KR102558085B1 - 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 - Google Patents

비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102558085B1
KR102558085B1 KR1020210119866A KR20210119866A KR102558085B1 KR 102558085 B1 KR102558085 B1 KR 102558085B1 KR 1020210119866 A KR1020210119866 A KR 1020210119866A KR 20210119866 A KR20210119866 A KR 20210119866A KR 102558085 B1 KR102558085 B1 KR 102558085B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
skin
extract
bifidobacterium animalis
licorice
Prior art date
Application number
KR1020210119866A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20230037108A (ko
Inventor
임용환
백채윤
김미선
김민지
강승현
박명삼
Original Assignee
코스맥스 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 코스맥스 주식회사 filed Critical 코스맥스 주식회사
Priority to KR1020210119866A priority Critical patent/KR102558085B1/ko
Priority to PCT/KR2022/013369 priority patent/WO2023038404A1/ko
Publication of KR20230037108A publication Critical patent/KR20230037108A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102558085B1 publication Critical patent/KR102558085B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/515—Animalis
    • A23Y2300/21—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Abstract

신규한 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 DS008 균주, 상기 균주를 이용한 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합발효추출물, 및 이들의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다. 일 양상에 따른 신규 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 또는 상기 균주를 이용한 천연물 복합발효추출물에 의하면, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 염증 개선, 아토피 개선, 및 가려움증 억제 효과가 있으므로, 피부 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.

Description

비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도{Bifidobacterium animalis subsp. lactis strain and its use for improving skin conditions}
신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액, 이를 이용한 천연물 복합발효추출물 및 이들의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다.
피부의 생태계는 미생물에게 다양한 형태의 서식처를 제공하며, 광범위한 미생물들이 살고 있다. 숙주인 인간은 이들과 공생관계를 이루고 있으며, 이들은 숙주에 많은 긍정적인 영향을 미친다고 알려져 있다. 피부는 함입부, 특화 되어있는 틈새 등 다양한 형태의 서식처를 구성하고 있으며, 넓은 분포의 미생물이 자랄 수 있도록 돕는다. 기본적으로 피부는 물리적인 막을 형성하며, 외부로부터 잠재적인 위험요소 및 독성물질들로부터 방어를 하도록 도와준다. 피부는 외부환경과의 접속 지점이 되며, 다양한 미생물들(진균, 세균, 바이러스 및 작은 유충)의 집합소이기도 하다. 물리적, 화학적 기능의 선택에 맞게 미생물들은 특화된 틈새에 적응하여 서식처를 마련한다. 일반적으로 피부는 차갑고, 산성 성질을 나타내며, 건조된 상태로 유지된다. 구조적으로 표피(epidermis)는 피부 장벽을 이루고 있으며, 미생물과 독소가 침투하는 것을 차단하고, 수분을 유지하는 중요한 역할을 한다. 표피의 최상위층은 각질층(stratum corneum)으로 구성되어있다. 표피는 일명 '벽돌과 몰탈 구조'라고 불리는 형태를 띠고 있는데, 피부 조직은 계속적인 자가 회복 과정을 거치고, 분화 과정의 마지막을 거친 비늘(squames)은 끊임없이 피부 조직에서 탈락되는 과정을 반복하게 된다.
프로바이오틱스(Probiotics)는 인체에 유익한 작용을 하는 미생물을 총칭하는 말로 우리 몸에 유익(benefit)을 주는 미생물을 말한다. 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균으로 알려져 있다. 프로바이오틱스는 인체에 여러 가지 유익 작용을 통해 효과적인 효능이 발생되는 것으로 보고되었지만, 피부상재균과 피부의 상호관계에 대한 연구는 미비한 실정이다.
이에, 피부 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 피부상재균의 개발이 필요한 실정이다.
KR 10-2136346 B1
일 양상은 신규한 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) 균주를 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 상기 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 또는 상기 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일 양상은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) 균주를 제공한다.
