로서 본 출원에서 정의된다. 상기 사멸 수용체 작용제는 항체, 사멸 리간드, 사이토카인(cytokines), 벡터 발현 사멸 수용체 작용제, 펩티드, 소분자 작용제, 사멸 수용체 작용제를 발현하는 세포 (예컨대, 줄기 세포), 및 상기 사멸 리간드의 발현을 유도하는 약물로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
예시적인 사멸 수용체 작용제는 하나 이상의 세포 내 경로를 통해 사멸 수용체에 결합하여 세포 사멸 또는 프로그램된 세포 사멸을 유도할 수 있다. 예시적으로 잘 연구된 사멸 수용체 작용제는 TNF 리간드 계열의 구성원을 포함하며, 이는 조직에 대한 보호 및 병원성 효과에 추가하여, 면역 내성에 대한 규제 및 해로운 영향에 중요한 역할을 할 수 있다 (Rieux-Laucat et al., 2003, Current Opinion in Immunology 15:325; Mackay and Ambrose, 2003, Cytokine and growth factor reviews, 14: 311; Mackay and Railed, 2002, Current Opinion in Immunology, 14: 783-790).
그러한 단백질의 예는 종양 괴사인자-관련 세포 자멸 유발 리간드(TRAIL), Fas 리간드(FasL) 및 종양 괴사 인자(TNF)를 포함한다. 예시적인 사멸 수용체 작용제는 트랜스멤브레인, 사멸 도메인 수용체에 결합시에 세포 사멸을 유도한다. 예를 들어, TRAIL은 사멸 수용체 4(DR4; TRAIL 수용체 1) 및 5(DR5; TRAIL 수용체 2)에 결합한다.
세 가지 다른 TRAIL-결합 수용체가 존재하지만, 세포 사멸 신호를 전달할 수 없는 것처럼 보이는 것처럼 "디코이 수용체"로 간주된다.
디코이 수용체1(DcR1)은 트랜스멤브레인과 세포내 도메인이 결핍된 것으로 보이며, 글라이코실포스파티딜이노시톨-테일을 통해 원형질막에 고정된다.
디코이 수용체2(DcR2)는 끝이 절단된 비기능성 사멸 도메인을 보유하고 있는 반면, 제3디코이 수용체인 오스테오프로테그린(osteoprotegerin)은 분비된 수용체이다. Fas 리간드는 Fas(CD95 또는 Apo-1로도 알려짐)에 결합함으로써 세포 사멸을 유도하는 반면, DcR3는 Fas로부터 FasL을 분리한다.
다른 사멸 수용체 작용제인 TNF는 TNF-수용체 I(TNFRI 또는 TNFR55로도 알려짐)에 결합함으로써 세포 사멸을 유도할 수 있다.
본 출원에 사용된 바와 같이, 용어 "변이체"는 기준 폴리펩티드 또는 폴리 뉴클레오티드와는 상이하지만 필수 특성을 보유하는 폴리펩티드 또는 폴리 뉴클레오티드를 나타낸다. 폴리펩티드의 전형적인 변이체는 또 다른 기준 폴리펩티드와 아미노산 서열이 상이하다. 일반적으로, 기준 폴리펩티드 및 변이체의 서열이 전체적으로 유사하고, 많은 영역에서 동일하다는 점에서 차이가 제한적이다. 변이체 및 참조 폴리펩티드는 하나 이상의 변형(예를 들어, 치환, 첨가 및/또는 결실)에 의해 아미노산 서열이 다를 수 있다. 치환 또는 삽입된 아미노산 잔기는 유전 암호에 의해 암호화된 것일 수도 아닐 수도 있다. 폴리펩티드의 변이체는 대립 유전자 변이체와 같은 자연 발생적이거나 또는 자연 발생적으로 알려지지 않은 변이체 일 수 있다.
"종양 괴사 인자 패밀리 구성원"또는 "종양 괴사 인자 리간드 패밀리 구성원"은 종양 괴사 인자 수용체를 활성화시킬 수 있는 임의의 사이토카인이다. 본 출원에 사용된 "TRAIL 단백질"은 야생형 TRAIL 단백질 및 TRAIL 변형체를 모두 포함한다.
변형 및 변경이 개시된 폴리펩티드의 구조에서 이루어질 수 있고 여전히 폴리펩티드와 유사한 특성을 갖는 분자(예를 들어, 보존적 아미노산 치환)를 수득 할 수 있다. 예를 들어, 특정 아미노산은 상당한 활성 손실없이 서열의 다른 아미노산으로 대체될 수 있다. 폴리펩티드의 생물학적 기능 활성을 정의하는 것이 폴리펩티드의 상호작용 용량 및 성질이기 때문에, 특정 아미노산 서열 치환이 폴리펩티드 서열에서 이루어질 수 있고, 그럼에도 불구하고 유사한 특성을 갖는 폴리펩티드를 수득할 수 있다.
예를 들어, "변이체" 사멸 수용체 작용제는 사멸 수용체 작용제가 사멸 수용체 작용제의 야생형 서열과 적어도 하나의 아미노산 위치가 상이한 것을 의미한다. "변이체" TRAIL 단백질은 TRAIL 단백질이 야생형 TRAIL 단백질 (TNFSF10, TL2; APO2L; CD253; Apo-2L로도 공지됨), Entrez GenelD:8743; 수탁번호 NM_003810.2; UniProtKB/Swiss-Prot:P50591; UniProtKB/TrEMBL: Q6IBA9.
"약제"는 임의의 작은 화합물, 항체, 핵산 분자 또는 폴리펩티드, 또는 그의 단편을 의미한다.
본원에서 사용된 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"이란 용어는 치료되는 질환 상태의 하나 이상의 증상을 치료, 억제 또는 경감시키기에 충분하거나 또는 다른 방법으로 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 제공하기에 충분한 투여 량을 의미한다. 정확한 투여량은 대상 의존성 변수(예: 연령, 면역계 건강 등), 질환 또는 장애 및 투여되는 치료제와 같은 다양한 요인에 따라 달라질 것이다. 유효량의 효과는 대조군에 비례할 수 있다. 이러한 대조군은 당업계에 공지되어 있고 본 출원에서 논의되었으며, 예를 들어 약물 또는 약물 조합의 투여 전 또는 투여하지 않은 환자의 상태일 수 있거나 또는 약물 조합의 경우, 조합은 약물 중 하나만의 투여 효과와 비교될 수 있다. 대조군은 약물/치료를 필요로 하지만 약물/치료를 받지 않은 대상일 수도 있다.
"개선하다"는 질병의 발병 또는 진행을 감소, 억제, 약화, 감소, 체포 또는 안정화시키는 것을 의미한다.
본 명세서에서, "포함하다", "포함하는", "함유하다" 및 "가지는" 등은 특허법에서 그들에게 부여된 의미를 가질 수 있으며, "포함한다", "함유한다" 등을 의미할 수 있다. "본질적으로 구성된다" 또는 "본질적으로 구성되어 있다"는 것은 특허법에서 규정한 의미를 가지며, 용어는 개방적이며, 열거된 것의 기본 또는 새로운 특징만큼 오랫동안 언급된 것 이상의 존재를 허용한다. 인용된 것 이상의 존재에 의해 변경되지 않지만, 종래 기술의 실시예는 배제된다.
"검출"은 검출될 분석물의 존재, 부재 또는 양을 확인하는 것을 의미한다.
"표지"는 질환 또는 장애와 관련된 발현 수준 또는 활성의 변화를 갖는 임의의 단백질 또는 폴리뉴클레오티드를 의미한다.
"감소", "억제", "완화" 또는 "감소"라는 용어는 대조군과 관련하여 사용된다. 당업자는 각 실험에 사용할 적절한 대조군을 쉽게 확인할 수 있을 것이다. 예를 들어, 화합물로 치료된 대상 또는 세포에서 감소된 반응은 화합물로 처리되지 않은 대상 또는 세포에서의 반응과 비교된다.
"변조"는 변경(증가 또는 감소)을 의미한다. 이러한 변경은 본 출원에 기술된 것과 같은 표준 기술 공지 방법에 의해 검출된다.
여기에 제공된 범위는 범위 내의 모든 값에 대한 단축형으로 이해된다. 예를 들어, 1 내지 50의 범위는 임의의 수, 수 조합, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50을 포함하는 하위 범위를 포함하는 것으로 이해된다.
"재조합 숙주 세포" 또는 "숙주 세포"는 삽입에 사용된 방법, 예를 들어 직접 흡수, 형질 도입 또는 재조합 숙주 세포를 생성하기 위한 당 업계에 공지된 다른 방법에 관계없이 외인성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포를 말한다. 외인성 폴리뉴클레오티드는 비통합 벡터, 예를 들어 플라스미드로서 유지되거나, 또는 숙주 게놈에 통합될 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "배지"(medium) 또는 "배지"(media)는 박테리아 숙주 세포, 효모 숙주 세포, 곤충 숙주 세포, 식물 숙주 세포, 진핵 숙주 세포, 포유류 숙주 세포, CHO 세포, 원핵 숙주 세포, 대장균, 또는 슈도모나스 숙주 세포, 및 세포 함유물을 포함하는 임의의 숙주 세포를 지지하거나 함유할 수 있는, 임의의 배양 배지, 용액, 고체, 반고체 또는 강성 지지체를 포함한다. 따라서, 상기 용어는 숙주 세포가 증식된 배지, 예를 들어 배양 단계 전후의 배지를 포함하여 TRAIL이 분비된 배지를 포함할 수 있다. 이 용어는 또한 TRAIL이 세포 내에서 생성되고 숙주 세포가 용해되거나 TRAIL을 방출하도록 파괴되는 경우와 같이 숙주 세포 용해물을 함유하는 완충제 또는 시약을 포함할 수 있다.
"감소한다"는 최소한 10 %, 25 %, 50 %, 75 % 또는 100 %의 음성 변형을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "약제를 획득하는 것"에서와 같이 "획득하는"은 약제를 합성, 구매 또는 획득하는 것을 포함한다.
"대상"(subject)은 소, 말, 개, 양, 고양이와 같은 인간 또는 비인간 포유 동물을 포함하나 이에 국한되지 않는 포유 동물을 의미한다.
"TRAIL"이라는 용어는 또한 임의의 하나 이상의 TRAIL 또는 임의의 다른 폴리펩티드, 단백질, 탄수화물, 중합체, 소분자, 링커, 리간드 또는 임의의 유형의 다른 생물학적 활성 분자의 TRAIL 이합체, 동종 이량체, 이종 다형체 또는 호모 다합체를 포함한다. 화학적 수단에 의해 또는 융합 단백질로서 발현될 뿐만 아니라 예를 들어 생물학적 활성을 유지하면서도 특정 결실 또는 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드 유사체를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", "치료" 등은 관련된 장애 및/또는 증상(예를 들어, 섬유증)을 감소시키거나 완화시키는 것을 나타낸다. 배제되지는 않지만, 장애 또는 상태를 치료하는 것은 그것과 관련된 장애, 상태 또는 증상이 완전히 제거될 것을 요구하지 않는다는 것으로 이해할 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "예방하다", "예방하는", "예방", "예방적 처치" 등은 질환을 가지지 않거나 발병할 위험이 있는 또는 장애 또는 상태를 발병하기 쉬운 대상에서 장애 또는 증상이 발생할 확률을 감소시키는 것을 지칭한다.
"참조"는 표준 또는 대조 조건을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 명백하지 않는 한, "또는" 이라는 용어는 포괄적인 것으로 이해된다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 구체적으로 언급되거나 명백한 경우가 아니라면, 용어 "하나의"("a", "an") 및 "상기(the)"는 단수 또는 복수로 이해된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 구체적으로 언급되거나 명백한 경우가 아니라면, 용어 "약"은 당해 분야의 통상의 허용 범위 내, 예를 들어 평균의 2 표준 편차 이내로 이해된다. 약은 명시된 값의 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0.5 %, 0.1 %, 0.05 % 또는 0.01 % 이내로 이해될 수 있다. 문맥 상 명확하지 않은 한, 여기에 제공된 모든 수치는 그 용어로 수정된다.
본 명세서에서 변수의 임의의 정의에서 화학 그룹의 목록을 인용하는 것은 단일 그룹 또는 열거된 그룹의 조합으로서의 변수의 정의를 포함한다. 본 명세서의 변수 또는 양태에 대한 실시예의 기재는 임의의 단일 실시예로서 또는 임의의 다른 실시예 또는 그의 일부와 조합하여 상기 실시예를 포함한다.
본 명세서에서 제공된 임의의 조성물 또는 방법은 본 명세서에서 제공된 하나 이상의 임의의 다른 조성물 및 방법과 조합될 수 있다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 다음의 상세한 설명 및 청구 범위로부터 당업자에게 명백할 것이다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기술된 것과 유사한 또는 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기술된다. 본 명세서에 인용된 모든 공개된 외국 특허 및 특허 출원은 본 명세서에 참고로 인용되어있다. 본 명세서에 인용된 등록 번호로 나타낸 유전자 은행(Genbank) 및 NCBI 제출물은 본 명세서에 참고 문헌으로 인용된다. 본 명세서에 인용된 다른 모든 공개 문헌, 문서, 원고 및 과학 문헌은 본 명세서에 참고로 인용되어 있다. 충돌이 있는 경우, 정의를 포함한 본 규격이 우선한다. 또한, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것이며 제한하려는 것은 아니다.
"재조합 숙주 세포" 또는 "숙주 세포"는 삽입에 사용된 방법, 예를 들어 직접 흡수, 형질 도입 또는 재조합 숙주 세포를 생성하기 위한 당업계에 공지된 다른 방법에 관계없이 외인성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포를 말한다. 외인성 폴리뉴클레오티드는 비통합 벡터, 예를 들어 플라스미드로서 유지되거나, 또는 숙주 게놈에 통합될 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "배지"(medium) 또는 "배지"(media)는 박테리아 숙주 세포, 효모 숙주 세포, 곤충 숙주 세포, 식물 숙주 세포, 진핵 숙주 세포, 포유류 숙주 세포, CHO 세포, 원핵 숙주 세포, 대장균, 또는 슈도모나스 숙주 세포, 및 세포 함유물을 포함하는 임의의 숙주 세포를 지지하거나 함유할 수 있는, 임의의 배양 배지, 용액, 고체, 반고체 또는 강성 지지체를 포함한다. 따라서, 상기 용어는 숙주 세포가 증식된 배지, 예를 들어 배양 단계 전후의 배지를 포함하여 TRAIL이 분비된 배지를 포함할 수 있다. 이 용어는 또한 TRAIL이 세포 내에서 생성되고 숙주 세포가 용해되거나 TRAIL을 방출하도록 파괴되는 경우와 같이 숙주 세포 용해물을 함유하는 완충제 또는 시약을 포함할 수 있다.
"감소한다"는 최소한 10 %, 25 %, 50 %, 75 % 또는 100 %의 음성 변형을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "약제를 획득하는 것"에서와 같이 "획득하는"은 약제를 합성, 구매 또는 획득하는 것을 포함한다.
"대상"(subject)은 소, 말, 개, 양, 고양이와 같은 인간 또는 비인간 포유 동물을 포함하나 이에 국한되지 않는 포유 동물을 의미한다.
"TRAIL"이라는 용어는 또한 임의의 하나 이상의 TRAIL 또는 임의의 다른 폴리펩티드, 단백질, 탄수화물, 중합체, 소분자, 링커, 리간드 또는 임의의 유형의 다른 생물학적 활성 분자의 TRAIL 이합체, 동종 이량체, 이종 다형체 또는 호모 다합체를 포함한다. 화학적 수단에 의해 또는 융합 단백질로서 발현될 뿐만 아니라 예를 들어 생물학적 활성을 유지하면서도 특정 결실 또는 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드 유사체를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", "치료" 등은 관련된 장애 및/또는 증상(예를 들어, 섬유증)을 감소시키거나 완화시키는 것을 나타낸다. 배제되지는 않지만, 장애 또는 상태를 치료하는 것은 그것과 관련된 장애, 상태 또는 증상이 완전히 제거될 것을 요구하지 않는다는 것으로 이해할 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "예방하다", "예방하는", "예방", "예방적 처치" 등은 질환을 가지지 않거나 발병할 위험이 있는 또는 장애 또는 상태를 발병하기 쉬운 대상에서 장애 또는 증상이 발생할 확률을 감소시키는 것을 지칭한다.
"참조"는 표준 또는 대조 조건을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 명백하지 않는 한, "또는" 이라는 용어는 포괄적인 것으로 이해된다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 구체적으로 언급되거나 명백한 경우가 아니라면, 용어 "하나의"("a", "an") 및 "상기(the)"는 단수 또는 복수로 이해된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 구체적으로 언급되거나 명백한 경우가 아니라면, 용어 "약"은 당해 분야의 통상의 허용 범위 내, 예를 들어 평균의 2 표준 편차 이내로 이해된다. 약은 명시된 값의 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0.5 %, 0.1 %, 0.05 % 또는 0.01 % 이내로 이해될 수 있다. 문맥 상 명확하지 않은 한, 여기에 제공된 모든 수치는 그 용어로 수정된다.
본 명세서에서 변수의 임의의 정의에서 화학 그룹의 목록을 인용하는 것은 단일 그룹 또는 열거된 그룹의 조합으로서의 변수의 정의를 포함한다. 본 명세서의 변수에 대한 실시예의 기재는 임의의 단일 실시예로서 또는 임의의 다른 실시예 또는 그의 일부와 조합하여 상기 실시예를 포함한다.
