KR102342405B1 - 박과진딧물매개황화바이러스 감염성 클론 및 이의 용도 - Google Patents

박과진딧물매개황화바이러스 감염성 클론 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 박과진딧물매개황화바이러스 DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드에 의해 형질 전환된 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 이용한 박과진딧물매개황화바이러스 감염활성 재현에 관한 것이다.
본 발명자들은 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 박과진딧물매개황화바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 박과 진딧물매개 황화바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 본 발명에 따른 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)는 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하여, 바이러스가 발현하는 단백질의 기능을 연구하고 병원성 관여 인자를 밝히는 데에 적용될 것이고, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 저항성 품종 육성을 위한 연구에 유용하게 활용될 것으로 기대된다.

Description

박과진딧물매개황화바이러스 감염성 클론 및 이의 용도{Cucurbit Aphid-Borne Yellows Virus Infectious Clone And Their Uses}
본 발명은 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드에 의해 형질 전환된 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 이용한 박과진딧물매개황화바이러스 감염활성 재현에 관한 것이다.
박과진딧물매개황화바이러스 (Cucurbit aphid-borne yellows virus, CABYV)는 Luteoviridae과, Polerovirus속에 속하는 직경 23 nm의 구형 바이러스로서, 진딧물에 의해서 영속전염 (순환형) 되는 것으로 알려져 있으며, 유전자는 약 5.7 Kb의 단일 가닥 (single stranded) RNA로 구성되어 있다. 프랑스에서 처음 보고된 이후 유럽, 아프리카, 북미 및 아시아 지역에서의 발생 보고가 있었다.
한편, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)는 호박, 수박, 오이, 상추 등 넓은 기주 범위를 가지고 있고, 특히 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)에 감염된 멜론은 잎에서는 퇴록반점, 모자이크, 황화 등의 증상을 일으키며, 이병된 과실에서는 불규칙한 네트 형성으로 상품성이 전혀 없으며 초기 감염주는 과실 형성이 되지 않는 것으로 알려져 있으며, 국내에서는 2013년도 남원, 구미, 청양 지역에서 처음 확인된 후 곡성, 횡성 등 멜론 재배지역에서 발생되었다. 이후 2016년 수박, 오이 및 2017년 참외, 애호박 등에서도 발생이 확인되었다.
박과진딧물매개황화바이러스에 대한 저항성 품종 육성을 위해서는 바이러스의 병원성 인자 및 기주 식물과의 상호작용연구가 필요하며, 상기 바이러스의 분자 생물학적 연구를 위해서는 일정한 감염활성을 지속적으로 재현할 수 있는 감염성 클론의 제작이 필요하다.
다른 식물 바이러스의 감염 재현을 위한 다양한 방법에 대한 연구는 활발하나 (Plant Pathol. J. 32(1) : 70-76 (2016)), 국내에서 발견되는 박과진딧물매개황화바이러스의 감염활성을 재현하기 위한 감염성 클론에 관한 연구는 미진한 실정이다.
본 발명자들은 국내에서 발견되는 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 박과진딧물매개황화바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 박과 진딧물매개 황화바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 서열번호 7로 표시되는 염기서열 이루어진, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 7로 표시되는 염기서열 이루어진, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 아그로박테리움 투메파시언스는 박과 진딧물매개 황화바이러스의 감염활성을 식물체에 재현시킬 수 있는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 아그로박테리움 투메파시언스는 기탁번호 KACC 95144P인 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 식물체는 멜론, 오이 또는 니코티아나 벤타미아나 (Nicotiana benthamiana)인 것일 수 있다.
본 발명자들은 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 박과진딧물매개황화바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 박과 진딧물매개 황화바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 본 발명에 따른 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)는 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하여, 바이러스가 발현하는 단백질의 기능을 연구하고 병원성 관여 인자를 밝히는 데에 적용될 것이고, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 저항성 품종 육성을 위한 연구에 유용하게 활용될 것으로 기대된다.
도 1은 pCassRz 벡터와 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론의 구조 모식도를 나타낸 것이다.
도 2는 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)에 감염된 식물체에서의 병징 발현 결과를 나타낸 것으로서, 도 2a는 멜론의 병징 발현 결과를 나타낸 것이고, 도 2b는 오이의 병징 발현 결과를 나타낸 것이며, 도 2c는 니코티아나 벤타미아나 (Nicotiana benthamiana)의 병징 발현 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론에 의해 감염된 식물체를 이용하여 RT-PCR을 통해 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염 여부 확인한 결과를 나타낸 것이다 (여기서, lane 1, 4 : 멜론, lane 2, 5 : 오이, lane 3, 6 : 니코티아나 벤타미아나를 표시함).
이하, 본 발명을 상세히 설명한다
본 발명자들은 국내에서 발견되는 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 박과진딧물매개황화바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 박과 진딧물매개 황화바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명자들은 실시예를 통해 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움을 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)을 통해 다양한 식물체에 접종한 후 감염성 여부를 확인한 결과, 건전 식물과 달리 퇴록반점, 모자이크, 황화 등의 등 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)에 의한 병징이 나타남을 확인함으로써 (실시예 2 참조), 본 발명에 따른 형질 전환된 아그로박테리움 투메파시언스가 식물체에서 박과진딧물매개황화바이러스 감염활성 재현용도를 가짐을 제안한다.
이에, 본 발명은 서열번호 7로 표시되는 염기서열 이루어진, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드 및 상기 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움 투메파시언스를 제공한다.
상기 재조합 플라스미드는 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA 및 pCassRz 벡터를 사용하여 제작되는 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어, “벡터”란, 또 다른 핵산을 그것에 결합시켜 이송시킬 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 바람직한 벡터는 그것이 결합된 핵산을 자기 복제 및 발현시킬 수 있는 벡터이며, 바람직하게는 pCassRz 벡터를 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 아그로박테리움 투메파시언스는 박과 진딧물매개 황화바이러스의 감염활성을 식물체에 재현시킬 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 대상으로 하는 “박과진딧물매개황화바이러스 병”은, 박과 식물에 감염하는 RNA를 함유한 바이러스로서, 박과 진딧물매개 황화바이러스에 감염된 식물은 잎들의 엽록체가 연하게 형성되는 퇴록 반점, 모자이크 및 황화 등의 병징이 나타나고, 멜론의 경우 표면의 그물 모양이 불규칙하게 형성되어 상품성을 갖출 수 없게 만든다. 또한, 꽃이 피기 전에 상기 바이러스에 감염되면, 박과 식물이 꽃을 피우지 못해 과실을 맺을 수 없는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “형질 전환”이란, 외래 DNA 또는 RNA가 세포에 흡수되어 세포의 유전형이 변화되는 것을 말한다. 숙주세포는 식물세포, 원핵세포, 효모세포, 곤충세포를 포함하고, 바람직하게는 숙주세포는 식물세포이나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 재조합 플라스미드가 도입되는 식물세포는 세포가 식물로 재생될 수 있는 한 특정한 형태를 가질 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 식물체는, 예를 들면, 배양된 세포 부유물, 원형질체 (protoplast), 잎 절편 (leaf section) 또는 캘러스 (callus) 등을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 식물세포의 대상 식물체로는 박과 식물 등이 포함할 수 있으며, 바람직하게는 멜론, 오이 등이 있고, 그 밖에 담배 식물 (니코티아나 벤타미아나) 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
보다 구체적으로, 본 발명에 따른 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA 감염 식물체는 서열번호 7의, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드 또는 상기 플라스미드로 형질 전환된 균주를 이용하여 식물체를 식물체를 형질 전환하는 과정을 통해 수득될 수 있다.
상기 재조합 플라스미드의 식물체로의 도입은 당 분야에 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 아그로박테리움 매개에 의한 방법, 입자 총 충격법 (particle gun bombardment), 실리콘 탄화물 위스커 (Silicon carbide whiskers), 초음파 처리 (sonication), 히트 쇼크법 (heat shock), 전기천공법 (electroporation) 또는 PEG (Polyethylenglycol)에 의한 침전법 등이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 있어서 식물체에 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA 감염으로 인한 병증을 유도하기 위해, 아그로박테리움 투메파시언스를 이용하는 방법이 사용될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration) 방법은 식물체 내로 유전자를 도입하여 발현시키거나 식물체 내에서 원하는 단백질을 생산하기 위한 방법을 의미할 수 있다. 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)은 이동시키고자 하는 유전자를 가진 아그로박테리움의 현탁액을 바늘이 없는 주사기를 사용해서 압력을 줌으로써 식물의 잎에 주입하여 식물체 세포로 원하는 유전자를 이동시키는 방법일 수 있다. 이는 전통적인 식물 형질 전환과 비교하면 신속하고 편리하다는 장점이 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론 제작 및 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 진단용 프라이머 디자인
박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 감염성 클론 제작에 필요한 프라이머와 이후 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)가 감염된 식물을 진단하기 위해 필요한 프라이머를 제작하였다. 상기 프라이머 서열은 하기의 표 1에 나타낸 바와 같다.
Fragment Primer name
(서열번호) 		Sequence (5'→3') Loci
1 CABYV-5E-F
(서열번호 1)		 ACAAAAGATACGAGCGGGTGATGCAAATTGAGTCTGT 1-3127
CABYV-4R
(서열번호 2)		 ACCGGAATGGCGAGGTCCTC
2 CABYV-B-F2
(서열번호 3)		 CAGGATTCGACAAGGTCGGATCCCT 1880-5683
CABYV-3E-BamHI-R
(서열번호 4)		 GCTGggatccACACCGAAACGCCAGGGGG
1-1. 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 유전자 확보
Binary 벡터를 사용하여 아그로-인필트레이션 (agro-infilration)이 가능한 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론을 제작하기 위해, 먼저 국내 포장의 멜론으로부터 분리한 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 분리주를 이용하였고, 해당 CABYV 분리주에 의해 감염된 멜론으로부터 전체 RNA를 추출하였다. 이 전체 RNA에 대하여 상기 표 1에 나타낸 2쌍의 프라이머를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응 (RT-PCR)을 수행하였다.
그 결과, CABYV 유전자가 2개의 DNA 절편으로 증폭되었다.
1-2. Binary vector 준비
박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 감염성 클론을 제작하기 위한 벡터로서, Binary 벡터인 pCassRz 벡터를 이용하였다. 상기 벡터는 도 1에 나타낸 바와 같다.
상기 pCassRz 벡터는 T-DNA의 left border, CaMV의 double 35S promoter, multiple cloning site (MCS; StuI, KpnI, XbaI, BamHI), cis-cleaving ribozyme sequence (Rz), 35S terminator (T), T-DNA의 right border를 순서대로 포함하고 있어 아그로박테리움 (agrobacterium)에 형질 전환하여 아그로-인필트레이션(agro-infilration)을 통해 식물에 원하는 유전자를 전달할 수 있다.
또한, pCassRz 벡터는 카나마이신 (Kanamycin) 저항성 유전자를 포함하고 있어 대장균과 아그로박테리움 (agrobacterium)에 형질 전환 시 선택 배양할 수 있다.
1-3. 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론제작
먼저, 상기 1-2의 Binary 벡터를 이용하여, 아그로-인필트레이션 (agro-infilration)이 가능한 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론을 제작하기 위해, 증폭된 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 DNA 절편 2개를 pCassRz 벡터에 클로닝하였다.
보다 구체적으로, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA 절편을 각각 BamHI으로 처리하고, 벡터의 StuI과 BamHI의 제한 효소 사이트를 이용하여 클로닝하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 얻어진 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 클론을 pCABYV-M-BY1으로 명명하였다.
또한, 클로닝된 DNA를 이용하여 전체 염기서열을 결정하였다. 상기 pCABYV-M-BY1의 전체 염기서열은 서열번호 7로 나타내었다.
상기 얻어진 서열번호 7로 표시되는 염기서열로 이루어진, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) DNA를 포함하는 pCABYV-M-BY1에 의해 형질 전환된 균주는 2019년 9월 KACC (농업미생물자원센터)에 수탁번호 KACC 95144P로 기탁하였다.
실시예 2. 아그로-인필트레이션을 통한 감염성 클론의 접종 및 감염성 확인
2-1. 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론을 이용한 아그로박테리움 투메파시언스의 형질 전환
박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론의 플라스미드 DNA를 아그로박테리움 균주 GV3101에 형질 전환하였다. pCABYV-M-BY1로 형질 전환된 아그로박테리움을 5 ml의 YEP 액체 배지 (50 mg/ml의 카나마이신 (kanamycin)과 50 mg/ml의 리팜피신 (rifampicin) 포함)에서 28 ℃의 조건, 16시간 동안 진탕 배양한 후 1차 배양액 1 ml을 50 ml의 새 YEP 배지 (50 mg/ml의 카나마이신 (kanamycin), 50 mg/ml의 리팜피신 (rifampicin)과 20 uM의 아세토시린곤 (acetosyringone) 포함)에 접종하여 28 ℃의 조건에서 6시간 동안 진탕 배양하였다. 배양액을 4800 G에서 10분 동안 원심 분리하여 아그로박테리움을 침전시키고 MMA 침윤 (infiltration) 버퍼 (10 mM MgCl2, 10 mM MES, pH 5.6, 200 uM 아세토시린곤 (acetosyringone))에 600 nm의 파장에서 O.D. 0.6의 농도로 다시 현탁시켰다.