상기 균주는 분리된 것일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "분리된(isolated)"이란 자연계에 존재하는 것이 아닌 인위적으로 분리하여 이용가능한 것을 의미한다. 상기 균주는 개 피부로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 균주는 개 각질세포로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 균주는 개 각질세포를 TSA(Tryptic Soy Agar)에 접종하여 배양된 콜로니를 순수 분리 배양하는 방법에 의해 분리된 균주일 수 있다.
상기 균주는 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.)에 속하는 균주일 수 있다.
상기 균주는 서열번호 1과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "서열 동일성(sequence identity)"은 특정 비교 영역에서 양 서열을 최대한 일치되도록 얼라인시킨 후 서열간의 아미노산 잔기 또는 염기의 동일한 정도를 의미한다. 서열 동일성은 당업계에 공지된 방법에 따라 확인될 수 있다. 상기 서열 동일성의 퍼센트는 공지의 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며, 일례로 BLASTN(NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM(DNASTAR Inc) 등을 들 수 있다.
상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) 균주는 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 기탁번호로 기탁된 균주는 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 DS008 균주일 수 있다.
상기 균주는 피부 상태 개선 효과를 갖는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 상태 개선은 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 염증 개선, 아토피 개선, 및 가려움증 억제 중 1종 이상일 수 있다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공한다.
상기 균주의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 "용해물"과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다. 상기 파쇄액은 파쇄액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 상호교환적으로 사용될 수 있고, 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며, 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 상기 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로, 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간 동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물, 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다. 예를 들어, 상기 배양액은 배지(예를 들면, R2A 배지, RCM 배지 또는 TSA 배지)에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 120시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액으로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물은 생물학적으로 순수한 것일 수 있다. 상기 균주는 순수배양(pure culture)에 의해 얻은 것일 수 있다.
또 다른 양상은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주로 천연물 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 제공한다.
상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주는 상기 일 양상에 따른 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 균주는 개 피부로부터 분리된 것일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 균주는 서열번호 1과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 상기 균주는 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 균주는 DS008 균주일 수 있다.
상기 천연물 복합 추출물은 감초, 엉겅퀴 및 인동 중 1종 이상의 복합 추출물일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 천연물 복합 추출물은 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물일 수 있다. 따라서, 상기 복합발효추출물은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물일 수 있다.
상기 "감초(licorice)"는 감초속(Glycyrrhiza sp.)에 속하는 식물일 수 있다. 상기 감초는 Glycyrrhiza uralensis Fischer, Glycyrrhiza glabra L., 또는 Glycyrrhiza inflate Batal일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일 구체예에서, 상기 감초는 Glycyrrhiza uralensis Fischer 일 수 있다.
상기 "엉겅퀴(Ussuri thistle)"는 Cirsium japonicum var. maackii 일 수 있다.
상기 "인동(honeysuckle)"은 "금은화(lonicer aflower)"라고도 하며, Lonicera japonica일 수 있다.
상기 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물에 있어서, 감초, 엉겅퀴 및 인동은 각각 그의 전초, 뿌리, 줄기, 잎 등 임의의 부위를 사용할 수 있다. 일 구체예에서, 상기 엉겅퀴는 엉겅퀴 뿌리를 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 인동은 인동 줄기를 사용할 수 있다. 따라서, 상기 복합 추출물은 감초, 엉겅퀴 뿌리 및 인동 줄기의 복합 추출물일 수 있다.
상기 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물에 있어서, 감초, 엉겅퀴 및 인동의 혼합 중량비는 1~100:1~100:1~100, 1~50:1~50:1~50, 1~20:1~20:1~20, 1~10:1~10:1~10, 또는 1~5:1~5:1~5, 예를 들어 1:5:4일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 "추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출 조건, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 추출함으로써 얻어진 물질을 모두 포함하며, 천연물의 성분을 추출한 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질도 포함한다. 따라서, 상기 추출물은 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
상기 추출 방법은 열수 추출, 에탄올 추출, 가열 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 아임계 추출 등 공지된 천연물 추출 방법을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일 구체예에서, 상기 추출 방법은 열수 추출일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 추출 방법은 중탕 추출일 수 있다.
