KR102365209B1

KR102365209B1 - 세타글립틴의 염 및 그의 제조방법, 약학조성물, 용도

Info

Publication number: KR102365209B1
Application number: KR1020197037582A
Authority: KR
Inventors: 옌 하오; 런옌 장; 후이핑 판; 푸즈 장; 스지에 인; 쥐핑 딩; 치앙 위
Original assignee: 씨젠테크 (쑤저우, 차이나) 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2018-04-26
Filing date: 2018-05-29
Publication date: 2022-02-21
Also published as: US11046701B2; KR20200012904A; US20200123164A1; EP3785713A4; TW201945369A; CN108383845A; WO2019205224A1; EP3785713A1; TWI727314B; JP2020525553A; JP6950092B2; CN108383845B

Abstract

본 발명은 식 (I) 화합물의 염을 제공하고,

(I)
상기 염은 결정형 또는 무정형의 인산염이거나, 결정형 또는 무정형의 옥살산염이다. 특히, 본 발명의 인산염 결정형 B는 결정화도가 높고 흡습성이 낮으며 안정성이 우수하고, 인산염 결정형 B는 경구 생체이용률이 우수하고 장기 투약할 경우 내구성이 뛰어나며 쉽게 저혈당을 유발하지 않는 동시에 혈청 DPPIV 억제 작용이 우수하다.

Description

세타글립틴의 염 및 그의 제조방법, 약학조성물, 용도

본 출원은 2018년 4월 26일에 제출된 출원번호가 CN201810384349.8인 중국 특허출원에 대하여 우선권을 주장하며, 그 모든 내용은 인용 방식으로 본 발명에 편입하였다.

본 발명은 화학의약 분야에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 세타글립틴(cetagliptin)의 염 및 그의 제조방법, 약학조성물, 용도에 관한 것이다.

세타글립틴(cetagliptin)은 화학명칭이 (8R)-7-[(3R)-3-아미노-1-산소-4-(2,4,5-트리플루오로페닐)부틸]-5,6,7,8-테트라히드로-8-메틸-3-(트리플루오로메틸)이미다조[1,5-a]피라진((8R)-7-[(3R)-3-amino-1-oxygen-4-(2,4,5-trifluorophenyl) butyl]-5,6,7,8-tetrahydro-8-methyl-3-(trifluoromethyl)imidazo[1,5-a]pyrazine)이고, 구조식은 식 (I)과 같다.

식（I）

상기 세타글립틴의 제조방법은 CN103351391B의 실시예 1에서 도시하는 바와 같다. 세타글립틴은 당뇨병, 특히 2형 당뇨병과 같은 디펩티딜 펩티데이즈(dipeptidyl peptidase) 관련 질병을 치료 또는 예방하는 치료약물이다.

현재 유리 알칼리(free alkali) 형식의 세타글립틴은 점성이 있는 유성 물질(oily substance)이기 때문에 의약적합성(druggability)이 비교적 떨어지며 세타글립틴의 염 및 결정형이 공개된 바가 없다. 따라서 세타글립틴의 염을 개발하고 그의 결정형에 대한 연구를 진행하는 것은 의미가 상당히 크다.

본 발명은 시스템의 선별을 거쳐 종래의 세타글립틴 염에서 예기치 못한 효과가 있다는 것을 발견하였으며, 특히 제제 가공에 적합하고 약효가 우수하며 독성 부작용이 적어 중요한 약물 개발 가치가 있다는 것을 발견하였다.

본 발명의 목적은 약물 연구와 산업생산에 적합한 식 (I) 화합물의 염을 제안하는 데에 있으며, 여기에는 인산염과 옥살산염(oxalate)이 포함되며, 상기에서 제공하는 인산염은 무정형 또는 결정 형태로 두 가지 결정 형태가 있는데 본 발명에서 명명하는 인산염의 결정 형태는 각각 인산염 결정형 A와 인산염 결정형 B이다. 상기에서 제공하는 옥살산염은 무정형 또는 결정 형태로 본 발명에서 명명하는 옥살산염의 결정 형태는 옥살산염 결정형 A이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에서는 이하의 기술방안을 채택한다.

본 발명의 목적 중 하나는 식 (I) 화합물의 염을 제공하는 데에 있다.

(I)

상기 염은 결정형 또는 무정형의 인산염이거나 결정형 또는 무정형의 옥살산염이다.

나아가, 식 (I) 화합물의 염 중 식 (I) 화합물과 산의 몰비는 1:1이다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 무정형 형태는 그 X선 분말 회절상(diffraction image)이 기본적으로 도 1과 일치한다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 무정형 형태는 150℃까지 가열할 때 약 7.0%의 중량 손실이 발생하며 열중량분석도는 기본적으로 도 2에 도시하는 바와 같다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 무정형 형태는 유리전이온도가 47.6℃(중간점 온도)이며 그 시차 주사 열량분석법은 기본적으로 도 2에 도시하는 바와 같다.

나아가, 상기 염은 인산염으로 결정형 A이고, 그 X선 분말 회절상은 2theta값이 15.8°±0.2°, 17.5°±0.2°, 19.1°±0.2°, 23.3°±0.2° 지점에서 특성 피크(characteristic peak)를 갖는다.

더 나아가, 상기 X선 분말 회절상은 2theta값이 15.2°±0.2°, 20.1°±0.2°, 24.5±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

더 나아가, 상기 X선 분말 회절상은 2theta값이 7.6°±0.2°, 22.8°±0.2°, 26.8°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

구체적으로 바람직한 일측면에 있어서, 상기 X선 분말 회절상은 기본적으로 도 4와 일치한다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 결정형 A는 150℃까지 가열할 때 약 6.4%의 중량 손실이 발생하며 열중량분석도는 기본적으로 도 5에 도시하는 바와 같다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 결정형 A는 분해 전에 각각 100.9℃와 132.7℃(피크 온도)의 두 흡열 피크가 있으며 그 시차 주사 열량분석법은 기본적으로 도 5에 도시하는 바와 같다.

나아가, 상기 염은 인산염으로 결정형 B이고, 그 X선 분말 회절상은 2theta값이 15.2°±0.2°, 15.9°±0.2°, 19.2°±0.2°, 23.3°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

더 나아가, 상기 X선 분말 회절상은 2theta값이 22.9°±0.2°, 23.1°±0.2°, 26.9°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

더 나아가, 상기 X선 분말 회절상은 2theta값이 20.2°±0.2°, 20.9°±0.2°, 24.6°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

구체적으로 바람직한 일측면에 있어서, 상기 X선 분말 회절상은 기본적으로 도 7과 일치한다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 결정형 B는 150℃까지 가열할 때 약 6.1%의 중량 손실이 발생하며 열중량분석도는 기본적으로 도 8에 도시하는 바와 같다.

