KR102307053B1

KR102307053B1 - (6S,9aS)-N-벤질-6-[(4-하이드록시페닐)메틸]-4,7-디옥소-8-(｛6-[3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일｝메틸)-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 화합물

Info

Publication number: KR102307053B1
Application number: KR1020167015608A
Authority: KR
Inventors: 사토시 이노우에; 유지 야마모토; 겐타로 이소
Original assignee: 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤; 가부시키가이샤 프리즘 바이오랩
Priority date: 2013-12-25
Filing date: 2014-12-22
Publication date: 2021-10-01
Also published as: RU2016122867A3; CN105873932B; CA2932435C; TW201609736A; CA2932435A1; PH12016501079A1; MX2016007705A; NZ720718A; ES2728353T3; ME03391B; WO2015098853A1; JO3809B1; AU2014371148B2; AR098908A1; US20150175615A1; SI3088401T1; IL245961A0; TR201908392T4; LT3088401T; PT3088401T

Abstract

화학식 1로 나타내는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 Wnt 경로 조절 활성을 갖는다:
[화학식 1]

(식 중, R¹은 C_1-6 알킬기이고; R² 및 R³은 서로 동일하거나 상이하며 각각은 수소 원자 또는 C_1-6 알킬기이고; X², X³ 및 X⁴는 서로 동일하거나 상이하며 각각은 수소 원자 또는 할로겐 원자이고; X⁵는 수소 원자 또는 -P(=O)(OH)₂임).

Description

(6S,9aS)-N-벤질-6-[(4-하이드록시페닐)메틸]-4,7-디옥소-8-(｛6-[3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일｝메틸)-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 화합물{(6S,9aS)-N-BENZYL-6-[(4-HYDROXYPHENYL)METHYL]-4,7-DIOXO-8-(｛6-[3-(PIPERAZINE-1-YL)AZETIDINE-1-YL]PYRIDINE-2-YL｝METHYL)-2-(PROP-2-EN-1-YL)-OCTAHYDRO-1H-PYRAZINO[2,1-c][1,2,4]TRIAZINE-1-CARBOXAMIDE COMPOUND}

본 발명은 (6S,9aS)-N-벤질-6-[(4-하이드록시페닐)메틸]-4,7-디옥소-8-({6-[3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 화합물에 관한 것이다.

Wnt 신호전달 경로는 개체의 종 차이와 무관하게 보존되어 있으며, 생명체의 발생, 분화 및 유지에 관여되는 중요한 경로로 알려져 있다. 그러나 최근 수 년 간, 이 경로의 구성적 활성화는 섬유증의 악성 전환 및 암의 발생에 관여되는 것으로 보고된다. 특히 결장직장암, 흑색종, 자궁내막암, 간암 및 전립선암에서, Wnt 신호전달 경로는 선종성 결장폴립증(APC)의 억제성 돌연변이 또는 β-카테닌 등의 활성화 돌연변이에 의해 구성적으로 활성화될 수 있는 것으로 알려져 있다. 또한 췌장암, 혈액암, 간암 등에서, Wnt 신호전달 경로가 공지된 항암제를 이용한 치료 후 활성화될 수 있음이 공지되어 있다.

비특허문헌 1 및 2에는 Wnt 신호전달 경로의 억제에 의해 뛰어난 항암 활성이 달성될 수 있음이 기재되어 있다. 비특허문헌 12, 13 및 14에는 Wnt 신호전달 경로의 억제에 의해 섬유증에서 뛰어난 효과가 달성될 수 있음이 기재되어 있다. 따라서, Wnt 신호전달 경로는 종양 치료 또는 섬유증 치료를 위한 신규한 표적으로서 관심을 끌어 왔다.

비특허문헌 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11에서는 Wnt 신호전달 경로를 억제할 수 있는 화합물 또는 항체가 개시되며, 화합물 또는 항체가 탄키라제(Tankyrase), Traf2- 및 Nck-상호작용 키나아제(TNIK), 포큐파인(Porcupine), 프리즐드(Frizzled) 수용체 등에 작용할 수 있음이 보고되어 있다.

또한, 각각 옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진 골격을 갖는 화합물이 Wnt 신호전달 경로의 조절물질로서 공지되어 있고, 화합물 및 질환, 예컨대 암 및 섬유증 간 상관관계가 지적되어 있다(특허 문헌 1 내지 3).

WO 2009/051397 US 2010/0286094 WO 2009/148192

Nick Barker et al., "Mining the Wnt pathway for Cancer therapeutics", Nature reviews Drug discovery 2006 Dec; 5(12):997-1014. Katayoon H. Emami et al., "A small molecule inhibitor of beta-catenin/CREB-binding protein transcription", Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2004, 101(34), p.12682-12687. Baozhi Chen et al., "Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer", Nat Chem Biol., 2009, 5(2), p.100-107. Shih-Min A. Huang et al., "Tankyrase inhibition stabilizes axin and antagonizes Wnt signalling", Nature, 2009, 461, p.614-620. Lari Lehtio et al., "Tankyrases as drug targets", The FEBS Journal, 2013, 280, 3576-3593. Miki Shitashige et al., "Traf2- and Nck-Interacting Kinase Is Essential for Wnt Signaling and Colorectal Cancer Growth", Cancer Res., 2010, 70(12), 5024-5033. Austin Gurney et al., "Wnt pathway inhibition via the targeting of Frizzled receptors results in decreased growth and tumorigenicity of human tumors", Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2012, 109(29), 11717-11722. Xiaomo Jiang et al., "Inactivating mutations of RNF43 confer Wnt dependency in pancreatic ductal adenocarcinoma", Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2013, 110(31), 12649-12654. Jo Waaler et al., "Novel Synthetic Antagonists of Canonical Wnt Signaling Inhibit Colorectal Cancer Cell Growth", Cancer Res, 2011, 71(1), 197-205. H Yao et al., "AV-65, a novel Wnt/β-catenin signal inhibitor, successfully suppresses progression of multiple myeloma in a mouse model", Blood Cancer Journal, 2011, 1, e43. De Robertis A et al., "Identification and characterization of a small-molecule inhibitor of Wnt signaling in glioblastoma cells", Mol Cancer Ther., 2013, 12(7), 1180-1189. Anna P. Lam et al., "β-catenin signaling: a novel mediator of fibrosis and potential therapeutic target", Curr Opin Rheumatol. 2011 November; 23(6): 562-567. Sha Hao et al., "Targeted Inhibition of β-Catenin/CBP Signaling Ameliorates Renal Interstitial fibrosis", J. Am. Soc. Nephrol. 22: 1642-1653, 2011. William R. Henderson, Jr. et al., "Inhibition of Wnt/β-catenin/CREB binding protein(CBP) signaling reverses pulmonary fibrosis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2010, 107(32), 14309-14314.

본 출원의 발명으로 해결하려는 과제는 Wnt 경로 조절 활성을 갖는 화합물을 제공하는 것이다.

상기 언급된 과제를 해결하기 위한 광범위한 연구 결과, 본 발명자들은 본 발명을 완성하였다. 즉, 본 발명은 하기 [1] 내지 [21]에 관한 것이다:

[1] 화학식 1로 나타내는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

[화학식 1]

[2] [1]에 있어서, R¹이 메틸기, 에틸기 또는 이소프로필기인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.

[3] [1]에 있어서, R² 및 R³이 서로 동일하거나 상이하며 각각은 수소 원자 또는 메틸기인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.

[4] [1]에 있어서, X²가 수소 원자 또는 불소 원자인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.

[5] [1]에 있어서, X³이 수소 원자 또는 불소 원자인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.

[6] [1]에 있어서, X⁴가 수소 원자 또는 불소 원자인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.

[7] 하기로부터 선택되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-8-((6-(3-(4-(프로판-2-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-8-((6-(3-(4-(프로판-2-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-8-((6-(3-(4-(프로판-2-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-3-((3R)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((3S)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((3R)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드,

4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)-3-플루오로페닐 디하이드로겐 포스페이트, 및

4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)페닐 디하이드로겐 포스페이트.

[8] 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

[9] (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[10] (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[11] (6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[12] (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[13] (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[14] (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[15] 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)-3-플루오로페닐 디하이드로겐 포스페이트 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[16] 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)페닐 디하이드로겐 포스페이트 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.

[17] [1] 내지 [16] 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물.

[18] [1] 내지 [16] 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 또는 섬유증에 대한 치료제 또는 예방제.

[19] 환자에게 [1] 내지 [16] 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 섬유증의 치료 또는 예방 방법.

[20] 암 또는 섬유증의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한 [1] 내지 [16] 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.

[21] 암 또는 섬유증의 치료제 또는 예방제의 제조에서 [1] 내지 [16] 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도.

본 발명에 따른 화합물은 Wnt 경로 조절 활성을 가지며, 이에 따라 암, 섬유증 등에 대한 치료제로서의 잠재적 용도를 갖는다.

도 1은 시험예 6의 결과를 나타낸다.
도 2는 시험예 7의 결과를 나타낸다.
도 3은 시험예 7의 결과를 나타낸다.

이하에, 본 발명의 내용이 상세히 기재될 것이다. 기재에서, 용어 "본 발명에 따른 화합물"은 화학식 1로 나타내는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다. 화학식 1로 나타내는 화합물은 때때로 "화합물 (1)"로 불린다.

본 발명에 따른 화합물에서, 그 입체화학 특성이 명확히 정의되는 화학식 1의 모이어티는 화학식에 나타낸 바와 같은 구조를 가지며, 상기 언급된 모이어티의 다른 부분이고 그 입체화학 특성이 명확히 정의되지 않은 화학식 1의 모이어티는 입체이성질체를 함유할 수 있으며, 입체이성질체는 하나의 유형의 입체이성질체 또는 입체이성질체들의 혼합물일 수 있다. 화합물에는 그의 결정 다형성이 포함될 수 있다. 결정 다형성은 특정 결정 형태로 제한되지 않고, 단일 결정 형태 또는 결정 형태들의 혼합물일 수 있다. 본 발명의 화합물에는 무정형 형태가 포함되며, 또한 무수물 및 용매화물, 예컨대 수화물이 포함된다.

이하에, 본 개시에 기재된 용어, 기호 등의 의미가 본 발명을 설명하기 위해 상세히 설명될 것이다.

본원에서 사용되는 용어 "할로겐 원자"는 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자를 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "C_1-6 알킬기"는 1 개 내지 6 개 탄소 원자를 가지는 선형 또는 분지형 알킬기를 나타내며, 기의 구체예에는 메틸기, 에틸기, 1-프로필기, 2-프로필기, 2-메틸-1-프로필기, 2-메틸-2-프로필기, 1-부틸기, 2-부틸기, 1-펜틸기, 2-펜틸기, 3-펜틸기, 1-헥실기, 2-헥실기 및 3-헥실기가 포함된다.

화학식 1로 나타내는 화합물에서의 R¹은 C_1-6 알킬기이다. R¹은 바람직하게는 메틸기, 에틸기 또는 이소프로필기이고, R¹은 보다 바람직하게는 에틸기이다.

화학식 1로 나타내는 화합물에서, R² 및 R³은 서로 동일하거나 상이하며 각각은 수소 원자 또는 C_1-6 알킬기이다. 바람직하게는, R² 및 R³은 서로 동일하거나 상이하며 각각은 수소 원자 또는 메틸기이다. 보다 바람직하게는, R² 및 R³은 둘 다 수소 원자이다.

화학식 1로 나타내는 화합물에서 X²는 수소 원자 또는 할로겐 원자, 바람직하게는 수소 원자이다.

화학식 1로 나타내는 화합물에서 X³은 수소 원자 또는 할로겐 원자, 바람직하게는 수소 원자 또는 불소 원자이다.

화학식 1로 나타내는 화합물에서 X⁴는 수소 원자 또는 할로겐 원자, 바람직하게는 수소 원자 또는 불소 원자이다.

화학식 1로 나타내는 화합물에서 X⁵는 수소 원자 또는 -P(=O)(OH)₂, 바람직하게는 수소 원자이다.

본 기재에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능한 염이 화학식 1로 나타내는 화합물과 함께 형성된 염이고 약학적으로 허용 가능한 한, 특별히 제한되지 않으며, 약학적으로 허용 가능한 염의 예에는 무기 산 염, 유기 산 염, 무기 염기 염, 유기 염기 염, 및 산성 또는 염기성 아미노산 염이 포함된다.

무기 산 염의 바람직한 예에는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 설페이트 염, 니트레이트 염 및 포스페이트 염이 포함되며, 유기 산 염의 바람직한 예에는 카복실레이트 염, 예컨대 아세테이트 염, 숙시네이트 염, 푸마레이트 염, 말레에이트 염, 타르트레이트 염, 시트레이트 염, 락테이트 염, 스테아레이트 염, 벤조에이트 염 및 만델레이트 염; 및 설포네이트 염, 예컨대 메탄설포네이트 염, 에탄설포네이트 염, p-톨루엔설포네이트 염 및 벤젠설포네이트 염이 포함된다.

무기 염기 염의 바람직한 예에는 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨 염 및 칼륨 염; 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 염 및 마그네슘 염; 알루미늄 염; 및 암모늄 염이 포함된다. 유기 염기 염의 바람직한 예에는 디에틸아민 염, 디에탄올아민 염, 메글루민 염 및 N,N'-디벤질에틸렌디아민 염이 포함된다.

산성 아미노산 염의 바람직한 예에는 아스파테이트 염 및 글루타메이트 염이 포함된다. 염기성 아미노산 염의 바람직한 예에는 아르기닌 염, 라이신 염 및 오르니틴 염이 포함된다.

화학식 1로 나타내는 화합물, 예컨대 아래에 언급된 실시예 1 내지 6, 8, 12, 13, 15 내지 19 및 22에 기재된 화합물, 특히 실시예 1 내지 6에 기재된 화합물은 용해도, 대사 안정성 및 막 투과성과 같은 파라미터의 측면에서 경구 적용 가능한 제제로 사용될 수 있다.

화학식 1로 나타내는 화합물은 아래에 언급된 방법에 의해 제조될 수 있다. 화학식 1로 나타내는 화합물의 제조 방법은 그 방법으로 제한되지 않으며, 일반 지식에 기반하여 당업자에 의해 상기 언급된 방법을 변형하여 제조될 수 있다.

[제조 방법 1] 화합물 (1A)의 제조 방법

식 중, R¹, R², R³, X², X³ 및 X⁴는 상기 정의된 바와 같고; X¹은 할로겐 원자이고; PG¹은 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기이다.

X⁵가 수소 원자인 화학식 1로 나타내는 화합물 중 하나인 화합물 (1A)의 제조 방법은 아래에서 언급된다.

화합물 (2)는 제조예에 기재된 방법 또는 실시예에서 제조 방법 2 등에 의해 제조될 수 있다.

화합물 (3)에 있어서, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물 (3)은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 화합물 (3)은 제조예에 기재된 방법 또는 실시예에서 제조 방법 3 등에 의해 제조될 수 있다.

화합물 (4)는 제조예에 기재된 방법 또는 실시예에서 제조 방법 4 등에 의해 제조될 수 있다.

[단계 1]

상기 단계는 염기의 존재 하에 마이크로파를 화합물에 조사하면서, 화합물 (2)를 화합물 (3) 또는 그의 염으로 나타내는 아민과 반응시켜서 화합물 (1A)를 제조하는 단계이다. 반응에 사용될 용매는 용매가 어느 정도 출발 물질를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 용매로서, 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 또는 임의의 둘 이상의 이들 용매의 혼합 용매가 사용될 수 있다. 반응에서 사용될 염기로서, 유기 염기, 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 1,8-디아자바이사이클로[5.4.0]운덱-7-엔("DBU"로도 불림) 및 피리딘이 사용될 수 있거나 화합물 (3) 자체가 또한 사용될 수 있다. 화합물 (3)은 화합물 (2)의 양에 대해 1 당량 이상, 바람직하게는 1.5 당량 내지 5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 염기는 화합물 (2)의 양에 대해 1 당량 이상, 바람직하게는 1.5 당량 내지 5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 50℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 1 시간 내지 72 시간 범위이다.

화합물 (1A)는 아래의 대안적 단계 (1)로 기재된 방법에 의해 화합물 (2)로부터 제조될 수 있다.

대안적 단계 (1): 상기 단계는 용매 중에 화합물 (2) 및 화합물 (3)을 가열하여 화합물 (1A)를 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 피리딘-유형 용매, 예컨대 피리딘 또는 상기 언급된 용매와 물의 혼합 용매가 사용될 수 있다. 우수한 수율을 달성하기 위한 목적으로, 염기, 예컨대 칼륨 카보네이트 및 세슘 카보네이트가 1 당량 내지 2 당량의 양으로 첨가될 수 있다. 화합물 (3)은 화합물 (2)의 양에 대해 1 당량 이상, 바람직하게는 1.5 당량 내지 5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 50℃ 내지 환류 온도의 범위이고, 반응 시간은 10 분 내지 72 시간 범위이다.

[단계 2]

상기 단계는 아세탈 모이어티를 알데하이드로 전환하기 위한 산성 조건 하에 화합물 (4)를 반응시킨 다음 고리화 반응을 수행하여 화합물 (5)를 제조하는 단계이다. 탈보호 반응이 본 단계의 산성 조건 하에 진행되는 보호기가 페놀계 하이드록시기, 예컨대 3차-부틸기에 대한 보호기 PG¹로 사용되는 경우, 상기 언급된 고리화 반응뿐만 아니라 보호기 PG¹의 제거가 일어나서 화합물 (1A)의 제조로 이어진다. 반응에서 사용될 산으로서, 포름산, p-톨루엔설폰산 등이 사용될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란, 3차-부틸 메틸 에테르 및 1,4-디옥산; 비양자성 극성 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 디메틸 설폭시드, 설폴란, N-메틸피롤리디논, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 헥사메틸포스포르아미드; 니트릴-유형 용매, 예컨대 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 방향족 탄화수소-유형 용매, 예컨대 벤젠 및 톨루엔; 및 물이 사용될 수 있다. 대안적으로, 산 자체 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매의 혼합 용매가 또한 사용될 수 있다. 산은 화합물 (4)의 양에 대해 촉매량 내지 용매량, 바람직하게는 3 당량 내지 용매량 범위의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 실온 내지 환류 온도 범위이고, 반응 시간은 10 분 내지 168 시간 범위이다.

[단계 3]

상기 단계는 화합물 (5)에서 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기 PG¹을 제거하여 화합물 (1A)를 제조하는 단계이다. 반응을 위한 조건은 사용될 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기 PG¹의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 벤질에테르-유형 보호기, 예컨대 벤질기가 제거되어야 하는 경우, 반응은 화합물 (1A)를 제조하기 위해 산성 조건 하에 수행된다. 사용될 산으로서, 유기 산, 예컨대 트리플루오로아세트산 및 메탄설폰산; 무기 산, 예컨대 황산; 및 루이스산, 예컨대 붕소 트리플루오라이드 디에틸 에테레이트가 사용될 수 있다. 더 우수한 결과를 수득하기 위한 목적으로, 첨가제, 예컨대 티오아니솔 및 펜타메틸벤젠이 반응에 첨가될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 바람직하게는, 에테르-유형 용매, 예컨대 디에틸 에테르 및 테트라하이드로푸란 및 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄이 사용될 수 있다. 대안적으로, 산 자체 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매의 혼합 용매가 사용될 수 있다. 첨가제로서, 티오아니솔, 에탄티올, dl-메티오닌, 펜타메틸벤젠 등이 사용될 수 있다. 산은 화합물 (5)의 양에 대해 1 당량 내지 용매량의 양으로 사용될 수 있다. 첨가제는 화합물 (5)의 양에 대해 1 당량 내지 5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이고, 반응 시간은 10 분 내지 72 시간 범위이다.

[제조 방법 2] 화합물 (2)의 제조 방법

식 중, X¹, X², X³, X⁴ 및 PG¹은 상기 언급된 정의에서 정의된 바와 같으며; PG²는 아미노기에 대한 보호기이다.

각각의 화합물 (6) 및 화합물 (7)에 있어서, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있거나, 화합물이 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 실시예의 제조예에 기재된 방법 등에 의해 제조될 수 있다.

화합물 (9)에 있어서, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있거나, 화합물이 공지된 방법, 예컨대 [J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 863-872]에 기재된 방법 등에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 실시예의 제조예에 기재된 방법 등에 의해 제조될 수 있다.

화합물 (12)에 있어서, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있거나, 화합물이 공지된 방법, 예컨대 국제 공개 번호 2009/148192에 기재된 방법 등에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다.

[단계 4]

상기 단계는 화합물 (7)과 화합물 (6) 또는 그의 염을 반응시켜 환원적 아민화를 수행함으로써 화합물 (8)을 제조하는 단계이다. 반응의 가속화 목적으로, 산, 예컨대 아세트산 및 염화수소산이 첨가될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 1,4-디옥산 및 테트라하이드로푸란; 알코올-유형 용매, 예컨대 메탄올 및 에탄올; 할로겐 함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 환원제로서, 리튬 알루미늄 하이드라이드, 나트륨 보로하이드라이드, 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 및 2-피콜린-보란 복합체가 사용될 수 있다. 환원제 대신에, 단계 6에 기재된 대안적 단계 (2)에 기재된 촉매를 이용한 촉매적 수소화에 의한 환원 반응이 이용될 수 있다. 화합물 (7)은 화합물 (6)의 양에 대해 1 당량 내지 2 당량의 양으로 사용될 수 있다. 사용될 환원제의 양은 환원제의 유형에 따라 변하며, 환원제는 화합물 (6)의 양에 대해 0.25 당량 내지 5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 산이 첨가되는 경우, 산은 화합물 (6)의 양에 대해 촉매량 내지 용매량 범위의 양으로 첨가될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 5 분 내지 24 시간 범위이다.

[단계 5]

상기 단계는 축합제의 존재 하에 화합물 (9) 또는 그의 염을 화합물 (8) 또는 그의 염과 반응시켜서 화합물 (10)을 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 에테르-유형 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란 및 1,4-디옥산; 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 니트릴-유형 용매, 예컨대 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 에스테르-유형 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 축합제로서, HATU(O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU(O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), TBTU(O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트), DMT-MM(4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드 n-수화물), Bop(1H-1,2,3-벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), WSC(1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드), DCC(N,N-디사이클로헥실카보디이미드)가 사용될 수 있다. 반응의 가속화 목적으로, 촉매량의 4-디메틸아미노피리딘 또는 1-하이드록시벤조트리아졸이 첨가될 수 있다. 염기, 예컨대 트리에틸아민이 1 당량 내지 5 당량의 양으로 첨가될 수 있고, 그 양은 사용될 축합제의 유형에 따라 변할 수 있다. 화합물 (8)은 화합물 (9)의 양에 대해 1 당량 내지 3 당량, 바람직하게는 1 당량 내지 1.5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 축합제는 화합물 (9)의 양에 대해 1 당량 내지 3 당량, 바람직하게는 1 당량 내지 1.5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 10 분 내지 48 시간 범위이다.

[단계 6]

상기 단계는 화합물 (10)에서 아미노기에 대한 보호기를 제거하여 화합물 (11)을 제조하는 단계이다. 탈보호를 위한 조건은 사용될 아미노기에 대한 보호기의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc) 기 등이 아미노기에 대한 보호기로 사용되며, 화합물 (11)은 염기성 조건 하에 반응을 수행하여 제조될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않으며, 할로겐 함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름, 에테르 유형 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란 및 1,4-디옥산, 아미드 유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 니트릴 유형 용매, 예컨대 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 알코올 유형 용매, 예컨대 메탄올 및 에탄올; 에스테르 유형 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 물; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매의 혼합 용매가 사용될 수 있다. 염기가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 염기 자체가 또한 용매로 사용될 수 있다. 염기로서, 유기 염기, 예컨대 피페리딘, 모르폴린, 디메틸아민, 디에틸아민, 디사이클로헥실아민, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민 및 DBU; 또는 무기 염기, 예컨대 탄산수소 나트륨, 나트륨 카보네이트, 칼륨 카보네이트 및 세슘 카보네이트가 사용될 수 있다. 염기는 화합물 (10)의 양에 대해 촉매량 내지 용매량, 바람직하게는 1 당량 내지 용매량 범위의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이고, 반응 시간은 5 분 내지 96 시간 범위이다.

화합물 (11)은 또한 아래 언급된 대안적 단계 (2)에 기재된 방법에 의해, 즉 벤질 옥시카보닐(Cbz 또는 Z)기, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc)기 등이 아미노기에 대한 보호기로 사용되는 화합물 (10)의 아미노기에 대한 보호기의 탈보호 반응을 수행하여 제조될 수 있다.

대안적 단계 (2): 상기 단계는 촉매적 수소화 반응에 의해 화합물 (11)을 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는, 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어 알코올 유형 용매, 예컨대 메탄올 및 에탄올; 에테르 유형 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란; 아미드 유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 니트릴 유형 용매, 예컨대 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 에스테르 유형 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 아세트산; 물; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 상기 단계에서 사용될 촉매로서, 팔라듐-카본 또는 팔라듐 하이드록사이드-카본이 사용될 수 있다. 촉매는 화합물 (10)의 양에 대해 촉매량 이상의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 실온 내지 환류 온도 범위이고, 반응 시간은 10 분 내지 48 시간 범위이다.

[단계 7]

상기 단계는 축합제의 존재 하에 화합물 (12) 또는 그의 염을 화합물 (11) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (13)을 제조하는 단계이다. 화합물 (13)은 단계 5에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 8]

상기 단계는 아세탈 모이어티를 알데하이드로 전환하기 위해 산성 조건 하에 화합물 (13)을 반응시킨 뒤 고리화 반응을 수행하여 화합물 (14)를 제조하는 단계이다. 화합물 (14)는 단계 2에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다. 탈보호를 위한 조건은 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기 PG¹이 상기 단계에서 채용된 산성 조건 하에 탈보호가 진행될 수 있는 보호기, 예컨대 3차-부틸기인 경우, 탈보호 반응은 상기 단계에서 고리화와 동시에 진행됨으로써 화합물 (2)가 제조된다.

[단계 9]

상기 단계는 화합물 (14)에서 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기를 제거하여 화합물 (2)를 제조하는 단계이다. 탈보호를 위한 조건은 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 벤질 에테르기, 예컨대 벤질기가 페놀계 하이드록시기에 대한 보호기로 사용되는 경우, 화합물 (2)가 탈보호를 위해 단계 3에서와 동일한 반응 조건에 의해 제조될 수 있다.

[제조 방법 3] 화합물 (3)의 제조 방법

식 중, R¹, R² 및 R³은 상기 정의에서 정의된 바와 같으며; LG는 이탈기이고; PG³은 아미노기에 대한 보호기이다.

각각의 화합물 (15), 화합물 (16), 화합물 (17), 화합물 (18) 및 화합물 (19)에 있어서, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있거나, 화합물이 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 각각의 화합물은 실시예의 제조예에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다.

[단계 10]

상기 단계는 화합물 (15)에서 하이드록시기를 이탈기로 전환하여 화합물 (16)을 제조하는 단계이다. LG가 염소 원자 또는 브롬 원자인 경우, 본 단계는 테트라클로로메탄 또는 테트라브로모메탄을 이용하여 트리페닐포스핀의 존재 하에 화합물 (15)를 할로겐화하여 화합물 (16)을 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란; 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 테트라클로로메탄 또는 테트라브로모메탄이 또한 용매로 사용될 수 있다. 트리페닐포스핀은 화합물 (15)의 양에 대해 1 당량 내지 5 당량 범위의 양으로 사용될 수 있다. 테트라클로로메탄 또는 테트라브로모메탄은 화합물 (15)의 양에 대해 1 당량 내지 용매량 범위의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 5 분 내지 48 시간 범위이다.

화합물 (16)은 또한 아래에 언급된 대안적 단계 (3), (4) 및 (5) 중 임의의 하나에 기재된 방법에 의해 화합물 (15)를 통해 제조될 수 있다.

대안적 단계 (3): 화합물 (15)는 산성 조건 하에 반응시켜 화합물 (16)으로 전환될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 디에틸 에테르, 물, 에틸 아세테이트 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 반응에서, 상 전이 촉매, 예컨대 테트라부틸암모늄 브로마이드가 화합물 (15)의 양에 대해 촉매량 내지 2 당량 범위의 양으로 첨가될 수 있다. 산으로서, 염화수소산, 브롬화수소산 등이 사용될 수 있다. 우수한 수율을 달성하기 위한 목적으로, 황산도 첨가될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 실온 범위이며, 반응 시간은 5 분 내지 48 시간 범위이다.

대안적 단계 (4): 화합물 (16)은 화합물 (15)를 티오닐 클로라이드와 반응시켜 제조될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 방향족 탄화수소-유형 용매, 예컨대 벤젠 및 톨루엔; 니트릴-유형 용매, 예컨대 아세토니트릴; 할로겐-함유 용매, 예컨대 클로로포름 및 디클로로메탄; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있으며, 티오닐 클로라이드도 용매로 사용될 수 있다. 우수한 수율을 달성하기 위한 목적으로, 촉매량의 피리딘이 첨가될 수 있다. 티오닐 클로라이드는 화합물 (15)의 양에 대해 1 당량 내지 용매량 범위의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 5 분 내지 48 시간 범위이다.

대안적 단계 (5): 화합물 (16)은 화합물 (15)를 인 할라이드와 반응시켜 제조될 수 있다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 디에틸 에테르; 니트릴-유형 용매, 예컨대 아세토니트릴; 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 인 할라이드로서, 인 옥시클로라이드, 인 트리클로라이드, 인 트리브로마이드 등이 사용될 수 있다. 인 할라이드는 화합물 (15)의 양에 대해 0.33 당량 내지 3 당량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 5 분 내지 48 시간 범위이다.

LG가 설폰산 에스테르, 예컨대 메탄설포닐옥시기, 트리플루오로메탄설포닐옥시기 또는 p-톨루엔설포닐옥시기인 경우, 본 단계는 염기성 조건 하에 화합물 (15)를 설폰산 클로라이드 또는 설폰산 무수물과 반응시켜 화합물 (16)을 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 1,4-디옥산 및 테트라하이드로푸란; 방향족 탄화수소-유형 용매, 예컨대 벤젠 및 톨루엔; 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 염기로서, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민 등이 사용될 수 있다. 설폰산 클로라이드로서, 메탄설포닐 클로라이드, 트리플루오로메탄설포닐 클로라이드, p-톨루엔설포닐 클로라이드 등이 사용될 수 있다. 설폰산 무수물로서, 메탄설폰산 무수물, 트리플루오로메탄설폰산 무수물, p-톨루엔설폰산 무수물 등이 사용될 수 있다. 염기는 화합물 (15)의 양에 대해 1 당량 내지 5 당량의 양으로 사용될 수 있다. 설폰산 클로라이드 또는 설폰산 무수물은 화합물 (15)의 양에 대해 1 당량 내지 3 당량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 실온 범위이며, 반응 시간은 5 분 내지 48 시간 범위이다.

[단계 11]

상기 단계는 염기의 존재 하에 화합물 (16)을 화합물 (17) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (19)를 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 에테르-유형 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란 및 디에틸 에테르; 방향족 탄화수소-유형 용매, 예컨대 벤젠 및 톨루엔; 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 알코올-유형 용매, 예컨대 메탄올 및 에탄올; 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 니트릴-유형 용매, 예컨대 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 염기성 용매, 예컨대 피리딘; 에스테르-유형 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 또는 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매가 사용될 수 있다. 반응에서 사용될 염기로서, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, DBU, 나트륨 수소 카보네이트, 칼륨 카보네이트 등이 사용될 수 있고, 화합물 (17) 자체도 사용될 수 있다. 화합물 (17)은 화합물 (16)의 양에 대해 1 당량 내지 10 당량, 바람직하게는 1 당량 내지 2 당량의 양으로 사용될 수 있다. 염기는 화합물 (16)의 양에 대해 1 당량 내지 과량의 양으로 사용될 수 있다. 반응 온도는 0℃ 내지 환류 온도 범위이며, 반응 시간은 10 분 내지 48 시간 범위이다.

[단계 12]

상기 단계는 화합물 (15)를 산화시켜 화합물 (18)을 제조하는 단계이다. 반응에서 사용될 용매는 용매가 어느 정도 원료를 용해시킬 수 있고 반응을 억제하지 않는 한, 특별히 제한되지 않으며, 할로겐-함유 용매, 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 방향족 탄화수소-유형 용매, 예컨대 벤젠 및 톨루엔; 아미드-유형 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 및 N-메틸피롤리디논; 에스테르-유형 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 니트릴-유형 용매, 예컨대 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 설폭시드-유형 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드; 아세톤; 임의의 둘 이상의 상기 언급된 용매를 포함하는 혼합 용매 등이 사용될 수 있다. 반응에서 사용될 산화제로서, 망간 디옥사이드, 피리디늄 클로로크로메이트, 피리디늄 디크로메이트, 디메틸 설폭시드-활성화제, 테트라프로필암모늄 퍼루테네이트, 디클로로트리스(트리페닐포스핀)루테늄(II), 1,1,1-트리스(아세틸옥시)-1,1-디하이드로-1,2-벤즈요오독솔-3-(1H)-온(Dess-Martin 퍼요오디난), 1-하이드록시-1,2-벤즈요오독솔-3(1H)-온-1-옥사이드(IBX) 등이 사용될 수 있다. 산화제는 화합물 (15)의 양에 대해 촉매량 내지 과량 범위의 양으로 사용될 수 있다. 산화가 디메틸 설폭시드-활성화제를 이용해서 수행되는 경우, 산 무수물, 예컨대 아세트산 무수물 및 트리플루오로아세트산 무수물; 산 클로라이드, 예컨대 옥살릴 클로라이드 및 티오닐 클로라이드; 염소, N-클로로숙신이미드 등이 활성화제로 사용될 수 있다. 디메틸 설폭시드는 활성화제의 양에 대해 1 당량 내지 20 당량의 양으로 사용될 수 있다. 테트라프로필암모늄 퍼루테네이트 또는 디클로로트리스(트리페닐포스핀)루테늄(II)이 촉매량으로 사용되는 경우, 산화제, 예컨대 N-메틸모르폴린-N-옥사이드 또는 비스(트리메틸실릴)퍼옥사이드를 동시에 사용할 수 있다. 반응 온도는 사용될 산화제의 유형에 따라 변하며, -78℃ 내지 환류 온도 범위이고, 반응 시간은 10 분 내지 96 시간 범위이다.

[단계 13]

상기 단계는 화합물 (18)을 화합물 (17) 또는 그의 염과 반응시켜 환원적 아민화를 수행함으로써 화합물 (19)를 제조하는 단계이다. 화합물 (19)는 단계 4에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 14]

상기 단계는 화합물 (19)에서 아미노기에 대한 보호기를 제거하여 화합물 (3)을 제조하는 단계이다. 탈보호를 위한 조건은 아미노기에 대한 보호기의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 벤질-유형 기, 예컨대 벤질기 및 벤즈하이드릴기, 벤질옥시카보닐(Cbz 또는 Z)기 등이 아미노기에 대한 보호기로 사용되는 경우, 탈보호를 위한 조건은 단계 6의 대안적 단계 (2)에서 채용된 것과 동일한 촉매적 수소화 방법에서 채용된 조건이거나 일반적으로 벤질기의 제거를 위해 채용된 조건이며, 화합물 (3)이 상기 조건을 채용해서 제조될 수 있다. 3차-부틸옥시카보닐(Boc)기 등이 아미노기에 대한 보호기로 사용되는 경우, 채용될 탈보호를 위한 조건은 염화수소산, 트리플루오로아세트산 등을 이용하는 산성 조건, 루이스산, 예컨대 알루미늄 클로라이드 및 아연 브로마이드를 이용하는 조건, 테트라부틸암모늄 플루오라이드 등을 이용하는 조건, 실릴 화합물, 예컨대 트리메틸 실릴 요오다이드, 트리메틸 실릴 클로라이드 및 테트라클로로실란 등을 이용하는 조건이다.

[제조 방법 4] 화합물 (4)의 제조 방법

식 중, R¹, R², R³, X², X³, X⁴, PG¹ 및 PG²는 상기 정의에서 정의된 바와 같다.

화합물 (20)에 대해, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 화합물은 또한 실시예의 제조예에 기재된 방법, 제조 방법 5 등을 채용해서 제조될 수 있다.

각각의 화합물 (6), 화합물 (9) 및 화합물 (12)에 대해, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 제품으로부터 각각 제조될 수 있다.

[단계 15]

상기 단계는 화합물 (20)과 화합물 (6) 또는 그의 염을 반응시켜 환원적 아민화를 수행함으로써 화합물 (21)을 제조하는 단계이다. 화합물 (21)은 단계 4에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 16]

상기 단계는 축합제의 존재 하에 화합물 (21) 또는 그의 염을 화합물 (9) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (22)를 제조하는 단계이다. 화합물 (22)는 단계 5에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 17]

상기 단계는 화합물 (22)에서 아미노기에 대한 보호기를 제거하여 화합물 (23)을 제조하는 단계이다. 화합물 (23)은 단계 6에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 18]

상기 단계는 축합제의 존재 하에 화합물 (23) 또는 그의 염을 화합물 (12) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (4)를 제조하는 단계이다. 화합물 (4)는 단계 5에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[제조 방법 5] 화합물 (20)의 제조 방법

식 중, R¹, R², R³, X¹ 및 X²는 상기 정의에서 정의된 바와 같으며; PG⁴는 알데하이드에 대한 보호기이다.

화합물 (3)에 대해, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 화합물은 실시예의 제조예에 기재된 방법, 제조 방법 3 등을 채용해서 제조될 수 있다.

각각의 화합물 (17), 화합물 (24) 및 화합물 (29)에 대해, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있거나, 화합물이 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 각각의 화합물은 실시예의 제조예에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다.

[단계 19]

상기 단계는 화합물 (24)를 화합물 (3) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (25)를 제조하는 단계이다. 화합물 (25)는 단계 1에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 20]

상기 단계는 화합물 (25)에서 알데하이드기에 대한 보호기를 제거하여 화합물 (20)을 제조하는 단계이다. 탈보호를 위한 조건은 알데하이드기에 대한 보호기의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 아세탈-유형 보호기가 알데하이드기에 대한 보호기로 사용되는 경우, 화합물 (20)은 아세탈의 제거를 위해 일반적으로 채용되는 탈보호를 위한 조건, 예컨대 포름산, p-톨루엔설폰산 등을 이용하여 산성 조건 하에 반응 방법에서 채용되는 조건에 의해 제조될 수 있다.

[단계 21]

상기 단계는 화합물 (24)를 아제티딘-3-올 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (26)을 제조하는 단계이다. 화합물 (26)은 단계 1에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 22]

상기 단계는 화합물 (26)을 산화하여 화합물 (27)을 제조하는 단계이다. 화합물 (27)은 단계 12에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 23]

상기 단계는 화합물 (27)을 화합물 (17)과 반응시켜 환원적 아민화를 수행함으로써 화합물 (28)을 제조하는 단계이다. 화합물 (28)은 단계 4에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 24]

상기 단계는 화합물 (28)에서 알데하이드기에 대한 보호기를 제거하여 화합물 (20)을 제조하는 단계이다. 화합물 (20)은 단계 20에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 25]

상기 단계는 화합물 (29)를 화합물 (3) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (30)을 제조하는 단계이다. 화합물 (30)은 단계 1에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 26]

상기 단계는 화합물 (30)을 산화시켜 화합물 (20)을 제조하는 단계이다. 화합물 (20)은 단계 12에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[제조 방법 6] 화합물 (5)의 제조 방법

식 중, R¹, R², R³, X¹, X², X³, X⁴ 및 PG¹은 상기 정의에서 정의된 바와 같다.

화합물 (14)는 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있고, 또한 실시예의 제조예에 기재된 방법, 제조 방법 2 등을 채용해서 제조될 수 있다.

[단계 27]

상기 단계는 화합물 (14)를 화합물 (3) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (5)를 제조하는 단계이다. 화합물 (5)는 단계 1에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[제조 방법 7] 화합물 (36)의 제조 방법

식 중, R¹, R², R³, X¹, X², X³ 및 X⁴는 상기 정의에서 정의된 바와 같으며; PG⁵는 수소 원자 또는 수소 원자에 대한 보호기 또는 페놀계 하이드록시기이고; PG⁶은 아미노기에 대한 보호기이고; R⁴는 수소 원자 또는 C_1-5 알킬기이며, 여기서 R¹은 -CH₂R⁴이다.

화합물 (31)은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있고, 또한 실시예의 제조예에 기재된 방법, 제조 방법 2 등을 채용해서 제조될 수 있다.

화합물 (32)에 대해, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 실시예의 제조예에 기재된 방법, 제조 방법 3 등을 채용해서 제조될 수 있다.

화합물 (35)에 대해, 상업적으로 이용 가능한 화합물이 임의의 개질 없이 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 공지된 방법에 의해 상업적으로 이용 가능한 화합물로부터 제조될 수 있다.

[단계 28]

상기 단계는 화합물 (31)을 화합물 (32) 또는 그의 염과 반응시켜 화합물 (33)을 제조하는 단계이다. 화합물 (33)은 단계 1에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[단계 29]

상기 단계는 화합물 (33)에서 아미노기에 대한 보호기 PG⁶을 제거하여 화합물 (34)를 제조하는 단계이다. 탈보호를 위한 조건은 아미노기에 대한 보호기의 유형에 따라 변한다. 예를 들어, 3차-부틸옥시카보닐기 등이 아미노기에 대한 보호기로 사용되는 경우, 화합물 (34)는 단계 14에서 탈보호를 위한 것과 유사한 조건에 의해 제조될 수 있다.

[단계 30]

상기 단계는 화합물 (34) 또는 그의 염을 화합물 (35)와 반응시켜 환원적 아민화를 수행함으로써 화합물 (36)을 제조하는 단계이다. 화합물 (36)은 단계 4에서와 유사한 방식으로 제조될 수 있다.

[제조 방법 8] 화합물 (1B)의 제조 방법

식 중, R¹, R², R³, X², X³ 및 X⁴는 상기 정의에서 정의된 바와 같다.

X⁵가 -P(=O)(OH)₂인 화학식 1로 나타내는 화합물인 화합물 (1B)의 제조 방법이 아래에서 언급된다.

[단계 31]

상기 단계는 화합물 (1A)에서의 페놀계 하이드록시기를 포스페이트 에스테르화제, 예컨대 인 옥시클로라이드와 반응시킨 뒤, 생성 산물을 수산화나트륨 용액 등으로 후처리하고, 이어서 처리된 산물을 중화함으로써 화합물 (1B)를 제조하는 단계이다. 반응 온도는 바람직하게는 0℃ 이하이며, 반응 시간은 바람직하게는 10 분 내지 3 시간이다. 포스페이트 에스테르화제의 양은 화합물 (1A)의 양에 대해 바람직하게는 1 당량 내지 5 당량이다.

각각의 방법 또는 각각의 단계 종료 후, 각 단계에서의 원하는 화합물이 종래 방법에 따라 반응 혼합물로부터 수집될 수 있다.

화합물 (1)의 전형적인 제조 방법은 상기 언급된 바와 같다. 화합물 (1)의 제조에서 사용된 각각의 원료 화합물 및 시약은 염 또는 용매화물, 예컨대 수화물의 형태를 가질 수 있고, 사용된 원료, 용매 등의 유형에 따라 변할 수 있으며, 반응을 억제하지 않는 한 특별히 제한되지 않는다. 사용되는 용매는 또한 원료, 시약 등의 유형에 따라 변할 수 있고, 반응을 억제하지 않고 원료를 어느 정도 용해시킬 수 있는 한 특별히 제한되지 않는다. 화합물 (1)이 유리 형태로 제조되는 경우, 유리 형태는 종래 방법에 의해 화합물 (1)로부터 형성될 수 있는 염 또는 용매화물로 전환될 수 있다.

화합물 (1)이 염 또는 용매화물의 형태로 제조되는 경우, 염 또는 용매화물은 종래 방법에 의해 화합물 (1)의 유리 형태로 전환될 수 있다.

화합물 (1)의 다양한 이성질체(예로, 기하 이성질체, 광학 이성질체, 회전 이성질체, 입체이성질체, 호변이성체) 또는 그의 중간체가 일반적 분리 방법, 예컨대 결정화 방법, 부분입체이성질체 염 방법, 효소적 분해 방법, 다양한 유형의 크로마토그래피(예로, 박층 크로마토그래피, 칼럼 크로마토그래피, 기체 크로마토그래피)에 의해 정제되고 단리될 수 있다.

필요한 경우, 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 약학적으로 허용 가능한 첨가제와 혼합되어 약학 조성물을 제조할 수 있다. 약학 조성물의 투여 형태의 예에는 경구 제조물(예로, 정제, 과립, 분말, 캡슐, 시럽), 주사용 제조물(예로, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 복강내 투여용) 및 외용 제조물(예로, 경피 제조물(연고, 접착성 피부 패치 등), 점안제, 점비제, 좌약)이 포함된다.

고체 제조물, 예컨대 정제, 캡슐, 과립 및 분말은 일반적으로 0.001 질량% 내지 99.5 질량%, 바람직하게는 0.001 질량% 내지 90 질량%의 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 함유할 수 있다.

경구 투여용 고체 제조물을 제조하려는 경우, 부형제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 착색제 등이 종래 방법에 의해 정제, 과립, 분말, 캡슐 등을 제조하기 위해 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 대해 필요한 바에 따라 첨가될 수 있다. 필요한 경우, 정제, 과립, 분말, 캡슐 등은 필름 코팅을 거칠 수 있다.

부형제의 예에는 락토스, 옥수수 전분 및 결정성 셀룰로스가 포함되며, 결합제의 예에는 하이드록시프로필 셀룰로스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로스가 포함되고, 붕해제의 예에는 카복시메틸 셀룰로스 칼슘 및 크로스카르멜로스 나트륨이 포함된다.

윤활제의 예에는 마그네슘 스테아레이트 및 칼슘 스테아레이트가 포함되며, 착색제의 예에는 철 세스퀴옥사이드, 황색 철 세스퀴옥사이드 및 티타늄 옥사이드가 포함된다.

필름 코팅제의 예에는 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 및 메틸 셀룰로스가 포함된다.

상기 언급된 첨가제의 예는 상기 언급된 물질에 제한되지 않는다.

주사용 제조물(예로, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 복강내 투여용)을 제조하려는 경우, 주사용 제조물은 필요에 따라 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 pH 조절물질, 완충제, 현탁화제, 용해 보조제, 항산화제, 보존제(항균제), 등장화제 등을 첨가하여 종래 방법에 의해 제조될 수 있다. 주사용 제조물은 동결되어 사용 직전에 용해될 수 있는 동결건조된 제조물을 제조할 수 있다. 주사용 제조물은 정맥내, 피하, 근육내 등으로 투여될 수 있다.

pH 조절물질 및 완충제의 예에는 유기 산 또는 무기 산 및/또는 그의 염, 나트륨 하이드록사이드 및 메글루민이 포함되며, 현탁화제의 예에는 메틸 셀룰로스, 폴리소르베이트 80 및 나트륨 카복시메틸 셀룰로스가 포함된다. 가용화제의 예에는 폴리소르베이트 80 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트가 포함되고, 항산화제의 예에는 아스코르브산 및 α-토코페롤이 포함되고, 보존제의 예에는 메틸 파라옥시벤조에이트 및 에틸 파라옥시벤조에이트가 포함되고, 등장화제의 예에는 글루코스, 나트륨 클로라이드 및 만니톨이 포함된다. 이들 성분은 상기 언급된 물질에 제한되지 않는다.

주사용 용액은 일반적으로 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 0.000001 질량% 내지 99.5 질량%, 바람직하게는 0.000001 질량% 내지 90 질량%의 양으로 함유할 수 있다.

외용 제조물을 제조하려는 경우, 제조물은 기제 원료를 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 첨가하고, 필요한 경우 상기 언급된 유화제, 보존제, pH 조절물질, 착색제 등을 생성 혼합물에 추가 첨가함으로써 경피 제조물(예로, 연고, 접착성 피부 패치), 점안제, 점비제, 좌약 등을 제조하여 종래 방식에 의해 제조될 수 있다.

사용될 기제 원료로서, 약물, 준-약물, 화장품 등에서 종래 사용되어 온 다양한 원료를 이용할 수 있으며, 기제 원료의 예에는 동물/식물성 오일, 광물성 오일, 에스테르 오일, 왁스, 고급 알코올 및 정제수와 같은 원료가 포함된다.

외용 제조물은 일반적으로 화합물 (1) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 0.000001 질량% 내지 99.5 질량%, 바람직하게는 0.000001 질량% 내지 90 질량%의 양으로 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 의약의 용량은 일반적으로 신체 상태, 연령, 성별, 체중 등에 따라 변하며, 원하는 효과를 일으키기 충분한 양일 수 있다. 예를 들어, 인간 성인의 경우, 1 일 약 0.1 mg 내지 5000 mg(바람직하게는 0.5 mg 내지 1000 mg)이 1 일 또는 수 일마다 1 회 또는 1 일 2 개 내지 6 개의 분할 용량으로 투여된다.

본 발명에 따른 화합물에는 화합물 (1)의 동위원소로 표지된 형태가 포함된다. 동위원소로 표지된 형태는 적어도 하나의 원자가 자연에서 보통 발견되는 것과 상이한 원자량 또는 상이한 원자량수를 갖는 원자로 치환되는 것을 제외하고 화합물 (1)과 실질적으로 동일하다. 화합물 (1) 내로 도입될 수 있는 동위원소의 예에는 수소의 동위원소, 탄소의 동위원소, 질소의 동위원소, 산소의 동위원소, 인의 동위원소, 불소의 동위원소, 요오드의 동위원소 또는 염소의 동위원소, 예컨대 ²H, ³H, ¹¹C, ¹⁴C, ¹⁸F, ³⁵S, ¹²³I 및 ¹²⁵I가 포함된다.

상기 언급된 동위원소 및/또는 또 다른 동위원소 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 유도체(예로, 염)를 함유하는 화합물 (1)은 본 발명에 따른 화합물의 범위 내에 포함된다. 본 발명에 따른 동위원소로 표지된 화합물, 예로 방사성 동위원소, 예컨대 ³H 및 ¹⁴C가 도입되는 화합물은 의약 또는 기질 조직 분포 분석에 유용하다. 동위원소 ³H 및 ¹⁴C는 그의 제조 및 검출의 용이성으로 인해 유용한 것으로 간주된다. 동위원소 ¹¹C 및 ¹⁸F는 PET(양전자 방출 단층촬영)에 유용한 것으로 간주되며, 동위원소 ¹²⁵I는 SPECT(단일 광자 방출 전산화 단층촬영)에 유용한 것으로 간주되고, 모든 동위원소가 뇌 조영에 유용하다. 더 무거운 동위원소, 예컨대 ²H에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성으로 인해 특정한 치료적 장점, 예컨대 생체내 반감기 증가, 필요 선량의 감소 등을 제공하며, 이에 따라 특정 상황에서 유용한 것으로 간주된다. 화합물 (1)의 동위원소로 표지된 형태는 동위원소로 표지되지 않은 시약 대신 쉽게 적용 가능한 동위원소로 표지된 시약을 이용하여 아래에서 언급된 실시예에 개시된 절차를 수행하여 계속 제조될 수 있다.

화합물 (1)은 생리 활성 저분자량 화합물의 표적 단백질을 포획하기 위한 화학적 탐침으로 사용될 수 있다. 즉, 화합물 (1)은 [J. Mass Spectrum. Soc. Jpn. Vol. 51, No.5 2003, p492-498, 국제 공개 번호 2007/139149] 등에 개시된 기법에 의해 화합물의 활성 개발에 필수적인 구조적 모이어티와 상이한 화합물 (1)의 모이어티 내로 표지기, 링커 등을 도입하여 친화도 크로마토그래피 탐침, 광친화도 크로마토그래피 탐침 등으로 전환될 수 있다.

화학적 탐침에서 사용될 표지기, 링커 등의 예에는 아래의 그룹 (1) 내지 (5)에 언급된 기가 포함된다:

(1) 단백질 표지기, 예컨대 광친화도 표지기(예로, 벤조일기, 벤조페논기, 아지드기, 카보닐아지드기, 디아지리딘기, 에논기, 디아조기 및 니트로기) 및 화학적 친화도기(예로, 알파 탄소 원자가 할로겐 원자에 의해 치환되는 케톤기, 카바모일기, 에스테르기, 알킬티오기, 미카엘 수신체(Michael acceptor), 예컨대 α,β-불포화 케톤기 및 α,β-불포화 에스테르기 및 옥시란기);

(2) 절단 가능한 링커, 예컨대 -S-S-, -O-Si-O-, 단당류기(예로, 글루코스기, 갈락토스기) 또는 이당류기(예로, 락토스기), 및 효소 반응에 의해 절단될 수 있는 올리고펩타이드 링커;

(3) 피싱 태그기, 예컨대 바이오틴 및 3-(4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4H-3a,4a-디아자-4-보라-s-인다센-3-일) 프로피오닐기;

(4) 방사성 표지기, 예컨대 ¹²⁵I, ³²P, ³H 및 ¹⁴C; 형광 표지기, 예컨대 플루오레세인, 로다민, 단실, 움벨리페론, 7-니트로푸라자닐, 3-(4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4H-3a,4a-디아자-4-보라-s-인다센-3-일) 프로피오닐기; 화학 발광기, 예컨대 루시페린 및 루미놀; 중금속 이온, 예컨대 란탄계 금속 이온 및 라듐 이온을 검출할 수 있는 마커;

(5) 고체 담체, 예컨대 유리 비드, 유리 층, 마이크로타이터 플레이트, 아가로스 비드, 아가로스 층, 폴리스티렌 비드, 폴리스티렌 층, 나일론 비드 및 나일론 층에 결합될 수 있는 기 등.

상기 언급된 문헌 등에 기재된 방법에 의해 상기 언급된 항목 (1) 내지 (5)로 구성된 군에서 선택된 표지기 등을 화합물 (1) 내에 도입하여 제조된 탐침은 신규 약물 탐색 표적에 대한 검색에 유용한 표지 단백질 등의 동정을 위한 화학적 탐침으로 사용될 수 있다.

실시예

본 발명에 따른 화합물은 아래에 언급된 제조예 및 실시예에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 그러나, 이들 실시예는 단지 예시적 목적을 위한 것이며, 본 발명에 따른 화합물이 어떤 식으로든 아래 언급된 구체예로 제한되지는 않는다.

제조예 및 실시예에서 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 이용한 정제용 실리카 겔은 YMC GEL SILICA(YMC Co., Ltd, 카탈로그 코드: SL06I52W)였고, NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 이용한 정제용 실리카 겔은 NH 실리카 겔(Fuji Silysia Chemical LTD., 카탈로그 코드: DM2035)이었고, ODS 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 이용한 정제용 실리카 겔은 YAMAZEN GEL ODS-SM(YAMAZEN Corporation, 카탈로그 코드: W113, W116 등)이었고, 실리카 겔 박층 크로마토그래피를 이용한 정제용 TLC 플레이트는 TLC 실리카 겔 60F₂₅₄(Merck KGaA, 카탈로그 코드: 1.05715.0001)였고, NH 실리카 겔 박층 크로마토그래피를 이용한 정제용 TLC 플레이트는 NH SILICA GEL TLC 플레이트(Fuji Silysia Chemical LTD., 카탈로그 코드: T050908)였다.

본원에서 이용된 약어는 하기와 같다:

NMP: N-메틸피롤리디논

THF: 테트라하이드로푸란

HATU: O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

HBTU: O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

TFA: 트리플루오로아세트산

DMF: N,N-디메틸포름아미드

DBU: 1,8-디아자바이사이클로[5.4.0]운덱-7-엔

[실시예 1]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 1-1-6에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(397 mg, 0.689 mmol) 및 NMP(10 mL)의 혼합 용액에 제조예 1-3-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-에틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(1.16 g)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물에 140℃에서 12 시간 동안 마이크로파를 조사하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 뒤 물을 여기에 첨가하고, 이어서 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트서 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올)에 의해 정제한 뒤 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(402 mg, 수율: 80%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.00(3H, t, J = 6.8 Hz), 2.10-2.65(10H, m), 3.10-3.21(2H, m), 3.41-3.74(8H, m), 3.84-3.89(1H, m), 3.95-4.05(2H, m), 4.17-4.23(2H, m), 4.51(1H, dd, J = 6.8 Hz, 15.6 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.6 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.50-5.60(1H, m), 5.70-5.80(1H, m), 5.82-5.87(1H, m), 6.24(1H, d, J = 8.0 Hz), 6.41(1H, dd, J = 2.0 Hz, 11.2 Hz), 6.47(1H, dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz), 6.69(1H, d, J = 7.2 Hz), 6.80-6.86(1H, m), 7.20-7.31(3H, m), 7.35-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 726.57 [M+H]⁺.

[제조예 1-1-1]

(2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민

2,2-디에톡시에탄-1-아민의 상업적으로 이용 가능한 제품(926 ㎕, 6.39 mmol), THF(10.0 mL) 및 아세트산(1.00 mL)의 혼합 용액에 6-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드의 상업적으로 이용 가능한 제품(800 mg, 6.39 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 25 분 동안 교반하였다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(2.71 g, 12.8 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가한 뒤 1 시간 10 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 첨가하여 반응을 종료시켰다. 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 1 : 1)에 의해 정제한 뒤, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(1.14 g, 수율: 74%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.22(6H, t, J = 7.2 Hz), 2.76(2H, d, J = 5.5 Hz), 3.50-3.61(2H, m), 3.65-3.76(2H, m), 3.89(2H, s), 4.64(1H, t, J = 5.5 Hz), 6.80(1H, dd, J = 2.8 Hz, 8.2 Hz), 7.22(1H, dd, J = 2.4 Hz, 7.3 Hz), 7.74(1H, q, J = 7.9 Hz).

[제조예 1-1-2]

9H-플루오렌-9-일메틸 N-((1S)-2-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-1-(2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)카바모일)에틸)카바메이트

제조예 1-1-1에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민(3.50 g, 14.4 mmol) 및 디클로로메탄(25 mL)의 혼합 용액에 제조예 1-2-7에 기재된 (2S)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로판산(7.76 g, 15.1 mmol), N-메틸모르폴린(2.06 mL, 18.7 mmol) 및 HATU(6.04 g, 15.8 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 13 시간 동안 교반하였다. 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물의 미정제 산물을 얻었다(14.4 g). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 758.50 [M+Na]⁺.

[제조예 1-1-3]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

제조예 1-1-2에 기재된 9H-플루오렌-9-일메틸 N-((1S)-2-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-1-((2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)카바모일)에틸)카바메이트(14.4 g) 및 THF(30 mL)의 혼합 용액에 디에틸아민(5.27 mL, 50.4 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 메탄올, 물 및 헵탄을 잔류물에 첨가하고, 생성 혼합물을 분획화하였다. 수성층을 헵탄으로 세정한 뒤 감압 하에 농축하였다. 물을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 1 : 1, 이어서 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(6.87 g, 수율: 93%).

ESI-MS(m/z): 514.32 [M+H]⁺.

[제조예 1-1-4]

(2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

제조예 1-1-3에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(4.87 g, 9.48 mmol) 및 디클로로메탄(100 mL)의 혼합 용액에 공지된 물질(WO2009148192) 2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트산(2.62 g, 9.95 mmol), 트리에틸아민(2.64 mL, 19.0 mmol) 및 HBTU(3.96 g, 10.4 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트, 이어서 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 30 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(7.28 g, 수율: 정량적).

ESI-MS(m/z): 759.43 [M+H]⁺.

[제조예 1-1-5]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 1-1-4에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(7.28 g, 9.48 mmol) 및 포름산(50 mL)의 혼합 용액을 실온에서 15 시간 15 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 수성 암모니아 용액을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 1 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(5.04 g, 수율: 80%).

ESI-MS(m/z): 667.39 [M+H]⁺.

[제조예 1-1-6]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 1-1-5에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(5.04 g, 7.56 mmol) 및 TFA(20 mL)의 혼합 용액에 티오아니솔(3.55 mL, 30.2 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 13 시간 50 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(4.34 g, 수율: 정량적).

ESI-MS(m/z): 577.31 [M+H]⁺.

[제조예 1-2-1]

메틸 (2S)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-하이드록시프로파노에이트

L-세린 메틸 에스테르 하이드로클로라이드의 상업적으로 이용 가능한 제품(10.0 g, 64.3 mmol), 1,4-디옥산(15 mL) 및 물(90 mL)의 혼합 용액에 나트륨 수소 카보네이트(10.8 g, 129 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 15 분 동안 교반하였다. 이어서, 1,4-디옥산(60 mL) 중 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 9H-플루오렌-9-일메틸카보네이트(21.7 g, 64.3 mmol) 용액을 생성 용액에 실온에서 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 14 시간 동안 교반하였다. 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 3 회 추출하고, 합한 유기층을 물 및 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 디에틸 에테르 및 헵탄을 생성 잔류물에 첨가하고, 침전물을 여과에 의해 수집하여 표제 화합물을 얻었다(22.3 g, 수율: 정량적).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.00-2.15(1H, m), 3.81(3H, s), 3.89-4.07(2H, m), 4.20-4.28(1H, m), 4.39-4.53(3H, m), 5.63-5.74(1H, m), 7.29-7.37(2H, m), 7.38-7.46(2H, m), 7.55-7.65(2H, m), 7.74-7.82(2H, m).

[제조예 1-2-2]

메틸 (2S)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-(((4-메틸벤젠)설포닐)옥시)프로파노에이트

제조예 1-2-1에 기재된 메틸 (2S)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-하이드록시프로파노에이트(5.00 g, 14.6 mmol) 및 피리딘(25 mL)의 혼합 용액에 4-디메틸아미노피리딘(18.0 mg, 0.146 mmol) 및 p-톨루엔설포닐 클로라이드(5.58 g, 29.3 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 생성 혼합물을 0℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 2 회 추출하였다. 합한 유기층을 1 N 염화수소산으로 3 회, 이어서 포화 수성 나트륨 수소 카보네이트 용액으로, 그 뒤 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시킨 뒤, 에틸 아세테이트, 디에틸 에테르 및 헵탄을 생성 잔류물에 첨가하고, 이어서 침전물을 여과에 의해 수집하여 표제 화합물을 얻었다(6.20 g, 수율: 85%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.37(3H, s), 3.74(3H, s), 4.16-4.23(1H, m), 4.23-4.31(1H, m), 4.32-4.40(2H, m), 4.41-4.48(1H, m), 4.54-4.62(1H, m), 5.63-5.66(1H, m), 7.26-7.37(4H, m), 7.38-7.45(2H, m), 7.56-7.64(2H, m), 7.72-7.81(4H, m).

[제조예 1-2-3]

메틸 (2R)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-요오도프로파노에이트

제조예 1-2-2에 기재된 메틸 (2S)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-(((4-메틸벤젠)설포닐)옥시)프로파노에이트(6.20 g, 12.5 mmol) 및 아세톤(50 mL)의 혼합 용액에 나트륨 요오다이드(9.38 g, 62.6 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 90 시간 50 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하였다. 물을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물, 이어서 포화 수성 나트륨 티오설페이트 용액, 그 뒤 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시킨 뒤, 디에틸 에테르 및 헵탄을 생성 잔류물에 첨가하고, 침전물을 여과에 의해 수집하여 표제 화합물을 얻었다(3.82 g, 수율: 68%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.55-3.66(2H, m), 3.84(3H, s), 4.20-4.30(1H, m), 4.35-4.48(2H, m), 4.56-4.62(1H, m), 5.63-5.72(1H, m), 7.30-7.37(2H, m), 7.38-7.45(2H, m), 7.62(2H, d, J = 7.2 Hz), 7.78(2H, d, J = 7.5 Hz).

[제조예 1-2-4]

4-(벤질옥시)-1-브로모-2-플루오로벤젠

4-브로모-3-플루오로페놀의 상업적으로 이용 가능한 제품(15.0 g, 78.5 mmol) 및 DMF(30 mL)의 혼합 용액에 칼륨 카보네이트(21.7 g, 157 mmol) 및 벤질 브로마이드(10.2 mL, 86.4 mmol)를 실온에서 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 20 분, 이어서 70℃에서 40 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 뒤, 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물에 이어 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 5 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(22.7 g, 수율: 정량적).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 5.04(2H, s), 6.65-6.72(1H, m), 6.75-6.80(1H, m), 7.30-7.45(6H, m).

[제조예 1-2-5]

4-(벤질옥시)-2-플루오로-1-요오도벤젠

제조예 1-2-4에 기재된 4-(벤질옥시)-1-브로모-2-플루오로벤젠(187 g, 665 mmol) 및 1,4-디옥산(300 mL)의 혼합 용액에 구리 요오다이드(I)(12.6 g, 66.1 mmol), 나트륨 요오다이드(200 g, 1.33mol) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민(14.0 mL, 132 mmol)을 실온에서 첨가하고, 생성 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃ 내지 115℃에서 19 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 뒤, 물 및 에틸 아세테이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 수성층 및 유기층 간에 분획화하였다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 상부에 실리카 겔이 놓인 유리 필터를 이용해서 여과하였다. 실리카 겔을 에틸 아세테이트로 세정하고, 수득된 유기층을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 7 : 1, 이어서 4 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(195 g, 수율: 89%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 5.04(2H, s), 6.57-6.62(1H, m), 6.73(1H, dd, J = 2.8 Hz, 10.0 Hz), 7.31-7.43(5H, m), 7.55-7.60(1H, m).

[제조예 1-2-6]

메틸 (2S)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로파노에이트

아연 분말(51.6 g, 789 mmol)을 1 N 염화수소산(100 mL)에 첨가하고, 생성 혼합물을 초음파 분쇄한 뒤 방치하고, 이어서 여기에서 상청액을 제거하였다. 상기 절차를 2 회 반복하였다. 물(300 mL)을 생성 아연 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 교반한 뒤 방치하고, 이어서 여기에서 상청액을 제거하였다. 상기 절차를 3 회 반복하였다. 아세톤(300 mL)을 생성 산물에 첨가하고, 혼합물을 교반한 뒤 방치하고, 여기에서 상청액을 제거한 뒤 디에틸 에테르(300 mL)를 용액에 첨가하고, 생성 용액을 교반한 뒤 방치하고, 여기에서 상청액을 제거한 뒤 잔류물을 감압 하에 건조하여 활성화된 아연을 얻었다. 활성화된 아연에 DMF(120 mL) 및 요오드(3.36 g, 13.2 mmol)를 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 45 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 제조예 1-2-3에 기재된 DMF(500 mL) 중 메틸 (2R)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-요오도프로파노에이트(120 g, 266 mmol) 용액을 30 분에 걸쳐 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 40 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 제조예 1-2-5에 기재된 4-(벤질옥시)-2-플루오로-1-요오도벤젠(104 g, 318 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)팔라듐(0)(6.00 g, 6.55 mmol) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디메톡시바이페닐(5.40 g, 13.2 mmol)을 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 20 시간 40 분 동안 교반하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여액을 분획화하고, 수성층을 에틸 아세테이트로 3 회 더 추출하였다. 합한 유기층을 물 및 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시킨 뒤, 디에틸 에테르(1.00 L) 및 헵탄(1.00 L)을 생성 잔류물에 첨가하고, 이어서 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 디에틸 에테르(500 mL) 및 헵탄(500 mL)을 여과된 고체에 첨가하고, 침전물을 여과에 의해 수집하여 표제 화합물을 얻었다(107 g, 수율: 77%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.03-3.20(2H, m), 3.75(3H, s), 4.20(1H, t, J = 6.6 Hz), 4.25-4.38(1H, m), 4.43(1H, dd, J = 7.1 Hz, 10.4 Hz), 4.58-4.70(1H, m), 4.99(2H, s), 5.33(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.63-6.72(2H, m), 6.94-7.03(1H, m), 7.26-7.48(9H, m), 7.52-7.62(2H, m), 7.77(2H, d, J = 7.7 Hz).

[제조예 1-2-7]

(2S)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로판산

제조예 1-2-6에 기재된 메틸 (2S)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로파노에이트(60.0 g, 114 mmol) 및 에틸 아세테이트(1331 mL)의 혼합 용액에 리튬 요오다이드(92.0 g, 685 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 환류 하에 23 시간 45 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 생성 고체에 1 N 염화수소산(228 mL)을 첨가하였다. 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 얻었다(42.2 g, 수율: 72%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.05-3.15(1H, m), 3.18-3.30(1H, m), 4.15-4.23(1H, m), 4.25-4.50(2H, m), 4.60-4.70(1H, m), 4.99(2H, m), 5.29(1H, d, J = 7.6 Hz), 6.64-6.73(2H, m), 7.06(1H, dd, J = 8.0 Hz, 9.6 Hz), 7.24-7.44(9H, m), 7.55(2H, dd, J = 6.4 Hz, 6.4 Hz), 7.76(2H, d, J = 7.6 Hz).

ESI-MS(m/z): 512.30 [M+H]⁺.

[제조예 1-3-1]

1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-4-에틸피페라진

1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(10.1 g, 42.6 mmol), THF(100 mL) 및 아세트산(5.00 mL)의 혼합 용액에 에틸피페라진(6.48 mL, 51.1 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 45 분 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(18.1 g, 85.1 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가한 뒤 실온에서 15 시간 동안 교반하였다. 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 반응 혼합물에 첨가한 뒤, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 포화 염수로 세정하고, 이어서 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트-메탄올)에 의해 정제한 뒤 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 2 : 1 및 1 : 1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(12.7 g, 수율: 89%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.07(3H, t, J = 7.6 Hz), 2.20-2.65(10H, m), 2.85-2.93(2H, m), 2.95-3.05(1H, m), 3.35-3.45(2H, m), 4.41(1H, s), 7.15-7.20(2H, m), 7.23-7.29(4H, m), 7.37-7.42(4H, m).

[제조예 1-3-2]

1-(아제티딘-3-일)-4-에틸피페라진

제조예 1-3-1에 기재된 1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-4-에틸피페라진(12.7 g, 37.9 mmol) 및 메탄올(50 mL)의 혼합 용액에 팔라듐 하이드록사이드-카본(5.00 g)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 그리고 0.35 MPa 내지 0.40 MPa에서 10 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기로 퍼징하고 이어서 셀라이트를 이용해서 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 벤질벤젠과의 혼합물 형태로 얻었다(12.4 g). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.09(3H, t, J = 7.2 Hz), 2.10-2.80(10H, m), 3.20-3.30(1H, m), 3.53-3.60(2H, m), 3.60-3.70(2H, m).

[실시예 2]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 2-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(30.0 mg, 0.0537 mmol) 및 NMP(2.0 mL)의 혼합 용액에 제조예 1-3-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-에틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(45.0 mg)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물에 140℃에서 8 시간 동안 마이크로파를 조사하였다. 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제한 뒤 NH 실리카 겔 박층 크로마토그래피(에틸 아세테이트)에 의해 추가 정제하였다. 생성 산물을 실리카 겔 박층 크로마토그래피(메탄올)에 의해 추가 정제한 뒤 NH 실리카 겔을 이용해서 여과하여 표제 화합물을 얻었다(14.0 mg, 수율: 37%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.02(3H, t, J = 7.1 Hz), 2.30-2.70(10H, m), 3.05-3.15(1H, m), 3.15-3.30(1H, m), 3.43(2H, d, J = 17.2 Hz), 3.50-3.70(5H, m), 3.75-3.83(1H, m), 3.83-3.90(1H, m), 4.00-4.10(2H, m), 4.15-4.30(2H, m), 4.35-4.45(1H, m), 5.00(1H, d, J = 13.4 Hz), 5.03-5.10(1H, m), 5.15-5.30(3H, m), 5.60-5.80(1H, m), 6.30(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.39(2H, d, J = 8.3 Hz), 6.56(2H, d, J = 8.4 Hz), 6.70-6.78(2H, m), 7.18-7.24(2H, m), 7.26-7.32(1H, m), 7.34-7.40(2H, m), 7.44-7.52(1H, m).

ESI-MS(m/z): 708.67 [M+H]⁺.

[제조예 2-1]

9H-플루오렌-9-일메틸 N-((1S)-2-(4-(3차-부톡시)페닐)-1-((2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)카바모일)에틸)카바메이트

제조예 1-1-1에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민(514 mg, 2.12 mmol) 및 DMF(10 mL)의 혼합 용액에 (2S)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로판산의 상업적으로 이용 가능한 제품(886 mg, 2.12 mmol), 트리에틸아민(355 ㎕, 2.54 mmol) 및 HATU(968 mg, 2.54 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 45 분 동안 교반하였다. 물을 반응 혼합물에 첨가한 뒤 생성 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 포화 염수로 세정하고, 이어서 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 1 : 1, 이어서 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(1.37 g, 수율: 94%).

ESI-MS(m/z): 684.58 [M+H]⁺.

[제조예 2-2]

(2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

제조예 2-1에 기재된 9H-플루오렌-9-일메틸 N-((1S)-2-(4-(3차-부톡시)페닐)-1-((2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)카바모일)에틸)카바메이트(1.37 g, 2.00 mmol) 및 디클로로메탄(7.0 mL)의 혼합 용액에 피페리딘(7.0 mL)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(881 mg, 수율: 95%).

ESI-MS(m/z): 462.49 [M+H]⁺.

[제조예 2-3]

(2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

제조예 2-2에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(881 mg, 1.91 mmol) 및 DMF(10.0 mL)의 혼합 용액에 국제 공개 번호 2009148192에 기재된 2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트산(503 mg, 1.91 mmol), 트리에틸아민(532 ㎕, 3.82 mmol) 및 HATU(871 mg, 2.29 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 35 분 동안 교반하였다. 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 포화 염수로 세정하고, 이어서 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(1.22 g, 수율: 91%).

ESI-MS(m/z): 707.67 [M+H]⁺.

[제조예 2-4]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 2-3에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(1.22 g, 1.73 mmol) 및 포름산(26 mL)의 혼합 용액을 70℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 물을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물에 이어 포화 염수로 세정하고, 이어서 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(865 mg, 수율: 90%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.30-3.42(4H, m), 3.42-3.64(3H, m), 3.81(1H, dd, J = 10.8 Hz, 11.2 Hz), 4.30-4.38(1H, m), 4.40-4.48(1H, m), 4.56-4.68(2H, m), 5.16-5.24(2H, m), 5.30(1H, dd, J = 4.8 Hz, 5.6 Hz), 5.35-5.44(1H, m), 5.54-5.74(2H, m), 6.66(2H, d, J = 8.0 Hz), 6.70-6.76(1H, m), 6.82-6.88(1H, m), 6.96-7.03(2H, m), 7.06-7.12(1H, m), 7.22-7.34(2H, m), 7.35-7.42(2H, m), 7.74-7.83(1H, m).

ESI-MS(m/z): 559.41 [M+H]⁺.

[실시예 3]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 1-1-6에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(40.0 mg, 0.0694 mmol) 및 NMP(2.0 mL)의 혼합 용액에 제조예 3-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-메틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(112 mg)을 실온에서 첨가하고, 생성 혼합물에 140℃에서 12 시간 동안 마이크로파를 조사하였다. 혼합물을 실온으로 냉각한 뒤, 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 물에 이어 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하고 이어서 NH 실리카 겔 박층 크로마토그래피(에틸 아세테이트)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(26.0 mg, 수율: 53%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.20-2.60(11H, m), 3.10-3.25(2H, m), 3.43(1H, d, J = 17.1 Hz), 3.45-3.75(7H, m), 3.86(1H, dd, J = 7.3 Hz, 9.9 Hz), 4.01(2H, dd, J = 3.5 Hz, 6.4 Hz), 4.15-4.30(2H, m), 4.48(1H, dd, J = 6.8 Hz, 15.2 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.8 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.53(1H, dd, J = 4.0 Hz, 10.8 Hz), 5.65-5.80(1H, m), 5.85(1H, dd, J = 2.1 Hz, 8.5 Hz), 6.24(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.41(1H, dd, J = 2.2 Hz, 11.6 Hz), 6.47(1H, dd, J = 8.4 Hz, 8.8 Hz), 6.69(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.78-6.86(1H, m), 7.20-7.32(3H, m), 7.34-7.47(3H, m).

ESI-MS(m/z): 712.57 [M+H]⁺.

[제조예 3-1]

1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-4-메틸피페라진

1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(1.00 g, 4.21 mmol), THF(20 mL) 및 아세트산(1.00 mL)의 혼합 용액에 메틸피페라진(561 ㎕, 5.05 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 15 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(1.79 g, 8.42 mmol)를 실온에서 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 2 시간 15 분 동안 교반하였다. 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 포화 염수로 세정하고, 이어서 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트-메탄올)에 의해 정제하고 이어서 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 1 : 1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(1.21 g, 수율: 89%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.20-2.55(11H, m), 2.85-2.95(2H, m), 2.95-3.05(1H, m), 3.35-3.45(2H, m), 4.41(1H, s), 7.15-7.20(2H, m), 7.23-7.30(4H, m), 7.37-7.43(4H, m).

ESI-MS(m/z): 322.29 [M+H]⁺.

[제조예 3-2]

1-(아제티딘-3-일)-4-메틸피페라진

제조예 3-1에 기재된 1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-4-메틸피페라진(1.21 g, 3.75 mmol) 및 메탄올(20 mL)의 혼합 용액에 팔라듐 하이드록사이드-카본(500 mg)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 그리고 0.35 MPa 내지 0.40 MPa에서 4 시간 45 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기로 퍼징하고, 이어서 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 벤질벤젠과의 혼합물 형태로 얻었다(1.00 g). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.25-2.60(11H, m), 3.20-3.30(1H, m), 3.50-3.70(4H, m).

ESI-MS(m/z): 155.96 [M+H]⁺.

[실시예 4]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 1-1-6에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(4.00 g, 6.94 mmol) 및 피리딘(100 mL)의 혼합 용액에 제조예 4-3에 기재된 (2S)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진(2.35 g, 13.9 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 6 시간 50 분 동안 환류 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 이어서 감압 하에 농축하였다. 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올)에 의해 정제하고, 이어서 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(2.93 g, 수율: 58%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.03(3H, d, J = 6.2 Hz), 1.76(2H, t, J = 10.8 Hz), 1.90-2.00(1H, m), 2.10-2.35(6H, m), 2.73(1H, d, J = 11.0 Hz), 3.08-3.20(2H, m), 3.40-3.50(2H, m), 3.50-3.62(3H, m), 3.62-3.75(3H, m), 3.85(1H, dd, J = 7.0 Hz, 9.9 Hz), 3.95-4.10(2H, m), 4.18-4.26(2H, m), 4.50(1H, dd, J = 7.1 Hz, 15.6 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.5 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.55(1H, dd, J = 4.0 Hz, 10.6 Hz), 5.70-5.80(1H, m), 5.84(1H, dd, J = 2.2 Hz, 8.4 Hz), 6.24(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.40(1H, dd, J = 2.2 Hz, 11.7 Hz), 6.47(1H, dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz), 6.69(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.83(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.8 Hz), 7.22(2H, d, J = 7.3 Hz), 7.24-7.32(1H, m), 7.34-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 726.60 [M+H]⁺.

[제조예 4-1]

3차-부틸 (2S)-4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트

공지되어 있고 상업적으로 이용 가능한 제품인 벤질 3-옥소아제티딘-1-카복실레이트(30.0 g, 146 mmol), THF(100 mL) 및 아세트산(60 mL)의 혼합 용액에 3차-부틸 (2S)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트의 상업적으로 이용 가능한 제품(32.2 g, 161 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(46.5 g, 219 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 1 시간 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 0℃에서 첨가하였다. 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 5 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(36.7 g, 수율: 64%).

ESI-MS(m/z): 390.31 [M+H]⁺.

[제조예 4-2]

벤질 3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트

제조예 4-1에 기재된 3차-부틸 (2S)-4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트(36.7 g, 94.2 mmol) 및 디클로로메탄(20 mL)의 혼합 용액에 TFA(30 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 35 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 수성 포름알데하이드 용액(70.1 mL, 942 mmol)을 생성 잔류물 및 THF(100 mL)의 혼합 용액에 실온에서 첨가한 뒤 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(29.9 g, 141 mmol)를 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 12 시간 45 분 동안 교반하였다. 수성 포름알데하이드 용액(10.0 mL) 및 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(17.5 g, 82.6 mmol)를 반응 혼합물에 실온에서 추가 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 45 분 동안 교반하였다. 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 0℃에서 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트에 이어 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 3 : 1)에 의해 정제하고 이어서 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(28.6 g, 수율: 정량적).

ESI-MS(m/z): 304.13 [M+H]⁺.

[제조예 4-3]

(2S)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진

제조예 4-2에 기재된 벤질 3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트(28.6 g, 94.3 mmol) 및 메탄올(150 mL)의 혼합 용액에 10% 팔라듐-카본(50% 수성, 10.0 g)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 그리고 0.35 MPa 내지 0.40 MPa에서 1 시간 45 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기로 퍼징하고, 이어서 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 얻었다(21.2 g, 수율: 정량적). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.06(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.70-1.82(2H, m), 2.05-2.25(2H, m), 2.25-2.50(4H, m), 2.58(1H, d, J = 10.6 Hz), 2.67(1H, dd, J = 2.2 Hz, 10.6 Hz), 2.75-2.85(1H, m), 3.25-3.38(1H, m), 3.70-3.80(4H, m).

[실시예 5]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 1-1-6에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(20.0 mg, 0.0347 mmol) 및 NMP(2.0 mL)의 혼합 용액에 제조예 5-3에 기재된 (2R)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(59.0 mg)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물에 140℃에서 12 시간 동안 마이크로파를 조사하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 이어서 물을 여기에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 물에 이어 포화 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하고, 이어서 NH 실리카 겔 박층 크로마토그래피(에틸 아세테이트)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물을 얻었다(10.8 mg, 수율: 43%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.884(3H, d, J = 6.1 Hz), 1.60-1.90(1H, m), 2.13-2.25(2H, m), 2.29(3H, s), 2.33-2.42(1H, m), 2.43-2.54(1H, m), 2.75-2.92(2H, m), 3.08-3.24(2H, m), 3.25-3.35(1H, m), 3.40(1H, d, J = 17.1 Hz), 3.45-3.77(7H, m), 3.83-3.93(1H, m), 4.00(2H, d, J = 7.2 Hz), 4.16-4.25(1H, m), 4.32(1H, dd, J = 5.6 Hz, 14.4 Hz), 4.47(1H, dd, J = 7.1 Hz, 15.3 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.8 Hz), 5.16-5.28(2H, m), 5.56-5.66(1H, m), 5.66-5.80(1H, m), 5.82-5.91(1H, m), 6.24(1H, d, J = 8.3 Hz), 6.39(1H, d, J = 11.4 Hz), 6.47-6.56(1H, m), 6.67(1H, d, J = 7.0 Hz), 6.76-6.81(1H, m), 7.20-7.33(3H, m), 7.33-7.47(3H, m).

ESI-MS(m/z): 726.71 [M+H]⁺.

[제조예 5-1]

3차-부틸 (2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트

1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(300 mg, 1.26 mmol), THF(6.0 mL) 및 아세트산(500 ㎕)의 혼합 용액에 3차-부틸 (2R)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트의 상업적으로 이용 가능한 제품(304 mg, 1.51 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 25 분 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(536 mg, 2.52 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 18 시간 35 분 동안 교반하였다. 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 포화 염수로 세정한 뒤 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 5 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(476 mg, 수율: 90%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.20(3H, d, J = 6.8 Hz), 1.44(9H, s), 1.77(1H, td, J = 3.4 Hz, 11.7 Hz), 1.96(1H, dd, J = 4.0 Hz, 11.2 Hz), 2.40(1H, d, J = 11.0 Hz), 2.56(1H, d, J = 11.2 Hz), 2.78(1H, dd, J = 6.8 Hz, 6.8 Hz), 2.83-2.95(2H, m), 2.98-3.05(1H, m), 3.39(2H, dd, J = 5.6 Hz, 6.4 Hz), 3.78(1H, d, J = 12.8 Hz), 4.12-4.22(1H, m), 4.38(1H, s), 7.15-7.21(2H, m), 7.24-7.30(4H, m), 7.41(4H, d, J = 7.2 Hz).

[제조예 5-2]

(2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진

제조예 5-1에 기재된 3차-부틸 (2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트(476 mg, 1.13 mmol) 및 THF(10.0 mL)의 혼합 용액에 리튬 알루미늄 하이드라이드(171 mg, 4.52 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 생성 혼합물을 환류 하에 1 시간 55 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 물(171 ㎕) 및 5 N 수성 나트륨 하이드록사이드 용액(171 ㎕)을 여기에 첨가하고, 물(513 ㎕)을 여기에 추가로 첨가하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 이용하여 여과한 뒤 에틸 아세테이트로 세정하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 2 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(342 mg, 수율: 90%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.01(3H, d, J = 6.0 Hz), 1.67(1H, dd, J = 10.4 Hz, 10.8 Hz), 2.00-2.10(2H, m), 2.20-2.33(4H, m), 2.54(1H, d, J = 10.8 Hz), 2.63(1H, d, J = 12.3 Hz), 2.75(1H, d, J = 11.6 Hz), 2.87-3.00(3H, m), 3.35-3.42(2H, m), 4.14(1H, s), 7.15-7.20(2H, m), 7.23-7.29(4H, m), 7.37-7.42(4H, m).

[제조예 5-3]

(2R)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진

제조예 5-2에 기재된 (2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진(342 mg, 1.02 mmol) 및 메탄올(10 mL)의 혼합 용액에 팔라듐 하이드록사이드-카본(200 mg)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 그리고 0.35 MPa 내지 0.40 MPa에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기로 퍼징하고, 이어서 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물 및 벤질벤젠의 혼합물(287 mg)을 얻었다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.06(3H, d, J = 6.0 Hz), 1.65-1.80(2H, m), 1.90-2.20(2H, m), 2.25-2.35(4H, m), 2.58(1H, d, J = 10.6 Hz), 2.67(1H, d, J = 9.2 Hz), 2.80(1H, d, J = 11.3 Hz), 3.22-3.30(1H, m), 3.60-3.75(4H, m).

[실시예 6]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

제조예 2-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(3.68 g, 6.59 mmol) 및 피리딘(20 mL)의 혼합 용액에 제조예 6-3에 기재된 (2S)-1-(아제티딘-3-일)-2,4-디메틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(4.45 g)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 5 시간 45 분 동안 환류 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 이어서 감압 하에 농축하였다. 생성 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1, 이어서 메탄올)에 의해 정제하고, 이어서 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 추가 정제하여 고체 물질을 얻었다. 에틸 아세테이트, 디에틸 에테르 및 헵탄을 고체 물질에 첨가하고, 침전물을 여과에 의해 수집하여 표제 화합물을 얻었다(3.44 g, 수율: 74%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.07(3H, d, J = 6.2 Hz), 1.50-1.70(1H, m), 1.95-2.10(2H, m), 2.18(3H, s), 2.25-2.40(2H, m), 2.59(1H, d, J = 11.3 Hz), 3.10(1H, dd, J = 4.8 Hz, 13.9 Hz), 3.25-3.50(4H, m), 3.52-3.75(6H, m), 3.85-3.92(1H, m), 4.10-4.26(4H, m), 4.37(1H, dd, J = 6.6 Hz, 15.4 Hz), 4.99(1H, d, J = 13.1 Hz), 5.08-5.15(1H, m), 5.16-5.30(3H, m), 5.68-5.80(1H, m), 6.33(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.43(2H, d, J = 8.4 Hz), 6.55(2H, d, J = 8.1 Hz), 6.69(1H, dd, J = 6.0 Hz, J = 6.4 Hz), 6.78(1H, d, J = 7.3 Hz), 7.19(2H, d, J = 7.0 Hz), 7.24-7.32(1H, m), 7.34-7.40(2H, m), 7.46-7.52(1H, m).

ESI-MS(m/z): 708.56 [M+H]⁺.

[제조예 6-1]

3차-부틸 (3S)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트

1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(300 mg, 1.26 mmol), THF(6.0 mL) 및 아세트산(500 ㎕)의 혼합 용액에 3차-부틸 (3S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트의 상업적으로 이용 가능한 제품(304 mg, 1.51 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 1 시간 40 분 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(536 mg, 2.52 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 혼합물을 실온에서 13 시간 45 분 동안 교반하였다. 나트륨 수소 카보네이트 및 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 포화 염수로 세정하고 이어서 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 5 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(493 mg, 수율: 93%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.89(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.44(9H, s), 1.90-2.05(1H, m), 2.20-2.35(1H, m), 2.54(1H, d, J = 10.6 Hz), 2.65-3.00(4H, m), 3.08-3.23(2H, m), 3.35-3.42(1H, m), 3.43-3.52(1H, m), 3.60-3.70(1H, m), 4.37(1H, s), 7.15-7.22(2H, m), 7.23-7.30(4H, m), 7.36-7.42(4H, m).

[제조예 6-2]

(2S)-1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2,4-디메틸피페라진

제조예 6-1에 기재된 3차-부틸 (3S)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트(493 mg, 1.17 mmol) 및 THF(10.0 mL)의 혼합 용액에 리튬 알루미늄 하이드라이드(178 mg, 4.68 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 5 시간 10 분 동안 환류 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각한 뒤 물(178 ㎕) 및 5 N 수성 나트륨 하이드록사이드 용액(178 ㎕)을 여기에 첨가하고, 물(534 ㎕)을 여기에 추가로 첨가하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 이용하여 여과한 뒤 에틸 아세테이트로 세정하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헵탄 : 에틸 아세테이트 = 2 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(321 mg, 수율: 82%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.90(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.85-2.00(1H, m), 2.03-2.13(1H, m), 2.13-2.40(5H, m), 2.52-2.70(3H, m), 2.84(1H, dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz), 2.94(1H, dd, J = 6.8 Hz, 7.2 Hz), 3.13(1H, dt, J = 6.7 Hz, 13.7 Hz), 3.39(1H, td, J = 2.6 Hz, 6.6 Hz), 3.49(1H, td, J = 2.7 Hz, 6.5 Hz), 4.38(1H, s), 7.15-7.21(2H, m), 7.23-7.30(4H, m), 7.36-7.43(4H, m).

[제조예 6-3]

(2S)-1-(아제티딘-3-일)-2,4-디메틸피페라진

제조예 6-2에 기재된 (2S)-1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2,4-디메틸피페라진(321 mg, 0.957 mmol) 및 메탄올(7.0 mL)의 혼합 용액에 팔라듐 하이드록사이드-카본(150 mg)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 그리고 0.35 MPa 내지 0.40 MPa에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기로 퍼징하고 이어서 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물 및 벤질벤젠의 혼합물(263 mg)을 얻었다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 170.00 [M+H]⁺.

[실시예 7]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(39.0 mg, 수율: 36%)을 제조예 2-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 7-5에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(131 mg, 0.150 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.00(3H, t, J = 7.1 Hz), 2.25-2.72(10H, m), 3.14(1H, dd, J = 5.1 Hz, 13.7 Hz), 3.17-3.25(1H, m), 3.40-3.70(9H, m), 3.80-3.89(2H, m), 4.08(1H, dd, J = 4.5 Hz, 11.1 Hz), 4.18(1H, dd, J = 5.6 Hz, 15.3 Hz), 4.39-4.48(1H, m), 4.95(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.00-5.56(1H, m), 5.15-5.29(3H, m), 5.67-5.79(1H, m), 6.46-6.61(4H, m), 6.67(1H, dd, J = 2.7 Hz, 7.8 Hz), 6.69-6.75(1H, m), 7.12(1H, dd, J = 7.9 Hz, 11.8 Hz), 7.18-7.42(5H, m).

ESI-MS(m/z): 726.53 [M+H]⁺.

[제조예 7-1]

(6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올

(6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올의 상업적으로 이용 가능한 제품(200 mg, 1.24 mmol) 및 NMP(2.00 mL)의 혼합 용액에 제조예 1-3-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-에틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(627 mg) 및 DBU(565 mg, 3.71 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물에 180℃에서 8 시간 동안 마이크로파를 조사하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 뒤 물을 여기에 첨가하고, 생성 용액을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성 잔류물을 NH 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 : 헵탄 = 1 : 4, 이어서 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물의 조정제 산물을 얻었다(402 mg).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.10(3H, t, J = 7.2 Hz), 2.37-2.66(10H, m), 3.26-3.36(1H, m), 4.00-4.08(2H, m), 4.18-4.29(2H, m), 4.56(2H, s), 6.39-6.50(1H, m), 7.05-7.18(1H, m).

[제조예 7-2]

6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드

제조예 7-1에 기재된 (6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올의 조정제 산물(402 mg) 및 디클로로메탄(10.0 mL)의 혼합 용액에 Dess-Martin 퍼요오디난(787 mg, 1.86 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 포화 수성 나트륨 티오설페이트 용액 및 포화 수성 나트륨 수소 카보네이트 용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성 용액을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물의 조정제 산물을 얻었다(362 mg). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[제조예 7-3]

(2,2-디에톡시에틸)((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민

표제 화합물(271 mg, 수율: 53%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 7-2에 기재된 6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드의 조정제 산물(362 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 410.28 [M+H]⁺.

[제조예 7-4]

(2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(118 mg, 수율: 86%)을 제조예 2-1 및 제조예 2-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 7-3에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민(90.0 mg, 0.220 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 629.59 [M+H]⁺.

[제조예 7-5]

(2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(131 mg, 수율: 79%)을 제조예 2-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 7-4에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(118 mg, 0.188 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 874.81 [M+H]⁺.

[실시예 8]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(65.0 mg, 수율: 57%)을 제조예 2-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 8-5에 기재된 (2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(134 mg, 0.156 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.25(3H, s), 2.29-2.78(8H, m), 3.14(1H, dd, J = 5.0 Hz, 13.8 Hz), 3.18-3.25(1H, m), 3.38-3.70(9H, m), 3.78-3.89(2H, m), 4.08(1H, dd, J = 4.3 Hz, 11.3 Hz), 4.20(1H, dd, J = 5.6 Hz, 15.7 Hz), 4.35-4.46(1H, m), 4.95(1H, d, J = 13.9 Hz), 4.99-5.06(1H, m), 5.14-5.29(3H, m), 5.66-5.79(1H, m), 6.47-6.53(2H, m), 6.55-6.61(2H, m), 6.64-6.74(2H, m), 7.13(1H, dd, J = 7.8 Hz, 11.9 Hz), 7.18-7.23(2H, m), 7.28-7.42(3H, m).

ESI-MS(m/z): 712.60 [M+H]⁺.

[제조예 8-1]

(5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메탄올

표제 화합물(267 mg, 수율: 77%)을 제조예 7-1에서와 유사한 절차를 채용하여 (6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올의 상업적으로 이용 가능한 제품(200 mg, 1.24 mmol) 및 제조예 3-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-메틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(450 mg)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.31(3H, s), 2.36-2.63(8H, m), 3.20(1H, m), 3.97-4.07(2H, m), 4.18-4.27(2H, m), 4.56(2H, m), 6.40-6.50(1H, m), 7.06-7.18(1H, m).

[제조예 8-2]

5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-카르브알데하이드

표제 화합물의 조정제 산물(265 mg)을 제조예 7-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 8-1에 기재된 (5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메탄올(267 mg, 0.952 mmol)로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[제조예 8-3]

(2,2-디에톡시에틸)((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)아민

표제 화합물(240 mg, 수율: 64%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 8-2에 기재된 5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-카르브알데하이드의 조정제 산물(265 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 396.24 [M+H]⁺.

[제조예 8-4]

(2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(120 mg, 수율: 정량적)을 제조예 2-1 및 제조예 2-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 8-3에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)아민(80.0 mg, 0.202 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 615.58 [M+H]⁺.

[제조예 8-5]

(2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(134 mg, 수율: 80%)을 제조예 2-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 8-4에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(120 mg, 0.202 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 860.94 [M+H]⁺.

[실시예 9]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-8-((6-(3-(4-(프로판-2-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(28.5 mg, 수율: 37%)을 실시예 2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 2-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(60 mg, 0.107 mmol) 및 제조예 9-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-(프로판-2-일)피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(164 mg)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.94-1.01(6H, m), 2.20-2.80(9H, m), 3.10(1H, dd, J = 13.7 Hz, 5.1 Hz), 3.20(1H, ddd, J = 6.6 Hz, 6.6 Hz, 6.6 Hz), 3.37-3.47(2H, m), 3.50-3.70(5H, m), 3.79(1H, dd, J = 9.8 Hz, 6.6 Hz), 3.88(1H, dd, J = 9.8 Hz, 7.0 Hz), 3.98-4.09(2H, m), 4.14-4.23(2H, m), 4.43(1H, dd, J = 15.2 Hz, 7.0 Hz), 4.99(1H, d, J = 13.3 Hz), 5.05(1H, dd, J = 10.9 Hz, 4.3 Hz), 5.17(1H, dd, J = 4.7 Hz, 3.1 Hz), 5.20-5.23(1H, m), 5.23-5.27(1H, m), 5.66-5.78(1H, m), 6.29(1H, d, J = 7.8 Hz), 6.36-6.43(2H, m), 6.52-6.58(2H, m), 6.69-6.77(2H, m), 7.19-7.23(2H, m), 7.28-7.32(1H, m), 7.34-7.40(2H, m), 7.47(1H, dd, J = 8.4 Hz, 7.2 Hz)

ESI-MS(m/z): 722.59 [M+H]⁺.

[제조예 9-1]

1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-4-(프로판-2-일)피페라진

표제 화합물(800 mg, 수율: 91%)을 제조예 1-3-1에서와 유사한 절차를 채용하여 1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(600 mg, 2.53 mmol) 및 1-(프로판-2-일)피페라진(389 mg, 3.03 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 350.30 [M+H]⁺.

[제조예 9-2]

1-(아제티딘-3-일)-4-(프로판-2-일)피페라진

표제 화합물을 제조예 1-3-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 9-1에 기재된 1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-4-(프로판-2-일)피페라진(550 mg, 1.57 mmol)으로부터 벤질벤젠과의 혼합물(680 mg) 형태로 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 184.03 [M+H]⁺.

[실시예 10]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(15.0 mg, 수율: 33%)을 제조예 1-1-6에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 10-3에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)메틸)-8-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(52.0 mg, 0.0634 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.21(3H, s), 2.22-2.76(8H, m), 3.09-3.21(2H, m), 3.39-3.87(11H, m), 4.08(1H, dd, J = 4.3 Hz, 11.1 Hz), 4.16-4.23(1H, m), 4.50(1H, dd, J = 7.2 Hz, 15.4 Hz), 4.91(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.19-5.29(3H, m), 5.52(1H, dd, J = 4.0 Hz, 10.8 Hz), 5.69-5.81(1H, m), 6.01(1H, dd, J = 2.3 Hz, 8.2 Hz), 6.42-6.54(2H, m), 6.61(1H, dd, J = 2.8 Hz, 7.9 Hz), 6.78-6.86(1H, m), 7.09(1H, dd, J = 7.8 Hz, 11.9 Hz), 7.19-7.42(5H, m).

ESI-MS(m/z): 730.62 [M+H]⁺.

[제조예 10-1]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(63.0 mg, 수율: 24%)을 제조예 1-1-2 및 제조예 1-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 8-3에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)아민(160 mg, 0.405 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 667.66 [M+H]⁺.

[제조예 10-2]

(2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(58.0 mg, 수율: 68%)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 10-1에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(63.0 mg, 0.0945 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 912.93 [M+H]⁺.

[제조예 10-3]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)메틸)-8-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(52.0 mg, 수율: 정량적)을 제조예 1-1-5에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 10-2에 기재된 (2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(58.0 mg, 0.0634 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 820.74 [M+H]⁺.

아래에 기재된 실시예 11 내지 23의 화합물을 아래에 기재된 제조예 12-2-4, 18-3 및 19-3의 화합물 및 상기 기재된 제조예 1-1-6, 1-3-2, 2-4, 3-2, 4-3, 6-3 및 9-2의 화합물의 표 1에서의 하기 언급된 조합을 이용해서 실시예 1에서와 유사한 절차에 의해 합성하였다.

[표 1]

[실시예 11]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-8-((6-(3-(4-(프로판-2-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.97(6H, t, J = 6.6 Hz), 2.10-2.80(9H, m), 3.05-3.25(2H, m), 3.35-3.75(8H, m), 3.87(1H, dd, J = 7.4, 10 Hz), 3.95-4.05(2H, m), 4.14-4.23(2H, m), 4.54(1H, dd, J = 15.6 Hz, 7.4 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.3 Hz), 5.19-5.29(3H, m), 5.52(1H, dd, J = 10.9 Hz, 3.9 Hz), 5.75(1H, m), 5.86(1H, dd, J = 8.2 Hz, 2.3 Hz), 6.25(1H, d, J = 8.2 Hz), 6.41(1H, dd, J = 11.7 Hz, 2.3 Hz), 6.46(1H, dd, J = 8.6 Hz, 8.6 Hz), 6.70(1H, d, J = 7.0 Hz), 6.84(1H, dd, J = 7.0 Hz, 5.9 Hz), 7.21-7.33(3H, m), 7.38(2H, m), 7.43(1H, dd, J = 8.4 Hz, 7.2 Hz).

ESI-MS(m/z): 740.66 [M+H]⁺.

[실시예 12]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-8-((6-(3-(4-(프로판-2-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.93-1.00(6H, m), 2.25-2.75(9H, m), 3.21(1H, ddd, J = 6.5 Hz, 6.5 Hz, 6.5 Hz), 3.27-3.42(3H, m), 3.50-3.86(6H, m), 3.88-4.03(3H, m), 4.03-4.13(1H, m), 4.24(1H, dd, J = 15.6 Hz, 5.5 Hz), 4.55(1H, dd, J = 15.4 Hz, 7.2 Hz), 4.87(1H, m), 5.13-5.28(2H, m), 5.31(1H, dd, J = 4.5 Hz, 4.5 Hz), 5.74(1H, m), 5.89(1H, m), 6.05(2H, d, J = 10.2 Hz), 6.20(1H, d, J = 8.2 Hz), 6.62(1H, d, J = 7.0 Hz), 6.83(1H, dd, J = 6.2 Hz, 6.2 Hz), 7.22-7.32(3H, m), 7.32-7.44(3H, m)

ESI-MS(m/z): 758.67 [M+H]⁺.

[제조예 12-1-1]

5-(벤질옥시)-2-브로모-1,3-디플루오로벤젠

표제 화합물의 조정제 산물(2.68 g)을 제조예 1-2-4에서와 유사한 절차를 채용하여 4-브로모-3,5-디플루오로페놀의 상업적으로 이용 가능한 제품(1.00 g, 4.79 mmol)으로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[제조예 12-1-2]

5-(벤질옥시)-1,3-디플루오로-2-요오도벤젠

표제 화합물의 조정제 산물(1.66 g)을 제조예 1-2-5에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 12-1-1에 기재된 5-(벤질옥시)-2-브로모-1,3-디플루오로벤젠(1.43 g)으로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[제조예 12-1-3]

메틸 (2S)-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로파노에이트

표제 화합물(264 mg, 수율: 22%)을 제조예 1-2-6에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 12-1-2에 기재된 5-(벤질옥시)-1,3-디플루오로-2-요오도벤젠(844 mg, 2.44 mmol) 및 제조예 1-2-3에 기재된 메틸 (2R)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)-3-요오도프로파노에이트(1.15 g, 2.22 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 545.2 [M+H]⁺.

[제조예 12-1-4]

(2S)-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로판산

표제 화합물(80.0 mg, 수율: 31%)을 제조예 1-2-7에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 12-1-3에 기재된 메틸 (2S)-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로파노에이트(264 mg, 0.486 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 531.3 [M+H]⁺.

[제조예 12-2-1]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(1.64 g, 수율: 91%)을 제조예 1-1-2 및 제조예 1-1-3에서와 유사한 절차를 채용해서 제조예 1-1-1에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민(821 mg, 3.39 mmol) 및 제조예 12-1-4에 기재된 (2S)-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-2-(((9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐)아미노)프로판산(1.67 g, 3.39 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 532.46 [M+H]⁺.

[제조예 12-2-2]

(2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(1.51 g, 수율: 63%)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 12-2-1에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(1.64 g, 3.08 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 777.61 [M+H]⁺.

[제조예 12-2-3]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(1.08 g, 수율: 81%)을 제조예 1-1-5에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 12-2-2에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(1.51 g, 1.95 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.20-3.30(2H, m), 3.35-3.50(2H, m), 3.51-3.60(2H, m), 3.61-3.69(1H, m), 3.93(1H, dd, J = 11.2 Hz, 11.6 Hz), 4.36-4.56(3H, m), 4.76(1H, d, J = 15.0 Hz), 4.94(2H, d, J = 2.4 Hz), 5.17-5.26(2H, m), 5.45(1H, dd, J = 4.9 Hz, 9.0 Hz), 5.64-5.76(1H, m), 6.16(1H, dd, J = 4.0 Hz, 11.0 Hz), 6.45(2H, d, J = 9.5 Hz), 6.76(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.0 Hz), 6.85(1H, dd, J = 2.4 Hz, 8.2 Hz), 7.20(1H, dd, J = 2.4 Hz, 7.5 Hz), 7.24-7.33(3H, m), 7.33-7.42(7H, m), 7.77(1H, dd, J = 8.0 Hz, 8.0 Hz).

[제조예 12-2-4]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(755 mg, 수율: 80%)을 제조예 1-1-6에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 12-2-3에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((4-(벤질옥시)-2,6-디플루오로페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(1.08 g, 1.58 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.20-3.30(1H, m), 3.40-3.70(5H, m), 3.97(1H, dd, J = 10.4 Hz, 12.0 Hz), 4.35-4.55(3H, m), 4.84(1H, d, J = 14.9 Hz), 5.18-5.28(2H, m), 5.45(1H, dd, J = 4.6 Hz, 9.0 Hz), 5.65-5.75(1H, m), 6.14-6.26(3H, m), 6.76(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.4 Hz), 6.82-6.88(1H, m), 7.18-7.24(1H, m), 7.24-7.34(3H, m), 7.34-7.42(2H, m), 7.76-7.90(2H, m).

[실시예 13]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.01(3H, t, J = 7.1 Hz), 2.25-2.70(10H, m), 3.18-3.28(1H, m), 3.35-3.50(3H, m), 3.50-3.80(6H, m), 3.85-3.92(1H, m), 3.92-4.05(2H, m), 4.18-4.28(2H, m), 4.54(1H, dd, J = 6.8 Hz, 15.9 Hz), 5.01(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.70-5.80(2H, m), 6.00(2H, d, J = 9.5 Hz), 6.22(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.67(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.85(1H, dd, J = 5.2 Hz, 7.2 Hz), 7.20-7.32(3H, m), 7.34-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 744.60 [M+H]⁺.

[실시예 14]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.18-2.30(5H, m), 2.30-2.60(6H, m), 3.18-3.25(1H, m), 3.30-3.45(3H, m), 3.50-3.80(6H, m), 3.85-3.95(1H, m), 3.95-4.03(2H, m), 4.18-4.28(2H, m), 4.51(1H, dd, J = 7.1 Hz, 15.9 Hz), 5.06(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.70-5.80(2H, m), 6.00(2H, d, J = 9.9 Hz), 6.22(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.67(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.84(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.4 Hz), 7.20-7.32(3H, m), 7.34-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 730.62 [M+H]⁺.

[실시예 15]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.05(3H, d, J = 6.0 Hz), 1.95-2.10(2H, m), 2.10-2.35(5H, m), 2.40-2.65(1H, m), 3.10-3.20(1H, m), 3.30-3.50(3H, m), 3.50-3.75(8H, m), 3.88(1H, dd, J = 7.2 Hz, 9.6 Hz), 4.05(1H, dd, J = 6.8 Hz, 6.8 Hz), 4.13(1H, dd, J = 6.8 Hz, 7.2 Hz), 4.18-4.25(2H, m), 4.49(1H, dd, J = 7.0 Hz, 15.7 Hz), 4.94(1H, d, J = 13.5 Hz), 5.18-5.30(3H, m), 5.56(1H, dd, J = 4.2 Hz, 10.4 Hz), 5.70-5.80(1H, m), 5.90(1H, dd, J = 2.4 Hz, 8.2 Hz), 6.27(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.40-6.48(2H, m), 6.74(1H, d, J = 7.2 Hz), 6.81(1H, dd, J = 5.6 Hz, 7.2 Hz), 7.22(2H, d, J = 7.2 Hz), 7.24-7.32(1H, m), 7.38(2H, dd, J = 7.2 Hz, 8.0 Hz), 7.45(1H, dd, J = 8.0 Hz, 8.0 Hz).

ESI-MS(m/z): 726.67 [M+H]⁺.

[실시예 16]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.04(3H, d, J = 6.2 Hz), 1.60-1.85(2H, m), 1.90-2.00(1H, m), 2.15-2.30(6H, m), 2.74(1H, d, J = 11.7 Hz), 3.10-3.20(1H, m), 3.35-3.50(3H, m), 3.50-3.80(6H, m), 3.89(1H, dd, J = 7.1 Hz, 10.1 Hz), 3.98(2H, dd, J = 3.1 Hz, 6.4 Hz), 4.24(2H, dd, J = 4.6 Hz, 14.8 Hz), 4.52(1H, dd, J = 7.1 Hz, 16.3 Hz), 5.00(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.75-5.81(2H, m), 5.99(2H, d, J = 9.5 Hz), 6.22(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.67(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.85(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.4 Hz), 7.20-7.32(3H, m), 7.34-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 744.69 [M+H]⁺.

[실시예 17]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((2S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.05(3H, d, J = 6.6 Hz), 1.50-1.90(2H, m), 1.93-2.05(1H, m), 2.10-2.25(5H, m), 2.50-2.65(2H, m), 3.30-3.50(4H, m), 3.50-3.78(6H, m), 3.91(1H, dd, J = 7.1 Hz, 9.7 Hz), 4.02-4.12(2H, m), 4.18-4.30(2H, m), 4.52(1H, dd, J = 7.3 Hz, 15.7 Hz), 5.00(1H, d, J = 13.5 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.70-5.81(2H, m), 6.03(2H, d, J = 9.5 Hz), 6.25(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.71(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.83(1H, dd, J = 6.4 Hz, 6.4 Hz), 7.20-7.32(3H, m), 7.34-7.48(3H, m).

ESI-MS(m/z): 744.65 [M+H]⁺.

[실시예 18]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.948(3H, t, J = 6.8 Hz), 1.05(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.70-2.00(2H, m), 2.27-2.60(4H, m), 2.70-2.90(2H, m), 3.05-3.22(2H, m), 3.30-3.70(8H, m), 3.70-3.90(2H, m), 4.00-4.10(2H, m), 4.19(2H, d, J = 10.4 Hz), 4.35-4.50(1H, m), 4.99(1H, d, J = 13.6 Hz), 5.03-5.12(1H, m), 5.13-5.30(3H, m), 5.68-5.80(1H, m), 6.29(1H, d, J = 8.8 Hz), 6.39(2H, d, J = 8.0 Hz), 6.56(2H, d, J = 7.6 Hz), 6.68-6.78(2H, m), 7.14-7.32(3H, m), 7.32-7.42(2H, m), 7.44-7.50(1H, m).

ESI-MS(m/z): 722.72 [M+H]⁺.

[제조예 18-1]

3차-부틸 (2S)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트

표제 화합물(451 mg, 85%)을 제조예 6-1에서와 유사한 절차를 채용하여 1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(300 mg, 1.26 mmol) 및 3차-부틸 (2S)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트의 상업적으로 이용 가능한 제품(304 mg, 1.51 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.20(3H, d, J = 6.8 Hz), 1.44(9H, s), 1.73-1.82(1H, m), 1.96(1H, dd, J = 4.0 Hz, 11.0 Hz), 2.40(1H, d, J = 11.0 Hz), 2.56(1H, d, J = 11.0 Hz), 2.78(1H, dd, J = 6.4 Hz, 7.6 Hz), 2.83-2.95(2H, m), 3.01(1H, td, J = 3.3 Hz, 12.8 Hz), 3.35-3.43(2H, m), 3.78(1H, d, J = 12.8 Hz), 4.13-4.22(1H, m), 4.38(1H, s), 7.15-7.21(2H, m), 7.23-7.30(4H, m), 7.38-7.43(4H, m).

[제조예 18-2]

(2S)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-1-에틸-2-메틸피페라진

표제 화합물(381 mg, 수율: 정량적)을 제조예 4-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 18-1에 기재된 3차-부틸 (2S)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트(451 mg, 1.07 mmol) 및 아세트알데하이드(180 ㎕, 3.21 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.95-1.05(6H,m), 1.73(1H, dd, J = 10.4 Hz, 10.4 Hz), 1.98-2.10(1H, m), 2.30-2.45(3H, m), 2.53(1H, d, J = 11.0 Hz), 2.64(1H, d, J = 11.0 Hz), 2.78-2.98(5H, m), 3.39(2H, dd, J = 5.6 Hz, 7.2 Hz), 4.42(1H, s), 7.18(2H, td, J = 0.80 Hz, 8.0 Hz), 7.23-7.29(4H, m), 7.64(4H, dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz).

[제조예 18-3]

(2S)-4-(아제티딘-3-일)-1-에틸-2-메틸피페라진

표제 화합물을 제조예 6-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 18-2에 기재된 (2S)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-1-에틸-2-메틸피페라진(381 mg, 1.09 mmol)으로부터 벤질벤젠과의 혼합물(288 mg) 형태로 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[실시예 19]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-3-((3R)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.91(3H, d, J = 5.9 Hz), 1.03(3H, t, J = 6.8 Hz), 1.50-1.95(1H, m), 2.13-2.25(1H, m), 2.35-2.55(2H, m), 2.60-2.75(1H, m), 2.80-2.95(3H, m), 3.05-3.25(3H, m), 3.35-3.48(2H, m), 3.50-3.60(5H, m), 3.75(1H, dd, J = 6.4 Hz, 9.2 Hz), 3.89(1H, dd, J = 7.0 Hz, 9.5 Hz), 4.03(2H, d, J = 6.6 Hz), 4.19(1H, dd, J = 4.2 Hz, 11.2 Hz), 4.25-4.42(2H, m), 4.98(1H, d, J = 13.5 Hz), 5.15-5.30(4H, m), 5.65-5.78(1H, m), 6.28(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.39(2H, d, J = 8.4 Hz), 6.59(2H, d, J = 8.4 Hz), 6.68-6.76(2H, m), 7.20-7.33(3H, m), 7.37(2H, dd, J = 7.2 Hz, 8.0 Hz), 7.46(1H, dd, J = 7.6 Hz, 8.0 Hz).

ESI-MS(m/z): 722.68 [M+H]⁺.

[제조예 19-1]

표제 화합물(491 mg, 수율: 92%)을 제조예 6-1에서와 유사한 절차를 채용하여 1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(300 mg, 1.26 mmol) 및 3차-부틸 (2R)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트의 상업적으로 이용 가능한 제품(304 mg, 1.51 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.20(3H, d, J = 6.8 Hz), 1.44(9H, s), 1.77(1H, td, J = 3.5 Hz, 11.6 Hz), 1.96(1H, dd, J = 4.0 Hz, 11.3 Hz), 2.40(1H, d, J = 11.3 Hz), 2.56(1H, d, J = 11.0 Hz), 2.78(1H, dd, J = 6.4 Hz, 6.8 Hz), 2.83-2.95(2H, m), 3.01(1H, td, J = 2.9 Hz, 12.6 Hz), 3.35-3.45(2H, m), 3.78(1H, d, J = 13.5 Hz), 4.10-4.22(1H, m), 4.38(1H, s), 7.18(2H, dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz), 7.23-7.30(4H, m), 7.41(4H, d, J = 7.2 Hz).

[제조예 19-2]

(2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-1-에틸-2-메틸피페라진

표제 화합물(410 mg, 수율: 정량적)을 제조예 4-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 19-1에 기재된 3차-부틸 (2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트(491 mg, 1.16 mmol) 및 아세트알데하이드(196 ㎕, 3.48 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.95-1.05(6H, m), 1.73(1H, dd, J = 10.0 Hz, 10.4 Hz), 1.98-2.10(1H, m), 2.28-2.48(3H, m), 2.53(1H, d, J = 10.3 Hz), 2.64(1H, d, J = 10.3 Hz), 2.78-3.00(5H, m), 3.39(2H, dd, J = 5.6 Hz, 6.8 Hz), 4.42(1H, s), 7.18(2H, dd, J = 6.8 Hz, 7.2 Hz), 7.23-7.29(4H, m), 7.37-7.42(4H, m).

[제조예 19-3]

(2R)-4-(아제티딘-3-일)-1-에틸-2-메틸피페라진

표제 화합물을 제조예 6-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 19-2에 기재된 (2R)-4-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-1-에틸-2-메틸피페라진(410 mg, 1.17 mmol)으로부터 벤질벤젠과의 혼합물(343 mg) 형태로 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[실시예 20]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.926(3H, t, J = 7.2 Hz), 1.04(3H, d, J = 5.9 Hz), 1.70-1.85(1H, m), 1.88-1.98(1H, m), 2.25-2.40(3H, m), 2.45-2.55(1H, m), 2.70-2.85(2H, m), 3.10-3.20(2H, m), 3.38-3.75(9H, m), 3.80-3.90(1H, m), 3.95-4.05(2H, m), 4.15-4.25(2H, m), 4.53(1H, dd, J = 7.1 Hz, 15.9 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.5 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.50-5.60(1H, m), 5.65-5.80(1H, m), 5.80-5.90(1H, m), 6.24(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.40(1H, dd, J = 2.8 Hz, 11.6 Hz), 6.47(1H, dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz), 6.69(1H, d, J = 7.2 Hz), 6.84(1H, dd, J = 5.6 Hz, 6.4 Hz), 7.20-7.32(3H, m), 7.34-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 740.70 [M+H]⁺.

[실시예 21]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.89(3H, d, J = 8.0 Hz), 1.03(3H, t, J = 7.3 Hz), 1.50-1.90(1H, m), 2.15-2.25(1H, m), 2.35-2.50(2H, m), 2.60-2.70(1H, m), 2.80-2.95(3H, m), 3.10-3.30(3H, m), 3.35-3.75(8H, m), 3.88(1H, dd, J = 7.1 Hz, 10.1 Hz), 4.00(2H, dd, J = 3.8 Hz, 6.4 Hz), 4.21(1H, dd, J = 4.4 Hz, 11.0 Hz), 4.32(1H, dd, J = 5.3 Hz, 15.2 Hz), 4.47(1H, dd, J = 6.6 Hz, 15.4 Hz), 4.95(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.62(1H, dd, J = 3.5 Hz, 7.5 Hz), 5.65-5.80(1H, m), 5.85-5.90(1H, m), 6.24(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.39(1H, dd, J = 2.4 Hz, 11.5 Hz), 6.51(1H, dd, J = 8.4 Hz, 8.8 Hz), 6.67(1H, d, J = 7.0 Hz), 6.82(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.4 Hz), 7.22-7.32(3H, m), 7.37(2H, dd, J = 6.8 Hz, 7.2 Hz), 7.43(1H, dd, J = 7.6 Hz, 8.0 Hz).

ESI-MS(m/z): 740.66 [M+H]⁺.

[실시예 22]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((3S)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.93(3H, t, J = 6.8 Hz), 1.05(3H, d, J = 6.2 Hz), 1.70-2.10(2H, m), 2.25-2.40(3H, m), 2.45-2.55(1H, m), 2.70-2.85(2H, m), 3.15-3.30(1H, m), 3.30-3.82(11H, m), 3.85-3.95(1H, m), 3.95-4.05(2H, m), 4.15-4.25(2H, m), 4.55(1H, dd, J = 7.0 Hz, 15.4 Hz), 5.00(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.70-5.82(2H, m), 6.00(2H, d, J = 9.9 Hz), 6.22(1H, d, J = 8.1 Hz), 6.67(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.86(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.8 Hz), 7.20-7.26(1H, m), 7.26-7.32(1H, m), 7.35-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 758.76 [M+H]⁺.

[실시예 23]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2,6-디플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-((3R)-4-에틸-3-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.893(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.02(3H, t, J = 6.8 Hz), 1.50-1.90(1H, m), 2.15-2.40(1H, m), 2.35-2.50(2H, m), 2.55-2.68(1H, m), 2.80-2.95(3H, m), 3.15-3.25(2H, m), 3.30-3.80(10H, m), 3.90-4.02(3H, m), 4.21(1H, dd, J = 4.2 Hz, 11.2 Hz), 4.32(1H, dd, J = 5.8 Hz, 15.2 Hz), 4.50(1H, dd, J = 6.8 Hz, 14.8 Hz), 4.99(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.20-5.30(3H, m), 5.66-5.84(2H, m), 6.02(2H, d, J = 9.9 Hz), 6.22(1H,d, J = 8.1 Hz), 6.65(1H, d, J = 7.3 Hz), 6.83(1H, dd, J = 5.6 Hz, 6.4 Hz), 7.22-7.33(2H, m), 7.35-7.46(3H, m).

ESI-MS(m/z): 758.72 [M+H]⁺.

[실시예 24]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(47.0 mg, 수율: 24%)을 제조예 2-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-1-6에 기재된 (2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(241 mg, 0.276 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.91(3H, d, J = 6.2 Hz), 1.65-1.76(1H, m), 2.10-2.21(2H, m), 2.30(3H, s), 2.38-2.56(2H, m), 2.77-2.91(2H, m), 3.12(1H, dd, J = 4.7 Hz, 13.9 Hz), 3.17-3.24(2H, m), 3.39-3.70(8H, m), 3.74-3.81(1H, m), 3.84-3.91(1H, m), 4.07(1H, dd, J = 4.4 Hz, 11.2 Hz), 4.26-4.44(3H, m), 4.94(1H, d, J = 13.8 Hz), 5.17-5.27(3H, m), 5.64-5.77(1H, m), 6.47-6.53(2H, m), 6.59-6.66(3H, m), 6.69-6.74(1H, m), 7.11(1H, dd, J = 7.8 Hz, 12.1 Hz), 7.21-7.42(5H, m).

ESI-MS(m/z): 726.59 [M+H]⁺.

[제조예 24-1-1]

2-클로로-6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘

6-클로로-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드의 상업적으로 이용 가능한 제품(820 mg, 5.14 mmol) 및 에탄올(10.0 mL)의 혼합 용액에 트리에틸 오르소포르메이트(2.56 mL, 15.4 mmol) 및 피리디늄 p-톨루엔설포네이트(64.6 mg, 0.257 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 80℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 물을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 에틸 아세테이트로 2 회 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 표제 화합물의 조정제 산물을 얻었다(977 mg). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 234.91 [M+H]⁺.

[제조예 24-1-2]

(2R)-4-(1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진

표제 화합물의 조정제 산물(157 mg)을 제조예 7-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-1-1에 기재된 2-클로로-6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘(100 mg, 0.428 mmol) 및 제조예 24-2-3에 기재된 (2R)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진의 조정제 산물(229 mg)로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 367.24 [M+H]⁺.

[제조예 24-1-3]

6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드

제조예 24-1-2에 기재된 (2R)-4-(1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진(157 mg, 0.428 mmol)에 포름산(5.00 mL)을 실온에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 표제 화합물의 조정제 산물을 얻었다(125 mg). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 293.13 [M+H]⁺.

[제조예 24-1-4]

(2,2-디에톡시에틸)((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민

표제 화합물(176 mg, 수율: 정량적)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-1-3에 기재된 6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드의 조정제 산물(125 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 410.35 [M+H]⁺.

[제조예 24-1-5]

(2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(206 mg, 수율: 77%)을 제조예 2-1 및 제조예 2-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-1-4에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)아민(176 mg, 0.430 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 629.57 [M+H]⁺.

[제조예 24-1-6]

(2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(241 mg, 수율: 82%)을 제조예 2-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-1-5에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(206 mg, 0.328 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 874.84 [M+H]⁺.

[제조예 24-2-1]

3차-부틸 (2R)-4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트

표제 화합물(610 mg, 수율: 83%)을 제조예 4-1에서와 유사한 절차를 채용하여 3차-부틸 (2R)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트의 상업적으로 이용 가능한 제품(451 mg, 2.25 mmol) 및 벤질 3-옥소아제티딘-1-카복실레이트(500 mg, 1.88 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 390.35 [M+H]⁺.

[제조예 24-2-2]

벤질 3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트

표제 화합물(423 mg, 수율: 82%)을 제조예 4-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-2-1에 기재된 3차-부틸 (2R)-4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트(660 mg, 1.70 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 304.18 [M+H]⁺.

[제조예 24-2-3]

(2R)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진

표제 화합물의 조정제 산물(236 mg)을 제조예 4-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-2-2에 기재된 벤질 3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트(423 mg, 1.39 mmol)로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 169.83 [M+H]⁺.

[참고예 1]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(37.1 mg, 수율: 22%)을 제조예 2-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 25-7에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(200 mg, 0.225 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.60-2.00(6H, m), 2.08-2.18(1H, m), 2.21(6H, s), 2.95(1H, d, J = 10.7 Hz), 3.09-3.22(2H, m), 3.35-3.71(8H, m), 3.86(2H, d, J = 7.0 Hz), 4.09(1H, dd, J = 4.1 Hz, 11.1 Hz), 4.20(1H, dd, J = 5.3 Hz, 15.2 Hz), 4.27-4.47(3H, m), 4.90-5.02(2H, m), 5.12-5.33(3H, m), 5.64-5.79(1H, m), 6.45-6.62(4H, m), 6.63-6.73(2H, m), 7.13(1H, dd, J = 7.9 Hz, 11.4 Hz), 7.19-7.44(5H, m), 9.82(1H, brs).

ESI-MS(m/z): 740.70 [M+H]⁺.

[제조예 25-1]

1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민

표제 화합물(1.30 g, 수율: 89%)을 제조예 1-3-1에서와 유사한 절차를 채용하여 N,N-디메틸피페리딘-4-아민의 상업적으로 이용 가능한 제품(640 mg, 5.00 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 350.35 [M+H]⁺.

[제조예 25-2]

1-(아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민

표제 화합물을 제조예 1-3-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 25-1에 기재된 1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민(1.30 g, 3.71 mmol)으로부터 벤질벤젠과의 혼합물(1.24 g) 형태로 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.46-1.60(2H, m), 1.73-1.87(4H, m), 2.07-2.22(1H, m), 2.28(6H, s), 2.77-2.87(2H, m), 3.12-3.21(1H, m), 3.50-3.58(2H, m), 3.59-3.66(2H, m).

[제조예 25-3]

(6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올

표제 화합물(240 mg, 수율: 63%)을 실시예 1에서와 유사한 절차를 채용하여 (6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올의 상업적으로 이용 가능한 제품(200 mg, 1.24 mmol) 및 제조예 25-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민 및 벤질벤젠의 혼합물(650 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 309.11 [M+H]⁺.

[제조예 25-4]

6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드

제조예 25-3에 기재된 (6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메탄올(240 mg, 0.779 mmol) 및 디클로로메탄(6.00 mL)의 혼합 용액에 Dess-Martin 퍼요오디난(400 mg)을 0℃에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 1.5 시간 동안 교반하였다. 수성 나트륨 수소 카보네이트 용액 및 나트륨 티오설페이트로 켄칭하고, 반응 용액을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 나트륨 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하고, 이어서 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 얻었다(320 mg). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

[제조예 25-5]

1-(1-(6-(((2,2-디에톡시에틸)아미노)메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민

표제 화합물(230 mg, 수율: 54%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 25-4에 기재된 6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드(320 mg, 1.04 mmol) 및 2,2-디에톡시에탄-1-아민의 상업적으로 이용 가능한 제품(170 mg, 1.28 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 424.42 [M+H]⁺.

[제조예 25-6]

(2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-(디메틸아미노)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(250 mg, 수율: 72%)을 제조예 2-1 및 제조예 2-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 25-5에 기재된 1-(1-(6-(((2,2-디에톡시에틸)아미노)메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민(230 mg, 0.542 mmol)으로부터 제조하였다(여기서 사용된 축합제는 HATU 대신에 HBTU였음).

ESI-MS(m/z): 643.64 [M+H]⁺.

[제조예 25-7]

(2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(290 mg, 수율: 84%)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 25-6에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(3차-부톡시)페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(250 mg, 0.389 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 888.99 [M+H]⁺.

[참고예 2]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(5.90 mg, 수율: 16%)을 실시예 1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 1-1-6에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(30.0 mg, 0.0520 mmol) 및 제조예 26-2에 기재된 (3R)-1-(아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피롤리딘-3-아민(88.0 mg, 0.260 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.56-1.69(1H, m), 1.84-1.96(1H, m), 2.18(6H, s), 2.27-2.36(1H, m), 2.71-2.87(2H, m), 2.92-3.00(1H, m), 3.08-3.18(2H, m), 3.29-3.35(1H, m), 3.48-3.60(3H, m), 3.60-3.72(2H, m), 3.75-3.82(1H, m), 3.84-3.91(1H, m), 3.94-4.00(1H, m), 4.01-4.07(1H, m), 4.17-4.30(2H, m), 4.37-4.50(1H, m), 4.93-5.01(1H, m), 5.17-5.24(2H, m), 5.24-5.28(1H, m), 5.38-5.47(1H, m), 5.65-5.80(2H, m), 5.86-5.93(1H, m), 6.22-6.25(1H, m), 6.37-6.39(1H, m), 6.44-6.48(1H, m), 6.68-6.72(1H, m), 6.75-6.81(1H, m), 7.21-7.26(2H, m), 7.28-7.32(1H, m), 7.34-7.40(2H, m), 7.41-7.47(1H, m).

ESI-MS(m/z): 726.59 [M+H]⁺.

[제조예 26-1]

(3R)-1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피롤리딘-3-아민

표제 화합물(458 mg, 수율: 65%)을 제조예 1-3-1에서와 유사한 절차를 채용하여 1-(디페닐메틸)아제티딘-3-온의 상업적으로 이용 가능한 제품(500 mg, 2.11 mmol) 및 (3R)-(+)-3-(디메틸아미노)-피롤리딘의 상업적으로 이용 가능한 제품(289 mg, 2.53 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.63-1.74(1H, m), 1.91-2.03(1H, m), 2.09-2.15(1H, m), 2.18(6H, s), 2.27-2.37(1H, m), 2.66-2.76(2H, m), 2.79-2.83(1H, m), 2.92-2.96(2H, m), 3.06-3.13(1H, m), 3.33-3.38(2H, m), 4.40(1H, s), 7.15-7.20(2H, m), 7.24-7.29(4H, m), 7.38-7.42(4H, m).

[제조예 26-2]

(3R)-1-(아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피롤리딘-3-아민

표제 화합물을 제조예 1-3-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 26-1에 기재된 (3R)-1-(1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피롤리딘-3-아민(458 mg, 1.37 mmol)으로부터 벤질벤젠과의 혼합물(408 mg) 형태로 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 170.0 [M+H]⁺.

[참고예 3]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(19.0 mg, 수율: 39%)을 실시예 1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 27-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(40.0 mg, 0.0655 mmol) 및 제조예 25-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-N,N-디메틸피페리딘-4-아민(40.0 mg, 0.0655 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.21-2.16(7H, m), 2.20(6H, s), 2.88-2.98(1H, m), 3.09-3.20(1H, m), 3.35-3.78(10H, m), 3.81-3.89(1H, m), 4.09(1H, dd, J = 4.2 Hz, 11.2 Hz), 4.16-4.31(2H, m), 4.34-4.42(1H, m), 4.52(1H, dd, J = 7.4 Hz, 15.6 Hz), 4.91(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.19-5.29(3H, m), 5.45-5.53(1H, m), 5.67-5.81(1H, m), 6.00-6.07(1H, m), 6.42-6.51(2H, m), 6.62(1H, dd, J = 2.7 Hz, 7.8 Hz), 6.77-6.83(1H, m), 7.09(1H, dd, J = 8.0 Hz, 11.9 Hz), 7.23-7.43(5H, m).

ESI-MS(m/z): 758.67 [M+H]⁺.

[제조예 27-1]

((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)(2,2-디에톡시에틸)아민

표제 화합물(233 mg, 수율: 68%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 6-클로로-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드의 상업적으로 이용 가능한 제품(198 mg)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.22(6H, t, J = 7.1 Hz), 2.75(2H, d, J = 5.5 Hz), 3.47-3.61(2H, m), 3.64-3.77(2H, m), 3.90(2H, s), 4.63(1H, t, J = 5.5 Hz), 7.32(1H, dd, J = 3.3 Hz, 8.2 Hz), 7.40-7.49(1H, m).

[제조예 27-2]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-N-(2,2-디에톡시에틸)프로판아미드

표제 화합물(445 mg, 수율: 97%)을 제조예 1-1-2 및 제조예 1-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 27-1에 기재된 ((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)(2,2-디에톡시에틸)아민(233 mg, 0.842 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 548.38 [M+H]⁺.

[제조예 27-3]

(2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-N-(2,2-디에톡시에틸)프로판아미드

표제 화합물(579 mg, 수율: 90%)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 27-2에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-N-(2,2-디에톡시에틸)프로판아미드(445 mg, 0.812 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 793.62 [M+H]⁺.

[제조예 27-4]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(288 mg, 수율: 65%)을 제조예 1-1-5 및 제조예 1-1-6에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 27-3에 기재된 (2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-((6-클로로-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-N-(2,2-디에톡시에틸)프로판아미드(579 mg, 0.730 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 611.34 [M+H]⁺.

[참고예 4]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(14.6 mg, 수율: 16%)을 제조예 1-1-5 및 제조예 1-1-6에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-7에 기재된 (2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(116 mg)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.97(3H, d, J = 6.3 Hz), 1.04(3H, d, J = 5.9 Hz), 1.61-1.70(1H, m), 1.73-1.81(1H, m), 2.36-2.46(1H, m), 2.59-2.83(4H, m), 2.98-3.05(1H, m), 3.10-3.18(1H, m), 3.39-3.79(10H, m), 3.82-3.90(1H, m), 4.08(1H, dd, J = 4.3 Hz, 11.1 Hz), 4.13-4.21(1H, m), 4.21-4.34(2H, m), 4.49(1H, dd, J = 7.1 Hz, 15.9 Hz), 4.91(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.18-5.30(3H, m), 5.49(1H, dd, J = 4.2 Hz, 10.8 Hz), 5.69-5.82(1H, m), 6.03-6.09(1H, m), 6.42-6.52(2H, m), 6.57-6.63(1H, m), 6.80-6.88(1H, m), 7.08(1H, dd, J = 7.8 Hz, 11.9 Hz), 7.18-7.42(5H, m).

ESI-MS(m/z): 770.73 [M+H]⁺.

[제조예 28-1]

1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-올

표제 화합물(89.0 mg, 수율: 51%)을 제조예 24-1-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 24-1-1에 기재된 2-클로로-6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘(150 mg, 0.642 mol) 및 아제티딘-3-올 하이드로클로라이드의 상업적으로 이용 가능한 제품(105 mg, 0.963 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.19-1.31(6H, m), 3.51-3.76(4H, m), 3.93-4.04(2H, m), 4.34-4.47(2H, m), 4.68-4.81(1H, m), 5.29(1H, s), 6.85-6.94(1H, m), 7.10-7.21(1H, m).

[제조예 28-2]

1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-온

표제 화합물의 조정제 산물(212 mg)을 제조예 7-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-1에 기재된 1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-올(214 mg, 0.792 mmol)로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.20-1.32(6H, m), 3.53-3.77(4H, m), 4.92(4H, d, J = 2.0 Hz), 5.32(1H, s), 7.01-7.09(1H, m), 7.27-7.32(1H, m).

[제조예 28-3]

(1S,4S)-2-(1-(6-디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-일)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄

표제 화합물(66.0 mg, 수율: 78%)을 제조예 1-3-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-2에 기재된 1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-온(57.6 mg, 0.215 mmol) 및 (1S,4S)-2-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄의 상업적으로 이용 가능한 제품(95.0 mg, 0.258 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 393.33 [M+H]⁺.

[제조예 28-4]

5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-카르브알데하이드

표제 화합물의 조정제 산물(53.5 mg)을 제조예 24-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-3에 기재된 (1S,4S)-2-(1-(6-디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-일)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄(157 mg, 0.428 mmol)으로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 319.18 [M+H]⁺.

[제조예 28-5]

(2,2-디에톡시에틸)((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)아민

표제 화합물(62.0 mg, 수율: 82%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-4에 기재된 5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-카르브알데하이드의 조정제 산물(53.5 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 436.39 [M+H]⁺.

[제조예 28-6]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(84.0 mg, 수율: 86%)을 제조예 1-1-2 및 제조예 1-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-5에 기재된 (2,2-디에톡시에틸)((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)아민(62.0 mg, 0.142 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 707.69 [M+H]⁺.

[제조예 28-7]

(2S)-2-(2-((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(116 mg, 수율: 정량적)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-6에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((5-플루오로-6-(3-((1S,4S)-5-(프로판-2-일)-2,5-디아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(84.0 mg, 0.119 mmol)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 952.95 [M+H]⁺.

[참고예 5]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(35.0 mg, 수율: 39%)을 제조예 1-1-5 및 제조예 1-1-6에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 29-7에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(110 mg, 0.117 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.27(3H, s), 2.37-2.52(6H, m), 2.54-2.71(2H, m), 3.11-3.20(1H, m), 3.34-3.44(2H, m), 3.48-3.77(11H, m), 3.87-3.95(2H, m), 3.99-4.06(1H, m), 4.16-4.30(2H, m), 4.43(1H, dd, J = 6.7 Hz, 15.3 Hz), 4.97(1H, d, J = 13.9 Hz), 5.18-5.28(3H, m), 5.39(1H, dd, J = 4.2 Hz, 10.6 Hz), 5.66-5.78(1H, m), 5.93(1H, dd, J = 2.1 Hz, 8.4 Hz), 6.25(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.33-6.39(1H, m), 6.40-6.47(1H, m), 6.68-6.77(2H, m), 7.21-7.47(6H, m).

ESI-MS(m/z): 756.62 [M+H]⁺.

[제조예 29-1]

1-(6-(1,3-디옥솔란-2-일)피리딘-2-일)아제티딘-3-올

표제 화합물(263 mg, 수율: 정량적)을 제조예 24-1-2에서와 유사한 절차를 채용하여 2-(1,3-디옥솔란-2-일)-6-플루오로피리딘의 상업적으로 이용 가능한 제품(200 mg, 1.18 mol) 및 아제티딘-3-올 하이드로클로라이드의 상업적으로 이용 가능한 제품(194 mg, 1.77 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.83-3.91(2H, m), 4.00-4.20(4H, m), 4.26-4.35(2H, m), 4.70-4.83(1H, m), 5.72(1H, s), 6.24-6.31(1H, m), 6.80-6.89(1H, m), 7.42-7.53(1H, m).

[제조예 29-2]

1-(6-(1,3-디옥솔란-2-일)피리딘-2-일)아제티딘-3-온

표제 화합물의 조정제 산물(261 mg)을 제조예 7-2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 29-1에 기재된 1-(6-(1,3-디옥솔란-2-일)피리딘-2-일)아제티딘-3-올(263 mg, 1.18 mmol)로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 3.99-4.23(4H, m), 4.82(4H, s), 5.75(1H, s), 6.47-6.57(1H, m), 6.98-7.04(1H, m), 7.55-7.65(1H, m).

[제조예 29-3]

1-(6-(1,3-디옥솔란-2-일)피리딘-2-일)-N-메틸-N-(2-(모르폴린-4-일)에틸)아제티딘-3-아민

표제 화합물(157 mg, 수율: 76%)을 제조예 1-3-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 29-2에 기재된 1-(6-(1,3-디옥솔란-2-일)피리딘-2-일)아제티딘-3-온(130 mg, 0.590 mmol) 및 메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아민의 상업적으로 이용 가능한 제품(176 mg, 0.767 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 349.22 [M+H]⁺.

[제조예 29-4]

6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-카르브알데하이드

제조예 29-3에 기재된 1-(6-(1,3-디옥솔란-2-일)피리딘-2-일)-N-메틸-N-(2-(모르폴린-4-일)에틸)아제티딘-3-아민(157 mg, 0.451 mmol), 아세토니트릴(5.00 mL) 및 물(0.500 mL)의 혼합 용액에 p-톨루엔설폰산 1 수화물(386 mg, 2.03 mmol)을 첨가하였다. 생성 혼합물을 100℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각한 뒤, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 포화 수성 나트륨 수소 카보네이트 용액을 잔류물에 첨가하고, 생성 용액을 디클로로메탄으로 3 회 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트에 걸쳐 건조한 뒤 여과하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물의 조정제 산물을 얻었다(122 mg). 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 305.19 [M+H]⁺.

[제조예 29-5]

1-(6-(((2,2-디에톡시에틸)아미노)메틸)피리딘-2-일)-N-메틸-N-(2-(모르폴린-4-일)에틸)아제티딘-3-아민

표제 화합물(55.0 mg, 수율: 33%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 29-4에 기재된 6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-카르브알데하이드의 조정제 산물(122 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 422.40 [M+H]⁺.

[제조예 29-6]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(94.0 mg, 수율: 정량적)을 제조예 1-1-2 및 제조예 1-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 29-5에 기재된 1-(6-(((2,2-디에톡시에틸)아미노)메틸)피리딘-2-일)-N-메틸-N-(2-(모르폴린-4-일)에틸)아제티딘-3-아민(55.0 mg, 0.130 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 693.62 [M+H]⁺.

[제조예 29-7]

(2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(110 mg, 수율: 92%)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 29-6에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(메틸(2-(모르폴린-4-일)에틸)아미노)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(94.0 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 938.84 [M+H]⁺.

[참고예 6]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(59.0 mg, 수율: 28%)을 제조예 27-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 30-5에 기재된 (2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(263 mg, 0.288 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.23(3H, s), 2.24(6H, s), 2.24-2.44(2H, m), 2.54-2.66(2H, m), 3.15-3.72(10H, m), 3.76-3.93(2H, m), 4.07-4.31(3H, m), 4.39-4.51(1H, m), 4.96(1H, d, J = 13.8 Hz), 5.15-5.28(3H, m), 5.34-5.42(1H, m), 5.65-5.80(1H, m), 6.09-6.17(1H, m), 6.36-6.45(1H, m), 6.48-6.56(1H, m), 6.59-6.74(2H, m), 7.09(1H, dd, J = 8.0 Hz, 11.7 Hz), 7.20-7.43(5H, m).

ESI-MS(m/z): 732.63 [M+H]⁺.

[제조예 30-1]

1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-N-메틸 아제티딘-3-아민

표제 화합물(128 mg, 수율: 54%)을 제조예 1-3-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 28-2에 기재된 1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)아제티딘-3-온(180 mg, 0.671 mmol) 및 (2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아민의 상업적으로 이용 가능한 제품(103 mg, 1.01 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 355.27 [M+H]⁺.

[제조예 30-2]

6-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드

표제 화합물의 조정제 산물(101 mg)을 제조예 24-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 30-1에 기재된 1-(6-(디에톡시메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-N-메틸아제티딘-3-아민(128 mg, 0.361 mmol)으로부터 제조하였다. 산물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

ESI-MS(m/z): 281.11 [M+H]⁺.

[제조예 30-3]

1-(6-(((2,2-디에톡시에틸)아미노)메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-N-메틸 아제티딘-3-아민

표제 화합물(125 mg, 수율: 87%)을 제조예 1-1-1에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 30-2에 기재된 6-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-카르브알데하이드의 조정제 산물(101 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 398.33 [M+H]⁺.

[제조예 30-4]

(2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(250 mg, 수율: 정량적)을 제조예 1-1-2 및 제조예 1-1-3에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 30-3에 기재된 1-(6-(((2,2-디에톡시에틸)아미노)메틸)-3-플루오로피리딘-2-일)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-N-메틸아제티딘-3-아민(125 mg, 0.314 mmol)으로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 669.64 [M+H]⁺.

[제조예 30-5]

(2S)-2-(2-(((벤질카바모일)아미노)(프로프-2-엔-1-일)아미노)아세트아미도)-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드

표제 화합물(263 mg, 수율: 94%)을 제조예 1-1-4에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 30-4에 기재된 (2S)-2-아미노-3-(4-(벤질옥시)-2-플루오로페닐)-N-(2,2-디에톡시에틸)-N-((6-(3-(((2-(디메틸아미노)에틸)(메틸)아미노)아제티딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)메틸)프로판아미드(250 mg)로부터 제조하였다.

ESI-MS(m/z): 914.82 [M+H]⁺.

[실시예 25]

4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)-3-플루오로페닐 디하이드로겐 포스페이트

옥시 염화인(257 ㎕, 2.76 mmol) 및 THF(10.0 mL)의 혼합 용액에 실시예 1에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(1.00 g, 1.38 mmol), 트리에틸아민(768 ㎕, 5.52 mmol) 및 THF(10.0 mL)의 혼합 용액을 10 분에 걸쳐 질소 분위기 하에 -15℃ 이하에서 적가하였다. 반응 혼합물을 -15℃ 이하에서 1 시간 10 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 5 N 수성 나트륨 하이드록사이드 용액(2.03 mL, 10.1 mmol) 및 물(21.0 mL)의 혼합 용액을 5 분에 걸쳐 10℃ 이하에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 35 분 동안 교반한 뒤, 에틸 아세테이트를 반응 혼합물로 첨가하고, 이어서 생성 용액을 분획화하였다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추가 세정한 뒤, 5 N 염화수소산을 용액에 첨가하여 용액의 pH 값을 중성 값으로 조정하였다. 용매를 감압 하에 반응 혼합물로부터 증류 제거하였다. 디클로로메탄, 에탄올 및 메탄올을 생성 잔류물에 첨가한 뒤 교반하고, 이어서 생성 현탁액을 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 용매를 감압 하에 여액으로부터 증류 제거하고, 생성 잔류물을 ODS 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매: 물/메탄올)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다(881 mg, 수율: 79%).

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.08(3H, t, J = 7.2 Hz), 2.10-2.50(4H, m), 2.55-2.68(2H, m), 2.70-2.90(4H, m), 3.00-3.20(2H, m), 3.23-3.40(3H, m), 3.45-3.90(9H, m), 4.03(1H, dd, J = 7.2 Hz, 7.6 Hz), 4.41(2H, d, J = 6.4 Hz), 5.18-5.28(2H, m), 5.30-5.44(2H, m), 5.62-5.78(2H, m), 6.14(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.51(1H, d, J = 6.4 Hz), 6.70-6.87(2H, m), 6.95(1H, dd, J = 8.0 Hz, 9.2 Hz), 7.14(1H, d, J = 11.6 Hz), 7.20-7.33(2H, m), 7.33-7.44(3H, m).

ESI-MS(m/z): 806.58 [M+H]⁺.

[실시예 26]

4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)페닐 디하이드로겐 포스페이트

표제 화합물(183 mg, 수율: 55%)을 실시예 25에서와 유사한 절차를 채용하여 실시예 2에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(298 mg, 0.421 mmol)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.10(3H, t, J = 7.6 Hz), 1.60-2.30(4H, m), 2.60-2.80(2H, m), 2.80-3.15(4H, m), 3.20-3.42(3H, m), 3.45-3.70(7H, m), 3.78-4.10(5H, m), 4.28-4.45(2H, m), 5.06-5.38(5H, m), 5.62-5.74(1H, m), 6.20(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.61(1H, d, J = 6.8 Hz), 6.70(1H, dd, J = 6.0 Hz, 6.0 Hz), 6.84(2H, d, J = 8.0 Hz), 7.09(2H, d, J = 8.0 Hz), 7.16-7.32(3H, m), 7.32-7.46(2H, m).

ESI-MS(m/z): 788.57 [M+H]⁺.

[실시예 27]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(33.0 mg, 수율: 74%)을 실시예 2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 2-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(35.0 mg, 0.0627 mmol) 및 제조예 4-3에 기재된 (2S)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진(106 mg, 0.314 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 1.05(3H, d, J = 6.0 Hz), 1.50-1.85(1H, m), 1.88-2.00(1H, m), 2.23(3H, s), 2.25-2.50(3H, m), 2.70-2.82(1H, m), 3.05-3.23(2H, m), 3.28-3.38(1H, m), 3.40-3.50(2H, m), 3.52-3.70(5H, m), 3.72-3.82(1H, m), 3.82-3.90(1H, m), 4.00-4.10(2H, m), 4.15-4.28(2H, m), 4.33-4.45(1H, m), 4.99(1H, d, J = 13.2 Hz), 5.03-5.13(1H, m), 5.15-5.30(3H, m), 5.65-5.80(1H, m), 6.29(1H, d, J = 7.6 Hz), 6.39(2H, d, J = 8.0 Hz), 6.56(2H, d, J = 8.4 Hz), 6.65-6.77(2H, m), 7.16-7.25(2H, m), 7.24-7.32(1H, m), 7.34-7.40(2H, m), 7.44-7.52(1H, m).

ESI-MS(m/z): 708.56 [M+H]⁺.

[실시예 28]

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-((3R)-3,4-디메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(23.0 mg, 수율: 52%)을 실시예 2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 2-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(35.0 mg, 0.0627 mmol) 및 제조예 24-2-3에 기재된 (2R)-4-(아제티딘-3-일)-1,2-디메틸피페라진(106 mg, 0.314 mmol)으로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 0.91(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.60-2.00(2H, m), 2.10-2.25(1H, m), 2.30(3H, s), 2.40-2.55(2H, m), 2.80-2.95(2H, m), 3.09(1H, dd, J = 4.8 Hz, 13.6 Hz), 3.15-3.25(2H, m), 3.35-3.48(2H, m), 3.50-3.78(6H, m), 3.85-3.93(1H, m), 4.03(2H, d, J = 6.4 Hz), 4.15-4.22(1H, m), 4.30-4.42(2H, m), 4.98(1H, d, J = 13.6 Hz), 5.18-5.30(3H, m), 5.13-5.30(1H, m), 6.28(1H, d, J = 8.0 Hz), 6.39(2H, d, J = 8.0 Hz), 6.60(2H, d, J = 8.0 Hz), 6.72(2H, d, J = 6.8 Hz), 7.20-7.28(2H, m), 7.28-7.32(1H, m), 7.33-7.40(2H, m), 7.43-7.50(1H, m).

ESI-MS(m/z): 708.70 [M+H]⁺.

[실시예 29]

(6S,9aS)-N-벤질-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-8-((6-(3-(4-메틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

표제 화합물(14 mg, 수율: 38%)을 실시예 2에서와 유사한 절차를 채용하여 제조예 2-4에 기재된 (6S,9aS)-N-벤질-8-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-6-((4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드(30.0 mg, 0.0537 mmol) 및 제조예 3-2에 기재된 1-(아제티딘-3-일)-4-메틸피페라진 및 벤질벤젠의 혼합물(87 mg)로부터 제조하였다.

¹H-NMR 스펙트럼(400 MHz, CDCl₃) δ(ppm): 2.30-2.65(11H, m), 3.05-3.15(1H, m), 3.18-3.25(1H, m), 3.43(2H, d, J = 16.8 Hz), 3.48-3.72(5H, m), 3.78(1H, dd, J = 6.4 Hz, 10.0 Hz), 3.87(1H, dd, J = 7.2 Hz, 9.6 Hz), 3.95-4.10(2H, m), 4.15-4.25(2H, m), 4.39(1H, dd, J = 6.8 Hz, 15.2 Hz), 4.99(1H, d, J = 13.6 Hz), 5.03-5.12(1H, m), 5.15-5.30(3H, m), 5.65-5.80(1H, m), 6.29(1H, d, J = 8.4 Hz), 6.39(2H, d, J = 8.4 Hz), 6.56(2H, d, J = 8.0 Hz), 6.67-6.79(2H, m), 7.20(2H, d, J = 6.8 Hz), 7.30(1H, d, J = 7.2 Hz), 7.38(2H, dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz), 7.48(1H, dd, J = 7.2 Hz, 8.0 Hz).

ESI-MS(m/z): 694.64 [M+H]⁺.

(참고예 7)

실시예 25에서 제조된 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)-3-플루오로페닐 디하이드로겐 포스페이트를 메탄올 및 이소프로판올 중에 용해시킨 뒤 증발 결정화에 의해 결정화하여 화합물의 단일 결정을 얻었다. X-선 회절 실험을 생성 단일 결정을 이용해서 수행하였다. 결정학적 데이터 및 구조 분석 데이터를 표 2에 나타내며, 원자 배위 데이터를 표 3에 나타낸다. 표제 화합물의 절대 구조를 결과로부터 결정하였다.

[표 2]

[표 3]

시험예 1: Wnt 신호의 검출

pcDNA3.1(+)(invitrogen)을 제한 효소 BglII 및 NotI로 절단하고, 아래에 나타낸 서열을 갖는 어댑터 BEHKS(제한 효소 부위 BglII, EcoRI, HindIII, KpnI, SacI 및 NotI 함유)를 여기에 삽입하여 플라스미드 pNeo-HKS를 제조하였다.

BEHKS-F 5'-gatctgaattcaagcttctcgagggtacctctagagagctcgc-3'(서열 목록 번호: 1)

BEHKS-R 5'-ggccgcgagctctctagaggtaccctcgagaagcttgaattca-3'(서열 목록 번호: 2)

이어서, TOPglow/FOPglow TCF 리포터 키트(upstate 카탈로그 #17-366)에 함유된 TOPglow 플라스미드로부터 제한 효소 HindIII 및 KpnI로 절단하여 제조된 약 2700 bp 길이를 갖는 단편(Wnt-반응 서열 및 루시퍼라제 유전자 함유)을 pNeo-HKS에서 HindIII 및 KpnI 사이에 삽입함으로써 플라스미드 pNeo-TOP을 제조하였다. 플라스미드 pNeo-TOP을 인간 태아 유래 신장 세포 균주 HEK293 내로 도입한 뒤, G418을 이용해서 화합물을 선택하고, 이어서 세포 클론 균주를 제한 희석 방법에 의해 구축하였다. 세포 클론 균주로 Wnt 신호 검출 시험을 거쳤다.

세포 클론 균주를 10% FBS를 함유하는 D-MEM 글루코스-풍부 배양 배지(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)에서 하위배양하고, 성장기에 있는 세포를 시험에서 이용하였다. 세포를 트립신-EDTA를 이용해서 수집하고, 세포수를 계수한 뒤, 세포수가 2 × 10⁵ 세포/mL가 되도록 10% FBS 함유 D-MEM 글루코스-풍부 배양 배지 중에 세포를 현탁하였다. 세포 현탁액을 0.1 mL/웰의 양으로 96-웰 세포 배양 플레이트(Greiner Bio-One Co., Ltd., 제품 번호: 655083)에 첨가한 뒤 5% CO₂ 인큐베이터(37℃)에서 하룻밤 동안 배양하였다. 배양 후, DMSO 중에 용해된 시험할 물질을 10% FBS 및 80 mM LiCl 함유 D-MEM 글루코스-풍부 배양 배지로 희석하여 샘플 용액을 제조하였다. 샘플 용액(0.1 mL)을 각각의 웰에 첨가한 뒤 5% CO₂ 인큐베이터(37℃)에서 하룻밤 동안 배양하였다. 샘플 용액 첨가 6 시간 후, 상청액을 각 웰로부터 제거한 뒤 50 ㎕의 Bright-Glo™ 루시퍼라제 기질(Promega, 제품 번호: E2620)을 여기에 첨가하였다. 플레이트를 수 초 동안 플레이트 혼합기에 놓은 뒤 각 웰로부터의 광 방출을 EnVision™ Multilabel 플레이트 판독기(PerkinElmer Co., Ltd.)를 이용해서 측정하였다. 각 웰의 Wnt 신호 활성화율(%)을 결정하고, 관심 물질의 Wnt 신호 활성을 50% 억제하기 위해 필요한 농도(IC₅₀)를 계산하였고, 여기서 샘플 용액이 첨가되지 않고 LiCl이 첨가된 웰의 발광도가 100% Wnt 신호 활성으로 정의되었고, 샘플 용액과 LiCl이 모두 첨가되지 않은 웰의 발광도가 0% Wnt 신호 활성으로 정의되었다. 시험 결과로부터, 본 발명에 따른 화합물이 Wnt 신호를 억제하며 암 및 섬유증을 포함하는 질환에 대한 치료제로서 적용 가능하다는 것이 나타났다.

시험예 2: 대사 안정성의 평가

생성 용액의 농도가 20 mM이 되도록 시험 물질을 DMSO 중에 용해시키고, 생성 용액의 농도가 1 mM이 되도록 DMSO로 용액을 희석하였다. 시험 물질의 대사 안정성을 인간 간이 풀링된 인간 간 마이크로좀(HLM)을 이용해서 평가하였다. 분석 완충 용액은 0.15 mL의 최종 인큐베이션 부피 중에 0.2 mg/mL의 HLM, 0.1 M의 포스페이트 칼륨 완충 용액(pH 7.4), 0.1 mM의 EDTA, 0.33 mM의 NADP+, 8 mM의 글루코스-6-포스페이트, 0.1 U/mL의 글루코스-6-포스페이트 탈수소효소, 6 mM의 MgCl₂, 0.1 μM의 시험 물질(DMSO 중 최종 농도: 0.01%)을 함유하였다. 37℃에서 반응 개시 15 분 후, 0.15 mL의 아세토니트릴/메탄올 혼합 용액(7 : 3, 부피 기준)을 용액에 첨가하여 반응을 종료시켰다. 원심분리 후, 생성 상청액을 LC-MSMS에 의해 분석하고, 피크 면적을 NADPH 생산 존재 또는 부재 하에 비교하고, 시험 물질의 잔여 비를 계산하였다.

시험예 3: 용해도의 평가

아래에서 언급된 0.25 mL의 시험 용액에 20 mM의 화합물 농도를 갖는 2.5 ㎕의 DMSO 용액을 첨가하였다. 생성 용액을 약 15 분 동안 실온에서 진탕하였다(진탕 조건은 아래에서 언급됨). 이어서, 상청액을 감압 하에 흡인 여과에 의해 수집하였다. 화합물 농도 200 μM을 갖는 DMSO 용액을 표준 용액으로 사용하였고, HPLC-UV 방법에 의해 정량된 여액 중 화합물의 농도를 용해도로 채용하였다(자연수로 반올림함). 상기 평가에서, 200 μM 값이 사용 상 상한치가 되므로, 200 μM을 초과하는 모든 정량값은 200 μM로 간주하였다.

시험 용액: GIBCO(등록 상표명) Dulbecco 포스페이트-완충 식염수(pH 7, Life Technologies Corporation)

진탕 조건: 마이크로플레이트 진탕기 N-704(Nissinrika Corporation), 속도 6

시험예 4: PAMPA 시험(평행 인공 막 투과도 분석)

지질막을 통한 공여체 측으로부터 수신체 측으로의 화합물 수송 시 시험 용액에 용해된 각각의 화합물(농도: 약 200 μM)의 막 투과 계수 P_e(cm/s)를 평가하기 위해, 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 필름 상에 지질이 사전 코팅된 96-웰 PAMPA 플레이트(BD Biosciences)를 이용해서 약 5 시간 동안 실온에서 진탕하면서 시험 용액(아래 참고)을 교반하였다. P_e 값을 식 1 및 2에 따라 계산하고, 공여체 측 및 수신체 측 상의 화합물 농도를 HPLC-UV 방법에 의해 측정하였다. 20 mM 농도로 화합물을 함유하는 DMSO 용액 3 ㎕가 시험 용액에 첨가되었으므로, 공여체 측의 시험 용액 0.3 mL에는 약 1%(v/v)의 DMSO가 함유된다.

시험 용액: pH 값 6.8을 갖는 포스페이트 완충 용액(90 mM의 포스페이트, 48 mM의 NaCl, 5.4 mM의 KCl)

교반 조건: 멀티진탕기 MS-300(AS ONE Corporation), 350 rpm

(식 1)

(식 2)

C_D(t): 시간 t에서 공여체 웰의 화합물 농도

C_A(t): 시간 t에서 수신체 웰의 화합물 농도

V_D: 공여체 웰 부피(0.3 mL)

V_A: 수신체 웰 부피(0.2 mL)

A: 필터 면적(0.3 cm²)

특허 문헌 1에서 표 3의 No. 199 화합물을 비교예 1에서 사용하였고, 특허 문헌 3에서 실시예 I-5 및 I-7에 기재된 화합물을 각각 비교예 2 및 3에서 사용하였으며, 이들 화합물에 대한 시험 결과를 또한 나타낸다.

[비교예 1]

(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-디옥소-8-((2-(4-(피롤리딘-1-일)피페리딘-1-일)피리딘-3-일)메틸)-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

[비교예 2]

(6S,9S)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-2,9-디메틸-4,7-디옥소-8-(퀴놀린-8-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드

[비교예 3]

4-(((6S,9S)-1-(벤질카바모일)-2,9-디메틸-4,7-디옥소-8-(퀴놀린-8-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-6-일)메틸)페닐 디하이드로겐 포스페이트

시험예 1 내지 4에서 실시예, 참고예 및 비교예에서의 화합물에 대한 시험 결과를 표 4에 나타낸다.

[표 4]

시험예 5: 용해도(실시예 25 및 26)의 평가

약 10 mg의 샘플을 정확히 칭량하고, 10-mL 폴리프로필렌 시험관에 넣고, 아래에 나타낸 시험 용액을 샘플이 완전 용해될 때까지 일부씩(0.1 mL) 여기에 첨가하였다. 시험 용액이 첨가되면, 시험 용액을 첨가할 때마다 혼합 용액을 볼텍스 혼합기를 이용해서 약 30 초 내지 3 분 범위로 간헐적으로 교반하였다. 임의의 고체 물질의 존재가 시각적 판단에 의해 관찰되지 않을 때까지 필요한 시험 용액의 첨가량으로부터 샘플의 용해도(mM)를 계산하였다.

시험 용액: GIBCO(등록 상표명)(pH 값 7을 갖는 Dulbecco 포스페이트-완충 식염수, Invitrogen Corporation)

실시예 25 및 26의 용해도 값을 표 5에 나타낸다.

[표 5]

시험예 6: APC^Min ^/+ 마우스에서 소장 폴립의 퇴행 효과

Wnt 신호 분해 조절 인자인 APC 유전자(선종성 결장폴립증 유전자)는 "결장직장암 억제 유전자"로 불리며, 가족성 선종폴립증의 원인 유전자이다. APC 유전자에 돌연변이가 일어나는 경우, 결장직장 점막 세포가 병적으로 증식하기 시작하여 전암성 병소로 불릴 수 있는 결장직장 폴립을 형성한다. 따라서, 이 유전자는 결장직장암의 개시 과정의 초기 단계에서 중요한 역할을 갖는 것으로 알려져 있다.

APC 유전자가 돌연변이되는 마우스(APC^Min ^/+ 마우스)에서, 가족성 선종폴립증 환자에서와 같이 다수의 폴립이 내장관에서 발생한다. 따라서, 마우스는 WNT 신호에 기반한 암의 개시 또는 침습 기전의 해명에 유용하며, 결장직장암의 예방, 진단 및 치료에 대한 연구를 위해 이용되어 온 표준 모델이다.

군 내 마우스 체중의 평균이 투여 첫 날 서로 거의 동일해지도록 APC^Min ^/+ 마우스(C57BL/6J-APC<Min>/J Hetero, 암컷, Sunplanet Co., Ltd.)를 그룹화하였다. 그 농도가 원하는 투여 농도가 되도록 0.1 N HCl 중에 시험 물질(실시예 화합물)을 용해시켜 분석물질을 제조한 후 4℃에서 냉장고에 보관하였다. 대조군(비히클군)에 대해, 투여 용매를 시험 물질과 동일한 조건 하에 경구 투여하였다. 분석물질을 4 일 동안 매일 50 mg/kg 및 75 mg/kg의 투여량으로 2 회 경구 경로를 통해 연속 투여한 뒤 3 일을 약물 휴일로 제공하였다. 상기 절차를 1 사이클로 정의하고, 투여를 총 16 일 동안(즉, 4 일×4 사이클) 수행하였다. 실험을 군 당 6 마리 내지 7 마리 마우스 상에서 수행하였다. 각각의 대조군 및 시험 물질-투여군에 있어서, 마지막 날의 체중 대 첫 날의 체중 값(즉, 상대 체중: RBW)을 계산하였다. (시험 물질 투여군의 RBW)/(대조군의 RBW)이 0.8 이상인 시험 물질 투여군을 안전하게 투여할 수 있는 그룹으로 결정하였다. 시험 물질 투여군에 있어서, 시험 물질 투여 후 실제 폴립의 수 및 마지막 날(투여 첫 날로부터 계수된 25 번째 날) 대조군에서 폴립의 수에 대비한 실제 수의 표준 편차를 도 1에 나타낸다. 상기 시험에서, 소장 및 결장에서 형성된 폴립을 계수하였다. 대조군 대비 시험 물질 투여군의 통계 분석(Dunnett 테스트)을 수행하고, P 값을 보고하였다.

시험예 7: 인간 K562 피하 이식 모델에서의 항암 효과

밀도가 2 × 10⁸ 세포/mL이 되도록 PBS(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.; Cat# 045-29795)로 제조된 인간 만성 골수종 백혈병 세포 균주 K562(10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보강된 RPMI-1640 액체 배양 배지 중에 배양됨)의 제조물을 1:1 의 혼합비로 MATRIGEL(BD Biosicence, Cat#: 354234)과 혼합함으로써 1 × 10⁸ 세포/mL의 밀도를 갖는 세포 현탁액을 제조하였다. 생성 세포 현탁액을 100 ㎕ 용량으로 각각의 6 주령 누드 마우스(CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj, 암컷, Charles River Laboratories Japan)의 우측 넙다리 내로 피하 이식하였다. 이식 7 일 후, 종양의 단반경 및 장반경을 전자 디지털 칼리퍼(Digimatic TM Caliper, Mitutoyo Corporation)를 이용해서 측정하여 하기 식에 따라 종양 부피를 계산하였다.

종양 부피(mm³) = (장반경(mm)) × (단반경(mm)) × (단반경(mm))/2

마우스를 투여 첫 날의 종양 부피를 기준으로 결정되는 군 당 마우스 종양 부피의 평균 값으로 그룹화하였다. 투여량이 10 mL/kg이 되도록 0.1 N HCl 중에 실시예 화합물을 용해시켜 분석물질을 제조하였다. 투여량이 10 mL/kg이 되도록 Otsuka 증류수(Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Cat#: 1324) 및 PROPYLENE GLYCOL(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Cat#: 164-04996)의 1 : 1 용액 중에 다사티닙, 자유 염기(LC Laboratories, Cat. No: D-3307)를 용해시켜 다사티닙 투여 용액을 제조하였다. 실시예 화합물을 매일 2 개의 분할 용량으로(bid) 투여 첫 날부터 시작해서 5 일 동안 연속해서 경구 투여하였다. 다사티닙을 연속해서 5 일 동안 매일 1 회(qd) 경구 투여하고, 다음 2 일의 약물 휴일을 설정하였다. 상기 절차를 1 사이클로 정의하고, 투여를 총 2 사이클로 수행하였다. 대조군은 임의의 실시예 화합물이 투여되지 않은 군이었다. 실험에서, 하나의 군에는 9 마리 내지 10 마리 마우스가 포함된다. 대조군, 실시예 화합물만 투여된 군, 다사티닙만 투여된 군, 및 실시예 화합물 및 다사티닙이 둘 다 투여된 군(이후, '조합 투여군'으로 불림)에 있어서, 종양 부피 및 체중을 첫 날부터 28 번째 날까지의 시기에 걸쳐 측정하였다. 대조군 및 실시예 화합물만 투여된 군에 있어서, 측정은 첫 날부터 11 번째 날까지의 시기 동안 수행하였다. 매 측정에 있어서, 종양 부피(상대 종양 부피: RTV) 및 체중(상대 체중: RBW)을 첫 날에 대한 값에 대비하여 계산하고, 투여 첫 날부터 28 번째 날까지의 시기 동안 결정된 그래프를 도 2 및 3에 나타낸다. 추가로, 다사티닙만 투여된 군에 대비하여 실시예 화합물 및 다사티닙이 둘 다 투여된 군에서 통계 분석(Dunnett 테스트)을 28 일째의 RTV 값을 이용해서 수행하고, P 값이 0.05 이하인 군은 별표(*)로 표시하였다. 또한, 28 일째에 시각적 판단에 의해 종양이 관찰되지 않고 촉진되지 않는(즉, 촉진되지 않은 종양을 갖는) 개체의 수를 또한 표 6에 나타낸다. 이 때, 다사티닙만 투여된 군에 대비하여 실시예 화합물 및 다사티닙이 둘 다 투여된 군에서 통계 분석(Fisher 테스트)을 수행하고, P 값이 0.05 이하인 군은 별표(*)로 표시하고 P 값이 0.01 이하인 군은 복수 별표(***)로 표시하였다.

[표 6]

SEQUENCE LISTING <110> Eisai R&D Management Co. Ltd. PRISM Pharma Co.,Ltd. <120> (6S,9aS)-N-Benzyl-6-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-4,7-dioxo-8-({6-[3-(piperazin-1-yl)azetidin-1-yl]pyridin-2-yl}methyl)-2-(prop-2-en-1-yl)-octahydro-1H-pyrazino[2,1-c][1,2,4]triazine-1-carboxamide compound <130> FP14-0590-00 <150> JP 2013-267687 <151> 2013-12-25 <160> 2 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> BEHKS-F <400> 1 gatctgaatt caagcttctc gagggtacct ctagagagct cgc 43 <210> 2 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> BEHKS-R <400> 2 ggccgcgagc tctctagagg taccctcgag aagcttgaat tca 43

Claims

(6S,9aS)-N-벤질-8-((6-(3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-6-((2-플루오로-4-하이드록시페닐)메틸)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)-옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복사미드 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

.
제1항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 암 또는 섬유증을 치료하기 위한 약학 조성물.
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제