상기 추출 용매는 물, 유기 용매, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 상기 물은 증류수 또는 정제수일 수 있다. 상기 유기 용매는 C1 내지 C6의 저급 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름 중 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일 구체예에서, 상기 추출물의 추출 용매는 물일 수 있다. 따라서, 상기 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물은 열수추출물일 수 있다.
상기 추출 조건은 추출 시간, 추출 온도 등 천연물의 성분을 추출하기 위한 조건을 의미한다. 상기 추출 시간은 30분 내지 120시간, 30분 내지 100시간, 30분 내지 80시간, 30분 내지 60시간, 30분 내지 40시간, 30분 내지 20시간, 30분 내지 10시간, 2시간 내지 120시간, 2시간 내지 100시간, 2시간 내지 80시간, 2시간 내지 60시간, 2시간 내지 40시간, 2시간 내지 20시간, 또는 2시간 내지 10시간일 수 있으나, 추출 용매, 추출 온도 등 다른 조건에 따라 적절히 선택할 수 있다. 상기 추출 온도는 10 내지 150℃, 10 내지 120℃, 10 내지 100℃, 10 내지 80℃, 20 내지 150℃, 20 내지 120℃, 20 내지 100℃, 20 내지 80℃, 20 내지 60℃, 20 내지 40℃, 또는 상온일 수 있으나, 추출 용매, 추출 시간 등 다른 조건에 따라 적절히 선택할 수 있다.
상기 복합발효추출물은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득될 수 있다. 일 구체예에서, 상기 복합발효추출물은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 배양액에 상기 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 첨가하고 발효시킴으로써 수득될 수 있다. 상기 균주 배양액에 상기 복합 추출물은 발효되기에 충분한 양으로 첨가될 수 있으며, 예를 들어, 0.01 내지 20 중량%, 0.01 내지 10 중량%, 0.01 내지 5 중량%, 0.1 내지 20 중량%, 0.1 내지 10 중량%, 0.1 내지 5 중량%, 1 내지 20 중량%, 1 내지 10 중량%, 또는 1 내지 5 중량%로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 발효 조건은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주를 이용한 발효에 적절한 온도 및 시간을 선택할 수 있다. 예를 들어, 상기 발효는 20 내지 40℃에서 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 발효는 1 내지 200시간, 1 내지 180시간, 24 내지 200시간, 24 내지 180시간, 24 내지 120시간, 48 내지 200시간, 48 내지 180시간, 또는 48 내지 120시간 동안 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다.
상기 발효 배지는 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주를 이용한 발효에 적절한 배지를 선택할 수 있다. 상기 배지는 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주를 배양할 수 있는 공지된 배지 또는 통상적인 배지를 사용할 수 있다.
또 다른 양상은 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물; 또는 상기 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물의 용도를 제공한다. 상세하게는, 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물; 또는 상기 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 용도 또는 조성물에 있어서, 상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주는 상기 일 양상에 따른 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 균주는 개 피부로부터 분리된 것일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 균주는 서열번호 1과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 상기 균주는 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 균주는 DS008 균주일 수 있다.
상기 균주의 용도는 피부 상태 개선, 피부 미용 개선, 피부 질환의 예방, 개선 또는 치료를 포함할 수 있다.
상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 염증 개선, 아토피 개선, 및 가려움증 억제 중 1종 이상일 수 있다.
상기 균주는 HAS3(hyaluronic acid synthase 3) 및 필라그린(Filaggrin) 중 1종 이상의 발현을 증가시키거나; IL-1α 및 IL-6 중 1종 이상의 발현을 감소시키는 것일 수 있다.
"피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.
"피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다. 피부　보습　효과는 피부의 주름 개선, 탄력도 증가에 도움을 줄 수 있다.
"염증 개선"은 "염증 억제", "항염증"과 혼용될 수 있으며, 면역 반응이 완화되어 NO 생성이 억제되는 모든 작용을 의미할 수 있다.
