TWI727314B - 盛格列汀的鹽、其製備方法與用途以及藥物組合物 - Google Patents

Abstract

一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽。所述鹽為結晶形式或無定形的磷酸鹽，或者是結晶形式或無定形的草酸鹽。本發明的發明人對由式（Ⅰ）表示的化合物進行了成鹽篩選和研究，找到了適於藥物開發的新的鹽型，提高了藥物的溶解度。特別是，本發明的磷酸鹽的晶型B具有高結晶度、低吸濕性和良好的穩定性，並且，磷酸鹽的晶型B的口服生物利用度好，長期給藥具有良好的耐受性，不易誘發低血糖，同時血清DPPIV抑制作用好，為藥物的後續開發提供了更好的選擇。

Description

盛格列汀的鹽、其製備方法與用途以及藥物組合物

本發明涉及化學醫藥領域，特別是涉及一種盛格列汀（Cetagliptin）的鹽、其製備方法與用途以及藥物組合物。

盛格列汀，化學名稱為（8R）-7-[（3R）-3-氨基-1-氧-4-（2，4，5-三氟苯基）丁基]-5,6,7,8-四氫-8-甲基-3-（三氟甲基）咪唑並[1,5-a]吡嗪，結構式如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。

盛格列汀的製備方法參見CN103351391B的實施例1。盛格列汀是一種用於治療或預防與二肽基肽酶有關的疾病的治療藥物，例如糖尿病，特別是Ⅱ型糖尿病。

目前，游離鹼形式的盛格列汀為黏稠油狀物，成藥性較差且尚未有盛格列汀的鹽以及晶型的報導。因此，開發盛格列汀的鹽並對其晶型進行研究意義重大。

本發明經過系統的篩選，發現有的鹽具有意想不到的效果，特別適合製劑加工，且藥效好，毒副作用小，具有重要的藥物開發價值。

本發明的目的是提供一種適於藥物研究和工業化生產的由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽，包括磷酸鹽和草酸鹽。所提供的磷酸鹽為無定形或結晶形式，且有兩種晶型，本發明中命名磷酸鹽的結晶形式分別為磷酸鹽晶型A和磷酸鹽晶型B；所提供的草酸鹽為無定形或結晶形式，本發明中命名草酸鹽的結晶形式為草酸鹽晶型A。

為實現上述目的，本發明採取如下技術方案。

本發明的一個目的是提供一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽，

（Ⅰ）。

所述的鹽為結晶形式或無定形的磷酸鹽，或者是結晶形式或無定形的草酸鹽。

進一步地，由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽中由式（Ⅰ）表示的化合物與酸的莫耳比為1:1。

本發明提供的磷酸鹽的無定形形式，其X射線粉末衍射圖基本上與圖1一致。

本發明提供的磷酸鹽的無定形形式，在加熱至150℃時，有約7.0%的失重，其熱重分析圖基本如圖2所示。

本發明提供的磷酸鹽的無定形形式，玻璃體態轉化溫度在47.6 ºC（中間點溫度），其差示掃描量熱分析圖基本如圖2所示。

進一步地，所述的鹽為磷酸鹽且為晶型A，其X射線粉末衍射圖在2θ值為15.8°±0.2°、17.5°±0.2°、19.1°±0.2°、23.3°±0.2°處具有特徵峰。

更進一步地，其X射線粉末衍射圖在2θ值為15.2°±0.2°、20.1°±0.2°、24.5±0.2°處具有特徵峰。

再進一步地，其X射線粉末衍射圖在2θ值為7.6°±0.2°、22.8°±0.2°、26.8°±0.2°處具有特徵峰。

根據一個具體且優選方面，其X射線粉末衍射圖基本上與圖4一致。

進一步地，所述的晶型B為水合物。

本發明提供的磷酸鹽的晶型A，在加熱至150℃時，有約6.4%的失重，其熱重分析圖基本如圖5所示。

本發明提供的磷酸鹽的晶型A，在分解前有兩個吸熱峰分別為100.9 ºC和132.7 ºC（峰值溫度），其差示掃描量熱分析圖基本如圖5所示。

進一步地，所述的鹽為磷酸鹽且為晶型B，其X射線粉末衍射圖在2θ值為15.2°±0.2°、15.9°±0.2°、19.2°±0.2°、23.3°±0.2°處具有特徵峰。