마지막으로, 현탁액을 28 ℃의 조건에서 2시간 동안 진탕 배양하였다. 이로써 박과진딧물매개황화바이러스 감염성 클론을 완성하였다.
2-2. 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)을 통한 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론의 접종 및 감염성 확인
pCABYV-M-BY1로 형질 전환된 아그로박테리움 배양액에 접종 효율을 높이기 위해, RNA silencing suppressor 유전자 클론 (pPZP-B2, 서울대) 배양액을 각각 같은 비율로 섞은 후 멜론, 오이 및 담배 잎의 배축면에 1 ml 주사기를 이용하여 압력으로 인필트레이션하였다. 박과 식물은 본엽이 나기 전의 떡잎에, 니코티아나 벤타미아나의 경우 본엽에 인필트레이션하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론을 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)을 통해 멜론, 오이, 담배에 접종한 후 4주 후 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)에 의해 나타나는 황화모자이크 등의 병징을 관찰하였다.
또한, 병징을 보이는 상엽으로부터 전체 RNA를 추출하여 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)를 특이적으로 검출할 수 있는 프라이머 (CABYV-u4와 CABYV-d3806)를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응 (RT-PCR)을 수행하여, 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)의 감염 여부를 조사하였다. 상기 프라이머의 염기서열은 하기의 표 2에 나타낸 바와 같다.
Target Primer name
(서열번호) 		Sequence (5'→3')
CABYV CABYV-u4
(서열번호 5)		 ACACGAGTTGCAAGCATTGGAAGT
CABYV-d3806
(서열번호 6)		 AGTATTCCAGAGCTGAATGCTGGG
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV) 감염성 클론을 접종한 식물체에 대해서 예상되는 크기 (466 bp)의 PCR 산물을 확인하였으며, 이로써 해당 식물이 박과진딧물매개황화바이러스 (CABYV)에 의해 전신감염이 되었음을 확인할 수 있었다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.
국립농업과학원 KACC (농업미생물자원센터) KACC95144P 20191029
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Cucurbit Aphid-Borne Yellows Virus Infectious Clone And Their Uses <130> PD19-194 <160> 7 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CABYV-5E-F <400> 1 acaaaagata cgagcgggtg atgcaaattg agtctgt 37 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CABYV-4R <400> 2 accggaatgg cgaggtcctc 20 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CABYV-B-F2 <400> 3 caggattcga caaggtcgga tccct 25 <210> 4 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CABYV-3E-BamHI-R <400> 4 gctgggatcc acaccgaaac gccaggggg 29 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CABYV-u4 <400> 5 acacgagttg caagcattgg aagt 24 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CABYV-d3806 <400> 6 agtattccag agctgaatgc tggg 24 <210> 7 <211> 5683 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pCABYV-M-BY1 <400> 7 acaaaagata cgagcgggtg 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cgagatagcg ttgtggagag 2580 tggttccctc caagcccggt tttggcttgt ctacggatga gcaagtggtg gagttcatgc 2640 agattctctc cgcccaggtt gggctgacgc cttcggaatt gatcaccgag tggcgagccc 2700 acatgatagc aactgactgc tccggttttg actggagcgt ttcggactgg cttcttgaag 2760 atgatatgga agtccgaaac cgcctgacgc tagatttaaa cgaaaccacg cgccgtttac 2820 gagcagcatg gttatattgc atatctaaca gcgtcctctg cctttctgac ggaacattat 2880 tagcgcagag agtcccaggc gtgcagaaga gcggcagcta caatacgtca tcgagcaatt 2940 cccgtattcg ggtgatggct gcctaccact gcggcgcaga atgggcaatg gcgatgggcg 3000 acgacgccct agagtcagct tgctcgaacc tcgagcgtta caaatcgctc ggttttaaag 3060 tcgaggagtc ctcaaaactg gaattctgtt ctcacatctt tgagaaagag gacctcgcca 3120 ttccggtcaa caaggcaaag atgctttaca agctcataca