KR102405458B1 - 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물, 이 화장료 조성물을 포함하는 두발용 화장품 및 화장료 조성물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 천연물인 자주개자리의 잎, 줄기 및 뿌리 중 적어도 하나로부터 추출되는 자주개자리 추출물을 포함하여, 섬유아세포 및 진피유두세포의 증식을 촉진시키고 모발 성장 관련 유전자들의 발현을 증가시킴으로써, 모발 성장을 촉진하고 탈모 방지에 우수한 효과를 나타내며, 세포 독성 및 피부 부작용이 없는, 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물, 이 화장료 조성물을 포함하는 두발용 화장품 및 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

Description

자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물, 이 화장료 조성물을 포함하는 두발용 화장품 및 화장료 조성물의 제조방법{COSMETIC COMPOSITION FOR PREVENTING HAIR LOSS AND PROMOTING HAIR GROWTH CONTAINING ALFALFA EXTRACT, HAIR COSMETIC INCLUDING THE SAME, AND METHOD OF MANUFACTURING THE SAME.}

본 발명은 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물, 이 화장료 조성물을 포함하는 두발용 화장품 및 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 천연물인 자주개자리의 잎, 줄기, 뿌리로부터 추출되는 자주개자리 추출물을 포함하여, 섬유아세포 및 진피유두세포의 증식을 촉진시키고 모발 성장 관련 유전자들의 발현을 증가시킴으로써, 모발 성장을 촉진하고 탈모 방지에 우수한 효과를 나타내도록 하고, 세포 독성 및 피부 부작용이 없도록 하는, 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물, 이 화장료 조성물을 포함하는 두발용 화장품 및 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

모발은 피부 부속 기관의 하나로 생태학적으로 상피에서 유래하며, 태생 2개월째부터 형성된다. 모발의 종류는 굵기에 따라 세모(vellus hair)와 경모(terminal hair)로 분류된다.

탈모는 정상적으로 모발이 존재해야 할 부위에 모발이 없는 상태를 말하며, 일반적으로 두피의 성모가 빠지는 것을 의미한다. 일반적으로 두피 질환이나 탈모 등은 유전적 요인, 노화의 진행, 약물 복용 등이 주된 원인이지만 최근에는 산업 발전과 함께 환경오염이 심각해지고, 사람들의 스트레스가 급증하면서 심각한 문제로 대두되고 있다.

종래의 이러한 두피 질환이나 탈모 등을 개선하기 위한 탈모 치료법으로 호르몬과 관련하여 여성 호르몬을 주재로 한 제제가 있으나, 이러한 제제는 효과가 높지 않을 뿐만 아니라 피부 염증 발생, 호르몬 투여에 의한 부작용 발생 등의 보고가 있어 현재는 사용이 중단되고 있다.

또한, 종래에 개시된 발모제로서 미녹시딜(minoxidil)과 같이 모세혈관 확장을 통해 두피에 바름으로써 탈모를 방지하거나, 피나스테라이드(finasteride)와 같이 탈모를 유발하는 남성 호르몬인 DHT(5-a dihydrotestosterone) 생성 억제 등을 통해 탈모를 방지 할 수 있다.

그러나 상기 약물은 탈모 방지를 개선하는 효과는 있으나 그에 따라 다모증, 접촉성 피부염 또는 습진 등의 부작용을 유발하는 문제점이 있다. 또한, 종래의 여러 종류의 발모제는 일반적으로 두피의 혈행 촉진과 모근의 영양공급을 목적으로 하여 모발의 성장에 도움을 주도록 하는 방법이 시도 되었으나, 역시 독성이 심하고 효과 또한 미흡한 것이 현재 실정이다.

이에 경제적이면서도 독성이 없으며, 부작용이 없는 생약 성분의 추출물을 이용하여 두피에 바르거나 복용으로 발모를 촉진하려는 연구가 활발히 진행되고 있다.