更進一步地，其X射線粉末衍射圖在2θ值為22.9°±0.2°、23.1°±0.2°、26.9°±0.2°處具有特徵峰。

再進一步地，其X射線粉末衍射圖在2θ值為20.2°±0.2°、20.9°±0.2°、24.6°±0.2°處具有特徵峰。

根據一個具體且優選方面，其X射線粉末衍射圖基本上與圖7一致。

本發明提供的磷酸鹽的晶型B，在加熱至150℃時，有約6.1%的失重，其熱重分析圖基本如圖8所示。

本發明提供的磷酸鹽的晶型B，在分解前有兩個吸熱峰分別為103.2 ºC和133.5 ºC（峰值溫度），其差示掃描量熱分析圖基本如圖8所示。

進一步地，所述的鹽為草酸鹽且為晶型A，其X射線粉末衍射圖在2θ值為9.8°±0.2°、17.3°±0.2°、24.9°±0.2°處具有特徵峰。

更進一步地，其X射線粉末衍射圖在2θ值為16.7°±0.2°、27.0°±0.2°、29.5°±0.2°處具有特徵峰。

再進一步地，其X射線粉末衍射圖在2θ值為20.5°±0.2°、21.3°±0.2°、25.3°±0.2°處具有特徵峰。

根據一個具體且優選方面，其X射線粉末衍射圖基本上與圖26一致。

本發明提供的草酸鹽的晶型A，在加熱至130℃時，有約7.6%的失重，其熱重分析圖基本如圖27所示。

本發明提供的草酸鹽的晶型A，在分解前有一個吸熱峰為121.3 ºC（峰值溫度），其差示掃描量熱分析圖基本如圖27所示。

本發明的第二個目的是提供一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽的製備方法。使所述由式（Ⅰ）表示的化合物與磷酸在甲基第三丁基醚的存在下反應，然後經攪拌沉澱或溶劑揮發得到無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽。

本發明的第三個目的是提供一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽的製備方法。將無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在異戊醇和水的混合溶劑中，然後經溶劑揮發得到晶型A。

優選地，所述的混合溶劑中所述異戊醇和所述水的體積比為18：1至20：1。

優選地，所述的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽通過如下方法製得：使所述的由式（Ⅰ）表示的化合物與磷酸在甲基第三丁基醚的存在下反應，然後經攪拌沉澱或溶劑揮發得到。

本發明的第四個目的是提供一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽的製備方法。將無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在乙醇、異丙醇或異戊醇中，然後經溶劑揮發得到晶型B；或者，將無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在異戊醇和水的混合溶劑，或者異丙醇和甲基第三丁基醚的混合溶劑中，然後加入晶型B的晶種進行誘導結晶製得晶型B。

優選地，在20至30℃下進行所述的溶劑揮發。

優選地，所述的混合溶劑中所述的異戊醇和所述的水的體積比為18：1至20：1；所述的混合溶劑中所述的異丙醇和甲基第三丁基醚的體積比為0.8：1至1.2：1。

優選地，所述的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽通過如下方法製得：使所述的由式（Ⅰ）表示的化合物與磷酸在甲基第三丁基醚的存在下反應，然後經攪拌沉澱或溶劑揮發得到。

本發明的第五個目的是提供一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽的製備方法。使所述的由式（Ⅰ）表示的化合物與草酸在甲基第三丁基醚的存在下反應，然後經攪拌沉澱或溶劑揮發得到無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的草酸鹽。

本發明的第六個目的是提供一種由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽的製備方法。使所述的由式（Ⅰ）表示的化合物與草酸在甲醇的存在下反應，然後經攪拌沉澱或溶劑揮發得到晶型A。

本發明的第七個目的是提供一種藥物組合物，包括活性成分和藥學上可接受的載體，所述的活性成分為所述的由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽。

本發明的第八個目的是提供所述的由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽在製備用於抑制二肽基肽酶活性的藥物中的用途。

本發明的第九個目的是提供所述的由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽在製備用於治療、控制或預防哺乳動物中Ⅱ型糖尿病藥物中的用途。

本發明的第十個目的是提供所述的由式（Ⅰ）表示的化合物的鹽在製備用於治療、控制或預防哺乳動物中高血糖症藥物中的用途。

由於以上技術方案的實施，本發明與現有技術相比具有如下優點。

本發明的發明人對由式（Ⅰ）表示的化合物進行了成鹽篩選和研究，找到了適於藥物開發的新的鹽型，提高了藥物的溶解度。

特別是，本發明的磷酸鹽晶型B，具有高結晶度、低吸濕性和良好的穩定性，並且，磷酸鹽晶型B的口服生物利用度好，長期給藥具有良好的耐受性，不易誘發低血糖，同時血清DPPIV抑制作用好，為藥物的後續開發提供了更好的選擇。

以下將通過具體實施例進一步闡述本發明，但並不用於限制本發明的保護範圍。本領域技術人員可在申請專利範圍內對製備方法和使用儀器作出改進，這些改進也應視為本發明的保護範圍。因此，本發明專利的保護範圍應以所附申請專利範圍為準。