tggctatgaa ccggaatgtg 3180 gcaatgtgga agtgctgatc aattacctgg ccgcctgttt ctcaattctc aatgagttgc 3240 ggtctgatcc ttcccttgtc aaaactctcc accagtggct ggtccttcca gtgcagccac 3300 aaaagatata aggggagtat aaagaacact agccaagcac acacgagttg caagcattgg 3360 aagtataagt ctcgttacca agagtccaca caatagatta caaatttctc gcaggatttt 3420 ctagcggtct attgtctgca gtaccagtta cggtaatagg actctatttt gtctacctaa 3480 agatttcagc acacgtgcgc tcaattgtta atgaatacgg ccgcggctag aaatcaaaat 3540 gcagggaggc ggaggcgaag aaatcagcgc tctatacggc gcgaccgcgt ggttgtggtc 3600 aacccctctg ggggaccacc gcgcggaaga cgacaacgaa gaaaccgccg acgccctaat 3660 cgaggaggca gagctagagg aaggagccca ggcgaaacat tcgtattttc aaaggacaat 3720 ctcacgggca gttcctcagg aagcatcact ttcgggccgt ctctatcaga gagcccagca 3780 ttcagctctg gaatactcaa ggcctaccat ggatataaga tcatcatggt ccagctggag 3840 ttcatctccg aggcctcttc cacctcctcg ggctccatct cttatgagtt ggacccccac 3900 tgcaagctta gctccctcca atccacgatt aataaatttg gaatcaccaa gaatggattg 3960 cgacgttggg cagctaagca gatcaacggg ttggaatggc atgacgcaac tgaggaccaa 4020 ttcaagatcc tctacaaagg gaacggatct tcctcggttg caggcagctt caggatcacc 4080 atcaagtgcc aggtccaaaa cccgaaatag gtagacggca gctccccccc cccccccagt 4140 cctagcccga ctccgccacc tccaccacct cctcagcctc aaccccaacc ttgcgctcag 4200 cgcttttggg gttatgaagg caacccacaa aataagatac 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atcgagcatc aacaagctct 5100 cgtctccgcg gcaacctcaa gccacaaggc ctacccaaac cacagcccac ccggactata 5160 acccagttca accctaatcc agatttggtg gaggcgtgga ggcctgatct agcacctgga 5220 tactccaaag cggacgtcgc agcagcgacc gtgatcgcag gagggagtat ccacgaggga 5280 cgagatatgc taaggcgaag agaagagtca gtgatggata gcaggaagaa atggggagtt 5340 ctctcctcag cttccactct cactagtggc tctttaaaga aactcagtgc acagtcagaa 5400 aagctcgcca agttgacaac tggcgagcgt agagaatatg agcgaattaa aaattcgcaa 5460 ggtaagactg ttgcagccga gtatctcgaa ctggtgctag ctgacaaaac ctcttaaccg 5520 ctctgtggag acgtgcgtga ctccatctgg cttccagtga gcccgtccta atcactgatg 5580 acatcaagcc aaagatgtaa aattggaacg actccgaaag gataggcaac gaacgttact 5640 actttagtgg aaacaggggg gaccccccct ggcgtttcgg tgt 5683

Claims (5)

  1. 서열번호 7로 표시되는 염기서열로 이루어진, 박과진딧물매개황화바이러스 (Cucurbit aphid-borne yellows virus, CABYV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드로 형질전환된 아그로박테리움 투메파시언스(Agrobacterium tumefaciens) GV3101을 포함하는, 박과진딧물매개황화바이러스(CABYV)의 감염활성을 식물체에 재현하기 위한 조성물로서,
    상기 재조합 플라스미드는 pCassRz 벡터를 사용하여 제작되는 것인, 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 아그로박테리움 투메파시언스 GV3101은 기탁번호 KACC 95144P인 것인, 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 식물체는 멜론, 오이 또는 니코티아나 벤타미아나 (Nicotiana benthamiana)인 것을 특징으로 하는, 조성물.
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WO1994026912A1 (de) 1993-05-06 1994-11-24 Institut für Pflanzengenetik und Kulturpflanzenforschung Verfahren und vektorkonstrukte zur expressionssteigerung von transgenen

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D. PRUFER 등. VIROLOGY. Vol. 214, 페이지 150-158 (1995.)*
Genbank Accession number MG257901 (2018.09.15.)*

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