상기와 같은 이유로 탈모 방지나 발모, 발모 촉진용 조성물에 관한 종래의 특허 출원으로써, 전엽음양곽, 하늘타리, 강진향, 뱀무 및 조구 등을 포함하는 탈모방지 및 발모촉진용 조성물(대한민국특허공개 제10-2009-0076671호), 가시오가피, 송엽, 송화, 교맥, 생지황 및 지모를 함유하는 생약 추출물을 함유하는 탈모방지 조성물 (대한민국특허공개 제10-2009-0051586호), 노근, 작약, 복신, 석위, 제니, 센나엽, 자단향, 초과, 택사, 관중, 아마인, 갈화, 강황, 괄루인, 마인 및 소목 추출물을 유효성분으로 포함하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물 (대한민국특허공개 제10-2014-0015199호) 등 다수 특허출원이 존재하고 있으나, 효과가 충분히 검증되지 않았고 이에 보다 효과적이면서 부작용이 없는 두발용 화장료 조성물에 대한 요구가 필요한 실정이다.

이에 본 출원인은 탈모예방 및 발모촉진 효과가 보다 우수하면서도 천연 성분으로 부작용이 발생하지 않도록 할 수 있는 두발용 화장료 조성물의 제품 개발에 대한 검토를 하게 되었다.

대한민국특허공개 제10-2009-0076671호 대한민국특허공개 제10-2014-0015199호

본 발명은 종래의 발모제가 가지는 문제를 해소하기 위해 안출된 것으로서, 인체에 세포 독성 및 피부 부작용이 없으면서 우수한 탈모 예방 및 모발 성장 촉진 효과를 가질 수 있도록 하며, 다양한 형태의 두발용 화장품으로 용이하게 제형 할 수 있는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물, 이 화장료 조성물을 포함하는 두발용 화장품 및 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명의 일 측면은, 자주개자리 잎, 줄기 및 뿌리 중 적어도 하나로부터 추출된 추출물을 유효성분으로 포함하여 두피 도포시 모발 성장을 촉진하고 탈모를 감소시키는 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 특징에 의하면, 상기 화장료 조성물은, 건율 추출물을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 특징에 의하면, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 비율이 9:1~4:6(자주개자리 추출물:건율 추출물)일 수 있다.

본 발명의 다른 측면은, 상기의 화장료 조성물을 포함하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 두발용 화장품을 제공한다.

본 발명의 또 다른 측면은, 자주개자리 잎, 줄기 및 뿌리 중 적어도 하나를 세절하는 제1 단계; 세절된 자주개자리 조각들을 1,3-부틸렌글라이콜, 탄소수 1~4의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 중 적어도 하나 이상을 순차적으로 사용하여 40내지 90℃에서 추출하고 여과하는 제2 단계; 및 제2 단계를 거쳐 마련된 여액을 감압 농축하여 자주개자리 추출물을 얻는 제3 단계; 를 포함하고, 상기 탄소수 1~4의 알코올은, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 프로판올 또는 부탄올 중에서 선택된 적어도 1종 이상이거나 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 바람직한 특징에 의하면, 건율을 세절하는 제4 단계; 세절된 건율 조각들을 1,3-부틸렌글라이콜, 탄소수 1~4의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 중 적어도 하나 이상을 순차적으로 사용하여 40내지 90℃에서 추출하고 여과하는 제5 단계; 제5 단계를 거쳐 마련된 여액을 감압 농축하여 건율 추출물을 얻는 제6 단계; 및 자주개자리 추출물과 건율 추출물을 혼합하는 제7 단계; 를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 특징에 의하면, 상기 제4 단계는, 화장료 조성물 전체 100중량부에 대하여, 자주개자리 추출물과 건율 추출믈의 총 함량이 2 내지 8중량부일 수 있다.

본 발명의 바람직한 특징에 의하면, 상기 제7 단계에서, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합비율이 9:1~4:6(자주개자리 추출물:건율 추출물)인 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유할 수 있다.

본 발명의 일 실시 예에 따르면, 천연 성분인 자주개자리의 잎, 줄기 뿌리 중 적어도 하나로부터 추출된 자주개자리 추출물을 포함하여, 인체에 세포 독성 및 다모증, 접촉성 피부염 또는 습진 등의 피부 부작용이 없으면서도, 모낭 세포인 섬유아세포 및 진피유두세포의 증식을 촉진시키고 모발 성장 관련 유전자들의 발현을 증가시킴으로써 탈모 현상을 감소시키고 모발 성장을 촉진시키는 효과를 제공하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 이러한 화장료 조성물은 다양한 형태로 용이하게 제형 할 수 있어서, 사용 용도에 따라 두발용 화장품으로서 도포제, 연고제, 크림제, 스프레이제 또는 샴푸제 중 하나의 외용제로 용이하게 제조할 수 있다.

