KR102359783B1 - 미생물 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 그의 제조방법 - Google Patents

미생물 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 그의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 발효물 및/또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 발효물을 유효성분으로 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

Description

미생물 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 그의 제조방법{Cosmetic composition containing microbial fermentation as an active ingredient and a method of manufacturing the same}
본 발명은 피부에 유용한 미생물 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
마이크로바이옴은 인체에 서식하는 "미생물(microbe)"과 "생태계(biome)"를 합친 말로 우리 몸에 사는 미생물과 그 유전정보를 일컫는다. 인체 마이크로바이옴의 수는 순수한 인체의 세포수보다 두 배 이상 많고 유전자 수는 100배 이상 많다. 따라서 미생물을 빼놓고 인간의 유전자를 논할 수 없을 정도이기에 제2의 게놈(Second Genome)이라 부르기도 한다.
마이크로바이옴은 유익균과 유해균이 생성되는 원리와 질병 간의 연관성 등을 분석할 수 있어 신약 개발 및 불치병 치료법 연구에 폭넓게 활용될 수 있는 분야다. 또한 마이크로바이옴은 식품, 화장품, 치료제 개발에도 활용된다.
구체적으로, 가장 작은 생물체인 미생물은 단백질을 형성하고, 그 단백질로 인해 메타볼라이트(metabolite)가 형성되면서 인체에 직접적인 영향을 미치게 된다. 장내 세균을 분석하여 건강한 대변에서 추출한 장내 미생물을 필요한 다른 환자에게 치료의 목적으로 사용하는 사례, 혈액 내 미생물로 조산을 예측한 사례, 비만 치료에 사용한 사례가 등장하고 있다.
이처럼 마이크로바이옴에 대한 연구가 지속적으로 활발해지면서, 그 적용영역이 점점 넓혀지고 있는 추세이다.
본 발명은 마이크로바이옴을 피부에 적용하여, 피부 장벽에 유용한 미생물 발효물을 포함한 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공하고자 한다.
구체적으로, 본 발명은 락토바실러스 파라카제이 발효물, 바실루스 플렉수스 발효물, 와이셀라 컨퓨사 발효물 등의 미생물을 이용한 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 발효물 및/또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 발효물을 유효성분으로 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 발효물을 유효성분으로 더 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물을 제공한다..
본 발명은 상기 유효성분을 이용한 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 유효성분을 이용한 염증완화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 유효성분을 이용한 피부진정용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 (a) 펩톤, 이스트, 탄소원의 배양액을 형성하는 단계; (b) 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus), 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 중 어느 하나 이상을 배양하여 미생물발효물을 형성하는 단계; (c) 상기 배양액과 상기 미생물발효물을 혼합 후 배양하는 단계를 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 (a)에 염화나트륨 또는 마그네슘포스테이트를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 (c)단계의 배양시간은 30시간 이상인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)의 배양액의 이스트의 농도는 3~10g/L 인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)의 배양액의 탄소원의 농도는 5~15g/L인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus)의 배양액의 이스트의 농도는 0.05~1g/L인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus)의 배양액의 탄소원의 농도는 0.01~0.5g/L인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 배양액과 미생물발효물의 혼합비는 1 : 8 내지 1 : 12인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조된 미생물을 이용한 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 의한 미생물을 이용한 화장료 조성물은 항염기능, 주름개선기능, 피부면역기능이 우수한 효과가 있다.
또한, 본 발명에 의한 미생물을 이용한 화장료 조성물은 모공수축, 피지분비 저하, 보습기능을 갖는 천연성분을 포함하여 피부기능 활성에 우수한 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 배지에 사용된 탄소원(환원당, 비환원당)에 따른 성장곡선을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 배지에 사용된 질소원의 농도 별 성장곡선을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 배지의 배양시간에 따른 성장곡선을 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 lactobacillus paracasei 발효물과 Bacillus flexus 발효물의 농도 별 nitric oxide 양을 확인한 실험 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명에 사용된 균주의 대사산물인 GABA, Ectoine의 농도 별 nitric oxide 양을 확인한 실험 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명에 사용된 균주의 대사산물인 Cis-vaccenic acid의 농도 별 nitric oxide 양을 확인한 실험 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명에 사용된 균주의 대사산물인 GABA, Ectoine의 농도 별 MMP-1의 발현량을 확인한 실험 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 본 발명에 사용된 균주의 대사산물인 GABA, Ectoine의 농도 별 procollagen의 농도를 확인한 실험 결과를 나타낸 도면이다.
본 발명을 하기 실시예를 들어 더욱 자세히 설명할 것이나, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예로 한정되는 의도는 아니다.
본 발명은 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus), 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)를 이용한 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명은 일 실시예로 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 발효물, 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 발효물, 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 발효물 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물을 제공한다.
상기 발효물은 특정 배양 조건에서 형성되는 것으로, 일 실시예로 증류수, 펩톤 또는 트립톤, 이스트(추출물), 탄소원으로 형성된 배양액에서 배양된 것을 의미한다. 상기 이스트(질소원)와 탄소원은 미생물에 주요한 영양원이다. 상기 탄소원은 환원당 또는 비환원당 모두 사용될 수 있고, 구체적으로 Glucose, fructose, maltose, galactose, saccharose 등이 사용될 수 있다.
본 발명은 일 실시예로 피부에 사용되는 화장료의 조성물로, 상기 유효성분을 이용한 주름개선용 화장료 조성물, 염증완화용 화장료 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명에 사용된 락토바실러스 파라카제이는 사르코신(SARCOSINE)을 형성하고, 상기 사르코신(SARCOSINE)은 모공수축, 피부결정리, 피지분비 저하 등의 기능을 가진다. 또한, 본 발명에 사용된 락토바실러스 파라카제이는 시스-바세닉산(cis-vaccenic acid)을 형성하고, 상기 시스-바세닉산(cis-vaccenic acid)은 모유성분에 포함된 것으로 피부면역 기능을 가진다. 락토바실러스 파라카제이 발효물은 사르코신, 시스-바세닉산 등의 유용한 물질을 포함하여, 이를 이용한 화장료 조성물은 피부에 유용한 기능을 가지게 된다.
본 발명에 사용된 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)는 가바(GABA; gamma-aminobutyric acid)를 형성하고, 상기 가바는 항염 및 주름개선의 기능을 가진다. 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 발효물은 가바 등의 유용한 물질을 포함하여, 이를 이용한 화장료 조성물은 피부에 유용한 기능을 가지게 된다.
본 발명에 사용된 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus)는 엑토인(Ectoine)을 형성하고, 상기 엑토인은 항염 및 주름개선의 기능을 가진다. 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 발효물은 엑토인 등의 유용한 물질을 포함하여, 이를 이용한 화장료 조성물은 피부에 유용한 기능을 가지게 된다.
본 발명은 미생물을 이용한 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
일 실시예로 (a) 펩톤, 이스트, 탄소원의 배양액을 형성하는 단계; (b) 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus), 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 중 어느 하나 이상을 배양하여 미생물발효물을 형성하는 단계; (c) 상기 배양액과 상기 미생물발효물을 혼합 후 배양하는 단계를 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 일 실시예로 상기 (a)에 염화나트륨 또는 마그네슘포스테이트를 더 포함할 수 있다. 다른 실시예로 락토바실러스 파라카제이, 와이셀라 컨퓨사를 이용하는 경우 마그네슘포스페이트를 이용할 수 있고, 바실루스 플렉수스를 이용하는 경우 염화나트륨을 이용할 수 있다. 다른 실시예로 (a)는 100℃이상, 100~150℃, 100~130℃, 110~130℃, 115~130℃에서 실시될 수 있다. 또 다른 실시예로 (a)는 0.5~3기압, 1~3기압, 1~2.5기압, 1~2기압에서 실시될 수 있다. 또 다른 실시예로 (a)는 10분 이상 배양 후 멸균할 수 있다.
본 발명은 상기 (b)단계는 (a)단계의 배양액 또는 배지 구성에 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus), 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 중 어느 하나 이상을 투입하여 배양한 후 발효물을 형성할 수 있다. 일 실시예로 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)의 단일 콜로니(colony)를 접종하여 배양할 수 있다. 배양 온도는 30~40℃, 배양시간은 12시간 이상으로 실시하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 실시예로 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)을 이용하는 경우 배양액 또는 배지의 이스트의 농도는 3~10g/L로 실시할 수 있고, 구체적으로 4~6 g/L, 더욱 구체적으로는 4.5~5.5g/L로 실시할 수 있다. 또한 일 실시예로 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)을 이용하는 경우 배양액 또는 배지의 탄소원의 농도는 5~15g/L로 실시할 수 있다. 구체적으로는 8~12g/L로 실시할 수 있고, 더욱 구체적으로는 9.5~10.5g/L로 실시할 수 있다.