본 발명에서 제안하는 인산염의 결정형 B는 분해 전에 각각 103.2℃와 133.5℃(피크 온도)의 두 흡열 피크가 있으며 그 시차 주사 열량분석법은 기본적으로 도 8에 도시하는 바와 같다.

나아가, 상기 결정형 B는 일수화물이다.

나아가, 상기 염은 옥살산염으로 결정형 A이고, 그 X선 분말 회절상은 2theta값이 9.8°±0.2°, 17.3°±0.2°, 24.9°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

더 나아가, 상기 X선 분말 회절상은 2theta값이 16.7°±0.2°, 27.0°±0.2°, 29.5°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

더 나아가, 상기 X선 분말 회절상은 2theta값이 20.5°±0.2°, 21.3°±0.2°, 25.3°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는다.

구체적으로 바람직한 일측면에 있어서, 상기 X선 분말 회절상은 기본적으로 도 26과 일치한다.

본 발명에서 제안하는 옥살산염의 결정형 A는 130℃까지 가열할 때 약 7.6%의 중량 손실이 발생하며 열중량분석도는 기본적으로 도 27에 도시하는 바와 같다.

본 발명에서 제안하는 옥살산염의 결정형 A는 분해 전에 121.3℃(피크 온도)의 한 흡열 피크가 있으며 그 시차 주사 열량분석법은 기본적으로 도 27에 도시하는 바와 같다.

본 발명의 두 번째 목적은 식 (I) 화합물의 염의 제조방법을 제안하는 것으로서, 상기 식 (I) 화합물을 인산과 메틸 tert-부틸에테르(methyl tert-butyl ether)의 존재 하에서 반응시킨 후 교반 침적 또는 용매 휘발을 거쳐 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 수득한다.

본 발명의 세 번째 목적은 식 (I) 화합물의 염의 제조방법을 제안하는 것으로서, 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 이소아밀 알코올(isoamyl alcohol)과 물의 혼합용매에서 용해시킨 후 용매를 휘발시켜 결정형 A를 수득한다.

바람직하게는, 상기 혼합용매 중 상기 이소아밀 알코올과 상기 물의 체적비는 18 내지 20:1이다.

바람직하게는, 상기 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염은, 상기 식 (I) 화합물과 인산을 메틸 tert-부틸에테르의 존재 하에서 반응시킨 후 교반 침적 또는 용매 휘발을 거쳐 수득함으로써 제조한다.

본 발명의 네 번째 목적은 식 (I) 화합물의 염의 제조방법을 제안하는 것으로서, 상기 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 에탄올, 이소프로판올(isopropanol) 또는 이소아밀 알코올에서 용해시킨 후 용매를 휘발시켜 결정형 B를 수득하거나; 또는 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 이소아밀 알코올과 물의 혼합용매에서 용해시키거나, 이소프로판올과 메틸 tert-부틸에테르의 혼합용매에서 용해시킨 후 결정형 B의 결정 종자를 첨가해 결정을 유도함으로써 결정형 B를 수득한다.

바람직하게는, 20 내지 30℃에서 상기 용매를 휘발시킨다.

바람직하게는, 상기 혼합용매 중 상기 이소아밀 알코올과 상기 물의 체적비는 18 내지 20:1이고, 상기 혼합용매 중 상기 이소프로판올과 메틸 tert-부틸에테르의 체적비는 0.8 내지 1.2:1이다.

본 발명의 다섯 번째 목적은 식 (I) 화합물의 염의 제조방법을 제안하는 것으로서, 상기 식 (I) 화합물을 옥살산과 메틸 tert-부틸에테르의 존재 하에서 반응시킨 후 교반 침적 또는 용매 휘발을 거쳐 무정형의 식 (I) 화합물의 옥살산염을 수득한다.

본 발명의 여섯 번째 목적은 식 (I) 화합물의 염의 제조방법을 제안하는 것으로서, 상기 식 (I) 화합물을 옥살산과 메탄올의 존재 하에서 반응시킨 후 교반 침적 또는 용매 휘발을 거쳐 결정형 A를 수득한다.

본 발명의 일곱 번째 목적은 약학조성물을 제안하는 것으로서, 여기에는 활성성분과 약학적으로 허용 가능한 캐리어를 포함하고, 상기 활성성분은 상기 식 (I) 화합물의 염이다.

본 발명의 여덟 번째 목적은 디펩티딜 펩티데이즈(dipeptidyl peptidase) 활성을 억제하는 약물 제조용 식 (I) 화합물의 염을 제안하는 것이다.

본 발명의 아홉 번째 목적은 포유동물의 2형 당뇨병을 치료, 제어 또는 예방하는 약물 제조용 식 (I) 화합물의 염을 제안하는 것이다.

본 발명의 열 번째 목적은 포유동물의 고혈당증을 치료, 제어 또는 예방하는 약물 제조용 식 (I) 화합물의 염을 제안하는 것이다.

상기 기술방안을 실시함으로써 본 발명은 종래기술과 비교할 때 이하의 장점을 가질 수 있다.

즉, 본 발명의 발명인은 식 (I) 화합물에 대해 염을 형성하기 위한 선별과 연구를 진행하였으며 이를 통해 약물 개발에 적합한 신규한 염 유형을 발견하여 약물의 용해도를 향상시켰다.

특히, 본 발명의 인산염 결정형 B는 결정화도가 높고 흡습성이 낮으며 안정성이 우수하고, 인산염 결정형 B는 경구 생체이용률이 우수하고 장기 투약할 경우 내구성이 뛰어나며 쉽게 저혈당을 유발하지 않는 동시에 혈청 DPPIV 억제 작용이 우수하고 약물의 후속적인 개발에 선택하기에도 좋다.