도 1은 인간 모유두 세포주 (human hair dermal papilla cell, HHDPC)를 이용하여 각각의 천연물 추출물과 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합물에 대한 세포 증식능을 확인한 결과이다.
도 2는 건율 추출물과 자주개자리 추출물의 바람직한 혼합 비율을 설정하기 위하여 인간 모유두 세포주를 이용하여 세포 증식능을 확인한 결과이다.
도 3은 각각 마우스를 대상으로 기존 발모 촉진제(미녹시딜)와, 자주개자리 추출물의 발모 촉진 효과를 육안으로 관찰한 결과이다.
도 4은 건율 추출물 처리군, 자주개자리 추출물 처리군 및 대조군의 조직 슬라이드를 헤마톡실린/에오신으로 염색하여 관찰한 결과이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시 예를 설명한다. 그러나, 본 발명의 실시 예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 예로 한정되는 것은 아니다.

덧붙여, 명세서 전체에서 어떤 구성 요소를 '포함'한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.

본 발명의 화장료 조성물은, 탈모 예방 및 발모 촉진 효과를 위한 것으로서, 자주개자리 추출물을 유효성분으로 포함하여 두피 도포시 모발 성장을 촉진하고 탈모를 감소시키게 된다.

자주개자리에는 사포닌(saponin), 루세르놀(lucernol), 사티볼(sativol), 쿠메스트롤(coumestrol), 포름오노네틴(formononetin), 트라이신(tricin) 등이 함유되어 있고, 건조중량으로 단백질이 21.8 내지 37.6 중량백분율, 당이 4.0 내지 9.5 중량백분율 함유되어 있다. 뿐만 아니라 자주개자리에는 비타민 A, B6, E, 칼슘, 인, 식이섬유, 지혈성의 비타민 K, 카베진이라고 불려지는 비타민 U 등도 함유되어 있다.

자주개자리 추출물(또는 알팔파 : Medicago savita)은 항암, 면역력강화, 심장기능불능, 고혈압 등에 탁월하며, 식이섬유가 많아 변비에 좋으며 콜레스테롤을 낮추는 작용을 한다. 최근에는 피토에스트로겐(phytoestrogen)의 일종인 퀘르세틴(Quercetin)과 쿠메스테롤(coumesterol)을 다량 함유하고 있는 알팔파에 대해 콜레스테롤을 낮추고 피부미용, 고혈압 개선 등의 효능으로 인해 인체에 대한 기능성이 부각되면서 이용하는 양이 점차 증가하고 있다.

상기 자주개자리 추출물은 천연물에서 추출한 성분이므로 세포 독성이 없고 피부 부작용이 없는 이점을 가진다. 또한, 상기 자주개자리 추출물은 두피의 보습을 증진시키고 모낭 세포인 섬유아세포 및 진피유두세포의 증식을 촉진시키고 모발 성장 관련 유전자들의 발현을 증가시킴으로써 우수한 탈모 방지 효과를 가지며 모발 성장을 향상시키는 효과 또한 뛰어나다.

또한, 두피를 상하게 하는 진드기나 모낭충의 번식을 억제하고 두피 표면에 쌓인 오염물질 또는 노폐물을 효과적으로 제거할 수 있고 두피의 혈액순환을 원활하게 할 수 있으므로 이러한 자주개자리 추출물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 첨가하여 피부 외용제를 제조하는 경우 발모 촉진 및 탈모 치료를 위한 두발용 화장품의 성분으로 유용하게 이용될 수 있다. 이때, 자주개자리 추출물은 바람직하게 발효하지 않고 사용한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 건율 추출물을 더 포함할 수 있다.

