KR101975671B1 - 유산균의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 및 개선용 조성물 - Google Patents

유산균의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 및 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유산균의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물 및 이의 다양한 적용에 관한 것이다. 본 발명의 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 또는 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.) 균주의 유크림 발효액은 피부수분보유량 향상, 피부의 pH 수치 감소를 통한 피부 안정화 또는 경피수분증증발량 감소 효과를 나타내어 아토피 피부염을 효과적으로 예방, 완화 및 개선할 수 있다. 또한, 피부의 수분 보유량을 향상 시켜 피부 보습에도 탁월한 효과를 나타낸다. 또한, 경구용 또는 피부 도포용으로 각각 이용하거나 이를 동시에 처리하여도 아토피 피부염을 개선할 수 있어, 관련된 화장품, 식품 또는 약학 산업에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

유산균의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 및 개선용 조성물{Composition comprising the milk-cream fermentation product of lactic acid bacteria for preventing and improving atopic dermatitis}
본 발명은 유산균의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물 및 이의 다양한 적용에 관한 것이다.
아토피 피부염(atopic dermatitis)은 만성적이며 재발이 빈번한 염증성 피부질환이다. 피부건조증과 소양증, 이로 인해 긁게 되면 습진 및 염증성 피부병변이 생기며 이것이 진행되면서 더 심한 소양증 및 수면장애 등이 유발되는 악순환이 반복된다. 또한 초기에 적절한 관리를 하지 않으면 삼출과 가피를 동반한 홍반성의 박탈성 구진과 인설로 진행되기도 하고 피부가 두꺼워지고 주름이 지는 태선화(lichenification) 등으로 진행되기도 한다. 유아기에는 보통 목과 팔다리, 무릎 뒤 등의 굽혀지는 쪽 부분에 습진 형태로 나타나고 만성화되면 습진 부위 피부가 태선화가 진행되고, 성인기까지 아토피 피부염이 남는 경우에는 특정 물질이나 자극에 의해 쉽게 염증 반응에 노출되는 경향이 많고, 몸보다는 얼굴 주변이나 사지말단에 습진이 생기거나 홍반 및 홍조가 나타나는 경향이 있다.
아토피 피부염은 유전 및 환경적 요인의 상호작용으로 인한 복합적 임상 증상으로 다양하게 나타나기 때문에 발병 원인이 어느 한 가지로만 설명될 수는 없으나, 매연 등의 환경 공해, 식품첨가물 등의 사용 증가, 실내 온도 상승으로인한 집먼지 진드기 등의 알레르기를 일으키는 원인 물질(알레르겐)의 증가 등 환경적인 요인과 유전적인 소인, 면역학적 반응 및 피부보호막의 이상, 가족력 등이 주요 원인으로 여겨지고 있다.
종합적으로 아토피 피부염 환자는 피부장벽의 이상이 있어, 피부 수분 보유량이 감소하며, 피부의 pH 수치의 증가 및 경피 수분 증발량이 증가할 뿐 아니라, 아토피 피부염 병변에서 황색포도상구균의 집락수가 정상인에 비해 월등히 높다.
현재 아토피 피부염 환자의 임상 점수인 SCORAD(Scoring of Atopic Dermatitis), ADSI(Atopic Dermatitis Severity Index) 등으로 아토피 피부염의 중증도를 평가하며, 피부에 직접 기계장비를 이용하여 항온, 항습 등 일정한 조건하에서의 피부 수분 보유량(skin surface hydration, SSH), 피부의 pH, 경피수분 증발량(transepidermal water loss, TEWL) 등을 측정함으로써 피부의 장벽 기능과 염증 상태 등의 피부손상지표를 객관적으로 평가한다.
아토피 피부염의 기본적인 치료로 피부의 청결과 건조 방지를 위해 보습제의 사용, 피부염증을 완화시키기 위해 경구용 항히스타민제, 스테로이드제, 면역억제제, 항생제, 항바이러스제, 항진균제, 생균제 등의 치료제제의 사용 및 광화학요법 등 무수히 많은 치료 요법을 사용하고 있으나, 이러한 제제를 장기간 사용 시 피부 위축 및 팽창, 혈관 및 모공 확장, 피부 변색 등의 부작용이 유발될 뿐 아니라, 아토피 피부염의 특성상 만성적이거나 재발을 자주하면서 질환에 대한 회의와 스테로이드제와 같은 약물의 부작용에 대한 우려도 커 제대로 된 치료가 이루어지지 못하거나, 검증되지 않은 치료 방법에 의존하여 결국 악화와 호전을 반복하는 만성질환이 되는 경우도 많다. 따라서, 부작용이 없고 인체에 안전한 천연물 유래 아토피 피부염 치료제가 꾸준히 요구되고 있는 실정이다.
유산균은 면역계내에서 마이크로파지를 활성화하여 세균이나 바이러스를 즉각 감지하는가 하면 림프구 분열을 촉진해 혈액내에서 IgA의 생산 증가, 감마 인터페론 생성 촉진 등으로 면역력을 증진시킨다. 실험동물과 배양세포를 중심으로 일부 유산균의 항알러지 효과가 나타나고 있고, 특히 아토피 피부염 중심으로그의 효과가 입증되었다. 특히 유산균 배양액은 산성 피막을 얇게 형성해 보습성분과 함께 피부에 도포되는 경우 윤기를 부여하며 부드러운 감촉을 가지게 한다. 따라서, 아토피 피부염을 효과적으로 예방, 완화 및 개선하기 위한 새로운 유효성분의 발굴이 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 피부 보습용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 피부 외용제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 아토피 피부염 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적의 달성을 위해, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염(atopic dermatitis) 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 피부 외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주를 유크림 배지에 배양하여 발효액을 수득하는 단계;를 포함하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 또는 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.) 균주의 유크림 발효액은 피부 수분 보유량 향상, 피부의 pH 수치 감소를 통한 피부 안정화 또는 경피 수분 증발량 감소 효과를 나타내어 아토피 피부염을 효과적으로 예방, 완화 및 개선할 수 있다. 또한, 피부의 수분 보유량을 향상 시켜 피부 보습에도 탁월한 효과를 나타낸다. 또한, 경구용 또는 피부 도포용으로 각각 이용하거나 이를 동시에 처리하여도 아토피 피부염을 개선할 수 있어, 관련된 화장품, 식품 또는 약학 산업에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 <실시예 1>의 유크림 발효액의 아토피 피부염 치료효과를 확인한 도이다.
본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염(atopic dermatitis) 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 유크림 발효액은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)을 배양 배지에서 배양하여 수득한 발효액, 농축 발효액, 발효액 의 건조물, 배양 여과액, 농축 배양 여과액, 또는 배양 여과액의 건조물을 의미하는 것으로, 상기 균주를 포함하는 것 또는 배양한 후 균주를 제거한 배양 여액일 수 있다. 또한 상기 배양물은 그 제형이 한정되지 아니하고, 일 예로 액체, 에멀젼, 또는 고체일 수 있다.
상기 발효액은 유크림(milk-cream), 우유(milk), 스킴밀크(skim-milk), Lactobacilli MRS 배지, LB(lysogeny broth) 배지, R2A 배지(MB-R2230) 및 카제인가수분해물(casamino acid) 포함 배지로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 배지로 더 배양할 수 있고, 바람직하게는 유크림, 우유 또는 Lactobacilli MRS 배지이나, 상기 각 속의 균주를 배양하기 위한 배지라면, 이에 제한되지 않는다.
상기 우유는 원유, 무지방 우유, 유지방 함량이 1 중량부 이하로 첨가된 저지방 및 탈지유(skim milk)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이고, 상기 우유는 젖소(cow), 산양(goat), 말(horse), 당나귀(donkey), 물소(water buffalo), 또는 낙타(camel) 유래일수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 유크림은 원유나 우유에서 분리한 유지방분, 유지방구의 농축물, 가공 유크림 및 분말 유크림으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상이나, 일반적으로 유지방방분이 30~40%인 생크림(Single cream)이나, 유지방분이 3~10%인 저지방 크림(Extra light cream), 유지방분이 10~20% 인 유크림(Light cream), 유지방분이 20~30% 인 테이블 크림(Table cream), 상기 유크림에 식품 또는 식품첨가물을 첨가하여 가공한 유지방분 18% 이상의 가공 유크림인 테이블 크림(Table cream), 사워크림(Sour cream), 휘핑크림(Whipping cream), 유지방분이 48~60%인 더블 크림(Double cream), 또는 유크림에 식품 또는 식품 첨가물을 가하여 분말화한 분말 유크림(유지방분 50% 이상)을 생크림 대신 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
유크림의 영양분은 크림 분리 전인 원유의 영양분에 영향을 받으며, 수용성 영양분의 함량은 감소하는 반면 지용성 영양분(비타민A, D, E, K)들은 원유보다 적게는 2~3배, 많게는 12배 이상 증가한다고 알려져 있다.
상기 유크림 발효액은 간헐 멸균(Tyndallization) 처리, 감압 농축 처리 및 효모추출물(Yeast extract) 처리로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 처리할 수 있고, 각각을 단독 처리하거나 1종을 처리 후 다른 방법을 처리할 수 있다.
본 발명에서 상기 간헐멸균(Tyndallization)된 유크림 발효액은 상기 다양한 유산균으로 발효된 유크림을 80 이상에서 일정한 기압으로 15분 이상 가온한 후 간헐멸균할 수 있다. 상기 감압 농축 처리는 상기 간헐 멸균 처리한 후 50-70 이상에서 50-70분 이상 가온을 실시하여 감압 2배 이상 농축할 수 있다.상기 효모 추출물 및 MRS broth 처리는 총 배지 중량의 0.1 중량% 이상을 배지에 처리할 수 있다.
상기 유크림 발효액은 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액, 또는 간헐멸균(Tyndallization)된 유크림 발효액, 또는 다양한 유산균 유크림 발효액 및 유산균 발효농축액의 혼합 발효액, 또는 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액의 혼합 유크림 발효액, 또는 유크림 발효액에 효모추출물(Yeast extract) 및 MRS broth 처리한 다양한 유크림배지 발효액으로 제조할 수 있다.
상기 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.)은 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum)및 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이나, 아토피 피부염을 예방, 완화 및 개선하기 위한 락토바실러스 속 균주라면, 이에 제한되지 않는다.
비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)은 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)이나, 아토피 피부염을 예방, 완화 및 개선하기 위한 비피도박테리움 속 균주라면, 이에 제한되지 않는다.
락토코커스 속(Lactococcus spp.)은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)이나, 아토피 피부염을 예방, 완화 및 개선하기 위한 락토코커스 속 균주라면, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 피부 수분 보유량 향상, 피부의 pH 수치 감소를 통한 피부 안정화 또는 경피 수분 증발량 감소 효과를 나타내나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액의 아토피 치료 효과를 각각 확인한 결과, 상기 유산균들을 포함하는 유크림 발효액들이 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)과 유사하게 피부 수분 보유량을 증가시키고, 피부의 pH수치를 감소시키며, 경피 수분증 발량을 감소시켜, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다(표 3 내지 표 5 참조).
또한 간헐멸균된 유크림 발효액, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액(K11), 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 80 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 20 중량%의 혼합 발효액, 또는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토코커스 락티스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액, 또는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 비피도박테리움 비피덤 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액의 아토피 치료 효과를 각각 확인한 결과, 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)에 비해 피부수분보유량의 증가, 피부의 pH수치의 감소, 경피수분증발량의 감소 등에서 더 월등한 효과를 나타내어, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다(표 6 내지 표 8 참조).
또한 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액 및 유크림MRS발효액 또는 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액 및 유크림MRS 발효액의 아토피 치료 효과를 각각 확인한 결과, 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)에 비해 피부수분보유량의 증가, 피부의 pH수치의 감소, 경피수분증발량의 감소 등에서 더 월등한 효과를 나타내어, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다(표 10 내지 표 12 참조).
또한 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 25 중량%와 락토코커스 락티스 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 가세리 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 델브루에키 유크림 발효액 25 중량%를 각각 혼합한 다양한 유산균 발효액의 혼합 유크림 발효액, 또는 락토바실러스 플란타룸 유크림효모 발효액 및 유크림MRS 발효액의 아토피 치료 효과를 확인한 결과, 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)과 유사하게 피부수분보유량을 증가시키고, 피부의 pH수치를 감소시키며, 경피수분증발량을 감소시켜, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다(표 6 내지 표 8, 표 10 내지 표 12 참조).
또한 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용한 후 아토피 치료 효과를 확인한 결과 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)에 비해 다소 변화율이 떨어지기는 하나, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였으며, 특히 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 유크림 발효액 로션을 바른 경우에는 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)에 비해 아토피 피부염 병변의피부 수분보유량의 증가, 피부 pH수치의 감소, 경피수분증발량의 감소 등에서 모두 유의적으로 더 높게 변화하여, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 더 높게 기여하는 것을 확인하였다(표 13 내지 표15 참조).
따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 아토피 피부염에서 주로 나타나는 피부 건조증, 소양증, 습진 및 염증성 피부병변 및 아급성 병변인 삼출, 가피를 동반한 구진과 인설, 만성 병변인 태선화 등의 병변의 완화 및 재발의 억제효과와 이에 상응하는 알레르기성 피부염의 병변 완화와 피부수분보유량의 향상, 피부의 pH수치 감소, 경피수분증발량의 감소 효과를 나타내므로, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물 및 피부 외용제로 유용하게 사용될 수 있다.
상기 조성물은 경구용 또는 피부 도포용이고 이를 혼합하는 용도로 이용할 수 있다. 경구용은 생균 또는 사균인 균주를 이용하고, 상기 생균 또는 사균의 혼합 비율(w/g)은 피부염 예방, 완화 및 개선을 위한 목적을 달성하기 위해서라면, 적의 선택하여 혼합할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에, 통상의 화장품에 사용가능한 모든 종류의 성분, 예컨대 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 부형제, 희석제, 무기염류 및 합성 고분자 물질 등을 추가로 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은, 기초화장품, 메이크업 화장품, 바디 화장품, 두발용 화장품, 두피용 화장품 또는 면도용 화장품의 용도로 제공될 수 있다. 상기 기초 화장품의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있으며, 상기 메이크업 화장품으로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이새도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있으며, 바디 화장품으로는, 비누, 액체 세정제, 입욕 제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있으며, 두발용 화장품으로는 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어 무쓰, 헤어 리퀴드, 포마드, 헤어 칼라제, 헤어 블릿치제, 칼라린스가 있으며, 두피용 화장품으로는 헤어 토닉, 스칼프 트리트먼트가 있으며, 면도용 화장품으로는 애프터셰이브로션, 셰이빙 크림 등이 있다.
또한 본 발명의 화장료 조성물에는 통상 화장료에 배합되는 다른 성분이 더욱 포함될 수 있다. 보다 상세하게, 상기 통상 화장료에 배합되는 다른 성분은 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기안료 및 무기안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제 또는 정제수 등일 수 있다.
상기 유지 성분은 구체적으로 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 또는 식물 유지 등일 수 있다.
상기 에스테르계 유지는 일 예로, 트리-2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리-2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라-2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인 산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실,올레인산 옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴,네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르,폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실,아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산 콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산 피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 1,2-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 1,2-스테알로일히드록시스테아르산 스테아릴 또는 1,2-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등일 수 있다.
상기 탄화 수소계 유지는 일 예로 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리 고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스 또는 와셀린 등일 수 있다.
상기 실리콘계 유지는 일 예로 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유 또는 아미노 변성 실리콘유 등일 수 있다.
상기 불소계 유지는 퍼플루오로폴리에테르 등일 수 있다.
또한, 동물 유지 또는 식물 유지를 포함할 수 있으며, 일 예로 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 아르간유, 로즈힙종자유, 녹차종자유, 타마누유, 햄프씨드유, 보리지유 난황유, 우지, 마유,밍크유, 에뮤유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 비즈왁스, 올리브왁스, 액상 라놀린 또는 경화피마자유 등일 수 있다.
상기 계면활성제는 구체적으로 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제 또는 양성 계면활성제일 수 있다.
상기 음이온성 계면 활성제는 일 예로, 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙 신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염 또는 퍼플루오로알킬인산에스테르 등일 수 있다.
상기 양이온성 계면 활성제는 일 예로, 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄,브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드 또는 라놀린 유도체 제4급 암모늄염 등일 수 있다.
상기 양성 계면 활성제는 일 예로, 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형,아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형 또는 아미드아민형의 양성계면 활성제 등일 수있다.
상기 안료는 유기안료, 무기안료 및 이들의 복합 안료 등일 수 있다.
상기 무기안료는 일 예로 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트,마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이,벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄,산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체 등일 수 있다.
상기 유기안료는 일 예로 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트 오렌지 및 이들의 복합체 등일 수 있다. 상기 유기 분체는 일 예로 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니 N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 사불화에틸렌 등일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 공지된 자외선 차단제를 추가로 더 포함할 수 있다.
상기 자외선 차단제는 유기 자외선 차단제 및/또는 무기 자외선 차단제일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다.
본 발명에서 용어 "배양"은 미생물을 적당히 인공적으로 조절한 환경조건에서 생육시키는 것을 의미한다.
배지는 특정 미생물을 배양하기 위하여 배양대상 즉 배양체가 되는 미생물이 필요로 하는 영양물질을 포함하는 것으로 특수한 목적을 위한 물질이 추가로 첨가되어 혼합된 것일 수 있다. 상기 배지는 배양기 또는 배양액이라고도 하며, 천연배지, 합성배지 또는 선택배지를 모두 포함하는 개념이다. 바실러스 서브티리스 GCB-13-001 균주는 통상의 배양방법에 따라 배양할 수 있다.
배양에 사용되는 배지는 적당한 탄소원, 질소원, 아미노산, 비타민 등을 함유한 통상의 배지 내에서 온도, pH 등을 조절하면서 적절한 방식으로 특정 균주의 요건을 충족해야 한다. 사용될 수 있는 탄소원으로는 글루코즈 및 자일로즈의 혼합당을 주 탄소원으로 사용하며 이외에 수크로즈, 락토즈, 프락토즈, 말토즈, 전분, 셀룰로즈와 같은 당 및 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유 등과 같은 오일 및 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리세롤, 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산이 포함된다. 이들 물질은 개별적으로 또는 혼합물로서 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 질소원으로는 암모니아, 황산암모늄, 염화암모늄, 초산암모늄, 인산암모늄, 탄산안모늄, 및 질산암모늄과 같은 무기질소원; 글루탐산, 메티오닌, 글루타민과 같은 아미노산 및 펩톤, NZ-아민, 육류 추출물, 효모 추출물, 맥아 추출물, 옥수수 침지액, 카세인 가수분해물, 어류 또는 그의 분해생성물, 탈지 대두 케이크 또는 그의 분해생성물 등 유기질소원이 사용될 수 있다. 이들 질소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 상기 배지에는 인원으로서 인산 제1칼륨, 인산 제2칼륨 및 대응되는 소듐-함유 염이 포함될 수 있다. 사용될 수 있는 인원으로는 인산이수소칼륨 또는 인산수소이칼륨 또는 상응하는 나트륨-함유 염이 포함된다. 또한, 무기화합물로는 염화나트륨, 염화칼슘, 염화철, 황산마그네슘, 황산철, 황산망간 및 탄산칼슘 등이 사용될 수 있다. 마지막으로, 상기 물질에 더하여 아미노산 및 비타민과 같은 필수 성장 물질이 사용될 수 있다.
또한, 배양 배지에 적절한 전구체들이 사용될 수 있다. 상기된 원료들은 배양과정에서 배양물에 적절한 방식에 의해 회분식, 유가식 또는 연속식으로 첨가될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다. 수산화나트륨, 수산화칼륨, 암모니아와 같은 기초 화합물 또는 인산 또는 황산과 같은 산 화합물을 적절한 방식으로 사용하여 배양물의 pH를 조절할 수 있다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주를 유크림 발효액의 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 피부 외용제를 제공한다.
본 발명에서 외용제란 일반적으로 외용에 사용하는 조성물 전반을 포괄하는 개념이고, 예를 들어, 기초 화장료, 메이크업 화장료, 모발용 화장료 등 각종 화장료를 포함하는 화장료 조성물이나 연고제 등의 다양한 의약품 내지 의약외품 등으로 폭넓게 적용 가능한 것을 말하며, 바람직하게는 화장료 조성물, 더욱 바람직하게는 기능성 화장료 조성물 또는 기능성 화장품일 수 있다.
상기 외용제에는 유효성분 외에 사용용도 및 외용제 조성물의 성질에 따라 통상 외용제에 배합되고 있는 성분, 일예로 보습제, 자외선 흡수제, 비타민류, 동식 물 추출성분, 소화제, 미백제, 혈관확장제, 수렴제, 청량제, 호르몬제 등을 추가로 배합한 것일 수 있다.
상기 외용제의 제형은 사용용도 및 외용제 조성물의 성질에 따라 적절한 형태를 취할 수 있으며, 일예로 수용액계, 가용화계, 유화계, 유액계, 겔계, 페이스트계, 연고계, 에어졸계, 물-기름 2층계, 물-기름-분말 3층계일 수 있으며, 상기 제형에 의해 본 발명의 외용제의 제형 및 형태가 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 외용제는 유효성분을 피부조직으로 침투 또는 이행시키기 위해서 필요한 기제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물은 상술한 유효성분으로 포함하는 화장료 제제를 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 조성물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 유효성분을 식품, 음료 등의 건강보조 식품에 첨가할 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식 품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 유크림 발효액은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴,스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스 파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 유크림 발효액은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 발효액은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 불로화 추출물 또는 이의 분획물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물에는 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 또는 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.) 균주의 유크림 발효액 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있으나, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 더 포함하여 그 면역성을 증가시킬 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 세린 분해효소 저해 펩티드; 또는 상기 발현 벡터의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 5,000 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 5,000 ㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주를 유크림 배지에 배양하여 발효액을 수득하는 단계;를 포함하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법을 제공한다.
상기 유크림 발효액에 유크림(milk-cream), 우유(milk), 스킴밀크(skim-milk), Lactobacilli MRS 배지, LB(lysogeny broth) 배지, R2A 배지(MB-R2230) 및 카제인가수분해물(casamino acid) 포함 배지로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 배지로 더 배양하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 유크림 발효액에 간헐 멸균(Tyndallization) 처리, 감압 농축 처리 및 효모추출물(Yeast extract) 처리로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 처리하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 유크림 발효액을 캡슐화 하여 경구용으로 제조하는 단계를 포함할 수 있으나, 이는 경구용으로 제작 시에 포함되는 단계이고, 이에 제한되지 않는다.
상기 유크림 발효액은 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액, 또는 간헐멸균(Tyndallization)된 유크림 발효액, 또는 다양한 유산균 유크림 발효액 및 유산균 발효농축액의 혼합 발효액, 또는 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액의 혼합 유크림 발효액, 또는 유크림 발효액에 효모추출물(Yeast extract) 및 MRS broth 처리한 다양한 유크림배지 발효액으로 제조할 수 있으며, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선을 위해서라면 제조 방법은 제한되지 않고, 상기 방법으로 제조된 유크림 발효액 또한 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus spp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하 나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미하며, 피부 외용제 및 개인위생용품도 포함한다.
본 발명의 조성물을 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용의 목적으로 의약외품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.
본 발명의 의약외품은 특별히 이에 제한되지 않으나, 예를 들어 크림제, 로션제, 에어로졸제, 샴푸제, 젤제 또는 팩제의 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
크림제ㆍ연고제ㆍ샴푸제ㆍ젤제 또는 팩제의 경우에 있어서는, 백색 바셀린, 황색 바셀린, 라놀린, 표백 밀랍, 세탄올, 스테아릴알코올, 스테아르산, 경화유, 겔화 탄화수소, 폴리에틸렌글리콜, 유동 파라핀, 스쿠알란 등의 기제; 올레산, 미리스트산이소프로필, 트리이소옥탄산글리세린, 크로타미톤, 세바크산디에틸, 아디프산디이소프로필, 라우르산헥실, 지방산, 지방산 에스테르, 지방족 알코올, 식물유 등의 용제 및 용해 보조제; 토코페롤 유도체, L-아스코르브산, 디부틸하이드록시톨루엔, 부틸하이드록시아니솔 등의 산화 방지제; 파라하이드록시벤조산에스테르 등의 방부제; 글리세린, 프로필렌글리콜, 히알루론산나트륨 등의 보습제; 폴리옥시에틸렌유도체, 글리세린 지방산 에스테르, 자당 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌글리콜 지방산 에스테르, 레시틴 등의 계면 활성제; 카르복시비닐 폴리머, 잔탄검, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨염류, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 증점제 등이 있다.
에어로졸제의 경우에 있어서는, 연고제, 크림제, 겔제, 현탁제, 유제, 액제 및 로션제 등의 조제에 사용되는 백색 바셀린, 황색 바셀린, 라놀린, 표백 밀랍, 세탄올, 스테아릴알코올, 스테아르산, 경화유, 겔화 탄화수소, 폴리에틸렌글리콜, 유동 파라핀, 스쿠알란 등의 기제; 올레산, 미리스트산이소프로필, 아디프산디이소프로필, 세바크산이소프로필, 트리이소옥탄산글리세린, 크로타미톤, 세바크산디에틸, 라우르산헥실, 지방산, 지방산 에스테르, 지방족 알코올, 식물유 등의 용제 및 용해 보조제; 토코페롤 유도체, L-아스코르브산, 디부틸하이드록시톨루엔, 부틸하이드록시아니솔 등의 산화 방지제; 파라하이드록시벤조산에스테르 등의 방부제; 글리세린, 프로필렌글리콜, 히알루론산나트륨 등의 보습제; 폴리옥시에틸렌 유도체, 글리세린 지방산 에스테르, 자당 지방산에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌글리콜 지방산 에스테르, 레시틴 등의 계면 활성제; 카르복시비닐폴리머, 잔탄검, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨염류, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 증점제; 추가로 각종 안정제, 완충제, 교미제, 현탁화제, 유화제, 방향제, 보존제, 용해 보조제, 그 밖의 적당한 첨가제를 배합할 수 있다.
또한, 필요에 따라 안정제, 보존제, 흡수 촉진제, pH 조정제, 그 밖의 적당한 첨가제를 배합할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선 활성을 더욱 증진시키기 위해, 현재까지 알려진 다른 아토피 피부염제와 병용하여 사용할 수도 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 다양한 유산균 균주로 발효한 유크림 발효액, 간헐멸균된 유크림 발효액, 발효농축액 준비 및 이의 아토피 피부염 치료 확인
<실시예 1-1> 다양한 유산균 균주로 발효한 유크림 발효액의 제조
유지방이 35% 이상 함유된 유크림에 1l에 전배양한 락토코커스 락티스 (Lactococcus lactis subsp. lactis KCTC 3115)(K1), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 8014)(K2), 락토바실러스 파라카제이 (Lactobacillus paracasei subsp. paracasei KCTC 3510)(K3), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri KCTC 3162)(K4), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus KCTC 3635)(K5), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri KCTC 3594)(K6), 락토바실러스 살리바리우스 (Lactobacillus salivarius subsp. salicinius KCTC 3600)(K7), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus fermentum KCTC 3112)(K8), 락토바실러스 애시도필러스 (Lactobacillus acidophilus KCTC 3140)(K9) 1×106 cfu/㎖ 이상을 각각 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 유크림 발효액을 제조하였다.
또는 상기와 동일한 방법으로 유지방이 35% 이상 함유된 유크림에 1l에 전배양한 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum KCTC 3202)(K10) 1×106 cfu/㎖ 이상을 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 유크림 발효액을 제조하되, 배양 중 배양조건 달성을 위한 산소차단을 위해 anaerobic jar와 이산화탄소 가스팩(Anaerogen 2.5L, Thermo scientific,　U.S.A)을 이용하여 내부 산소를 제거하였다.
또한, 상기 다양한 유산균 균주의 유크림 발효액의 대조군으로서, 종래 문헌에 기재된 방법에 따라(10-2016-0035879), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus KCTC 5033) 유크림 발효액(B2)을 이용하였다. 상기 락토바실러스 람노서스는 유지방이 35% 이상 함유된 유크림에 1l에 전배양한 락토바실러스 람노서스 균주1×106 cfu/㎖를 접종한 후, 항온 37 배양기에서 72시간 배양하여, 유크림 발효액을 수득하였다.
<실시예 1-2> 다양한 유산균 유크림 발효액을 함유한 로션 제형 준비
상기 <실시예 1-1>의 다양한 유산균 유크림 발효액을 제형 총 중량의 75 중량%로 함유한 로션 제형을 하기 표 1에 따라 제조하였다. 또한, 대조군으로서 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 함유한 로션(B2)은 종래 문헌에 기재된 방법에 따라(10-2016-0035879, PCT/KR2017/003172), 워터 베이스로 fermented sterilized milk cream 75 unit(g), 오일 베이스로 포도씨유 19 unit(g), 올리브 유래 왁스 5 unit(g), 첨가물로 napre 1 unit(g) 및 라벤더 에센셜 오일 3방울로 로션을 제조하였다.
Ingredient Unit(g)
Lotion W Fermented sterilized milk-cream(K1, K2, K3, K4, K5, K6, K7, K8, K9, K10) 75
O Grape seed oil 19
Olive derived wax 5
A Napre 1
Total weight 100
Abbreviation: W, water base (K1, fermented milk-cream with KCTC 3115; K2, fermented milk-cream with ATCC 8014; K3, fermented milk-cream with KCTC 3510; K4, fermented milk-cream with KCTC 3162; K5, fermented milk-cream with KCTC 3635; K6, fermented milk-cream with KCTC 3594; K7, fermented milk-cream with KCTC 3600; K8, fermented milk-cream with KCTC 3112; K9, fermented milk-cream with KCTC 3140: K10, fermented milk-cream with KCTC 3202); O, oil base; A, additives. This biological resources used in this research were distributed from KCTC.
<실시예 1-3> 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 준비
상기 <실시예 1-1>와 동일한 방법으로 유지방이 35% 이상 함유된 유크림 1l에 전배양한 락토바실러스 람노서스 1×106 cfu/㎖ 이상을 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 유크림 발효액을 수득하였다.
<실시예 1-4> 간헐멸균(Tyndallization)된 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 준비
상기 <실시예 1-3>과 동일한 방법으로 수득한 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 80 이상에서 일정한 기압으로 15분 이상 가온하여 간헐멸균된 유크림 발효액을 수득하였다.
<실시예 1-5> 다양한 유산균 발효농축액 준비
Lactobacilli MRS 또는 스킴 밀크(skim milk) 1l에 <실시예 1>과 동일한 방법으로 전배양한 락토바실러스 람노서스 및 락토코커스 락티스를 1×106 cfu/㎖ 이상을 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 다양한 유산균 발효액을 수득하였다. 그 후, 다양한 유산균 발효액을 80 이상에서 일정한 기압으로 15분 이상 가온하는 등으로 간헐멸균(Tyndallization)한 후, 60 이상에서 60분 이상 가온을 실시하여 감압 10배 농축한 다양한 유산균 10배 발효농축액을 수득하였다.
<실시예 1-6> 다양하게 제조된 유크림 발효액을 함유한 로션 제형 준비
상기 <실시예 1-4>에서 수득한 간헐멸균(Tyndallization)된 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(K11), 상기 <실시예 1-3>에서 수득한 락토바실러스 람노서스유크림 발효액과 <실시예 1-4>에서 다양한 유산균 농축 발효액을 하기 표 2와 같은 비율로 배합하여 수득한 다양한 유크림 발효액(K12, K13, K14, K15), 상기 <실시예 1-3>에서 수득한 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 25 중량%에 상기 <실시예 1-1>에서 수득한 락토코커스 락티스유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 가세리 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 델브루에키 유크림 발효액 25 중량%를 혼합한 혼합 유크림 발효액(K16)을 제형 총 중량의 75 중량%로 함유한 로션 제형을 제조하였다(표 2).
또한, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 함유한 로션은 상기 실시예 1의 바실러스 람노서스 유크림 로션제형(B2)과 동일하며, 상기 다양한 유산균 유크림 로션의 비교군으로 이용하였다.
Ingredient Unit(g)
Lotion W Fermented sterilized milk cream(K11, K12, K13, K14, K15, K16) 75
O Grape seed oil 19
Olive derived wax 5
A Napre 1
Total weight 100
Abbreviation: W, water base (K11, tyndalized fermented milk-cream broth with KCTC 5033; K12, mixture, added 10% 10-fold concentrated fermented broth with KCTC 5033 to fermented milk-cream with KCTC 5033; K13, mixture, added 20% 10-fold concentrated fermented broth with KCTC 5033 to fermented milk-cream with KCTC 5033; K14, mixture, added 10% 10-fold concentrated fermented broth with KCTC 3115 to fermented milk-cream with KCTC 5033; K15, mixture, added 10% 10-fold concentrated fermented broth with KCTC 3202 to fermented milk-cream with KCTC 5033; K16, Fermented milk-cream mixture, mixing fermented milk-cream KCTC 5033, fermented milk-cream with KCTC 3115, fermented milk-cream with KCTC 3162 and fermented milk-cream with KCTC 3635); O, oil base; A, additives.
<실험예 1-1> 아토피 피부염 시험대상자의 선정
임상 모집공고를 통하여 모집된 아토피 피부염 병변이 있는 참가희망자 중 6개월 이상 간헐적 또는 지속적으로 아토피 피부염 증상을 보인 참가 희망자를 1차 선정하고, 이들 중 6개월 이내에 아토피 피부염 치료를 위해 국소 및 전신 스테로이드, 면역 조절 및 억제제, 항히스타민제나 이에 준하는 치료를 받은 경험이 있는 사람을 제외한 참가희망자를 최종 시험대상자로 선정하였다. 아울러, 시험기간은 총 6주(42일)간으로 하였다.
<실험예 1-2> 아토피 치료 효과 확인 방법
피부 병변의 정확한 상태를 측정하기 위하여 항온 항습 조건을 실내온도 20~25, 실내습도 40~60%로 설정한 피부측정실에서 비침습적 피부측정장비인 MPA580(Multi Probe Adapter system, C+K Electronic GmbH, Cologne, Germany)을 이용하여 기계적 측정을 실시하였다. 시험대상자는 병변 부위의 정확한 평가를 위해 피부측정실 입실 12시간 전부터는 시험로션 도포를 금지하였으며, 입실 후 약 30분간 안정을 취하게 한 후 측정을 하였다.
또한, 피부측정은 임상시험 전후 총 2회에 걸쳐 실시하였고, 보다 객관적인 결과를 위해 측정자 2인이 동일한 방법으로 측정하였다. 피부측정은 피부수분보유량(skin surface hydration, SSH), 피부의 산성도(pH), 경피수분증발량(transepidermal water loss, TEWL)을 임상시험 전 시험대상자의 병변부위 중 중증도가 가장 심한 부위를 지정하여 측정하고, 개인별로 표시해두었다가 임상시험 후 동일 병변부위를 측정하여 객관적인 효과를 평가하였다.
아울러, 참여한 시험대상자의 병변 부위를 시험 전후 디지털 카메라(SAMSUNG, VLUU PL150)를 이용하여 총2회 촬영하였다. 객관적인 결과를 얻기 위하여 기계적 측정부위와 동일한 병변 부위를 지정된 장소에서 동일 촬영자 1인이 촬영하였다.
<실험예 1-3> 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 후 아토피피부염 병변의 개선 효과 확인
<1-3-1> 피부 수분 보유량(SSH) 확인
상기 <실시예 1-1>에서 수득한 발효액으로 상기 <실시예 1-2>와 동일한 방법으로 제조한 다양한 유산균으로 발효시킨 유크림 발효액을 함유한 로션을 아토피 피부염 병변 부위에 도포한 후, 시험 전후 피부수분보유량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 1-3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 22% 유의하게 증가한데 비하여, 락토코커스 락티스(K1)는 약 21% 유의하게 증가하였으며, 락토바실러스 플란타룸(K2)는 약 12% 유의하게 증가, 락토바실러스 파라카제이(K3)는 약 18% 유의하게 증가, 락토바실러스 가세리(K4)는 약 21% 유의하게 증가하였으며, 락토바실러스 델브루에키(K5)는 약 24% 증가하였고, 락토바실러스 루테리(K6)는 약 16% 유의하게 증가, 락토바실러스 살리바리우스(K7)는 약 23% 유의하게 증가, 락토바실러스 퍼멘텀(K8)은 약 19% 유의하게 증가, 락토바실러스 애시도필러스(K9)은 약 17% 유의하게 증가하였으며, 비피도박테리움 비피덤(K10)은 약 22% 유의하게 피부수분보유량이 증가해, 다양한 유산균으로 발효시킨 유크림 발효액을 함유한 로션들도 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우와 유사하게 아토피 피부염 병변 부위의 피부수분보유량을 증가시키는 것을 확인하였다(표 3).
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
SSH B2 21 22.12± 7.98 27.05± 7.99 -4.92±4.53 -4.981 (.000***)
K1 3 20.04±3.14 24.31±2.17 -4.27±1.05 -7.056 (.020*)
K2 3 19.77±2.63 22.10±2.81 -2.33±0.61 -6.614 (.022*)
K3 3 23.85±3.20 28.13±2.69 -4.28±0.52 -14.288 (.005**)
K4 3 20.33±3.99 24.64±3.73 -4.31±0.31 -23.834 (.002**)
K5 3 21.41±4.25 26.48±2.01 -5.07±2.67 -3.292 (.081)
K6 3 26.59±2.74 30.91±2.80 -4.32±0.31 -24.289 (.002**)
K7 3 19.50±1.04 24.07±1.59 -4.56±1.76 -4.484 (.046*)
K8 3 21.94±3.12 26.07±3.25 -4.12±0.24 -30.279 (.001**)
K9 3 23.52±1.32 27.51±1.15 -3.99±0.28 -24.267 (.002**)
K10 3 20.72±2.64 25.27±3.44 -4.55±0.88 -8.927 (.012*)
*p<.05, **p<.01, ***p<.001
Abbreviation: B2, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 5033; K1, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3115; K2, testing products made from fermented milk-cream with ATCC 8014; K3, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3510; K4, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3162; K5, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3635; K6, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3594; K7, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3600; K8, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3112; K9, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3140; K10, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3202; N, The number of people in group.
<1-3-2> 피부 표면의 산성도(pH) 확인
상기 <1-3-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 피부 표면의 산성도의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 1-3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 6% 유의하게 감소한데 비하여, 락토코커스 락티스(K1)는 약 6% 감소하였으며, 락토바실러스 프란타룸(K2)는 약 2% 감소, 락토바실러스 파라카제이(K3)는 약 5% 감소, 락토바실러스 가세리(K4)는 약 5% 유의하게 감소하였고, 락토바실러스 델브루에키(K5)는 약 7% 감소, 락토바실러스 루테리(K6)는 약 4% 감소, 락토바실러스 살리바리우스(K7)는 약 6% 유의하게 감소, 락토바실러스 퍼멘텀(K8)은 약 4% 유의하게 감소, 락토바실러스 애시도필러스(K9)는 약 3% 감소하였으며, 비피도박테리움 비피덤(K10)은 약 6% 피부 표면 pH가 감소해, 다양한 유산균으로 발효시킨 유크림 발효액을 함유한 로션들도 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우와 유사하게 아토피 피부염 병변 부위의 피부 pH를 감소시키는 것을 확인하였다(표 4).
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
pH B2 21 5.56±0.48 5.21±0.38 0.34±0.39 3.963 (.001**)
K1 3 5.62±0.18 5.27±0.37 0.35±0.22 2.714 (.113)
K2 3 5.45±0.41 5.31±0.32 0.13±0.12 2.753 (.111)
K3 3 5.56±0.08 5.30±0.15 0.26±0.11 4.274 (.051)
K4 3 5.73±0.32 5.47±0.37 0.26±0.06 7.403 (.018*)
K5 3 5.55±0.21 5.16±0.06 0.39±0.18 1.429 (.289)
K6 3 5.50±0.25 5.26±0.38 0.23±0.20 2.056 (.176)
K7 3 5.47±0.24 5.15±0.17 0.31±0.09 5.742 (.029*)
K8 3 5.55±0.10 5.33±0.17 0.22±0.08 4.801 (.041*)
K9 3 5.51±0.15 5.33±0.14 0.17±0.10 3.159 (.087)
K10 3 5.56±0.42 5.15±0.26 0.31±0.01 4.093 (.055)
*p<.05, **p<.01
Abbreviations were the same as Table 3.
<1-3-3> 경피수분증발량(TEWL) 확인
상기 <1-3-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 경피수분증발량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 1-3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 32% 유의하게 TEWL이 감소한데 비하여, 락토코커스 락티스(K1)는 약 32% 유의하게 감소하였으며, 락토바실러스 프란타룸(K2)는 약 20% 유의하게 감소, 락토바실러스 파라카제이(K3)는 약 23% 유의하게 감소, 락토바실러스 가세리(K4)는 약 29% 유의하게 감소, 락토바실러스 델브루에키(K5)는 약 29% 유의하게 감소, 락토바실러스 루테리(K6)는 약 24% 감소, 락토바실러스 살리바리우스(K7)는 약 32% 유의하게 감소, 락토바실러스 퍼멘텀(K8)은 약 26% 유의하게 감소, 락토바실러스 애시도필러스(K9)는 약 27% 유의하게 감소하였으며, 비피도박테리움 비피덤(K10)은 약 31% 유의하게 피부 TEWL이 감소해, 다양한 유산균으로 발효시킨 유크림 발효액을 함유한 로션들도 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우와 유사하게 아토피 피부염 병변 부위의 TEWL을 감소시키는 것을 확인하였다(표 5).
따라서, 다양한 다른 유산균주로 발효한 유크림 발효액도 피부수분보유량을 증가시키고, 피부의 pH수치를 감소시키며, 경피수분증발량을 감소시켜, 종래(10-2016-0035879, PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포하였을 경우와 유사하게 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다.
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
TEWL B2 21 38.94±21.58 26.62±14.36 12.32±13.59 4.154 (.000***)
K1 3 33.68±3.10 22.93±1.57 10.75±2.57 7.229 (.019*)
K2 3 32.65±1.15 26.24±1.49 6.41±1.48 7.479 (.017*)
K3 3 34.59±3.34 26.78±3.19 7.81±2.72 4.967 (.038*)
K4 3 31.60±1.97 22.48±0.63 9.12±1.36 11.658 (.007**)
K5 3 35.35±4.17 24.96±6.32 10.39±2.41 7.461 (.017*)
K6 3 29.54±7.23 22.38±4.76 7.17±3.27 3.802 (.063)
K7 3 35.09±4.58 23.97±4.73 11.13±1.19 16.257 (.004**)
K8 3 29.32±3.29 21.68±2.86 7.64±0.71 18.544 (.003**)
K9 3 36.23±6.23 26.30±2.67 9.94±5.41 10.640 (.009**)
K10 3 34.89±4.33 24.06±3.02 10.83±2.04 9.195 (.012*)
*p<.05, **p<.01, ***p<.001
Abbreviations were the same as Table 3.
<실험예 1-4> 다양하게 제조한 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 후의 아토피피부염 병변의 개선 효과 확인
<1-4-1> 피부수분보유량(SSH) 확인
상기 <실시예 1-5>의 방법으로 다양하게 제조한 유크림 발효액을 함유한 로션을 아토피 피부염 병변 부위에 도포한 후, 시험 전후 피부수분보유량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 1-3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 22% 유의하게 증가한데 비하여, 간헐멸균(Tyndallization)된 유크림 발효액(K11)은 약 29% 증가, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 유크림 발효액(K12)은 약 32% 유의하게 증가, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 80 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 20 중량%의 혼합 유크림 발효액(K13)은 약 31% 유의하게 증가, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토코커스 락티스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 유크림 발효액(K14)은 약 29% 유의하게 증가하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 비피도박테리움 비피덤 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액(K15)은 피부수분보유량이 약 30% 유의하게 증가하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변 부위의 피부수분보유량을 증가시키는 데 더 우수함을 확인하였다(표 6).
한편, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 25 중량%에 락토코커스 락티스 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 가세리 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 델브루에키 유크림 발효액 25 중량%를 혼합한 혼합 유크림 발효액(K16)은 피부수분보유량이 약 22% 유의하게 증가하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우와 유사하게 아토피 피부염 병변 부위의 피부수분보유량을 증가시키는 것을 확인하였다(표 6).
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
SSH B2 21 22.12± 7.98 27.05± 7.99 -4.92±4.53 -4.981 (.000***)
K11 3 21.30±3.29 27.47±1.22 -6.17±4.38 -2.439 (.135)
K12 3 22.57±4.42 29.80±5.77 -7.23±1.94 -6.458 (.023*)
K13 3 18.30±2.86 24.03±3.92 -5.73±1.10 -9.015 (.012*)
K14 3 19.00±1.92 24.46±2.50 -5.46±1.10 -8.568 (.013*)
K15 3 23.55±1.82 30.59±1.78 -7.03±1.20 -10.124 (.009**)
K16 3 21.30±2.81 26.02±3.69 -4.72±0.88 -9.261 (.012*)
*p<.05, ***p<.001
Abbreviation: B2, testing products made from fermented milk cream with KCTC 5033; K11, testing products made from tyndalized fermented milk-cream broth with KCTC 5033; K12, testing products made from mixture, aded 10% 10-fold concentrated fermented skim milk broth with KCTC 5033 to fermented milk cream with KCTC 5033; K13, testing products made from mixture, aded 20% 10-fold concentrated fermented skim milk broth with KCTC 5033 to fermented milk cream with KCTC 5033; K14, testing products made from mixture, aded 10% 10-fold concentrated fermented broth with KCTC 3115 to fermented milk cream with KCTC 5033; K15, testing products made from mixture, aded 10% 10-fold concentrated fermented broth with KCTC 3202 to fermented milk cream with KCTC 5033; K16, testing products made from fermented milk-cream mixture, mixing fermented milk-cream KCTC 5033, KCTC 3115, KCTC 3162 and KCTC 3635; N, The number of people in group.
<1-4-2> 피부 표면의 산성도(pH) 확인
상기 <1-4-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 피부 표면의 산성도의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 1-3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 6% 유의하게 감소한데 비하여, 간헐멸균(Tyndallization)된 유크림 발효액(K11)은 약 7% 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 유크림 발효액(K12)은 약 9% 유의하게 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 80 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 20 중량%의 혼합 유크림 발효액(K13)은 약 8% 유의하게 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토코커스 락티스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 유크림 발효액(K14)은 약 8% 유의하게 감소하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 비피도박테리움 비피덤 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액(K15)은 피부 표면의 pH가 약 8% 감소하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변 부위의 피부 pH를 감소시키는 데 더 우수함을 확인하였다(표 7).
한편 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 25 중량%에 락토코커스 락티스 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 가세리 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 델브루에키 유크림 발효액 25 중량%를 혼합한 혼합 유크림 발효액(K16)은 피부 표면의 pH가 약 6% 감소하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우와 유사하게 아토피 피부염 병변의 피부 pH를 감소시키는 것을 확인하였다(표 7).
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
pH B2 21 5.56±0.48 5.21±0.38 0.34±0.39 3.963 (.001**)
K11 3 5.59±0.12 5.20±0.30 0.39±0.37 1.814 (.211)
K12 3 5.64±0.28 5.15±0.20 0.49±0.11 7.621 (.017*)
K13 3 5.66±0.23 5.21±0.15 0.45±0.17 4.525 (.046*)
K14 3 5.38±0.25 4.97±0.23 0.41±0.04 7.581 (.017*)
K15 3 5.57±0.27 5.11±0.11 0.46±0.28 2.859 (.104)
K16 3 5.68±0.28 5.35±0.14 0.32±0.29 1.951 (.190)
*p<.05, **p<.01
Abbreviations were the same as Table 6.
<1-4-3> 경피수분증발량(TEWL) 확인
상기 <1-4-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 경피수분증발량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 1-3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 32% 유의하게 TEWL이 감소한데 비하여, 간헐멸균(Tyndallization)된 유크림 발효액(K11)은 약 36% 유의하게 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액(K12)은 약 41% 유의하게 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 80 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 20 중량%의 혼합 발효액(K13)은 약 40% 유의하게 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토코커스 락티스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액(K14)은 약 38% 유의하게 감소하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 비피도박테리움 비피덤 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액(K15)은 경피수분증발량이 약 39% 유의하게 감소하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변 부위의 TEWL을 감소시키는 데 더 우수함을 확인하였다(표 8).
한편, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 25 중량%에 락토코커스 락티스 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 가세리 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 델브루에키 유크림 발효액 25 중량%를 혼합한 혼합 유크림 발효액(K16)은 경피수분증발량이 약 31% 유의하게 감소하여, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우와 유사하게 아토피 피부염 병변 부위의 TEWL을 감소시키는 것을 확인하였다(표 8).
따라서 간헐멸균(Tyndallization)된 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액, 또는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 80 중량%와 락토바실러스 람노서스 10배 발효농축액 20 중량%의 혼합 발효액, 또는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 락토코커스 락티스 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 90 중량%와 비피도박테리움 비피덤 10배 발효농축액 10 중량%의 혼합 발효액이 피부수분보유량의 증가, 피부의 pH수치의 감소, 경피수분증발량의 감소 등에서 모두 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)에 비해 유의적으로 더 높게 변화함으로써, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 매우 월등하게 기여하는 것을 확인하였다.
또한, 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액을 함유한 로션들 중 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 25 중량%에 임의로 선별한 락토코커스 락티스 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 가세리 유크림 발효액 25 중량%, 락토바실러스 델브루에키 유크림 발효액 25 중량%를 혼합한 혼합 유크림 발효액이 아토피 피부염 병변의 피부 수분보유량의 증가, 피부 pH수치의 감소, 경피수분증발량의 감소 등에서 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)과 유사한 변화를 보여, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다.
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
TEWL B2 21 38.94±21.58 26.62±14.36 12.32±13.59 4.154 (.000***)
K11 3 30.23±6.62 19.20±4.54 11.03±2.87 6.660 (.022*)
K12 3 29.34±5.99 17.27±4.62 12.08±1.57 13.316 (.006**)
K13 3 39.83±2.30 23.77±2.56 16.06±4.18 6.657 (.022*)
K14 3 37.50±7.15 23.11±6.47 14.39±2.63 9.481 (.011*)
K15 3 34.91±2.94 21.24±4.58 13.67±1.85 12.808 (.006**)
K16 3 34.17±7.11 23.47±5.67 10.70±1.71 10.818 (.008**)
*p<.05, **p<.01, ***p<.001
Abbreviations were the same as Table 6.
<실시예 2> 다양한 유산균 균주에 효모추출물을 포함하는 다양한 유크림 발효액 준비 및 아토피 피부염 치료 확인
<실시예 2-1> 다양한 유크림배지 발효액 준비
유지방이 35% 이상 함유된 유크림 99 중량%에 효모추출물(Yeast extract, Becton, Dickinson & Co, Calif., U.S.A) 1 중량%를 혼합한 유크림 효모 배지 1l에 락토바실러스 람노서스 KCTC 5033을 1×106 cfu/㎖ 이상을 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액(M1)을 수득하였다.
또한, 유지방이 35% 이상 함유된 유크림 95 중량%에 Lactobacilli MRS broth(Becton, Dickinson & Co, Calif., U.S.A) 5 중량%를 혼합한 유크림 MRS 배지 1l에 락토바실러스 람노서스 KCTC 5033을 1×106 cfu/㎖ 이상을 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 락토바실러스 람노서스 유크림 MRS발효액(M2)을 수득하였다.
또한, 상기와 동일한 방법으로 락토코커스 락티스를 유크림효모 배지, 유크림 MRS 배지에 각각 접종하여 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액(M3), 락토코커스 락티스 유크림 MRS 발효액(M4)을 각각 수득하였다.
또한, 상기와 동일한 방법으로 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액 중 그 변화량이 가장 낮았던 락토바실러스 플란타룸을 유크림효모 배지, 유크림MRS 배지에 각각 접종하여 락토바실러스 플란타룸 유크림효모 발효액(M5), 락토바실러스 플란타룸 유크림MRS 발효액(M6)을 각각 수득하였다.
<실시예 2-2> 다양한 유크림배지 발효액을 함유한 로션 제형 준비
상기 <실시예 2-1>에서 수득한 다양한 유크림효모 발효액, 유크림MRS 발효액을 하기와 같이 제형 총 중량의 75 중량%를 함유한 로션 제형을 제조하였다(표 13).
또한 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 함유한 로션은 종래 문헌에 기재된 방법에 따라(10-2016-0035879, PCT/KR2017/003172), 워터 베이스로 fermented sterilized milk cream 75 unit(g), 오일 베이스로 포도씨유 19 unit(g), 올리브 유래 왁스 5 unit(g), 첨가물로 napre 1 unit(g) 및 라벤더 에센셜 오일 3방울로 로션을 제조하였다.
락토코커스 락티스 유크림 발효액과 락토바실러스 플란타룸 유크림 발효액을 함유한 로션은 상기 <실시예 1-6>에서 제조한 유크림 로션제형과 동일하며, 상기 다양한 유크림배지 발효액 로션의 비교군으로 이용하였다.
Ingredient Unit(g)
Lotion W Fermented sterilized milk cream(M1, M2, M3, M4, M5, M6) 75
O Grape seed oil 19
Olive derived wax 5
A Napre 1
Total weight 100
Abbreviation: W, water base (M1, fermented milk-cream & yeast broth with KCTC 5033; M2, fermented milk-cream & MRS broth with KCTC 5033; M3, fermented milk-cream & yeast broth with KCTC 3115; M4, fermented milk-cream & MRS broth with KCTC 3115; M5, fermented milk-cream & yeast broth with ATCC 8014; M6, fermented milk-cream & MRS broth with ATCC 8014; Milk-cream & yeast broth, mixture of 99% of milk-cream and 1% of yeast extract; Milk-cream & MRS broth, mixture of 95% of milk-cream and 5% of MRS broth); O, oil base; A, additives.
<실험예 2-3> 다양한 유크림배지 발효액을 함유한 로션을 도포한 후의 아토피피부염 병변의 개선 효과 확인
<2-3-1> 피부수분보유량(SSH) 확인
상기 <실시예 2-1>에서 수득한 발효액으로 상기 <실시예 2-2>에서 로션을 아토피 피부염 병변 부위에 도포한 후, 시험 전후 피부수분보유량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 10에 나타낸 바와 같이, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 22% 유의하게 증가한데 비하여, 락토코커스 락티스(K1)는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액과 유사하게 약 21% 유의하게 증가한 반면, 락토바실러스 플란타룸(K2)은 약 12% 유의하게 증가하여 다른 유산균 유크림 발효액에 비하면 그 증가폭이 다소 낮았다.
이에 비해 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액(M1)은 약 24% 유의하게 증가, 락토바실러스 람노서스 유크림MRS 발효액(M2)은 약 23% 유의하게 증가하였으며, 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액(M3)은 약 24% 유의하게 증가, 락토코커스 락티스 유크림MRS 발효액(M4)은 약 23% 유의하게 증가하여, 유크림 단일 배지 발효액보다 조금씩 더 증가한 것으로 나타난 반면, 락토바실러스 플란타룸 유크림효모 발효액(M5)은 약 18% 유의하게 증가, 락토바실러스 플란타룸 유크림MRS 발효액(M6)은 약 20% 증가하였으나, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액보다 그 증가폭이 낮은 것으로 나타났다.
이상의 결과로 락토바실러스 플란타룸으로 발효한 유크림 발효액, 유크림효모 발효액, 유크림 MRS 발효액은 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다는 그 증가폭은 다소 낮았으나 아토피 피부염 병변 부위의 피부수분보유량을 증가시키는 데 도움은 되었으며, 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액, 락토바실러스 람노서스 유크림 MRS 발효액, 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액, 락토코커스 락티스 유크림 MRS 발효액의 경우는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변 부위의 피부수분보유량을 증가시키는 데 더 우수함을 확인하였다(표 10).
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
SSH B2 21 22.12± 7.98 27.05± 7.99 -4.92±4.53 -4.981 (.000***)
K1 3 20.04±3.14 24.31±2.17 -4.27±1.05 -7.056 (.020*)
K2 3 19.77±2.63 22.10±2.81 -2.33±0.61 -6.614 (.022*)
M1 3 20.66±4.07 25.54±4.86 -4.88±1.29 -6.557 (.023*)
M2 3 20.82±3.54 25.67±2.37 -4.84±1.32 -6.362 (.024*)
M3 3 22.74±2.45 28.17±2.69 -5.42±1.13 -8.350 (.014*)
M4 3 22.46±1.66 27.65±0.70 -5.19±1.60 -5.635 (.030*)
M5 3 21.19±3.52 25.17±2.63 -3.98±1.31 -5.275 (.034*)
M6 3 23.04±2.55 27.67±2.01 -4.62±1.97 -4.066 (.056)
*p<.05, **p<.01, ***p<.001
Abbreviation: B2, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 5033; K1, testing products made from fermented milk-cream with KCTC 3115; K2, testing products made from fermented milk-cream with ATCC 8014; M1, testing products made from fermented milk-cream & yeast broth with KCTC 5033; M2, testing products made from fermented milk-cream & MRS broth with KCTC 5033; M3, testing products made from fermented milk-cream & yeast broth with KCTC 3115; M4, testing products made from fermented milk-cream & MRS broth with KCTC 3115; M5, testing products made from fermented milk-cream & yeast broth with ATCC 8014; M6, testing products made from fermented milk-cream & MRS broth with ATCC 8014; N, The number of people in group.
<2-3-2> 피부 표면의 산성도(pH) 확인
상기 <2-3-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 피부 표면의 산성도의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 11에 나타낸 바와 같이, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 6% 유의하게 감소한데 비하여, 락토코커스 락티스(K1)는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액과 유사하게 약 6% 감소한 반면, 락토바실러스 프란타룸(K2)는 약 2% 감소하여 다른 유산균 유크림 발효액에 비하면 그 감소폭이 다소 낮았다.
이에 비해 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액(M1)은 약 7% 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림MRS 발효액(M2)은 약 6% 감소하였으며, 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액(M3)은 약 7% 유의하게 감소, 락토코커스 락티스 유크림MRS 발효액(M4)은 약 6% 감소하여, 유크림 단일 배지 발효액보다 조금씩 더 감소한 것으로 나타난 반면, 락토바실러스 플란타룸 유크림효모 발효액(M5)은 약 5% 감소, 락토바실러스 플란타룸 유크림MRS 발효액(M6)은 약 5% 유의하게 감소하였으나, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액보다 그 감소폭이 낮은 것으로 나타났다.
이상의 결과로 락토바실러스 플란타룸으로 발효한 유크림 발효액, 유크림효모 발효액, 유크림MRS 발효액은 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다는 그 감소폭은 다소 낮았으나 아토피 피부염 병변 부위의 피부 pH를 감소시키는 데 도움은 되었으며, 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액, 락토바실러스 람노서스 유크림MRS 발효액, 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액, 락토코커스 락티스 유크림MRS 발효액의 경우는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변 부위의 피부 pH를 감소시키는 데 더 우수함을 확인하였다(표 11).
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
pH B2 21 5.56±0.48 5.21±0.38 0.34±0.39 3.963 (.001**)
K1 3 5.62±0.18 5.27±0.37 0.35±0.22 2.714 (.113)
K2 3 5.45±0.41 5.31±0.32 0.13±0.12 2.753 (.111)
M1 3 5.45±0.38 5.09±0.26 0.36±0.37 1.704 (.230)
M2 3 5.33±0.25 5.00±0.08 0.34±0.19 3.002 (.095)
M3 3 5.39±0.21 5.03±0.14 0.36±0.08 9.827 (.010*)
M4 3 5.50±0.42 5.16±0.28 0.34±0.21 2.767 (.110)
M5 3 5.37±0.05 5.10±0.23 0.27±0.20 2.304 (.148)
M6 3 5.57±0.25 5.26±0.22 0.30±0.07 7.128 (.019*)
*p<.05, **p<.01
Abbreviations were the same as Table 10.
<2-3-3> 경피수분증발량(TEWL) 확인
상기 <2-3-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 경피수분증발량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 16에 나타낸 바와 같이, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 32% 유의하게 TEWL이 감소한데 비하여, 락토코커스 락티스(K1)는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액과 유사하게 약 32% 유의하게 감소한 반면, 락토바실러스 프란타룸(K2)는 약 20% 유의하게 감소하여 다른 유산균 유크림 발효액에 비하면 그 감소폭이 다소 낮았다.
이에 비해 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액(M1)은 약 35% 유의하게 감소, 락토바실러스 람노서스 유크림MRS 발효액(M2)은 약 34% 유의하게 감소하였으며, 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액(M3)은 약 36% 유의하게 감소, 락토코커스 락티스 유크림MRS 발효액(M4)은 약 34% 유의하게 감소하여, 유크림 단일 배지 발효액보다 조금씩 더 감소한 것으로 나타난 반면, 락토바실러스 플란타룸 유크림효모 발효액(M5)은 약 28% 유의하게 감소, 락토바실러스 플란타룸 유크림MRS 발효액(M6)은 약 30% 유의하게 감소하였으나, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액보다 그 감소폭이 낮은 것으로 나타났다(표 12).
이상의 결과로 락토바실러스 플란타룸으로 발효한 유크림 발효액, 유크림효모 발효액, 유크림MRS 발효액은 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다는 그 감소폭은 다소 낮았으나 아토피 피부염 병변 부위의 TEWL을 감소시키는 데 도움은 되었으며, 락토바실러스 람노서스 유크림효모 발효액, 락토바실러스 람노서스 유크림MRS 발효액, 락토코커스 락티스 유크림효모 발효액, 락토코커스 락티스 유크림MRS 발효액의 경우는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변 부위의 TEWL을 감소시키는 데 더 우수함을 확인하였다(표 12).
따라서, 다양한 유산균으로 발효한 유크림 발효액 중 그 변화량이 가장 낮았던 Lactobacillus plantarum으로 발효한 유크림효모 발효액, 유크림MRS 발효액인 경우에도 아토피 피부염의 병변 발현의 억제, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하였으며, 다양한 유크림배지 발효액은 피부수분보유량을 증가시키고, 피부의 pH수치를 감소시키며, 경피수분증발량을 감소시켜, 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 로션(B2)을 도포하였을 경우보다 더 우수하게 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였다.
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 t (p)
TEWL B2 21 38.94±21.58 26.62±14.36 12.32±13.59 4.154 (.000***)
K1 3 33.68±3.10 22.93±1.57 10.75±2.57 7.229 (.019*)
K2 3 32.65±1.15 26.24±1.49 6.41±1.48 7.479 (.017*)
M1 3 39.18±2.61 25.35±3.08 13.83±2.25 10.638 (.009**)
M2 3 38.73±2.74 25.53±2.68 13.20±2.36 9.696 (.011*)
M3 3 37.02±4.14 23.82±5.61 13.20±2.01 11.379 (.008**)
M4 3 38.50±1.25 25.32±5.07 13.18±4.30 5.316 (.034*)
M5 3 37.98±2.75 27.22±1.13 10.76±3.00 6.224 (.025*)
M6 3 39.83±2.30 27.87±4.40 11.97±2.68 7.744 (.016*)
*p<.05, **p<.01, ***p<.001
Abbreviations were the same as Table 10.
<실시예 3> 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하거나 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균 복용과 동시에 유크림 발효액을 도포한 후의 아토피 치료 효과 확인
<실시예 3-1> 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균 캡슐의 제조
상기 <실시예 1-5>와 동일한 방법으로 Lactobacilli MRS, 또는 skim milk 1l에 전배양한 락토바실러스 람노서스(KCTC 5033)를 1×106 cfu/㎖ 이상을 접종한 후, 항온 37 배양기에서 24시간이상 배양하여 락토바실러스 람노서스 발효액을 수득하였다.
그런 다음, 락토바실러스 람노서스 발효액을 60이하에서 1시간 이상 가온을 실시하여 감압농축한 다음 동결건조시켜 분말하여 수득한 것을 락토바실러스 람노서스 생균체로 사용하였다.
또한, 상기 락토바실러스 람노서스 발효액의 생균을 사균 하기 위하여 80 이상에서 일정한 기압으로 15분 이상 가온하는 간헐멸균(Tyndallization)을 시행한 후 60이하에서 1시간 이상 가온을 실시하여 감압농축한 다음 동결건조시켜 분말하여 수득한 것을 락토바실러스 람노서스 사균체로 사용하였다.
본 실험을 위한 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균은 생균체 50 중량% + 락토바실러스 람노서스 사균체 50 중량%를 혼합한 후 캡슐에 충전하여 제조하되, 용량은 500mg/capsule, 한 캡슐 당 생균수는 5.0×1010 CFU 이상으로, 사균수는 5.0×1010 CFU 이상으로 정하여 총 중량 10.0×1010 CFU 이상으로 배합하였다.
또한 대조군으로 경구용 락토바실러스 람노서스 생균은 락토바실러스 람노서스 생균체 100 중량%으로 캡슐에 충전하되, 용량은 500mg/capsule, 한 캡슐 당 생균수는 10.0×1010 CFU 이상으로 정하였으며, 경구용 락토바실러스 람노서스 사균은 락토바실러스 람노서스 사균체 100 중량%으로 캡슐에 충전하되, 용량은 500mg/capsule, 한 캡슐 당 사균수는 10.0×1010 CFU 이상으로 정하여 각각 수득하였다.
<실험예 3> 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하거나 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균 복용과 동시에 유크림 발효액을 도포한 후의 아토피 치료 효과 확인
<3-1> 피부수분보유량(SSH) 확인
상기 <실시예 3>에서 수득한 경구용 락토바실러스 람노서스 생균 캡슐(H1), 사균 캡슐(H2), 혼합균 캡슐(H3)을 상기 <실험예 1-1>의 방법으로 모집한 아토피 피부염 시험대상자에게 각각 30일 동안 하루 1회 1캡슐, 물과 함께 복용한 후, 시험 전후 피부수분보유량의 변화를 확인하였다. 또한 상기 <실시예 3>에서 제조한 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균 캡슐을 복용하는 동시에 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 함유한 로션과 동일한 방법으로 제조한 락토바실러스 람노서스 유크림 로션을 아토피 피부염 병변 부위에 하루 2회 도포(H4)한 후, 시험 전후 피부수분보유량의 변화를 확인하였다.
그 결과, 하기 표 13에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들의 기 특허 출원서(10-2016-0035879)의 <실험예 3>에서와 같이 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 22% 유의적으로 증가한 것에 비교하여, 경구용 락토바실러스 람노서스 생균 캡슐을 복용한 경우(H1), 사균 캡슐을 복용한 경우(H2), 각각 약 7%, 14% 증가 경향을 보였으며, 혼합균 캡슐을 복용한 경우(H3)에는 약 16% 증가경향을 보였다. 한편, 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 경우(H4)에는 약 29% 유의하게 증가하였다(표 13).
따라서, 경구용 락토바실러스 람노서스 생균을 복용한 경우 보다 사균을 복용하는 것이, 그 보다 혼합균을 복용하는 것이 아토피 피부염 병변의 피부수분보유량을 증가시키는 데 더 우수하였으며, 특히 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 경우에는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변의 피부수분보유량을 증가시키는 데 더 우수함을 확인하였다.
Variable Group N Measurement (Mean±SD) Analysis of variance
Before After t1-t2 (M±SD) t (p)
SSH B2 21 22.12±7.98 27.05±7.99 -4.92±4.53 -4.981 (.000***)
H1 3 25.58±7.86 27.26±5.85 -1.68±9.25 -0.406 (0.706)
H2 3 18.53±2.35 21.20±9.75 -2.66±7.46 -.619 (.599)
H3 3 19.11±2.52 22.10±3.36 -2.99±1.59 -3.250 (.083)
H4 3 16.30±2.80 20.96±3.84 -4.66±1.07 -7.494 (.017*)
*p<.05, ***p<.001
Abbreviation: B2, lotion made from fermented milk cream with L. rhamnosus; H1, ate oral L. rhamnosus, live cells; H2, ate oral L. rhamnosus, dead cells; H3, ate oral L. rhamnosus, mixed cells; H4, ate oral L. rhamnosus, mixed cells and applied the lotion made from fermented milk cream with on skin.
<3-2> 피부 표면의 산성도(pH) 확인
상기 <3-1>과 동일한 방법으로 시험 전후 피부의 산성도 변화를 측정하였다.
그 결과, 하기 표 14에 나타낸 바와 같이, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 6% 유의하게 감소한데 비하여, 경구용 락토바실러스 람노서스 생균 캡슐을 복용한 경우(H1)에는 약 0.5% 감소 경향을 보였으며, 사균 캡슐을 복용한 경우(H2)에는 약 2% 감소경향을, 혼합균 캡슐을 복용한 경우(H3) 약 3% 감소 경향을 보인 반면, 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 도포한 경우(H4)에는 약 7% 유의적인 감소를 보였음을 확인하였다(표 14).
따라서, 경구용 락토바실러스 람노서스 생균을 복용한 경우 보다 사균을 복용하는 것이, 그 보다 혼합균을 복용하는 것이 아토피 피부염 병변의 피부 pH를 감소시키는 데 더 우수하였으며, 특히 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 경우(H4)에는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)을 도포한 경우보다 아토피 피부염 병변의 피부 pH 안정화를 유도하는 데 더 우수함을 확인하였다.
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 (M±SD) t (p)
pH B2 21 5.56±0.48 5.21±0.38 0.34±0.39 3.963 (.001**)
H1 3 5.50±0.69 5.47±0.81 0.03±0.72 .072 (.950)
H2 3 5.61±0.88 5.49±0.61 0.12±0.37 .592 (.614)
H3 3 5.27±0.16 5.12±0.10 0.16±0.08 3.584 (.070)
H4 3 5.57±0.13 5.16±0.08 0.41±0.15 4.759 (.041*)
*p<.05, **p<.01
Abbreviations were the same as Table 13.
<3-3> 경피수분증발량(TEWL) 확인
상기 <3-1>과 동일한 방법으로 경피수분증발량의 변화를 측정하였다.
그 결과, 하기 표 15에 나타낸 바와 같이, 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액(B2)이 약 32% 유의하게 TEWL이 감소한데 비하여, 경구용 락토바실러스 람노서스 생균 캡슐을 복용한 경우(H1)에는 약 0.2% 증가 경향을 보였으며, 사균 캡슐을 복용한 경우(H2)에는 약 11% 감소 경향을 보였고, 혼합균 캡슐을 복용한 경우(H3)에는 약 15% 감소를 보인 반면, 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 경우(H4)에는 약 36% 유의적인 감소를 보였음을 확인하였다(표 15).
따라서, 경구용 락토바실러스 람노서스 생균을 복용한 경우 보다 사균을 복용하는 것이, 그 보다 혼합균을 복용하는 것이 아토피 피부염 병변의 TEWL이 감소시키는 데 더 우수하였으며, 특히 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 락토바실러스 람노서스유크림 발효액을 함유한 로션을 도포한 경우(H4)에는 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액을 도포한 경우(B2)보다 아토피 피부염 병변의 TEWL을 감소시키는데 더 우수함을 확인하였다.(표 15)
결과적으로 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 경우에는 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 로션을 도포한 경우(B2)에 비해 다소 변화율이 떨어지기는 하나, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 기여하는 것을 확인하였으며, 특히 경구용 락토바실러스 람노서스 혼합균을 복용하는 동시에 락토바실러스 람노서스 유크림 발효액 로션을 바를 경우(H4)에는 본 발명자들의 2016년 3월 25일 기 특허 출원(10-2016-0035879) 및 2017년 3월 25일 국제 출원(PCT/KR2017/003172)의 락토바실러스 람노서스 유크림 로션을 도포한 경우(B2)에 비해 아토피 피부염 병변의피부 수분보유량의 증가, 피부 pH수치의 감소, 경피수분증발량의 감소 등에서 모두 유의적으로 더 높게 변화함으로써, 아토피 피부염의 병변 발현을 억제할 뿐 아니라, 병변의 완화 및 병변 재발의 억제효과에 더 높게 기여하는 것을 확인하였다.
Variable Group N Measurement
(Mean±SD)		 Analysis of variance
Before After t1-t2 (M±SD) t (p)
TEWL B2 21 38.94±21.58 26.62±14.36 12.32±13.59 4.154 (.000***)
H1 3 25.08±1.67 25.13±0.75 -0.05±1.58 -.095 (.926)
H2 3 30.61±9.60 26.96±12.73 3.65±5.60 1.596 (.171)
H3 3 42.07±2.68 35.90±4.33 6.17±3.15 3.387 (.077)
H4 3 41.78±3.46 26.74±4.85 15.04±2.61 9.969 (.009**)
**p<.01, ***p<.001
Abbreviations were the same as Table 13.

Claims (19)

  1. 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri),락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림(milk-cream) 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염(atopic dermatitis) 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 유크림 발효액은 유크림(milk-cream), 우유(milk), 스킴밀크(skim-milk), Lactobacilli MRS 배지, LB(lysogeny broth) 배지, R2A 배지(MB-R2230) 및 카제인가수분해물(casamino acid) 포함 배지로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 배지로 더 배양하는 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 우유(milk)는 원유, 무지방 우유, 유지방 함량이 1 중량부 이하로 첨가된 저지방 및 탈지유로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 유크림은 원유나 우유에서 분리한 유지방분, 유지방구의 농축물, 가공 유크림 및 분말 유크림으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 유크림 발효액은 간헐 멸균(Tyndallization) 처리, 감압 농축 처리 및 효모추출물(Yeast extract) 처리로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 처리하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  6. 삭제
  7. 제1항에 있어서, 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)은 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 락토코커스 속(Lactococcus spp.)은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부수분보유량 향상, 피부의 pH 수치 감소를 통한 피부 안정화 또는 경피수분증증발량 감소 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  10. 삭제
  11. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 보습 효과를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 화장료 조성물.
  12. 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri),락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 피부 외용제.
  13. 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri),락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염(atopic dermatitis) 예방, 완화 및 개선용 식품 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 식품 조성물에 포함되는 균주는 생균 또는 사균을 이용하는 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 식품 조성물.
  15. 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri),락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염(atopic dermatitis) 예방 및 치료용 약학 조성물.
  16. 락토코커스 속(Lactococcus spp.), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루에키 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri),락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium spp.)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주를 유크림 배지에 배양하여 발효액을 수득하는 단계;를 포함하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 유크림 발효액에 유크림(milk-cream), 우유(milk), 스킴밀크(skim-milk), Lactobacilli MRS 배지, LB(lysogeny broth) 배지, R2A 배지(MB-R2230) 및 카제인가수분해물(casamino acid) 포함 배지로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 배지로 더 배양하는 단계;를 포함하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법.
  18. 제16항에 있어서, 상기 유크림 발효액에 간헐 멸균(Tyndallization) 처리, 감압 농축 처리 및 효모추출물(Yeast extract) 처리로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 처리하는 단계;를 포함하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법.
  19. 제16항에 있어서, 상기 유크림 발효액을 캡슐화 하여 경구용으로 제조하는 단계;를 포함하는, 아토피 피부염 예방, 완화 및 개선용 유크림 발효액 제조 방법.
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