본 발명의 일 실시예로 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus)를 이용하는 경우 배양액 또는 배지의 이스트의 농도는 0.05~1g/L로 실시할 수 있고, 구체적으로는 0.1~0.5g/L, 더욱 구체적으로는 0.2~0.3g/L로 실시할 수 있다. 또한 일 실시예로 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus)를 이용하는 경우 배양액 또는 배지의 탄소원의 농도는 0.01~0.5g/L로 실시할 수 있고, 구체적으로는 0.1~0.3g/L, 더욱 구체적으로는 0.2~0.25 g/L로 실시할 수 있다.
본 발명은 상기 (c)에서 배양액과 미생물발효물의 혼합비는 1 : 8 내지 1 : 12로 혼합할 수 있고, 구체적인 일 실시예로 1 : 10으로 혼합할 수 있다. 상기 혼합 후 24시간 이상 배양한 다음 모두 회수하여, 원심분리를 통해 상등액을 회수할 수 있다. 구체적인 실시 예로, 상기 혼합 후 배양시간은 락토바실러스 파라카제이, 와이셀라 컨퓨사를 이용하는 경우 30시간 이상이 바람직하고, 바실루스 플렉수스를 이용하는 경우 50시간 이상이 바람직하다.
본 발명은 일 실시예로 상기 제조방법에 의하여 제조된 미생물을 이용한 화장료 조성물을 제공할 수 있다. 또한, 본 발명에 의한 화장료 조성물을 이용하여 제조된 제품을 제공할 수 있다.
실시예 1. Lactobacillus paracasei, weissella confuse 미생물 배양 과정
peptone 2g/L, saccharose 10g/L, yeast extract 5g/L, Magnesium phosphate 0.8g/L 의 배지조성으로 제조하여 100도 이상, 1.5기압 조건으로 멸균한다.
상기 멸균 배지에 Lactobacillus paracasei 또는 weissella confuse를 접종하여 35~40도에서 24시간 이상 진탕배양한다
상기 멸균배지와 상기 진탕배양배지를 혼합 후 1 vvm air, 200 rpm, 37도, initial pH 7.0 조건으로 배양을 시작한다. D.O는 70으로 유지하고, 온도는 37도로 유지하며, 나머지 조건은 D.O를 조절하기 위하여 변화될 수 있다. 36시간 후 배양을 종료하며, 배양액을 모두 회수하여 원심분리한다. 원심분리 후 얻어진 상등액을 회수하여 필터처리 한다.
실시예 2. Bacillus flexus 미생물 배양과정
Yeast extract 0.24 g/L, peptone 1.2g/L, NaCl 0.48g/L, glucose 0.08g/L의 배지 조성으로 제조하여 100도 이상, 1.5기압 조건으로 멸균한다.
상기 멸균 배지에 Bacillus flexus를 접종하여 35~40도에서 24시간 이상 진탕배양한다
상기 멸균배지와 상기 진탕배양배지를 혼합 후 1 vvm air, 200 rpm, 37도, initial pH 7.0 조건으로 배양을 시작한다. D.O는 70으로 유지하고, 온도는 37도로 유지하며, 나머지 조건은 D.O를 조절하기 위하여 변화될 수 있다. 60시간 후 배양을 종료하며, 배양액을 모두 회수하여 원심분리한다. 원심분리 후 얻어진 상등액을 회수하여 필터처리 한다.
실시예 3. 화장료 조성물의 제조공정
상기 실시예 1 및/또는 2의 배양액에 Dehydroacetic acid와 Benzyl Alcohol을 혼합하여 최종 생성물을 제조한다. 상기 Dehydroacetic acid는 0.08 %, Benzyl Alcohol은 0.88% 포함된다.
실험예 1. 배지 최적화 확인 실험
1) 탄소원 (도 1)
탄소원은 미생물 성장에 있어 50% 수준의 영향력을 미친다. 미생물이 잘 자랄 수 있는 환경을 조성하기 위하여, 배지 최적화가 필요하다.
비환원당인 saccharose, 환원당인 glucose를 선정하여 lactobacillus paracasei를 yeast extract(5g/L)와 peptone(2g/L), 마그네슘설페이트(0.8g/L)의 함량을 고정하여 실험을 진행하였고, 이를 도 1에 나타내었다. Saccharose와 glucose 모두에서 성장이 잘 이루어졌고, glucose가 saccharose에 대비하여 좀 더 우수한 성장을 보였다. Saccharose는 비환원당으로 질소원과 함께 멸균하여도 카라멜반응이 일어나지 않아 향과 색깔이 우수한 효과가 있다.