本發明中未說明的比例為體積比。

本發明中所用到的縮寫的解釋如下： 溶劑的縮寫見表1；XRPD：X射線粉末衍射；DSC：差示掃描量熱分析；TGA：熱重分析；DVS：動態水分吸附；1H-NMR：氫譜液態核磁；HPLC：高效液相色譜；IC：離子色譜。 表1

X射線粉末衍射（XRPD）：XRPD圖譜在PANalytical Empyrean X射線粉末衍射分析儀上採集，XRPD參數如下表2。 表2

熱重分析（TGA）和差示掃描量熱（DSC）：TGA和DSC圖譜分別在TA Q500/5000熱重分析儀和TA Q200/2000差示掃描量熱儀上採集，試驗參數如下表3。 表3

動態水分吸附（DVS）：動態水分吸附（DVS）曲線在SMS（Surface Measurement Systems）的DVS Intrinsic上採集。在25 ºC時的相對濕度用LiCl，Mg(NO₃ )₂ 和KCl的潮解點校正。DVS測試參數如下表4。 表4

氫譜液態核磁（1H NMR）：氫譜液態核磁譜圖在Bruker 400M核磁共振儀上採集，使用DMSO-d6為溶劑。

卡爾費休水分測定（KF）：水分測試在萬通870卡氏水分測定儀上進行，使用的滴定試液為市售Sigma-aldrich的HydranalR-Composite 5（34805-1L-R, Batch#SZBD3330V）。水分測定儀用純水進行校正。甲醇（HPLC級）作為溶劑使用。

高效液相色譜（HPLC）：高效液相色譜在Agilent 1260 HPLC上採集。具體儀器和實驗參數見下表5。 表5

離子色譜（IC）：離子色譜在ICS 1100上採集。具體的儀器和實驗參數見下表6。 表6

本發明中的由式（Ⅰ）表示的化合物的製備方法參見CN103351391B的實施例1。

實施例1、由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽無定形形式的製備方法：將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的甲基第三丁基醚中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的磷酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，收集固體即可得到。

經檢測，所得固體為磷酸鹽的無定形形式，其XRPD圖如圖1，TGA圖和DSC圖如圖2，1H NMR圖如圖3。XRPD結果表明該固體是無定形。圖2中TGA結果顯示該樣品加熱至150 ºC時有7.0%的失重，mDSC結果顯示樣品玻璃體態轉化溫度在47.6 ºC（中間點溫度）。圖3中1H NMR（DMSO-d6）譜圖和下表7的KF結果（4.3%） 顯示該固體含有殘留溶劑乙醚、第三丁醇和水。 表7

對實施例1製得的無定形形式的磷酸鹽的粗略溶解度進行測定，試驗中先稱取約2毫克實施例1製得的無定形形式的磷酸鹽至3毫升的玻璃瓶中，然後分別加入下表8中所列的溶劑，每次加入20微升，並觀察樣品是否完全溶解。若加入2毫升溶劑後，樣品仍不完全溶解，則停止試驗。粗略溶解度結果見下表8。 表8

對比例1至對比例3

將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的甲醇中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的磷酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，未得到固體，繼續室溫揮發，仍未得到固體。

將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的丙酮中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的磷酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，未得到固體，繼續室溫揮發，仍未得到固體。

將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的體積比為19:1的異丙醇和水的混合溶劑中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的磷酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，未得到固體，繼續室溫揮發，仍未得到固體。

實施例2、由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽晶型A的製備方法：將實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在體積比為19:1的異戊醇和水的混合溶劑中，通過溶液緩慢揮發，收集固體即可得到。

經檢測，所得固體為磷酸鹽的晶型A，其XRPD資料如下表9所示，其XRPD圖如圖4，TGA圖和DSC圖如圖5。XRPD顯示結晶度高，TGA結果顯示樣品加熱至150 ºC時有6.4%的失重，DSC結果顯示樣品在分解前有兩個吸熱峰分別為100.9 ºC和132.7 ºC（峰值溫度）。圖6的XRPD表徵顯示磷酸鹽晶型A在50 ºC下加熱48小時後轉變為磷酸鹽晶型B。 表9

實施例3、由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽晶型B的製備方法：將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在1 ml乙醇中，然後在室溫（25±2℃）下緩慢揮發得到固體。

經檢測，所得固體為磷酸鹽的晶型B，其XRPD資料如下表10，其XRPD圖如圖7，TGA圖和DSC圖如圖8，1H NMR表徵結果如圖9所示。XRPD顯示該晶型結晶度高。TGA結果顯示樣品加熱至150 ºC時有6.1%的失重。DSC結果顯示樣品在分解前有兩個吸熱峰分別為103.2 ºC和133.5 ºC（峰值溫度）。1H NMR （DMSO-d6） 譜圖顯示沒有異丙醇的信號峰存在，結合晶型 B 樣品在TGA中加熱失重可判斷晶型 B 為水合物。重複製備的磷酸鹽晶型B的化學計量比由HPLC/IC方法進行測定，結果顯示游離鹼與磷酸的比例為1:1。 表10

物理性質研究：

將該實施例製得的磷酸鹽的晶型B置於1.5毫升小瓶內，將小瓶分別置於不同條件下：40 ºC/75% RH，25 ºC/60% RH下敞口放置一周，80 ºC放置24小時。所得樣品分別進行XRPD測試和HPLC測試，5 ºC密封放置的樣品作為HPLC純度測試的參照樣品（初始）。樣品在80 ºC放置24小時後外觀由白色固體轉變成黃色固體。圖10和下表11的結果表明樣品在一周穩定性試驗中XRPD不變－未發生晶型轉變，且純度也沒有明顯變化，即磷酸鹽晶型B在測試條件下有良好的物理化學穩定性。圖11的DVS結果表明樣品在25 ºC/40% RH至25 ºC/80% RH區間內，水分吸/脫附變化平緩。25 ºC/80% RH 時相對0%RH的增重為6.5%。圖12的XRPD結果顯示磷酸鹽晶型B在DVS試驗前後XRPD一致，晶型沒有發生變化。 表11

磷酸鹽的晶型B的血藥濃度與血清DPPIV活性的關係研究：

受試樣品和陽性藥：實施例3製得的磷酸鹽的晶型B（命名為DPPIV-P1）。稱取磷酸鹽的晶型B配製一定濃度的溶液，給藥體積為10 ml/kg。稱取磷酸西格列汀，作為陽性對照藥，配製成溶液，給藥體積為10 ml/kg。

實驗動物：CD-1（ICR）小鼠，4周齡，體重約為18 g至22 g。

分組與給藥方案：小鼠適應性餵養，實驗開始前一天，按照體重隨機分組，禁食過夜。實驗分6組：（1）陰性對照組；（2）磷酸西格列汀3 mg/kg；（3） DPPIV-P1 0.1 mg/kg； （4）DPPIV-P1 0.3 mg/kg；（5）DPPIV-P1 1 mg/kg；（6）DPPIV P1 3 mg/kg；另單獨設置一組，用來檢測DPPIV的起始基礎值。實驗分組後，單獨設置的一組進行採血，其它動物予以灌胃給藥，給藥體積為10 ml/kg；給藥後進行採血，其餘所有動物給予葡萄糖刺激；給糖後20分、40分、60分、120分再分別採血，取血漿檢測藥物濃度，DPPIV活性。DPPIV-P1對動物體重的影響，各組體重資料見表12。 表12

DPPIV-P1對ICR小鼠血清DPPIV活性的影響，圖28是DPPIV活性檢測結果，從圖28可見DPPIV-P1有不錯的量效關係。

藥效學-藥物濃度相關性研究：給藥後1小時、1.33小時、1.67小時、2小時和3小時時間點採血測血藥濃度，結果如下表13所示，DPPIV-P1的藥物暴露值（AUC_eff0-3h ）隨著劑量的增加而增加，分別為：16.09 ng·h/mL，52.65 ng·h/mL，162.3 ng·h/mL，和542.28 ng·h/mL。並且在相同劑量情況下，DPPIV-P1 3 mg/kg組的藥物暴露值（AUC_eff0-3h ）高於磷酸西格列汀3 mg/kg的藥物暴露值（AUC_eff0-3h ），分別為542.28 ng·h/mL和369.74 ng·h/mL。 表13

*血藥濃度的單位為ng/ml，**藥物暴露量為AUC_eff0-3h ，單位為ng·h/ml。

結論：在ICR小鼠PK/PD實驗過程中，選取給藥後1小時、1.33小時、I.67小時、2小時和3小時採集血液樣品來檢測化合物的濃度和DPPIV活性，以初步瞭解藥效和血藥濃度的相關性。在該模型中，DPPIV-P1劑量依賴性地抑制DPPIV的活性，DPPIV-P1的藥物暴露量隨給藥劑量的增加而增加，呈現很好的劑量依賴性。並且在相同劑量情況下，DPPIV-P1的藥物暴露值（AUC_eff0-3h ）略高於磷酸西格列汀的藥物暴露值（AUC_eff0-3h ），分別為542.28 ng·h/mL和369.74 ng·h/mL。這也表明與磷酸西格列汀相比，DPPIV-P1具有更好的口服生物利用度。

磷酸鹽的晶型B長期給藥對DIO小鼠的降糖藥效研究

受試樣品和陽性藥：實施例3製得的磷酸鹽的晶型B（DPPIV-P1）。稱取磷酸鹽的晶型B配製一定濃度的溶液，給藥體積為10 ml/kg。稱取磷酸西格列汀，作為陽性對照藥，配製成溶液，給藥體積為10 ml/kg。

實驗動物：C57BL16小鼠，5周齡，體重約為13 g至16 g。

分組與給藥方案：適應性餵養，分為正常對照組和模型組，高脂飼料（Research diets ，D 12492）餵養。當小鼠空腹血糖≥7 mM，則認為小鼠己經成為DIO小鼠，可選取入組做降糖藥效試驗，入組的DIO小鼠根據血糖和體重進行分層隨機分組。實驗共分6組：（1）瘦鼠對照組；（2）模型對照組；（3）磷酸西格列汀30 mg/kg；（4）DPPIV-P1 0.3 mg/kg；（5）DPPIV-P1 3 mg/kg；（6）DPPIV-P1 30 mg/kg；實驗開始後，動物每天予以灌胃給藥，給藥體積為10 m1/kg。每週稱體重，測空腹血糖；記錄投食、剩食量、計算攝食量；給藥結束時禁食過夜，採血，留取血清測游離脂肪酸（NEFA），總膽固醇（TCHO），甘油三酯（TG），胰島素（insulin），DPPIV活性。

DPPIV-P1對DIO小鼠血糖水準的影響，表14和圖29是實驗期間血糖監測結果，表15和圖30是給藥28天時禁食血糖數據；結果顯示，實驗結束時，DPPIV-P1劑量依賴地抑制血糖的升高，抑制率分別為14.2%、9.9%和18.5%，與模型對照組比較，具有顯著性或極顯著性差異（p＜0.05或0.01）。 表14

表中：與模型對照組比較，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01 表15

DPPIV-P1對DIO小鼠體重的影響，圖31和表16是實驗期間體重檢測結果，圖32和表17是給藥28天時的體重。給藥28天時體重與開始給藥時的體重均無顯著性差異。 表16

表17

DPPIV-P1對DIO小鼠相關代謝參數的影響，實驗結束時，禁食過夜（16小時）處理，採血取血清檢測游離脂肪酸（NEFA）、總膽固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、胰島素（insulin）和DPPIV活性。圖33、圖34、圖35、圖36和圖37分別是NEFA、TCHO、TG、胰島素和攝食量的資料統計，資料表明：在長期給藥結束時，與模型對照組比較，磷酸西格列汀-30組和DPPIV-P1-30組的總膽固醇TCHO分別有25.4% （P＜0.01）和18.4%（P＜0.01）的降低；磷酸西格列汀-30組和DPPIV-P 1-0.3組的胰島素分別有58.3%和28.3%的降低（但與模型對照組相比無顯著性差異），其它代謝資料也均無顯著性差異。表18是各代謝參數的資料總表。 表18

**p＜0.01vs模型對照組

DPPIV-P1對DIO小鼠DPPIV活性的影響，圖25為藥物對各組血清DPPIV抑制的結果，DPPIV-P1對DPPIV的抑制效果呈劑量依賴性，DPPIV-P1-0.3，DPPIV-P1-3和DPPIV-P1-30的抑制率分別為47.1%、82.7%和95.3%，與模型對照組比較，具有極顯著性差異（p＜0.01）。磷酸西格列汀-30的抑制率為66.4%，結果與血糖的抑制率基本吻合。

結論：採用飲食誘導致糖尿病的DIO小鼠進行長期給藥，觀察DPPIV-P1的作用。結果表明，DPPIV-P1長期給藥後，對動物禁食血糖無明顯影響，結果與陽性藥物磷酸西格列汀一致，說明此類藥物不易引起餐前低血糖。

長期口服DPPIV-P1對動物體重、攝食量、血清游離脂肪酸、甘油三醋等指標均無明顯影響，不影響動物的正常脂類代謝。但DPPIV-P1與陽性藥物磷酸西格列汀均可降低血清胰島素的水準，兩者不同劑量下降低程度相當，這與藥物降低血糖誘發胰島素分泌不足有關。

DPPIV-P1長期給藥後，對血清DPPIV的抑制作用明顯強於磷酸西格列汀，其3 mg/kg劑量下與磷酸西格列汀的30 mg/kg基本相當。

綜上所述，DPPIV-P1長期給藥具有很好的耐受性，且不易誘發低血糖，同時，與磷酸西格列汀相比，具有更強的血清DPPIV抑制作用。

實施例4、由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽晶型B的製備方法：將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在異丙醇中配製成飽和溶液，然後在室溫（25±2℃）下緩慢揮發得到固體。經檢測，所得固體為磷酸鹽的晶型B。

實施例5、由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽晶型B的製備方法：將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽溶解在0.3毫升的異戊醇中，然後在室溫（25±2℃）下緩慢揮發得到固體。經檢測，所得固體為磷酸鹽的晶型B。

實施例6、由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽晶型B的製備方法： 1、稱取150毫克實施例1製得的無定形磷酸鹽至20毫升玻璃瓶內。 2、加入4毫升異戊醇/水（19/1，v/v）混合溶液，攪拌溶解。 3、向上述小瓶內加入5毫克實施例3製得的磷酸鹽晶型B晶種。 4、室溫磁力攪拌（500 rpm），18小時後取樣分析，XRPD結果顯示得到磷酸鹽晶型B，其XRPD圖如圖13。

實施例7 1、稱取150毫克實施例1製得的無定形磷酸鹽至20毫升玻璃瓶內。 2、加入4毫升異丙醇/甲基第三丁基醚 （1/1，v/v） 混合溶液，攪拌溶解。 3、向上述小瓶內加入5毫克實施例3製得的磷酸鹽晶型B晶種。 4、在室溫緩慢揮發得到磷酸鹽晶型B的單晶。

圖14為磷酸鹽晶型B的單晶的顯微鏡照片。

選取磷酸鹽晶型B的針狀單晶，進行了單晶衍射資料收集，並成功解析了單晶結構。下表19列出了單晶結構和結構修正資料。圖15是晶型B的化學結構。圖16、圖17、圖18分別顯示了晶型B的立體結構圖、分子結構圖和橢球圖。單晶結構解析確定了晶型B的化學結構，該結構中游離鹼、磷酸根和水分子的莫耳比為1:1:1。單晶結構也確認了晶型B的手性碳原子C8（R）和C14（R）的絕對構型。在晶型B結構中，O6與O6’為同一個水分子的無序，由於該水分子熱振動較大，在O6與O6’位置出現的機率均為50%。圖19為晶型B單晶的單胞圖。在晶體基本結構單元中，共有6個晶型B基本單元，即：6個游離鹼、6個磷酸根和6個水分子。圖20為晶型B單晶的氫鍵示意圖。在晶型B結構中，每個游離鹼中的氨基與相鄰的兩個游離鹼通過N-H∙∙∙F氫鍵相連，在c軸方向延伸形成一維鏈狀結構。磷酸根通過N-H∙∙∙O氫鍵將這些一維鏈結合起來，形成c軸方向的一維孔洞結構，水分子通過O-H∙∙∙O氫鍵與磷酸根結合，填充在游離鹼和磷酸根共同形成的一維孔洞中，如圖21所示。圖22為晶型B單晶的堆積圖。圖23為根據晶型B的單晶結構類比的XRPD與實施例7製得晶型B的透射的XRPD對比圖，從對比圖中可以看出單晶結構類比的XRPD與晶型B的XRPD圖基本一致，模擬圖中2θ為4.38度時的衍射峰在透射XRPD圖中不明顯（圖24為用反射XRPD在3°至7°的3小時掃描，可看到有衍射峰），可能是擇優取向所致。

單晶樣品的顯微鏡圖片使用上海測維體視顯微鏡PXS9-T在室溫下拍攝。單晶衍射資料用Bruker D8 ADVANCE單晶衍射儀（Mo Kα, λ = 0.71073 Å）在290（2）K採集。晶體結構用直接法（SHELXTL和OLEX2）解出，隨後用數輪差值傅立葉（Fourier）合成法確定了全部非氫原子的座標，繼而用全矩陣最小二乘法對所有非氫原子進行各向異性溫度因數修正。結構圖用Diamond產生，單胞圖和理論模擬XRPD圖用Mercury產生。透射XRPD資料在PANalytical Empyrean X射線粉末衍射儀上採集。反射XRPD資料在Xpert 3 X射線粉末衍射儀上採集。 表19

對比例4

將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽至1.5毫升小瓶中，分別加入0.2毫升至0.5毫升下表中所示溶劑得到懸浮液，在室溫條件下磁力攪拌3天，離心分離固體並測試XRPD，結果見下表20，其中N/A表示未得到固體。另外，本發明還在5℃和50℃下分別進行了懸浮攪拌實驗，但均未得到晶型。 表20

對比例5

將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽分別溶解在MeOH、IPAc、ACN、Acetone、2-丁酮、THF、2-MeTHF、1,4-Dioxane、H₂ O、Acetic acid、MeOH/EtOAc（1/1）、Acetone/IPAc（1/1）、Acetone/DCM（1/1）、EtOH/CHCl3（1/1）、IPA/Heptane（1/1）、THF/Toluene（1/1）、MeOH/CHCl3（5/1）、MeOH/Heptane（5/1）中得到澄清溶液，然後在室溫（25±2℃）下緩慢揮發，均未得到固體。

對比例6

將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽分別溶解在MeOH、EtOH 、IPAc、ACN、Acetone、2-丁酮、THF、2-MeTHF、1,4-Dioxane、H₂ O、Acetic acid、MeOH/EtOAc（1/1）、Acetone/IPAc（1/1）、Acetone/DCM（1/1）、EtOH/CHCl3（1/1）、IPA/Heptane（1/1）、THF/Toluene（1/1）、MeOH/CHCl3（5/1）、MeOH/Heptane（5/1）中得到澄清溶液，然後在室溫5℃下緩慢揮發，均未得到固體。

對比例7

將15毫克實施例1製得的無定形的由式（Ⅰ）表示的化合物的磷酸鹽至3毫升小瓶中，分別加入下表中所示良溶劑得到澄清溶液，將玻璃瓶敞口置於裝有4毫升對應反溶劑（見下表21）的20毫升玻璃瓶中，密閉後在室溫條件下放置5天，結果如下表21，均未得到固體。 表21

本發明還進行了多種溶劑的氣固滲透實驗、反溶劑添加試驗、反反溶劑添加試驗、緩慢降溫試驗、聚合物誘導試驗、離子液體誘導試驗、濕法研磨試驗、緩慢析出試驗，均未得到晶型。

實施例8、由式（Ⅰ）表示的化合物的草酸鹽無定形形式的製備方法：將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的甲基第三丁基醚中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的草酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，收集固體即可得到。經檢測，所得固體為草酸鹽的無定形形式。

實施例9、由式（Ⅰ）表示的化合物的草酸鹽晶型A的製備方法：將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的甲醇中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的草酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，收集固體即可得到。

經檢測，所得固體為草酸鹽的晶型A，其X射線粉末衍射資料如下表22，其XRPD圖如圖26，TGA圖和DSC圖如圖27。XRPD顯示其結晶度高，TGA結果顯示樣品加熱至130 ºC時有7.6%的失重，DSC結果顯示樣品在分解前有一個吸熱峰為121.3 ºC （峰值溫度）。 表22

對比例8

將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的甲基第三丁基醚中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的煙酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，未得到固體，繼續室溫揮發，仍未得到固體。

對比例9

將20 mg由式（Ⅰ）表示的化合物溶解在0.5 mL的甲醇中，然後加入與由式（Ⅰ）表示的化合物等莫耳比的煙酸，室溫（25±2℃）下攪拌反應12小時，未得到固體，繼續室溫揮發，仍未得到固體。

上述實施例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在於讓熟悉此項技術的人士能夠瞭解本發明的內容並據以實施，並不能以此限制本發明的保護範圍。凡根據本發明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。

無。

圖1為實施例1的無定形磷酸鹽的XRPD圖。 圖2為實施例1的無定形磷酸鹽的TGA圖和DSC圖。 圖3為實施例1的無定形磷酸鹽的1H NMR圖。 圖4為實施例2的磷酸鹽晶型A的XRPD圖。 圖5為實施例2的磷酸鹽晶型A的TGA圖和DSC圖。 圖6為實施例2的磷酸鹽晶型A在50 ºC下加熱48小時後轉變為磷酸鹽晶型B的XRPD圖，其中最上面的譜圖表示晶型A，中間的譜圖表示晶型A加熱至50 ºC，最下面的譜圖表示晶型B。 圖7為實施例3的磷酸鹽晶型B的XRPD圖。 圖8為實施例3的磷酸鹽晶型B的TGA圖和DSC圖。 圖9為實施例3的磷酸鹽晶型B的1H NMR表徵結果圖。 圖10為實施例3的磷酸鹽晶型B的穩定性的XRPD疊圖，其中最上面的譜圖表示40ºC/75% RH，1周；第二條譜圖表示25 ºC/60% RH，1周；第三條譜圖表示80℃，24小時；最下面的譜圖表示初始。 圖11為實施例3的磷酸鹽晶型B的DVS圖。 圖12為DVS試驗前後XRPD圖，其中上面的譜圖表示DVS試驗前，下面的譜圖表示DVS試驗後。 圖13為實施例6的磷酸鹽晶型B的XRPD圖，其中上面的譜線為實施例6得到的樣品，下面的譜線為實施例3的樣品。 圖14為實施例7的磷酸鹽晶型B的單晶的顯微鏡照片。 圖15為磷酸鹽晶型B的化學結構。 圖16為晶型B的立體結構圖。 圖17為晶型B的分子結構圖。 圖18為晶型B的橢球圖。 圖19為晶型B單晶的單胞圖。 圖20為晶型B單晶的氫鍵示意圖。 圖21為晶型B單晶的一維鏈狀結構圖。 圖22為晶型B單晶的堆積圖。 圖23為根據晶型B的單晶結構類比的XRPD與實施例7製得晶型B的透射的XRPD對比圖，其中上面的譜線為晶型B，下面的譜線為模擬的XRPD。 圖24為用反射XRPD在3°至7°的3小時掃描圖。 圖25為各組血清DPPIV抑制率，抑制率均為與模型對照組比較的結果（均值±標準差，n=11）。 圖26為實施例9的草酸鹽晶型A的XRPD圖。 圖27為實施例9的草酸鹽晶型A的TGA圖和DSC圖。 圖28為磷酸鹽晶型B對ICR小鼠DPPIV的影響（均值±標準差，n=3）。 圖29為長期給予DPPIV-P1對DIO小鼠禁食血糖的影響（均值±標準差，n=11）。 圖30為給予DPPIV-P1 28天時，各組禁食血糖資料，抑制率均與模型對照組比較的結果（均值±標準差，n=11）。 圖31為長期給予DPPIV-P1對DIO小鼠體重的影響（均值±標準差，n=11）。 圖32為給予DPPIV-P1 28天時各組體重資料（均值±標準差，n=11）。 圖33為各組血清游離脂肪酸NEFA資料（均值±標準差，n=11）。 圖34為各組血清總膽固醇TCHO資料（均值±標準差，n=11）。 圖35為各組血清甘油三酯TG資料（均值±標準差，n=11）。 圖36為各組血清胰島素（insulin）資料（均值±標準差，n=11）。 圖37為各組攝食量資料（均值±標準差，n=11）。

Claims (11)

1. 一種化合物的鹽，所述化合物由式(I)表示，

   

   其中所述鹽為磷酸鹽晶型B，其X射線粉末衍射圖在2θ值為15.2°±0.2°、15.9°±0.2°、19.2°±0.2°、23.3°±0.2°處具有特徵峰。
2. 如申請專利範圍第1項所述的化合物的鹽，其中所述磷酸鹽晶型B的X射線粉末衍射圖還在2θ值為22.9°±0.2°、23.1°±0.2°、26.9°±0.2°處具有特徵峰。
3. 如申請專利範圍第2項所述的化合物的鹽，其中所述磷酸鹽晶型B的X射線粉末衍射圖還在2θ值為20.2°±0.2°、20.9°±0.2°、24.6°±0.2°處具有特徵峰。
4. 如申請專利範圍第3項所述的化合物的鹽，其中所述磷酸鹽晶型B的X射線粉末衍射圖基本上與圖7一致。
5. 如申請專利範圍第1項所述的化合物的鹽，其中所述磷酸鹽晶型B為水合物。
6. 一種如申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述的化合物的鹽的製備方法，包括：所述磷酸鹽晶型B的製備方法為：將無定形的由式(I)表示 的化合物的磷酸鹽溶解在乙醇、異丙醇或異戊醇中，然後經溶劑揮發得到所述磷酸鹽晶型B；或者，將所述無定形的由式(I)表示的化合物的磷酸鹽溶解在異戊醇和水的混合溶劑或者異丙醇和甲基第三丁基醚的混合溶劑中，然後加入晶型B的晶種進行誘導結晶製得所述磷酸鹽晶型B；所述無定形的由式(I)表示的化合物的磷酸鹽的製備方法為：使由式(I)表示的化合物與磷酸在甲基第三丁基醚的存在下反應，然後經攪拌沉澱或溶劑揮發得到所述無定形的由式(I)表示的化合物的磷酸鹽。
7. 如申請專利範圍第6項所述的化合物的鹽的製備方法，其中在製備所述磷酸鹽晶型B時採用的所述混合溶劑中異戊醇和水的體積比為18：1至20：1；所述混合溶劑中異丙醇和甲基第三丁基醚的體積比為0.8：1至1.2：1。
8. 如申請專利範圍第6項所述的化合物的鹽的製備方法，其中在製備所述磷酸鹽晶型B時，在20℃至30℃下進行所述溶劑揮發。
9. 一種藥物組合物，包括活性成分和藥學上可接受的載體，所述活性成分為如申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述的化合物的鹽。
10. 一種如申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述的化合物的鹽在製備用於二肽基肽酶抑制劑活性藥物中的用途。
11. 一種如申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述的化 合物的鹽在製備用於治療、控制或預防哺乳動物中糖尿病藥物中的用途。

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