"피부 질환"은 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환 또는 피부 염증일 수 있다. 용어 "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다. 용어 "개선"은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
상기 피부 염증성 질환은 피부염, 아토피 피부염, 소양증(가려움증), 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것일 수 있다. 상기 피부 염증성 질환은 피부염, 아토피 피부염 및 소양증(가려움증) 중 1종 이상일 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물; 또는 상기 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함함으로써, HAS3 및 필라그린의 발현을 증가시켜 피부 장벽 강화 및 피부 보습 효과를 나타낼 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 상기 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물; 또는 상기 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함함으로써, 염증성 사이토카인(예: IL-1α 및 IL-6)의 발현을 감소시켜, 피부 염증 개선, 또는 피부 염증성 질환, 아토피, 가려움증 등의 피부 질환 예방, 개선 또는 치료 효과를 나타낼 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 균주는 피부 상태 개선 효과를 갖는 다른 균주, 예를 들어, 비피도박테리움 속에 속하는 균주와 함께 사용되어 시너지 효과를 나타낼 수 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 상기 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물, 또는 상기 복합발효추출물을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물, 또는 복합발효추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.
상기 조성물은 액체 상태 또는 건조 상태인 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 건조 분말 형태일 수 있다.
상기 조성물을 건조 상태로 제조하는 건조 방법은 당업계에서 일반적으로 사용되는 방법을 사용할 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. 상기 건조 방법의 비제한적인 예는, 공기 건조 방법, 자연 건조 방법, 분무 건조 방법, 동결 건조 방법 등이 있다. 이들 방법은 단독으로 사용하거나 적어도 두 가지 방법을 함께 사용할 수 있다.
상기 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물, 또는 복합발효추출물의 열화(deterioration)를 감소시키기에 충분한 유효량의 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 결합제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 화장품학적으로, 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 담체와 함께 제형화되어 화장품, 약품, 식품 첨가제 등으로 제공될 수 있다.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 명세서에 개시된 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 기능성 첨가물 등을 추가로 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 분산제, 유화제, 방부제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 특정 제형에 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 가용화 제형, 유화 제형, 또는 분산 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제; 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제; 비타민 C, 마그네슘아스코빌포스페이트, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산; 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 만니톨, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제 등일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 연고제 등일 수 있다.
상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물, 또는 복합발효추출물 단독을 사용하거나, 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태, 피부 상처, 또는 피부 염증과 관련된 상태일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고, 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 개선을 필요로 하는 개체, 예를 들어 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 염증 개선, 아토피 개선 또는 가려움증 억제 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
일 양상에 따른 신규 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 또는 상기 균주를 이용한 천연물 복합발효추출물에 의하면, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 염증 개선, 아토피 개선, 및 가려움증 억제 효과가 있으므로, 피부 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.
도 1은 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 HAS3의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; RA: 양성대조군으로서 레티노산 첨가군.
도 2는 실시예 2의 균주 배양액과 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 HAS3의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; DS008: 실시예 2의 균주 배양액 첨가군; RA: 양성대조군으로서 레티노산 첨가군.
도 3은 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 필라그린의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군.
도 4는 실시예 2의 균주 배양액과 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 필라그린의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; DS008: 실시예 2의 균주 배양액 첨가군.
도 5는 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 IL-1α의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 염증 미유도 및 미첨가군; (+): 염증 유도 및 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; Dex: 양성대조군으로서 덱사메타손 첨가군.
도 6은 실시예 2의 균주 배양액과 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 IL-1α의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 염증 미유도 및 미첨가군; (+): 염증 유도 및 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; DS008: 실시예 2의 균주 배양액 첨가군; Dex: 양성대조군으로서 덱사메타손 첨가군.
도 7은 실시예 2의 균주 배양액과 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 IL-6의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 염증 미유도 및 미첨가군; (+): 염증 유도 및 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; Dex: 양성대조군으로서 덱사메타손 첨가군.
도 8은 실시예 2의 균주 배양액과 실시예 3의 천연물 발효액을 각질형성세포에 처리시 IL-6의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다. None: 염증 미유도 및 미첨가군; (+): 염증 유도 및 미첨가군; Medium: R2A 배지 첨가군; Complex: 실시예 3의 천연물 발효액 첨가군; DS008: 실시예 2의 균주 배양액 첨가군; Dex: 양성대조군으로서 덱사메타손 첨가군.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정
건강한 개의 피부에서 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주를 분리 및 동정하였다.
구체적으로, 건강한 개의 피부를 멸균 증류수로 세척하여 확보된 샘플, 즉, 개 각질세포(canine epidermal keratinocyte)를 TSA(Tryptic Soy Agar) 배지(BD)에 접종하였다. 접종 후 48시간 동안 28℃ 인큐베이터에서 배양한 뒤 형성된 집락 100개를 순수 분리 배양하여, 48시간 동안 28℃ 인큐베이터에서 재배양 하였다.
배양이 완료된 집락은 16S rRNA 유전자 서열 동정을 실시하였다. 이때 프라이머는 박테리아에만 반응하여 증폭하도록 고안된 것을 사용하였다. PCR 증폭은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 75℃ 1분30초씩 30 사이클로 실시 하였으며, 마지막으로 72℃에서 8분간 처리한 후 4℃에서 보관하였다. PCR 반응이 끝난 뒤 분리 배양된 종들의 DNA 서열은 ABI-3730XL(ABI, USA)를 이용하여 결정하였다.
분리 배양된 미생물 집락 중 결정된 16S rRNA 부위의 염기서열을 미국 국립생물정보센터(NCBI, National Center for Biotechnology Information) 홈페이지에서 제공되는 BLAST 프로그램을 사용하여 등록된 다른 균주들과 비교 분석 하였을 때 상동성 99% 이하의 신규 미생물 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) 균주(이하 "DS008"라 함)를 선별하였다. 선별된 DS008 균주를 2021년 5월 28일자로 한국 미생물 보존센터(KCCM)에 기탁하여 기탁번호 KCCM12993P를 부여 받았다. DS008 균주는 서열번호 1(complementary DNA)의 16S rRNA 서열을 갖는다.
실시예 2. DS008 균주 배양액의 제조
실시예 1의 DS008 균주를 R2A(Reasoner's 2A) 배지(Becton Dickinson, Cockeysville, MD)에 접종하여 37℃, 혐기 조건에서 72시간 배양하였다.
실시예 3. DS008 균주를 이용한 천연물 발효액의 제조
증류수 1 L당 감초 10 g, 엉겅퀴 뿌리 50 g 및 인동 줄기 40 g를 넣고, 1 기압 이상의 압력, 112℃에서 2시간 30분 동안 중탕추출하여 천연물 복합 추출물을 얻었다. R2A 배지에 상기 천연물 복합 추출물 5%(w/w)를 첨가하고 실시예 1의 DS008 균주를 접종하여 72시간 배양하고, 상층액을 수득하고 여과하여 발효액을 제조하였다.
실험예 1. 피부 장벽 강화 및 피부 보습 활성 분석 - HAS3 및 Filaggrin 발현 증가 확인
DS008 균주 배양액 또는 이를 이용한 천연물 발효액이 피부 장벽 강화 및 피부 보습 활성에 미치는 영향을 분석하기 위해, HAS3(Hyaluronic acid synthase 3) 및 필라그린(Filaggrin)의 발현을 확인하였다.
구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 상기 실시예 2의 배양액 1%(w/w) 또는 실시예 3의 발효액 1%(w/w)을 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 양성대조군으로는 레티노산(Retinoic acid, RA) 1 uM을 사용하였다. 피부 장벽 강화 및 피부 보습과 관련된 인자인 HAS3 및 필라그린에 대한 프라이머를 사용하여 실시간(real-time) PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. HAS3 및 필라그린의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 1, 2, 3 및 4에 각각 나타내었다.
도 1 및 2는 각질형성세포에서 HAS3의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다.
도 3 및 4는 각질형성세포에서 필라그린의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다.