건율은 참나무과의 밤나무(Castanea crenata Sieb. et Zucc.)의 종피를 벗긴 씨, 즉 밤 과육인 깐밤을 의미하고, 특이한 냄새가 조금 있고 성질은 따뜻하고 맛은 달며, 엽산, 나이아신, 판토텐산, 피리독산, 리보플라빈, 티아민 등의 비타민이 함유되어 있으며 나트륨, 칼륨 등의 전해질과 칼슘, 구리, 철, 마그네슘, 망간, 인, 아연 등의 미네랄도 다량 포함하고 있다.

상기의 건율 추출물은 건위작용이 있고 세설을 멎게 하며 신장기능을 좋게 하는 효과가 있다. 또한, 건율은 지혈작용과 기관지염에도 효능이 있고 약리작용으로 항산화 작용 등이 보고되고 있다.

이때, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 비율은 9:1~4:6(자주개자리 추출물:건율 추출물)일 수 있다. 더 바람직하게 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 비율은 8:2(자주개자리 추출물:건율 추출물)일 수 있다.

이러한 건율 추출물은, 모낭 세포인 섬유아세포 및 진피유두세포의 증식을 촉진시키고 모발 성장 관련 유전자들의 발현을 증가시키며 두피에 존재하는 유해균의 생장을 억제하고 유익균의 생장을 촉진시킴으로써, 우수한 탈모 방지 효과를 가지며 모발 성장을 향상시키는 효과 또한 뛰어나므로 이를 첨가하여 피부 외용제를 제조하는 경우 발모 촉진 및 탈모 치료를 위한 두발용 화장품의 성분으로 유용하게 이용될 수 있다.

또한, 건율 추출물은 두피의 항산화 작용을 돕고 발모에 필요한 영양분을 공급하는 기능을 할 수 있다.

이때, 자주개자리 추출물와 건율 추출물의 총 함량은, 화장료 조성물 전체 100중량부에 대하여 0.5 내지 50중량부 일 수 있고, 더 바람직하게는 화장료 조성물 전체 100중량부에 대하여, 2 내지 8중량부 일 수 있다.

또한, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합 비율은 바람직하게 자주개자리 추출물:건율 추출물이 9:1~4:6의 범위의 비율로 혼합될 수 있으며, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 이때, 더 바람직하게 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합 비율은 8:2일 수 있다.

자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합 비율이 9:1~4:6(자주개자리 추출물: 건율 추출물)의 범위에서 세포 증식능이 200% 이상이고, 특히 자주개자리 추출물이 8이고 건율 추출물의 비율이 2인 경우 유두모 세포의 증식이 가장 우수하여 탈모 방지 및 발모 촉진 효과가 최대화된다.

이와 같이 구성된 화장료 조성물은 다양한 타입의 형태로 용이하게 제형 할 수 있다. 이에 사용 용도에 따라, 본 실시 예의 화장료 조성물은 도포제, 연고제, 크림제, 스프레이제 또는 샴푸제 중 하나의 외용제로 된 두발용 화장품으로 용이하게 제조할 수 있으며, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 구체적으로 상기 두발용 화장품은 예를 들어, 헤어토너, 헤어로션, 헤어크림, 헤어스프레이, 헤어무스, 헤어젤, 헤어비누, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어팩 또는 헤어트리트먼트 중에서 선택된 하나일 수 있으며, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물을 제조하는 방법에 대해 설명하면 다음과 같다.

먼저 자주개자리의 잎, 줄기 및 뿌리 중 적어도 하나를 건조하거나 또는 천연 그대로 분쇄하여 소정 크기로 세절하는 제1 단계를 진행한다.

다음으로, 세절된 자주개자리 조각들을 추출하고 여과하는 제2 단계를 진행한다. 이때, 추출 방법은 제1 단계에서 얻어진 자주개자리 조각들에 증류수, 유기용매 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매를 사용하여 40 내지 90℃에서 추출할 수 있다.

이때, 사용되는 유기용매는 1,3-부틸렌글라이콜, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 중 적어도 하나 이상일 수 있으며, 필요시 상기 유기용매의 극성에 따라 2종 이상을 순차적으로 사용할 수 있다.

또한, 상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 저급 알코올로서, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 프로판올 또는 부탄올 중에서 선택된 적어도 1종 이상이거나 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 이때, 에탄올을 사용하는 경우, 추출의 효율성을 위하여 주정 기준으로 30% 내지 50%의 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다.