도 1은 실시예 1에 있어서 무정형 인산염의 XRPD도이고;
도 2는 실시예 1에 있어서 무정형 인산염의 TGA도와 DSC도이고;
도 3은 실시예 1에 있어서 무정형 인산염의 1H NMR도이고;
도 4는 실시예 2에 있어서 인산염 결정형 A의 XRPD도이고;
도 5는 실시예 2에 있어서 인산염 결정형 A의 TGA도와 DSC도이고;
도 6은 실시예 2에 있어서 인산염 결정형 A를 50℃에서 48시간 가열한 후 인산염 결정형 B로 전환된 XRPD도이고, 여기에서 최상단의 스펙트로그램은 결정형 A를 나타내고, 중간의 스펙트로그램은 결정형 A를 50℃까지 가열한 것을 나타내고, 최하단의 스펙트로그램은 결정형 B를 나타내고;
도 7은 실시예 3에 있어서 인산염 결정형 B의 XRPD도이고;
도 8은 실시예 3에 있어서 인산염 결정형 B의 TGA도와 DSC도이고;
도 9는 실시예 3에 있어서 인산염 결정형 B의 1H NMR 특징 결과도이고;
도 10은 실시예 3에 있어서 인산염 결정형 B의 안정성의 XRPD 바이플롯(biplot)이고, 여기에서 최상단의 스펙트로그램은 40℃/75% RH, 일주일을 나타내고, 두 번째 스펙트로그램은 25℃/60% RH 일주일을 나타내고, 세 번째 스펙트로그램은 80℃, 24시간을 나타내고, 최하단 스펙트로그램은 Initial을 나타내고;
도 11은 실시예 3에 있어서 인산염 결정형 B의 DVS도이고;
도 12는 DVS 시험 전후 XRPD도이고, 여기에서 상부의 스펙트로그램은 DVS 시험 전을 나타내고, 하부의 스펙트로그램은 DVS 시험 후를 나타내고;
도 13은 실시예 6에 있어서 인산염 결정형 B의 XRPD도이고, 여기에서 상부의 스펙트럼선은 실시예 6에서 수득한 샘플이고, 하부의 스펙트럼선은 실시예 3의 샘플이고;
도 14는 실시예 7에 있어서 인산염 결정형 B의 단결정의 현미경 사진이고;
도 15는 인산염 결정형 B의 화학구조이고;
도 16은 결정형 B의 입체구조도이고;
도 17은 결정형 B의 분자구조도이고;
도 18은 결정형 B의 타원도이고;
도 19는 결정형 B 단결정의 단위세포도이고;
도 20은 결정형 B 단결정의 수소 사슬 설명도이고;
도 21은 결정형 B 단결정의 일차원 사슬형 구조도이고;
도 22는 결정형 B 단결정의 적층도이고;
도 23은 결정형 B에 따른 단결정 구조의 모의 XRPD와 실시예 7에서 제조한 결정형 B를 투사한 XRPD 비교도이고, 여기에서 상부의 스펙트럼선은 결정형 B이고, 하부의 스펙트럼선은 모의 XRPD이고;
도 24는 반사 XRPD를 이용한 3 내지 7°에서의 3시간 스캔 이미지이고;
도 25는 각 혈청 DPPIV 억제율이고, 억제율은 모두 모형 대조군과 비교한 결과(평균값±표준차, n=11)이고;
도 26은 실시예 9에 있어서 옥살산염 결정형 A의 XRPD도이고;
도 27는 실시예 9에 있어서 옥살산염 결정형 A의 TGA도와 DSC도이고;
도 28은 인산염 결정형 B가 ICR 작은 쥐 DPPIV에 미치는 영향(평균값±표준차, n=3)이고;
도 29는 DPPIV-P1을 DIO 작은 쥐에게 장기 투여한 경우 금식 상태 혈당에 미치는 영향(평균값±표준차, n=11)이고;
도 30은 DPPIV-P1을 28일간 투여한 경우 각 그룹의 금식 상태 혈당 데이터이고, 억제율은 모두 모형 대조군과 비교한 결과(평균값±표준차, n=11)이고;
도 31은 DPPIV-P1을 DIO 작은 쥐에게 장기 투여한 경우 체중에 미치는 영향(평균값±표준차, n=11)이고;
도 32는 DPPIV-P1을 28일간 투여한 경우 각 그룹의 체중 데이터(평균값±표준차, n=11)이고;
도 33은 각 그룹 혈청 유리 지방산 NEFA 데이터(평균값±표준차, n=11)이고;
도 34는 각 그룹 혈청 총콜레스테롤 TCHO 데이터(평균값±표준차, n=11)이고;
도 35는 각 그룹 혈청 트리글리세리드(triglyceride) TG 데이터(평균값±표준차, n=11)이고;
도 36은 각 그룹 혈청 인슐린(insulin) 데이터(평균값±표준차, n=11)이고; 및
도 37은 각 그룹 섭식량 데이터(평균값±표준차, n=11)이다.

이하의 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 더욱 상세하게 설명하며, 이는 본 발명의 보호범위를 제한하지 않는다. 본 발명이 속한 기술분야의 당업자는 특허청구범위 내에서 제조방법과 사용 기구를 개선할 수 있으며, 이러한 개선도 본 발명의 보호범위 내에 속하는 것으로 간주한다. 따라서 본 발명의 보호범위는 첨부한 특허청구범위를 기준으로 한다.

본 발명에서 설명하지 않은 비율은 체적비를 말한다.

본 발명에서 언급한 축약한 용어에 대한 해석은 이하와 같다. 용매의 축약은 표 1을 참고한다.

XRPD는 X선 분말 회절이고, DSC는 시차 주사 열량분석이고, TGA는 열중량분석이고, DVS는 동적 수분 흡착이고, 1H-NMR은 수소 핵자기공명 스펙트럼이고, HPLC는 고속 액체 크로마토그래피이고, IC는 이온 크로마토그래피이다.

X선 분말 회절(XRPD): XRPD 스펙트럼은 PANalytical Empyrean X선 분말 회절 분석기 상에서 채집하며 XRPD 계수는 표 2와 같다.

열중량분석(TGA)과 시차 주사 열량분석(DSC): TGA와 DSC 스펙트럼은 각각 TA Q500/5000 열중량분석기와 TAQ200/2000 시차 주사 열량분석기 상에서 채집하며, 시험 계수는 표 3을 참고한다.

동적 수분 흡착(DVS): 동적 수분 흡착(DVS) 곡선은 SMS(Surface Measurement Systems)의 DVS Intrinsic 상에서 채집한다. 25℃일 때의 상대 습도는 LiCl, Mg(NO₃)₂와 KCl의 조해(deliquescence)점을 이용해 교정한다. DVS 시험 계수는 표 4를 참고한다.