본 명세서에서 제공된 임의의 조성물 또는 방법은 본 명세서에서 제공된 하나 이상의 임의의 다른 조성물 및 방법과 조합될 수 있다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 다음의 상세한 설명 및 청구 범위로부터 당업자에게 명백할 것이다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기술된 것과 유사한 또는 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기술된다. 본 명세서에 인용된 모든 공개된 외국 특허 및 특허 출원은 본 명세서에 참고로 인용되어 있다. 본 명세서에 인용된 등록 번호로 나타낸 유전자 은행(Genbank) 및 NCBI 제출물은 본 명세서에 참고 문헌으로 인용된다. 본 명세서에 인용된 다른 모든 공개 문헌, 문서, 원고 및 과학 문헌은 본 명세서에 참고로 인용되어 있다. 충돌이 있는 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 우선한다. 또한, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것이며 제한하려는 것은 아니다.
II. 조성물
TRAIL(종양 괴사 인자 관련 세포 사멸-유발 리간드, 유전자 명 TNFSF10)은 그의 동족 사멸 수용체(DRs), DR4(유전자 명 TNFRSF10A) 및 DR5(유전자 명 TNFRSF10B)를 발현하는 세포에서 세포 사멸을 유도할 수 있는 사멸 리간드이다(Johnstone RW et al., Nat Rev Cancer, 8(10): 782-798(2008)).
재조합 TRAIL 및 DR 작용제 항체는 암세포에 DR 매개 세포 사멸을 선택적으로 유도하면서 정상 세포에 명백한 독성을 나타내지 않는 독특한 능력으로 인해 암 치료법에 대해 활발히 연구되어 왔다. TRAIL의 임상 연구는 인간에 대한 광범위한 내약성을 나타내지만 종양학에서 강력한 치료 효과를 입증하지 못했다(Lemke J et al., Cell Death Differ;21(9):1350-1364(2014)).
암 환자에 사용된 TRAIL의 실망스러운 결과를 초래하는 주요 요인은 1) 짧은 반감기(사람에서 30분 미만) 및 2) 이종의 원발성 암은 일반적으로 TRAIL에 내성이 있다. 활성화된 일차 간 및 췌장 별 모양의 세포는 정지 상태가 아닌 정체된 세포가 증가된 DR4 및 DR5로 인해 TRAIL 유도성 세포 사멸에 매우 민감해진다(US 특허출원공개 No. US 2016/0022776). 활성화된 HSC 및 PSC는 간 및 췌장 섬유증의 선조세포(progenitor)로 간주된다.
SSc에서 섬유화를 근본으로 하는 병원성 기작은 복잡하고 대부분 알려져 있지 않다. 그러나, 근섬유 아세포(myofibroblasts,(MFBs)) 분명히 이 장애의 중요한 시초 중 하나이다(Ho YY et al., Nat Rev Rheumatol;10(7):390-402(2014) and Bhattacharyya S et al., Nat Rev Rheumatol;8(1):42-54(2012)).
만성적인 피부 손상이나 질병 중에는 상주 섬유 아세포가 활성화되어 증식성, 섬유증 및 수축성 α-SMA+MFB로 전환되며 활성 섬유증의 최전선에서 축적된다. MFB는 콜라겐 및 기타 ECM 성분뿐만 아니라 피부 섬유형성을 조율하고 지속시키기 위해 여러 가지 섬유화 성분을 합성하는 능력을 증가시켰다. 본질적으로, MFB는 피부 섬유증/SSc 요법의 주요 상류 표적이다.
따라서 SSc, MFB의 전구 세포를 제거할 수 있는 고도의 선택 제제를 설계하는 것은 정상 세포를 절약하면서 현저한 항 섬유화 효과를 나타낼 수 있다. 그러나 신체 내에서 선택적으로 MFB를 표적으로 삼을 수 있는 확실한 방법이 없다면, 이 전략을 방해할 수 있다. SSC 진행 중에 α-SMA+MFB를 고갈시키고 정상 세포를 손상시키지 않는 새로운 전략이 필요하다.
전신 경화증의 영향을 받는 내부 장기의 섬유화 및 섬유화를 개선 및/또는 예방하는 치료법이 필요하다.
따라서, 본 발명의 목적은 대상외 독성 없이 전신 경화증을 치료 또는 예방하기위한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 정상적인 세포를 손상시키지 않고 전신 경화증에서 섬유 아세포 또는 섬유 아세포 세포 활성화를 감소 또는 차단하기 위한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 정상 세포를 손상시키지 않으면서 전신 경화증을 감소시키거나 감소시키는 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 개시 내용은, 포유 동물 대상에서의 섬유성 자가 면역 질환 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한, 치료 및/또는 예방 요법으로서 또는 천연 작용제 또는 이의 변형체 또는 유도체로서, 적어도 부분적으로 사멸 수용체(DR) 작용자의 발견에 기초한다.
본 명세서에 개시된 연구의 주요 목표는 국소 또는 확산 SSc 표적화를 위한 항 섬유화 및/또는 항염증제로서 TNF-관련 세포 사멸-유도 리간드(TRAIL) 수용체 작용제(TRA)(예컨대, 재조합 TRAIL 변이체 및 항체)의 확인과 관련 있다. 따라서, 특정 실시예에서, 본 명세서는 근섬유 아세포(MFB)안으로의 주요 섬유 형성 세포 활성화를 표적화 및 차단하거나 섬유 아세포를 역전시키고 SSc에서 염증을 해결하기 위해 주요 섬유 형성 세포를 박멸하는 독특한 작용 기전을 기술한다.
본 명세서에 개시된 연구는 사멸 수용체 작용제가 SSc에서 활성화된 섬유 아세포 및 근섬유 아세포의 TRAIL 매개 세포사멸을 유도할 수 있음을 보여준다. 중요한 것은 TRAIL 유사체와 DR 항체를 포함한 DR 작용제가 섬유 아세포 활성화를 선택적으로 차단하고, α-SMA+MFB를 고갈시킴과 동시에 뚜렷한 독성없이 여러 가지 섬유화 성분을 동시에 낮추어 상보적인 SSc 모델에서 섬유화와 염증을 강하게 개선한다는 것이다.
이 개시는 MFB 활성화를 차단하고 상향 조절된 DR을 통해 주요 섬유화 촉진성 세포 군 MFBs를 고갈시키는 것이 소멸을 유도하거나 SSc에서 진전된 섬유증의 진행을 방지한다는 것을 증명한다. TGFβ 활성화된, α-SMA+일차 인간 섬유 아세포는 자발적으로 DR 매개 세포사멸을 통해 TRAIL 및 DR 작용제 항체에 민감하게 된다. 특정 유형의 일차 암세포와 달리 활성화된 MFB는 TRAIL에 내성이 없었다. 상호 보완적인 두 SSc 마우스 모델에서 DR4와 DR5는 정상 피부 조직에 비해 섬유 아세포 피부 조직의 α-SMA+MFB에서 높게 발현된다는 것이 확인되었다. SSc 동물 모델을 TRAIL 유사체 및 DR 항체 모두로 처리한 경우, DR 작용제는 생체 내에서 MFB를 표적으로 하고, 표적외 독성없이 진행된 섬유화를 명백하게 개선한다는 것이 밝혀졌다. 또한, 건강한 피검자 및 SSc 환자의 피부 생검에서 조직 섬유증을 분석하였다. 정상적인 피부 조직에서는 강한 α-SMA와 DR의 발현이 관찰되지 않았다. 대조적으로, SSc 환자의 섬유 아세포 피부 조직에서 더 높은 수준의 DR4 및 DR5뿐만 아니라 α-SMA가 검출되었다. 이 공개는 SSc의 신규 치료에 대한 새로운 통찰력 및 임상적 근거를 제공한다.
SSc 환자 및 SSc 동물 모델의 일차 인간 조직을 사용하여 TRAIL 수용체 유사체(TRA)가 섬유화를 역전시키고 SSc와 관련된 광범위한 염증 반응을 보였다. 전 임상 데이터에 근거하여, 전신 투여된 TRAILPEG, PEG화된 재조합 인간 호모 삼체 TRAIL 및 항-DR 항체는 생체내 α 평활근 액틴 양성(α-SMA+) 근섬유 아세포를 표적으로 하여 SSc에서 다수의 섬유화 물질을 동시에 억제한다. 설치류 SSc 모델에서 TRAILPEG 및 항-DR 항체는 피부 경화 및 과도한 콜라겐 생성을 건강한 수준으로 감소시킨다. 마찬가지로, TRAILPEG 및 항-DR 항체는 특발성 폐섬유증에서 광범위한 섬유화를 감소시켰으며, 이는 SSc의 가능한 증상이다.
조직 손상 동안 염증 및 자가 항체는 섬유 아세포를 근섬유 아세포로 활성화시켜 섬유 아세포를 유도한다. 섬유세포, 골수 간엽 줄기 세포 및 혈관주위세포와 같은 보충 세포는 또한 섬유화 진행 도중 근섬유 아세포로 전환분화한다. TRAILPEG 및 항-DR 항체는 이러한 활성화를 표적화 및 차단하고, 정상 세포가 아닌 근섬유 아세포에서만 TRAIL 매개 세포 사멸을 유도하고, 근섬유 아세포를 활성화시키는 염증 반응을 완화시켰다. 결과적으로 섬유화 경로가 중단되고 건강한 섬유 모세포가 기관을 다시 채웠다. 따라서 TRAILPEG 및 항 -DR 항체를 포함하는 DR 작용제는 근섬유 아세포 세포군을 표적으로하고, 자가 면역, 염증 및 전이 분화 기전을 포함한 모든 섬유 아세포 활성화 기전을 처리함으로써 SSc를 역전시키는 능력을 입증하였다.
개시된 방법의 추가 특징은 이하 및 본 명세서의 다른 곳에서 설명된다.
A. 사멸 수용체 작용제
본 명세서에 기술된 사멸 수용체 작용제는 TRAIL 및 작용성 사멸 수용체 항체뿐만 아니라 이들의 유사체, 변이체, 단편 및 유도체를 포함한다.
1. TRAIL
종양 괴사 인자(TNF)-관련 세포 사멸-유발 리간드(TRAIL)는 TNF 계열의 구성원이며, 세포 사멸에 관여하는 막투과성 단백질이다. TRAIL은 세포 외 도메인이 위치 115의 아르기닌에서 위치 281의 글리신 또는 위치 95의 트레오닌에서 위치 281의 글리신으로의 아미노산을 포함하는 281 개의 아미노산으로 이루어진 단백질이다.
인간 TRAIL 단백질 서열은 REFSEQ accession NP_003801로서 입수 가능하며하기(서열 번호 1)에 제시되어 있다:
Figure 112018069582968-pct00001
세 분자의 TRAIL 단량체는 구조적으로 변형된 삼량체를 형성한다. TRAIL 삼량체는 세포 사멸을 유도하는 세포 사멸에 관여하는 수용체와 결합한다. TRAIL과 TNF 수퍼 패밀리의 다른 구성원 사이의 주요 차이점은 정상 조직에서 세포 사멸을 유도하지 못하는 능력이다. TNF는 정상 세포에 영향을 미치고 암세포 및 과도하게 활성화된 면역 세포의 사멸을 유도하기 때문에 적용 가능성이 제한적이다. 대조적으로, TRAIL은 정상 세포에 거의 영향을 미치지 않으면 서 광범위한 암세포 및과 활성화된 면역 세포에서 세포사멸를 유도한다. 이것은 세포 유형 사이에서 TRAIL 수용체의 차등 발현 때문이다.
TRAIL은 수용체와 상호 작용하여 세포 사멸을 유도한다. 현재 DR4, DR5, DcR1, DcR2, 오스테오프로테게린(Osteoprotegrin)과 같은 TRAIL에 대한 4 가지 수용체가 확인되었다. TRAIL은 보존된 사멸 도메인(DD) 모티프를 포함하는 DR4 및 DR5와의 결합시에 카스파제-의존성 세포사멸를 통해 사망을 유도한다. DcR1 및 DcR2는 과발현될 때 TRAIL-유도된 세포 사멸을 억제하는 그들의 능력에 대한 디코이(decoy)로서 작용한다. DcR1 및 DcR2는 DR4 및 DR5의 세포 외 도메인에 가까운 상동성을 갖는다. DcR2는 잘리지 않는 비기능성 세포질 DD를 가지고 있는 반면, DcR1은 세포질 영역이 없으며 글리코포스포리피드(glycophospholipid) 잔기를 통해 원형질막에 고정되어 있다. DcR2의 세포질 도메인은 기능적이며 NF-κB를 활성화시켜 사망 신호 경로를 작용하거나 염증을 촉진하는 것으로 알려진 유전자의 전사를 유도한다. DR4에 결합하는 리간드는 세포내 사멸 도메인의 수용체 삼량체화 및 클러스터링을 유발하여 사멸 유도 복합체(DISC)를 형성한다. DISC는 어댑터 분자를 모집하고 세포사멸을 유도하는 카스파제의 결합 및 활성화를 시작한다. TRAIL 수용체를 통한 신호 전달을 유도하거나 복원하는 것은 항암 전략이다. TRAIL은 자가 항원 특이적 T 세포를 억제하여 자가 면역 반응을 억제할 수 있음을 나타낸다.
일부 정상 세포에 대한 독성 외에도 TRAIL은 생체 내에서 짧은 반감기를 가지며 시험에 사용된 동물의 종에 따라 다른 반감기를 가지고 있다. 예를 들어, TRAIL은 설치류에서 수 분, 원숭이에서 약 30 분의 반감기를 갖는 것으로 보고되었다(H. Xiang, et al., Drug Metabolism and Disposition 2004, 32, 1230-1238). 특히 대부분의 TRAIL은 신장을 통해 빠르게 배설된다.
a. TRAIL 유사체
TRAIL은 삼량체로 그것의 수용체와 상호 작용할 수 있다. 따라서, 일부 실시예에서, 본 명세서에 개시된 방법에 사용된 리간드 또는 작용제는 다량체, 바람직하게는 삼량체이다. 삼량체는 동형 삼량체(homotrimer) 또는 이종 삼량체(heterotrimer)일 수 있다.
본 명세서에 기재된 모든 TRAIL 단백질은 천연 또는 재조합 단백질을 단리하기위한 표준 기술을 사용하여 제조할 수 있으며, 본 명세서에 기재된 바와 같이 화학적으로 변형시킬 수 있다.
TRAIL 접합체는 TRAIL 유사체, 또는 작용적 TRAIL 수용체 결합 단편 또는 이의 변형체를 포함할 수 있다. TRAIL 유사체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 실시예에서, 유사체는 하나 이상의 작용제 TRAIL 수용체(예를 들어, TRAIL R1(DR4) 및/또는 TRAIL-R2(DR5))에 대한 증가된 친화력 또는 특이성, 하나 이상의 작용적 또는 미끼 TRAIL 야생형 또는 내인성 TRAIL과 비교하여 수용체(예: 수용체 DcR1 및 DcR2) 또는 이들의 조합물을 포함한다.
일부 실시예에서, 유사체는 야생형 TRAIL의 DR4-선택적 돌연변이이다. DR-4 선택적 돌연변이체는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 Tur, J. Biological Chemistry, 283(29): 20560-8(2008)에 개시되어 있다. 특정 실시예에서, 유사체는 D218H 또는 D218Y 치환체 또는 이의 기능적 단편(예를 들어, 세포 외 도메인)을 갖는 서열 번호 1의 변이체이다.
일부 실시예에서, 유사체는 야생형 TRAIL의 DR5- 선택 돌연변이이다. 특정 DR-5- 선택 돌연변이는 D269H, D269H/E195R 또는 D269H/T214R을 갖는 서열 번호 1의 변이체 및 이의 기능적 단편(예를 들어, 세포 외 도메인)을 포함한다. 이러한 변형은 문헌 [van der Sloot, Proc. Nat. Acad. Sci. U SA 103(23): 8634-9(2006)]에 기재되어 있다.
b. TRAIL 융합 단백질
TRAIL 접합체는 TRAIL 융합 단백질 일 수 있다. TRAIL 융합 폴리펩티드는(i) 제 2 폴리펩티드에 직접 융합되거나 또는(ii) 임의로, 제 2 폴리펩티드에 융합된 링커 펩티드 서열에 융합된 TRAIL 단백질 세포 외 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 제 1 융합 파트너를 갖는다. 융합 단백질은 임의로 2 개 이상의 융합 단백질을 이합체화 또는 다중화시키는 기능을 하는 도메인을 함유한다. 펩티드/폴리펩티드 링커 도메인은 별도의 도메인일 수 있거나, 대안으로 융합 단백질의 다른 도메인(TRAIL 폴리펩티드 또는 제 2 폴리펩티드)중 하나 내에 포함될 수 있다. 유사하게, 융합 단백질을 이합체화 또는 다중화시키는 기능을 하는 도메인은 별도의 도메인일 수 있거나 또는 융합 단백질의 다른 도메인(TRAIL 폴리펩티드, 제 2 폴리펩티드 또는 펩티드/폴리펩티드 링커 도메인) 중 하나 내에 포함될 수 있다. 일 실시예에서, 이량체화/다량화 도메인 및 펩티드/폴리펩티드 링커 도메인은 동일하다.
본 명세서에 개시된 융합 단백질은 하기 화학식 I의 화합물일 수 있다:
N-R1-R2-R3-C
"N"은 융합 단백질의 N- 말단을 나타내고, "C"는 융합 단백질의 C-말단을 나타내고, "R1"은 TRAIL 폴리펩티드이고, "R2"는 선택적인 펩티드/폴리펩티드 링커 도메인이고, "R3 "은 두 번째 폴리펩티드이다. 대안적으로, R3은 TRAIL 폴리펩티드일 수 있고, R1은 두 번째 폴리펩티드일 수 있다.
융합 단백질은 이량화되거나 다량화될 수 있다. 이량화 또는 다량화 도메인을 통해 2 개 이상의 융합 단백질 사이에서 또는 이들 중 이량화 또는 다량화가 발생할 수 있다. 대안으로, 융합 단백질의 이량체화 또는 다량체화는 화학적 가교 결합에 의해 일어날 수 있다. 형성된 이량체 또는 다량체는 동종 이량체/동종 다 형체 또는 이종 이량체/이종 다량체일 수 있다.