다음으로, 제2 단계를 거쳐 마련된 여액을 감압 농축하여 자주개자리 추출물을 얻는 제3 단계를 진행한다.

또한, 본 실시 예의 화장료 조성물은 건율 추출물을 추가 성분으로 더 포함할 수 있다.

이를 위해, 먼저 건율을 소정 크기로 세절하는 제4 단계를 진행한다. 다음으로, 세절된 건율 조각들을 앞서 자주개자리 추출시와 유사하게 1,3 부틸렌글라이콜, 탄소수 1~4의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 중 적어도 하나 이상을 사용하여 40내지 90℃에서 추출하고 여과하는 제5 단계를 진행한다.

다음으로, 제5 단계를 거쳐 마련된 여액을 감압 농축하여 건율 추출물을 얻는 제6 단계를 진행한다.

이때, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합 비율은 바람직하게 자주개자리:건율이 9:1~4:6의 범위의 비율로 혼합될 수 있으며, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 이때, 더 바람직하게 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합 비율은 8:2일 수 있다.

이하, 다양한 실험 예를 통하여 본 발명에 대한 작용 및 효과를 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실험 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실험 예에 의해 제한되는 것은 아니다.

실험 예 1: 세포 증식능 실험

세포 증식능 실험을 위한 인간 모유두 세포(human hair dermal papilla cell, HHDPC)는 (주)Sciencell로부터 구입하여 사용하였으며, 5% FBS, 1% antibiotics를 함유하는 MSC 배지, 37℃, 5% CO₂의 배양기에서 배양하였다.

세포는 96 well plate에 1X10⁴의 세포수로 배양하였으며, 다음날 FBS를 포함하지 않은 MSC 배지에 각각의 실험 군 별로 현탁하여 처리하였다. 그리고, 24시간 배양 후 MTT 시약을 처리하여 세포 증식능을 확인하여 대조군에 대한 %로 아래 표 1과 도 1에 나타내었다.

이때, 실험 군은 5개의 군으로 구분하여 실험을 진행하였고, 실험 예 1-1은 생리식염수 처리군인 대조군(음성대조군)이고, 실험 예 1-2는 기존 발모촉진제(미녹시딜) 처리군(양성대조군)이고, 실험 예 1-3은 건율 추출물 처리군이고, 실험 예 1-4는 자주개자리 추출물 처리군이고, 실험 예 1-5는 건율 추출물과 자주개자리 추출물의 혼합물 처리군이다.

	실험 예 1-2		실험 예 1-3		실험 예 1-4		실험 예 1-5
농도(ug/ml)	평균	표준오차(SE)	평균	표준오차(SE)	평균	표준오차(SE)	평균	표준오차(SE)
0	100	0.2906	100.8	0.4359	100.8	0.4359	100.5	0.2906
6.25	155.771	5.6672	117.6667	1.453	167.48	4.8769	156.789	10.4444
12.5	190.152	0.597	155	2.8868	223.688	12.5047	219.555	8.19
25	203.8967	2.0396	177	1.5275	247.459	2.3164	260	6.29
50	240.3333	0.8819	205.6667	3.1798	279.1093	2.6598	298	5.26
100	297.4667	1.7938	231.3333	5.9255	302.2652	1.6785	315.9999	8.4

표 1과 도 1을 참조하면, 세포 증식능 실험 결과, 건율 추출물 처리군인 실험 예 1-3의 경우 유두모 세포 증식이 실험 예 1-2 보다 낮게 나타나는 것을 확인할 수 있고, 자주개자리 추출물 처리에 의한 실험 예 1-4에서 유두모 세포 증식이 실험 예 1-2 보다 증가되는 것을 확인 할 수 있었다.

그리고, 건율 추출물과 자주개자리 추출물의 혼합물 처리군인 실험 예 1-5의 경우 기존의 발모촉진제로 사용되고 있는 실험 예 1-2의 미녹시딜은 물론 자주개자리 추출물 단독 처리군인 실험 예 1-4 보다 유두모 세포 증식능이 더 뛰어난 것을 확인할 수 있으며, 이는 자주개자리 추출물과 건율 추출물이 혼합되면 유두모세포 증식능이 더욱 활성화되기 때문이다.