수소 핵자기공명 스펙트럼(1H NMR): 수소 핵자기공명 스펙트럼은 Bruker 400M 핵자기공명기 상에서 채집하며 DMSO-d6 용매를 사용한다.

칼피셔(Karl fischer) 수분측정(KF): 수분은 완퉁870(万通870) 칼피셔 수분측정기 상에서 측정하며, 사용하는 적정(titration) 시액은 시판되는 Sigma-aldrich의 Hydranal®-Composite 5(34805-1L-R, Batch#SZBD3330V)를 사용한다. 수분 측정기는 순수(pure water)를 사용해 교정한다. 메탄올(HPLC 레벨)은 용매로 사용한다.

고속 액체 크로마토그래피(HPLC): 고속 액체 크로마토그래피는 Agilent 1260 HPLC 상에서 채집한다. 구체적인 기구와 실험 계수는 표 5를 참고한다.

이온 크로마토그래피(IC): 이온 크로마토그래피는 ICS 1100 상에서 채집한다. 구체적인 기구와 실험 계수는 표 6을 참고한다.

본 발명 중의 식 (I) 화합물의 제조방법은 CN103351391B의 실시예 1을 참고한다.

실시예 1, 식 (1) 화합물의 인산염 무정형 형태의 제조방법:

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 메틸 tert-부틸에테르에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 인산을 첨가하고, 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반한 후 고형물을 수집하면 된다.

검출한 바에 따르면, 수득한 고형물은 인산염의 무정형 형태이고, 그 XRPD도는 도 1에서 도시하는 바와 같고, TGA도와 DSC도는 도 2에서 도시하는 바와 같고, 1H NMR도는 도 3에서 도시하는 바와 같다. XRPD 결과는 상기 고형물이 무정형이라는 것을 나타낸다. 도 2에서 TGA 결과는 상기 샘플을 150℃까지 가열했을 때 7.0%의 중량 손실이 있다는 것을 나타내며, mDSC 결과는 샘플 유리전이온도가 47.6℃(중간점 온도)라는 것을 나타낸다. 도 3에서 1H NMR(DMSO-d6) 스펙트로그램과 이하 표 7의 KF 결과(4.3%)는 상기 고형물에 잔류 용매 에테르, tert-부틸 알코올과 물이 함유돼 있다는 것을 나타낸다.

실시예 1에서 제조한 무정형 인산염의 대략적인 용해도에 대한 측정을 진행하였다. 시험 중 먼저 실시예 1에서 제조한 무정형 인산염 2mg을 3ml의 유리병에 넣은 후 각각 이하 표 8에 나열한 용매를 매회 20μl 첨가해 샘플이 완전히 용해되는지 여부를 관찰하였다. 2.0ml 용매를 첨가해도 샘플이 완전히 용해되지 않으며 시험을 중단하였다. 대략적인 용해도 결과는 표 8과 같다.

비교예 1 내지 3

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 메탄올에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 인산을 첨가하고 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반하였으나 고형물을 수득할 수 없었으며, 계속해서 실온에서 휘발시켰으나 여전히 고형물을 수득할 수 없었다.

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 아세톤에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 인산을 첨가하고 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반하였으나 고형물을 수득할 수 없었으며, 계속해서 실온에서 휘발시켰으나 여전히 고형물을 수득할 수 없었다.

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 체적비가 19:1인 이소프로판올과 물의 혼합용매에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 인산을 첨가하고 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반하였으나 고형물을 수득할 수 없었으며, 계속해서 실온에서 휘발시켰으나 여전히 고형물을 수득할 수 없었다.

실시예 2, 식 (1) 화합물의 인산염 결정형 A 제조방법:

실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 체적비가 19:1인 이소아밀 알코올과 물의 혼합용매에 용해시킨 후 용액을 천천히 휘발시켜 고형물을 수집하면 된다.

검출한 바에 따르면, 수득한 고형물은 인산염의 결정형 A이고, 그 XRPD 데이터는 이하 표 9와 같으며, 그 XRPD도는 도 4에서 도시하는 바와 같고, TGA도와 DSC도는 도 5에서 도시하는 바와 같다. XRPD는 결정화도가 높다는 것을 나타내고, TGA 결과는 150℃까지 가열할 경우 중량 손실이 6.4%라는 것을 나타내고, DSC 결과는 샘플의 분해 전 두 개의 흡열 피크가 각각 100.9℃와 132.7℃(피크 온도)라는 것을 나타낸다. 도 6에서 XRPD의 특징은 인산염 결정형 A가 50℃에서 48시간 가열하면 인산염 결정형 B로 전환된다는 것을 나타낸다.

실시예 3, 식 (1) 화합물의 인산염 결정형 B 제조방법:

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 1mL의 에탄올에 용해시킨 후 실온(25±2℃)에서 천천히 휘발시켜 고형물을 수득한다.

검출한 바에 따르면, 수득한 고형물은 인산염의 결정형 B이고, 그 XRPD 데이터는 이하 표 10과 같으며, 그 XRPD도는 도 7에서 도시하는 바와 같고, TGA도와 DSC도는 도 8에서 도시하는 바와 같고, 1H NMR 특징 결과는 도 9에서 도시하는 바와 같다. XRPD는 상기 결정형의 결정화도가 높다는 것을 나타낸다. TGA 결과는 샘플을 150℃까지 가열할 경우 중량 손실이 6.1%라는 것을 나타낸다. DSC 결과는 샘플의 분해 전 두 개의 흡열 피크가 각각 103.2℃와 133.5℃(피크 온도)라는 것을 나타낸다. 1H NMR(DMSO-d6) 스펙트로그램은 이소프로판올의 신호피크가 존재하지 않는다는 것을 나타내는데, 결정형 B 샘플이 TGA에서 가열하면 중량 손실이 발생한다는 사실과 결합해 보면 결정형 B가 수화물인 것으로 판단할 수 있다. 반복 제조한 인산염 결정형 B의 화학양론을 HPCL/IC 방법으로 측정한 결과는 유리 알칼리와 인산의 비율이 1:1이라는 것을 나타낸다.