제 2 폴리펩티드는 면역 글로불린 중쇄 불변 영역의 하나 이상의 도메인을 포함하고, 바람직하게는,
제 2 폴리펩티드의 존재는 TRAIL 융합 폴리펩티드의 용해도, 안정성, 친화성 및/또는 원자가를 변화시킬 수 있다. 본 명세서에서 사용된 "원자가(valency)"는 분자당 이용가능한 결합 부위의 수를 의미한다. 일부 실시예에서, 제 2 폴리펩티드는, 바람직하게는 인간 면역 글로불린 Cγ1 쇄의 CH2 및 CH3 영역인, 힌지에, 또는 쥐 면역 글로불린 Cγ2a 쇄의 CH2 및 CH3 영역인, 힌지에 상응하는, 아미노산 서열을 갖는, 면역 글로불린 중쇄 불변 영역의 하나 또는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 마우스 면역 글로불린 Cγ2a 쇄의 특정 이량체 융합 단백질에서, 이합체는 이합체화된 정상 Ig 중쇄에서 디설파이드 연결되는 동일한 Cys 잔기 인 Ig 중쇄의 2 개 힌지 영역에서 Cys 잔기의 공유 결합에 기인한다.
특정 실시예에서, TRAIL 융합 단백질은 Gieffers, Molecular Cancer(Molecular Cancer)에 기술된 바와 같이 단일 사슬 TRAIL-수용체 결합 도메인(scTRAIL-RBD)으로 지칭되는 하나의 폴리펩티드 사슬에서 결합된 3 개의 TRAIL- Therapeutics, 12(12): 2735-47(2013). 각각 3 개의 수용체 결합 부위를 갖는 소위 scTRAIL-RBD 중 2 개가 근접하여 6가 결합 모드를 갖는 다중 융합 단백질을 생성할 수 있다. 일부 실시예에서, 다량화는 인간 면역 글로불린 G1(IgG1)-뮤틴의 Fc-부분을 scTRAIL-RBD 폴리펩티드에 융합시켜 약물 분자당 6 개의 수용체 결합 부위를 생성시킴으로써 달성된다.
주로 이량체(DbscreAIL)로 구성된 표적화된 scTRAIL에 대한 scFv 링커 변형에 기초한 scFv-scTRAIL의 이량체화는 일부 표적 세포 유형에 대해 비표적화된 scTRAIL의 활성을 약 100 배 초과한다. DbscreAIL의 증가된 활성은 또한 표적-음성 세포에서 입증되었으며, 표적화 이외에, 표준 TRAIL 자체의 적어도 이합체 조립체와 동등한 올리고머화가 세포 사멸 신호 전달을 강화시킨다는 것을 나타낸다. 따라서, 바람직한 실시예에서, TRAIL 융합 단백질은 예를 들어 이량체, 삼량체 또는 육량체 분자를 유도할 수 있는 이량체화 또는 삼량체화 도메인 또는 이의 조합물과 같은 다량화 도메인을 갖는다.
삼량체 형성을 촉진시키는 또 다른 융합 단백질은 삼량체화 루신 또는 이소루신 지퍼 도메인에 아미노 말단 융합된 TRAIL의 수용체 결합 단편을 포함한다.
TRAIL 융합 단백질 및 기능 분석에서 융합 단백질을 사용하는 결과는 문헌 [Wahl, Hepatology, 57(2): 625-36(2013)]에 기재되어 있다.
2. TRAILPEG: PEGylated TRAIL
a. 폴리에틸렌 글리콜
폴리에틸렌 글리콜(PEG)은 선형 형태인 경우 HO-(-CH2CH2O-)n-H의 구조를 갖는 중합체이다. 높은 친수성으로 인해, PEG는 약물 단백질이 그것에 결합될 때 용해도의 증가를 가능하게 한다. 또한, 단백질에 적절히 결합될 때, PEG는 효소 활성 및 수용체 결합과 같은 주요 생물학적 기능을 유지하면서 변형된 단백질의 분자량을 증가시킨다; 소변 배설을 줄이고, 단백질을 세포 및 항원으로부터 외인성 항원을 인식하는 항체로부터 보호하고, 프로테아제에 의한 단백질 분해를 감소시킨다. 단백질과 결합할 수 있는 PEG의 분자량은 약 1,000 내지 100,000이다. 1,000보다 큰 분자량을 갖는 PEG는 매우 낮은 독성을 갖는 것으로 알려져 있다. 1,000 내지 6,000의 분자량을 갖는 PEG는 신체 전체에 걸쳐 광범위하게 분포되고 신장을 통해 대사된다. 특히, 분자량이 40,000인 PEG는 간을 포함하여 혈액 및 장기에 분포되어 간에서 대사된다. 예시적인 PEG 또는 PEG 유도체는 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙시니딜 프로피오네이트, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트 N-히드록시 숙신이미드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 말레이미드 및 다중-분지형 폴리에틸렌 글리콜을 포함 하나 이에 한정되지 않는다.
이와 관련하여, PEG는 국제공개번호 WO2007/145457에 기술된 바와 같이 TRAIL의 N-말단에 선택적으로 부착되었다. 또한, PEG화는 TRAIL의 용해도 및 안정성을 현저하게 증가시켰다(예를 들어, PEG화 TRAIL의 안정성, 반감기 및 생체내 활성은 천연형 TRAIL보다 현저히 더 컸다). 또한, PEG화는 다양한 제형에서 장기 보관으로 연결된 약물의 약물 동력학적 프로파일을 개선하여 약물 투여 빈도를 감소시키고 약물의 지속 기간을 지속시키는 것으로 밝혀졌다.
비선형 형태의 PEG 또는 그 유도체도 사용될 수 있다. 예로는 분지형, 삼중분기형, 다중-암, 이량체 및 삼량체 구조와 같은 측쇄 중합체가 포함된다.
i. 폴리알킬렌 옥사이드 및 TRAIL
BASF가 판매하는 PLURONICㄾ와 같은 폴리알킬렌 옥사이드 또는 이의 공중 합체와 같은 친수성 폴리머의 사용은 분자에 공유 결합되어 TRAIL의 약물 동력학 및 약력학 프로파일을 향상시킬 수 있다(Kim, et al., Bioconjugate Chem., 22(8), pp 1631-1637(2011)). 연구에 따르면 PEG로 유도체화된 TRAIL 유사체는 항암 활성을 유지하면서 혈장내 대사 안정성이 향상되고 약물 동력학적 프로파일이 확대되고 순환 반감기가 커짐을 보여준다(Chae, et al., Molecular cancer therapeutics 9(6):1719-29(2010); Kim, et al., Bioconjugate chemistry, 22(8):1631-7(2011); Kim, et al., Journal of pharmaceutical sciences 100(2):482-91(2011); Kim, et al., Journal of controlled release: official journal of the Controlled Release Society 150(1):639(2011)).
따라서, 일부 실시예에서, TRAIL 도메인은 하나 이상의 에틸렌 글리콜(EG) 단위, 보다 바람직하게는 2 이상의 EG 단위(즉, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)) 또는 이의 유도체로 유도체화된다. PEG의 유도체는 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙신이미딜 프로피오네이트, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 N-히드록시 숙신이미드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 알데히드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 말레이미드 및 다중-분 지형 폴리에틸렌 글리콜을 포함 하나 이에 한정되지 않는다.
EG 또는 유도 단위의 정확한 수는 원하는 활성, 혈장 안정성 및 약물 동태 프로파일에 따라 다르다. 예를 들어, Kim, et al.(상기)는 2, 5, 10, 20 및 30K-PEG-TRAIL이 생쥐에서 각각 3.9, 5.3, 6.2, 12.3 및 17.7 시간의 순환 반감기를 나타 냈고, TRAIL의 경우 1.1 시간이었다. 일부 실시예에서, PEG의 분자량은 약 1 내지 100 kDa, 바람직하게는 약 1 내지 50 kDa이다. 예를 들어, PEG는 "N"kDa의 분자량을 가질 수 있으며, 여기서 N은 1 내지 100의 임의의 정수이다. PEG는 "N"Da의 분자량을 가질 수 있으며, 여기서 N은 1,000 내지 1,000,000의 임의의 정수이다. 특정 실시예에서, PEG의 분자량은 "N"Da이고, 여기서 "N"은 1,000 내지 50,000, 또는 보다 바람직하게는 5,000 내지 50,000이다.
친-세포 사멸 제는 선형 또는 분 지형 PEG와 접합될 수 있다. 일부 연구에 따르면 분 지형 PEG로 유도체 화된 단백질은 분지 화된 PEG- 단백질의보다 큰 유체 역학적 부피에 기인 한 것으로 생각되는 선형 PEG- 단백질과 비교하여 생체 내 순환 반감기가 연장되어 있음을 보여주었다(Fee, et al., Biotechnol Bioeng., 98(4): 725-3(2007).
펩티드 리간드는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 C-말단, 또는 바람직하게는 N-말단에서 유도체화될 수 있다.
TRAIL-PEG 접합체는 하기 화학식으로 나타낼 수 있다:
X-L-(PEG)n,
여기서, X는 TRAIL 단백질을 나타내고,
L은 링커를 나타내고,
PEG는 분지형 폴리(에틸렌 글리콜)사슬을 나타내고,
n은 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 중에서 선택된 정수이다.
특정 실시예에서, n은 2이다.
폴리알킬렌 옥사이드는 링커를 통해 단백질에 결합된다. 링커는 폴리알킬렌 옥사이드일 수 있으며, 바람직하게는 2 개의 폴리알킬렌 옥사이드 중합체를 단백질에 연결시킨다.
특정 실시예에서, TRAIL-접합체는 인간 TRAIL의 절단된 형태를 포함하는 TRAIL 도메인을 포함하는 PEG-접합체, 예를 들어, 아르기닌-114부터(1-8181)의 완전 길이 형태의 글리신-281까지 인간 TRAIL 및 1,000 내지 100,000 달톤, 바람직하게는 5,000 내지 50,000 달톤의 분자량을 갖는 PEG를 포함한다.
N-말단 변형 PEG-TRAIL 접합체는 TRAIL 도메인의 N-말단 아민을 환원제의 존재하에 PEG의 알데히드그룹과 반응시킴으로써 수득될 수 있다. PEG 및 TRAIL은 2 내지 10, 또는 바람직하게는 5 내지 7.5의 몰비(PEG/TRAIL)로 반응될 수 있다.
바람직한 실시예에서, TRAIL-접합체는 3 개의 TRAIL-접합체 단량체 사이에서 삼량체 형성을 허용하는 지퍼 아미노산 모티프, 예를 들어 이소루이신 지퍼 모티프를 포함한다.
PEG 사슬은 동일한 분자량 인 것이 바람직하나, 반드시 그런 것은 아니다. 각각의 PEG 쇄에 대한 예시적인 분자량 범위는 약 10 kDa 내지 60 kDa, 바람직하게는 약 20 kDa 및 40 kDa이다. PEG40은 분지된 PEG 잔기이며 합성되었으며 40 kDa: 20+20 kDa(각 PEG 사슬)의 분자량을 갖는다.
삼량체 PEG 부분은 링커 암에 부착된 분지형 PEG 사슬로 이루어질 수 있다. 삼량체 PEG 부분의 시각적 설명은 바로 아래에 제공된다.
Figure 112018069582968-pct00002
다음과 같은 삼량체 PEG가 합성되었다: YPEG42, YPEG43.5, YPEG45, YPEG50 및 YPEG60.
- YPEG42는 분자량 42kDa:(20+20 kDa)(분 지형 PEG)+2 kDa(링커 암)의 삼량체 PEG 부분이다.
- YPEG43.5는 43.5kDa:(20+20 kDa)(분지형 PEG)+3.5 kDa(링커 암)의 분자량을 갖는 삼량체 PEG 부분이다.
- YPEG45는 45kDa:(20+20 kDa)(분지형 PEG)+5 kDa(링커 암)의 분자량을 갖는 삼량체 PEG 부분이다.
- YPEG50은 50kDa:(20+20 kDa)(분지형 PEG)+10 kDa(링커 암)의 분자량을 갖는 삼량체 PEG 부분이다.
- YPEG60은 60kDa:(20+20 kDa)(분지형 PEG)+20 kDa(링커 암)의 분자량을 갖는 삼량체 PEG 부분이다.
ii. 링커 잔기
단백질 또는 펩티드는 링커를 통해 분 지형 PEG 부분에 공유 결합된다. 링커는 중합체이고, 일반적으로 800 옹스트롬 이상의 원자 길이를 갖는다. 전형적으로, 링커는 약 800 내지 약 2,000 옹스트롬, 약 800 내지 약 1,500 옹스트롬, 약 800 내지 약 1,000 옹스트롬, 또는 약 900 내지 약 1,000 옹스트롬의 원자 길이를 갖는다. 상기 열거된 원자 거리는 완전히 확장된 중합체를 지칭하고, 고체 상태 또는 용액에서 링커는 분지형 PEG와 단백질 또는 펩티드 간의 실제 거리가 위에 열거된 원자 길이보다 작다.
특정 실시예에서, 링커는 약 1 kDa 내지 30 kDa, 바람직하게는 약 2 kDa 내지 20 kDa의 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜) 유도체이다. 링커는 또한 길이가 적어도 80 유닛인 천연 또는 비천연 아미노산일 수 있다.
폴리에틸렌 옥사이드, 폴리비닐 알콜, 폴리아크릴아미드, 히알루론산 및 콘드로이틴 설페이트와 같은 단백질, 하이드록시메틸 셀룰로즈, 폴리비닐 알콜 및 폴리하이드록시알킬(메트)아크릴레이트와 같은 셀룰로오스와 같은 합성 또는 천연의 수용성 생체 적합성 중합체를 포함한다.
단백질 및 펩티드는 통상적인 화학을 사용하여 링커에 공유 결합될 수 있다. N- 말단 또는 라이신 잔기에서 발견되는 것과 같은 1 차 아민기는 환원 조건 하에서 알데히드 및 그 등가물과 반응하여 아민을 제공할 것이다.(Molineux, Current pharmaceutical design, 10(11): 1235-1244(2004)). 시스테인 잔기에서 발견되는 것과 같은 머캅토(mercapto, -SH) 기들은 아크릴아미드 및 메타크릴산 유도체뿐만 아니라 말레이미드(male et al., British Journal of Pharmacology, 163 2): 399-412(2011)). 펩티드 및 단백질에서 발견되는 다른 적합한 친핵성기는 디설파이드 결합(Brocchini 등, Nature protocols, 1: 2241-2252(2006)) 및 히스티딘 잔기(Cong, et al., Bioconjugate Chemistry, 23(2): 248 -263(2012)).
링커는 통상적인 화학을 사용하여 단백질 또는 펩티드에 공유 결합될 수 있다. 예를 들면, 링커 중합체는 알데히드, 에폭시드, 할로겐(염소, 브롬화물, 요오드), 술폰산 에스테르(토실레이트, 메실레이트), 마이클 수용체 또는 활성화된 카르복실레이트와 같은 친전자성기로 한쪽 말단을 유도체화 한 다음, 단백질 또는 펩티드 내의 친핵성 아민 또는 티올기. 적합한 마이클 수용체는 아크릴아미드, 메타 크릴아미드, 아크릴레이트 및 메타크릴레이트 뿐만 아니라 말레이미드와 같은 아실산 및 메타크릴산 유도체를 포함한다. 적합한 활성화된 카르복실레이트는 니트로페닐카르보네이트 및 NHS(N-히드록시숙시네이트)에스테르를 포함한다. 다른 실시예에서, 아르기닌 잔기를 함유하는 펩티드 및 단백질은 반응성 1,3-디케톤 작용기를 함유하는 링커와 공유 결합될 수 있다.
접합체는 먼저 링커를 펩티드 또는 단백질과 결합시킨 후 링커를 분지형 폴리(에틸렌 글리콜)과 결합시키거나 또는 먼저 링커를 분지형 폴리(에틸렌 글리콜)과 결합시킨 다음 링커를 결합시킴으로써 제조할 수 있다. 펩티드 또는 단백질과 함께 결합 형성의 최적 순서는 관련된 특정 화학적 변형에 의해 결정된다.
c. 거대 분자
다른 실시예에서, TRAIL은 보고된 방법을 통해 생체 고분자 또는 폴리펩티드를 사용하여 연장된 반감기를 갖는 장시간 TRAIL로서 유도체화될 수 있다;(Yang et al., Biomaterials 32(33); 8722-8729(2011)), 데포형성 폴리펩티드(Amiram et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 110(8);27922792(2013), U.S. Published Application No. US 2013-0178416 A1) 및 확장된 재조합 폴리펩티드에 연결된 TRAIL(미국 공개 출원 제 2010-0239554 A1).
d. 복합체
TRAIL 도메인은 음전하를 띤 부분과 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시예에서, 음으로 하전된 잔기는 연장된, 지속된 또는 시간 방출된 전달을 위해 나노 입자 내로 리간드 또는 작용제를 로딩하는 것을 용이하게할 수 있다. 일부 실시예에서, 음으로 하전된 잔기 자체는 리간드 또는 작용제의 연장된, 지속된 또는 시간 방출된 전달을 매개한다. 바람직하게는, 음으로 하전된 부분은 리간드 또는 작용제가 세포사멸을 유도하거나 증강시키는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는다.