이때, 유두모세포 증식능을 최대화하기 위한 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 최적의 혼합비율을 설정하기 위하여, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합 비율을 1:9 ~ 9:1의 범위 내에서 다양하게 혼합한 후 각각의 시료를 유두모 세포에 25 ug/ml의 농도로 처리하여 세포 증식능을 확인하여 표 2에 나타내었다.

그 결과, 도 2에서와 같이, 자주개자리 추출물의 비율이 9:1~4:6(자주개자리 추출물: 건율 추출물)의 범위에서 세포 증식능이 200% 이상이었고, 특히 자주개자리 추출물의 비율이 8이고 건율 추출물의 비율이 2인 경우 유두모 세포의 증식이 가장 우수한 것을 확인하였다.

실험 예 2: 발모 촉진 동물 실험

본 발모 촉진 동물실험에 사용되는 실험동물은 일반적으로 발모 촉진 실험에 가장 많이 사용되는 6주령의 C57BL/6J 마우스 수컷(체중 16 내지 18g, ㈜라온바이오) 20마리를 이용하여 1주일간 사육조건에 적응시킨 후 실험에 사용하였다.

실험 개시 전까지 실험동물의 유지 밀 관리는 독립된 동물 실험실에서 최적의 조건을 유지하여 사육하였다. 이때, 실험 군은 3개의 군으로 구분하여 실험을 진행하였고, 실험 예 2-1은 생리식염수 처리군인 대조군(음성대조군)이고, 실험 예 2-2는 기존 발모촉진제(미녹시딜) 처리군(양성대조군)이고, 실험 예 2-3은 자주개자리 추출물 처리군이며, 실험동물은 각각의 실험 예 마다 5마리씩 배치하였다.

또한, 실험이 개시되기 전에 실험동물을 다이에틸에테르(dietylether)를 이용하여 마취시킨 후 등쪽 피부색이 붉은 색으로 보이는 휴지기에 체모를 클리퍼(clipper)를 이용하여 1차로 제거하였고, 2차로 제모 크림(Veet, Reckitt Benckise France)을 이용하여 남은 털을 완전히 제거하였다. 피부에 남은 제모 크림은 에탄올로 닦아내었다.

그리고, 제모된 부위에 부드러운 브러쉬를 이용하여 자주개자리 추출물, 건율 추출문, 기존 발모 촉진제로 시판되고 있는 미녹시딜 및 생리식염수를 각각 0.2 mL씩 1일 1회씩, 약 3주간 도포하였고, 발모의 정도를 육안으로 관찰하였다.

그 결과, 실험기간 동안 본 발명의 천연물 추출물이 처리된 실험 예 2-3 의 실험동물 중에 대조군인 실험 예 2-1에 비하여 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며 체중변화, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 천연물 추출물인 자주개자리 추출물과 건율 추출물이 세포 독성 및 피부 부작용을 유발하지 않는다는 것을 확인할 수 있다.

도 3에서 (a)는 실험 예 2-1의 시험동물의 실험 3주 후 사진이고, (b)는 실험 예 2-2의 실험 3주 후 사진이고, (c)는 실험 예 2-3의 실험 3주 후 사진이다.

도 3을 참조하면, 건율 추출물 또는 자주개자리 추출물 중 아무것도 처리하지 않은 실험 예 2-1(a)은 제모 한 후 24일 지나서야 자연적으로 다시 발모가 되었지만, 미녹시딜을 도포한 실험 예 2-2(b)의 경우 14일째에 발모가 시작되었고, 본 발명의 자주개자리 추출물를 도포한 실험 예 2-3(c)의 경우 실험 예 2-2 보다도 빠른 11일째 발모가 시작되어 자주개자리 추출물을 도포하였을 때 음성대조군 및 양성대조군에 비해 매우 빠르게 발모가 촉진됨을 알 수 있다.

따라서, 상기 결과로부터 본 발명에 사용되는 천연물 추출물인 자주개자리 추출물로 이루어지는 화장료 조성물이 탈모가 되는 속도를 늦추면서도 발모 속도는 빠르게 촉진하여 유의적인 모발 생장 촉진 효과를 나타내게 되고, 기존에 모발 성장 촉진제로 알려진 제품보다 우수하게 모발 성장을 촉진할 수 있음을 확인할 수 있다.