물리적 성질 연구:

상기 실시예에서 제조한 인산염의 결정형 B를 1.5ml의 작은 병에 넣고, 작은 병을 각각 40℃/75% RH, 25℃/60% RH의 다른 조건에서 입구를 연 채 1주일간 거치하고 80℃에서 24시간 방치한다. 수득한 샘플은 각각 XRPD 테스트와 HPLC 테스트를 진행하며, 5℃에서 밀봉 거치한 샘플을 HPLC 순도 테스트의 참조 샘플(Initial)로 삼는다. 샘플은 80℃에서 24시간 거치하자 외관이 백색 고형물에서 황색 고형물로 바뀌었다. 도 10과 이하 표 11의 결과는 샘플이 일주일간 안정성 테스트에서 XRPD가 변하지 않고 결정형이 바뀌지 않았으며 순도에도 현저한 변화가 없는 것으로 나타났는데, 이는 인산염 결정형 B가 테스트 조건 하에서 우수한 물리화학적 안정성을 나타낸다는 것을 설명해 준다. 도 11의 DVS 결과는 샘플이 25℃/40% RH 내지 25℃/80% RH 구간에서 수분 흡/탈착 변화가 안정적이었다는 것을 설명해 준다. 0%RH에 상대적으로 25℃/80% RH일 때 중량 증가가 6.5%이었다. 도 12의 XRPD 결과는 인산염 결정형 B가 DVS 테스트 전후 XRPD가 일치하였고 결정형에 변화가 없다는 것을 설명해 준다.

인산염의 결정형 B의 혈장농도와 혈청 DPPIV 활성의 관계 연구:

피험 샘플과 양성 약: 실시예 3에서 제조한 인산염의 결정형 B(DPPIV-P1으로 칭함). 인산염의 결정형 B의 무게를 잰 후 취하여 일정한 농도의 용액으로 배합 제조하며 투약 체적은 10mL/kg으로 한다. 인산 시타글립틴(sitagliptin)의 무게를 잰 후 취하여 양성 대조약으로 삼고 이를 용액으로 배합 제조하며 투약 체적은 10mL/kg으로 한다.

실험 동물: CD-1(ICR) 작은 쥐, 4주령, 체중은 약 18 내지 22g

그룹 나누기와 투약 방안: 환경에 적응하도록 작은 쥐를 사육하고 실험 시작 하루 전에 체중에 따라 그룹을 나누고 하룻밤 금식시킨다. (1)음성 대조군; (2)인산 시타글립틴 3mg/kg; (3)DPPIV-P1 0.1mg/kg; (4)DPPIV-P1 0.3mg/kg; (5)DPPIV-P1 1mg/kg; (6)DPPIV P1 3mg/kg의 6그룹으로 나누어 실험하며, 별도로 한 그룹을 설정해 DPPIV의 초기 기초값을 검출하는 데 사용한다. 실험 그룹을 나눈 후 별도로 설정한 한 그룹의 혈액을 채취하고 다른 동물은 위내 투약하며 투약 체적은 10mL/kg으로 하고; 투약 후 혈액을 채취하며 나머지 동물에게는 포도당 자극을 주고; 포도당 자극 후 20분, 40분, 60분, 120분마다 각각 혈액을 채취하고 여기에서 혈장을 채취해 약물 농도와 DPPIV 활성을 검출한다. DPPIV-P1이 동물 체중에 미치는 영향을 실험하였으며 각 그룹의 체중 데이터는 표 12를 참고한다.

DPPIV-P1가 ICR 작은 쥐 혈청 DPPIV 활성에 미치는 영향에 있어서, 도 28은 DPPIV 활성 검출 결과인데 도 28에서 알 수 있듯이 DPPIV-P1은 우수한 용량영향관계(dose-effect relationship)를 가진 것으로 나타난다.

약력학-약물농도 상관성 연구: 투약 후 1시간, 1.33시간, 1.67시간, 2시간, 3시간 지점에 혈액을 채취해 혈장농도를 측정하였으며 그 결과는 표 13을 참고한다. DPPIV-P1의 약물 노출값(AUC_eff0-3h)은 용량이 늘수록 증가했으며 이는 각각 16.09ngㆍh/mL, 52.65ngㆍh/mL, 162.3ngㆍh/mL및 542.28ngㆍh/mL이었다. 동일한 용량 하에서 DPPIV-P1 3mg/kg 그룹의 약물 노출값(AUC_eff0-3h)은 인산 시타글립틴 3mg/kg의 약물 노출값(AUC_eff0-3h)보다 높았으며 이는 각각 542.28ngㆍh/mL와 369.74ngㆍh/mL이었다.

*혈장농도의 단위는 ng/mL이고, **약물 노출값은 AUC_eff0 _-3h이고, 단위는 ngㆍh/mL이다.

결론: ICR 작은 쥐의 PK/PD 실험 과정에서 선별하여 투약 1시간, 1.33시간, 1.67시간, 2시간, 3시간 후 혈액 샘플을 채집하여 화합물의 농도와 DPPIV 활성을 검출하여 약효와 혈장농도의 상관성을 1차적으로 이해하였다. 상기 모형에서 DPPIV-P1은 용량 의존적으로 DPPIV의 활성을 억제하였으며, DPPIV-P1의 약물 노출량은 투약 용량이 늘수록 증가하여 우수한 용량 의존성을 보였다. 동일한 용량 하에서 DPPIV-P1의 약물 노출값(AUC_eff0-3h)은 인산 시타글립틴의 약물 노출값(AUC_eff0-3h)보다 약간 높았으며 이는 각각 542.28ngㆍh/mL와 369.74ngㆍh/mL였다. 이는 인산 시타글립틴과 비교할 때 DPPIV-P1이 더욱 우수한 경구 생체이용률을 가지고 있다는 것을 설명해 준다.

인산염의 결정형 B 장기 투약이 DIO 작은 쥐의 혈당저하 약효에 미치는 영향 연구

피험 샘플과 양성 약: 실시예 3에서 제조한 인산염의 결정형 B(DPPIV-P1). 인산염의 결정형 B의 무게를 잰 후 취하여 일정한 농도의 용액으로 배합 제조하며 투약 체적은 10mL/kg으로 한다. 인산 시타글립틴(sitagliptin)의 무게를 잰 후 취하여 양성 대조약으로 삼고 이를 용액으로 배합 제조하며 투약 체적은 10mL/kg으로 한다.

실험동물: C57BL16 작은 쥐, 5주령, 체중은 약 13 내지 16g.

그룹 나누기와 투약 방안: 환경에 적응하도록 작은 쥐를 사육하고 각각 정상대조군과 모형군으로 나누며, 고지방 사료(Research diets，D 12492)를 먹인다. 작은 쥐의 공복 혈당이 ≥7mM이면 작은 쥐가 이미 DIO 작은 쥐가 된 것으로 간주하며, 선별하여 그룹에 넣고 혈당저하 약효 시험을 진행하고, 그룹에 넣은 DIO 작은 쥐는 혈당과 체중에 따라 나누어 무작위로 그룹을 나눈다. (1)마른 쥐 대조군; (2)모형 대조군; (3)인산 시타글립틴 30mg/kg；(4)DPPIV-P1 0.3mg/kg; (5)DPPIV-P1 3mg/kg; (6)DPPIV-P1 30mg/kg의 총 6개 그룹으로 나누어 실험한다. 실험 시작 후 동물은 매일 위내 투약을 진행하며 투약 체적은 10m1/kg로 한다. 매주 체중을 재고 공복 혈당을 측정하고; 음식물 제공량, 음식물 잔여량을 기록하고; 투약 종료 시 하룻밤 금식시켜 혈액을 채취하며 혈청을 취해 유리 지방산(NEFA), 총콜레스테롤(TCHO), 트리글리세리드(TG), 인슐린(insulin), DPPIV 활성을 측정한다.

DPPIV-P1가 DIO 작은 쥐의 혈당 레벨에 미치는 영향에 있어서, 표 14와 도 29는 실험기간 동안 혈당 모니터링 결과이며, 표 15와 도 30은 투약 28일째에 금식시킨 후의 혈당 데이터이다. 결과에 따르면, 실험 종료 시 DPPIV-P1이 용량 의존적으로 혈당 증가를 억제하였으며 억제율은 각각 14.2%, 9.9%, 18.5%였으며, 모형대조군과 비교할 때 현저하거나 상당히 현저한 차이(p<0.05 또는 0.01)를 가진 것으로 나타났다.

표에서 모형 대조군과의 비교 중 *는 p＜0.05를, **는 p＜0.01을 나타낸다.

DPPIV-P1가 DIO 작은 쥐 체중에 미치는 영향에 있어서, 도 31과 표 16은 실험기간 동안 체중 검출 결과이며, 도 32와 표 17은 투약 28일째의 체중이다. 투약 28일째의 체중은 투약 시작 시의 체중과 현저한 차이가 없었다.

DPPIV-P1가 DIO 작은 쥐 관련 대사 계수에 미치는 영향에 있어서, 실험 종료 시 하룻밤 금식(16시간)시킨 후 혈청을 채취하고 유리 지방산(NEFA), 총콜레스테롤(TCHO), 트리글리세리드(TG), 인슐린(insulin), DPPIV 활성을 측정한다. 도 33, 도 34, 도 35, 도 36, 도 37은 각각 NEFA, TCHO, TG, insulin과 섭식량의 데이터 통계이며, 상기 데이터는 다음 결과를 나타낸다. 즉, 장기 투약 종료 시 모형 대조군과 비교할 때 인산 시타글립틴-30군과 DPPIV-P1-30군의 총콜레스테롤(TCHO)은 각각 25.4%(P<0.01)와 18.4%(P<0.01)로 감소했고; 인산 시타글립틴-30군과 DPPIV-P1-0.3군의 인슐린(insulin)은 각각 58.3%와 28.3%로 감소했으며(그러나 모형 대조군에 비해 현저한 차이는 없음), 기타 대사 데이터는 모두 현저한 차이가 없었다. 표 18은 각 대사 계수의 데이터를 정리한 표이다.

**p<0.01vs 모형 대조군

DPPIV-P1이 DIO 작은 쥐 DPPIV 활성에 미치는 영향에 있어서, 도 25는 약물이 각 그룹 혈청 DPPIV 억제에 미치는 결과인데, DPPIV-P1의 DPPIV 억제에 대한 효과는 용량 의존성을 나타냈고, DPPIV-P1-0.3, DPPIV-P1-3와 DPPIV-P1-30의 억제율은 각각 47.1%, 82.7%와 95.3%이었으며, 모형 대조군과 비교할 때 상당히 현저한 차이(p<0.01)를 나타냈다. 인산 시타글립틴-30의 억제율은 66.4%였으며 그 결과는 혈당의 억제율에 기본적으로 부합하였다.

결론: 음식 유도형 당뇨병을 가진 DIO 작은 쥐에게 장기간 투약한 결과 DPPIV-P1의 작용이 관찰되었다. 결과에 따르면, DPPIV-P1을 장기간 투약한 후 동물의 금식 혈당에 현저한 영향이 없었으며 그 결과는 양성 약물 인산 시타글립틴과 일치하였는데, 이러한 약물이 식전 저혈당을 쉽게 유발하지 않는다는 것을 설명해 준다.

DPPIV-P1을 장기간 경구투여한 경우 동물 체중, 섭식량, 혈청 유리 지방산, 트리글리세리드 등 지표에 현저한 영향이 없었으며 동물의 정상적인 지질대사에 영향을 미치지 않았다. 그러나 DPPIV-P1과 양성 약물 인산 시타글립틴은 모두 혈청 인슐린의 레벨을 떨어뜨릴 수 있으며, 양자는 각기 다른 용량 하에서 떨어뜨리는 정도가 비슷한데, 이는 약물이 혈당을 저하시켜 인슐린 분비 부족을 유발하는 것과의 관련이 있다.

DPPIV-P1을 장기간 투약한 후, 혈청 DPPIV에 대한 억제작용이 인산 시타글립틴보다 현저하게 강하였으며, 이는 3mg/kg 용량이 인산 시타글립틴의 30mg/kg 용량과 비슷하였다.

상기 내용을 종합하면, DPPIV-P1 장기 투약은 우수한 내구성이 있으며 저혈당을 쉽게 유발하지 않는 동시에 인산 시타글립틴보다 더욱 강한 혈청 DPPIV 억제 작용을 나타낸다.

실시예 4, 식 (1) 화합물의 인산염 결정형 B 제조방법:

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 이소프로판올에 용해시켜 포화 용액을 만든 후 실온(25±2℃)에서 천천히 휘발시켜 고형물을 수득한다. 검출한 바에 따르면 수득한 고형물은 인산염의 결정형 B이다.

실시예 5, 식 (1) 화합물의 인산염 결정형 B 제조방법:

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 0.3mL의 이소아밀 알코올에 용해시킨 후 실온(25±2℃)에서 천천히 휘발시켜 고형물을 수득한다. 검출한 바에 따르면 수득한 고형물은 인산염의 결정형 B이다.

실시예 6, 식 (1) 화합물의 인산염 결정형 B 제조방법:

1. 150mg의 실시예 1에서 제조한 무정형 인산염을 취하여 20mL 유리병에 넣는다.

2. 4mL의 이소아밀 알코올/물(19/1，v/v) 혼합용액을 첨가하고 교반하여 용해시킨다.

3. 상기 작은 병 안에 5mg의 실시예 3에서 제조한 인산염 결정형 B 결정 종자를 첨가한다.

4. 실온에서 18시간 동안 전자기 교반(500rpm)을 진행한 후 샘플을 취하여 분석하며, XRPD 결과는 인산염 결정형 B를 수득하였다는 것을 나타내며, 그 XRPD도는 도 13에서 도시하는 바와 같다.

실시예 7

2. 4mL의 이소프로판올/메틸 tert-부틸에테르(1/1, v/v) 혼합용액을 첨가하고 교반하여 용해시킨다.

4. 실온에서 천천히 휘발시켜 인산염 결정형 B의 단결정을 수득한다.

도 14는 인산염 결정형 B 단결정의 현미경 사진을 도시한 것이다.

인산염 결정형 B의 침상(needle-like) 단결정을 선택하여 단결정 회절 데이터 수집을 진행하여 단결정 구조를 성공적으로 해석하였다. 이하 표 19는 단결정 구조와 구조 수정 데이터를 나열한 것이다. 도 15는 결정형 B의 화학 구조이다. 도 16, 도 17, 도 18은 각각 결정형 B의 입체 구조도, 분자 구조도 및 타원도를 도시한 것이다. 단결정 구조 해석은 결정형 B의 화학 구조를 확정하며, 상기 구조 중 유리 알칼리, 인산염과 물분자의 몰비는 1:1:1이다. 단결정 구조도 결정형 B의 키랄탄소(chiral carbon) C8(R)와 C14(R)의 절대배열을 확인해 주었다. 결정형 B 구조에 있어서, O6와 O6’는 동일한 물분자의 무질서이고, 상기 물분자는 열진동이 비교적 크기 때문에 O6와 O6’ 위치에서 출현하는 확율이 모두 50%이다. 도 19는 결정형 B 단결정의 단위세포도를 도시한 것이다. 결정체의 기본 구조 단위에 있어서, 총 6개의 결정형 B 기본 단위가 있는데, 이는 바로 6개의 유리 알칼리, 6개의 인산염, 6개의 물분자이다. 도 20은 결정형 B 단결정의 수소 사슬 설명도를 도시한 것이다. 결정형 B 구조에 있어서, 각 유리 알칼리 중의 아미노기와 이웃하는 2개의 유리 알칼리는 N-H…F 수소 사슬을 통해 연결되며, c축 방향에서 연장되어 1차원 사슬 형상 구조를 형성한다. 인산염은 N-H…O 수소 사슬을 통해 이러한 1차원 사슬을 결합하여 c축 방향의 1차원 공동 구조를 형성하며, 물분자는 O-H…O 수소 사슬을 통해 인산염과 결합한 후 유리 알칼리와 인산염이 공동으로 형성하는 1차원 공동을 채우는데 이는 도 21에서 도시하는 바와 같다. 도 22는 결정형 B 단결정의 적층도를 도시한 것이다. 도 23은 결정형 B에 따른 단결정 구조의 모의 XRPD와 실시예 7에서 제조한 결정형 B를 투사한 XRPD 비교도를 도시한 것인데, 도면에서 알 수 있듯이 단결정 구조 모의 XRPD와 결정형 B의 XRPD도는 기본적으로 일치하며, 모의 도면 중의 2Theta가 4.38도일 때의 회절 피크는 XRPD도에서 현저하게 투사되지 않았는데(도 24는 반사 XRPD를 이용한 3 내지 7°에서의 3시간 스캔 이미지로, 회절 피크를 볼 수 있음), 방위배열 때문일 수 있다.

단결정 샘플의 현미경 사진은 상하이처웨이(上海測維) 입체현미경 PXS9-T를 사용해 실온에서 촬영한다. 단결정 회절 데이터는 Bruker D8 ADVANCE 단결정 회절기(Mo Kα, λ = 0.71073 Å)를 사용해 290(2) K에서 채집한다. 결정체 구조는 직접법(SHELXTL와 OLEX2)을 통해 석출한 후 푸리에(Fourier) 합성법을 이용해 모든 비수소 원자의 좌표를 확정하였고, 이어서 전체 매트릭스 최소자승법(full matrix leastsquares method)을 이용해 모든 비수소 원자에 대해 이방성 온도 인자 수정을 진행한다. 구조도는 Diamond를 이용해 생성하고, 단위세포도와 이론 모의 XRPD도는 Mercury를 이용해 생성한다. XRPD 데이터를 PANalytical Empyrean X선 분말 회절기 상에 투사하여 채집한다. XRPD 데이터를 Xpert 3 X선 분말 회절기 상에 반사하여 채집한다.

비교예 4

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 1.5mL의 작은 병에 넣고, 각각 0.2 내지 0.5mL의 이하 표에서 언급한 용매를 첨가해 부유액을 수득하고, 실온 조건에서 3일 동안 전자기 교반을 진행하며 원심분리를 거쳐 고형물을 수득한 후 XRPD 테스트를 진행하였다. 결과는 이하 표 20과 같으며 여기에서 N/A는 고형물을 수득하지 못하였다는 것을 의미한다. 또한, 본 발명은 5℃와 50℃에서 각각 현탁 교반 실험을 진행하였으나 모두 결정형을 수득하지 못하였다.

비교예 5

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 각각 MeOH, IPAc, ACN, Acetone, 2-Butanone, THF, 2-MeTHF, 1,4-Dioxane, H₂O, Acetic acid, MeOH/EtOAc(1/1), Acetone/IPAc(1/1), Acetone/DCM(1/1), EtOH/CHCl₃(1/1), IPA/Heptane(1/1), THF/Toluene(1/1), MeOH/CHCl₃(5/1), MeOH/Heptane(5/1)에 용해시켜 맑은 용액을 수득한 후 실온(25±2℃)에서 천천히 휘발시켰으나 모두 고형물을 수득하지 못하였다.

비교예 6

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 각각 MeOH, EtOH, IPAc, ACN, Acetone, 2-Butanone, THF, 2-MeTHF, 1,4-Dioxane, H₂O, Acetic acid, MeOH/EtOAc(1/1), Acetone/IPAc(1/1), Acetone/DCM(1/1), EtOH/CHCl₃(1/1), IPA/Heptane(1/1), THF/Toluene(1/1), MeOH/CHCl₃(5/1), MeOH/Heptane(5/1)에 용해시켜 맑은 용액을 수득한 후 실온 또는 5℃에서 천천히 휘발시켰으나 모두 고형물을 수득하지 못하였다.

비교예 7

15mg의 실시예 1에서 제조한 무정형의 식 (I) 화합물의 인삼염을 3mL 작은 병에 담고 각각 이하 표에서 언급한 양용매를 첨가해 맑은 용액을 수득하고, 유리병을 열어 4mL의 대응하는 반용매(이하 표 21 참고)가 담긴 20mL 유리병 내에 거치하여 밀봉한 후 실온 조건에서 5일간 방치하였으며 결과는 표 21과 같고 모두 고형물을 수득하지 못하였다.

본 발명은 다양한 용매의 기체-고체 삼투 실험, 반용매 첨가 시험, 반반용매 첨가 시험, 서냉(slowly cooling) 시험, 폴리머 유도 시험, 이온 액체 유도 시험, 습식 연마 시험, 완속 석출 시험을 진행하였으나 모두 결정형을 수득하지 못하였다.

실시예 8, 식 (1) 화합물의 옥살산염 무정형 형태의 제조방법:

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 메틸 tert-부틸에테르에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 옥살산을 첨가하고, 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반한 후 고형물을 수집하면 된다. 검출한 결과, 수득한 고형물은 옥살산염의 무정형 형태였다.

실시예 9, 식 (1) 화합물의 옥살산염 결정형 A 제조방법:

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 메탄올에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 옥살산을 첨가하고, 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반한 후 고형물을 수집하면 된다.

검출한 바에 따르면, 수득한 고형물은 옥살산염의 결정형 A이고, 그 X선 분말 회절 데이터는 이하 표 22와 같으며, 그 XRPD도는 도 26에서 도시하는 바와 같고, TGA도와 DSC도는 도 27에서 도시하는 바와 같다. XRPD는 결정화도가 높다는 것을 나타내고, TGA 결과는 130℃까지 가열할 경우 중량 손실이 7.6%라는 것을 나타내고, DSC 결과는 샘플의 분해 전 하나의 흡열 피크가 121.3℃(피크 온도)라는 것을 나타낸다.

비교예 8

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 메틸 tert-부틸에테르에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 니코틴산(nicotinic acid)을 첨가하고 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반하였으나 고형물을 수득할 수 없었으며, 계속해서 실온에서 휘발시켰으나 여전히 고형물을 수득할 수 없었다.

비교예 9

20mg의 식 (I) 화합물을 0.5mL의 메탄올에 용해시킨 후 식 (I) 화합물과 몰비가 같은 니코틴산을 첨가하고 실온(25±2℃)에서 12시간 동안 교반하였으나 고형물을 수득할 수 없었으며, 계속해서 실온에서 휘발시켰으나 여전히 고형물을 수득할 수 없었다.

상기 실시예는 본 발명의 기술적 구상과 특징을 설명하기 위한 것으로서 본 발명이 속한 기술분야의 당업자가 본 발명의 내용을 이해하고 실시할 수 있도록 돕는 데에 그 목적이 있으므로 상기 내용은 본 발명의 보호범위를 제한하지 않는다.

Claims

식 (I) 화합물의 염에 있어서,

(I)
상기 염은 결정형의 인산염이고;
상기 염은 인산염 결정형 B이고, 그 X선 분말 회절상은 2theta값이 15.2°±0.2°, 15.9°±0.2°, 19.2°±0.2°, 23.3°±0.2° 지점에서 특성 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염.
삭제
제1항에 있어서,
상기 인산염 결정형 B의 X선 분말 회절상은 2theta값이 22.9°±0.2°, 23.1°±0.2°, 26.9°±0.2° 지점에서 특성 피크를 더 갖는 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염.
제3항에 있어서,
상기 인산염 결정형 B의 X선 분말 회절상은 2theta값이 20.2°±0.2°, 20.9°±0.2°, 24.6°±0.2° 지점에서 특성 피크를 더 갖는 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염.
제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 인산염 결정형 B의 X선 분말 회절상이 도 7과 일치하는 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염:
[도 7]

.
제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 인산염 결정형 B가 일수화물인 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염.
인산염 결정형 B의 제조방법은, 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 에탄올, 이소프로판올 또는 이소아밀 알코올에서 용해시킨 후, 용매를 휘발시켜 결정형 B를 수득하는 단계; 또는, 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 이소아밀 알코올과 물의 혼합용매에 용해시키거나, 또는 이소프로판올과 메틸 tert-부틸에테르의 혼합용매에 용해시킨 후, 결정형 B의 결정 종자를 첨가해 결정을 유도함으로써 인산염 결정형 B를 수득하는 단계를 포함하고;
상기 무정형의 식 (I) 화합물 인산염의 제조방법은, 상기 식 (I) 화합물과 인산을 메틸 tert-부틸에테르의 존재 하에서 반응시킨 후, 교반 침적 또는 용매 휘발을 거쳐 무정형의 식 (I) 화합물의 인산염을 수득하는 것을 특징으로 하는 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 식 (I) 화합물의 염의 제조방법.
제7항에 있어서,
상기 인산염 결정형 B 제조 시 채택하는 상기 혼합용매 중 상기 이소아밀 알코올과 상기 물의 체적비는 18 내지 20:1이고; 상기 혼합용매 중 상기 이소프로판올과 메틸 tert-부틸에테르의 체적비는 0.8 내지 1.2:1인 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염의 제조방법.
제7항에 있어서,
상기 인산염 결정형 B 제조 시 20 내지 30℃에서 상기 용매를 휘발시키는 것을 특징으로 하는 식 (I) 화합물의 염의 제조방법.
포유동물 당뇨병을 치료, 제어 또는 예방하는 데 사용하는 약학 조성물에 있어서,
활성성분과 약학적으로 허용 가능한 캐리어를 포함하고, 여기에서 상기 활성성분이 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 식 (I) 화합물의 염인 것을 특징으로 하는 포유동물 당뇨병을 치료, 제어 또는 예방하는 데 사용하는 약학조성물.
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