KR20200142633A

KR20200142633A - 코코넛 추출물을 함유하는 피부 염증 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20200142633A
Application number: KR1020190069560A
Authority: KR
Inventors: 강웅철; 조수현; 박찬현; 이미혜; 이창민
Original assignee: 주식회사 바디프랜드
Priority date: 2019-06-12
Filing date: 2019-06-12
Publication date: 2020-12-23
Also published as: KR102249432B1

Abstract

코코넛 추출물을 함유하는 피부 미백, 항주름, 또는 보습용 조성물에 관한 것으로, 일 양상에 따른 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물은 NO 생성을 억제하고, 피부에 염증 및 여드름을 일으키는 상재균에 대한 항균 활성이 있을 뿐만 아니라, 염증성 사이토카인을 억제할 수 있는 효과가 있어, 피부 염증 또는 피부 진정에 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다.

Description

코코넛 추출물을 함유하는 피부 염증 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating skin inflammation comprising Cocos nucifera extract}

코코넛 추출물을 함유하는 피부 염증 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

피부가 과도한 자외선이나 오염물질 등에 노출되거나 스트레스, 질병 등의 요인으로 인해 체내의 자유라디칼이 활성화되면 피부 세포 및 조직의 손상을 촉진시켜 피부 주름의 증가 등 피부노화 증상이 가속화된다.

염증은 상처나 질병에 반응하는 인체의 면역 반응으로, 자외선이나 활성산소, 자유라디칼 등의 산화적 스트레스 등이 염증성 인자를 활성화시켜 각종 질병 및 피부의 노화를 일으킨다. 혈관 활성 폴리펩타이드인 키닌(kinin), 플라스민(plasmin), 보체(complement) 등이 혈관 확장과 수축 및 주화성(chemotaxis) 작용을 하고, 그 외에 인터루킨-6(IL-6) 등과 같은 림포카인과 아라키돈산(arachidonic acid) 등이 염증 반응을 담당한다. 아라키돈산은 싸이클로 옥시게나아제(cyclooxygenase) 혹은 리포옥시게나아제(lipooxygenase)의 2가지 경로를 거쳐 염증 매개체인 프로스타글란딘(prostaglandin), 류코트리엔(lukotriene)들로 대사되어 다양한 염증 반응을 매개한다.

한편, 염증을 소실시키기 위해 염증원의 제거, 생체 반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 것을 항염제라 한다. 현재까지 항염의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계 및 스테로이드계 물질이 있으나, 이들 물질은 피부에 대한 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적으로 염증 완화 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.

따라서 최근에는 천연물을 활용한 소재의 개발을 위한 연구가 활발히 진행되고 있으며 인체에 안전하면서도 피부 염증을 개선할 수 있는 소재의 개발에 대한 요구가 증가하고 있다.

일 양상은 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 함유하는 피부 염증의 예방, 개선, 또는 치료, 또는 피부 진정을 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

다른 양상은 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 함유하는 피부 염증성 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 피부 외용제를 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 함유하는 피부 염증성 질환의 예방, 개선, 또는 치료를 위한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 함유하는 피부 염증성 질환의 예방, 개선, 또는 치료를 위한 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

일 양상은 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 함유하는 탈모 예방, 개선, 또는 치료, 또는 발모 촉진을 위한 조성물을 제공하는 것이다.

본 명세서에서 "코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium)"은 "발아 후 코코넛의 배아 또는 그의 일부분"과 상호 호환적으로 사용되고, 코코넛의 발아 동안 배아의 원위로부터 형성되는 스폰지 흡수성 조직(spongy absorbent tissue)를 의미할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "유효성분" 또는 "유효량"은 질환, 장애 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방에 충분한 본원에서 제공되는 발명을 실시하는 과정에서 이용되는 조성물의 임의의 양을 의미할 수 있다.

본 명세서에서 용어, "투여하는," "도포하는", 및 "도입하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.

상기 추출물은 물, 알콜, 예를 들면, C1-C6 알콜, 예를 들면, C1-C4 알콜 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 것일 수 있다. 상기 C1-C6 알콜은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 1,3-프로판디올, 부탄올, 펜탄올, 헥산올 등일 수 있다. 상기 용매는 예를 들면, 물과 알콜의 혼합물 즉 알콜 수용액일 수 있다. 알콜 수용액의 알콜 농도는 1 내지 99.5 (v/v)%, 예를 들면, 10 내지 99.5 (v/v)%, 1 내지 70(v/v)%, 1 내지 40(v/v)%, 5 내지 25(v/v)%, 7 내지 20(v/v)%, 5 내지 25(v/v)%, 또는 10 내지 20(v/v)%일 수 있다. 상기 알콜 수용액은 에탄올 수용액일 수 있다.

상기 추출은 상기 코코넛 하우스토리움 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료, 또는 발아 전 코코넛 배아에 대하여 상기 추출 용매를 3 내지 10 (부피/중량)배, 예를 들면, 3 내지 7 (부피/중량)배, 3 내지 5 (부피/중량)배, 5 내지 10 (부피/중량)배, 또는 4 내지 10배 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 인동 또는 지황의 전초, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료 1kg에 대하여 상기 추출 용매를 3 내지 10 L 첨가하는 것을 포함할 수 있다.

상기 추출은 가온된 액체 추출, 가압된 액체 추출 (pressurized liquid extraction: PLE), 초음파 도움을 받은 추출 (microwave assisted extraction: MAE), 아임계 추출 (subcritical extraction: SE), 또는 이들의 조합에 의하여 수행될 수 있다. 상기 아임계 추출은 아임계 수추출 (subcritical water extraction: SWE)일 수 있다. 아임계 수추출은 초가열된 수추출 (superheated water extraction) 또는 가압된 열수 추출 (pressurized hot water extraction: PHWE)라고도 한다. 상기 가온된 액체 추출은 환류 추출일 수 있다.

상기 추출은 4 내지 70, 예를 들면, 4 내지 50, 4℃ 내지 40, 4℃ 내지 30, 10℃ 내지 70, 15℃ 내지 70, 20℃ 내지 70, 4℃ 내지 50, 10℃ 내지 50, 4℃ 내지 40, 4℃ 내지 30, 10℃ 내지 40, 10℃ 내지 35, 또는 10 내지 30에서 수행하는 것일 수 있다. 상기 추출 시간은 선택된 온도에 따라 달라질 수 있는데 1 시간 내지 2개월, 예를 들면, 1 시간 내지 1개월, 1 시간 내지 15일, 1 시간 내지 10일, 1 시간 내지 5일, 1 시간 내지 3일, 1 시간 내지 2일, 1 시간 내지 1일, 5 시간 내지 1개월, 5 시간 내지 15일, 5 시간 내지 10일, 5 시간 내지 5일, 5 시간 내지 3일, 5 시간 내지 2일, 5 시간 내지 1일, 10 시간 내지 1개월, 10 시간 내지 15일, 10 시간 내지 10일, 10 시간 내지 5일, 10 시간 내지 3일, 또는 10 시간 내지 2일일 수 있다. 상기 추출은 상기 용매 중에 코코넛 하우스토리움 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료, 또는 발아 전 코코넛 배아를 혼합하고 일정 시간 동안 방치하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방치는 적당한 교반을 포함할 수 있다. 상기 추출은 1회 이상, 예를 들면, 1 내지 5회 반복될 수 있다.

상기 추출은 식물체 잔사 및 추출액을 여과 등의 알려진 방법에 의하여 분리할 수 있다. 상기 추출은 또한 얻어진 추출액으로부터 감압 농축과 같은 알려진 방법에 의하여 용매를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 상기 추출은 또한 얻어진 추출물을 동결건조와 같은 건조에 의하여 건조 추출물을 제조하는 것을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 추출물을 함유하는 것일 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 추출물은 발효 추출물일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 발효는 탄소원을 함유하는 배지에서 30 내지 60℃에서 pH 6 내지 7에서 1일 내지 7일간 이루어지는 것일 수 있다. 일 구체예에 있어서, 상기 발효는 바실러스(Bacillus) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속, 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속, 사카로마이세스(Saccharomyce) 속 및 갈락토마이세스(Galactomyces) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주로 발효된 것일 수 있다. 더욱 구체적으로, 상기 균주는, 균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 커바투스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 콘푸수스(Lactobacillus confusus), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri),　비피도박테리움　브레브(Bifidobacterium breve),　비피도박테리움　써모필럼(Bifidobacterium thermophilum), 스트렙토코크스 써모필루스(Streptococcus thermophilus), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 사카로마이세스 세레비지애(S. cerevisiae), 사카로마이세스 바야누스(S. bayanus), 사카로마이세스 파라독서스 (S. paradoxus), 사카로마이세스 미카테(S. mikatae), 사카로마이세스 쿠드리아브제비(S. kudriavzevii), 또는 갈락토마이세스　칸디둠(Galactomyces candidum)일 수 있다.

특정 이론에 제한됨이 없이, 상기 코코넛 하우스토리움, 또는 발아전 코코넛 배아의 추출물(또는 발효 추출물)은 NO의 생성을 억제하고, 항균 활성을 갖고, 염증성 사이토카인의 억제 활성을 갖는 것일 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 피부 염증, 피부 염증성 질환, 또는 피부 진정 등에 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 피부 염증 또는 피부 염증성 질환은 피부염, 아토피 피부염, 지루성 피부염, 접촉성 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 조성물을 피부 외용제 조성물일 수 있다.

상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.

상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.

상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 건강기능식품일 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 일 구체예에 따른 코코넛 하우스토리움 추출물 또는 발아 전 코코넛 배아 추출물 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.

일 양상에 따른 코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물은 NO 생성을 억제하고, 피부에 염증 및 여드름을 일으키는 상재균에 대한 항균 활성이 있을 뿐만 아니라, 염증성 사이토카인을 억제할 수 있는 효과가 있어, 피부 염증 또는 피부 진정에 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 발아 후 코코넛 배아(코코넛 하우스토리움) 추출물의 제조

발아 후 코코넛 배아(코코넛 하우스토리움) 추출물은 다음과 같이 제조하였다.

먼저, 발아된 코코넛(바누아트산 직접 수입)으로부터 배아(코코넛 하우스토리움)를 분리하였다. 약 100 g의 코코넛 하우스토리움을 분리한 이후에, 이들을 분쇄한 후, 물 200 ㎖을 각각 첨가하여 상온에서 48 시간 교반한 후 추출하였다. 추출 후 여과지(filter paper;Whatman NO. 2, Maidstone, UK)로 여과하여 40 ℃ 이하의 중탕에서 감압 환류 냉각장치(N-1110S, EYELA, Tokyo, JAPAN)로 농축한 후 동결건조하였다. 모든 시료는 실험 전까지 80 ℃ 냉동 보관하였으며, 디메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)에 용해하여 실험에 사용하였다. 회수율은 17.89% 이었다.

실시예 2. 발아 전 코코넛 배아 추출물의 제조

먼저, 발아되기 전의 코코넛(바누아트산 직접 수입)으로부터 배아를 분리하였다. 약 100 g의 코코넛 배아를 분리한 이후에, 이들을 분쇄한 후, 물 200 ㎖을 각각 첨가하여 상온에서 48 시간 교반한 후 추출하였다. 추출 후 여과지(filter paper;Whatman NO. 2, Maidstone, UK)로 여과하여 40 ℃ 이하의 중탕에서 감압 환류 냉각장치(N-1110S, EYELA, Tokyo, JAPAN)로 농축한 후 동결건조하였다. 모든 시료는 실험 전까지 80 ℃ 냉동 보관하였으며, 디메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)에 용해하여 실험에 사용하였다. 회수율은 19.21% 이었다.

소원으로 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 이때 사용한 유산균은 비피도박테리움을 사용하였으며, 배양액당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 7일간, 37℃, pH 5-7로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 후 더 이상 배양이 되지 않도록 멸균(121℃, 15분, 1.5기압)하였다.

MRS 한천배지에 희석배수별로 50 μL씩 도말하고 37 ℃에서 24 - 48 시간 배양하였다. 대략 개체수가 106 CFU/mL 이상 되는 배지 상에서 자란 단일 콜로니를 형태에 따라 선별하여 순수 분리

실시예 3. 발아 후 코코넛 배아(코코넛 하우스토리움) 발효 추출물의 제조

먼저, 발아된 코코넛(바누아트산 직접 수입)으로부터 배아(코코넛 하우스토리움)를 분리하였다. Bifidobacterium　longum을 MRS 한천배지에 도말하고 37 ℃에서 48시간 동안 배양하였다. 대략 개체수가 10⁶ CFU/mL 이상 되는 배지 상에서 자란 단일 콜로니를 분리하였다. 이후에, 상기 분쇄된 코코넛 하우스토리움을 10 g/L가 되도록 균주 배양액에 첨가한 후, 탄소원으로 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양은 7일간 37 ℃에서 pH 6을 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 후 더 이상 배양이 되지 않도록 멸균(121℃, 15분, 1.5기압)하였다. 제조된 발효액은 동물세포 배양용 배지인 MEM과 동량으로 섞은 후에 0.22 ㎛ 필터에 여과하여 균을 제거한 액을 사용하였다.

실험예 1. 코코넛 배아 추출물의 NO 생성 억제 효과 분석

상기 실시예 1 및 2에서 제조한 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물의 항염증 활성을 분석하기 위해 NO 생성 억제 효과를 측정하였다.

구체적으로, RAW264.7 세포주(ATCC number: CRL-2278)를 배양하고, 웰 하나에 2 x 10⁵ cells/ml를 24-웰 플레이트에 넣은 후, 24시간 동안 배양시켰다. 이후에, 상기 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물을 각각 20, 50, 100, 및 200 ug/ml로 함유하는 배지로 교체하였다. 이후에 NO-생성 억제물질인 L-NMMA(L-NG-Monomethylarginine)을 양성 대조군으로 함께 처리하여 30분 동안 배양하였고, 자극원으로 LPS(Lipopolysaccharide)를 10 ㎍씩 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 상층액을 100 ㎕씩 취해 96-웰 프레이트에 옮기고, 그리스 시약(Griess reagent; 0.5% 설파닐아미드, 2.5% 인산 및 0.5% 나프틸에틸렌아민)을 100 ㎕씩 가해 상온에서 10분간 반응시키고, 540 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 NO 억제 효과를 측정하였다. 비교 대조군으로는 코코넛 오일 및 코코넛 열매 추출물을 사용하였다. 코코넛 열매 추출물은 코코넛의 Kernel 부위를 분리한 후, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다. 상기 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

시료	NO 생성 억제 활성(%)
시료	50 ug/ml	100 ug/ml	200 ug/ml
CH 추출물	15.27	28.24	51.22
CB 추출물	11.14	20.47	35.89
CH 발효 추출물	13.81	31.39	53.46
CO	4.41	6.78	12.65
CN 추출물	8.05	15.88	28.18

CH 추출물: 코코넛 하우스토리움 추출물; CB 추출물: 발아전 코코넛 배아 추출물; CO: 코코넛 오일; CN 추출물: 코코넛 열매 추출물

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 코코넛 하우스토리움 추출물 또는 발아 전 코코넛 배아 추출물은 농도 의존적으로 NO 생성을 억제함을 알 수 있었다. 이에 반해 비교군인 코코넛 오일은 NO 생성 억제 효과가 거의 없고, 코코넛 하우스토리움 추출물은 코코넛 열매 추출물에 비해 약 1.5 내지 2배 이상의 효과가 있는 것을 알 수 있었다. 이러한 결과는, 일 구체예에 따른 코코넛 하우스토리움 추출물 또는 발아 전 코코넛 배아 추출물이 NO 생성을 억제하여 우수한 항염증 활성이 있음을 의미한다.

실험예 2. 코코넛 배아 추출물의 여드름균 및 피부상재균에 대한 항균 활성 분석

상기 실시예 1 및 2에서 제조한 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물이 여드름 및 피부상제균에 대한 활성을 나타내는지 분석하기 위해 5종의 미생물 균주를 사용하였다.

구체적으로, Escherichia coli (KCTC2571), Staphylococcus aureus (KCTC1916), Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), Propionibacterium acne (ATCC 29399), Pseudomonas aeruginosa (KCTC2513)를 분양받아, NA(Nutrient Agar, Difco, USA), BHIA(Brain Heart Infusion Agar, Difco, USA)에 접종하였다. 이후에, 37 ℃에서 집락을 형성할 때까지 진탕 배양기에서 18시간 동안 배양하였다. 다음에, 균체를 회수하여 PBS로 세척한 후, 균주 1ml을 고체 배지에 도말한 후, 추가적으로 37 ℃에서 6시간 동안 배양하였다. 이후에 상기 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물을 페이퍼 디스크에 각각 200 ug/ml로 처리한 다음 37 ℃에서 6시간 동안 배양하였다. 이후 디스크 주위에 균주가 억제되는 농도를 확인하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

	E.coli	S.aureus	S.epidermidis	P.acne	P.aeruginosa
CH 추출물	+	+	+	+	+
CB 추출물	-	+	-	+	-

CH 추출물: 코코넛 하우스토리움 추출물; CB 추출물: 발아전 코코넛 배아 추출물.

상기 표 2에 나타낸 바와 같이 일 구체예에 따른 코코넛 하우스토리움 추출물 및 발아 전 코코넛 배아 추출물은 여드름 및 염증성 피부질환을 악화시키는 병원성 균주의 성장을 억제함을 알 수 있엇다.

이러한 결과는, 일 구체예에 따른 추출물이 피부에서 여드름 및 염증 질환을 야기시키는 균주에 대한 우수한 항염 효과가 있음을 의미한다.

실험예 3. 코코넛 배아 추출물의 아토피 피부염에 대한 활성 분석

상기 실시예 1 및 2에서 제조한 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물의 아토피 피부염에 대한 활성을 분석하기 위해 아토피 동물 모델을 사용하였다.

구체적으로, NC/Nga 마우스 아토피 마우스 모델(6주령, 대한바이오링크)에 1% (10㎎/㎖)트리니트로클로로벤젠(trinitrochlorobenzene, TNCB)를 3일간 마우스의 등 및 귀 뒤에 처리하여 아토피 피부염 및 면역과민반응을 유발하였다. 이후에 1일 1회 2주간 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물을 200 mg/kg의 농도로 병변 부위에 도포하였다. 음성 대조군은 정제수를 투여하였고, 각 군당 5마리의 마우스를 사용하였다. 실험 기간 중 고형사료와 물은 자유로이 섭취시켰으며 사육실의 온도(22 ± 2 ℃), 상대습도(60 ± 5%)와 명암은 12시간 주기를 유지하였다. 이후에, 마우스 피부 두께를 측정하기 위해, 피부 조직을 분리한 후 H&E 염색을 수행하여, 피부 표피층의 두께를 측정하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

실험군	피부두께 (um)
정상 마우스	12.11 ± 2.01
아토피 유발 대조군	35.14 ± 5.36
CH 추출물	19.23 ± 3.23
CB 추출물	23.21 ± 4.12

상기 표 3에 나타낸 바와 같이 일 구체예에 따른 코코넛 하우스토리움 추출물과 발아 전 코코넛 배아 추출물은 피부표면의 염증상태를 완화시켜 피부 장벽을 정상화할 수 있음을 알 수 있었다.

또한, 마우스의 혈청을 이용하여 면역 항체인 IgE의 농도를 BD OptEIA Kit를 사용하여 제조사의 지시에 따라 확인하였다. 구체적으로, 마우스에서 채혈한 혈청 1μL을 희석 버퍼(BD OptEIA Kit, Cat No : 51-2641KC, BD Bioscience) 49 μL과 혼합하여 웰 플레이트에 분주하였다. 이후에 PBS 완충용액(0.05% Tween-20)으로 세척 후, 항 비오틴-IgE (BD Bioscience)를 혼합한 후 2시간 동안 반응시켰다. 이후에, 다시 PBS 완충용액으로 세척한 후, 아비딘-HRP 컨쥬게이트 항체 100 μL(BD Bioscience)를 처리하고 1 시간 실온에서 놓아둔 후 PBS 완충용액으로 세척하였다. 그 후 기질 A(BD OptEIA Kit, Cat No : 51-2606KZ, BD Biosciences)와 기질 B(BD OptEIA Kit, Cat No : 51-2607KZ, BD Biosciences)를 동량으로 혼합하여, 이 혼합액을 100 μL씩 분주하고 암소에서 30 분간 방치하였다. 마지막으로 100 μL의 정지 용액 (BD OptEIA Kit, Cat No : 51-2608KZ, BD Biosciences)을 처리한 후 450 nm에서 IgE에 대한 흡광도를 측정하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

실험군	혈청 내 IgE 농도(ng/ml)
정상 마우스	33.55 ± 8.89
아토피 유발 대조군	41.23 ± 9.33
CH 추출물	34.85 ± 7.12
CB 추출물	37.56 ± 8.32

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 코코넛 하우스토리움 추출물 및 발아 전 코코넛 배아 추출물이 아토피 유발을 통해 증가된 혈청 내 IgE의 농도를 정상에 가까울 정도로 감소시킬 수 있는 효과가 있음을 알 수 있었다.

Claims

코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 함유하는 피부 염증의 개선을 위한 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 물, C1-C4 알콜, 또는 이들의 조합을 용매로 하여 추출된 것인 피부 염증의 개선, 또는 피부 진정을 위한 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 피부 염증은 피부염, 아토피 피부염, 지루성 피부염, 접촉성 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것인 피부 염증의 개선을 위한 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 발효 추출물인 것인 피부 염증의 개선을 위한 화장료 조성물.
코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증성 질환의 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제 조성물.
청구항 5에 있어서, 상기 추출물은 물, C1-C4 알콜, 또는 이들의 조합을 용매로 하여 추출된 것인 피부 염증성 질환의 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제 조성물.
청구항 5에 있어서, 상기 피부 염증성 질환은 피부염, 아토피 피부염, 지루성 피부염, 접촉성 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것인 피부 염증성 질환의 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제 조성물.
청구항 5에 있어서, 상기 추출물은 발효 추출물인 것인 피부 염증성 질환의 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제 조성물.
코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물.
코코넛 하우스토리움(Coconut haustorium) 추출물 또는 발아 전 코코넛(Cocos nucifera) 배아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증성 질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품.