실험 예 3: 조직학적 검사

본 발명에 따른 천연물 추출물의 발모 촉진 효과를 조직학적으로 확인하기 위하여, 상기 실험 예 1과 동일한 마우스를 대상으로 등의 털을 제모한 후 대조 군인 실험 예 3-1에는 생리식염수를, 양성 실험 예 3-2로서 대조군으로는 미녹시딜 5%를, 실험군으로는 실험 예 3-3으로 건율 추출물을 실험 예 3-4로 자주개자리 추출물을 각각 1일 1회씩, 총 3주간 충분히 도포하였다. 이때, 실험동물인 마우스는 실험기간 동안 자유롭게 사료와 물을 섭취하도록 하였으며, 항온 항습의 조건에서 사육하였다.

그리고, 3주 경과 후, 실험동물을 에테르로 마취시킨 후 약물 처리 부위로부터 2X3 cm 크기의 조직을 떼어 내어 티슈텍 OCT 화합물(Tissue-Tek OCT Compound, Ted Pella, USA)로 충분히 포매한 후 즉시 -80℃로 동결하였다.

그리고, 이 조직을 통상적인 조직 처리 및 파라핀 포매 과정을 거쳐 약 6 mm 두께로 모낭의 결과 평행하게 초냉동 박절기(cryostat microtome)를 이용하여 절편하여 조직 슬라이드(slide)를 제작하였다.

조직 내 모낭의 상태 및 모낭의 활성 정도를 조사하기 위하여 상기 조직 슬라이드를 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신(eosin)으로 염색한 후 광학현미경으로 관찰하였다.

도 4는 각각 대조군인 실험 예 3-1(d), 미녹시딜 처리군인 실험 예 3-2(e) 및 천연물 추출물 처리군으로서 건율 추출물 처리군인 실험 예 3-3(f)과 자주개자리 추출물 처리군인 3-4(g)의 조직 슬라이드를 헤마톡실린/에오신으로 염색하여 관찰한 결과이다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 모든 실험군에서 헤마톡실린/에오신 염색으로 모낭의 상태가 정확히 관찰되었는데, 특히 실험 예 3-1과 비교할 때 미녹시딜을 처리한 실험 예 3-2와 본 발명의 자주개자리 추출물 처리군인 실험 예 3-4에서 뚜렷하게 모낭의 수가 증가하였고 특히 실험 예 3-4가 실험 예 3-2 보다 더 모발의 성장주기(anagen)에 해당하는 모낭의 수가 현저히 증가하였음을 확인하였다.

이하, 본 발명의 화장료 조성물을 이용한 크림제형의 화장품을 제조한 후 피부 부작용, 발모촉진효과 및 세포증식율에 대한 사항을 확인하기 위한 실험을 추가로 실시한다.

실험 예 4

아래 표 2의 분량으로 크림을 각각 조제하였다(여기서, 단위는 1 g당 포함된 mg이다.

성분	배합목적	샘플 1	샘플 2	샘플 3	샘플 4	샘플 5
자주개자리추출물	유효성분	20	40	80	40	40
건율 추출물	유효성분	-	-	-	20	40
글리세린모노스테아르산	유화제	30	30	30	30	30
폴리소르베이트 60	유화제	10	10	10	10	10
경질유동파라핀	기제	60	60	60	60	60
세탄올	기제	100	100	100	100	100
스테아르산	기제	30	30	30	30	30
글리세린	습윤제	20	20	20	20	20
보존제	보존제	2	2	2	2	2
정제수	용제	적량	적량	적량	적량	적량

본 실험에 사용되는 크림제형은, 위 조성으로, 먼저 제1 조제탱크에 정제수 및 보존제, 폴리소르베이트를 넣고 80±5℃로 가온하며 교반하고, 제2 조제탱크에 글리세린모노스테아르산, 경질유동파라핀, 세탄올, 스테아르산 및 글리세린을 넣고　80±5℃로 가온하며 교반한다.

다음으로, 제1 조제탱크 1에 제2 조제탱크 2에서 교반된 성분을 넣고 80±5℃로 30분간 유화기로 유화한 후, 제1 조제탱크의 온도를 45±5℃로 낮춘 후 기타 유효성분을 더 넣고 30분간 유화기로 유화한다.

그리고, 제1 조제탱크의 온도는 30±5℃로 냉각시키고 탈포공정을 하여 크림제형을 완성한다.

그리고, 위에 따라 제조한 크림을 제조한 후 아래 표 2의 항목으로 각각 비교해 보았다. 여기서 '-'는 빈도(현상)가 없는 경우이고, '+'는 빈도가 나타나는 경우이고, '++'는 빈도가 높게 나타나는 경우이고, '+++'은 빈도가 매우 높게 나타나는 경우를 의미한다.

테스트 항목	샘플 1	샘플 2	샘플 3	샘플 4	샘플 5
피부 부작용	-	-	-	-	-
발모촉진	+	++	++	++	+++
세포증식율	+	+	+	+	++

표 3을 참조하여 먼저 건율의 유무에 따른 영향을 알아보았다. 그 결과, 샘플 1-5에서 건율의 유무와 관계 없이 피부 부작용은 모두 나타나질 않았다.

또한, 세포증식율의 경우 건율이 추가되면 세포증식율이 더욱 증가하는 것을 볼 수 있다.

또한, 발모촉진의 경우 세포증식율과도 관계가 있는데, 자주개자리 추출물의 함량이 증가함에 따라 발모촉진 효과도 증가하게 되고, 건율 추출물을 더 포함하는 경우 발모촉진 효과가 더 증가할 뿐만 아니라 건율 추출물의 함량이 가장 많이 혼합된 샘플 5의 경우 가장 우수한 발모촉진 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다.

따라서, 자주개자리 추출물과 건율 추출물을 모두 포함하는 크림제형의 화장품이, 자주개자리 추출물만을 포함하는 크림제형의 화장품에 비해 발모촉진과 세포증식율에서 상대적으로 좋은 효과를 나타냄을 알 수 있다.

본 발명은 상술한 실시 예에 의해 한정되는 것이 아니다. 따라서, 청구 범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 당 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 형태의 치환, 변형 및 변경이 가능할 것이며, 이 또한 본 발명의 범위에 속한다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 자주개자리의 잎으로부터 추출된 자주개자리 추출물과 건율(깐밤) 추출물을 유효성분으로 포함하여 두피 도포시 모발 성장을 촉진하고 탈모를 감소시키는 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서, 자주개자리 추출물과 건율 추출물의 비율이 9:1~4:6(자주개자리 추출물:건율 추출물)인 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물.
4. 제1항 또는 제3항의 화장료 조성물을 포함하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 두발용 화장품.
5. 자주개자리의 잎을 세절하는 제1 단계;
   세절된 자주개자리 조각들을 1,3-부틸렌글라이콜, 탄소수 1~4의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 중 적어도 하나 이상을 순차적으로 사용하여 40내지 90℃에서 추출하고 여과하는 제2 단계;
   제2 단계를 거쳐 마련된 여액을 감압 농축하여 자주개자리 추출물을 얻는 제3 단계;
   건율(깐밤)을 세절하는 제4 단계;
   세절된 건율 조각들을 1,3-부틸렌글라이콜, 탄소수 1~4의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 중 적어도 하나 이상을 순차적으로 사용하여 40 내지 90℃에서 추출하고 여과하는 제5 단계;
   제5 단계를 거쳐 마련된 여액을 감압 농축하여 건율(깐밤) 추출물을 얻는 제6 단계; 및
   자주개자리 추출물과 건율 추출물을 혼합하는 제7 단계; 를 포함하고,
   상기 탄소수 1~4의 알코올은, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 프로판올 또는 부탄올 중에서 선택된 적어도 1종 이상이거나 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물의 제조방법.
6. 삭제
7. 제5항에 있어서, 상기 제7 단계에서,
   자주개자리 추출물과 건율 추출물의 혼합비율이 9:1~4:6(자주개자리 추출물:건율 추출물)인 것을 특징으로 하는 자주개자리 추출물을 함유하는 탈모예방 발모촉진 화장료 조성물의 제조방법.

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