양전하된 TRAIL과 음전하된 콘드로이틴 설페이트(CS)(CS/TRAIL) 사이의 복합체의 형성이 개발되었고, 폴리(락티드-코-글리코리드)(PLGA) 마이크로스피어(Kim, et al., Journal of Pharmacy and Pharmacology, 65(1): 11-21(2013)) 약 200 nm의 나노 복합체가 2 TRAIL 대 CS(TC2 )를 함유하고, 복합체는 본래의 TRAIL보다 다중 에멀젼 법으로 제조된 PLGA MS에서 95 % 이상의 높은 로딩 효율을 가졌다. 따라서, 일부 실시예에서, 리간드 또는 작용제, 특히 TRAIL 펩티드 및 변이체, 및 이들의 융합 단백질 또는 이들의 콘쥬게이트, 예컨대 PEG-콘쥬 게이트는 콘드로이틴 설페이트와 복합체를 형성하고, 선택적으로 마이크로 또는 나노 입자, 예컨대 PLGA-기재 입자에 로딩된다.
다른 실시예에서, 리간드 또는 작용제, 특히 TRAIL 펩티드, 및 그의 변형체, 기능적 단편 및 융합 단백질, 또는 PEG- 접합체와 같은 이의 접합체는 히알루론산(HA)과 복합체화된다. 양전하를 띤 PEG-TRAIL과 음전하를 띤 HA를 혼합하여 제조한 PEG-TRAIL과 HA의 나노 복합체는 생체 내에서 지속적으로 전달되는 것으로 나타났으며 PEG 촉진제와 비교하여 생체 활성은 무시할 수 없었다(Kim, et al., Biomaterials, 31(34): 9057-64(2010)). 1 % HA 함유 용액에서 나노 입자를 투여함으로써 전달이 더욱 향상되었다.
B. 항체 조성물 및 제조 방법
정제된 TRAIL 수용체 폴리펩티드, 단편, 융합체 또는 항원 또는 이의 에피토프를 사용하여 TRAIL 수용체에 특이적으로 결합하는 항체를 제조할 수 있다. 항체는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 이어서, 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 항체를 기능적 활성(예를 들어, 작용제 또는 작용제 활성)에 대해 스크리닝할 수 있다. 예시적인 작용제 항체는 사멸 수용체 DR4 및 DR5에 대한 항체를 포함한다.
1. 사멸 수용체 작용제 항체
본 발명의 특정 실시예는 사멸 수용체(예를 들어, TRAIL 항체)에 대한 작용성 항체(또는 대안으로, 항체 단편 또는 이의 변형체)를 포함한다. 항체는 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. 예를 들어, 항체는 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 염소, 당나귀, 말, 오리 또는 닭)의 혈청으로부터 친 화성 정제될 수 있다. 다양한 이용 가능한 DR 항체, DR4 및 DR5 항체가 또한 섬유성 자가면역 질환(예를 들어 전신성 경화증)의 치료에 사용될 수 있다. 예시적인 DR 작용제는 렉사투무맙(Lexatumumab), 티가투주맙(Tigatuzumab), 코나투무맙(Conatumumab), 드로지투맙(Drozitumab), 마파투무맙(Mapatumumab), HGSTR2J/KMTRS 및 LBY-135를 포함한다. 일부 실시 예에서, DR 항체는 다가 제제, 예를 들어, TAS266이다.
본 발명의 항체는 특정 표적 항원에 특이적인 결합을 부여하기에 충분한 표준 면역 글로불린 서열 요소를 포함하는 폴리펩티드를 지칭할 수 있다. 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이, 본질적으로 생산되는 손상되지 않은 항체는 2개의 동일한 중쇄 폴리펩티드(각각 약 50 kD) 및 2 개의 동일한 경쇄 폴리펩티드(각각 약 25 kD)의 대략 150 kD의 4량체 약제이며, 일반적으로 "Y 형"구조라고 한다. 각각의 중쇄는 적어도 4개의 도메인(각각 약 110 아미노산 길이), 아미노 말단 가변(VH) 도메인(Y 구조의 말단에 위치), 3개의 불변 도메인: CH1, CH2 및 카복시-말단 CH3(Y 줄기의 바닥에 위치)을 포함한다. "스위치"로 알려진 짧은 영역은 중쇄 가변 영역과 불변 영역을 연결한다. "힌지"는 CH2 및 CH3 도메인을 항체의 나머지 부분에 연결한다. 이 힌지 영역의 2 개의 디설파이드 결합은 손상되지 않은 항체에서 2개의 중쇄 폴리펩티드를 서로 연결시킨다. 각 경쇄는 다른 "스위치"에 의해 서로 분리된 아미노 말단 가변(VL) 도메인, 이어서 카복시 말단 상수(CL) 도메인의 2 개의 도메인을 포함한다. 무손상 항체 사량체는 중쇄 및 경쇄가 단일 이황화물 결합에 의해 서로 연결된 2 개의 중쇄-경쇄 이합체로 구성된다; 2개의 다른 디설파이드 결합은 중쇄 힌지 영역을 서로 연결시켜, 이량체가 서로 연결되고 사량체가 형성되도록 한다. 자연적으로 생성된 항체는 또한 일반적으로 CH2 도메인에서 글리코실화된다. 천연 항체의 각 도메인은 압축된 역 평행 베타 배럴에서 서로에 대해 포장된 2개의 베타 시트(예: 3-, 4- 또는 5- 가닥 시트)로 형성된 "면역글로불린 폴드(immunoglobulin fold)"를 특징으로 하는 구조를 갖는다. 각 가변 도메인은 "상보적 결정 영역"(CDR1, CDR2 및 CDR3) 및 4 개의 다소 불변 인 "프레임 워크"영역(FR1, FR2, FR3 및 FR4)으로 알려진 3 의 초가변 루프를 포함한다. 자연 항체가 접힐 때, FR 영역은 도메인에 대한 구조적 프레임 워크를 제공하는 베타 시트를 형성하고, 중쇄 및 경쇄 모두로부터의 CDR 루프 영역은 단일의 초가변 변이체 결합을 생성하도록 3 차원 공간에 모이게 된다. 사이트는 Y 구조의 끝에 위치한다. 자연 발생 항체의 Fc 영역은 예를 들어, 세포 독성을 중재하는 작용제 세포를 포함하는, 보체(complement) 시스템의 요소 및 또한 작동자 세포상의 수용체에 결합한다. 당업계에 공지된 바와 같이, Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 친화력 및/또는 다른 결합 특성은 글라이코실화 또는 다른 변형을 통해 조절될 수 있다.
일부 실시예에서, 항체는 폴리클로날이다; 일부 실시예에서, 항체는 단일 클론성이다. 일부 실시예에서, 항체는 마우스, 토끼, 영장류 또는 인간 항체의 특징인 불변 영역 서열을 갖는다. 일부 실시예에서, 항체 서열 요소는 당업계에 공지된 바와 같이, 완전히 인간이거나, 인간화되고, 자화되고, 키메라 등이다. 더욱이, 본 명세서에서 사용된 용어 "항체"는(별도로 언급되지 않거나 문맥상 명확하지 않은 한) 적절한 실시예에서 대안적인 제시의 항체 구조 및 기능적 특징을 이용하기 위한 당업계에 공지되거나 개발된 구조물 또는 형식을 의미할 수 있다.
항체는 세포 배양, 파지(phage) 또는 다양한 동물에서 생성될 수 있다. 한 실시예에서, 항체는 포유류 항체이다. 파지 기술은 초기 항체를 분리하거나 변형된 특이성 또는 항원 특이성을 갖는 변이체를 생성시키는데 사용될 수 있다. 이러한 기술은 일상적이고 당업계에 잘 알려져 있다. 한 실시예에서, 항체는 당업계에 공지된 재조합 수단에 의해 생성된다. 예를 들어, 재조합 항체는 항체를 코딩하는 DNA 서열을 포함하는 벡터로 숙주 세포를 형질 감염시킴으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 벡터를 사용하여 숙주 세포에서 적어도 하나의 VL 및 하나의 VH 영역을 발현하는 DNA 서열을 형질 감염시킬 수 있다. 항체 생산 및 생산의 재조합 수단에 대한 예시적인 설명은 Delves, Antibody Production: Essential Techniques(Wiley, 1997); Shephard, 등, Monoclonal Antibodies(Oxford University Press, 2000); Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice(Academic Press, 1993); Current Protocols In Immunology(John Wiley & Sons, 최신판)을 포함한다.
개시된 항체는 목적하는 기능을 매개하는데 항체의 더 큰 효능을 증가시키기 위해 재조합 수단에 의해 변형될 수 있다. 항체는 재조합 수단을 사용하여 대체함으로써 변형될 수 있다. 전형적으로, 치환은 보존적 치환일 것이다. 예를 들어, 항체의 불변 영역의 적어도 하나의 아미노산은 다른 잔기로 대체될 수 있다. 예를 들어, 미국특허 제5,624,821호, 미국특허 제6,194,551호, WO9958572; 및 Angal, 등, Mol. Immunol. 30: 105-08(1993)에 기재되어 있다. 아미노산의 변형은 아미노산의 결실, 부가 및 치환을 포함한다. 일부 경우, 이러한 변화는 바람직하지 않은 활성, 예를 들어 보체 의존성 세포 독성을 감소시키기 위해 이루어진다. 종종 항체는 공유 결합 또는 비공유 결합으로 검출 가능한 신호를 제공하는 물질로 표시된다. 다양한 표지 및 접합 기술이 알려져 있으며 과학 및 특허 문헌에서 폭넓게보고된다. 이러한 항체는 TRAIL 수용체에 대한 결합에 대해 스크리닝될 수 있다. Antibody Engineering: A Practical Approach(Oxford University Press, 1996)를 참조할 수 있다.
원하는 생물학적 활성을 갖는 적합한 항체는 증식, 이동, 부착, 연한 아가 성장, 혈관 신생, 세포-세포 전달, 세포 사멸, 수송, 신호 전달 및 하기 생체 내 검정법을 포함하지만 이에 제한되지 않고 종양 성장의 억제와 같은 시험 관내 검정에 의해 확인될 수 있다.
개시된 조성물 및 방법에 사용될 수 있는 항체는 임의의 부류의 전체 면역 글로불린(즉, 완전한 항체), 그의 단편 및 적어도 항체의 항원 결합 가변 도메인을 함유하는 합성 단백질을 포함한다. 가변 도메인은 항체 사이의 순서가 다르며, 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 그러나, 가변성은 일반적으로 항체의 가변 도메인을 통해 고르게 분포되지 않는다. 그것은 일반적으로 경쇄 및 중쇄 가변 영역 모두에서 상보성 결정 영역(CDRs) 또는 과가변 영역으로 불리는 3 개의 부분으로 농축된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분을 프레임 워크(FR)라고 부른다. 본래의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 베타 시트 구조를 연결하는 3 개의 CDR로 연결된 4 개의 FR 영역을 포함하며, 이는 베타 시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고 일부 경우 베타 시트 구조의 일부를 형성한다. 각각의 쇄의 CDR은 FR 영역에 의해 근접하여 함께 유지되고, 다른 쇄의 CDR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다.
또한 생물학적 활성을 갖는 항체 단편이 개시된다. 단편의 활성이 비변형된 항체와 비교하여 유의하게 변화되거나 손상되지 않는다면, 단편은 다른 서열에 부착 되든 그렇지 않든 간에 특정 부위 또는 특정 아미노산 잔기의 삽입, 결실, 치환 또는 기타 선택된 변형 또는 항체 단편을 포함한다.
기술은 또한 본 출원의 항원 단백질에 특이적인 단쇄 항체의 생산에 적용될 수 있다. 단쇄 항체의 생산 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 단일 사슬 항체는 짧은 펩티드 링커를 사용하여 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 융합시킴으로써 생성될 수 있으며, 이에 의해 단일 분자 상에 항원 결합 부위를 재구성할 수 있다. 하나의 가변 도메인의 C-말단이 15 내지 25 개의 아미노산 펩티드 또는 링커를 통해 다른 가변 도메인의 N-말단에 연결되는, 단쇄 항체 가변 단편(scFvs)은 항원 결합 또는 바인딩의 특이성을 현저히 파괴시키지 않고, 개발되어 왔다. 링커는 중쇄 및 경쇄가 그들의 적절한 입체적 방위로 함께 결합할 수 있도록 선택된다.
2가의 단일 사슬 가변 단편(di-scFvs)은 2개의 scFv를 연결함으로써 조작될 수 있다. 이것은 2 개의 VH 및 2 개의 VL 영역을 갖는 단일 펩티드 사슬을 생성하여 직렬 scFv를 생성함으로써 수행될 수 있다. ScFv는 2 개의 가변 영역이 함께 접혀(약 5 개의 아미노산) 너무 짧아서 scFv가 이합체화되도록하는 링커 펩티드로도 설계될 수 있다. 이 유형은 디아바디(diabodies)로 알려져 있다. 디아 바디는 상응하는 scFv보다 최대 40 배 낮은 해리 상수를 갖는 것으로 나타 났는데, 이는 이들이 표적에 훨씬 더 높은 친 화성을 가짐을 의미하다. 더 짧은 링커(하나 또는 두 개의 아미노산)는 삼량체(triabody 또는 tribody)의 형성을 유도하다. Tetrabody도 생산되었다. 그들은 디아바디(diabody)보다 훨씬 더 높은 친화도를 나타낸다.
모노클로날 항체는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된다. 즉, 집단 내의 개별 항체는 항체 분자의 작은 서브 세트에 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 서브 클래스에 속하는 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체를 포함하는 반면, 다른 종으로부터 유래된 항체 또는 다른 항체 클래스 또는 서브 클래스에 속하는 항체의 상응하는 또는 상동성 뿐만 아니라 그러한 항체의 단편이 원하는 작용작용을 나타내는 한 상동성이거나 상동이다.
단일 클론 항체는 단일 클론 항체를 생산하는 모든 절차를 사용하여 만들 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 쥐 또는 다른 적절한 숙주 동물은 면역원으로 특이 적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도하기 위해 전형적으로 면역제로 면역화된다. 또는, 림프구를 시험 관내에서 면역화할 수 있다.
항체는 재조합 DNA 방법으로 만들 수도 있다. 개시된 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차(예를 들어, 쥐 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고 뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써)를 용이하게 단리 및 시퀀싱될 수 있다. 항체 또는 활성 항체 단편의 라이브러리는 또한 파지 디스플레이 기술을 사용하여 생성 및 스크리닝될 수 있다.
2. 인간의 및 인간화된 항체
많은 비인간 항체(예를 들어, 마우스, 래트 또는 토끼로부터 유래된 것들)는 인간에서 자연적으로 항원성이며, 따라서 인간에게 투여될 때 바람직하지 않은 면역 반응을 일으킬 수 있다. 따라서, 이 방법에서 인간 또는 인간화 항체의 사용은 인간에게 투여된 항체가 바람직하지 않은 면역 반응을 일으킬 가능성을 줄이는 역할을 한다.
면역화시 내인성 면역 글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 완전한 레퍼토리를 생성할 수 있는 형질 전환 동물(예를 들어, 마우스)이 사용될 수 있다. 예를 들어, 키메라 및 생식선 돌연변이 마우스에서 항체 중쇄 결합 영역(J(H)) 유전자의 동형 접합체 결실은 내인성 항체 생산의 완전한 억제를 초래한다고 기재되어 있다. 이러한 생식선 돌연변이 마우스에서의 인간 생식선 면역 글로불린 유전자 어레이의 전달은 항원 공격시 인간 항체의 생성을 초래할 것이다. 선택적으로, 항체는 다른 종에서 생성되고 인간에게 투여하기 위해 "인간화"된다. 인간이 아닌 인간(예: 쥐) 항체의 형태는 키메라 면역 글로불린, 면역 글로불린 쇄 또는 이의 단편(예: Fv, Fab, Fab ', F(ab') 2 또는 항체의 다른 항원 결합 부분 서열) 비-인간 면역 글로불린으로부터 유래된 서열이다. 인간화된 항체는 인간 면역 글로불린(수혜 항체)를 포함하고, 이 인간 면역 글로부린에는 수용체 항체의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및 용량을 가지는, 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비인간 동물(공여자 항체)의 CDR로부터의 잔기로 대체된다. 일부의 경우, 인간 면역 글로불린의 Fv 골격 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 인간화 항체는 또한 수혜자 항체 또는 수입된 CDR 또는 프레임 워크 서열에서 발견되지 않는 잔기를 함유할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 CDR 영역의 전부 또는 실질적으로 모두가 비-인간 면역 글로불린의 아미노산 및 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역의 아미노산 서열에 상응하는 하나 이상의, 전형적으로 2 개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 함유할 것이다. 또한, 인간화 항체는 최적으로 면역 글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 면역 글로불린의 일부를 함유할 것이다.
비-인간 항체를 인간화하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 사람이 아닌 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이러한 비인간 아미노산 잔기는 흔히 "임포트(import)" 잔기라고 불리는데, 이는 일반적으로 "임포트" 가변 영역에서 가져온다. 항체 인간화 기술은 일반적으로 항체 분자의 하나 이상의 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 DNA 서열을 조작하기 위한 재조합 DNA 기술의 사용을 포함한다. 인간화는 필수적으로 인간 항체의 상응하는 서열을 설치류 CDR 또는 CDR 서열로 대체함으로써 수행될 수 있다. 따라서, 인간이 아닌 형태의 비-인간 항체(또는 그의 단편)는 키메라 항체 또는 단편이며, 실질적으로 완전한 인간 가변 도메인보다 적게 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환된다. 실제로, 인간화 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사한 부위의 잔기로 치환된 인간 항체이다.
인간화 항체를 만드는데 사용되는 경중 인간 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키기 위해 매우 중요하다. "가장 적합한" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열은 알려진 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝된다. 설치류 동물과 가장 가까운 인간 서열은 인간화 항체에 대한 인간 골격(FR)으로 받아 들여진다. 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위 군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유도된 특정 골격을 사용한다. 같은 프레임 워크가 여러 가지 인간화 항체에 사용될 수 있다.
항체가 항원에 대한 높은 친화성 및 다른 유리한 생물학적 특성을 유지하면서 인간화되는 것이 더욱 중요하다. 이러한 목표를 달성하기 위해, 인간화 항체는 바람직하게는 모서열 및 인간화된 서열의 3 차원 모델을 사용하여 부모 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물을 분석하는 공정에 의해 제조된다. 3 차원 면역 글로불린 모델은 일반적으로 이용 가능하고 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보 면역 글로불린 서열의 가능한 3 차원 입체 구조를 설명하고 표시하는 컴퓨터 프로그램이 이용 가능하다. 이들 디스플레이의 검사는 후보 면역 글로불린 서열의 기능, 즉 후보 면역 글로블린이 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석에서 잔기의 가능한 역할의 분석을 허용한다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 컨센서스 및 수입 서열로부터 선택되고 결합되어 표적 항원(들)에 대한 증가된 친 화성과 같은 원하는 항체 특성이 달성될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 직접적이고 가장 실질적으로 항원 결합에 영향을 미친다.
3. 단일 사슬 항체
단쇄 항체의 생산 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 단일 사슬 항체는 짧은 펩티드 링커를 사용하여 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 융합시킴으로써 생성되며, 이에 의해 단일 분자 상에 항원 결합 부위를 재구성한다. 하나의 가변 도메인의 C- 말단이 15 내지 25 개의 아미노산 펩티드 또는 링커를 통해 다른 가변 도메인의 N- 말단에 연결되는 단쇄 항체 가변 단편(scFvs)은 항원 결합 또는 바인딩의 특이성을 현저히 파괴시키지 않고, 링커는 중쇄 및 경쇄가 그들의 적절한 입체적 방위로 함께 결합할 수 있도록 선택된다. 이들 Fv는 천연 항체의 중쇄 및 경쇄에 존재하는 불변 영역(Fc)이 결여되어 있다.
4. 1가 항체
시험관내 방법은 또한 1가 항체를 제조하는데 적합하다. 그의 단편, 특히 Fab 단편을 생성하기 위한 항체의 분해는 당업계에 공지된 일상적인 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어 소화는 파파인을 사용하여 수행할 수 있다. 항체의 파파인 소화는 전형적으로 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 Fab 단편 및 잔류 Fc 단편으로 지칭되는 2 개의 동일한 항원 결합 단편을 생성한다. 펩신 처리는 2 개의 항원 결합 부위를 갖고 아직도 항원을 교차 결합시킬 수 있는 F(ab ') 2 단편이라 불리는 단편을 생성한다.
항체 소화에서 생산된 Fab 단편은 또한 경 사슬의 불변 도메인 및 중쇄의 제 1 불변 도메인을 함유한다. Fab '단편은 항체 경첩 부위의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 도메인의 카르복시 말단에 몇 개의 잔기를 부가함으로써 Fab 단편과 상이하다. F(ab ') 2 단편은 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2 개의 Fab'단편을 포함하는 2가 단편이다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 그룹을 갖는 Fab '에 대한 지정이다. 항체 단편은 원래 그들 사이에 경첩 시스테인을 갖는 Fab '단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플 링 또한 공지되어있다.
5. 하이브리드 항체
항체는 하이브리드 항체일 수 있다. 하이브리드 항체에서, 하나의 중쇄 및 경쇄 쌍은 하나의 에피토프에 대해 생성된 항체에서 발견되는 것과 상동성이 있는 반면, 다른 중쇄 및 경쇄 쌍은 다른 에피토프에 대해 생성된 항체에서 발견되는 쌍에 상동이다. 이는 다기능 원자가의 성질을 낳는다. 즉, 2가 항체는 적어도 2 개의 상이한 에피토프를 동시에 결합시키는 능력을 갖는다. 이러한 혼성 체는 각각의 성분 항체를 생산하는 하이브리도마의 융합 또는 재조합 기술에 의해 형성될 수 있다. 물론, 이러한 하이브리드는 키메라 사슬을 사용하여 형성될수 도 있다.
6. 단백질 화학을 이용한 항체 제작 방법
항체를 포함하는 단백질을 생산하는 하나의 방법은 단백질 화학 기술에 의해 둘 이상의 펩티드 또는 폴리펩티드를 함께 연결시키는 것이다. 예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드는 Fmoc(9-플루오레닐메틸옥시카보닐) 또는 Boc(tert-부틸옥시카보닐) 화학을 사용하여 현재 이용 가능한 실험 장비를 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다.(Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). 당업자는 예를 들어 항체에 상응하는 펩티드 또는 폴리펩티드가 표준 화학 반응에 의해 합성될 수 있음을 쉽게 이해할 수 있다. 예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드는 합성될 수 있고 합성 수지로부터 절단되지 않는 반면, 항체의 다른 단편은 합성될 수 있고, 이어서 수지로부터 절단되어 다른 단편에서 기능적으로 차단된 말단기를 노출시킨다. 펩티드 축합반응에 의해, 이들 2 개의 단편은 그들의 카르복실 및 아미노 말단에서 각각 펩티드 결합을 통해 공유 결합되어 항체 또는 그의 단편을 형성할 수 있다. 다르게는, 펩티드 또는 폴리펩티드는 전술한 바와 같이 독립적으로 생체 내에서 합성된다. 일단 분리되면, 이들 독립적인 펩티드 또는 폴리펩티드는 유사한 펩티드 축합 반응을 통해 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 형성하도록 연결될 수 있다.
예를 들어, 복제 또는 합성 펩티드 절편의 효소적 연결은 상대적으로 짧은 펩티드 단편이 더 큰 펩티드 단편, 폴리펩티드 또는 전체 단백질 도메인을 생성하도록 합쳐질 수 있게 한다. 또는, 합성 펩티드의 본래의 화학적 결합을 이용하여 더 짧은 펩티드 단편으로부터 큰 펩티드 또는 폴리펩티드를 합성적으로 작게할 수 있다. 이 방법은 2 단계 화학 반응으로 구성된다. 첫 번째 단계는 보호되지 않은 합성 펩티드 -α-티오에스테르와 아미노 말단 Cys 잔기를 함유하는 다른 보호되지 않은 펩티드 세그먼트를 화학적으로 반응시켜 초기 공유 결합 생성물로서 티오에스테르 연결 중간체를 제공하는 것이다. 반응 조건의 변화없이, 이 중간체는 자연 발생적이며 신속한 분자 내 반응을 거쳐 결합 부위에서 본래의 펩티드 결합을 형성한다.
III. 사용 방법
본 출원에 개시된 사멸 수용체 작용제는 전신 경화증과 같은 자가 면역 섬유증 환자를 치료하기 위해 단독으로 또는 약제학적 조성물 또는 제제의 활성제로서 사용될 수 있다.
A. 경피증(전신 경화증, SSc)
경피증은 결합 조직의 경화에 의해 신체에 영향을 미치는 자가 면역, 류마티스 및 만성 질환이다. 결합 조직은 많은 종류의 단백질(예: 콜라겐)로 만들어져 널리 보급되어 있다. SSc는 피부와 내장 기관의 섬유화를 일으키며 SSc의 치명적인 성분이다. 섬유증은 장기 또는 조직에서 결합 조직 구성 요소의 과도한 축적을 특징으로 하는 병적인 과정이다. 섬유증은 만성 조직 손상 또는 만성 염증에 반응하여 탈조절된 상처 치유(예를 들어, 과량의 콜라겐 생성)에 의해 생성된다. 과량의 콜라겐은 기관이 정상적으로 기능하는 것을 예방한다(JHU Scleroderma Center: www.hopkinsscleroderma.org). 조직 구조를 왜곡하고 장기 기능의 점진적 손실을 초래하는 진행성 섬유증은 SSc(가장 치명적인 류마티스 질환 중 하나)를 가진 개인의 이환율 및 사망률의 주요 원인 중 하나로 인식된다. 활성화된 알파 평활근 액틴(α-SMA) 근섬유 아세포는 섬유화에서 세포 외 기질 흉터를 생성하는 세포이다(Ho et al., Nat Rev Rheumatol 10, 390-402(2014)). α-SMA + 세포는 근섬유 아세포 형성을 위한 바이오 마커로 자주 사용되며, 경피증의 중요한 발병 원인이다.
SSc는 드문 질환으로 현재 미국에서 50만 명 미만이 진단 받고 있다. 환자의 약 80 %가 여성이며 진단의 평균 연령은 40대(35 ~ 50 세)이다. 사망은 신장, 심장 및 신장 침범으로 가장 많이 발생하지만 신장 장애에 대한 효과적인 치료로 생존율이 크게 향상된다. 폐섬유증은 진단의 10 년 이내에 사망률이 50% 인 가장 흔한 사망 원인이다.
SSc의 초기 증상은 감기에 매우 민감해지고 차갑거나 감정적인 스트레스(예: 레이노 현상)로 색이 변하고 경직해지고 부어 오를 수 있는 손가락의 변화를 포함한다. 손가락 색깔의 변화는 경련과 혈관의 협착에 의해 유발된다. 이것은 과도한 콜라겐이 혈관을 좁히고 차가운 온도와 감정적인 스트레스에 대한 피부 혈관의 반응 때문에 발생한다. 차가운 감도와 색 변화를 레이노 현상이라고 한다. 레이노 현상은 일반적인 조건이다. 레이노 현상을 가진 대부분의 사람들은 경피증을 일으키지 않을 것이다. 레이노 현상에는 두 가지 유형이 있다: 1차(레이노 현상으로 진단된 대상과 경피증으로 진단되지 않은 대상) 및 2 차(레이노 현상과 경피증으로 진단된 대상)의 두 가지 유형이 있다.
섬유증은 또한 내부 장기에 영향을 줄 수 있으며 손상된 기관의 손상 또는 실패를 초래할 수 있다. 가장 흔히 영향을 받는 기관은 식도, 심장, 폐 및 신장이다. 내부 기관 침범은 가슴 쓰림, 연하 곤란(dysphagia), 고혈압(고혈압), 신장 문제, 호흡 곤란, 설사, 또는 소화관을 통해 음식을 이동시키는 근육 수축 장애에 의해 나타날 수 있다.
전신 경피증의 특징을 지닌 사람들의 약 15 %에서 25 %는 다발성 근염, 피부 근염, 류마티스 관절염, 쇼그렌 증후군 또는 전신성 홍반성 루푸스와 같은 결합 조직에 영향을 주는 다른 증상의 징후와 증상이 있다. 전신 경피증과 다른 결합 조직 이상의 조합은 경피증 중첩 증후군(scleroderma overlap syndrome)으로 알려져 있다.
1. 경피증의 종류
A. 한정된 경피증(CREST 증후군)
한정된 경피증은 보다 경미한 형태의 SSc로 특징지어 진다. 한정된 경피증은 대개 얼굴 목과 말초의 팔꿈치와 무릎의 피부에 영향을 미치고, 질병의 후반부에는 고립된 폐 고혈압을 유발한다. 일반적으로, 제한된 경피증은 더 심한 형태보다 신체 장기의 침범을 덜 일으킨다. 일부 환자는 폐 및 심장 질환을 일으킬 수 있다.
한정된 경피증은 CREST(석회화, 레이노 현상, 식도 기능 부전, 경증, 모세관확장증(Telangiectasis)) 증후군과 관련이 있다. 피부와 조직에 있는 칼슘은 고통 스러우며 피부 표면을 자극하거나 부셔버릴 수 있다. 위에서 설명한 바와 같이 레이노 증후군은 냉증에 견딜 수 없다. 식도 운동 장애로 인한 산성 역류는 식도 안감에 자극을 유발할 수 있다. 혈관 확장증은 모세 혈관 확장으로 특징지어지며 모낭이 적색 또는 보라색으로 나타나게 한다. 그들은 일반적으로 증상을 일으키지 않으며 레이저 요법으로 제거할 수 있다.
b. 확산성 경피증
확산성 피부 경화증은 종종 피부, 심장, 폐, 위장관 및 신장(예를 들어, 콜라겐의 과잉 생산에 의해 상기 부위가 두꺼워 짐)을 포함하는 더 많은 영역에 영향을 미친다. 조여진 피부는 손가락, 손 및 다른 관절을 구부리기가 더 어려워지며 조인트, 힘줄 및 근육의 염증이 종종 관찰된다.
c. 전신 경화증 사인 경화증
전신 경화증 사인(sine scleroderma)에서 섬유증은 하나 이상의 내장 기관에는 영향을 미치지만 피부에는 영향을 미치지 않는다. 영향을 받는 내부 장기에는 식도, 폐, 심장 및 신장이 포함된다.
B. 치료 대상
개시된 방법으로 치료받는 피험자는 전신 경화증을 앓고 있는 환자를 포함한다. 환자는 제한된 경피증이나 미만성 경피증으로 고통받을 수 있다. 환자는 SSc의 초기 증상을 앓고 있을 수 있으며, 레이노(Raynaud)의 1 차 또는 2 차 현상이 나타날 수 있다. 환자는 석회증, 레이노 현상, 식도 기능 부전, 경증, 모세 혈관 확장증 및/또는 확산 경피증으로 고통받을 수 있다. 환자는 초기, 중기 또는 진행 단계일 수 있다.
치료될 피험자는 섬유화 또는 내부 기관의 염증과 같은 다른 섬유성 질환이 없는 경우의 하나 이상의 형태의 전신 경화증을 앓고 있을 수 있다. 예는 간 섬유화의 존재 또는 부재 하에 전신 경화증을 앓는 환자 집단, 간경화의 존재 또는 부재 하에 전신 경화증을 앓고 있는 대상체, 췌장 섬유증의 존재 또는 부재 하에 전신 경피증을 앓고 있는 대상체 및 췌장염의 존재 또는 부재 하에 전신 경화증을 앓고 있는 환자를 포함한다.
치료될 대상의 다른 예는 제2형 당뇨병, 관절염 또는 제1형 당뇨병, 류마티스성 관절염, 전신성 홍반성 루푸스 또는 다발성 경화증과 같은 기타 자가 면역 질환의 존재 또는 부재 하에 전신 경화증을 앓고 있는 환자를 포함한다.
치료될 대상의 다른 예는 암과 같은 증식성 질환의 존재 또는 부재 하에 전신 경화증을 앓고 있는 환자를 포함한다.
C. SSc를 위한 현재의 치료 및 처치
현재 SSc에 대한 치료법은 없다. 그러나 일부 증상에 대한 치료가 가능하다. 예시적인 그러한 치료법은 피부를 부드럽게하고 염증을 감소시키는 약물을 포함하며, 또한 환자의 열에 대한 노출은 유익한 효과를 갖는 것으로 입증되었다. 효과적이고 안전한 장기 요법이나 FDA 승인 약물은 없지만 질병 진행을 변화시키지 않지만 증상(예: 통증 및 궤양)을 개선할 수 있는 국소 치료법을 사용할 수 있다. 글루코코르티코이드가 제한된 적용을 가지지만, 면역 억제 약물을 사용할 수 있다. 스테로이드(예: 프레드니손)뿐만 아니라 다양한 비스테로이드성 항염증제(NSAID)(예: 나프록센)를 사용할 수도 있다. 프로스타글린, 엔도텔린-수용체 작용제(예: 보센탄), 메토트렉세이트, 시클로스포린, 페니실라민, ACE 억제제, 시클로포스파미드, 에포프로스타놀, 보센탄 및 에어로라이즈드 일로프로스를 포함한다.
제약 산업 내에서의 연구는 종종 경피증과 함께 특발성 폐섬유증(IPF)을 목표로한다. Hoffmann-La Roche, Ltd, Bayer AG, Celgene Corporation, InterMune, Inc. 및 Corbus Pharmaceuticals Holdings, Inc.를 비롯한 여러 제약 회사의 연구 파이프 라인은 자가 면역 질환(예: 류마티스 관절염 및 청소년 특발성 관절염)과 관련이 있다. 그러나 현재의 치료 전략 중 어느 것도 SSc와 관련하여 섬유증을 역전시키고 염증을 해결하는 데 초점을 맞추지 않는다.
D. 병용 요법
병용 요법은 하나 이상의 추가 약제와 함께 유효량의 사멸 수용체 작용제를 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 제제는 전신 경화증의 증상을 완화시키는데 현재 사용되는 치료제를 포함할 수 있다.
추가의 약제는 메토트렉세이트, 아자티오프린, 메스샴푸린, 닥티노마이신, 안트라사이클린, 마이토마이신 C, 블레오마이신, 미트라마이신, 글루코코르티코이드, 바실리시맙, 다클리쯔마브, 뮤로모브-CD3, 시클로스포린, 타크로롤로스,시롤리무스, 에베로리무스, 인터페론 및 미코페놀레이트와 같은 면역 억제제, 네오마이신, 스트렙토마이신, 클로람페니콜, 세팔로스포린, 암피실린, 페니실린, 테트라사이클린 및 시프로플록사신과 같은 스테로이드 및 스테로이드 약제, 메트로니다졸, 메트로니다졸, 염산 메트로니다졸, 겐타마이신 설페이트, 염산 린코마이신, 토브라 마이신 황산염, 염산 반코마이신, 폴리믹신 B 황산염, 콜리스틴테이트 나트륨, 아세토 아미노펜, 나프록센 나트륨, 부프로핀(buprenorphine), 프로폭시펜하이드로클로라이드, 프로폭시펜나피실레이트, 메페리딘하이드로클로라이드(meperidine hydrochlo)와 같은 진통제와 같은 비스테로이드계 항염증제(non-steroidal anti-inflammatory drugs) 부르르비탈, 구연산 페닐로록삼아민, 구연산 디페닐 히드라민, 메토트리메프라딘, 염산 시네멘린, 염산 인산염, 인산 칼슘, 메소트렉틴, 시클로스포린, 페니실라민, ACE 억제제, 예를 들어 베나제프릴카토프릴,에날라 프릴, 포시노프릴, 리시노 프릴(lisinopril)과 같은 비타민제, 암로디핀, 딜티아젬, 펠로디핀,이라다이핀, 니카디핀, 니페디핀, 니졸디핀 및 베라파밀, 모이에필릴, 페린도프릴, 퀸아프릴, 라미프릴 및 트란드라프릴, 시클로포스파미드, 에포프로스테톨, 보센탄 및 에어로라이즈드 일로프로스을 포함한다.
추가의 작용제는 사멸 수용체 작용제와 동시에 투여될 수 있다.
다르게는, 추가의 작용제는 유효량의 사멸 수용체 작용제를 투여하기 전에 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 추가의 약물(들)의 투여 전 또는 투여 후 적어도 3 시간, 적어도 6 시간, 적어도 12 시간, 적어도 24 시간만큼 유효량의 사멸 수용체 작용제의 투여로부터 시간상으로 분리될 수 있다. 적어도 48 시간, 72 시간 이상, 4 일 이상, 5 일 이상, 6 일 이상, 7 일 이상, 2 주 이상, 3 주 이상, 또는 1 개월 이상 지속될 수 있다.
E. 약학 조성물 및 투여 방법
1. 약학 조성물
본 출원의 또 다른 실시예는 화합물의 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 약학 조성물은 전형적으로 약물(예 : 사멸 수용체 작용제) 및 약학으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 출원에서 사용된 "약학적으로 허용가능한 담체"는 생리학적적으로 상용 성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장액 및 흡수 지연 제 등을 포함한다. 담체의 유형은 의도된 투여 경로에 기초하여 선택될 수 있다. 다양한 구체 예에서, 담체는 정맥 내, 복강 내, 피하, 근육 내, 국소, 경피 또는 경구 투여에 적합하다. 약학적으로 허용가능한 담체는 멸균된 수용액 또는 분산액 및 멸균된 주사 가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조용 멸균 분말을 포함한다. 약학적 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 제제의 용도는 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성제와 양립 불가능한 경우를 제외하고는, 그의 약학 조성물에서의 용도가 고려된다. 보충 활성제 또한 조성물에 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에서 무균 및 안정해야 한다. 상기 조성물은 용액, 마이크로 에멀젼, 리포솜, 또는 고약물 농도에 적합한 다른 규칙 구조로 제형화될 수 있다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지 및 계면 활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 등장제, 예를 들면 설탕, 폴리 알콜, 예를 들어 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사 가능한 조성물의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 모노스테아린산 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 초래될 수 있다. 또한, 상기 제제는 예를 들어 지연 방출 중합체를 포함하는 조성물과 같은 시간 방출 제제로 투여될 수 있다. 활성제는 임플란트 및 마이크로 캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어된 방출 제제와 같이, 신속한 방출로부터 약제를 보호하는 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌비닐아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산 및 폴리락틱폴리글리콜 코폴리머(PLG)와 같은 생분해성, 생체 적합성 폴리머가 사용될 수 있다. 이러한 제제의 제조를 위한 많은 방법은 당업자에게 일반적으로 공지되어있다.
멸균주 사용 용액은 필요에 따라 활성 성분을 적절한 용매에 상기 열거한 성분들 중 하나 또는 조합 물과 혼합하고, 이어서 여과 멸균함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터 요구되는 다른 성분을 함유하는 무균 비히클에 제제를 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조로 사전에 살균 여과된 용액으로부터 활성 성분+임의의 부가적인 성분을 생성한다.
투여 경로에 따라, 작용제를 불활화시킬 수 있는 효소, 산 및 기타 자연 조건의 작용으로부터 이를 보호하는 물질로 코팅될 수 있다. 예를 들어, 약제는 효소 저해제와 함께 또는 적절한 담체, 예컨대 리포좀 내에서 함께 투여되는 적절한 담체 또는 희석제로 대상에게 투여될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 희석제는 식염수 및 수성 완충액을 포함한다. 효소 억제제는 췌장 트립신 억제제, 디이소프로필플루오로 인산염(DEP) 및 트라실롤을 포함한다. 리포솜은 통상적인 리포솜뿐만 아니라 물-중-수중유 에멀젼을 포함한다(Strejan, et al.,(1984) J. Neuroimmunol 7:27). 분산액은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물 및 오일에서 제조될 수 있다. 일반적인 저장 및 사용 조건 하에서 이러한 제제에는 미생물의 생장을 막기 위한 방부제가 함유되어 있을 수 있다.
2. 유효량 및 투여 단위 형태
조성물 중의 활성제(예를 들어, TRAILPEG, DR 항체)는 바람직하게는 치료적 유효량으로 조성물 중에 제제화된다. 치료학적 유효량의 활성제는 질환 상태, 개체의 나이, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 약물의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 용량 요법은 유익한 치료 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 치료 유효량은 또한 약제의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료 학적으로 유익한 효과보다 큰 것이다. 또 다른 실시예에서, 활성 약제는 예방 유효량으로 조성물 중에 제형화된다. "예방적 유효량"은 필요한 예방적 결과를 얻는데 필요한 투여량 및 필요한 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방적 투여량이 질병의 초기 단계 또는 초기 단계에서 피험자에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.
조성물 중의 활성 화합물의 양은 환자의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 용량 요법은 최적의 치료 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 단일 볼러스(bolus)가 투여 될 수 있고, 여러 번 분할된 용량이 시간이 지남에 따라 투여될 수 있거나, 투여량은 치료 상황의 긴급성에 의해 지시된 바와 같이 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투약 단위 형태로 비경구 조성물을 제제화하는 것이 특히 바람직하다. 본원에 사용된 투여 단위 형태는 치료하고자 하는 포유 동물 대상에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미한다; 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소 정량의 활성 화합물을 함유한다. 투여 단위 형태에 대한 명세는 (a) 활성 화합물의 독특한 특성 및 달성 될 특정 치료 효과, 및 (b) 그러한 활성 화합물을 배합하는 분야에 내재된 한계 개인의 감수성 치료에 의존한다.
3. 투여량 및 투여 경로
약제의 예시적인 투여량(예, TRAILPEG, DR 항체)은 약 0.0001 % 내지 5 %, 약 0.0001 % 및 1 %, 약 0.0001 % 및 0.1 %, 약 0.001 % 및 0.1 %, 약 0.005 % 및 0.1 % 약 0.01 % 내지 0.1 %, 약 0.01 % 내지 0.05 % 및 약 0.05 % 내지 0.1 %이다. 선택적으로, 투여량은 약 0.001 % 내지 약 50 %, 약 0.01 % 및 약 5 %, 약 0.1 % 및 약 2.5 %, 약 0.2 % 및 약 2 %, 약 0.3 % 및 약 1.5 %, 약 0.4 % 및 약학 조성물 또는 제형의 약 1.25 %, 약 0.5 % 및 약 1 %, 약 0.6 % 및 약 0.9 % 및 약 0.7 % 내지 약 0.8 %를 포함한다. 예시적인 투여량은 또한 약 0.0001 mg/kg 내지 약 1 g/kg, 0.001 mg/kg 및 약 1 g/kg과 같은, 예를 들어 mg/kg으로 치료된 환자의 체중에 비례하여 약 0.1 mg/kg 및 약 1 g/kg, 약 0.2 mg/kg 및 약 500 mg/kg, 0.3 mg/kg 및 약 200 mg/kg, 약 0.4 mg/약 0.5 mg/kg 및 약 50 mg/kg, 약 0.6 mg/kg 및 약 30 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 및 약 20 mg/kg, 약 0.8 mg/kg 및 약 0.1 mg/약 15 mg/kg, 약 1 mg/kg 및 약 10 mg/kg, 약 2 mg/kg 및 약 8 mg/kg 및 약 4 mg/kg 및 약 6 mg/kg이다.
사멸 수용체 작용제는 전신적으로, 장내로, 비경구적으로, 국소적으로, 또는 협측 전달을 통해 투여될 수 있다. 선택적으로, 상기 사멸 수용체 작용제는 국소 투여된다. 국부 투여에는 국소 투여 및/또는 피하 투여가 포함된다. 작용제(들)의 유효량은 단일 투여 또는 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다.
약제(사멸 수용체 작용제(들))는 하나 이상의 투여에서 유효량으로 투여될 수 있다. 작용제의 유효 투여량의 각각의 투여는 적어도 3 시간, 적어도 6 시간, 적어도 12 시간, 적어도 24 시간, 적어도 48 시간, 적어도 72 시간, 적어도 4 일, 5 일 이상, 6 일 이상, 7 일 이상, 2 주 이상, 3 주 이상 또는 1 개월 이상으로 분리될 수 있다.
약제는 화합물(들)의 생체 이용률의 지속 기간을 연장시키고, 약제의 작용 지속 시간 및 약제의 방출 시간 프레임을 적어도 3 시간, 적어도 6 시간, 적어도 12 시간, 적어도 24 시간, 적어도 48 시간, 적어도 72 시간, 적어도 4 일, 적어도 5 일, 적어도 6 일, 적어도 7 일, 2 주 이상, 3 주 이상, 및 1 개월 이상이지만, 여기에 제공된 조성물이 없는 경우에는 약제의 양보다 적어도 어느 정도 많아야 한다. 선택적으로 선행 효과 중 일부 또는 전부의 지속 시간은 최소 30 분, 최소 1 시간, 최소 2 시간, 최소 3 시간, 최소 6 시간, 최소 12 시간, 최소 24 시간, 적어도 48 시간, 72 시간 이상, 4 일 이상, 5 일 이상, 6 일 이상, 7 일 이상, 2 주 이상, 3 주 이상 또는 1 개월 이상 지속될 수 있다.
약제는 약제 조성물로 제형화 될 수 있으며, 여기서 약제는 그 중의 유일한 활성제이다. 다르게는, 약제학적 조성물은 추가적인 활성제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 둘 이상의 화합물을 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 화합물은 자가 면역 질환(예를 들면 전신성 경화증)에 조절 효과를 갖는 하나 이상의 다른 제제와 조합될 수 있다.
IV. 키트
본 발명은 또한 유효량의 제제, 예를 들어, 사멸 수용체 작용제(예 : TRAILPEG 및 DR 항체) 및 사용 설명서를 포함하는 키트를 포함한다.
키트는 하나 이상의 멸균된, 사전 포장된 주사기, 캡슐, 정제, 분말, 겔 또는 투여 준비가 된 패치에 약제의 유효 투여량을 포함할 수 있다.
키트에는 병용 요법을 위한 약제의 유효 용량과 함께 추가 약제가 포함될 수 있다.
본 발명은 다음의 비제한적인 실시예를 참조로 추가로 이해될 것이다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 설명되며, 이들 실시예는 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고 문헌, 특허 및 공개된 특허출원 및 도면의 내용은 본원에 참고로 인용된다.
실시예 1 : 활성화된 섬유 모세포가 사멸 수용체(DR) 및 DR의 작용제를 상향 조절하여 활성화된 근섬유 아세포에서는 세포사멸을 선택적으로 유도하지만, 정상 섬유 아세포에서는 세포사멸을 선택적으로 유도하지 않는다.
활성화 된 α-SMA + 섬유 모세포 (근섬유 아세포)는 경피증의 근원 중 하나이다. 생체 내 근섬유 아세포의 선택적 박멸이 SSc를 역전시키고 염증을 해결한다는 것이 본원에서 밝혀졌다. 현재까지 인간의 근섬유 아세포를 표적으로 하고 영향을 미치는 임상적으로 입증된 강력한 방법은 존재하지 않았다. TRAILPEG는 α-SMA + 활성화된 간 및 췌장 별모양 세포를 표적화함으로써 간 및 췌장에서 심한 섬유화를 역전시키는 것으로 이미 확인되었다(국제출원공보 WO/2015/164217). 본 명세서에서, TRAIL, TRAILPEG 및 DR5 항체는 섬유 아세포로 형질 전환된 α-SMA + 근섬유 아세포를 표적으로 하고 동시에 SSc에서 다수의 핵심 인자를 억제하였다. 1 차 건강한 피부 섬유 아세포가 TGF-β1에 의해 54 시간 동안 활성화되었을 때, 활성화된 섬유 아세포는 α-SMA, DR4, DR5 및 콜라겐을 포함한 섬유성 마커(표 1 및 표 2)의 mRNA 및 단백질 수준을 상향 조절했다. 중요하게, 활성화된 섬유아세포를 시험관내에서 3 시간 동안 재조합 TRAIL (R & D SystemsTM, 1ug/mL), TRAILPEG (1ug/mL) 및 DR5 항체(1ug/mL, Conatumumab with protein G 및 HGSTR2J/KMTRS) 근섬유 아세포는 증가된 수준의 세포 사멸 마커, 활성 카스파제-8 및 카스파제-3/7을 나타내었고 TRAIL- 유도된 세포 사멸로 인한 형태학적 변화를 나타낸다(표 3). 일차 인간 폐섬유아세포(ATCC® CCL-151)도 TGF-β1(10 ng/mL)에 의해 54 시간 동안 활성화된 후 TRAILPEG로 치료되었다. 활성화된 폐섬유아세포 만 TRAIL에 의해 유발된 세포 사멸로 인한 형태학적 변화를 나타낸다. 본원에서 제공된 하기의 실시예는 피부 및 폐섬유증과 같은 경피증 모델에서 TRAILPEG 및 DR 항체 효능을 지지한다.
표 1
Figure 112018069582968-pct00003
표 2
Figure 112018069582968-pct00004
표 3
Figure 112018069582968-pct00005
실시예 2 : TRAIL PEG 역전된 피부 농축 및 콜라겐 침착
연구 디자인 I (블레오마이신 유발성 SSc 마우스 모델에서 경미한 섬유증)
생체 내 연구를 위해, 블레오마이신-유도된 경피를 사용하는 마우스 모델이 사용되었다. 마우스(DBA2/J)를 피하(s.c.) 블레오마이신(0-28 일)으로 처리하였다. TRAILPEG (10, 20mg/kg) 또는 인산 완충식염수(PBS)를 15일째부터 2 주일 간격으로 복강 (i.p.) 처리하고; 그룹당 n = 5. 실험 디자인의 개략도가 도 1에 도시되어 있다. 피부와 폐에서 조직 샘플을 모델의 28 일에 수집하고 포르말린 치료에 의해 조직학을 준비했다. 파라핀포매 조직 절편을 헤마톡실린-에오신 (H & E)으로 염색하였다. 또한, 조직 절편은 면역 조직 화학을 사용하여 다수의 섬유화 마커(콜라겐, α-SMA)에 대해 분석되었다. 조직 균질화 뿐만 아니라 섬유화 마커에 대한 서양 얼룩과 RT-PCT에 의해 분석되었다.
TRAIL PEG 치료는 마우스 피부 경피증 모델에서 2주 치료 후 정상 단계에 가까운 피부 비후를 역전시켰다.
경피증의 마우스 모델에서 TRAILPEG의 효과를 평가하기 위해, 표백제로 유도된 피부 섬유화 모델을 사용하였다. 확립된 섬유화의 치료를 평가하기 위해, TRAILPEG치료의 주사는 블레오마이신 주사의 개시 2주 후에 시작되었다. 2 주 동안 TRAILPEG 치료 후, TRAILPEG 처리 마우스에서 염증 세포 침윤이 감소되었다. 정량적 평가에 따르면, 표백된 피부 섬유 모델 모델 마우스에서 건강한 피부에 비해 진피의 두께가 70 % 이상 증가했다. 그러나 이러한 마우스에 대한 TRAILPEG 의 투여는 피부의 두께 증가를 약화시켰고 정상적인 수준으로 회복시켰다(도 2).
TRAIL PEG 처리는 마우스 피부 경피증 모델에서 2주 치료 후 정상 단계에 가까운 콜라겐 침착을 감소시켰다.
블레오마이신 유발 섬유증의 피부 병변은 진피에서 두꺼운 콜라겐 번들의 고밀도 축적을 보여 콜라겐 침착을 증가시켰다. 그러나, 계속적인 블레오마이신 모상을 갖는 TRAILPEG를 투여 한 마우스는 콜라겐 침착을 상당히 감소시켰다. 절편은 트리크롬 염색(trichrome stain)으로 처리되어 성숙한 콜라겐 침착 영역을 탐지 할 수 있었다. 블레오마이신 유발 마우스의 피부 병변은 진피에서 두꺼운 콜라겐 뭉치의 고밀도 축적을 보여 콜라겐 침착을 증가시켰다. 그러나 TRAILPEG와 블레오마이신을 함께 투여한 마우스는 콜라겐 침착을 상당히 역전시켰다.
TRAILPEG의 생체 내 콜라겐 유전자 발현에 미치는 영향을 조사하기 위해, 병변 피부의 mRNA를 실시간 PCR로 정량화하였다. 결과는 정상 쥐와 비교하여, 블레오마이신으로 처리된 마우스에서 Col1A1 및 Col1A2 mRNA의 수준이 3 배 증가한 것으로 나타났다. TRAILPEG 처리는 콜라겐 mRNA를 현저히 하향 조절한다 (도 3).
실시예 3: TRAIL PEG 는 SSC의 창시자를 목표로 삼았다.
TRAILPEG 처리는 α-SMA + 세포 집단(예: 활성화된 섬유아세포, 근섬유아세포, SSc의 생성자)
병리학적 섬유 형성에 중요한 역할을 하는 근섬유아세포를 확인하는 지표인 α-SMA의 발현은 면역 조직 화학 검사를 통해 결정되었다. 블레오마이신 처리 마우스에서는 병변 진피 및 피하층에서 α-SMA의 증가가 관찰되었다. TRAILPEG처리는 α-SMA + 섬유아세포의 수를 현저하게 감소시켰다. 블레오마이신 처리 마우스에서는 병변 진피 및 피하층에서 α-SMA의 증가가 관찰되었다. TRAILPEG 처리는 α-SMA + 섬유아세포의 수를 현저하게 감소시켰다. α-SMA 단백질과 유전자 수준은 각각 웨스턴 블롯(Western blot)과 실시간 PCR 분석으로 확인하였다.
실시예 4 : 형질 전환 성장 인자 β1(TGF-β1) 및 사멸 수용체 5(DR5) 표현식에 대한 TRAIL PEG 의 효과
TRAIL PEG 처치는 피부 경피증이 생체 내 모델에서 역전될 수 있음을 입증했다
형질 전환 성장 인자는 다양한 섬유증 장애뿐만 아니라 블레오마이신-유도된 섬유증의 동물 모델에서의 섬유화의 주요 중재자이다. 생체 내에서 TRAILPEG에 의한 TGF-β1의 조절을 평가하기 위해 병변 피부에서 TGF-β1 mRNA를 검사하였다. TRAILPEG 투여는 TGF-β1 mRNA의 상향 조절을 실질적으로 막았다(도 4).
실시예 5 : TRAIL PEG 역 폐섬유증
TRAIL PEG 처치는 폐 섬유증에서 콜라겐 및 근섬유아세포 자극을 억제했다.
블레오마이신 유발 폐 섬유증에서 콜라겐 및 α-SMA 발현에 대한 TRAILPEG의 영향을 조사하기 위해 폐의 mRNA를 실시간 PCR로 정량화하였다. 결과는 정상 마우스와 비교하여 블레오마이신으로 치료한 마우스에서 Col1A1(도 5)의 수준이 50 % 이상 증가한 것을 보여 주었다. TRAILPEG 처리는 콜라겐 mRNA의 상향 조절을 현저하게 감소시켰다.
블레오마이신 유발 폐섬유증에서 TRAIL PEG 가 약화된 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF)
PDGF는 그들의 증식 이동과 생존을 자극하여 근섬유 아세포의 확장에 중요한 역할을 한다. PDGF의 상승된 수치는 폐의 섬유성 병변에서 일관되게 입증되었다. 블레오마이신 유도된 폐에서 PDGF 발현에 대한 TRAILPEG 처리의 효과를 조사하기 위해, 폐의 mRNA를 실시간 PCR에 의해 정량화하였다. 결과는 정상 마우스와 비교하여 블레오마이신을 투여한 마우스에서 PDGFα(도 6a) 및 PDGFβ (도 6b) mRNA의 수준이 증가함을 보여 주었다. TRAILPEG 처리는 PDGF mRNA의 상향 조절을 현저하게 감소시켰다.
실시예 6: TRAIL PEG 는 블레오마이신-유도 SSc 마우스 모델에서 진행된 섬유화를 역전시켰다.
연구 디자인 II (블레오마이신 유발성 SSc 마우스 모델에서 진행된 섬유화)
진행된 섬유화의 SSc 마우스 모델에서 DR 작용제의 항섬유화 효능을 추가로 확인하기 위해, 마우스(DBA2/J)를 피하(sc) 블레오마이신으로 3 주간 (0-21 일) 처리하여 피부 섬유화를 확립하고, 추가로 DR 작용제 또는 PBS를 추가로 3 주간 복용한다. TRAILPEG(5 mg/kg) 또는 PBS를 3 주간 매일 (22 내지 42 일, n = 7 내지 10) 복강 내(i.p.) 투여하였다. 조직 샘플을 43 일에 수집하고 상기 기술된 바와 같이 분석하였다. 히드록시프롤린(콜라겐 마커) 함량은 분석 키트 (Sigma)로 측정하였다. 또한 피부 조직 절편을 면역 조직 화학을 이용하여 여러 가지 섬유화 마커(콜라겐, α-SMA)에 대해 분석하였다. 조직 균질화는 DR5, α-SMA, TGF-β1, 콜라겐, PDGFR 및 PDGF에 대한 웨스턴 블랏 및 RT-PCT로 분석하였다. TRAIL에 의해 유발된 세포 사멸을 확인하기 위해, 피부 조직에서의 카스파제-8 및 카스파제 -3/7 활성을 측정 키트로 측정하였다.
결과:
블레오마이신의 주사는 피부가 두꺼워지고, 콜라겐이 침착되고, 피내 지방 조직이 손실되고, 치밀한 염증 침윤 및 근섬유 분화를 특징으로 하는 현저한 피부 섬유화를 유발했다. 6 주간 블레오마이신의 장기 주입은 3 주간 주사와 비교하여 피부 섬유증의 정도와 유사하며, 그 다음 3 주 동안 NaCl을 주입한다. TRAILPEG 치료는 3 주간 블레오마이신 투여 후 3 주간 블레오마이신을 주사한 PBS 치료 마우스(표 4)와 비교하여 염증 침투, 피부 두께, 하이드록시프롤린 함량 및 근섬유아세포 수치의 유의한 감소로 섬유화의 진행을 개선시켰다. 또한, TRAILPEG는 사전 설정된 피부 섬유아세포 샘플에서 섬유성 마커(ACTA2, TGF-β1, Col1A1, Col1A2, PDGFR-β 및 PDGFα) mRNA 수준의 발현을 감소시켰다(표 5). 또한, DR5 mRNA 수준은 PBS 처리 마우스와 비교하여 블레오마이신 투여 마우스에서 유의하게 높았다. TRAILPEG 처리 된 블레오마이신에 의해 유발된 SSc 마우스의 피부에서의 TRAIL 유도성 세포 사멸의 증가가 확인되었지만, 건강한 마우스의 피부에서는 증가하지 않았다(표 6).
표 4
Figure 112018069582968-pct00006
표 5
Figure 112018069582968-pct00007
표 6
Figure 112018069582968-pct00008
실시예 7 : DR 작용제(TRAIL PEG )는 Tight skin-1 (TSK-1) 유전자 삽입 SSc 마우스 모델에서 섬유화를 개선한다.
TSK-1 마우스에서 DR 작용제(TRAILPEG)의 영향을 조사하였다. TSK-1 표현형은 소량의 침윤, 자가 항체 생산 및 피부의 섬유증을 가진 SSc 유사 질환을 유발하는 섬유소-1 유전자의 우성 변이에 의해 유발된다. 이 모델은 피부 섬유증의 후기 단계를 모방하여 염증을 줄인다. TSK-1 마우스는 JAX® Laboratory에서 구입되었다. 치료는 5 주령에 시작되었고 결과는 10 주령에 조사되었다. 야생형(WT) 마우스 또는 TSK-1 마우스에서 5 주간(주당 5 내지 10, 그룹당 7 내지 10) 매일 TRAILPEG(5mg/kg) 또는 PBS를 복강 내 (i.p.) 투여하였다. 표 7에 요약된 바와 같이 TSK-1 마우스는 대조군(야생형, WT)과 비교하여 피부 두께, 히드록시프롤린 함량(콜라겐 마커) 및 α-SMA + 근섬유 아세포 세포군의 증가를 보였다. TSK-1 마우스를 TRAILPEG(1 mg / kg)로 5 주간 처리하면 PBS 처리된 TSK-1 마우스에 비해 피하선의 비후, 하이드록시프롤린 함량 및 피부 근섬유 수를 감소시켰다.
표 7
Figure 112018069582968-pct00009
실시예 8 : DR 항체 (MD5-1, 마우스 항 -DR5 항체)는 블레오마이신-유도 된 SSc 마우스 모델에서 진행된 섬유화를 역전시켰다.
연구 디자인 II에서 기술된 대로, 진보된 섬유증의 SSc 쥐 모형에 있는 작용제 DR 항체의 항 섬유화 효능을 더 확인하기 위하여는, 쥐 (DBA2 / J)는 3 주 (0-21 일) 동안 피하 SC피부 섬유증을 유발하고 추가 3 주간 (매일 22-42 일, 그룹당 7-10 회) DR5 항체 (마우스 당 100 ug), IgG (대조군) 또는 PBS로 매일 처리하였다.
조직 샘플을 43 일에 수집하고 상기 기술된 바와 같이 분석하였다. 피부 두께와 하이드록시프롤린(콜라겐 마커) 함량 뿐만 아니라 α-SMA + 근섬유 아세포 세포 집단을 위에서 설명한대로 측정했다. 조직 균질화는 α-SMA, TGF-β1, 콜라겐, PDGFR 및 PDGF에 대해 RT-PCT로 분석했다. TRAIL에 의해 유발된 세포 사멸을 확인하기 위해, 피부 조직에서의 카스파제-8 및 카스파제 -3/7 활성을 측정 키트로 측정하였다.
결과 :
사전 설정된 섬유화를 가진 SSc 마우스에서 3 주간 항-DR5 항체 (MD5-1)로 처리하면 피부의 두께, 히드록시프롤린 함량 및 근섬유 아세포 수치가 현저히 감소하여 피부 섬유증이 완화되었다(표 8). 또한 MD5-1의 투여는 사전 설정된 섬유화에서 ACTA2 (α-SMA), Col1A1, Col1A2, TGF-β1, PDGFR-β 및 PDGFα의 mRNA 수준을 실질적으로 감소시켰다(표 9). MD5-1에 의한 caspase-8 및 caspase-3 / 7 활성 분석을 통한 DR 매개된 세포 사멸이 확인되었다(표 10).
표 8
Figure 112018069582968-pct00010
표 9
Figure 112018069582968-pct00011
표 10
Figure 112018069582968-pct00012
다른 실시예들
본 발명이 그의 상세한 설명과 관련하여 설명되었지만, 전술한 설명은 예시하기 위한 것이며, 첨부된 청구 범위에 의해 한정되는 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 다른 실시예, 이점 및 수정은 다음의 청구 범위의 범주 내에 있다.
본 명세서에서 언급된 특허 및 과학 문헌은 당업자에게 이용 가능한 지식을 확립한다. 본 명세서에 인용된 모든 미국 특허 및 공개되거나 미공개된 미국 특허출원은 참조로 포함된다. 본 명세서에 인용된 모든 공개된 외국 특허 및 특허 출원은 본원에 참고로 포함된다. 본원에 인용된 등록 번호로 나타낸 Genbank 및 NCBI 제출물은 본 출원에 참조로서 포함된다. 여기에 인용된 다른 모든 출판된 참고 문헌, 문서, 원고 및 과학 문헌은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 바람직한 실시예를 참조하여 구체적으로 도시되고 설명되었지만, 첨부 된 청구범위에 포함되는 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서 형태 및 세부 사항에서 다양한 변화가 이루어질 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. .
균등물
당업자는 일상적인 실험만을 사용하여 본원에 기재된 특정 실시예에 대한 많은 균등물을 인식할 수 있거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 하기 청구 범위에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> The Johns Hopkins University Lee, Seulki Pomper, Martin G Park, Jong-Sung Oh, Yumin Swierczewska, Magdalena Horton, Maureen R <120> AMELIORATING SYSTEMIC SCLEROSIS WITH DEATH RECEPTOR AGONISTS <130> JHU C 13772 <150> 62/268,637 <151> 2015-12-17 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 281 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys 1 5 10 15 Val Leu Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala 20 25 30 Val Thr Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys 35 40 45 Tyr Ser Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr 50 55 60 Trp Asp Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val 65 70 75 80 Lys Trp Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser 85 90 95 Glu Glu Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro 100 105 110 Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly 115 120 125 Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu 130 135 140 Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly 145 150 155 160 His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile 165 170 175 His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe 180 185 190 Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln 195 200 205 Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys 210 215 220 Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr 225 230 235 240 Ser Ile Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile 245 250 255 Phe Val Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala 260 265 270 Ser Phe Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly 275 280

Claims (23)

  1. 포유류 대상에서 전신경화증(SSc)을 예방하거나 치료하기 위한 조성물으로서,
    상기 조성물은 활성화된 근섬유 아세포를 차단 또는 고갈시키는데 유효한 양의 사멸 수용체4(DR4) 작용제 또는 사멸 수용체5(DR5) 작용제를 포함하고,
    상기 조성물은 SSc를 갖는 대상에게 투여되고, 그것에 의해서 상기 대상에서 상기 SSc를 치료하며,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 TNF-관련 세포 자멸-유발 리간드(TRAIL), PEG화 TRAIL, 또는 DR5 작용제 항체를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 SSc는 한정된 경피증 또는 확산성 경피증인 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 PEG화 TRAIL을 포함하는 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 인간 재조합 TRAIL을 포함하는 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 천연 TRAIL, 또는 TRAIL의 세포 외 도메인을 포함하는 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 렉사투무맙(Lexatumumab), 티가투주맙(Tigatuzumab), 코나투무맙(Conatumumab), 드로지투맙(Drozitumab), HGSTR2J/KMTRS 및 LBY-135로 이루어진 군으로부터 선택된 DR5 작용제를 포함하는 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 TAS266 및 scTRAIL-RBD로 이루어진 군으로부터 선택된 다가 DR 작용제를 포함하는 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제1항에 있어서,
    상기 PEG화 TRAIL은 PEG, 또는 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙신이미딜 프로피오네이트, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트 N-히드록시 숙신이미드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 말레이미드, 및 다중 분지 폴리에틸렌 글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 PEG 유도체에 부착된 TRAIL인 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 PEG 또는 PEG 유도체는 1,000 Da 내지 100,000 Da의 분자량을 갖는 조성물.
  12. 제10항에 있어서,
    상기 PEG 또는 PEG 유도체는 5,000 Da 내지 50,000 Da의 분자량을 갖는 조성물.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제가 전신 투여되는 조성물.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 국소 투여되는 조성물.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제가 피하 투여되는 조성물.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 유효한 양의 DR4 작용제 또는 DR5 작용제를 투여하여, 대조군과 비교하여, 피부 두께, 피부 콜라겐 수준, TGF-β, PDGFR, PDGF 수준을 감소시키고 및/또는 α-SMA + 섬유 아세포를 감소시키는 조성물.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 SSc는 대조군과 비교하여 환자에서 예방되거나 치료되는 조성물.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 환자에게 0.001 mg/kg 내지 50 mg/kg의 투여량으로 주사 투여되는 조성물.
  19. 제1항에 있어서,
    상기 유효한 양의 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 하나 또는 하나 이상의 투여량으로 투여되는 조성물.
  20. 제1항에 있어서,
    상기 유효한 양의 DR4 작용제 또는 DR5 작용제는 1일 이상 동안 상기 대상에게 투여되는 조성물.
  21. 제1항에 있어서,
    상기 대상은 인간인 조성물.
  22. 포유동물 대상에서의 전신성 섬유성 질환 또는 장애의 치료를 위한 주사가능한 약학 조성물로서,
    청구항 18의 조성물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  23. 삭제
KR1020187020296A 2015-12-17 2016-12-16 사멸 수용체 작용제로 전신성 경화증 완화 KR102508649B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562268637P 2015-12-17 2015-12-17
US62/268,637 2015-12-17
PCT/US2016/067145 WO2017106627A1 (en) 2015-12-17 2016-12-16 Ameliorating systemic sclerosis with death receptor agonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20180095013A KR20180095013A (ko) 2018-08-24
KR102508649B1 true KR102508649B1 (ko) 2023-03-13

Family

ID=59057609

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187020296A KR102508649B1 (ko) 2015-12-17 2016-12-16 사멸 수용체 작용제로 전신성 경화증 완화

Country Status (10)

Country Link
US (1) US11007251B2 (ko)
EP (1) EP3389696A4 (ko)
JP (2) JP6797203B2 (ko)
KR (1) KR102508649B1 (ko)
CN (1) CN108601819B (ko)
AU (1) AU2016371021B2 (ko)
CA (1) CA3008392C (ko)
EA (1) EA038551B1 (ko)
HK (1) HK1258208A1 (ko)
WO (1) WO2017106627A1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015164217A1 (en) * 2014-04-21 2015-10-29 Theraly Pharmaceuticals Inc. Trail receptor agonists for treatment of fibrotic diseases

Family Cites Families (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
DE69133557D1 (de) 1990-08-29 2007-03-15 Pharming Intellectual Pty Bv Homologe rekombination in säugetier-zellen
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
JP4435304B2 (ja) 1995-06-29 2010-03-17 イミュネックス・コーポレーション アポトーシスを誘導するサイトカイン
ATE342729T1 (de) 1997-01-15 2006-11-15 Phoenix Pharmacologics Inc Modifizierter tumor-nekrosefaktor
PT1012274E (pt) 1997-01-28 2007-08-14 Craig A Rosen Receptor 4 contendo um domínio de morte (dm4; receptor de morte 4), membro da super-família do ftn e ligação a liart (ap02)
US6072047A (en) 1997-02-13 2000-06-06 Immunex Corporation Receptor that binds trail
EP1001990A4 (en) 1997-06-26 2001-12-19 Immunex Corp PROTEIN BINDING TO TRAIL PROTEIN
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6329148B1 (en) 1999-02-16 2001-12-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford University Combined therapy of diterpenoid triepoxides and death domain receptor ligands for synergistic killing of tumor cells
US7550143B2 (en) 2005-04-06 2009-06-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
US7534866B2 (en) 2005-10-19 2009-05-19 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
WO2000069911A1 (en) 1999-05-17 2000-11-23 Conjuchem, Inc. Long lasting insulinotropic peptides
AU766984B2 (en) 1999-09-30 2003-10-30 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Trail: an inhibitor of autoimmune inflammation and cell cycle progression
IL136156A0 (en) 2000-05-16 2001-05-20 Compugen Ltd Sequences of trail variants
US20040005314A1 (en) 2001-07-27 2004-01-08 Enrique Escandon Apo-2l receptor agonist and cpt-11 synergism
KR100396983B1 (ko) 2000-07-29 2003-09-02 이강춘 고반응성의 가지 달린 고분자 유도체 및 고분자와 단백질또는 펩타이드의 접합체
MXPA03002262A (es) 2000-09-18 2003-10-15 Idec Pharma Corp Terapia de combinacion para tratamiento de enfermedades autoinmunes usando una combinacion de anticuerpos inmunorreguladores/supresores de celulas b.
KR20020056565A (ko) 2000-12-29 2002-07-10 황규언 인간유래 세포 소멸 인자와 그 수용체의 결합체인ＴＲＡＩＬ-ｓＤＲ5 결합체의 결정화에 의한 3차원 구조및 ＴＲＡＩＬ 결실 돌연변이 단백질
US20020169123A1 (en) 2001-02-27 2002-11-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulating apoptosis in TRAIL-resistant cancer cells, while protecting normal, non-cancerous cells
KR100521526B1 (ko) 2001-07-10 2005-10-13 캐논 가부시끼가이샤 폴리하이드록시알카노에이트로 이루어진 입상 구조체 및그 제조방법
DE10144252A1 (de) 2001-08-31 2003-03-27 Fraunhofer Ges Forschung Nanopartikel mit daran immobilisiertem biologisch aktivem TNF
JP2005508162A (ja) 2001-10-02 2005-03-31 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ａｐｏ−２リガンド変異体とその使用法
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
CA2465314C (en) * 2001-11-01 2013-12-10 The Uab Research Foundation Combinations of antibodies selective for a tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor and other therapeutic agents
US7906118B2 (en) 2005-04-06 2011-03-15 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Modular method to prepare tetrameric cytokines with improved pharmacokinetics by the dock-and-lock (DNL) technology
EP2500032A1 (en) 2002-06-24 2012-09-19 Genentech, Inc. APO-2 ligand/trail variants and uses thereof
WO2004009774A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Amgen Inc. Protein conjugates with a water-soluble biocompatible, biogradable polymer
CA2497794A1 (en) 2002-09-06 2004-03-18 Bayer Pharmaceuticals Corporation Modified glp-1 receptor agonists and their pharmacological methods of use
US20050203142A1 (en) 2002-10-24 2005-09-15 Zeldis Jerome B. Methods of using and compositions comprising immunomodulatory compounds for treatment, modification and management of pain
JP2006506985A (ja) 2002-10-30 2006-03-02 ファイザー・プロダクツ・インク コンパニオンアニマルのガンを診断および治療するための方法および組成物
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
JP2007530008A (ja) 2003-05-09 2007-11-01 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ａｐｏ−２ｌレセプター結合ペプチド及びその使用
US7186699B2 (en) 2003-06-03 2007-03-06 Cell Genesys, Inc. Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes
US7795404B1 (en) 2003-08-08 2010-09-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Human soluble notch receptor ligands
GB0328261D0 (en) 2003-12-05 2004-01-07 Univ Groningen Improved cytokine design
US20110020273A1 (en) 2005-04-06 2011-01-27 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Bispecific Immunocytokine Dock-and-Lock (DNL) Complexes and Therapeutic Use Thereof
US8003111B2 (en) 2005-04-06 2011-08-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dimeric alpha interferon pegylated site-specifically shows enhanced and prolonged efficacy in vivo
US8034352B2 (en) 2005-04-06 2011-10-11 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Tetrameric cytokines with improved biological activity
WO2006107617A2 (en) 2005-04-06 2006-10-12 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
ES2246694B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Nanoparticulas pegiladas.
ZA200610134B (en) 2004-06-18 2008-06-25 Genentech Inc Use of Apo2L receptor agonists and NK cells or NK cell activators
EP1773400A2 (en) 2004-07-08 2007-04-18 Amgen Inc. Therapeutic peptides
US20060046961A1 (en) 2004-09-02 2006-03-02 Mckay William F Controlled and directed local delivery of anti-inflammatory compositions
MX2007002855A (es) 2004-09-08 2007-04-27 Genentech Inc Metodos para usar ligandos de receptor de muerte y anticuerpos cd20.
US20080182783A1 (en) 2004-10-18 2008-07-31 Novo Nordisk A/S Growth Hormone Conjugates
US8029783B2 (en) 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
US20060188498A1 (en) 2005-02-18 2006-08-24 Genentech, Inc. Methods of using death receptor agonists and EGFR inhibitors
EP1695717A1 (en) 2005-02-23 2006-08-30 Ludwig-Maximilians-Universität Transport of nano-and macromolecular structures into cytoplasm and nucleus of cells
US20060228352A1 (en) 2005-02-24 2006-10-12 Schoenberger Stephen P TRAIL and methods of modulating T cell activity and adaptive immune responses using TRAIL
US8158129B2 (en) 2005-04-06 2012-04-17 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dimeric alpha interferon PEGylated site-specifically shows enhanced and prolonged efficacy in vivo
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
EP1745802A1 (en) 2005-07-20 2007-01-24 Kreatech Biotechnology B.V. Method of conjugating therapeutic compounds to cell targeting moieties via metal complexes
JP5231231B2 (ja) 2005-10-19 2013-07-10 アイビーシー・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 複雑性が増大した生理活性アセンブリーを生成するための方法および組成物ならびに使用
GB0524316D0 (en) 2005-11-29 2006-01-04 Medical Res Council Tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligands (TRAILs)
EP2364735A3 (en) 2005-12-16 2012-04-11 Nektar Therapeutics Branched PEG conjugates of GLP-1
WO2007120368A2 (en) 2006-01-09 2007-10-25 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory combinations for vaccine adjuvants
KR100784485B1 (ko) 2006-01-18 2007-12-11 한국과학기술연구원 생분해성 온도 감응성 폴리포스파젠계 하이드로젤, 그의제조방법 및 그의 용도
CN101563104A (zh) * 2006-02-01 2009-10-21 约翰霍普金斯大学 用于肿瘤或传染性疾病免疫预防或免疫治疗的多肽-核酸结合物
WO2007102690A1 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Postech Foundation Vector including the codon-optimized dna cassette for producing secretory recombinant dodecamer trail
KR100746962B1 (ko) 2006-04-04 2007-08-07 한국과학기술연구원 온도 감응성 포스파젠계 고분자-생리 활성 물질 복합체,그의 제조방법 및 그의 용도
US9283260B2 (en) 2006-04-21 2016-03-15 Amgen Inc. Lyophilized therapeutic peptibody formulations
CN101074261A (zh) 2006-04-30 2007-11-21 北京同为时代生物技术有限公司 Trail受体1和/或trail受体2特异性抗体及其应用
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
KR100886783B1 (ko) 2006-06-12 2009-03-04 성균관대학교산학협력단 N-말단이 수식된 peg-trail 결합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
EP2044434B1 (en) 2006-06-20 2015-11-18 Genentech, Inc. Methods and materials for observing apoptosis by detecting fragments of clathrin-pathway components
DK2041576T3 (da) 2006-06-21 2011-12-05 Apogenix Gmbh Differentiel cytokinekspression i humane cancere
WO2008088582A2 (en) 2006-08-04 2008-07-24 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials related to trail isoforms
WO2008030968A2 (en) 2006-09-06 2008-03-13 Phase Bioscience, Inc. Fusion peptide therapeutic compositions
WO2009126558A1 (en) 2008-04-10 2009-10-15 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Modular method to prepare tetrameric cytokines with improved pharmacokinetics by the dock-and-lock (dnl) technology
WO2008120832A1 (en) 2007-03-30 2008-10-09 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Human neural stem cell secreting a smac, preparation method and use thereof
US8420598B2 (en) 2007-04-20 2013-04-16 B & L Delipharm Corp. Mono modified exendin with polyethylene glycol or its derivatives and uses thereof
KR100968591B1 (ko) 2007-06-14 2010-07-08 한국과학기술연구원 약물전달용 폴리포스파젠계 하이드로젤, 그의 제조방법 및그의 용도
BRPI0814645A2 (pt) 2007-07-25 2015-01-27 Alexion Pharma Inc Métodos e composições para tratar de doença autoimune.
WO2009020093A1 (ja) 2007-08-09 2009-02-12 Daiichi Sankyo Company, Limited デスドメイン含有受容体発現細胞にアポトーシスを誘導するイムノリポソーム
AU2008317383B2 (en) 2007-10-23 2013-11-14 Nektar Therapeutics Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom
BRPI0818810A2 (pt) 2007-10-31 2014-10-29 Medimmune Llc Esqueletos d polipeptídeo recombinante e multimérico, molécula de ácido n ucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, biblioteca de exibição de polipeptídeo, coleção de moléculas de ácido nucleico isolado, métodos para obter um esqueleto de polipeptídeo e pelo menos dois esqueletos, para detectar um composto em uma amostra, para capturar um composto em uma amostra, para prevenir, tratar, controlar ou melhorar uma doença, para diagnose ou formação de imagem de uma doença para purificar e produzir um esqueleto, para ensaiar ou detectar a ligação de um esqueleto a um alvo, para usar o esqueleto e para prevenir, tratar, melhora ou controlar câncer, composição estéril, isenta de pirógeno, composição farmacêutica, e, processo escalável.
GB0723059D0 (en) 2007-11-23 2008-01-02 Nat Univ Ireland Improved cytokine design
US20090203671A1 (en) 2007-11-27 2009-08-13 Abbott Laboratories Method of treating cancer
GB0724532D0 (en) 2007-12-17 2008-01-30 Nat Univ Ireland Trail variants for treating cancer
WO2009140469A2 (en) 2008-05-14 2009-11-19 Genentech, Inc. Methods of using apo2l/trail to treat cancer
US20100068302A1 (en) 2008-09-17 2010-03-18 Traslational Cancer Drugs Pharma, S.L. Methods and compositions for the treatment of cancer
JP2012504969A (ja) 2008-10-10 2012-03-01 アナフォア インコーポレイテッド Ｔｒａｉｌ−ｒ１及びｔｒａｉｌ−ｒ２に結合するポリペプチド
GB0818649D0 (en) 2008-10-10 2008-11-19 Nat Univ Ireland Treatment of proliferative disorders with trail
US20120021995A1 (en) 2008-10-10 2012-01-26 Anaphore, Inc. Polypeptides that Bind TRAIL-R1 and TRAIL-R2
MX362028B (es) 2009-02-03 2019-01-04 Amunix Pharmaceuticals Inc Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos.
CN102448494B (zh) 2009-02-13 2016-02-03 免疫医疗公司 具有胞内可裂解的键的免疫共轭物
CN101870728A (zh) 2009-04-23 2010-10-27 派格生物医药(苏州)有限公司 新型Exendin变体及其缀合物
EP2473186A4 (en) 2009-08-31 2013-07-10 Ibc Pharmaceuticals Inc BIS SPECIFIC IMMUNOZYTOKIN DOCK-AND-LOCK COMPLEXES AND THERAPEUTIC USE THEREOF
WO2011079293A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Ambrx, Inc Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand polypeptides and their uses
WO2011080314A2 (en) 2009-12-31 2011-07-07 Deutsches Krebsforschungszentrum Novel modulators of trail signalling
WO2011106707A2 (en) 2010-02-26 2011-09-01 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to dr3
EP2558495B1 (en) 2010-04-13 2019-07-17 MedImmune, LLC Trail r2-specific multimeric scaffolds
US8461311B2 (en) 2010-06-08 2013-06-11 Washington University TRAIL trimers, methods and uses therefor
KR101209266B1 (ko) 2010-06-30 2012-12-06 한국과학기술연구원 생분해성 및 온도 감응성 폴리포스파젠계 자성 고분자, 그의 제조 방법 및 용도
RS54846B1 (sr) * 2010-10-29 2016-10-31 Daiichi Sankyo Co Ltd Novo anti-dr5 antitelo
EP2468764A1 (en) 2010-12-24 2012-06-27 Rijksuniversiteit te Groningen TNF family ligand variants
EP2670426B1 (en) 2011-01-31 2017-05-10 The General Hospital Corporation Multimodal trail molecules and uses in cellular therapies
US20140105898A1 (en) 2011-02-28 2014-04-17 Istituto Di Ricovero E Cura A Carattere Scientific Materno-Infantile Burlo Garo Apoptosis-inducing molecules and uses therefor
US20140079722A1 (en) 2011-03-09 2014-03-20 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
EP3138581B1 (en) 2011-03-17 2019-01-02 The University of Birmingham Re-directed immunotherapy
US20130101553A1 (en) * 2011-04-18 2013-04-25 The Regents Of The University Of California Inducing inactivation of fibrogenic myofibroblasts
CA2832342C (en) 2011-04-29 2019-12-31 The Penn State Research Foundation Small molecule trail gene induction by normal and tumor cells as an anticancer therapy
CA2834776A1 (en) 2011-05-03 2012-11-08 Genentech, Inc. Therapeutic apo2l/trail polypeptides and death receptor agonist antibodies
FI20115640A0 (fi) 2011-06-22 2011-06-22 Turun Yliopisto Yhdistelmähoito
US8586020B2 (en) 2011-06-30 2013-11-19 Korea Institute Of Science And Technology Poly(organophosphazene) composition for biomaterials
CN103747807B (zh) 2011-07-05 2016-12-07 比奥阿赛斯技术有限公司 P97‑抗体缀合物和使用方法
CN111635462A (zh) 2011-07-06 2020-09-08 江苏靶标生物医药研究所有限公司 一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体及其应用
CN102898526A (zh) 2011-07-28 2013-01-30 山东先声麦得津生物制药有限公司 一种肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体融合蛋白及其制备和应用
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
JP6219923B2 (ja) 2012-03-28 2017-10-25 アムジェン インコーポレイテッド Ｄｒ５受容体アゴニストの組み合わせ
WO2013156054A1 (en) 2012-04-16 2013-10-24 Universität Stuttgart The igm and ige heavy chain domain 2 as covalently linked homodimerization modules for the generation of fusion proteins with dual specificity
US9862932B2 (en) 2012-07-24 2018-01-09 The General Hospital Corporation Oncolytic virus therapy for resistant tumors
US20150038511A1 (en) * 2012-08-09 2015-02-05 Celgene Corporation Treatment of immune-related and inflammatory diseases
US9605074B2 (en) 2012-08-30 2017-03-28 The General Hospital Corporation Multifunctional nanobodies for treating cancer
CA2883356A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Turun Yliopisto Method of selecting individualized brain cancer therapy
EP3345923A1 (en) 2012-09-20 2018-07-11 MorphoSys AG Treatment for rheumatoid arthritis with anti-gm-csf antibody
US20140134647A1 (en) 2012-11-01 2014-05-15 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Novel crystal structure and ligand binding sites of trail receptor
AU2012395148B2 (en) 2012-11-24 2016-10-27 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
US20150301058A1 (en) 2012-11-26 2015-10-22 Caris Science, Inc. Biomarker compositions and methods
WO2014121093A1 (en) 2013-01-31 2014-08-07 Thomas Jefferson University Fusion proteins that facilitate cancer cell destruction
US10052389B2 (en) 2013-02-13 2018-08-21 Agency For Science, Technology And Research Polymeric system for release of an active agent
CN104342444B (zh) 2013-07-23 2017-11-17 四川大学华西医院 一种重组trail蛋白及其制备方法和用途
NZ717003A (en) 2013-09-02 2019-05-31 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Novel cytotoxic agents for conjugation of drugs to cell binding molecule
WO2015037000A1 (en) 2013-09-11 2015-03-19 Compugen Ltd Vstm5 polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of cancer, infectious diseases and immune related diseases
PL222795B1 (pl) 2013-12-22 2016-09-30 Univ Warszawski Rekombinowane białko fuzyjne ProSTAT do zastosowania w leczeniu
ES2960619T3 (es) 2014-02-28 2024-03-05 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores cargados y sus usos para la conjugación
WO2015138638A1 (en) * 2014-03-11 2015-09-17 Theraly Pharmaceuticals, Inc. Long acting trail receptor agonists for treatment of autoimmune diseases
US9901620B2 (en) 2014-04-21 2018-02-27 Theraly Pharmaceuticals, Inc. Trail receptor agonists for treatment of fibrotic disease
US10975112B2 (en) 2015-06-16 2021-04-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Linkers for conjugation of cell-binding molecules

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015164217A1 (en) * 2014-04-21 2015-10-29 Theraly Pharmaceuticals Inc. Trail receptor agonists for treatment of fibrotic diseases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Gilbane et al., Arthritis Research & Therapy, 2013, 15:215*

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016371021A1 (en) 2018-08-02
CA3008392A1 (en) 2017-06-22
CN108601819A (zh) 2018-09-28
US11007251B2 (en) 2021-05-18
AU2016371021B2 (en) 2020-04-09
HK1258208A1 (zh) 2019-11-08
US20190000924A1 (en) 2019-01-03
CN108601819B (zh) 2022-03-15
EA201891434A1 (ru) 2018-12-28
WO2017106627A1 (en) 2017-06-22
KR20180095013A (ko) 2018-08-24
JP2019502687A (ja) 2019-01-31
EA038551B1 (ru) 2021-09-14
EP3389696A4 (en) 2019-08-14
JP6797203B2 (ja) 2020-12-09
CA3008392C (en) 2021-11-09
JP2020172556A (ja) 2020-10-22
EP3389696A1 (en) 2018-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106687478B (zh) 新的抗人Tie-2抗体
US9399678B2 (en) Anti-tumor necrosis factor-alpha agents and uses thereof
CN103339145A (zh) 运载体免疫球蛋白及其用途
AU2015250039B2 (en) TRAIL receptor agonists for treatment of fibrotic diseases
JP2023175822A (ja) 特異的結合分子
US9901620B2 (en) Trail receptor agonists for treatment of fibrotic disease
US20180280474A1 (en) Treatment of bile acid disorders
JP2016027801A (ja) 改良された抗血清アルブミン結合変異体
US20210246217A1 (en) Trimeric polypeptide complexes and uses thereof
KR102508649B1 (ko) 사멸 수용체 작용제로 전신성 경화증 완화
TW202313105A (zh) 與貝伐單抗的抗葉酸受體結合物組合療法
EP4302836A1 (en) Antibodies against snake toxins causing muscle and/or tissue damage
AU2022346049A1 (en) Novel wnt agonist antibodies and therapeutic uses thereof
WO2014144817A2 (en) Inhibitory polypeptides specific to wnt inhibitors
CN117651565A (zh) 抗叶酸受体偶联物与贝伐珠单抗的联合治疗

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant