KR102285748B1

KR102285748B1 - 수박모자이크바이러스 감염성 클론 및 이의 용도

Info

Publication number: KR102285748B1
Application number: KR1020190167087A
Authority: KR
Inventors: 곽해련; 최홍수; 홍수빈; 김미경; 김정은
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2019-12-13
Filing date: 2019-12-13
Publication date: 2021-08-05
Also published as: KR20210075699A

Abstract

본 발명은 수박모자이크바이러스 감염성 클론 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 수박모자이크바이러스 DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드에 의해 형질 전환된 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 이용한 수박모자이크바이러스 감염활성 재현에 관한 것이다.
본 발명자들은 수박모자이크바이러스 (WMV)의 일정한 감염활성을 박과 작물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 수박모자이크바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 수박 모자이크 바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 본 발명에 따른 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)는 수박모자이크바이러스 (WMV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하여, 바이러스가 발현하는 단백질의 기능을 연구하고 병원성 관여 인자를 밝히는 데에 적용될 것이고, 수박모자이크바이러스 (WMV) 저항성 품종 육성을 위한 연구에 유용하게 활용될 것으로 기대된다.

Description

수박모자이크바이러스 감염성 클론 및 이의 용도{Watermelon mosaic virus Infectious clone and their uses}

본 발명은 수박모자이크바이러스 감염성 클론 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드에 의해 형질 전환된 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 이용한 수박모자이크바이러스 감염활성 재현에 관한 것이다.

수박모자이크바이러스 (Watermelon mosaic virus, WMV)는 Potyviridae과, Potyvirus속에 속하는 길이 750 nm의 사상형 바이러스로 진딧물에 의해 전염되는 것으로 알려져 있으며, 유전자는 약 10Kb의 단일 가닥 (single stranded) RNA로 구성되어 있다.

한편, 수박모자이크바이러스 감염 시에 나타나는 병징으로는 모자이크, 엽맥녹대 및 잎의 뒤틀림의 기형증상과 식물체가 자라지 못하는 증상이 있으며, 수박, 멜론, 오이, 호박, 참외 등 박과 작물에서 지속적으로 발생하여 피해를 주고 있다.

수박모자이크바이러스에 대한 저항성 품종 육성을 위해서는 바이러스의 병원성 인자 및 기주 식물과의 상호작용연구가 필요하며, 상기 바이러스의 분자 생물학적 연구를 위해서는 일정한 감염활성을 지속적으로 재현할 수 있는 감염성 클론의 제작이 필요하다.

다른 식물 바이러스의 감염 재현을 위한 다양한 방법에 대한 연구는 활발하나 (Plant Pathol. J. 32(1) : 70-76 (2016)), 수박 모자이크 바이러스의 감염활성을 재현하기 위한 감염성 클론에 관한 연구는 미진한 실정이다.

본 발명자들은 수박모자이크바이러스 (WMV)의 일정한 감염활성을 박과 작물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 수박모자이크바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 수박모자이크바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 서열번호 11로 표시되는 염기서열 이루어진, 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 11로 표시되는 염기서열 이루어진, 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)를 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 아그로박테리움 투메파시언스는 수박 모자이크 바이러스의 감염활성을 식물체에 재현시킬 수 있는 것일 수 있다.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 아그로박테리움 투메파시언스는 기탁번호 KACC 95145P인 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 식물체는 멜론, 수박, 쥬키니호박 또는 니코티아나 벤타미아나 (Nicotiana benthamiana)인 것일 수 있다.

본 발명자들은 수박모자이크바이러스 (WMV)의 일정한 감염활성을 박과 작물에 재현하기 위해 예의 연구한 결과, 수박모자이크바이러스 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드를 이용하여 형질 전환된 아그로박테리움이 박과 식물에 수박모자이크바이러스를 감염시킬 수 있음을 최초로 확인하였는바, 본 발명에 따른 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)는 수박모자이크바이러스 (WMV)의 일정한 감염활성을 박과 식물에 재현하여, 바이러스가 발현하는 단백질의 기능을 연구하고 병원성 관여 인자를 밝히는 데에 적용될 것이고, 수박모자이크바이러스 (WMV) 저항성 품종 육성을 위한 연구에 유용하게 활용될 것으로 기대된다.

도 1은 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 DNA 클론의 구조 모식도 및 제작 과정을 나타낸 것이다.
도 2는 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론에 의해 감염된 식물체에서의 병징 발현 결과를 나타낸 것으로서, 도 2a는 멜론의 병징 발현 결과를 나타낸 것이고, 도 2b는 쥬키니호박의 병징 발현 결과를 나타낸 것이며, 도 2c는 수박의 병징 발현 결과를 나타낸 것이며, 도 2d는 니코티아나 벤타미아나의 병징 발현 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론에 의해 감염된 식물체를 이용하여 RT-PCR을 통해 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염 여부 확인한 결과를 나타낸 것이다 (여기서, W는 수박, Z는 쥬키니호박, M은 멜론, N은 니코티아나 벤타미아나를 표시함).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명자들은 실시예를 통해 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 아그로박테리움을 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)을 통해 다양한 식물체에 접종한 후 감염성 여부를 확인한 결과, 건전 식물과 달리 잎의 모자이크, 잔주름, 약한 잎 말림 등 수박모자이크바이러스 (WMV)에 의한 병징이 나타남을 확인함으로써 (실시예 2 참조), 본 발명에 따른 형질 전환된 아그로박테리움 투메파시언스가 식물체에서 수박모자이크바이러스 감염활성 재현용도를 가짐을 제안한다.

이에, 본 발명은 서열번호 11로 표시되는 염기서열 이루어진, 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드 및 상기 재조합 플라스미드로 형질 전환된, 대장균 및 아그로박테리움 투메파시언스를 제공한다.

상기 재조합 플라스미드는 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA 및 pJL89 벡터를 사용하여 제작되는 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 사용되는 용어, “벡터”란, 또 다른 핵산을 그것에 결합시켜 이송시킬 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 바람직한 벡터는 그것이 결합된 핵산을 자기 복제 및 발현시킬 수 있는 벡터이며, 바람직하게는 pJL89 벡터를 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 대장균은 상기 재조합 플라스미드의 양을 늘리기 위해 사용될 수 있으며, 바람직하게는 Escherichia coli DH10B strain을 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 아그로박테리움 투메파시언스는 수박 모자이크 바이러스의 감염활성을 식물체에 재현시킬 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 대상으로 하는 “수박모자이크바이러스 병”은, 박과 식물에 감염하는 RNA를 함유한 바이러스로서, 수박모자이크바이러스에 감염된 식물은 잎에서 모자이크 병징이 나타나고 과피가 그을음이 묻은 것처럼 변하여 상품성이 현저히 떨어진다. 종래 미국, 유럽 등에서 문제가 되는 바이러스였으나, 국가 간 식물체 이동이 빈번해지면서 최근 국내에서도 발병하여 작물의 생산량 감소와 품질 하락 등 피해를 일으키고 있다. 오이모자이크바이러스 등 기타 바이러스와 복합 감염되어 피해가 커지며, 주로 진딧물에 의해 전염되고 국내에서는 묘판과 시설하우스의 출입구 및 측창에 한냉사를 설치해 진딧물의 유입을 방지하고 약제를 살포하여 예방하는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, “형질 전환”이란, 외래 DNA 또는 RNA가 세포에 흡수되어 세포의 유전형이 변화되는 것을 말한다. 숙주세포는 식물세포, 원핵세포, 효모세포, 곤충세포를 포함하고, 바람직하게는 숙주세포는 식물세포이나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 재조합 플라스미드가 도입되는 식물세포는 세포가 식물로 재생될 수 있는 한 특정한 형태를 가질 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 식물체는, 예를 들면, 배양된 세포 부유물, 원형질체 (protoplast), 잎 절편 (leaf section) 또는 캘러스 (callus) 등을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 식물세포의 대상 식물체로는 박과 식물 등이 포함할 수 있으며, 바람직하게는 멜론, 수박, 쥬키니호박 등이 있고, 그 밖에 담배 식물 (니코티아나 벤타미아나) 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

보다 구체적으로, 본 발명에 따른 수박 모자이크 바이러스 (WMV) DNA 감염 식물체는 서열번호 11의, 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드 또는 상기 플라스미드로 형질 전환된 균주를 이용하여 식물체를 형질 전환하는 과정을 통해 수득될 수 있다.

상기 재조합 플라스미드의 식물체로의 도입은 당 분야에 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 아그로박테리움 매개에 의한 방법, 입자 총 충격법 (particle gun bombardment), 실리콘 탄화물 위스커 (Silicon carbide whiskers), 초음파 처리 (sonication), 히트 쇼크법 (heat shock), 전기천공법 (electroporation) 또는 PEG (Polyethylenglycol)에 의한 침전법 등이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 있어서 식물체에 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA 감염으로 인한 병증을 유도하기 위해, 아그로박테리움 투메파시언스를 이용하는 방법이 사용될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration) 방법은 식물체 내로 유전자를 도입하여 발현시키거나 식물체 내에서 원하는 단백질을 생산하기 위한 방법을 의미할 수 있다. 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)은 이동시키고자 하는 유전자를 가진 아그로박테리움의 현탁액을 바늘이 없는 주사기를 사용해서 압력을 줌으로써 식물의 잎에 주입하여 식물체 세포로 원하는 유전자를 이동시키는 방법일 수 있다. 이는 전통적인 식물 형질 전환과 비교하면 신속하고 편리하다는 장점이 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론 제작 및 이의 진단용 프라이머 디자인

수박모자이크바이러스 (WMV)의 감염성 클론 제작에 필요한 프라이머와 이후 수박모자이크바이러스 (WMV)가 감염된 식물을 진단하기 위해 필요한 프라이머를 제작하였다.

보다 구체적으로, 감염성 클론 제작을 위한 수박모자이크바이러스 (WMV)의 절편과 벡터의 증폭에 사용한 프라이머 세트는 각 단량체의 말단이 40 bp씩 겹치는 염기서열을 갖도록 디자인하였다. 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론 제작을 위해서 총 8개의 프라이머 (WMV-1F, 1R, 2F1, 2R, 3F, 3F, pJL89-F, R)를 제작하였으며, WMV 진단을 위해서 1쌍의 프라이머 (WMV-F, R)를 제작하였다. 상기 프라이머 서열은 하기의 표 1에 나타낸 바와 같다.

Target	Primer name (서열번호)	Sequence (5'→3')	Product size (bp)
WMV	WMV-1F (서열번호 1)	AAATTAAAACAACTCATAAA	3,348
	WMV-1R (서열번호 2)	TGATTATGAAAATTTTTGCAACGCTATGTTCCTTATTTATCCACATTTCGATTCCCTTCT	3,348
	WMV-2F (서열번호 3)	ATAAATAAGGAACATAGCGT	3,759
	WMV-2R (서열번호 4)	CATACCCAACTCCAAACATTGTCTCCTTGTGACCATCTGAAGAGTTCGTGAGTTGGCAGA	3,759
	WMV-3F (서열번호 5)	TCAGATGGTCACAAGGAGAC	3,371
	WMV-3R (서열번호 6)	CAGGTCGGACCGCGAGGAGGTGGAGATGCCATGCCGACCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT	3,371
pJL89	pJL89-F (서열번호 7)	GGGTCGGCATGGCATCTCCA	4,661
pJL89	pJL89-R (서열번호 8)	CGTTTGTTTTGTTTGATGTCTTTATGAGTTGTTTTAATTTCCTCTCCAAATGAAATGAAC	4,661
WWV detection	WMV-F (서열번호 9)	CAGTTTGAATCATGGTACAGCGC	400
WWV detection	WMV-R (서열번호 10)	TGTGCTATTGCTTCTCTTGCCC	400

1-1. 수박모자이크바이러스 (WMV) 유전자 확보

2015년 익산의 멜론 재배 농가에서 수박모자이크바이러스 (WMV) 병징을 보이는 멜론 시료를 채집하였다. 채집된 수박모자이크바이러스 (WMV) 시료는 흰명아주 (Chenopodium quinoa)를 이용하여 3차 순수 분리하여 쥬키니호박 (Cucurbita pepo)에 증식하여 전체 RNA를 추출하였다.

상기의 표 1에 나타낸 각 3쌍의 프라이머를 이용하여 추출한 RNA를 하기의 조건으로 역전사-중합효소연쇄반응 (RT-PCR)을 수행하였다.

보다 구체적으로, 45 ℃에서 10분간 역전사 반응 후 98 ℃에서 2분간 변성한 뒤, 다시 98 ℃에서 10초, 63 ℃에서 10초, 72 ℃에서 3분을 1주기로 35주기 반복한 후, 72 ℃에서 5분간 반응시켜 수박모자이크바이러스 (WMV) 각 RNA의 염기서열을 함유한 DNA 절편을 증폭하였다.

상기 증폭된 결과물을 아가로즈 겔에 전기영동하여 목적한 사이즈의 유전자 DNA을 분리, 정제하였다.

1-2. Binary vector 준비

수박모자이크바이러스 (WMV)의 감염성 클론을 제작하기 위한 벡터로서, Binary 벡터인 pJL89 벡터를 이용하였다. pJL89 벡터는 T-DNA의 left border, 꽃양배추 모자이크 바이러스(Cauliflower mosaic virus; CaMV)의 35S promoter, 멀티플 클로닝 사이트 (multiple cloning site ; MCS; StuI, AvrII, XmaI, SmaI), cis-cleaving ribozyme sequence (Rz), 35S terminator (T), T-DNA의 right border를 순서대로 포함하고 있어 아그로박테리움 (agrobacterium)에 형질 전환하여 아그로-인필트레이션 (agro-infiltration)을 통해 식물에 원하는 유전자를 전달할 수 있다.

또한, pJL89 벡터는 카나마이신 (kanamycin) 저항성 유전자를 포함하고 있어 대장균과 아그로박테리움 (agrobacterium)에 형질 전환 시 선택 배양할 수 있다.

pJL89 벡터를 증폭하기 위해, 상기 표 1의 프라이머를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응 (RT-PCR)을 하기의 조건으로 수행하였다.

보다 구체적으로, 98 ℃에서 3분간 변성시킨 후 98 ℃에서 10초, 63 ℃에서 10초, 72 ℃에서 3분을 1주기로 30주기 반복한 후, 72 ℃에서 5분 동안 수행하여 유전자를 증폭하였다.

상기 증폭된 결과물을 아가로즈 겔에 전기영동하여 분리, 정제하였다.

1-3. 수박모자이크바이러스 (WMV) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드 및 감염성 클론의 제작

먼저, 상기 1-2의 Binary 벡터를 이용하여, 아그로-인필트레이션 (agro-infilration)이 가능한 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론을 제작하기 위해, 증폭된 각 수박모자이크바이러스 (WMV) 유전자 3개 절편과 증폭된 pJL89 벡터를 NEB사의 Gibson Assembly^® Master Mix을 이용하여 Gibson Assembly 방식으로 결합하였다.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 수득된 수박모자이크바이러스 DNA를 포함하는, 재조합 플라스미드를 pWMV-M이라 명명하였다.

또한, 상기 재조합 DNA를 Escherichia coli DH10B strain에 형질 전환하여 클로닝하였으며, 상기 클로닝된 DNA를 이용하여 전체 염기서열을 결정하였다. 상기 pWMV-M의 전체 염기서열은 서열번호 11로 나타내었다.

상기 과정으로 얻어진 서열번호 11로 표시되는 염기서열로 이루어진, 수박모자이크바이러스 DNA를 포함하는 pWMV-M에 의해 형질 전환된 균주는 2019년 9월 KACC (농업미생물자원센터)에 수탁번호 KACC 95145P로 기탁하였다.

실시예 2. 아그로-인필트레이션을 통한 감염성 클론의 접종 및 감염성 확인

2-1. 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론을 이용한 아그로박테리움 투메파시언스의 형질 전환

수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론의 플라스미드 DNA를 아그로박테리움 균주 GV3101에 형질 전환하였다. pWMV-M으로 형질 전환된 아그로박테리움을 5 ml의 YEP 액체 배지 (50 mg/ml의 카나마이신 (kanamycin)과 50 mg/ml의 리팜피신 (rifampicin) 포함)에서 28 ℃의 조건에서 16시간 동안 진탕 배양한 후 1차 배양액 1 ml을 50 ml의 새 YEP 배지 (50 mg/ml의 카나마이신 (kanamycin), 50 mg/ml의 리팜피신 (rifampicin)과 20 uM의 아세토시린곤 (acetosyringone) 포함)에 접종하여 28 ℃의 조건에서 6시간 동안 진탕 배양하였다.

그 다음으로, 배양액을 4800 G에서 10분 동안 원심 분리하여 아그로박테리움을 침전시키고 MMA 침윤 (infiltration) 버퍼 (10 mM MgCl₂, 10 mM MES, pH5.6, 200 uM 아세토시린곤 (acetosyringone))에 600 nm의 파장에서 O.D. 0.6의 농도로 다시 현탁 시켰다.

마지막으로, 상기 현탁액을 28 ℃의 조건에서 2시간 동안 진탕 배양하였다. 이로써 수박모자이크바이러스 감염성 클론을 완성하였다.

2-2. 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)을 통한 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론의 접종 및 감염성 확인

pWMV-M로 형질 전환된 아그로박테리움 배양액을 멜론, 수박, 쥬키니호박, 니코티아나 벤타미아나의 잎의 뒷면에 바늘은 제거한 1ml 주사기를 이용하여 압력으로 잎 내부 조직에 흡수되도록 인필트레이션하였다. 박과 식물은 본엽이 나기 전의 떡잎에, 니코티아나 벤타미아나의 경우 본엽에 인필트레이션하였다. 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론을 아그로-인필트레이션 (Agro-infiltration)을 통해 다양한 식물체에 접종한 후 7일 내지 21일간 재배하면서 감염성 여부를 확인하였다.

그 결과, 도 2a 내지 도 2d에 나타낸 바와 같이 감염된 식물에서는 약 10일 후부터 건전 식물과 달리 잎의 모자이크, 잔주름, 약한 잎 말림 등 수박모자이크바이러스 (WMV)에 감염 시에 나타나는 병징을 관찰할 수 있었다.

또한 병징을 나타내는 상엽으로부터 전체 RNA를 추출하여 상기 표 1에 나타낸 수박모자이크바이러스 (WMV) 진단용 프라이머를 이용하여 RT-PCR를 통해 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염여부를 조사하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 수박모자이크바이러스 (WMV) 감염성 클론을 접종한 식물체에서 예상되는 크기의 PCR 산물을 명확히 확인하였고, 해당 식물이 수박모자이크바이러스 (WMV)에 의해 전신감염 되었음을 확인할 수 있었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.

국립농업과학원 KACC (농업미생물자원센터)

KACC95145P

20191029

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Watermelon mosaic virus Infectious clone and their uses <130> PD19-193 <160> 11 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> WMV-1F <400> 1 aaattaaaac aactcataaa 20 <210> 2 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> WMV-1R <400> 2 tgattatgaa aatttttgca acgctatgtt ccttatttat ccacatttcg attcccttct 60 60 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> WMV-2F <400> 3 ataaataagg aacatagcgt 20 <210> 4 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> WMV-2R <400> 4 catacccaac tccaaacatt gtctccttgt gaccatctga agagttcgtg agttggcaga 60 60 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> WMV-3F <400> 5 tcagatggtc acaaggagac 20 <210> 6 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> WMV-3R <400> 6 caggtcggac cgcgaggagg tggagatgcc atgccgaccc tttttttttt tttttttttt 60 60 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial 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Claims

서열번호 11로 표시되는 염기서열 이루어진, 수박모자이크바이러스 (Watermelon mosaic virus) DNA를 포함하는 재조합 플라스미드로 형질전환된, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens)로서,
상기 아그로박테리움 투메파시언스는 기탁번호가 KACC 95145P이고, 수박 모자이크 바이러스의 감염활성을 식물체에 재현시킬 수 있는 것을 특징으로 하는, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens).
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제1항에 있어서,
상기 식물체는 멜론, 수박, 쥬키니호박 또는 니코티아나 벤타미아나 (Nicotiana benthamiana)인 것을 특징으로 하는, 아그로박테리움 투메파시언스 (Agrobacterium tumefaciens).