2) 효소 (도 2)
질소원은 미생물 성장에 있어 10% 이상 수준의 영향력을 미친다. 질소원인 yeast extract 함량을 최적화하기 위하여, lactobacillus paracasei를 yeast extract 2.5g/L, 5.0g/L, 15.0g/L와 각각 첨가하고 나머지 조성은 peptone 2g/L, 탄소원 10g/L, 마그네슘설페이트 0.8g/L로 고정하여 실험을 진행하였다. 도 2에 나타난 바와 같이 yeast extract 와 미생물 성장은 비례하였다. 다만, 관능평가에서 10g/L 이상 첨가군에서는 향 적인 측면에서 거부도가 높게 형성되어, 그 이하를 설정하는 것이 바람직하다.
3) 배양시간 (도 3)
최종 선정된 배지조성에 따라 lactobacillus paracasei 또는 weissella confuse를 첨가하고 배양 조건을 최적화하기 위하여, 3시간단위로 샘플링하여 gowth를 spectrophotometer 620nm에서 측정하였다. 도 3에 나타난 바와 같이 결과 (growth는 측정됨) 30시간 이상에서 가장 높은 성장을 나타내었다.
Bacillus flexus의 경우는 50시간 이상에서 가장 높은 성장을 나타내었다.
실험예 2. In-vitro 실험
1) nitric oxide production 측정을 통한 조성물의 항염효과 실험
RAW264.7 cells을 counting한 뒤 2.5x105cell/well이 되도록 희석 후, 48 well plate에 2.5x105cell/well세포를 seeding 하고 5 % CO2, 37
Figure 112021023451259-pat00001
incubator에서 24시간 동안 incubation 하였다. 배양 후 serum free media 교체 후 starvation하고, 균주 추출물(lactobacillus paracasei, weissella confusa, Bacillus flexus) 각각의 샘플을 농도별로 희석하여 처리하였다. Positive control로 사용하는 Dexamethasone은 2ug/ml 로 처리 후 5 % CO2 37
Figure 112021023451259-pat00002
incubator에서 1시간 incubation 하고, LPS가 1 ug/ml이 되도록 처리 후 5 % CO2 37
Figure 112021023451259-pat00003
incubator에서 24시간 incubation 하였다. 합성된 NO를 포함하는 배지 100 ul를 96 well plate로 옮기고 500 uM NaNO2를 Standard로 사용하여 각각의 농도별(50, 40, 30, 20, 10, 0 uM)로 96 well plate에 처리 후 20분 동안 실온에서 반응시켰다. 흡광도 측정을 위해 multiskan GO 프로그램을 실행 후 흡광도를 540 nm로 설정하고, plate에 측정 영역을 선택하고 흡광도를 측정하였다. 각각의 합성된 NO의 값을 standard curve를 이용하여 계산하고, 그 값의 평균으로 결과 값을 도 4와 같이 도출하였다.
Deinococcus radiodurans extract의 항염 효과를 확인하기 위하여 Raw264.7에서 시험물질을 세포 독성이 없는 범위에서 농도별로 처리하여 nitric oxide production양 측정을 통해 항염 효과를 확인하였다. nitric oxide production 측정을 통해 본 발명에 의한 조성물의 항염 효능을 확인한 결과, lactobacillus paracasei extract은 500 ug/ml 농도에서 약 30% 억제, weissella confusa extract은 1000 ug/ml 농도에서 약 90% 억제, Bacillus flexus extract은 1000 ug/ml 농도에서 약 90% nitric oxide 억제 효능을 나타내었고, positive control인 dexamethasone보다 높은 효능이 확인되어 항염증 효능에 우수함을 확인하였다.
2) nitric oxide production 측정을 통한 균주 대사산물의 항염효과 실험
lactobacillus paracasei, weissella confusa, Bacillus flexus 각각의 배양액에서 얻어진 metabolite인 GABA, Ectoine, Cis-vaccenic acid를 위와 같은 방법으로 항염효능을 확인하였고, 그 결과 값을 도 5, 도 6에 나타내었다. GABA은 1000 ug/ml 농도에서 약 50% 억제, Ectoine은 1000 ug/ml 농도에서 약 15% 억제, Cis-Vaccenic acid은 50 ug/ml 농도에서 약 85% NO 생성을 억제됨을 확인하였다. 각각의 배양액에서 얻어진 대사산물 또한 항염효능이 우수함을 확인하였다.
3) 균주 대사산물의 콜라겐 조절 및 주름개선 효능 확인 실험
HaCat cell line을 10 % FBS(fetal bovine serum)와 1X Penicillin/streptomycin(P/S)이 함유된 DMEM에 maintain하고 세포를 counting한 뒤 6 cm2 plate에 2x105 cell/well이 되도록 희석하여 seeding 하고 5 % CO2, 37
Figure 112021023451259-pat00004
incubator에서 24시간 incubation 한다. 실험 2일차에 또 다른 세포인 Fibroblast cell line을 10 % FBS(fetal bovine serum)와 1X Penicillin/streptomycin(P/S)이 함유된 FBM에 maintain하고 세포를 counting한 뒤 24well plate에 3x104 cell/well이 되도록 희석하여 seeding 하고 5 % CO2, 37
Figure 112021023451259-pat00005
incubator에서 24시간 incubation 한다. 배양한 세포(HaCaT)의 상등액을 제거하고, PBS wash 후 PBS를 1ml 넣고 UV를 15mJ/cm2 조사하였다. PBS를 제거하고, starvation step을 위해 1% FBS를 포함하는 DMEM media 교체 후 5 % CO2, 37
Figure 112021023451259-pat00006
incubator에서 24시간 incubation 하였다. UV조사를 한 HaCaT 세포의 상등액과 조사하지 않은 HaCaT 세포의 상등액을 각각 50ml 튜브에 옮기고 독성이 없는 농도 범위 기준으로 설정한 후 HaCat 세포의 상등액을 이용하여 시험물질을 각각 희석하였다. 배양한 세포 Fibroblast의 상등액을 제거한다. HaCaT 상등액을 이용하여 만든 sample을 배양한 세포 Fibroblast에 농도별로 처리 후 5 % CO2, 37
Figure 112021023451259-pat00007
incubator에서 24시간 incubation 하였다. 배양한 세포 Fibroblast의 상등액을 96 well plate에 150ul씩 넣었다. Human Total MMP-1 ELISA kit(DY901)를 활용하여 Fibroblast 상등액 내에 존재하는 MMP-1의 양을 정량 하였으며, Procollagen Type I C-Peptide EIA Kit 활용하여 assay를 수행하였다.
GABA, Ectoine을 농도별로 각각 처리하여 Collagen 분해 효소인 MMP-1 발현량이 감소하는지 여부의 확인을 통해 대사산물들의 주름개선 효능을 확인하였다. MMP-1 활성을 측정한 결과, 도 7에 나타나는 바와 같이 Ectoine 시료는 최고 농도 20ug/ml에서 대조군 대비 약 15% 정도의 MMP-1 활성의 저해를 확인하였다. 또한, 도 8에 나타난 바와 같이 Procollagen 증가 여부를 확인 한 결과 GABA는 300ug/ml 농도에서 control 대비 약 2 배의 procollagen 양이 증가하는 것을 확인되었고, Ectoine는 control대비 20ug/ml 농도에서 약 1.3 배의 procollagen 양이 증가하는 것을 확인하였다.

Claims (12)

  1. 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 발효물 및/또는 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 발효물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 발효물을 유효성분으로 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. (a)펩톤, 이스트, 탄소원의 배양액을 형성하는 단계;
    (b)상기 배양액에 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus), 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 중 어느 하나 이상을 배양하여 미생물발효물을 형성하는 단계;
    (c) 상기 배양액과 상기 미생물발효물을 혼합 후 배양하는 단계;
    를 포함하며, 바실루스 플렉수스(Bacillus flexus) 발효물 및 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa) 발효물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 발효물을 유효성분으로 포함하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 (a)에 염화나트륨 또는 마그네슘포스테이트를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 (c)단계의 배양시간은 30시간 이상인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법.
  9. 제6항에 있어서,
    락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)와 와이셀라 컨퓨사(Weissella confusa)의 배양액의 이스트는 3~10g/L이고, 탄소원의 농도는 5~15g/L인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법.
  10. 제6항에 있어서,
    바실루스 플렉수스(Bacillus flexus)의 배양액의 이스트는 0.05~1g/L이고, 탄소원의 농도는 0.01~0.5g/L인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법.
  11. 제6항에 있어서,
    상기 배양액과 미생물발효물의 중량비는 1 : 8 내지 1 : 12인 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 화장료 조성물 제조방법.
  12. 제6항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제조방법에 의하여 제조된 미생물을 이용한 화장료 조성물.
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