도 1, 2, 3 및 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 3의 천연물 발효액은 HAS3 및 필라그린의 발현을 유의적으로 증가시켰다. 특히, 실시예 3의 천연물 발효액은 실시예 2의 균주 배양액 보다 HAS3 및 필라그린의 발현량이 높음을 확인할 수 있었다.
이러한 결과는 DS008 균주 및 이를 이용한 천연물 발효액이 피부 장벽 강화 및 피부 보습에 유용하게 사용될 수 있음을 의미한다.
실험예 2. 항염증, 항아토피 및 가려움증 억제 활성 분석 - 염증성 사이토카인 발현 감소 확인
DS008 균주 배양액 또는 이를 이용한 천연물 발효액이 항염증, 항아토피 및 가려움증 억제 활성이 있는지 여부를 분석하기 위해, 염증성 사이토카인 IL-1α 및 IL-6의 발현을 확인하였다.
구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 배지는 3~4일마다 교환해 주며 세포가 과다하게 증식되었을 때는 계대배양 하였다. 이후에 상기 세포를 5x105/웰로 분주하고 배양 24시간 후, 인산 완충 식염수 용액(PBS)으로 세척하였다. FBS를 포함하지 않은 DMEM 배지가 들어있는 각 웰에 세포를 분주하고, Poly I:C 10 ㎍/㎖, 및 IL-4를 10 ng/㎖로 첨가하여 각질형성 세포주에 염증을 유도하였다. 다음으로 상기 실시예 2의 배양액 또는 실시예 3의 발효액을 1%(w/w) 농도로 처리한 후, 4시간 동안 추가 배양하였다. 양성대조군으로는 덱사메타손(dexamethasone) 1 μM을 사용하였다. IL-1α 및 IL-6에 대한 프라이머를 사용한 것만을 제외하고는 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 발현량을 분석하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 5 내지 도 8에 나타내었다.
도 5 및 6은 각질형성세포에서 IL-1α의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다.
도 7 및 8은 각질형성세포에서 IL-6의 상대적인 발현 수준을 나타낸 결과이다.
도 5, 6, 7 및 8에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 균주 배양액은 IL-1α 및 IL-6의 발현을 유의적으로 감소시켰다. 또한, 실시예 3의 천연물 발효액은 IL-1α 및 IL-6의 발현을 유의적으로 감소시켰다. 특히, 실시예 3의 천연물 발효액은 실시예 2의 균주 배양액 보다 IL-1α 및 IL-6의 발현 감소량이 크다는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과는 DS008 균주 및 이를 이용한 천연물 발효액이 피부 염증성 질환의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 아토피의 예방, 개선, 또는 치료, 또는 가려움증(소양증)의 예방, 치료 또는 개선에도 유용하게 사용될 수 있음을 의미한다.
종합하면, 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 DS008 균주 또는 이를 이용한 천연물 발효액은 HAS3 및 필라그린의 발현을 증가시키며; IL-1α 및 IL-6의 발현을 감소시킴을 확인하였다. 따라서, DS008 균주 및 이를 이용한 천연물 발효액은 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 염증 개선, 아토피 개선, 피부 가려움증 억제 효과를 가짐을 알 수 있었다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다.
한국미생물보존센터(국외) KCCM12993P 20210528
SEQUENCE LISTING <110> Cosmax, INC. <120> Bifidobacterium animalis subsp. lactis strain and its use for improving skin conditions <130> PN139626KR <160> 1 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 1413 <212> DNA <213> Bifidobacterium animalis subsp. lactis <400> 1 gctcaggatg aacgctggcg gcgtgcttaa cacatgcaag tcgaacggga tccctggcag 60 cttgctgtcg gggtgagagt ggcgaacggg tgagtaatgc gtgaccaacc tgccctgtgc 120 accggaatag ctcctggaaa cgggtggtaa taccggatgc tccgctccat cgcatggtgg 180 ggtgggaaat gcttttgcgg catgggatgg ggtcgcgtcc tatcagcttg ttggcggggt 240 gatggcccac caaggcgttg acgggtagcc ggcctgagag ggtgaccggc cacattggga 300 ctgagatacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca caatgggcgc 360 aagcctgatg cagcgacgcc gcgtgcggga tggaggcctt cgggttgtaa accgcttttg 420 ttcaagggca aggcacggtt tcggccgtgt tgagtggatt gttcgaataa gcaccggcta 480 actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta gggtgcgagc gttatccgga tttattgggc 540 gtaaagggct cgtaggcggt tcgtcgcgtc cggtgtgaaa gtccatcgcc taacggtgga 600 tctgcgccgg gtacgggcgg gctggagtgc ggtaggggag actggaattc ccggtgtaac 660 ggtggaatgt gtagatatcg ggaagaacac caatggcgaa ggcaggtctc tgggccgtca 720 ctgacgctga ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg 780 ccgtaaacgg tggatgctgg atgtggggcc ctttccacgg gtcccgtgtc ggagccaacg 840 cgttaagcat cccgcctggg gagtacggcc gcaaggctaa aactcaaaga aattgacggg 900 ggcccgcaca agcggcggag catgcggatt aattcgatgc aacgcgaaga accttacctg 960 ggcttgacat gtgccggatc gccgtggaga cacggtttcc cttcggggcc ggttcacagg 1020 tggtgcatgg tcgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1080 caaccctcgc cgcatgttgc cagcgggtga tgccgggaac tcatgtggga ccgccggggt 1140 caactcggag gaaggtgggg atgacgtcag atcatcatgc cccttacgtc cagggcttca 1200 cgcatgctac aatggccggt acaacgcggt gcgacacggt gacgtggggc ggatcgctga 1260 aaaccggtct cagttcggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaaggcg gagtcgctag 1320 taatcgcgga tcagcaacgc cgcggtgaat gcgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt 1380 caagtcatga aagtgggtag cacccaaagc cgg 1413

Claims (11)

  1. 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) DS008 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하는 피부 장벽 강화 또는 피부 보습용 화장료 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것인, 화장료 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, HAS3(hyaluronic acid synthase 3) 및 필라그린(Filaggrin) 중 1종 이상의 발현을 증가시키는 것인 화장료 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 발효는 R2A(Reasoner's 2A) 배지에서 수행되는 것인 화장료 조성물.
  5. 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) DS008 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하는 피부 염증 개선, 아토피 개선, 또는 가려움증 억제용 화장료 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서, IL-1α 및 IL-6 중 1종 이상의 발현을 감소시키는 것인 화장료 조성물.
  7. 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) DS008 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하며, IL-1α 및 IL-6 중 1종 이상의 발현을 감소시키는 것인, 피부 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) DS008 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하는 피부 장벽 강화 또는 피부 보습용 건강기능식품 조성물.
  9. 기탁번호 KCCM12993P로 기탁된 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) DS008 균주로 감초, 엉겅퀴 및 인동의 복합 추출물을 발효시킴으로써 수득된 복합발효추출물을 포함하는 피부 염증 개선, 아토피 개선, 또는 가려움증 억제용 건강기능식품 조성물.
  10. 삭제
  11. 삭제
KR1020210119866A 2021-09-08 2021-09-08 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 KR102558085B1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210119866A KR102558085B1 (ko) 2021-09-08 2021-09-08 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
PCT/KR2022/013369 WO2023038404A1 (ko) 2021-09-08 2022-09-06 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210119866A KR102558085B1 (ko) 2021-09-08 2021-09-08 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20230037108A KR20230037108A (ko) 2023-03-16
KR102558085B1 true KR102558085B1 (ko) 2023-07-24

Family

ID=85507470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210119866A KR102558085B1 (ko) 2021-09-08 2021-09-08 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102558085B1 (ko)
WO (1) WO2023038404A1 (ko)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040013706A1 (en) 2000-10-06 2004-01-22 Markus Baur Use of probiotic lactic acid bacteria for balancing the skin's immune system
US20100226892A1 (en) 2009-03-04 2010-09-09 L'oreal Use of probiotic microorganisms to limit skin irritation
WO2019204475A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Forte Biosciences, Inc Compositions for the treatment of skin conditions
KR102136346B1 (ko) * 2019-12-23 2020-07-22 주식회사 락토메이슨 한국인 영유아 유래 신규한 비피도박테리움 애니멀리스 락티스 lm1017을 유효성분으로 포함하는, 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물
KR102171334B1 (ko) 2020-03-12 2020-10-29 서울대학교산학협력단 약콩 발효물을 포함하는 피부 개선용 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011126295A2 (ko) * 2010-04-06 2011-10-13 (주)아모레퍼시픽 약용 잎을 활용한 쌈 발효법 및 이를 활용한 피부 외용제 조성물
PL3489350T3 (pl) * 2017-11-27 2022-01-24 Ewelina Sosnowska-Turek Szczep Bifidobacterium animalis AMT30 i kompozycja zawierająca szczep Bifidobacterium animalis AMT30
KR102074384B1 (ko) * 2019-01-28 2020-02-06 주식회사 락토메이슨 신규한 비피도박테리움 애니멀리스 락티스 lm1017을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선 및 피부 탄력용 화장료 조성물
KR102346078B1 (ko) * 2020-01-15 2022-01-03 경희대학교 산학협력단 엉겅퀴 발효물 제조방법 및 이의 방법으로 제조된 항염증용 조성물

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040013706A1 (en) 2000-10-06 2004-01-22 Markus Baur Use of probiotic lactic acid bacteria for balancing the skin's immune system
US20100226892A1 (en) 2009-03-04 2010-09-09 L'oreal Use of probiotic microorganisms to limit skin irritation
WO2019204475A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Forte Biosciences, Inc Compositions for the treatment of skin conditions
KR102136346B1 (ko) * 2019-12-23 2020-07-22 주식회사 락토메이슨 한국인 영유아 유래 신규한 비피도박테리움 애니멀리스 락티스 lm1017을 유효성분으로 포함하는, 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물
KR102171334B1 (ko) 2020-03-12 2020-10-29 서울대학교산학협력단 약콩 발효물을 포함하는 피부 개선용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GenBank Accession No. MN435721.1(2019.09.16.)*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230037108A (ko) 2023-03-16
WO2023038404A1 (ko) 2023-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102273233B1 (ko) 마이크로코커스 루테우스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102273232B1 (ko) 마이크로코커스 리래 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102273950B1 (ko) 큐티박테리움 아크네스 아종 아크네스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102197174B1 (ko) 큐티박테리움 그래뉼로섬 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102286076B1 (ko) 스타필로코커스 갈리나룸 st-4 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102286077B1 (ko) 스타필로코커스 에피더미디스 st-6 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102273234B1 (ko) 코쿠리아 바리안스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102558085B1 (ko) 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102286075B1 (ko) 스타필로코커스 렌투스 st-2 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102430927B1 (ko) 병풀 유래 락토바실러스 플란타룸 bcrc-l43 균주 및 그의 항염증, 항알레르기, 피부 미생물 조절, 피부 진정 용도
KR102583365B1 (ko) 마이크로코커스 안타르크티쿠스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102368736B1 (ko) 마이크로박테리움 올레이보란스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102609655B1 (ko) 스트렙토코커스 소브리너스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102609657B1 (ko) 코리네박테리움 제로시스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102336747B1 (ko) 판토에아 아나나티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102199062B1 (ko) 스타필로코커스 자일로서스 st-10 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102195998B1 (ko) 스타필로코커스 시뮬란스 st-9 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20240010585A (ko) 후디시움 저그렌디스 버렌거 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20230130446A (ko) 엔히드로박테르 아에로사쿠스 v-5 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20230149082A (ko) 세디미니박테리움 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20230024078A (ko) 마이크로코커스 코니이 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20240002753A (ko) 젓갈리바카 단국엔시스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20230172327A (ko) 마이크로코커스 테리우스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20240016182A (ko) 스트렙토코커스 파이오제네스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20240016184A (ko) 스트렙토코커스 룹네리 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant