BR112019015269A2

BR112019015269A2 - compostos

Info

Publication number: BR112019015269A2
Application number: BR112019015269A
Authority: BR
Inventors: Ren Feng; Cui Haifeng; Zhang Xiaomin; Sang Yingxia
Original assignee: Glaxosmithkline Ip Dev Ltd
Priority date: 2017-01-25
Filing date: 2018-01-23
Publication date: 2020-04-14
Also published as: WO2018137607A1; EP3573975A1; JP2020506966A; CA3050021A1; EP3573975A4; US20200002323A1; CN110225910A

Abstract

a presente invenção se refere aos novos compostos que inibem a atividade de lrrk2 quinase, processos para a preparação dos mesmos, as composições contendo os mesmos e ao uso dos mesmos no tratamento de ou na prevenção de doenças associadas com ou caracterizadas pela atividade da lrrk2 quinase, por exemplo, doença de parkinson, doença de alzheimer e esclerose lateral amiotrófica (als).

Description

“COMPOSTOS”

CAMPO DA INVENÇÃO [001 ]A presente invenção se refere a novos compostos que inibem a atividade da LRRK2 quinase, processos para a sua preparação, composições contendo os mesmos e sua utilização no tratamento de doenças associadas ou caracterizadas pela atividade da LRRK2 quinase, por exemplo, doença de Parkinson, doença de Alzheimer e esclerose lateral amiotrófica (ALS)

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO [002]A doença de Parkinson (DP) é um distúrbio neurodegenerativo caracterizado por degenerescência seletiva e morte celular de neurônios dopaminérgicos na região nigra substancial do cérebro. A doença de Parkinson foi geralmente considerada esporádica e de etiologia desconhecida, mas, nos últimos 15 anos, houve um importante desenvolvimento da compreensão da base genética desta doença e dos mecanismos patogênicos associados. Uma área do desenvolvimento é a compreensão da proteína quinase 2 rica em leucina (LRRK2). Um certo número de mutações missenso no gene LRRK2 foi fortemente relacionado à doença de Parkinson autossômica dominante em estudos familiares (ver W02006068492 e W02006045392; Trinh and Farrer 2013, Nature Reviews in Neurology 9: 445-454; Paisan-Ruiz et al., 2013, J. Parkinson's Disease 3: 85-103). A mutação de G2019S em LRRK2 é a mutação missenso mais frequente e está associada a um fenótipo clínico que se assemelha à doença de Parkinson esporádica. A mutação G2019S de LRRK2 está também presente em aproximadamente 1,5% dos casos de doença de Parkinson esporádica (ver Gilks et al., 2005, Lancet, 365: 415-416). Adicionalmente às mutações de codificação patogênica conhecidas em LRRK2, identificaram-se variantes de codificação de aminoácidos adicionais de LRRK2 que também estão associadas ao risco de desenvolver doença de Parkinson (ver Ross et al., 2011 Lancet Neurology 10: 898-908). Além disso, estudos de associação genômica ampla (GWAS)

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2/169 identificaram LRRK2 como um locus de suscetibilidade à doença de Parkinson, o que indica que LRRK2 também pode ser relevante para casos de doença de Parkinson esporádica sem mutações que causam substituições de aminoácidos na proteína LRRK2. (VerSatake et al., 2009 Nature Genetics 41:1303-1307; Simon-Sanchez et al 2009 Nature Genetics 41:1308-1312) [003]LRRK2 é um membro da família de proteínas ROCO e todos os membros desta família compartilham cinco domínios conservados. A mutação patogênica mais comum G2019S ocorre no domínio quinase altamente conservado de LRRK2. Esta mutação confere um aumento na atividade da quinase LRRK2 em ensaios enzimáticos in vitro de proteínas LRRK2 recombinantes (Ver Jaleel et al., 2007, Biochem J, 405: 307-317) e em proteínas LRRK2 purificadas a partir de células derivadas do paciente G2019S (Ver Dzamko et al., 2010 Biochem. J. 430: 405-413). Uma mutação patogênica de LRRK2 menos frequente que confere substituição de aminoácido em um resíduo diferente, R1441, também demonstrou elevar a atividade da LRRK2 quinase diminuindo a taxa de hidrólise de GTP pelo domínio GTPase de LRRK2 (ver Guo et al., 2007 Exp Cell). Res. 313: 3658-3670; West et al., 2007 Hum. Mol Gen. 16: 223-232). Além disso, a fosforilação dos substratos fisiológicos da proteína Rab do LRRK2 demonstrou estar aumentada por uma faixa de mutações patogênicas da doença de Parkinson de LRRK2 (ver Steger et al., 2016 eLife 5 e12813). Portanto, as evidências indicam que as atividades de quinase e GTPase de LRRK2 são importantes para a patogênese, e que o domínio LRRK2 quinase pode regular a função geral de LRRK2 (ver Cookson, 2010 Nat. Rev. Neurosci. 11: 791797).

[004]Há evidências que mostram que o aumento da atividade da LRRK2 quinase está associado à toxicidade neuronal em modelos de cultura celular (ver

Smith et al., 2006 Nature Neuroscience 9: 1231-1233) e compostos inibidores da quinase protegem contra a morte celular mediada por LRRK2 (Ver Lee et al., 2010

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Nat. Med. 16: 998-1000). Foi também relatado que o LRRK2 atua como um regulador negativo da depuração da alfa-sinucleína mediada pela microglia (ver Maekawa et al., 2016 BMC Neuroscience 17:77), sugerindo uma possível utilidade dos inibidores de LRRK2 na promoção da clearance de formas neurotóxicas de alfa-sinucleína no tratamento da doença de Parkinson.

[005]Células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) derivadas de pacientes com doença de Parkinson LRRK2 G2019S demonstraram apresentar defeitos no crescimento de neuritos e aumento da susceptibilidade à rotenona, que podem ser melhorados por correção genética da mutação G2019S ou tratamento de células com inibidores de molécula pequena de atividade de LRRK2 quinase (Ver Reinhardt et al., 2013 Cell Stem Cell 12:354-367). O dano ao DNA mitocondrial tem sido relatado como um marcador molecular de neurônios dopaminérgicos vulneráveis na substância nigra de espécimes de doença de Parkinson após a morte (ver Sanders et al. 2014 Neurobiol. Dis. 70: 214-223). Níveis aumentados de tais danos no DNA mitocondrial associados à mutação LRRK2 G2019S em iSPCs são bloqueados pela correção genética da mutação G2019S (ver Sanders et al., 2014 Neurobiol. Dis. 62: 381 -386).

[006]Evidências adicionais ligam a função e a disfunção da LRRK2 com as vias autofagia-lisossômicas (ver Manzoni e Lewis, 2013 Faseb J. 27:3234-3429). As proteínas LRRK2 conferem defeitos na autofagia mediada por chaperonas que afetam negativamente a capacidade das células de degradar a alfa-sinucleína (Orenstein et al., 2013 Nature Neurosci. 16 394-406). Em outros modelos celulares, os inibidores seletivos de LRRK2 mostraram estimular a macroautofagia (ver Manzoni et al., 2013 BBA Mol. Cell Res. 1833: 2900-2910). Estes dados sugerem que os inibidores de pequena molécula da atividade da quinase LRRK2 podem ter utilidade no tratamento de doenças caracterizadas por defeitos na proteostase celular que resultam de vias anormais de degradação autofágica/lisossomal incluindo formas de doença de Parkinson associadas a mutações GBA (Veja Swan and Saunders-Pullman 2013 Curr.

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Neurol. Neurosci Rep. 13: 368), outras alfa-sinucleinopatias, tauopatias, doença de Alzheimer (Ver Li et al., 2010 Neurodegen. Dis. 7: 265-271) e outras doenças neurodegenerativas (ver Nixon 2013 Nat. Med. 19: 983-997) e doença de Gaucher (ver Westbroek et al., 2011 Trends. Mol. Med. 17: 485-493). Como promotores da autofagia, os inibidores de molécula pequena da LRRK2 quinase podem também ter utilidade no tratamento de outras doenças incluindo diabetes, obesidade, doença do neurônio motor, epilepsia e alguns cânceres (Ver Rubinsztein et al., 2012). Nat.Rev. Drug Discovery 11: 709-730), doenças pulmonares, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica e fibrose pulmonar idiopática (ver Araya et al., 2013 Intern. Med. 52: 2295-2303) e doenças autoimunes como o lúpus eritematoso sistêmico (ver Martinez et al., Nature 533: 115-119, 2016). Como promotores de autofagia e processos fagocíticos, os inibidores de pequena molécula de LRRK2 quinase também podem ter utilidade em aumentar as respostas do hospedeiro no tratamento de uma variedade de infecções bacterianas intracelulares, infecções parasitárias e infecções virais, incluindo doenças como a tuberculose (ver Rubinsztein et al. 2012 Nat.Rev. Drug Discovery 11: 709-730; Araya et al., 2013 Intern. Med. 52: 2295-2303; Gutierrez, Biochemical Society Conference; Leucine rich repeat kinase 2: ten years along the road to therapeutic intervention, Henley Business School, UK 12 July 2016), HIV, virus do Nilo Ocidental e virus do chikungunya (ver Shoji-Kawata et al., 2013 Nature 494: 201-206). Os inibidores de LRRK2 podem ter utilidade no tratamento de tais doenças isoladas ou em combinação com fármacos que diretamente têm como alvo o agente infeccioso. Além disso, foram também observados níveis significativamente elevados de mRNA de LRRK2 em fibroblastos de pacientes com doença de Niemann-Pick Tipo C (NPC) em comparação com fibroblastos de sujeitos normais, o que indica que a função anormal de LRRK2 pode desempenhar um papel em distúrbios lisossômicos (Ver Reddy et al.., 2006 PLOS One 1 (1): e19 doi: 10.1371/journal.pone,0000019 Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 14/187

5/169 informações de suporte Dataset S1). Esta observação sugere que os inibidores de LRRK2 podem ter utilidade para o tratamento de NPC.

[007]Foi também relatado que a forma mutante G2019S associada à DP de LRRK2 aumenta a fosforilação da Tau associada à tubulina (ver Kawakami et al., 2012 PLoS ONE 7: e30834, doi 10.1371), e foram propostos modelos de doença nos quais a LRRK2 age a montante dos efeitos patogênicos da Tau e da alfa-sinucleina (ver Taymans & Cookson, 2010, BioEssays 32: 227-235). Em apoio a isto, a expressão de LRRK2 foi associada com agregação aumentada de Tau insolúvel, e aumento da fosforilação de Tau, em um modelo de camundongo transgênico (Veja Bailey et al., 2013 Acta Neuropath. 126: 809-827). A sobre-expressão da proteína mutante patogênica da PD LRRK2R1441G é relatada como causadora de sintomas da doença de Parkinson e hiperfosforilação da Tau em modelos de camundongos transgênicos (Ver Li, Y. et al. 2009, Nature Neuroscience 12:826-828). Portanto, estes dados sugerem que os inibidores de LRRK2 da atividade catalítica da quinase podem ser úteis para o tratamento de doenças da tauopatia caracterizadas por hiperfosforilação da Tau, como doença granulosa argirofílica, doença de Pick, degeneração corticobasal, paralisia supranuclear progressiva e demência frontotemporal hereditária e parkinsonismo ligado ao cromossomo 17 (FTDP-17) (Ver Goedert, M e Jakes, R (2005) Biochemica et Biophysica Acta 1739, 240-250). Além disso, os inibidores de LRRK2 podem ter utilidade no tratamento de outras doenças caracterizadas por níveis diminuídos de dopamina tais como sintomas de abstinência/recaída associados à toxicodependência (ver Rothman et al., 2008, Prog. Brain Res, 172: 385).

[008]0utros estudos também mostraram que a sobre-expressão da forma mutante G2019S de LRRK2 confere defeitos na proliferação e migração de células neuroprogenitoras da zona subventricular (SVZ) em modelos de camundongos transgênicos (Ver Winner et al., 2011 Neurobiol. Dis. 41: 706-716) e reduz a duração

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6/169 das neurites e os modelos de cultura de células ramificadas (ver Dachsel et al., 2010 Parkinsonism & Related Disorders 16: 650-655). Além disso, foi relatado que os agentes que promovem a proliferação e migração de células neuroprogenitoras SVZ também melhoram os resultados neurológicos após lesão isquêmica em modelos de acidente vascular cerebral em roedores (ver Zhang et al., 2010 J. Neurosci. Res. 88: 3275-3281). Estes resultados sugerem que os compostos que inibem a atividade anormal de LRRK2 podem ter utilidade para os tratamentos concebidos para estimular a restauração das funções do SNC após lesão neuronal, tal como acidente vascular cerebral isquêmico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinal.

[009]Também foram identificadas mutações no LRRK2 que estão clinicamente associadas à transição do comprometimento cognitivo leve (MCI) para a doença de Alzheimer (ver W02007149798). Estes dados sugerem que os inibidores da atividade da LRRK2 quinase podem ser úteis para o tratamento de doenças tais como a doença de Alzheimer, outras demências e distúrbios neurodegenerativos relacionados.

[010]A regulação anormal de proteínas LRRK2 normais também é observada em alguns tecidos de doenças e modelos de doenças. Mecanismos normais de controle traducional de LRRK2 por miR-205 são perturbados em alguns casos esporádicos de DP, onde reduções significativas nos níveis de miR-205 em amostras de cérebro de PD coincidem com níveis elevados de proteína LRRK2 nessas amostras (Veja Cho et al., 2013) Hum. Mol. Gen. 22: 608-620). Portanto, os inibidores de LRRK2 podem ser usados no tratamento de pacientes com DP esporádicos que possuem níveis elevados de proteínas LRRK2 normais.

[011]Em um modelo experimental da doença de Parkinson em saguis, observa-se uma elevação do mRNA de LRRK2 de um modo que se correlaciona com o nível de discinesia induzida por L-Dopa (ver Hurley, MJ et al., 2007 Eur. J. Neurosci.

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26:171-177). Isto sugere que os inibidores de LRRK2 podem ter utilidade na melhoria de tais discinesias.

[012]Níveis significativamente elevados de mRNA de LRRK2 foram relatados em amostras de biopsia muscular de paciente com ALS (ver Shtilbans et al., 2011 Amyotrophic Lateral Sclerosis 12: 250-256). Sugere-se que níveis elevados de atividade da LRRK2 quinase podem ser uma característica marcante da ALS. Portanto, esta observação indicou que o inibidor de LRRK2 pode ter utilidade para o tratamento da ALS.

[013]Existem também evidências que indicam que a atividade da LRRK2 quinase pode desempenhar um papel na mediação de respostas pró-inflamatórias microgliais (ver Moehle et al., 2012, J. Neuroscience 32:1602-1611). Essa observação sugere uma possível utilidade dos inibidores de LRRK2 no tratamento de mecanismos neuroinflamatórios anormais que contribuem com uma série de doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Parkinson, doença de Alzheimer, esclerose múltipla, demência induzida por HIV, esclerose lateral amiotrófica, acidente vascular cerebral isquêmico, traumatismo cranioencefálico e lesão medular espinhal. Algumas evidências também indicam que o LRRK2 desempenha um papel na regulação da diferenciação de progenitores neuronais in vitro (Ver Milosevic, J. et al., 2009 Mol. Neurodegen. 4: 25). Esta evidência sugere que os inibidores de LRRK2 podem ter utilidade na produção de células progenitoras neuronais in vitro para consequente aplicação terapêutica em tratamento com base em células de distúrbios do SNC.

[014]Tem sido relatado que pacientes com doença de Parkinson portadores da mutação LRRK2 G2019S apresentam maior frequência de cânceres não relacionados à pele, incluindo câncer renal, mama, pulmão, próstata, bem como leucemia mielogênica aguda (AML). Uma vez que existem evidências para mostrar que a mutação G2019S no LRRK2 aumenta a atividade catalítica do domínio LRRK2 quinase, os inibidores de molécula pequena de LRRK2 podem ter utilidade no

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8/169 tratamento de cânceres, por exemplo câncer do rim, câncer da mama, câncer do pulmão, câncer da próstata (por exemplo, tumores sólidos) e câncer no sangue (ver. AML; Saunders-Pullman et al., 2010, Movement Disorders, 25:2536-2541; Inzelberg et al., 2012 Neurology 78: 781-786). A amplificação e sobre-expressão de LRRK2 foi reportada em carcinomas renais papilares e de tireoide, onde a co-operatividade entre LRRK2 e o oncogene MET podem promover crescimento e sobrevivência da célula tumoral (ver Looyenga et al., 2011 PNAS 108: 1439-1444.) [015]Alguns estudos sugeriram que a associação genética de variantes comuns de LRRK2 com susceptibilidade a espondilite anquilosante (Ver Danoy P, et al., 2010. PLoS Genet.; 6 (12):e1001195; e infecção por lepra. (VerZhang FR, et al. 2009, N Engl J Med. 361:2609-18.) Estes achados sugerem que os inibidores de LRRK2 podem ter uma utilidade no tratamento de espondilite anquilosante e infecção por lepra.

[016]A meta-análise de três varreduras associados ao genoma da doença de Crohn identificou um número de loci associados com a doença, incluindo o locus contendo o gene LRRK2 (ver Barrett et al., Nature Genetics, 40: 955-962, 2008). Também se tem evidenciado que o LRRK2 é um gene alvo de IFN-γ que pode estar envolvido em vias de sinalização relevantes para a patogênese da doença de Crohn (Ver Gardet et al., 2010, J. Immunology, 185: 5577-5585). Estes resultados sugerem que os inibidores de LRRK2 podem ter utilidade no tratamento da doença de Crohn.

[017]Como um gene alvo IFN-γ, LRRK2 pode ainda desempenhar um papel nos mecanismos de células T que são subjacentes à outras doenças do sistema imunológico tais como a esclerose múltipla e artrite reumatoide. A potencial utilidade adicional dos inibidores de LRRK2 vem da constatação relatada de que os linfócitos B constituem uma população principal de células que expressam LRRK2 (ver Maekawa et al. 2010, BBRC 392: 431-435). Isto sugere que os inibidores de LRRK2 podem ser eficazes no tratamento de doenças do sistema imunológico para as quais

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9/169 a depleção de células B é ou pode ser eficaz em doenças tais como os linfomas, as leucemias, a esclerose múltipla (ver Ray et al., 2011 J. Immunol. 230: 109), a artrite reumatoide, o lúpus eritematoso sistêmico, a anemia hemolítica autoimune, a aplasia pura dos glóbulos vermelhos, a púrpura trombocitopênica idiopática (PTI), a síndrome de Evans, a vasculite, as doenças da pele bolhosas, o diabetes mellitus tipo 1, a síndrome de Sjõgren, a doença de Devic e as miopatias inflamatórias (Ver Engel et al., 2011 Pharmacol. Rev. 63: 127-156; Homam et al., 2010 J. Clin. Neuromuscular Disease 12: 91-102).

[018]Os documentos WO2016036586 e WO2017012576 divulgam uma série de compostos descritos como inibidores da LRRK2 quinase e sua utilização no tratamento de doenças, incluindo, entre outras, a doença de Parkinson. As necessidades não satisfeitas existem para novos tratamentos que irão interromper ou retardar a progressão da doença tanto em termos de sintomas motores (por exemplo, o controle da disfunção da marcha, o congelamento e o desequilíbrio postural) quanto dos sintomas não motores (por exemplo, demência associada à DP), reduzindo a necessidade de uso crescente de medicamentos sintomáticos e os efeitos adversos de longo prazo associados ao tratamento atualmente disponível (por exemplo, a discinesia e as flutuações on/ off) mantendo a independência por mais tempo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [019]A presente invenção proporciona, em um primeiro aspecto, compostos de Fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:

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em que

R¹ é selecionado a partir do grupo que consiste em CN, C1-3 alquil, C1-3 alcoxi, Ci-3haloalquil e C3 cicloalquil;

R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, halo, CN, Ci salquil e Ci-3haloalquil;

R³ é selecionado a partir do grupo que consiste em:

a)um anel heterocicil de 4-6 membros ligado a N, opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em:

halo, hidroxil,

Ci-6alquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: halo, hidroxil, Ci salcoxi e ciclopropil e

C1-6 alcoxil, cujo grupo alcoxil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil e C1-3 alcoxil,

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11/169 em que quando o anel heterociclil de 4 a 6 membros ligado ao N contém um átomo de nitrogênio substituível, o grupo de substituintes ainda inclui um anel heterociclil de 4 a 6 membros que é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil, com a condição de que 0 anel heterociclil de 4 a 6 membros seja ligado ao referido átomo de nitrogênio substituível;

b) NHR⁸; e

c) OR⁸;

R⁴ e R⁵ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, hidroxil e halo;

R⁶ é halo, hidroxil ou -(CH2)nSO2Ci-3alquil, em que n é 0, 1,2 ou 3;

R⁷ é selecionado a partir do grupo que consiste em

H,

Ciclopropil,

Ci-3alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil e C1-3 alcoxil,

-CH2CH2- e -CH2CH2CH2-, em que um carbono terminal se liga com 0 átomo de carbono ao qual 0 outro átomo de carbono terminal está ligado para formar um anel;

R⁸ é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em:

C4-6 cicloalquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil,

C1-3 alcoxil e

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Ci-3 alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo e hidroxil; e um heterociclil de 4 a 6 membros que contém nitrogênio ou oxigênio e é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil,

C1-3 alcoxil e

C1-3 alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo ou hidroxil.

[020]Em outro aspecto da invenção, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[021 ]Um outro aspecto da invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento ou na prevenção de doença de Parkinson, doença de Alzheimer, ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [022]Os aspectos acima e outros da presente invenção serão agora descritos em maiores detalhes com relação à descrição e metodologias fornecidas aqui. Deve ser apreciado que a invenção pode ser incorporada em diferentes formas e não deve ser interpretada como limitada às modalidades aqui estabelecidas. Pelo contrário, estas modalidades são fornecidas de modo que esta divulgação seja ampla e completa e completamente transmitirá o escopo da invenção aos especialistas na técnica.

[023]A terminologia utilizada na descrição da invenção aqui é para fins de descrever as modalidades particulares apenas e não pretende ser limitante da

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13/169 invenção. Tal como utilizado na descrição das modalidades da invenção e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma” e “o” destinam-se a incluir também as formas no plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Além disso, como usados aqui, “e/ ou” se refere e abrange qualquer uma e todas as combinações possíveis de um ou mais dos itens listados associados. Entender-se-á ainda que os termos “compreende” e/ou “que compreende”, quando utilizados nesta especificação, especificam a presença de características, números inteiros, etapas, operações, elementos e / ou componentes declarados, mas não excluem a presença ou adição de um ou mais outros recursos, inteiros, etapas, operações, elementos, componentes e / ou grupos dos mesmos.

[024]Geralmente, a nomenclatura aqui utilizada e os procedimentos laboratoriais em química orgânica, química medicinal, biologia aqui descritos são os bem conhecidos e comumente utilizados na técnica. A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm geralmente o mesmo significado que o normalmente entendido por um especialista na técnica à qual esta divulgação pertence. No caso em que há uma pluralidade de definições para um termo usado aqui, aqueles nesta seção prevalecem a menos que indicado de outra forma.

A.Definições [025]Como usado aqui, “alquil” se refere a uma cadeia de hidrocarboneto saturado monovalente tendo um número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, C1-3 alquil se refere a um grupo alquil com 1 a 3 átomos de carbono. Os grupos alquil podem ser lineares ou ramificados. Em algumas modalidades, grupos alquil ramificados podem ter um, dois ou três ramificações. Grupos alquil exemplares incluem, mas não estão limitados a, metil, etil e propil (n-propil e isopropil).

[026]Como usado aqui, “alcoxi” se refere ao grupo -O-alquil. Por exemplo, os grupos C1-6 alcoxi contêm de 1 a 6 átomos de carbono. Os grupos C1-3 alcoxi contêm

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14/169 de 1 a 3 átomos de carbono. Grupos alcóxi exemplificativos incluem, mas não estão limitados a, metoxi, etoxi, propoxi, butoxil, pentiloxi e hexiloxi.

[027]Como usado aqui, “cicloalquil” se refere a um anel de hidrocarboneto monocíclico saturado tendo um número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, C3-6 cicloalquil contém 3 a 6 átomos de carbono como átomos membros no anel. Exemplos de C3-6 cicloalquil incluem ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil e ciclohexil.

[028]Como usado aqui, “halogênio” se refere a flúor (F), cloro (Cl), bromo (Br), ou iodo (I). “Halo” se refere aos radicais de halogênio: fluoro (-F), cloro (-CI), bromo (Br), ou iodo (-I).

[029]Como aqui usado, “haloalquil” se refere a um grupo alquil, como definido acima, tendo um ou mais átomos de halogênio selecionados de F, Cl, Br, ou I, que são substituídos em qualquer um ou todos os átomos de carbono do grupo alquil substituindo átomos de hidrogênio ligados ao átomos de carbono e que podem ser iguais ou diferentes. Por exemplo, Cishaloalquil se refere a um grupo Ci-salquil substituído com um ou mais átomos de halogênio. Em algumas modalidades, “haloalquil” se refere a um grupo alquil substituído por um ou mais átomos de halogênio independentemente selecionados de F ou Cl. Grupos haloalquil exemplificativos incluem, mas não estão limitados a clorometil, bromoetil, trifluorometil e diclorometil.

[030]Como usado aqui, “heterociclil” ou “anel herterociclil” é um radical monovalente derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um anel monocíclico saturado, cujo anel consiste em átomos de carbono e 1 ou mais heteroátomos no anel, independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em uma modalidade, 0 anel consiste em anel átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos no anel independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em uma modalidade, os heteroátomos do anel são independentemente selecionados do nitrogênio ou do oxigênio. O número de átomos do anel pode ser

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15/169 especificado. Por exemplo, um “heterociclil de 4 a 6 membros” é um heterociclil como definido acima, que consiste em 4 a 6 átomos no anel. O termo anel heterocíclico ligado a N de 4 a 6 membros se refere a um heterociclil de 4 a 6 membros como definido acima, que contém pelo menos um átomo de nitrogênio no anel através do qual está ligado ao núcleo. Outros heteroátomos do anel (nitrogênio, oxigênio ou enxofre) podem estar adicionalmente presentes. O termo nitrogênio contendo heterociclil se refere a um anel heterociclil como definido acima que contém pelo menos um átomo de nitrogênio no anel. Outros heteroátomos do anel (nitrogênio, oxigênio ou enxofre) podem estar adicionalmente presentes. O termo oxigênio contendo heterociclil produzido deve ser interpretado de uma maneira análoga. Exemplos de anéis herterociclil incluem, mas não estão limitados a, azetidinil, tetrahidrofuranil (incluindo, por exemplo, tetrahidrofuran-2-il e tetrahidrofuran-3-il), pirrolidinil (incluindo, por exemplo, pirrolidin-1-il e pirrolidin-3-il), piperidinil (incluindo, por exemplo, piperidin-3-il e piperidin-4-il), morfolinil (incluindo, por exemplo, morfolin-

2-il e morfolin-4-il).

[031]Como usado aqui, “substituído” em referência a um grupo indica que um ou mais átomos de hidrogênio ligados a um átomo membro (por exemplo, átomo de carbono) dentro do grupo é substituído por um substituinte selecionado do grupo de substituintes definidos. Deve ser entendido que o termo “substituído” inclui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte e que a substituição resulta em um composto estável (isto é, um que não sofra espontaneamente transformação tal como por rearranjo, ciclização ou eliminação e que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento de uma mistura de reação). Quando se afirmar que um grupo pode conter um ou mais substituintes, um ou mais átomos do membro (conforme apropriado) dentro do grupo podem ser substituídos. Além disso, um átomo de um único membro dentro do grupo pode estar substituído com mais do que um substituinte desde que

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16/169 essa substituição esteja de acordo com a valência permitida do átomo. Exemplos de

anéis heterociclil substituídos incluem, mas não estão limitados a, o

OH

[032]Como usado aqui, “opcionalmente substituído” indica que um grupo particular pode ser não substituído, ou pode ser substituído conforme definido mais adiante.

[033]Como usado aqui, o termo “doença” se refere a qualquer alteração no estado do corpo ou de alguns órgãos, interrompendo ou perturbando o desempenho das funções e/ou causando sintomas como desconforto, disfunção, angústia ou até mesmo a morte para a pessoa afligida ou aqueles em contato com uma pessoa. Uma doença também pode incluir enfermidade, doença, enfermidade, distúrbio, transtorno, doença, queixa, interdisposição e/ou afetação.

[034]Como usado aqui, “tratar”, “tratando” ou “tratamento” em referência a uma doença significa: (1) melhorar a doença ou uma ou mais das manifestações biológicas da doença, (2) interferir com (a) um ou mais pontos na cascata biológica que leva ou é responsável pela doença ou (b) uma ou mais das manifestações biológicas da doença, (3) aliviar um ou mais dos sintomas ou efeitos associados à doença, (4) retardar a progressão da doença ou uma ou mais das manifestações biológicas da doença, e / ou (5) diminuir a probabilidade de gravidade de uma doença ou manifestações biológicas da doença. O tratamento sintomático se refere a um tratamento como referido nos pontos (1), (3) e (5). O tratamento modificador da doença se refere a um tratamento tal como definido nos pontos (2) e (4).

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17/169 [035]Como usado aqui, “prevenir”, “prevenindo” ou “prevenção” significa a administração profilática de um medicamento para diminuir a probabilidade do aparecimento ou retardar o início de uma doença ou sua manifestação biológica.

[036]Como usado aqui, “sujeito” significa um sujeito mamífero (por exemplo, cão, gato, cavalo, vaca, ovelha, cabra, macaco, etc.) e sujeitos humanos incluem sujeitos masculinos e femininos incluindo os neonatais, os infantis, os juvenis, os adolescentes, os adultos e os idosos, além de incluir várias raças e etnias incluindo, mas não se limitando a, branco, negro, asiático, índio americano e hispânico.

[037]Como usado aqui, “sais farmaceuticamente aceitáveis” se refere a um ou mais sais que retêm a atividade biológica desejada do composto em questão e apresentam efeitos toxicológicos indesejáveis mínimos. Estes sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados in situ durante o isolamento final e purificação do composto, ou fazendo reagir separadamente o composto purificado na sua forma de ácido livre ou base livre com uma base ou ácido adequado, respectivamente.

[038]Como usado aqui, “quantidade terapeuticamente eficaz” em referência a um composto da invenção ou outro agente farmaceuticamente ativo significa uma quantidade do composto suficiente para tratar ou prevenir a doença do paciente, mas baixa o suficiente para evitar efeitos colaterais sérios (em uma relação razoável risco/benefício) no âmbito de um julgamento médico sólido. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto variará com o composto particular escolhido (por exemplo, considerar a potência, eficácia e meia-vida do composto); a via de administração escolhida; a doença a ser tratada; a gravidade da doença a ser tratada; a idade, o tamanho, o peso e a doença física do paciente a ser tratado; a história médica do paciente a ser tratado; a duração do tratamento; a natureza da terapia concomitante; o efeito terapêutico desejado; e fatores semelhantes, mas podem no entanto ser rotineiramente determinados pelo especialista na técnica.

B.Compostos

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18/169 [039]Esta invenção fornece, em um primeiro aspecto, um composto de Fórmula (I) e os sais do mesmo:

Formula (I) em que em que

R¹ é selecionado a partir do grupo que consiste em CN, C1-3 alquil, C1-3 alcóxi, Ci-3haloalquil e C3 cicloalquil;

R³ é selecionado a partir do grupo que consiste em:

d)um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil,

Ci-6alquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil, Ci salcoxi e ciclopropil, e

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Ci-6 alcoxil, cujo grupo alcoxil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil e C1-3 alcoxil, em que quando 0 anel heterociclil de 4 a 6 membros ligado ao N contém um átomo de nitrogênio substituível, 0 grupo de substituintes ainda inclui um anel heterociclil de 4 a 6 membros que é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil, com a condição de que 0 anel heterociclil de 4 a 6 membros está ligado ao referido átomo de nitrogênio substituível;

e) NHR⁸; e

f) OR⁸;

R⁶ é halo, hidroxil ou -(CH2)nSO2Ci-3alquil, em que n é 0, 1,2, ou 3;

R⁷ é selecionado a partir do grupo que consiste em

H,

Ciclopropil,

-CH2CH2- e -CH2CH2CH2-, em que um carbono terminal se liga ao átomo de carbono ao qual 0 outro átomo de carbono terminal está ligado para formar um anel;

R⁸ é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em:

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Ci-3 alcoxil e

C1-3 alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo e hidroxil; e urn heterociclil de 4 a 6 membros que contém nitrogênio ou oxigênio e é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil,

C1-3 alcoxil e

[040]Em uma modalidade, R¹ é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-3 alquil e C1-3 alcoxil. Em uma modalidade, R¹ é selecionado a partir do grupo que consiste em metil ou metoxi. Em uma modalidade, R¹ é metil.

[041 ]Em uma modalidade, R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, halo e Ci-salquil. Em uma modalidade, R² é Ci-aalquil. Em uma modalidade, R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, halo e metil. Em uma modalidade, R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, flúor, cloro e metil. Em uma modalidade, R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, cloro e metil. Em uma modalidade, R² é selecionado a partir do grupo que consiste em cloro e metil. Em uma modalidade, R² é metil.

[042]Em uma modalidade R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil,

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C-i-ealquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: halo, hidroxil, Ci aalcoxi e ciclopropil,

C1-6 alcoxil, cujo grupo alcoxil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil, e em que 0 anel heterociclil de 4 a 6 membros ligado ao N contém um átomo de nitrogênio substituível, um outro anel heterociclil de 4 a 6 membros que é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil e com a condição de que 0 outro anel heterociclil de 4 a 6 membros está ligado ao referido átomo de nitrogênio substituível.

[043]Em uma modalidade R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil,

Ci-3alquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: halo, hidroxil e Ci salcoxi, e

C1-3 alcoxil, cujo grupo alcoxil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil.

[044]Em uma modalidade R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros selecionados a partir do grupo que consiste em morfolinil, azetidinil, pirrolidinil e piperazinil, opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo,

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22/169 hidroxil,

Ci-3alquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: halo, hidroxil e Ci aalcoxi, e

[045]Em uma modalidade R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros selecionados a partir do grupo que consiste em morfolinil, azetidinil, pirrolidinil e piperazinil, opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

hidroxil,

[046]Em uma modalidade R³ é um anel morfolinil ligado ao N opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

hidroxil,

[047]Em uma modalidade R³ é um anel morfolinil ligado ao N opcionalmente substituído com um substituinte Ci-salquil, cujo grupo alquil é opcionalmente

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23/169 substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: halo, hidroxil e Ci-3alcoxi.

[048]Em uma modalidade, R³ é morfolin-4-il.

[049]Em uma modalidade, R³ é 3-metil morfolin-4-il.

[050]Em uma modalidade, R³ é (2-hidroxietil)-morfolin-4-il.

[051 ]Em uma modalidade, R³ é 3-hidroxiI azetidin-1 -il [052]Em uma modalidade R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros contendo um átomo de nitrogênio substituível, substituído com um outro anel heterociclil de 4 a 6 membros que é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil e com a condição de que 0 outro anel heterociclil de 4 a 6 membros está ligado ao referido átomo de nitrogênio substituível.

[053]Em uma modalidade R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros contendo um átomo de nitrogênio substituível, substituído com um grupo oxetanil no referido átomo de nitrogênio substituível.

[054]Em uma modalidade, R⁴ e R⁵ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H e halo. Em uma modalidade, R⁴ e R⁵ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H e flúor. Em uma modalidade, R⁴ e R⁵ são ambos hidrogênio. Em uma modalidade, R⁴ é H e R⁵ é fluoro.

[055]Em uma modalidade, R⁶ é flúor ou hidroxil.

[056]Em uma modalidade, R⁶ é -SO2CH3.

[057]Em uma modalidade, R⁷ é H.

[058]Em uma modalidade, R⁶ é hidroxil e R⁷ é metil.

[059]Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo que é um composto de qualquer um dos exemplos 1 to a , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

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24/169 [060]Em uma modalidade, esta invenção se refere a um composto selecionado a partir de

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[061 ]Em uma modalidade a invenção fornece um composto selecionado a partir de

2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-morfolinopirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6il)piperidin-1 -il)etanol,

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2-(4-(1 -(6-(azetidin-1 -i l)-2-metoxi piri m idi n-4-i l)-5-meti 1-1 H-indazol-6-il)-3fluoropiperidin-1 -i l)etanol,

-(4-(5-cloro-1 - (6-(2-(h idroximeti l)morf oli no)-2-meti Ipi ri m idi n-4-i I)-1 H-indazol6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol, (4-(2-metil-6-(5-metil-6-(1 -(2-(metilsulf on i l)eti l)pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 il)pirimidin-4-il)morfolin-2-il)metanol,

-(3-f lúor-4-( 1 - (6-(2-(hidroximeti l)morf oli no)-2-meti Ipi ri m idi n-4-i l)-5-meti I-1Hindazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ol,

-f lúor-3-(4-( 1 - (6-(2-(hidroximeti l)morf oli no)-2-meti Ipi ri m idi n-4-i l)-5-meti I-1Hindazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol, e

2-flúor-3-(4-(1 -(6-(2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 Hi ndazol-6-i l)pi peridi n-1 -i l)propan-1 -ol;

ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[062]Além da forma de base livre dos compostos descritos aqui, a forma de sal dos compostos também está dentro do escopo da presente invenção. Os sais ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos aqui descritos podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação final do composto, ou reagindo separadamente o composto purificado na sua forma de base livre com uma base ou ácido adequado, respectivamente. Para revisões sobre sais farmacêuticos adequados, Berge etal, J. Pharm, Sei., 66,1 -19,1977; P L Gould, International Journal of Pharmaceutics, 33 (1986), 201-217; e Bighley etal, Enciclopédia of Pharmaceutical Technology, Marcel Dekker Inc, New York 1996, Volume 13, páginas 453-497.

[063]Certos compostos de fórmula (I) contêm um grupo básico e são, portanto, capazes de formar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis por tratamento com um ácido adequado. Ácidos adequados são ácidos inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis e ácidos orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis exemplares incluem cloridrato,

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26/169 bromidrato, nitrato, metilnitrato, sulfato, bisulfato, sulfamato, fosfato^ acetato, hidroxiacetato, fenilacetato, propionato, butirato, isobutirato, valerato, maleato, hidroximaleato, acrilato, fumarato, malato, tartrato, citrato, salicilato, paminosaliciclato, glicolato, lactato, heptanoato, ftalato, oxalato, succinato, benzoato, o-acetoxibenzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, mandelato, tanato, formato, estearato, ascorbato, palmitato, oleato, piruvato, pamoato, malonato, laurato, glutarato, glutamato, estolato, metanosulfonato (mesilato), etanosulfonato (esilato), 2-hidroxietanosulfonato, benzenosulfonato (besilato), p-aminobenzenosulfonato, p-toluenosulfonato (tosilato) e naftaleno-2sulfonato. Em algumas modalidades, os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ο L-tartrato, etanodisulfonato (edisilato), sulfato, fosfato, p-toluenosulfonato (tosilato), sal cloridrato, metanosulfonato, citrato, fumarato, benzenosulfonato, maleato, hidrobromato, L-lactato, malonato e S-camfor-10-sulfonato. Em determinadas modalidades, alguns destes sais forma solvatos. Em determinadas modalidades, alguns destes sais são cristalinos.

[064]Certos compostos de Fórmula (I) ou sais dos mesmos podem existir em formas estereoisoméricas (por exemplo, estes podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos). Os estereoisômeros individuais (enantiômeros e diastereoisômeros) e as misturas dos mesmos estão incluídos no escopo da presente invenção. As diferentes formas isoméricas podem ser separadas ou resolvidas umas das outras por meio de métodos convencionais, ou qualquer determinado isômero pode ser obtido por métodos sintéticos convencionais ou por sínteses estereoespecíficas ou assimétricas.

[065]Determinados compostos de Fórmula (I) são capazes de existir em formas tautoméricas. Por exemplo, determinados compostos exibem tautomerismo ceto-enol. Em alguns casos, apenas um de um par de formas tautoméricas se

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27/169 enquadra na Fórmula (I). Tais tautômeros alternativos também formam parte da invenção.

[066]A invenção ainda inclui compostos e sais marcados isotopicamente, que são idênticos aos compostos de Fórmula (I) ou os sais dos mesmos, mas pelo fato de que mais ou menos átomos são substituídos por um átomo com massa atômica ou número de massa diferente do atômico massa ou número de massa mais comumente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos de Fórmula (I) ou sais isótopos de dos mesmos hidrogênio, carbono, nitrogênio, flúor, tais como ³H, ¹¹C, ¹⁴C e ¹⁸F. Tal composto de fórmula (I) marcado isotopicamente ou os sais dos mesmos são úteis em ensaios de distribuição de fármaco e / ou substrato no tecido. Por exemplo, os isótopos ¹¹C e ¹⁸F são úteis em PET (tomografia por emissão de positrons). PET é útil em imagens do cérebro. Os compostos de Fórmula (I) marcados isotopicamente e os sais dos mesmos podem geralmente ser preparados realizando os procedimentos descritos abaixo, substituindo um reagente não marcado isotopicamente por um reagente marcado isotopicamente prontamente disponível. Em uma modalidade, os compostos de Fórmula (I) ou sais dos mesmos não são marcados isotopicamente.

[067]Determinados compostos de Fórmula (I) ou os sais dos mesmos podem existir na forma sólida ou líquida. No estado sólido, os compostos de Fórmula (I) ou sais podem existir na forma cristalina ou não cristalina, ou como uma mistura dos mesmos. Para compostos de Fórmula (I) ou sais que estão na forma cristalina, o especialista na técnica apreciará que os solvatos farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados em que moléculas de solvente são incorporadas na rede cristalina durante a cristalização. Os solvatos podem envolver solventes não aquosos, como etanol, isopropanol, DMSO, ácido acético, etanolamina e acetato de etila, ou podem envolver água como solvente que é incorporado na rede cristalina. Solvatos em que a água é o solvente que é incorporado na rede cristalina são tipicamente

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28/169 referidos como hidratos. Hidratos incluem hidrocarbonetos estequiométricos, bem como composições contendo quantidades variáveis de água.

[068]O especialista na técnica apreciará ainda que certos compostos de Fórmula (I), os sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos que existem na forma cristalina, incluindo os vários solvatos dos mesmos, podem apresentar polimorfismo (isto é, a capacidade de ocorrer em diferentes estruturas cristalinas). Essas diferentes formas cristalinas são tipicamente conhecidas como “polimorfos”. Polimorfos têm a mesma composição química, mas diferem em empacotamento, arranjo geométrico e outras propriedades descritivas do estado sólido cristalino. Polimorfos, portanto, podem ter diferentes propriedades físicas, tais como forma, densidade, dureza, deformabilidade, estabilidade e propriedades de dissolução. Polimorfos tipicamente exibem diferentes pontos de fusão, espectros de IV e padrões de difração de raios X, que podem ser usados para identificação. O especialista apreciará que diferentes polimorfos podem ser produzidos, por exemplo, alterando ou ajustando as condições de reação ou reagentes, utilizados na preparação do composto. Por exemplo, mudanças na temperatura, pressão ou solvente podem resultar em polimorfismos. Além disso, um polimorfo pode converterse espontaneamente em outro polimorfo sob certas condições.

[069]O especialista na técnica também apreciará que esta invenção pode conter várias formas deuteradas de compostos de Fórmula (I), ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Cada átomo de hidrogênio disponível ligado a um átomo de carbono pode ser substituído por um átomo de deutério. Uma especialista na técnica saberá como sintetizar formas deuteradas de compostos de Fórmula (I), ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Materiais de partida deuterados comercialmente disponíveis podem ser empregados na preparação de formas deuteradas de compostos de Fórmula (I) ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, ou estes podem ser sintetizados

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29/169 utilizando técnicas convencionais empregando reagentes deuterados (por exemplo, deutereto de alumínio e lítio).

C.Métodos de uso [070]Compostos de fórmula (I) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são inibidores da atividade de LRRK2 quinase e são, assim, capazes de terem uso potencial no tratamento de ou na prevenção das seguintes doenças neurológicas: Doença de Parkinson, doença de Alzheimer, demência (incluindo demência do corpo de Lewy e demência vascular, demência induzida pelo HIV), esclerose lateral amiotrófica (ALS), disfunção da memória relacionada com a idade, disfunção cognitiva ligeira, doença granulosa argirofílica, doença de Pick, degeneração corticobasal paralisia, demência frontotemporal hereditária e parkinsonismo ligados ao cromossomo 17 (FTDP-17), sintomas de abstinência/recidiva associados à dependência de drogas, discinesia induzida por LDopa, acidente vascular cerebral isquêmico, traumatismo cranioencefálico, lesão medular e esclerose múltipla. Outras doenças potencialmente tratáveis pela inibição dos distúrbios lisossomais (por exemplo, doença de Niemann-Pick Tipo C, doença de Gaucher), doença de Crohn, cânceres (incluindo de tireoide, renal (incluindo os renais papilares), mama, cânceres de pulmão e próstata, leucemias (incluindo leucemia mielogênica aguda (AML)) e linfomas), artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico, anemia hemolítica autoimune, aplasia eritrocitária pura, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), síndrome de Evans, vasculite, distúrbios cutâneos bolhosos, diabetes mellitus tipo 1, obesidade, epilepsia, doenças pulmonares, como doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar idiopática, síndrome de Sjõgren, doença de Devic, miopatias inflamatórias, espondilite anquilosante, infecções bacterianas (incluindo hanseníase), infecções virais (incluindo tuberculose, HIV, Vírus do Nilo Ocidental e vírus chikungunya) e infecções parasitárias.

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30/169 [071 ]Um aspecto da invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia. Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de ou na prevenção dos distúrbios acima (ou seja, as doenças neurológicas e outras doenças listadas acima). Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de ou na prevenção da doença de Parkinson. Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento da doença de Parkinson. Em outra modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de ou na prevenção da doença de Alzheimer. Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento da doença de Alzheimer. Em outra modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[072]Em uma modalidade, a invenção fornece 1-(4-(5-cloro-1-(6-(2(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento ou na prevenção de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[073]Em outra modalidade, a invenção fornece 1-(4-(5-cloro-1-(6-(2(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de doença de Parkinson.

[074]Em uma modalidade, a invenção fornece (4-(2-metil-6-(5-metil-6-(1-(2(metilsulf oni l)eti l)pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -i l)pi ri m idi n-4-i I) morfoli n-2-i I) metanol ou

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31/169 um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento ou na prevenção de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[075]Em outra modalidade, a invenção fornece (4-(2-metil-6-(5-metil-6-(1-(2(metilsulf oni l)eti l)pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -i l)piri m idi n-4-i I) morfoli n-2-i I) metanol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de doença de Parkinson.

[076]Um outro aspecto da invenção fornece o uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento ou para a prevenção dos distúrbios acima (ou seja, as doenças neurológicas e outras doenças listadas acima). Um outro aspecto da invenção fornece o uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de ou a prevenção de doença de Parkinson. Um outro aspecto da invenção fornece o uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de doença de Parkinson. Em outra modalidade, a invenção fornece o uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento ou para a prevenção de doença de Alzheimer. Em uma modalidade, a invenção fornece o uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de doença de Alzheimer. Em outra modalidade, a invenção fornece use of um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[077]Em uma modalidade, a invenção fornece o uso de 1-(4-(5-cloro-1-(6-(2(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento

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32/169 para o tratamento ou para a prevenção de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[078]Em outra modalidade, a invenção fornece o uso de 1-(4-(5-cloro-1-(6-(2(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento ou para a prevenção de doença de Parkinson.

[079]Ainda em outra modalidade, a invenção fornece o uso de 1-(4-(5-cloro1 - (6-(2-(hidróxi metil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-i I)-1 H-i ndazol-6-i l)pi peridi n-1 il)propan-2-ol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de doença de Parkinson.

[080]Em uma modalidade, a invenção fornece o uso de (4-(2-metil-6-(5-metil6-(1 - (2-(metilsulfon i l)eti I) pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -i l)pi ri m idi n-4-i I) morf olin-2il)metanol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento ou para a prevenção de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[081 ]Em outra modalidade, a invenção fornece o uso de (4-(2-metil-6-(5-metil6-(1 - (2-(metilsulfon i l)eti I) pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -i l)pi ri m idi n-4-i I) morf olin-2il)metanol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento ou para a prevenção de doença de Parkinson.

[082]Ainda em outra modalidade, a invenção fornece o uso de (4-(2-metil-6(5-metil-6-(1 -(2-(metilsulfonil)etil)piperidin-4-il)-1 H-indazol-1 -il)pirimidin-4-il)morfolin2-il)metanol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de doença de Parkinson.

[083]Um outro aspecto da invenção fornece um método de tratamento ou de prevenção de um distúrbio listado acima (ou seja, selecionado de doenças neurológicas e outras doenças listadas acima), que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente

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33/169 de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um outro aspecto da invenção fornece um método de tratamento ou na prevenção de doença de Parkinson, que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um outro aspecto da invenção fornece um método de tratamento da doença de Parkinson, que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um outro aspecto da invenção fornece um método de tratamento ou na prevenção de doença de Alzheimer, que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um outro aspecto da invenção fornece um método de tratamento de doença de Alzheimer, que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um outro aspecto da invenção fornece um método de tratamento de tuberculose, que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, o sujeito é humano.

[084]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS), que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[085]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS),

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34/169 que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[086]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[087]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[088]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto selecionado a partir de

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ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[089]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de 1-(4-(5cloro-1 - (6-(2-(hidróxi m eti l)morf oli no)-2-meti Ipiri m idi n-4-i I)-1 H-indazol-6-il)pi peridi n-1 il)propan-2-ol.

[090]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de 1-(4-(5cloro-1 - (6-(2-(hidróxi m eti l)morf oli no)-2-meti Ipiri m idi n-4-i I)-1 H-indazol-6-il)pi peridi n-1 il)propan-2-ol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[091 ]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de (4-(2-metil6-(5-metil-6-(1 - (2-(metilsulfon i l)eti I) pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -il)pi ri m idi n-4il)morfolin-2-il)metanol.

[092]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um humano em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de (4-(2-metil6-(5-metil-6-(1 - (2-(metilsulfon i l)eti I) pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -il)pi ri m idi n-4il)morfolin-2-il)metanol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[093]Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo que é um composto de qualquer um

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36/169 dos exemplos 1 a 43 ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, a invenção fornece um composto de Fórmula 1 que é um composto de qualquer um dos exemplos 1 a 43.

[094]No contexto da presente invenção, o tratamento da doença de Parkinson se refere ao tratamento da doença de Parkinson esporádica, e / ou da doença de Parkinson familiar. Em uma modalidade, o tratamento da doença de Parkinson se refere a um tratamento da doença de Parkinson familiar. Os pacientes com doença de Parkinson familiar são aqueles que expressam uma ou mais das seguintes mutações da LRRK2 quinase: Mutação G2019S, mutação N1437H, mutação R1441G, mutação R1441C, mutação R1441H, mutação Y1699C, mutação S1761 R, ou mutação I2020T. Em outra modalidade, pacientes com doença de Parkinson familiar expressam outras mutações de codificação (como G2385R) ou polimorfismos de nucleotídeo único não codificantes no locus LRRK2 que estão associados à doença de Parkinson. Em uma modalidade mais particular, a doença de Parkinson familiar inclui pacientes expressando a mutação G2019S ou mutação R1441G em LRRK2 quinase. Em uma modalidade, o tratamento da doença de Parkinson se refere ao tratamento da doença de Parkinson familiar inclui os pacientes expressando a LRRK2 quinase contendo a mutação G2019S. Em outra modalidade, os pacientes com doença de Parkinson familiar expressam níveis anormalmente elevados de quinase LRRK2 normal.

[095]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende a administração a um ser humano que expressa a mutação G2019S em LRRK2 quinase em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[096]Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de doença de Parkinson, que compreende testar em um ser humano para a mutação

G2019S na LRRK2 quinase e a administração ao ser humano que expressa a mutação

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G2019S em LRRK2 quinase em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[097]O tratamento da doença de Parkinson pode ser sintomático ou pode ser modificador da doença. Em uma modalidade, o tratamento da doença de Parkinson se refere a um tratamento sintomático. Em uma modalidade, o tratamento da doença de Parkinson se refere a um tratamento modificador da doença.

[098]Os compostos da presente invenção também podem ser úteis no tratamento de pacientes identificados como susceptíveis à progressão para parkinsonismo grave por meio de características mais sutis associadas à progressão da doença, como história familiar, déficits de olfação, constipação, defeitos cognitivos, indicadores da marcha ou indicadores biológicos de progressão da doença adquirida a partir de tecnologias moleculares, bioquímicas, imunológicas ou de imagem. Neste contexto, o tratamento pode ser sintomático ou modificador da doença.

[099]No contexto da presente invenção, o tratamento da doença de Alzheimer se refere ao tratamento da doença de Alzheimer esporádica e / ou da doença de Alzheimer familiar. O tratamento da doença de Alzheimer pode ser sintomático ou pode ser modificador da doença. Em uma modalidade, o tratamento da doença de Alzheimer se refere a um tratamento sintomático.

[0100]No contexto da presente invenção, o tratamento da demência (incluindo demência do corpo de Lewy e demência vascular, demência induzida pelo HIV), esclerose lateral amiotrófica (ALS), disfunção da memória relacionada à idade, comprometimento cognitivo leve, doença argirofílica do grão, doença de Pick, degeneração corticobasal, paralisia supranuclear progressiva, demência frontotemporal hereditária e parkinsonismo ligada ao cromossomo 17 (FTDP-17), esclerose múltipla, distúrbios lisossomais (por exemplo, doença de Niemann-Pick Tipo C, doença de Gaucher), doença de Crohn, cânceres (incluindo de tireoide, renal

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38/169 (incluindo câncer renal papilar), cânceres de mama, pulmão e próstata, leucemias (incluindo leucemia mielogênica aguda (AML)) e linfomas), artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico, anemia hemolítica autoimune, aplasia eritrocítica pura, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), Síndrome de Evans, vasculite, distúrbios cutâneos bolhosos, diabetes mellitus tipo 1, obesidade, epilepsia, doenças pulmonares, como doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar idiopática, síndrome de Sjõgren, doença de Devic, miopatias inflamatórias, espondilite anquilosante podem ser sintomáticos ou modificadores da doença. Em determinadas modalidades, o tratamento desses distúrbios se refere a um tratamento sintomático.

[0101 ]A invenção também fornece o uso de inibidores de LRRK2 na produção de células progenitoras neuronais in vitro para consequente aplicação terapêutica em tratamento à base de célula de distúrbios do SNC.

[0102]Quando um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é destinado ao uso no tratamento de doença de Parkinson, este pode ser usado em combinação com medicamentos alegadamente úteis como tratamentos sintomáticos da doença de Parkinson. Exemplos apropriados de tais outros agentes terapêuticos incluem L-dopa e agonistas de dopamina (por exemplo, pramipexol, ropinirol).

[0103]Quando um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é destinado ao uso no tratamento de doença de Alzheimer, este pode ser usado em combinação com medicamentos alegadamente úteis como ou tratamentos modificadores da doença ou tratamentos sintomáticos da doença de Alzheimer. Exemplos adequados de tais outros agentes terapêuticos podem ser agentes sintomáticos, por exemplo, aqueles conhecidos por modificar a transmissão colinérgica tais como agonistas do receptor muscarínico M1 ou moduladores alostéricos, antagonistas muscarínicos M2, inibidores da acetilcolinesterase (tais como tetrahidroaminoacridina, donepezil, cloridrato de rivastigmina e galantamina),

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39/169 receptor nicotínico agonistas ou moduladores alostéricos (tais como a7-agonistas ou moduladores alostéricos ou a432-agonistas ou moduladores alostéricos), agonistas do PPAR (tais como agonistas do PPARy), agonistas parciais do receptor 5-HT4, antagonistas do receptor 5-HTe, por exemplo, antagonistas dos receptores SB-742457 ou 5HT1A e antagonistas ou moduladores do receptor NMDA, ou agentes modificadores da doença, tais como inibidores da β ou γ-secretase, por exemplo, semagacestat, estabilizadores mitocondriais, estabilizadores de microtúbulos ou moduladores da patologia Tau, como inibidores da agregação Tau (por exemplo, azul de metileno e REMBER™), AINEs, por exemplo, tarenflurbil, tramiprosil; ou anticorpos por exemplo bapineuzumabe ou solanezumabe; proteoglicanos, por exemplo, tram i prosato.

[0104]Quando um composto de Fórmula (I) ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é destinado ao uso no tratamento de infecções bacterianas, infecções parasitárias ou infecções virais, este pode ser usado em combinação com medicamentos alegadamente úteis como tratamentos sintomáticos que diretamente têm como alvo o agente infeccioso.

[0105]Quando um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é usado em combinação com outros agentes terapêuticos, o composto pode ser administração sequencialmente ou simultaneamente por qualquer via conveniente.

[0106]A invenção também fornece, em outro aspecto, uma combinação que compreende um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo junto com um ou mais outros agentes terapêuticos.

[0107]As combinações referidas acima podem ser convenientemente apresentadas para utilização na forma de uma formulação farmacêutica e assim formulações farmacêuticas que compreendem uma combinação tal como definida acima juntamente com um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável

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40/169 compreendem um outro aspecto da invenção. Os componentes individuais de tais combinações podem ser administrados sequencialmente ou simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

[0108]Quando um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é usado em combinação com um segundo agente terapêutico ativo contra o mesmo estado da doença, a dose de cada composto pode diferir daquela quando o composto é usado isoladamente. As doses apropriadas serão prontamente apreciadas pelos especialistas na técnica.

D.Composição [0109]Compostos de fórmula (I) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos podem ser formulados em composições farmacêuticas antes da administração a um sujeito. De acordo com um aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável. De acordo com outro aspecto, a invenção fornece um processo para a preparação de uma composição farmacêutica que compreende a mistura de um composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0110]As composições farmacêuticas podem ser apresentadas em formas de dose unitária contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo por dose unitária. Tal unidade pode conter, por exemplo, 0,1 mg, 0,5 mg, ou 1 mg a 50 mg, 100 mg, 200 mg, 250 mg, 500 mg, 750 mg ou 1 g de um composto da presente invenção, dependendo da doença a ser tratada, a via de administração e a idade, o peso e condição a do sujeito, ou as composições farmacêuticas podem ser apresentadas em formas de dose unitária contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo por dose unitária. Em outras modalidades, as composições de dosagem unitária são aquelas contendo uma dose diária ou sub-dose, como descrito aqui, ou uma

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41/169 fração apropriada da mesma, de um ingrediente ativo. Além disso, tais composições farmacêuticas podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos pelos especialistas na técnica.

[0111]Uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) dependerá de uma série de fatores incluindo, por exemplo, a idade e o peso do destinatário pretendido, a condição precisa que requer tratamento e sua gravidade, a natureza da formulação e a via de administração e, em última instância, ficará a critério do médico atendente que prescrever o medicamento. No entanto, uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula (I) para o tratamento de doenças descritas na presente invenção estará geralmente na faixa de 0,1 a 100 mg / kg de peso corporal do receptor por dia e mais geralmente na faixa de 1 a 10 mg / kg de peso corporal por dia. Assim, para um mamífero adulto de 70 kg, a quantidade real por dia seria normalmente de 70 a 700 mg e esta quantidade pode ser administrada em uma dose única diária ou em um número de sub-doses diárias, tal como duas, três, quatro, cinco ou seis doses por dia. Ou a dosagem pode ser feita de forma intermitente, como uma vez a cada dois dias, uma vez por semana ou uma vez por mês. Uma quantidade terapeuticamente eficiente de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, etc., pode ser determinada como uma proporção da quantidade terapeuticamente eficiente do composto de Fórmula (I) per se. Prevê-se que doses semelhantes seriam apropriadas para o tratamento das outras doenças acima referidas.

[0112]As composições farmacêuticas da invenção podem conter um ou mais compostos de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem conter mais do que um composto da invenção. Por exemplo, em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem conter dois ou mais compostos de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Além disso, as composições farmacêuticas

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42/169 podem opcionalmente ainda compreender um ou mais ingredientes farmacêuticos ativos adicionais (APIs).

[0113]Como usado aqui, “excipiente farmaceuticamente aceitável” significa um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável envolvido em conferir forma ou consistência à composição farmacêutica. Cada excipiente pode ser compatível com os outros ingredientes da composição farmacêutica quando misturado de modo a evitar interações que reduzam substancialmente a eficácia do composto da invenção quando administrado a um sujeito e interações que resultem em composições farmacêuticas que não sejam farmaceuticamente aceitáveis.

[0114]Os compostos da invenção e o excipiente ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser formulados em uma forma de dosagem adaptada para administração ao sujeito pela via de administração desejada. Por exemplo, as formas de dosagem incluem aquelas adaptadas para (1) administração oral (compreendendo bucal ou sublingual) tais como comprimidos, cápsulas, comprimidos oblongos, pílulas, trociscos, pós, xaropes, elixires, suspensões, soluções, emulsões, sachês e hóstias; (2) administração parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa ou intradérmica), como soluções estéreis, suspensões e pós para reconstituição; (3) administração transdérmica, tal como emplastros transdérmicos; (4) administração retal tal como supositórios; (5) inalação nasal, como pós secos, aerossóis, suspensões e soluções; e (6) administração tópica (incluindo bucal, sublingual ou transdérmica), tais como cremes, pomadas, loções, soluções, pastas, sprays, espumas e gel. Tais composições podem ser preparadas por quaisquer métodos conhecidos na especialidade farmacêutica, por exemplo associando um ou mais compostos de Fórmula (I) aos carreadores ou excipientes.

[0115]As composições farmacêuticas adaptadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades distintas, tais como cápsulas ou comprimidos; pós ou grânulos; soluções ou suspensões em líquidos aquosos ou não

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43/169 aquosos; espumas ou chicletes comestíveis; ou emulsões líquidas óleo-em-água ou emulsões líquidas água-em-óleo.

[0116]Excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados podem variar dependendo da forma de dosagem particular escolhida. Adicionalmente, os excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados podem ser escolhidos para uma função particular que podem servir na composição. Por exemplo, certos excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser escolhidos pela sua capacidade para facilitar a produção de formas de dosagem uniformes. Certos excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser escolhidos pela sua capacidade para facilitar a produção de formas de dosagem estáveis. Certos excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser escolhidos pela sua capacidade de facilitar o transporte do composto ou compostos da invenção uma vez administrados ao sujeito de um órgão, ou uma porção do corpo, para outro órgão, ou uma porção do corpo. Certos excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser escolhidos pela sua capacidade de melhorar a adesão do paciente.

[0117]Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem os seguintes tipos de excipientes: diluentes, enchimentos, aglutinantes, desintegrantes, lubrificantes, deslizantes, agentes de granulação, agentes de revestimento, agentes molhantes, solventes, cossolventes, agentes de suspensão, emulsionantes, edulcorantes, aromatizantes, agentes mascaradores de sabor, corantes, agentes antiaglomerantes, umectantes, agentes quelantes, plastificantes, agentes de aumento da viscosidade, antioxidantes, conservantes, estabilizantes, surfactantes e agentes tamponantes. O especialista na técnica irá apreciar que certos excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem servir mais do que uma função e podem servir funções alternativas dependendo de quanto o excipiente está presente na formulação e que outros ingredientes estão presentes na formulação.

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44/169 [0118]Os especialistas na técnica têm o conhecimento e perícia na técnica para permitir que selecionem excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados em quantidades apropriadas para utilização na invenção. Além disso, existem vários recursos que estão disponíveis para o especialista na técnica que descrevem excipientes farmaceuticamente aceitáveis e podem ser úteis na seleção de excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados. Exemplos incluem Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited) e The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).

[0119]As composições farmacêuticas da invenção são preparadas utilizando técnicas e métodos conhecidos pelos especialistas na técnica. Alguns dos métodos geralmente utilizados na técnica são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).

[0120]Em um aspecto, a invenção é dirigida para uma forma de dosagem oral sólida, tal como um comprimido ou cápsula que compreende um suplemento terapeuticamente eficiente de um composto da invenção e um diluente ou enchimento. Diluentes e enchimentos adequados incluem lactose, sacarose, dextrose, manitol, sorbitol, amido (por exemplo, amido de milho, amido de batata e amido prégelatinizado), celulose e seus derivados (por exemplo, celulose microcristalina), fosfato de cálcio sulfato e cálcio dibásico. A forma de dosagem sólida oral pode ainda compreender um aglutinante. Aglutinantes adequados incluem amido (por exemplo, amido de milho, amido de batata e amido pré-gelatinizado), gelatina, acácia, alginato de sódio, ácido algínico, tragacanto, goma guar, povidona e celulose e seus derivados (por exemplo, celulose microcristalina). A forma de dosagem sólida oral pode ainda compreender um desintegrante. Desintegrantes adequados incluem crospovidona, amidoglicolato de sódio, croscarmelose, ácido algínico e carboximetilcelulose de

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45/169 sódio. A forma de dosagem sólida oral pode ainda compreender um lubrificante. Os lubrificantes adequados incluem ácido esteárico, estearato de magnésio, estearato de cálcio e talco.

[0121]Em determinadas modalidades, a presente invenção é direciona para uma composição farmacêutica que compreende 0,01 a 1000 mg de um ou mais de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e 0,01 a 5 g de um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0122]Em outra modalidade, a presente invenção é dirigida a uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença neurodegenerativa que compreende um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, a presente invenção é direcionada para uma composição farmacêutica para o tratamento da doença de Parkinson que compreende um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

E.Processo de preparação de compostos [0123]O processo a ser utilizado na preparação do composto de fórmula (I) ou os sais dos mesmos aqui descritos depende dos compostos desejados. Tais fatores, tais como a seleção do substituinte específico e várias localizações possíveis do substituinte específico desempenham todos um papel no caminho a ser seguido na preparação dos compostos específicos desta invenção. Esses fatores são facilmente reconhecidos por um especialista na técnica.

[0124]Em geral, os compostos da presente invenção podem ser preparados por técnicas convencionais conhecidas e por processos conhecidos análogos aos mesmos. Os métodos gerais para preparar o composto de fórmula (I) são apresentados abaixo. Todo o material de partida e reagentes descritos nos esquemas experimentais gerais abaixo estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por métodos conhecidos pelos especialistas na técnica.

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46/169 [0125]O especialista na técnica apreciará que se um substituinte aqui descrito não for compatível com os métodos sintéticos aqui descritos, o substituinte pode ser protegido com um grupo de proteção adequado que é estável nas condições da reação. O grupo de proteção pode ser removido em um ponto adequado na sequência da reação para proporcionar um composto intermediário ou alvo desejado. Grupos de proteção adequados e os métodos para proteger e desproteger diferentes substituintes utilizando tais grupos de proteção adequados são bem conhecidos dos especialistas na técnica; exemplos dos quais podem ser encontrados em T. Greene and P. Wuts, Protecting Groups in Chemical Synthesis (3a ed.), John Wiley & Sons, NY (1999). Em alguns casos, um substituinte pode ser especificamente selecionado para ser reativo sob as condições de reação usadas. Nestas circunstâncias, as condições de reação convertem o substituinte selecionado em outro substituinte que é útil como um composto intermediário ou é um substituinte desejado em um composto alvo.

[0126]O Esquema Geral 1 fornece exemplos de processos de síntese para a preparação de compostos da presente invenção.

Esquema Geral 1

A = Cl or I

[0127]O Esquema Geral 1 fornece uma síntese exemplificativa para preparar o composto 3 que representa o composto de fórmula (I). No Esquema 1, Ri, R2, R3, R4, Rs, Re e Rzsão como definidos na Fórmula I.

[0128]A etapa (i) pode ser uma reação de substituição fazendo reagir 0 composto 1 com composto 2 utilizando uma base apropriada tal como CS2CO3 em um

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47/169 solvente apropriado tal como N, N-dimetilformamida (DMF) sob temperatura adequada tal como cerca de 100 °C para fornecer o composto 3.

[0129]A etapa (i) pode alternativamente ser uma reação de acoplamento utilizando reagentes apropriados tais como Cui e N, N'-dimetil-ciclo-hexano-1,2diamina na presença de base adequada tal como K3PO4 em um solvente adequado tal como tolueno na temperatura adequada tal como condição de refluxo para fornecer 0 composto 3.

[0130]A etapa (i) pode alternativamente ser uma reação de acoplamento utilizando reagentes apropriados tais como Pdzdbas e di-terc-butil (2' 4' 6'-tri-isopropil[1,1’-bifenil]-2-il) fosfina na presença de base adequada, tal como terc-butóxido de sódio, em um solvente adequado, tal como tolueno, a uma temperatura adequada, tal como 100 ^QC, para fornecer 0 composto 3.

Esquema Geral 2

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48/169 [0131 ]0 Esquema Geral 2 fornece uma síntese exemplar para a preparação do intermediário 1. O grupo de proteção, Pi, pode ser qualquer grupo de proteção apropriado, por exemplo, tetrahidro-2H-piran-2-il (THP), (trimetilsilil)etoxi)metil (SEM) ou Acetil (Ac).

[0132]O intermediário 5 pode ser obtido na etapa (i) ao fazer reagir material de partida 4 com reagentes apropriados tal como DHP na presença de ácidos apropriados tal como TsOH em solventes apropriados tal como DCM sob temperaturas apropriadas tal como 20 °C a 40 °C.

[0133]Etapa (ii) é uma reação de acoplamento cruzado entre intermediário 5 e ácido borônico ou ésteres usando catalisadores de paládio apropriados tal como Pd(dppf)Cl2 na presença de bases apropriadas tal como Na2COa em solventes apropriados tal como 1,4-dioxano em temperaturas apropriadas tal como 60 ^QC a 100 ^QC.

[0134]A etapa (iii) envolve a reação com reagentes de oxidação apropriados tal como H2O2em um solvente apropriado tal como THF sob temperaturas apropriadas tal como -60 °C a -10 °C para fornecer o intermediário 7.

[0135]A Etapa (iv) é uma reação com um agente de redução apropriado tal como hidrogênio na presença de catalisadores apropriados tais como Pd/C em solventes polares tal como MeOH em temperaturas apropriadas tal como 25 °C a 80 °C.

[0136]A Etapa (v) pode ser uma reação de oxidação com oxidantes tal como DMP em solventes apropriados tal como DCM sob temperaturas apropriadas tal como 0 °C a 25 °C para gerar o intermediário 8.

[0137]As Etapas (vi) e (viii) envolve a reação com um fluridizer tal como DAST em solventes apropriados tal como DCM sob temperaturas apropriadas tal como -78 °C a 0 °C.

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49/169 [0138]As Etapas (viii) (x) e (xi) são as reações de desproteção. Tipicamente, o intermediário é reagido com ácidos apropriados tais como HCI em solventes apropriados tal como 1,4-dioxano sob temperaturas apropriadas tal como 25 °C a 40 °C para gerar o intermediário 1.

Esquema Geral 3

N

A = Clorl [0139]Esquema Geral 3 fornece uma síntese exemplar para a preparação do intermediário 2.

[0140]Quando R3 é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros ou NHR⁷; a etapa (i) pode ser uma reação com diferentes aminas usando bases apropriadas tal como TEA em solventes apropriados tal como EtOH sob temperaturas apropriadas tal como 25 °C a 100 °C para fornecer 0 intermediário 2.

[0141]Quando R3 é OR⁷, etapa (i) é uma reação de acoplamento. O álcool (R⁷OH) é desprotonado por uma base apropriada tal como hidreto de sódio em solvente apropriado tal como THF em uma temperatura apropriada tal como 0 °C para gerar 0 intermediário de transição. Então, 0 intermediário 12 é reagido com 0 intermediário de transição em solvente apropriado tal como THF em temperatura apropriada tal como temperatura ambiente.

EXEMPLOS

Procedimentos Experimentais Gerais [0142]As seguintes descrições e exemplos ilustram a invenção. Estes exemplos não se destinam a limitar 0 escopo da presente invenção, mas sim fornecer orientações ao químico especialista para preparar e utilizar os compostos, composições e métodos da presente invenção. Embora sejam descritas modalidades

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50/169 particulares da presente invenção, o químico especialista apreciará que várias alterações e modificações podem ser feitas sem se afastar do escopo e da invenção.

[0143]Os nomes químicos dos compostos descritos no presente pedido foram geralmente criados a partir de ChemDraw Ultra (ChambridgeSoft) e / ou seguem geralmente o princípio da nomenclatura IUPAC.

[0144]Aquecimento de misturas de reação com irradiações de micro-ondas foi realizado em um micro-ondas Smith Creator (adquirido da Personal Chemistry, Forboro/MA, agora propriedade da Biotage), um Emrys Optimizer (adquirido da Personal Chemistry) ou um Explorer (fornecido pela CEM Discover, Matthews/NC).

[0145]Técnicas convencionais podem ser usadas aqui para o desenvolvimento de reações e purificação dos produtos dos Exemplos.

[0146]Referências nos Exemplos abaixo relacionadas com a secagem de camadas ou fases orgânicas podem se referir a secar a solução sobre sulfato de magnésio ou sulfato de sódio e filtrar o agente de secagem de acordo com as técnicas convencionais. Os produtos podem geralmente ser obtidos removendo o solvente por evaporação sob pressão reduzida.

[0147]A purificação dos compostos nos exemplos pode ser realizada por métodos convencionais como cromatografia e / ou recristalização utilizando solventes adequados. Os métodos cromatográficos são conhecidos do especialista e incluem, por exemplo, cromatografia em coluna, cromatografia rápida, HPLC (cromatografia líquida de alta eficiência) e MDAP (auto-preparação direcionada para massa, também referida como purificação por LCMS direcionada para massa). A MDAP é descrita, por exemplo, em W. Goetzinger et al, Int. J. Mass Spectrom., 2004, 238, 153-162.

[0148]Sílica Gel GF Analtech e placas de camada fina de Silica Gel 60 F-254 da E. Merck foram usadas para cromatografia em camada fina. Tanto a cromatografia rápido como a por gravidade foram realizadas em silica gel Kieselgel 60 (malha de

230-400) da E. Merck. A HPLC preparativa foi realizada utilizando um Sistema

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Preparativo Gilson utilizando uma coluna de fase reversa Luna 5u C18 (2) 100A eluindo com um gradiente 10-80 (0,1% FA em acetonitrila / 0,1% de FA aquoso) ou um gradiente 10-80 (acetonitrila /água). O sistema CombiFlash usado para purificação neste pedido foi comprado da Isco, Inc. A purificação CombiFlash foi realizada utilizando uma coluna de S1O2 pré-empacotada, um detector com comprimento de onda UV a 254 nm e solventes mistos.

[0149]Os termos “CombiFlash”, “Biotage®”, “Biotage 75” e “Biotage SP4®”, quando usados aqui, se referem aos sistemas de purificação automática disponíveis comercialmente, usando cartuchos de silica gel pré-empacotados.

[0150]Gs compostos finais foram caracterizados com LCMS (condições listadas abaixo) ou RMN. Os espectros de ¹H RMN ou ¹⁹FNMR foram registados utilizando um espectretro Bruker Avance 400MHz. CDCh é deuterioclorofórmio, DMSO-cfeé hexadeuteriodimetilsulfóxido e CD3OD é tetradeuteriometanol. Os desvios químicos são apresentados em partes por milhão (ppm) abaixo do padrão interno tetrametilsilano (TMS) ou do solvente NMR. As abreviaturas para os dados de RMN são as seguintes: s = singuleto, d = dupleto, t = tripleto, q = quarteto, m = multipleto, dd = duplo dupleto, dt = duplo tripleto, app = aparente, br = largo. J indica a constante de acoplamento de RMN medida em Hertz.

[0151]Todas as temperaturas são relatadas em graus Celsius. Todas as outras abreviaturas são descritas no ACS Style Guide (American Chemical Society, Washington, DC, 1986).

[0152]A estereoquímica absoluta pode ser determinada por métodos conhecidos de um especialista na técnica, por exemplo, raios X ou Dicroísmo Circular Vibracional (VCD).

[0153]Quando um enantiômero ou diasteroisômero é descrito e a estereoquímica absoluta de um centro quiral não é conhecida, 0 uso de “*” no centro quiral denota que a estereoquímica absoluta do centro quiral não é conhecida, ou seja,

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52/169 o composto como desenhado pode ser ou um único enantiômero R ou um único enantiômero S. Onde a estereoquímica absoluta em um centro quiral de um enantiômero ou um diasteroisômero é conhecida, um símbolo de cunha ou (-^) ou um símbolo de cunha hachurada (...........) é usado, conforme apropriado, sem o uso de “*” no centro quiral.

[0154]Quando um isômero geométrico ou cis-trans é descrito e a configuração absoluta do isômero não é conhecida, o uso de “*” em um dos átomos relevantes para o isomerismo geométrico ou cis-trans denota que a configuração absoluta em ou em torno desse o átomo não é conhecido, ou seja, o composto como extraído pode ser um único isômero cis ou um único enantiômero trans.

[0155]Nos procedimentos a seguir, após cada material de partida, a referência a um intermediário é tipicamente fornecida. Isto é fornecido apenas para assistência ao químico especialista. O material de partida pode não ter sido necessariamente preparado a partir do lote referido.

[0156]Condições de LCMS:

1) Método ácido:

a. Instrumentos: HPLC: Waters UPC2 e MS: Qda

Fase móvel: água contendo 0,1% de FA / 0,1% de MeCN

Coluna: ACQUITY UPLC BEH Cis 1,7 pm 2,1 x 50 mm e 1,7 pm 2,1 x 100 mm Detecção: MS e detector em arranjo de fotodiodo (PDA)

b. Instrumentos: HPLC: Shimadzu e MS: 2020

Fase móvel: água contendo 0,1% de FA / 0,1% de MeCN

Coluna: Sunfire Cis 5 pm 50 x 4,6 mm e Sunfire Cis 5 pm 150 x 4,6 mm Detecção: MS e detector em arranjo de fotodiodo (PDA)

2) Condições básicas:

Instrumentos: HPLC: Agilent 1260 e MS: 6120

Fase móvel: 0,1%NH4OH em Η2θ/0,1% NH4OH em ACN

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Coluna: Xbridge Cis 5 μιτι 50 x 4,6 mm e Xbridge Cie 5 pm 150 x 4,6 mm

Detecção: MS e detector em arranjo de fotodiodo (DAD)

Condições de Prep-HPLC

Instrumento: Instrumento da Waters

Coluna: Coluna Xbridge Prep CisOBD (10 pm, 19 x 250 mm) ,Xbrige prep Cie 10 pm OBD TM 19 x 150 mm, Sunfire Prep Cw 10 x 25 Omm 5 pm, XBRIDGE Prep Cis 10 x 150 mm 5 pm,etc

Método ácido:

Fase móvel: água contendo 0,1% de TFA / acetonitrila.

Método básico:

Fase móvel: água contendo 0,1% NFkOH/acetonitrila.

Prep-HPLC quiral:

Thar SFC Prep 80 (TharSFC ABPR1, TharSFC SFC Prep 80 CO2 Bomba,Bomba TharSFC Cossolvente, trocador de calor e resfriador TharSFC e banho de circulação, medidor de fluxo de massa TharSFC, misturador estático TharSFC, módulo de injeção TharSFC, detector de UV Gilson, módulo de coleta de fração TharSFC

Análise de HPLC Quiral:

Instrumento: Thar SFC Prep 80 (TharSFC ABPR1, Bomba TharSFC SFC Prep 80 CO2, Bomba TharSFC Cossolvente, trocador de calor e refrigerador TharSFC e Banho de circulação, medidor de fluxo de massa TharSFC, misturador estático TharSFC, módulo de injeção TharSFC, detector de UV Gilson, módulo de coleta de fração TharSFC

Coluna e fase móvel: são descritos nos exemplos abaixo.

Abreviaturas e fontes de recursos [0157]As seguintes abreviaturas e recursos são usados abaixo:

Ac - acetil

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MeCN-acetonitrila

Atm - atmosfera

Aq - aquosa

BINAP-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1 '-binaftil

Boc - tert-butiloxicarbonil

B0C2O - di-tert-butil dicarbonato

Bn - benzil t-Bu - tert-butil cone - concentrado

DAST- Ν,Ν-dietilaminoenxofre trifluoreto

DCE- 1,2-dicloroetano

DCM - diclorometano

DEA- dietanolamina

DMEDA- Λ/,/V-Dimetiletilenodiamina

Dess-Martin - 1,1,1 -Tris(acetiloxi)-1,1 -dihidro-1,2-benziodoxol-3-(1 H)-ona

DHP - 3,4-dihidro-2/-/-pirano

DIBAL-H - di-isobutilaluminio hidreto

DIEA - N,N-di-isopropiletilamina

DIPEA - N, ΛΖ-di-isopropiletilamina

DMA - A/, /V-dimetilacetamida

DMAP - 4-dimetilaminopiridina

DMEDA— N,N'-dimetiletilenodiamina

DMF - A/, /V-dimetilformamida

DMP - periodinano de Dess-Martin

DMSO - dimetil sulfóxido

DPPF - 1,1 '-bis(difenilfosfino)ferroceno

EA - acetato de etila

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EDC - 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida cloridrato

EDCI- 3-(etiliminometilenoamino)-N,N-dimetilpropan-1 -amina

EtOH/EtOH - etanol

EtzO - éter dietilico

EtOAc - acetato de etila

EtaN - trietilamina

FA - ácido fórmico

HEP - heptano

Hex - hexano

HOAc - ácido acético

HATU - 2-(1 /-7-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil urânio hexafluorofosfato

HOBT - hidroxibenzotriazol

IPA - álcool isopropilico 'PrOH/iPrOH - álcool isopropilico m-CPBA - ácido meta-cloroperoxibenzoico

MOMCI - éter monoclorodimetil

Me - metil

MeOH - metanol

MsCI - cloreto de metanosulfonil

NaHMDS-bis(trimetilsilil)amida de sódio

NIS - /V-iodosuccinimida

NMP - 1 -metil-2-pirrolidona

NMO - 4-metilmorfolina 4-óxido

PE - éter de petróleo

PMB - p-metoxibenzil

Pd2(dba)3 - T ris(dibenzylideneacetone)dipalladium

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Pd(dppf)Cl2 - complexo de 1,1 '-Bis(difenilfosfino)ferrocenopaládio(ll)dicloreto diclorometano

PhaP - trifenilfosfina

PhNTfa- N,N-bis-(Trifluorometanosulfonil)anilina

PPTS -p-toluenosulfonato de piridinio

PTSA - ácido p-toluenosulfônico rt /RT- temperatura ambiente

Rt - tempo de retenção sat. - saturado

SEM-CI - 2-(trimetilsilil)etoximetil cloreto

SFC - Cromatografia Fluida Supercritica

TBAI - iodeto de tetrabutilamônio

TBDPSCI — tert-Butil(cloro)difenilsilano

TEA - trietilamina

TFA - ácido trifluoroacético

TFAA - anidrido trifluoroacético

THF - tetrahidrofurano

TLC - cromatografia em camada fina

TsCI-4-toluenosulfonil cloreto

Ácido TsOH- p-toluenosulfônico

Descrição 1

6-Bromo-5-metil-1 H-indazol (D1)

[0158]À uma solução de 5-bromo-2,4-dimetilanilina (15,0 g, 75,0 mmol) em clorofórmio (150 mL) foi adicionado AC2O (15,0, 150 mmol) sob banho de gelo. KOAc (8,00 g, 82,5 mmol), 18-crown-6 (10,0 g, 37,5 mmol) e isoamil nitreto (26,3 g, 225 mmol) foram adicionados. A mistura foi submetida a refluxo durante 36 horas. A

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57/169 mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (500 mL). A solução orgânica foi lavada com água (100 mL), seca sobre NazSCk e concentrada. O resíduo foi dissolvido em THF (100 mL) e NaOH (4 M, 40,0 mL, 160 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 h. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAc (400 mL) e água (200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2ÔO4 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc a partir de 10: 1 a 5: 1) para gerar o composto do título (5,1 g, rendimento de 32%) como um sólido laranja.

[0159]¹ H RMN (300 MHz, CDCh): δ 10,20 (br s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 2,50 (s, 3H).

Descrição 2

6-Bromo-5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-indazol (D2)

THP [0160]À uma solução de 6-bromo-5-metil-1 H-indazol (5,10 g, 24,2 mmol) em DCM seco (120 mL) foi adicionado DHP (4,10 g, 48,4 mmol), TsOH (0,800 g, 4,80 mmol) e Mg2SCU(5,0 g) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida até 35 ^QC e agitada por uma hora. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi lavado com uma solução de NazCOs (10%, 100 mL), seca sobre NazSCk e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc a partir de 50: 1 a 20: 1) para gerar o composto do título (6,0 g, rendimento de 84%) como um sólido laranja.

[0161]¹H RMN (300 MHz, CDCh): δ 7,90 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 5,63 (dd, J = 9,6, 3,0 Hz, 1H), 4,05-4,00 (m, 1H), 3,78-3,70 (m, 1H), 2,58-2,44 (m, 4H), 2,20-2,02 (m, 2H), 1,78-1,65 (m, 3H).

[0162]LCMS: (fase móvel: 5-95% CH3CN), Rt = 2,19 min em 3 min; MS Calculada: 294; MS encontrada: 295 [M + H]⁺.

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Descrição 3

Tert-butil 4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-indazol-6-il)-5,6dihidropiridina-1 (2/-/)-carboxilato (D3)

THP / N [0163]À uma suspensão de 6-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 Hindazol (5,50 g, 18,6 mmol), íerí-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6dihidropiridina-1 (2H)- carboxilato (6,90 g, 22,3 mmol) e NazCOs (4,90 g, 46,5 mmol) em dioxano (150 mL) e água (130 mL) foi adicionado Pd(dppf)Cl2 (658 mg, 0,900 mmol). A mistura foi desgaseificada com N2 por 3 vezes e, em seguida, agitada a 80 ^QC durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e 0 resíduo foi particionado entre EtOAc (300 mL) e água (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2ÔO4 e concentradas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc =10:1) para gerar 0 composto do título (7,30 g, rendimento de 99%) como um sólido marrom claro.

[0164]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 7,92 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 5,67 (dd, J = 9,6, 2,8 Hz, 1H), 5,63 (br s, 1H), 4,07-4,01 (m, 3H), 3,78-3,70 (m, 1H), 3,67-3,64 (m, 2H), 2,62-2,53 (m, 1H), 2,45-2,39 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,18-2,12 (m, 1H), 2,07-2,02 (m, 1H), 1,81-1,73 (m, 2H), 1,69-1,61 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Descrição 4

Trans-tert-but\\ 3-hidroxi-4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-indazol-6il)oioeridina-1-carboxilato (D4)

Boc. ,^.OH N

N γ

I trans

THP I N

N ?N [0165]À uma solução de íerf-butil 4-(5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 Hindazol-6-il)-5,6-dihidropiridina-1 (2H)-carboxilato (21,0 g, 52,83 mmol) em THF seco

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59/169 (200 mL) foi adicionada solução de BH3-THF (1 M, 211 mL, 211 mmol) sob N2 e abaixo de 5 ^QC como temperatura interna. A mistura foi aquecida até rt e agitada durante a noite. TLC mostrou que 0 material de partida foi consumido. Depois de resfriado até 0 ^QC, NaOH (aq, 2 M, 79 mL, 158 mmol) foi adicionado sob gotejamento cuidadosamente e a temperatura interna foi mantida abaixo de 10 °C. Então, H2O2 (30%, 20,0 mL, 151 mmol) foi adicionado sob gotejamento e a temperatura interna foi mantida ainda abaixo de 10 ^QC. A mistura foi agitada em temperatura ambiente, por uma hora, em seguida, extinta com 150 mL de solução a 10% de Na2Ô2O3 sob banho de gelo e agitada por 20 min. O solvente foi removido e 0 resíduo foi extraído com EtOAc (200 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2ÔO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc a partir de 10: 1 a 2: 1) para gerar 0 composto do título (16,5 g, rendimento de 75%) como um sólido branco.

[0166]¹H RMN (300 MHz, CDCh): δ 7,92 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 5,70-5,67 (m, 1H), 4,49-4,44 (m, 1H), 4,30-4,17 (m, 1H), 4,05-3,91 (m, 2H),, 3,82-3,72 (m, 1H), 3,04-2,96 (m, 1H), 2,86-2,72 (m, 2H), 2,63-2,53 (m, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,212,16 (m, 1H), 2,07-2,02 (m, 1H), 1,99-1,67 (m, 6H), 1,52 (s, 9H).

Descrição 5 (cis)-tert-Butil 3-flúor-4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-indazol-6-il) oioeridina-1-carboxilato (D5)

[0167]À uma solução de (trans)- íerí-Butil 3-hidroxi-4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2Hpiran-2-il)-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (24,5 g, 59,0 mmol) em DCM seco (200 mL) foi adicionado DAST (38,0 g, 236 mmol) sob N2 a -65 ^QC. A mistura foi gradualmente aquecida até rt e agitada por 2 hrs. A mistura de reação foi cuidadosamente vertida em solução aquosa de Na2COs (10%, 300 mL) e agitada por

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60/169 min. A camada orgânica foi separada e a aquosa foi extraída com DCM (250 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SCU e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc =10:1) para gerar o composto do título (11,8 g, rendimento de 48%) como um sólido branco.

[0168]¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 7,92 (s, 1H) ,7,52 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 5,74-5,67 (m, 1H), 4,80-4,59 (m, 2H), 4,21 (br s, 1H), 4,07-3,99 (m, 1H), 3,80-3,71 (m, 1H), 3,25-3,19 (m, 1H), 2,89-2,79 (m, 2H), 2,65-2,51 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,19-2,15 (m, 1H), 2,15-2,04 (m, 1H), 1,93-1,88 (m, 1H), 1,80-1,74 (m, 5H), 1,52 (s, 9H).

[0169]LCMS ( 5-95% CH₃CN): Rt = 2,25 min em 3 min; MS Calculada: 417; MS encontrada: 418 [M + H]⁺.

Descrição 6 ((cis)-6-(3-FluoroDioeridin-4-il)-5-metil-1-(tetrahidro-2H-Diran-2-il)-1 H-indazol ÍD6}

[0170]À uma solução de (c/s)-íerf-butil 3-flúor-4-(5-metil-1-(tetrahidro-2Hpiran-2-iI)-1 H-indazol-6-il) piperidina-1 -carboxilato (1,60 g, 3,84 mmol) em CH3OH (10 mL) foi adicionado HCI/CH3OH (5 M, 20 mL). A mistura foi agitada em 0 ^QC por 1 h. A mistura de reação foi vertida em solução sat. de NaHCCb (200 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por coluna Cis (5%-60% CH3CN em água) para gerar 0 composto do título (600 mg, rendimento de 49%) como um óleo amarelo.

[0171]LCMS (fase móvel: 5-95% de acetonitrila em 2,5 min): Rt = 1,46 min; MS Calculada: 317; MS encontrada: 318 [M + H]⁺.

Descrição 7

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61/169 (c/s)-6-(3-FluoroDÍDeridin-4-il)-5-metil-1 H-indazol cloridrato (D7)

[0172]Uma mistura de (c/s)-tert-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran2-il)-1 H-indazol-6-il) piperidina-1-carboxilato (2,50 g, 6,00 mmol) em HCI/dioxano (6 mol/L, 40 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 6 hrs. A mistura de reação foi resfriada até 0 ^QC e filtrada. O sólido foi lavado com 1,4-dioxano (5 mL) frio para obter o composto do título (1,4 g, rendimento de 100%) como um sólido branco que foi usado na etapa seguinte diretamente.

[0173]LC-MS (5-95% CH₃CN): Rt = 1,73 min; MS Calculada.:233, MS encontrada: 234 [M + H]⁺.

Descrição 8 (c/s)-tert-Butil 3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)Dioeridina-1-carboxilato (D8) BocN ^/Sy F cis [0174]À uma solução de (c/s)-6-(3-fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol cloridrato (500 mg, 2,14 mmol) em CH3OH (5 mL) e H2O (1 mL) foi adicionado KOH (242 mg, 4,29 mmol) e (Boc)20 (700 mg, 3,21 mmol) sob banho de gelo. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 hrs. A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 χ 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas e purificadas por cromatografia em coluna (PE: EtOAc = 20: 1) para gerar 0 composto do título (180 mg, rendimento de 25%) como um óleo incolor.

[0175]¹H RMN (300 MHz, CDCh): δ 9,98 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,56 (s, 1H),

7,39 (s, 1H), 4,76-4,54 (m, 2H), 4,27-4,10 (m, 1H), 3,25-3,14 (m, 1H), 2,91-2,76 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,97-1,84 (m, 1H), 1,71 -1,62 (m, 1H), 1,51 (s, 9H).

Descrições 9 e D10

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62/169 (c/s)-íerí-Buti I 3-f lúor-4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-i I) piperidina-1 -carboxilato (isômero cis único 1) (D9) e (c/s)-tert-Butil 3-flúor-4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidina1-carboxilato (isômero cis único 2) (D10)

single cis isomer 1 single cis isomer 2

D9 D10 [0176] (cis)-tert-ButiI 3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (140 mg, 0,420 mmol) foi separado por prep.HPLC quiral com o método (Chiralpak IB 5 pm 20*250nm, Hex: i-PrOH = 80: 20, Fluxo: 20mL/min, 205 nm, T = 30 ^QC) para gerar (c/s)-tert-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (enantiômero 1) (D9) (68 mg, rendimento de 48%) como um sólido branco e (czs)-tertButil 3-flúor-4-(5-metil-1/-/-indazol-6-il)piperidina-1-carboxilato (enantiômero 2) (D10) (47 mg, rendimento de 33%) como um sólido branco.

Isômero cis único 1, D9:

[0177]LCMS (fase móvel: 5-95% Acetonitrila em 2,5 min): Rt = 1,64 min; MS Calculada: 333 MS encontrada: 332 [M - H]’.

[0178]¹H RMN (300 MHz, CDCh): δ 10,07 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,56 (s, 1H),

7,39 (s, 1H), 4,78-4,53 (m, 2H), 4,32-4,12 (m, 1H), 3,26-3,13 (m, 1H), 2,93-2,75 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 1,94-1,79 (m, 1H), 1,69-1,60 (m, 1H), 1,49 (s, 9H).

[0179]HPLC quiral (Chiralpak IB 5 pm 4,6 χ 250 mm, Fase: Hex/IPA = 80/20, vazão: 1 mL/min, temperatura: 30°C); Rt = 6,142 min, 100% ee.

Isômero cis único 2, D10:

[0180]LCMS: (fase móvel: 5-95% Acetonitrila em 2,5 min), Rt = 1,64 min; MS Calculada: 333 MS encontrada: 332 [Μ - H]’.

[0181]¹H RMN (300 MHz, CDCh): δ 10,45 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,56 (s, 1H),

7,39 (s, 1H), 4,75-4,55 (m, 2H), 4,26-4,16 (m, 1H), 3,24-3,17 (m, 1H), 2,90-2,74 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,93-1,87 (m, 1H), 1,70-1,61 (m, 1H), 1,50 (s, 9H).

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63/169 [0182]HPLC quiral (Chiralpak IB 5 pm 4,6 χ 250 mm, Fase: Hex/IPA = 80/20, vazão: 1 mL/min, temperatura: 30 ^QC): Rt = 7,671 min, 100% ee

Descrição 11

6-((3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-il)-5-metiI-1 H-indazol (D11)

F

J* cis H

N single cis isomer 1 [0183]À uma solução de íerí-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina1-carboxilato (D9, 100 mg, 0,30 mmol), em MeOH (1,5 mL) foi adicionado HCI/MeOH (5M, 1 mL) a 0 ^QC. A mistura de reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e solução de NazCOa (5 mL) foi adicionada. Esta foi extraída com EtOAc por 3 vezes. A fase orgânica foi combinada, seca, filtrada e concentrada para gerar o produto em bruto como um sólido branco.

[0184]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 0,49 min; MS Calculada.: 233, MS encontrada: 234 [M + H]⁺.

Descrição 12

6-((3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-il)-5-metiI-1 H-indazol (D12)

J* cis h

N single cis isomer 2 [0185]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D11 partindo de uma suspensão de 6-((3R,4S)-3-fluoropiperidin-4-il)-5metil-1 H-indazol (D10), 1-bromo-2-fluoroetano, K2CO3 em DMF.

[0186]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 0,29 min; MS Calculada.:279,1, MS encontrada: 280,2 [M + H]⁺.

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Descrição 13

4,6-Di-iodo-2-metoxioirimidina (D13)

N^N

Λ JL [0187]À uma solução de Nal (1,10 g, 7,34 mmol) em HI (55%, 7,5 mL) foi adicionada 4,6-dicloro-2-metoxipirimidina (1,00 g, 5,59 mmol). A mistura foi aquecida até 40 ^QC e agitada por 10 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, vertida em água gelada (50 mL) e filtrada para gerar o sólido bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc = 10: 1) para gerar o produto do título (640 mg, rendimento de 31,7%) como um sólido branco.

[0188]¹ H RMN (400 MHz, CDCh): δ 7,85 (s, 1H), 4,00 (s, 3H).

Descrição 14

4-(6-iodo-2-metoxioirimidin-4-il)morfolina (D14):

o' n^n

Γ j£ <^O [0189]Uma mistura de 4,6-di-iodo-2-metoxipirimidina (1,00 g, 2,80 mol) e morfolina (240 mg, 2,80 mol) em EtsN (850 g, 8,40 mmol) e EtOH (20 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solução de reação foi vertida em NH4CI sat. (50 mL) e extraída com EtOAc (3x60 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia (PE:EtOAc = 3:1) para gerar 0 produto do título (850mg, rendimento: 95%) como um sólido branco.

[0190]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt = 0,89 min; MS Calculada.:321,0, MS encontrada: 322,2 [M + H]⁺.

Descrição 15

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65/169 (F?)-4-(6-iodo-2-metoxiDirimidin-4-il)-3-metilmorfolina (D 15):

i [0191 ]À uma solução de4,6-di-iodo-2-metoxipirimidina (725 mg, 2,00 mmol) e (R)-3-metilmorfolina cloridrato (202 mg, 2,00 mmol) em i-PrOH/THF (10 mL/10 mL) foi adicionado DIEDA (776 mg, 6 mmol). A mistura foi agitada em 80 ^QC durante a noite, em seguida, concentrada para gerar o resíduo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (PE:EtOAc=7:1) para gerar o produto do título como um óleo incolor (500 mg, rendimento: 75%) que foi usado diretamente na etapa seguinte.

Descrição 16 tert-butil cis-3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5metil-1 H-indazol-6-il)oioeridina-1 -carboxilato (D16):

single unknown isomer 1 [0192]À uma mistura de íerí-butil cis-3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6il)piperidina-1-carboxilato (D9, 80 mg, 0,24 mmol) e (F?)-4-(6-iodo-2-metilpirimidin-4il)-3-metilmorfolina (87 mg, 0,26 mmol) em tolueno/THF (5 mL/1 mL) foram adicionados AAA/²-dimetiletano-1,2-diamina (32 mg, 0,31 mmol), Cul (51 mg, 0,24 mmol) e K3PO4 (110 mg, 0,48 mmol). A mistura de reação foi agitada a 90 ^QC por 2 horas sob N2, diluída com ΝΗ3Ή2Ο aq. (50 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3 ). As camadas orgânicas combinadas foram secas, filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia (PE:EtOAc = 5:1) gerou 0 produto do título como um óleo branco (125 mg, rendimento: 96%).

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66/169 [0193]LC-MS [fase móvel: 40% de água (0,1% FA) e 60% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9,0 min]: Rt = 4,56 min; MS Calculada.: 540,6, MS encontrada: 541,4 [M + H]⁺.

Descrição 17 c/s-f3F?)-4-(6-(6-(3-fluoroDioeridin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-1-il)-2metoxioirimidin-4-il)-3-metilmorfolina cloridrato (D17);

single unknown isomer 1 [0194]À uma solução de íerf-butil cis-3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3metilmorfolino) pi ri m idi n-4-i l)-5-meti I-1 H-i ndazol-6-i I) pi peridi na-1 -carboxilato (D16, 125 mg, 0,200 mmol) em EtOAc (5 mL) foi lentamente gotejado HCLEtOAc (2,00 mL, 3,50 mol/L) em banho de gelo. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente, por 30 min, então, concentrada para gerar o produto em bruto como um sólido branco (80 mg).

[0195]LC-MS [fase móvel: 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min]: Rt = 4,83 min; MS Calculada.:440,5, MS encontrada: 441,3 [M + H]⁺.

Descrição 18 cis-2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino)Dirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)Dioeridin-1-il)acetato de etila (D18):

single unknown isomer 1 [0196]À uma solução de c/s-(3F?)-4-(6-(6-(3-fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-1-il)-2-metoxipirimidin-4-il)-3-metilmorfolina cloridrato(D17, 75 mg, 0,17

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67/169 mmol)) em DMF (2 mL) foram adicionados Et₃N (52 mg, 0,51 mmol) e etil 2bromoacetato (57 mg, 0,34 mmol) em banho de gelo. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas, diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL x 2), seca sobre Na2ÔO4 anidro e concentrada para gerar o produto do título como um sólido branco (90 mg).

[0197]LC-MS [fase móvel: 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt = 1,54 min; MS Calculada.:526,6, MS encontrada: 527,3 [M + H]⁺.

Descrição 19 tert-butil cis-3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5metil-1 H-indazol-6-il)Dioeridina-1 -carboxilato (D19):

single unknown isomer 2 [0198]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D16 partindo de cis-3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6il)piperidina-1 -carboxilato (D10), (F?)-4-(6-iodo-2-metilpirimidin-4-il)-3-metilmorfolina em tolueno/THF, N1 ,N2-dimetiletano-1,2-diamina, Cui e K3PO4 a 90 ^QC.

[0199]LC-MS [fase móvel: 40% de água (0,1% FA) e 60% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9,0 min]: Rt = 4,48 min; MS Calculada.:540,6, MS encontrada: 541,3 [M + H]⁺.

Descrição 20 c/s-ó3F?)-4-(6-(6-(3-fluoroDii3erídin-4-il)-5-rnetil-1 H-indazol-1-il)-2-metoxioirimidin-4-il)-3-metilmorfolina cloridrato (D20):

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[0200]0s compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D17 partindo de tert-butil cis-3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6((R)-3-metilmorfolino) pi ri m idi n-4-i l)-5-meti I-1 H-i ndazol-6-i l)pi peridina-1 -carboxilato (D19).

[0201]LC-MS [fase móvel: 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9,0 min]: Rt = 4,87 min; MS Calculada.:440,5, MS encontrada: 441,3 [M + H]⁺.

Descrição 21 cis-2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)Dioeridin-1-il)acetato de etila (D21):

single unknown isomer 2 [0202]0s compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D18 partindo de c/s-(3F?)-4-(6-(6-(3-fluoropiperidin-4il)-5-metil-1 H-indazol-1-il)-2-metoxipirimidin-4-il)-3-metilmorfolina cloridrato e 2bromoacetato de etila (D20).

[0203] LC-MS [fase móvel: 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt = 1,54 min; MS Calculada.:526,6, MS encontrada: 527,3 [M + H]+.

Descrições 22-50 [0204]0s compostos abaixo foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D13, D16, D17 e D18.

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Entr ada	Estrutura	Solvente/ba se	Caracterização
D 22	/ 0 N / o F VU / N -r-J I	i-PrOH & THF/DIPEA	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 60% de água (0,1% FA) e 40% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,43 min; MS Calculada.:335,0, MS encontrada: 336,0 [M + H]⁺.
D 23	N v—N 0 I	i-PrOH &THF/NEt₃	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 0,45 min; MS Calculada.: 305, MS encontrada: 306,2 [M + H]⁺.
D 24	%(R) \—N Z0 ΖΓ \VN / N 1	i-PrOH /DIEDA
D 25	\-N ZT \VN / N _=-=/ I	i-PrOH &THF/DIPE A	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 60% de água (0,1% FA) e 40% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 0,99 min; MS

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			Calculada.:319,0, MS encontrada: 320,2 [M + H]⁺.
D 26	/ 0 /-X N / o F v-^N. / BOC_Sk,/\_F ^N / N Xsss/ I Cis / aX'ⁿ single unknown isomer 1	Tolueno&T HF/DMEDA	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,81 min; MS Calculada.: 526,3, MS encontrada: 527,4 [M + H]⁺.
D 27	/ yvO HnOt^^{F N}\^/ I Cis / single unknown isomer 1	EtOAc	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,16 min; MS Calculada.: 438,2, MS encontrada: 439,4 [M + H]⁺.
D 28	/ 0 >—κ vvO ^NyX II I Cis / ⁰ single unknown isomer 1	DMF/NEt₃	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,56 min; MS Calculada.: 512,3, MS encontrada: 513,4 [M + H]⁺.

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D 29	/ 0 r x \—N / o B°C^_klx\».F N / --- single unknown isomer 2		LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 6,93 min; MS Calculada.: 526,3, MS encontrada: 527,3 [M + H]⁺.
D 30	/ 0 r—\ yvO hnot^fI Cis / * Τι ' single unknown isomer 2		LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,16 min; MS Calculada.: 438,2, MS encontrada: 439,4 [M + H]⁺.
D 31	/ 0 ,—< N / o F vn / '-’Osf V single unknown isomer 2	DMF/NEt₃	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 4,82 min; MS Calculada.: 512,3, MS encontrada: 513,3 [M + H]⁺.
D 32	I >—N r o 7 \VN ... / N„ T +=⁷ I Cis / - AA? single unknown isomer 1	tolueno/TH F/ DMEDA	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1%

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			FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 7,02 min; MS Calculada.: 540,3, MS encontrada: 541,3 [M + H]⁺.
D 33	/ YvO hnot^f v/ ; I Cis / - XX/ single unknown isomer 1	EtOAC	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 4,92 min; MS Calculada.: 440,2, MS encontrada: 441,3 [M + H]⁺.
D 34	/ 0 !--- \—N Γ o n L^cisl ' ⁰ N single unknown isomer 1	Et₃N/ DMF	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,61 min; MS Calculada.: 526,3, MS encontrada: 527,3 [M + H]⁺.
D 35	/ y—N / ^s o Boc^.^.T N Γ 'ISW N„ T I Cis / - XX? single unknown isomer 2	tolueno&TH F/ DMEDA	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em

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			9,0 min, Rt = 4,50 min; MS Calculada.: 540,3, MS encontrada: 541,3 [M + H]⁺.
D 36	/ 0 /—-\ y_VO hnOT^f A I Cis / - single unknown isomer 2	EtOAc	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 4,91 min; MS Calculada.: 440,2, MS encontrada: 441,3 [M + H]⁺.
D 37	/ V_na^{f r}V single unknown isomer 2	NEt₃/DMF	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,61 min; MS Calculada.: 526,3, MS encontrada: 527,3 [M + H]⁺.
D 38	-N Γ V) ir y Boc^./^F N Γ JU^^Nsingle unknown isomer 1	tolueno/DM EDA	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 50% de água (0,1% FA) e 50% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) in 3,0 min, Rt = 1,57 min; MS Calculada.: 510, MS encontrada: 511,4 [M + H]⁺.

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D 39	YvO hnCY^f V XX^N single unknown isomer 1	EtOAc
D 40	YvO N r X^ 11 1 Cis 1 / ⁰ single unknown isomer 1	NEt₃/DMF	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 6,15 min; MS Calculada.: 496, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.
D 41	\^-N Γ Y) fí Xy-N j Boc._klx-\..F N Γ r JU^ⁿ single unknown isomer 2	Tolueno/ DMEDA	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 7,66 min; MS Calculada.: 510, MS encontrada: 511,3 [M + H]⁺.
D 42	YvO hnOT^F ν' I Cis / XX? single unknown isomer 2	EtOAc
D 43	YvO N r X^ 1! 1 Cis 1 / ⁰ single unknown isomer 2	NEt₃/DMF	LC-MS: fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em

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			9,0 min, Rt = 6,15 min; MS Calculada.: 496, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.
D 44	\^N / o Βοο^,,χχ.»_F N / Y--' VV single unknown isomer 1	Tolueno&T HF/ N¹,N²dimetiletano -1,2diamina	LC-MS: fase móvel: 50% de água (0,1% FA) e 50% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min, Rt = 7,41 min; MS Calculada.:524,6, MS encontrada: 525,4 [M + H]⁺.
D 45	vvO hnot^f ν' I Cis / single unknown isomer 1	EtOAc	LC-MS: fase móvel: 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min, Rt = 4,70 min; MS Calculada.:424,5, MS encontrada: 425,3 [M + H]⁺.
D 46	II \| Cis Γ ⁰ single unknown isomer 1	NEt₃/DMF	LC-MS: fase móvel: 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,54 min; MS

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			Calculada.:510,6, MS encontrada: 511,3[M + H]⁺.
D 47	N / o í! / Boc^,,/\*,F N / '—' ΪΜ 7^ single unknown isomer 2	tolueno&TH F/ N¹,N²dimetiletano -1,2diamina	LC-MS: fase móvel: 40% de água (0,1% FA) e 60% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 4,89 min; MS Calculada.:524,6, MS encontrada: 525,4 [M + H]⁺.
D 48	s Wx vvO hnot^f ν' I Cis / single unknown isomer 2	EtOAc	LC-MS: fase móvel: 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 9,0 min, Rt = 4,76 min; MS Calculada.:424,5, MS encontrada: 425,3 [M + H]⁺.
D 49	II I Cis / ⁰ single unknown isomer 2	DMF/Et₃N	LC-MS: fase móvel: 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min, Rt = 1,54 min; MS Calculada.:510,6, MS encontrada: 511,3[M + H]⁺.

Descrição 50

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77/169 tert-butil 4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-indazol-6-il)oioeridina-1 carboxilato (D50):

? I J^HP [0205]À uma solução de tert-butil 4-(5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 Hindazol-6-il)-5,6-dihidropiridina-1 (2H)-carboxilato (80 g, bruto) em MeOH (2 L) sob H2 foi adicionado Pd/C (10 g, 12%/W). A mistura de reação foi desgaseificada por 3 vezes e agitada em r.t por 2d. A mistura foi filtrada e 0 filtrado foi concentrado para gerar 0 produto em bruto como um sólido branco. (65,8 g) [0206]LC-MS [fase móvel: fase móvel: de 30% de água (0,1% FA) e 70% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt = 0,63 min; MS Calculada.:399,2, MS encontrada: 400,5 [M + H]⁺.

Descrição 51

5-metil-6-(oioeridin-4-il)-1 H-indazol (D51):

[0207]À uma solução de tert-butil 4-(5-metil-1-(tetrahid-ro-2H-piran-2-il)-1 Hindazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (55,4 g, 139 mmol) em MeOH (150 mL) foi adicionado HCI/MeOH (5 M, 200 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, em seguida, concentrada, tratada com uma solução de Na2COs e basificada com uma solução de NaOH até pH > 12. A mistura foi filtrada para gerar 0 produto desejado como um sólido branco. (29,3 g, rendimento de = 98%) [0208]LC-MS [fase móvel: fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt = 0,85 min; MS Calculada.:215, MS encontrada: 216 [M + H]⁺.

Descrição 52 tert-butil 4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)oioeridina-1 -carboxilato (D52):

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[0209]À uma solução agitada de 5-metil-6-(piperidin-4-il)-1 H-indazol (1,00 g, 4,64 mmol) e EtsN (930 mg, 9,20 mmol) em CH2CI2 (80 mL) foi adicionado B0C2O (1,00 g, 4,60 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 3 h. LCMS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada até secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com PE:EtOAc = 3:1 para gerar 0 produto desejado como um sólido branco (900 mg, rendimento: 61%).

[0210]¹ H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ 12,77 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 4,12-4,07 (m, 2H), 3,17 (s, 1H), 2,94-2,84 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,77 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 1,55-1,47 (m, 2H), 1,43 (s, 9H).

Descrição 53

1-(4-(6-iodo-2-metoxioirimidin-4-il)morfolin-2-il)etanona (D53):

0^/ [0211 ]À uma solução de4,6-di-iodo-2-metoxipirimidina (869 mg, 2,40 mmol) e 1-(morfolin-2-il)etanona (400 mg, 2,40 mmol) em THF/EtOH=1/1 (30 mL) foi adicionado DIEA (1,24 g, 9,60 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 h. TLC (PE:EtOAc = 5:1) mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada até secura e 0 resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com PE:EtOAc = 10:1 para gerar 0 produto do título como um sólido branco (650 mg, rendimento: 74%).

[0212]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% FA) e50%de CH3CN (0,1%

FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) in 2,6 min]: Rt = 1,13 min;

MS Calculada: 363,0, MS encontrada: 364,0 [M + H]⁺.

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79/169

Descrição 54 tert-butil 4-(1 -(6-(2-acetilmorfolino)-2-metoxioirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol6-il)oioeridina-1 -carboxilato (D54):

[0213]À uma solução agitada de 1 -(4-(6-iodo-2-metoxipirimidin-4-il)morfolin-2il)etanona (576 mg, 1,60 mmol) e tert-butil 4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1carboxilato (500 mg, 1,60 mmol) em tolueno (30 mL) foram adicionados Cul (453 mg, 2,03 mmol), K3PO4 (672 mg, 3,20 mmol) e N,N'-dimetiletilenodiamina (281 mg, 3,20 mmol). A mistura de reação foi agitada a 100 ^QC por 5h. LC-MS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada e 0 resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com PE:EtOAc = 3:1 para gerar 0 produto do título como um sólido branco (550 mg, rendimento: 63%).

[0214]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% FA) e50%de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,6 min]: Rt = 2,01 min; MS Calculada: 550,3, MS encontrada: 551,4 [M + H]⁺.

Descrição 55

-(4-(2-metoxi-6-(5-metil-6-(oioeridin-4-il)-1 H-indazol-1 -il)pirimidin-4il)morfolin-2-il)etanona (D55):

[0215]À uma solução de tert-butil 4-(1 -(6-(2-acetilmorfolino)-2-metoxipirimidin4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (540 mg, 0,98 mmol) em CH2CI2 (50 mL) foi adicionado ácido 2,2,2-trifluoroacético (5 mL). A mistura de reação foi

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80/169 agitada em temperatura ambiente por 16 h. LC-MS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi diluído com CH2CI2 (20 mL) e NH3.H2O (10 mL). A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (2 X 20 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SCU anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado até secura para gerar 0 produto alvo como um sólido branco (406 mg, rendimento: 92%).

[0216]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% FA) e50%de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,6 min]: Rt = 0,79 min; MS Calculada: 450,2, MS encontrada: 451,2 [M + H]⁺.

Descrição 56

-(4-(6-(6-(1 -(2-fluoroetil)Dioeridin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-1 -il)-2metoxioirimidin-4-il)morfolin-2-il)etanona (D56):

N

N ,N /

c> V-N [0217]À uma solução de 1-(4-(2-metoxi-6-(5-metil-6-(piperidin-4-il)-1 Hindazol-1-il)pirimidin-4-il)morfolin-2-il)etanona (380 mg, 0,840 mmol) , 1-flúor-2iodoetano (176 mg, 1,01 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado CS2CO3 (326 mg, 1,69 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. LCMS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi diluída com CH2CI2 (20 mL) e H2O (20 mL). A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (2 X 50 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado até secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com EtOAc para gerar 0 produto do título como um sólido branco (235 mg, rendimento: 56%).

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81/169 [0218]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% FA) e 50% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,6 min]: Rt = 0,80 min; MS Calculada: 496,6, MS encontrada: 497,4 [M + H]⁺.

Descrição 57

4,6-Di-iodo-2-metiloirimidina (D57)

[0219]À uma solução de Nal (11,9 g, 79,7 mmol) em HI (55%, 50 mL) foi adicionada 4,6-dicloro-2-metilpirimidina (10,0 g, 61,3 mmol) em porções. A mistura de reação foi aquecida até 40 ^QC e agitada por 1 hora, em seguida, filtrada, lavada com água e depois com metanol (50 mL) e filtrada. A torta filtrada foi seca para gerar 0 composto do título (9,0 g, rendimento de 42%) como um sólido branco.

[0220]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,07 (s, 1H), 2,67 (s, 3H).

[0221]LCMS (fase móvel: 5-95% acetonitrila in 2,5 min): Rt = 1,59 min, MS Calculada: 346; MS encontrada: 347 [M + H]⁺.

Descrição 58

6-((3S,4R)-3-flúor-1 -(2-fluoroetil)Dioeridin-4-il)-5-metil-1 H-indazol (D58)

single cis isomer 1 [0222]À uma suspensão de 6-((3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol (D11) (80 mg, 0,34 mmol) e 1-bromo-2-fluoroetano (52,0 mg, 0,41 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionado K2CO3 (141 mg, 1,02 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25°C por um dia, extinta com água e extraída com EtOAc por 3 vezes. A fase orgânica foi combinada, seca, filtrada e concentrada. A purificação via coluna de silica gel (EtOAc ~ DCM: MeOH = 20:1) gerou 0 produto do título (40 mg, rendimento de 41,8%) como um sólido branco.

Descrição 59

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6-((3S,4R)-3-flúor-1 -(2-fluoroetil)Diperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol (D59)

single cis isomer 2 [0223]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D58 partindo de uma suspensão de 6-((3R,4S)-3-fluoropiperidin-4il)-5-metil-1 H-indazol (D12), 1-bromo-2-fluoroetano, faCChem DMF a 25°C.

[0224]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 0,29 min; MS Calculada.:279,1, MS encontrada: 280,2 [M + H]⁺.

Descrição 60

-(6-lodo-2-metilpirimidin-4-il)azetidin-3-ol (D60)

OH [0225]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D14 partindo de uma suspensão de 4,6-di-iodo-2-metilpirimidina, azetidin-3-ol cloridrato eTEA in i-PrOH.

[0226]¹H RMN (400 MHz, DMSO-ofe): δ 6,69 (s, 1H), 5,79 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,59-4,52 (m, 1H), 4,22-4,18 (m, 2H), 3,72 (dd, J = 9,6, 4,4 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H).

LCMS: (fase móvel: 5-95% Acetonitrila em 2,5 min), Rt = 1,18 min, MS Calculada: 291; MS encontrada: 292 [M + H]⁺.

Descrição 61

4-lodo-2-metil-6-(3-((tetrahidro-2H-oiran-2-il)oxi)azetidin-1 -iDoirimidina (D61)

II I

ΌΤΗΡ

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83/169 [0227]À uma suspensão de 1 -(6-iodo-2-metiIpirimidin-4-il)azetidin-3-ol (1,20 g, 4,12 mmol) em DCM seco (20 mL) foi adicionado DHP (1,38 g, 16,4 mmol) eTsOH (280 mg, 1,64 mmol) em temperatura ambiente. A mistura resultante foi aquecida até refluxo e agitada por 20 hrs. A mistura de reação foi diluída com DCM até 100 mL e em seguida lavada com NazCOs (sat., 50 mL) e salmoura, seca sobre MgSCU e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (PE: EtOAc = 5: 1) para gerar o composto do título (1,5 g, rendimento de 97%) como um óleo incolor.

[0228]¹ H RMN (300 MHz, CDCh): δ 6,48 (s, 1H), 4,70-4,60 (m, 2H), 4,33-4,18 (m, 2H), 4,08-3,92 (m, 2H), 3,90-3,80 (m, 1H), 3,57-3,48 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 1,891,69 (m, 2H), 1,64-1,49 (m, 4H).

[0229]LCMS(fase móvel: 5-95% Acetonitrila in 2,5 min): Rt = 1,59 min, MS Calculada: 375; MS encontrada: 376 [M + H]⁺.

Descrição 62

6-((3S,4R)-3-flúor-1-(2-fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metil-1-(2-metil-6-(3((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)azetidin-1 -il)pirimidin-4-iI)-1 H-indazol (D62)

N

N ?N

N OTHP

V-hL /

Single cis isomer 1 [0230]0s compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D16 partindo de uma suspensão de 6-(3-flúor-1-(2fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metil-1-(2-metil-6-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)azetidin-1il)pi ri m idi n-4-i I)-1 H-indazol (D58), 4-iodo-2-metil-6-(3-((tetrahidro-2H-piran-2il)oxi)azetidin-1-il)pirim-idina, Cui e K3PO4 em tolueno seco e A/,A/-dimetil-1,2etanodiamina.

Descrição 63

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 93/187

84/169

6-((3S,4R)-3-flúor-1-(2-fluoroetil)Dioeridin-4-il)-5-metil-1-(2-metil-6-(3((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)azetidin-1 -il)pirimidin-4-il)-1 H-indazol (D63) _;N /X^OTHP

V-N. /

Single cis isomer 2 [0231 ]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D16 partindo de uma suspensão de 6-((3R,4S)-3-flúor1 -(2-fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metiI-1 H-indazol (D59), 4-iodo-2-metil-6-(3-((tetrahidro2H-piran-2-il)oxi)azetidin-1 -il)pirimidina, Cui e K3PO4 em tolueno seco e N,N-dimetil1,2-etanodiamina.

[0232]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,18 min; MS Calculada.:526,3, MS encontrada: 527,3 [M + H]⁺.

Descrição 64 (F?)-tert-butil 4-(5-metil-1 -(2-metil-6-(3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-1 Hindazol-6-il)oioeridina-1 -carboxilato (D64):

\ d<^R> Q [0233]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D16 partindo de uma mistura de tert-butil 4-(5-metil-1 H-indazol-6il)piperidina-1 -carboxilato e (R)-4-(6-iodo-2-metilpirimidin-4-il)-3-metilmorfolina em tolueno/THF, AZ/AAdimetiletano-l ,2-diamina, Cui e K3PO4.

[0234]LC-MS [fase móvel: 40% de água (0,1% FA) e 60% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 5,99 min; MS Calculada.:506,6, MS encontrada: 507,4 [M + H]\

Descrição 65

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 94/187

85/169 (R)-3-metil-4-(2-metil-6-(5-metil-6-foiperidin-4-il)-1 H-indazol-1-il)oirimidin-4iDmorfolina (D65):

[0235]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D17 partindo de (R)-tert-butil 4-(5-metil-1-(2-metil-6-(3metilmorfolino)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-6-il)piperidina-1-carboxilato em EtOAc e HCI-EtOAc.

Descrição 66 (F?)-etil 2-(4-(5-metil-1 -(2-metil-6-(3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-1 H-indazol6-il)oioeridin-1 -ihacetato (D66):

[0236]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D18 partindo de uma solução de (R)-3-metil-4-(2-metil-6-(5-metil6-(piperidin-4-il)-1 H-indazol-1-il)pirimidin-4-il)morfolina em DMF, Et₃N e etil 2bromoacetato.

[0237]LC-MS [fase móvel: 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH₃CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt = 1,17 min; MS Calculada.:492,6, MS encontrada: 493,4 [M + H]⁺. Descrição 67 (F?)-tert-butil 4-(1-(2-metoxi-6-(3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)Dioeridina-1 -carboxilato (D67):

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86/169

[0238]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D16 partindo de uma mistura de íerí-butil 4-(5-metil-1 H-indazol-6il)piperidina-1 -carboxilato, (R)-4-(6-iodo-2-metoxipirimidin-4-il)-3-metilmorfolina, Cul (20 mg), K3PO4 in tolueno/THF e DMEDA [0239]¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,72 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,46 (br, 1H), 4,29 (br, 2H), 4,11-4,10 (m, 1H), 4,11 (s, 3H), 4,03-3,99 (m, 1H), 3,78-3,73 (m, 2H), 3,61 -3,53 (m, 1H), 3,37-3,30 (m, 1H), 3,02-2,85 (m, 3H), 2,47 (s, 3H), 1,86 (m, 2H), 1,71-1,65 (m, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,34 (d, J= 6,8 Hz, 3H).

Descrição 68

Síntese de (R)-4-(2-metoxi-6-(5-metil-6-(oioeridin-4-il)-1 H-indazol-1 il)pirimidin-4-il)-3-metilmorfolina cloridrato (D68):

[0240]0s compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D17 partindo de uma solução de (R)-tert-butil 4-(1-(2metoxi-6-(3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 carboxilato em HCI/EtOAc.

Descrição 69 (R)-etil 2-(4-(1 -(2-metoxi-6-(3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol6-il)oioeridin-1 -iDacetato (D69):

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 96/187

87/169

[0241 ]0 composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D18 partindo de etil 2-bromoacetato e uma solução de (R)-4-(2metoxi-6-(5-metil-6-(piperidin-4-il)-1 H-indazol-1 -il)pirimidin-4-il)-3-metilmorfolina cloridrato e EtsN em DMF.

Descrição 70 (S)-tert-butil 4-(1-(2-metoxi-6-(3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)oioeridina-1 -carboxilato (D70):

[0242]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D16 partindo de uma suspensão de tert-butil 4-(5-metil-1 H-indazol6-il)piperidina-1 -carboxilato, (S)-4-(6-iodo-2-metoxipirimidin-4-il)-3-metilmorfolina, Cul e K3PO4 in tolueno/THF e DMEDA.

[0243]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e95%de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt= 1,07 min; MS Calculada.: 522,3, MS encontrada: 523,4 [M + H]⁺.

Descrição 71 (S)-4-(2-metoxi-6-(5-metil-6-foioeridin-4-il)-1 H-indazol-1-il)pirimidin-4-il)-3metilmorfolina (D71):

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88/169

[0244]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para D17 partindo de uma solução de (S)-tert-butil 4-(1-(2metoxi-6-(3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 carboxilato em EtOAc e HCI/EtOAc.

[0245]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CFhCN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e95%de CFhCN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt= 1,21 min; MS Calculada.: 422,2, MS encontrada: 423,5 [M + H]⁺.

Descrição 72 (S)-etil 2-(4-(1 -(2-metoxi-6-(3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil- 1Hindazol-6-il)oioeridin-1 -iDacetato (D72):

[0246]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para D18 partindo de etil 2-bromoacetato e uma solução de (S)-4-(2metoxi-6-(5-meti l-6-(pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol-1 -i I) pi ri m idi n-4-i l)-3-meti Imorfoli na e

EtsN em DMF.

[0247]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e95%de CH3CN (0,1% FA) em 2,0 min]: Rt= 1,34 min; MS Calculada.: 508,3, MS encontrada: 509,5 [M + H]⁺.

Descrição 73

4-(azetidin-1 -il)-6-iodo-2-metoxioirimidina (D73)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 98/187

89/169 [0248]Uma mistura de 4,6-di-iodo-2-metoxipirimidina (362 mg, 1,00 mol), azetidina (86,0 mg, 1,50 mol) e DIEA (388 g, 3,00 mmol) em THF (10,0 mL) e '-PrOH (10,0 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solução de reação foi concentrada e purificada por cromatografia (PE:EtOAc = 2:1) para gerar o produto do título (269 mg, rendimento: 92,0%) como um sólido branco.

[0249]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,38 min; MS Calculada.: 291,0, MS encontrada: 292,1 [M + H]⁺.

Descrição 74 tert-butil 4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxioirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)-

3-fluoroDioeridina-1 -carboxilato (D74)

N ?N

JC/s [0250]À uma suspensão de c/s-tert-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6il)piperidina-1-carboxilato (D9, Pico 1, 60 mg, 0,18 mmol), 4-(azetidin-1-il)-6-iodo-2metoxipiri-midina (63 mg, 0,22 mmol), Cul (34 mg, 0,18 mmol), K3PO4 (76 mg, 0,36 mmol) em tolueno/THF (5,0 mL/1 mL) foi adicionado DMEDA (32 mg, 0,36 mmol). A mistura resultante foi desgaseificada com N2 três vezes, em seguida, agitada a 80 ^QC por 2 horas. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (20 mL), lavada com NFUCI sat. (20 mL) e salmoura (20 mL). A solução orgânica foi seca sobre anidro NazSCk e concentrada. O resíduo foi purificado por prep-TLC (PE:EtOAc = 2:1) para gerar 0 produto do título (58 mg, rendimento: 65%) como um sólido amarelo pálido.

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 99/187

90/169 [0251]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,30 min; MS Calculada.: 496,3, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.

Descrição 75

-(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-6-(3-fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol (D75)

[0252]À uma solução de tert-butil 4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)5-metil-1 H-indazol-6-il)-3-fluoropiperidina-1-carboxilato (D74, 58 mg, 0,12 mmol) em CH2CI2 (5,0 mL) foi adicionado sob gotejamento TFA (1,0 mL). A solução de reação foi agitada em temperatura ambiente por 60 min e concentrada para gerar 0 produto do título (59 mg, rendimento: 100%) como um sólido amarelo pálido.

[0253]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,23 min; MS Calculada.: 396,2, MS encontrada: 397,4 [M + H]⁺.

Descrição 76 etil 2-(4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)-3fluoropiperidin-1-il)acetato (D76, a partir do Pico 1)

[0254]À uma solução de 1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-6-(3fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol (D75, 59 mg, 0,12 mmol) e Et₃N (60 mg, 0,60 mmol) em DMF (2,0 mL) foi lentamente adicionado etil 2-bromoacetato (40 mg, 0,24

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 100/187

91/169 mmol). A solução de reação foi agitada em temperatura ambiente por 60 min, em seguida, extinta com NHkCI sat., diluída com EtOAc (20 mL), lavada com salmoura (50 mL), seca e concentrada. O resíduo foi purificado por prep-TLC (PE:EtOAc = 1:1) para gerar o produto do título (49 mg, rendimento: 88%) como um sólido amarelo pálido.

[0255]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,66 min; MS Calculada.: 482,2, MS encontrada: 483,4 [M + H]⁺.

Descrição 77 tert-butil 4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxioirimidin-4-il)-5-metil-1 /7-indazol-6-il)3-fluoroDioeridina-1 -carboxilato (D77)

[0256]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D74 partindo de uma suspensão de cis-tert-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 Hindazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (D10, Pico 2), 4-(azetidin-1-il)-6-iodo-2metoxipirimidina (D73), Cui e K3PO4 em tolueno/THF e DMEDA.

[0257]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,30 min; MS Calculada.: 496,3, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.

Descrição 78

-(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxiDirimidin-4-il)-6-(3-fluoroDioeridin-4-il)-5-metil-1 Hindazol (D78, a partir do Pico 2)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 101/187

92/169

[0258]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D74 partindo de uma solução de tert-butil 4-(1-(6-(azetidin-1-il)-2metoxipirimidin-4-il)-5-metil-1 /-/-indazol-6-il)-3-fluoropiperidina-1-carboxilato (D77) em CH2CI2 e TFA.

[0259]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,23 min; MS Calculada.: 396,2, MS encontrada: 397,4 [M + H]⁺.

Descrição 79 etil 2-(4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-5-metil-1 /-/-indazol-6-il)-3fluoropiperidin-1-il)acetato (D79, a partir do Pico 2)

[0260]0 composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D75 partindo de etil 2-bromoacetato (37 mg, 0,22 mmol) foi lentamente adicionado à solução de 1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-6-(3-fluoropiperidin-

4-il)-5-metil-1 H-indazol (D78) e EtsN em DMF.

LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,66 min; MS Calculada.: 482,2, MS encontrada: 483,4 [M + H]⁺.

Descrição 80 tert-butil 4-(5-cloro-1 H-indazol-6-il) piperidina-1-carboxilato (D80)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 102/187

93/169

[0261 ]À uma solução de íerí-butil 6-(1-(terFbutoxicarbonil)piperidin-4-il)-5cloro-1 /-/-indazol-1-carboxilato (D117, 600 mg, 1,38 mmol) em MeOH (40,0 mL) foi adicionado aq. NaOH (1 M, 40,0 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, diluída com CH2CI2 (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre Na2ÔO4 anidro, filtradas e concentradas até secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com PE:EtOAc = 1:1 para gerar 0 produto do título como um sólido branco (400 mg, rendimento: 86,0%).

[0262]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1 %T FA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 1,57 min; MS Calculada: 335,8, MS encontrada: 336,1 [M + H]⁺.

Descrição 81 tert-butil 4-(5-cloro-1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-1 /-/-indazol-6-il) piperidi-na1-carboxilato (D81)

[0263]Uma mistura de tert-butil 4-(5-cloro-1 H-indazol-6-il) piperidina-1carboxilato (2,00 g, 6,00 mmol), 4,6-dicloro-2-metilpirimidina (978 mg, 6,00 mmol) e CS2CO3 (5,90 g, 18,0 mmol) em DMF (80,0 mL) foi agitada a 50 ^QC por 5 h. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL x 3) e salmoura (50 mL), secas, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com (PE: EtOAc = 5:1) para gerar 0 produto bruto. O produto bruto

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 103/187

94/169 foi recristalizado a partir de MeOH para gerar o produto do título como um sólido branco (380 mg, 13,0% de rendimento).

[0264]LC-MS [fase móvel: de 20% de água (0,1% TFA) e 80% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1 %T FA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 10 min]: Rt = 3,44 min; MS Calculada: 461,1, MS encontrada: 462,1 [M + H]⁺

Descrição 82

5-cloro-1 -(6-cloro-2-metilDirimidin-4-il)-6-(Dioeridin-4-il)-1 H-indazol (D82)

N

N ?N [0265]À uma solução de íerf-butil 4-(5-cloro-1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)1/7-indazol-6-il) piperidina-1-carboxilato (380 mg, 0,820 mmol) em CH2CI2 (80,0 mL) foi adicionado ácido 2,2,2-trifluoroacético (10 mL).A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, diluída com NH3 H2O (15 mL) e extraída com CH2CI2 (100 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre NazSCk anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado até secura para gerar 0 produto do título como um sólido branco (310 mg, rendimento: 100%).

[0266]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,81 min; MS Calculada: 361,0, MS encontrada: 362,0 [M + H]⁺

Descrição 83

-(4-(5-cloro-1 -(6-cloro-2-metiloirimidin-4-il)-1 H-indazol-6-il) oioeridin-1 -il) orooan-2-ona (D83)

N

N ?N

Π ^No l

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95/169 [0267]À uma solução de 5-cloro-1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-6-(piperidin-4il)-1 H-indazol (300 mg, 0,830 mmol) e 1 -bromopropan-2-ona (164 mg, 1,20 mmol) em DMF (40,0 mL) foi adicionado EtsN (242 mg, 2,40 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, concentrada, diluída com H2O (50,0 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL x 3) e salmoura, secas sobre Na2ÔO4 anidro, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com EtOAc para gerar 0 produto do título como um sólido branco (240 mg, rendimento: 69,0%).

[0268]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,82 min; MS Calculada: 417,1, MS encontrada: 418,1 [M + H]⁺

Descrição 84

-(4-(5-cloro-1 -(6-(2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-1 Hindazol-6-il)oioeridin-1 -il)orooan-2-ona (D84) _—OH

[0269]À uma solução de 1-(4-(5-cloro-1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-1 Hindazol-6-il) piperidin-1-il) propan-2-ona (120 mg, 0,290 mmol) e (F?)-morfolin-2ilmetanol cloridrato (D114, 44,0 mg, 0,290 mmol) em DMF (30,0 mL) foi adicionado DIEA (187 mg, 1,45 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 80 ^QC durante a noite, resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (50 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL x 3) e salmoura (50 mL), secas, filtradas e concentradas para gerar 0 produto do título como um sólido amarelo (110 mg, rendimento: 76,0%).

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 105/187

96/169 [0270]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,78 min; MS Calculada.:498,2, MS encontrada: 499,2 [M + H]⁺.

Descrição 85

-(4-(5-cloro-1 -(6-((F?)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-1 Hindazol-6-il)oioeridin-1 -il)orooan-2-ol (D85)

N

N ,'n

Y N OH L [0271 ]À uma solução de (F?)-1-(4-(5-cloro-1-(6-(2-(hidroximetil)morfolino)-2metilpirim-idin-4-il)-1/7-indazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ona (110 mg, 0,220 mmol) em MeOH (30,0 mL) foi adicionado NaBFL (24,0 mg, 0,660 mmol) a 0^QC. A mistura de reação foi agitada a 0 ^QC por 3 h, diluída com H2O (50,0 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SCU anidro, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com (EtOAc:MeOH=20:1) para gerar 0 produto do título como um sólido branco (78,0 mg, rendimento: 70,0%,).

[0272]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,77 min; MS Calculada: 500,2, MS encontrada: 501,2 [M + H]⁺.

Descrição 86 (S)-1 -(4-(5-cloro-1 -(6-(2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-1 Hindazol-6-il)oioeridin-1 -il)orooan-2-ona (D86)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 106/187

97/169

[0273]À uma solução de 1-(4-(5-cloro-1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-1 Hindazol-6-il) piperidin-1-il) propan-2-ona (120 mg, 0,290 mmol) e (S)-morfolin-2 ilmetanol cloridrato (44,0 mg, 0,290 mmol) em DMF (30,0 mL) foi adicionado DIEA (187 mg, 1,45 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 80 ^QC durante a noite, resfriada até temperatura ambiente, diluída com água (50 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL x 3) e salmoura (50 mL), secas e filtradas. O filtrado foi concentrado para gerar o produto do título como um sólido amarelo (110 mg, rendimento: 76,0%).

[0274]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CFhCN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH₃CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,78 min; MS Calculada.:498,2, MS encontrada: 499,2 [M + H]⁺.

Descrição 87 c/s-tert-butil 4-(1-(6-cloro-2-metiloirimidin-4-il)-5-metil-1 /-/-indazol-6-il)-3fluoroDioeridina-1 -carboxilato (D87)

[0275]Uma mistura de cis- tert-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 H-indazol-6il)piperidina-1 -carboxilato (D9, pico 1) (500 mg, 1,50 mmol) e 4,6-dicloro-2metilpirimidina (300 mg, 1,84 mmol) e CS2CO3 (1,60 g, 4,91 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada a 40 ^QC por 2h, diluída com EtOAc (100 mL) e lavada com salmoura (100 mL x 3). A camada orgânica foi seca e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna (PE:EtOAc=10:1) para gerar 0 produto do título como um sólido quase branco (500

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 107/187

98/169 mg, 72,0% de rendimento). O sólido foi recristalizado a partir de MeOH para gerar o produto puro como um sólido branco (342 mg, 50% de rendimento) [0276]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,81 min; MS Calculada.:459,2, MS encontrada: 460,3 [M + H]⁺.

Descrição 88

1-(6-cloro-2-metilDirimidin-4-il)-6-(cis-3-fluoroDioeridin-4-il)-5-metil-1 H-indazol cloridrato (D88)

[0277]À uma mistura de c/s-tert-butil 4-(1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-5-metiI1 H-indazol-6-il)-3-fluoropiperidina-1 -carboxilato (D87, 300 mg, 0,650 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado HCI/EtOAc (5 mL, 6 N). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h e concentrada para gerar 0 produto do título como um sólido branco (280 mg) [0278]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 0,37 min; MS Calculada.:359,1, MS encontrada: 360,3 [M + H]⁺.

Descrição 89

-(c/s-4-(1 -(6-cloro-2-metiloirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)-3-fluorooioeridin-1-il)Drooan-2-ona (D89)

[0279]À uma solução de 1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-6-(c/s-3fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol cloridrato (D88, 260 mg, 0,600 mmol) em DMF

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 108/187

99/169 (10 mL) foram adicionados 1-bromopropan-2-ona (274 mg, 2,00 mmol) e EtsN (1 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h, diluída com EtOAc (50 mL), lavada com salmoura (60 mL x 3), seca e concentrada para gerar o produto do título como um sólido quase branco (310 mg) [0280]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1 %T FA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,37 min; MS Calculada.:415,2, MS encontrada: 416,2 [M + H]⁺.

Descrição 90

1-(c/s-3-flúor-4-(1-(6-((fí)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-5metil-1 H-indazol-6-il)oioeridin-1 -il)orooan-2-ona (D90) ^OH

[0281 ]Uma solução de 1-(c/s-4-(1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)-3-fluoropiperidin-1-il)propan-2-ona (D89,,70,7 mg, 0,170 mmol), (fí)morfolin-2-ilmeth-anol cloridrato (D116, 153 mg, 1,00 mmol) e EtsN (1 mL) em NMP (10 mL) foi agitada a 60 ^QC por 2h, diluída com EtOAc (50 mL), lavada com salmoura (50 mL x 3). A solução orgânica foi seca e concentrada. O resíduo foi purificado por prep-TLC (MeOH/DCM=1/10) para gerar 0 produto do título como um sólido branco (79,0 mg, 99,0% de rendimento) [0282]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,09 min; MS Calculada.:496,3, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.

Descrição 91

1-(c/s-3-flúor-4-(1-(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-5metil-1 /-/-indazol-6-il)oioeridin-1 -il)orooan-2-ona (D91)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 109/187

100/169

[0283]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D90 partindo de uma solução de 1-(c/s-4-(1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)-3-fluoropiperidin-1 -il)propan-2-ona (D89), (S)-morfolin-2ilmetanol cloridrato e Et₃N em NMP a 60 ^QC por 2h.

[0284]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH₃CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH₃CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,05 min; MS Calculada.:496,3, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.

Descrição 92 c/s-tert-butil 4-(1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)-3-fluoropiperidina-l-carboxilato (D92)

[0285]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D87 partindo de uma mistura de c/s-tert-butil 3-flúor-4-(5-metil-1 Hindazol-6-il)piperidina-1-carboxilato (D10, pico 2), 4,6-dicloro-2-metilpirimidina e Cs2CO₃ em DMF a 40 ^QC por 2 h.

[0286]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH₃CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH₃CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,81 min; MS Calculada: 459,2, MS encontrada: 460,3 [M + H]⁺.

Descrição 93

1-(6-cloro-2-metilDirimidin-4-il)-6-(cis-3-fluoroDioeridin-4-il)-5-metil-1 /-/-indazol cloridrato (D93)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 110/187

101/169

[0287]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D88 partindo de uma mistura de c/s-tert-butil 4-(1-(6-cloro-2metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 /-7-indazol-6-il)-3-fluoropiperidina-1-carboxilato em MeOH e HCI/EtOAc em temperatura ambiente por 1 h.

[0288]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 0,37 min; MS Calculada.:359,1, MS encontrada: 360,3 [M + H]⁺.

Descrição 94

-(c/s-4-(1 -(6-cloro-2-metiloirimidin-4-il)-5-metil-1 /-/-indazol-6-il)-3-fluorooioeridin-1-il)Drooan-2-ona (D94)

[0289]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D89 partindo de uma solução de 1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-6-(cis-3fluoropiperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol cloridrato em DMF, 1-bromopropan-2-ona e EtsN em temperatura ambiente por 1 h.

[0290]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,37 min; MS Calculada.:415,2, MS encontrada: 416,2 [M + H]⁺.

Descrição 95

1-(c/s-3-flúor-4-(1-(6-((F?)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-5metil-1 /-/-indazol-6-il)Dioeridin-1 -il)orooan-2-ona (D95)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 111/187

102/169

-—OH

[0291 ]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para D90 partindo de uma solução de 1 -(4-(1 -(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-5metil-1 /-/-indazol-6-il)-c/s-3-f luoropi peridi n-1 -il)propan-2-ona (D94), (F?)-morfolin-2ilmetanol cloridrato e EtsN em NMP a 60 ^QC por 2 h.

[0292]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,14 min; MS Calculada.:496,26, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.

Descrição 96

1-(c/s-3-flúor-4-(1-(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metiloirimidin-4-il)-5-

[0293]Uma solução de 1-(c/s-4-(1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il) [0294]3-fluoropiperidin-1-il)propan-2-ona (D94, 75,0 mg, 0,180 mmol), (S)morfolin-2-ilme-tanol cloridrato (138 mg, 0,900 mmol) e EtsN (125 mg) em NMP (5,00 mL) foi agitada a 60 ^QC por 2h. A solução de reação foi diluída com NH4CI sat. (80,0 mL) e extraída com EtOAc (60 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de silica gel (MeOH/CH2Cl2=1/15) para gerar 0 produto do título como um sólido branco (120 mg)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 112/187

103/169 [0295]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CFhCN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH₃CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,14 min; MS Calculada.:496,3, MS encontrada: 497,3 [M + H]⁺.

Descrição 97 tert-butil 4-(1 -(6-(3-hidroxiazetidin-1 -il)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 H-in-dazol-6-il)oioeridina-1 -carboxilato (D97)

[0296] Uma suspensão de 1 -(6-iodo-2-metilpirimidin-4-il)azetidin-3-ol (291 mg, 1,00 mmol), tert-butil 4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (315 mg, 1,00 mmol), Cui (38,0 mg, 0,200 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,00 mmol) e N,N'dimetilciclohexano-1,2-diamina (56,0 mg, 0,400 mmol) em tolueno (3,00 mL) foi agitada a 100 ^QC durante a noite, diluída com EtOAc (30 mL), lavada com NH3 H2O (15 mL x 3). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia rápida (éter de petróleo/EtOAc =1:1) para gerar 0 composto do título (420 mg, 88%) como um sólido branco.

[0297]¹HRMN (400 MHz, CDCb): δ 8,75 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 4,84-4,81 (m, 1H), 4,43-4,29 (m, 4H), 4,02-3,98 (m, 2H), 2,98-2,85 (m, 3H),

2,61 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 1,89-1,86 (m, 2H), 1,78-1,72 (m, 3H), 1,50 (s, 9H).

Descrição 98

-(2-metil-6-(5-metil-6-(oioeridin-4-il)-1 /-/-indazol-1 -il)pirimidin-4-il)azetidin-3-

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 113/187

104/169 [0298]À uma solução de tert-butil 4-(1-(6-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2metilpirimidin-4-il)-5-metil-1/-/-indazol-6-il)piperidina-1-carboxilato (420 mg, 0,880 mmol) em MeOH (2,00 mL) foi adicionado HCI/MeOH (2 M, 1 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas e concentrada para gerar o produto do título (332 mg, 99,0%) como um sólido branco.

[0299]LCMS [coluna: Phenomenex Kinetex 5pm EVO, Cie; tamanho da coluna: 4,6 x 50 mm; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NFkAc em água); gradiente (B%) em 4 mins]: Rt = 1,580 min, MS Calculada.:378, MS encontrada: 379 [M + H]⁺.

Descrição 99

-flúor-3-(4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-indazol-6-il)oioeridin-1 il)orooan-2-ol (D99)

THP / N [0300]Uma mistura de 5-metil-6-(piperidin-4-iI)-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-iI)-1Hindazol (D114, 787 mg, 2,63 mmol), 2-(fluorometil)oxirano (1,00 g, 13,2 mmol) e CS2CO3 (2,60 g, 7,89 mmol) em DMF (10,0 mL) foi agitada a 80 ^QC em um tubo vedado durante a noite. A mistura resultante foi diluída com EtOAc (30,0 mL), lavada com água (50 mL x 2). A solução orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna de silica gel (CFECUMeOH = 30:1 -10:1) para gerar 0 produto do título (420 mg, rendimento: 43%) como um óleo amarelo.

[0301]LC-MS [fase móvel: de 70% de água (0,1% TFA) e 30% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 3,04 min; MS Calculada: 375,2, MS encontrada: 376,4 [M + H]⁺.

Descrição 100

-flúor-3-(4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)oioeridin-1 -il)orooan-2-ol (D 100)

N

H N

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 114/187

105/169 [0302]À uma solução de 1-flúor-3-(4-(5-metil-1-(tetrahidro-2/7-piran-2-il)-1 /7indazol-6-il)p-iperidin-1-il)propan-2-ol (D99, 420 mg, 1,12 mmol) em CH2CI2 (10,0 mL) TFA (2,00 mL) foi adicionado sob gotejamento. A solução de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, concentrada e diluída com água (20,0 mL) e MeOH (5,00 mL). A mistura resultante foi basificada até pH~9 com K2CO3 sólido, em seguida, extraída com CH2CI2 (20 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SCU anidro e concentradas. O resíduo foi purificado por coluna de silica gel (CH2Cl2:MeOH=5:1) para gerar 0 produto do título (185 mg, rendimento: 57,0%) como um sólido amarelo.

[0303]LC-MS [fase móvel: de 70% de água (0,1% TFA) e 30% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 3,85 min; MS Calculada: 291,2, MS encontrada: 292,3 [M + H]⁺.

Descrição 101 metil 2-hidroxi-3-(4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2/7-piran-2-il)-1 /7-indazol-6-il)oioeridin-l-iDoropanoato (D101)

Ό γ N

OH l ο γ N oh l

THP / N [0304]Uma mistura de 5-metil-6-(piperidin-4-iI)-1 -(tetrahidro-2H-piran-2-iI)-1Hindazol (D114, 4,40 g, 14,7 mmol), metil oxirano-2-carboxilato (4,50 g, 44,1 mmol) e CS2CO3 (14,4 g, 44,1 mmol) em DMF (40 mL) foi agitada a 80 ^QC em um tubo vedado durante a noite. A mistura resultante foi diluída com EtOAc (80,0 mL) e lavada com água (100 mL x 2). A solução orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna de silica gel (CH2Cl2:MeOH=30:1) para gerar 0 produto do título (1,70 g, rendimento: 29,0%) como um sólido amarelo.

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106/169 [0305]LC-MS [fase móvel: de 70% de água (0,1% TFA) e 30% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 3,28 min; MS Calculada: 401,2, MS encontrada: 402,4 [M + H]⁺.

Descrição 102

Metil 2-flúor-3-(4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2/-/-oiran-2-il)-1 /-/-indazol-6-il)Dioeridin-l-iDoropanoato (D102)

[0306]À uma solução de metil 2-hidroxi-3-(4-(5-metil-1-(tetrahidro-2/-/-piran-2il)-1 /-/-indazol-6-il)piperidin-1 -il)propanoato (D101,1,70 g, 4,23 mmol) em CH2CI2 (15,0 mL) foi adicionado sob gotejamento uma solução de DAST (2,00 g, 12,7 mmol) em CH2CI2 (5 mL) a -60 ^QC sob N2. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 h, extinta com NaHCOa sat. e lavada com salmoura (20 mL). A parte orgânica separada foi seca sobre Na2SCU anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna de silica gel (CH2CÍ2:MeOH=100:1) para gerar 0 produto do título (620 mg, rendimento: 36,0%) como um óleo amarelo.

[0307]LC-MS [fase móvel: de 70% de água (0,1% TFA) e 30% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,10 min; MS Calculada: 403,2, MS encontrada: 404,4 [M + H]⁺.

Descrição 103

2-flúor-3-(4-(5-metil-1 -(tetrahidro-2H-oiran-2-il)-1 H-indazol-6-il)Dioeridin-1 iDoropan-l-ol (D103)

[0308]À uma solução de metil 2-flúor-3-(4-(5-metil-1-(tetrahidro-2/-/-piran-2-il)1/-/-indazol-6-il)piperidin-1-il)propanoato (D102, 620 mg, 1,54 mmol) em MeOH (10,0

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107/169 mL) foi adicionado NaBFk (174 mg, 4,61 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 30 min, extinta com NaHCOa sat., diluída com DCM (30 mL) e lavada com salmoura (20 mL x 2). A parte orgânica separada foi seca sobre NazSCk anidro e concentrada para gerar o produto do título (560 mg, rendimento: 97,0%) como um sólido amarelo.

[0309]LC-MS [fase móvel: de 70% de água (0,1% TFA) e 30% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,02 min; MS Calculada: 375,2, MS encontrada: 376,4 [M + H]⁺.

Descrição 104

2-flúor-3-(4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)oioeridin-1 -iDoropan-l -ol (D 104)

N

H N [0310]À uma solução de 2-flúor-3-(4-(5-metil-1-(tetrahidro-2/-/-piran-2-il)-1 Hindazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-1 -ol (D103, 560 mg, 1,49 mmol) em CH2CI2 (5,00 mL) foi adicionado sob gotejamento TFA (1 mL). A solução de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, concentrada, diluída com CH2CI2 (30 mL), lavada com NaHCOs sat. (30 mL) e salmoura (30 mL). A solução orgânica separada foi seca sobre NazSCU anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna de silica gel (CH2Cl2:MeOH=10:1) para gerar 0 produto do título (245 mg, rendimento: 56,0%) como um sólido amarelo.

[0311]LC-MS [fase móvel: de 70% de água (0,1% TFA) e 30% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,06 min; MS Calculada: 291,2, MS encontrada: 292,2 [M + H]⁺.

Descrição 105

4-(azetidin-1 -il)-6-iodo-2-metoxioirimidina (D 105)

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108/169 [0312]Uma mistura de 4,6-di-iodo-2-metoxipirimidina (2,00 g, 5,52 mmol), azetidina (0,570 g, 6,07 mmol) e TEA (1,67 g, 16,6 mmol) em DMSO (20,0 mL) foi agitada a 60 ^QC durante a noite, diluída com H2O (250 mL), extraída com EtOAc (200 mL x 2) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel coluna (éter de petróleo/EtOAc = 8/1) para gerar 0 produto do título (0,640 g, 40,0%) como um óleo branco.

[0313]¹HRMN (300 MHz, CDCh): 6,29 (s, 1H), 4,07 (t, J= 8,0 Hz, 4H), 3,89 (s, 3H), 2,45-2,38 (m, 2H).

Descrição 106 tert-butil 4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxicirimidin-4-il)-5-metil-1 /-/-indazol-6il)ciceridina-1 -carboxilato (D106)

N ?N [0314]Uma mistura de terí-butil 4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 carboxilato (300 mg, 0,950 mmol), 4-(azetidin-1-il)-6-iodo-2-metoxipirimidina (304 mg, 1,05 mmol), A/,A/’-dimetilciclohexano-1,2-diamina (27,0 mg, 0,190 mmol), Cul (18,0 mg, 0,0950 mmol) e K3PO4 (403 mg, 1,90 mmol) em tolueno (4 mL) foi agitada a 100 ^QC por 3 horas, diluída com H2O (15 mL) e ΝΗ3Ή2Ο (5 mL) e extraída com EtOAc (20 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas e purificadas por cromatografia em coluna on silica gel (éter de petróleo/EtOAc =3/1) para gerar 0 produto em bruto (460 mg, 100 %) como um óleo amarelo.

[0315]LCMS [coluna: Cis; tamanho da coluna: 4,6 x 30 mm 5 pm; Dikwa

Diamonsil plus; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NH4AC + 5% de CH3CN em água);

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109/169 gradiente (B%) em 4 mins. 05-95-POS; vazão: 1,5 ml/min]: Rt = 2,824 min; MS Calculada.:478, MS encontrada: 479 [M + H]⁺.

Descrição 107

-(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxiDirimidin-4-il)-5-metil-6-foiceridin-4-il)-1 /-/-indazole (D107)

[0316]Uma solução de tert-buti 14-(1 -(6-(azetidin-1 -i l)-2-metoxi pi ri m idi n-4-i l)-5metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (D106, 460 mg, 0,960 mmol) em DCM (5 mL) e TFA (5 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora, concentrada, diluída com H2O (10 mL) e basificada com NaHCCh sat. até pH = 8-9 e filtrada. A torta filtrada foi seca para gerar 0 produto do título (350 mg, 96,0%) como um sólido amarelo.

[0317]LCMS [coluna: Cis; tamanho da coluna: 4,6 x 30 mm 5 pm; Dikwa Diamonsil plus; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NFkAc + 5% de CH3CN em água); gradiente (B%) em 4 mins. 05-95-POS; vazão: 1,5 ml/min]: Rt = 1,880 min; MS Calculada.:378, MS encontrada: 379 [M + H]⁺.

Descrição 108 (fí)-tert-butil 4-(1-(6-(2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil1 /-/-indazol-6-il)ciceridina-1 -carboxilato (D108) —-OH

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110/169 [0318]Uma mistura de (fí)-(4-(6-iodo-2-metilpirimidin-4-il)morfolin-2-il)metanol (D116, 335 mg, 1,00 mmol), tert-butil 4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1carboxilato (D52, 315 mg, 1,00 mmol), Cui (38,0 mg, 0,200 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,00 mmol) e A/,A/-dimetilciclohexano-1,2-diamina (56,0 mg, 0,400 mmol) em tolueno (3 mL) foi agitada a 100 ^QC por 4 horas, diluída com EtOAc (30 mL), lavada com NH3 H2O (15 mL x 3), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia rápida (éter de petróleo/EtOAc =1:1) para gerar 0 produto do título (420 mg, 80,0%) como um sólido branco.

[0319]¹HRMN (400 MHz, CDCh): δ 8,75 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,38-4,25 (m, 5H), 4,15-4,05 (m, 2H), 3,81-3,65 (m, 5H), 3,15-3,11 (m, 1H), 3,08-2,83 (m, 5H), 2,62 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 1,51 (s, 10H).

Descrição 109 (fí)-(4-(2-metil-6-(5-metil-6-(oioeridin-4-il)-1 H-indazol-1-il)oirimidin-4-il)morpholin-2-il)metanol (D109) ^OH

[0320]À uma solução de (fí)-tert-butil 4-(1-(6-(2-(hidroximetil)morfolino)-2metilpiri-midin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (D108, 420 mg, 0,800 mmol) em MeOH (2 mL) foi adicionado HCI/MeOH (2 M, 1 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas, concentrada, dissolvida em MeOH (10 mL) e tratada com Amberst. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e filtrada. O filtrado foi concentrado para gerar 0 produto do título (327 mg, 96%) como um sólido branco.

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 120/187

111/169 [0321]¹HRMN (400 MHz, DMSO-ofe): δ 8,75 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,36-4,27 (m, 2H), 3,98-3,94 (m, 1H), 3,40-3,56 (m, 9H), 3,34-2,97 (m, 6H), 2,83-2,74 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 2,46 (s, 3H).

Descrição 110

1-(6-iodo-2-metoxipirimidin-4-il)azetidin-3-ol (D110) ^xo

Xn

I II

[0322]Uma mistura de 4,6-di-iodo-2-metoxipirimidina (2,00 g, 5,52 mmol), azetidin-3-ol (665 mg, 6,07 mmol) e TEA (1,67 g, 16,6 mmol) em /-PrOH (10 mL) foi agitada a 50 ^QC por 5 horas, diluída com H2O (20 mL) e extraída com EtOAc (30 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas e purificadas por cromatografia em silica gel coluna (éter de petróleo/EtOAc = 4/1 a 1/1) para gerar 0 produto do título (1,57 g, 93,0 %) como um sólido amarelo [0323]¹HRMN (300 MHz, CDCh): 6,32 (s, 1H), 4,80 (br s, 1H), 3,97-3,92 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 2,68 (s, 1H).

Descrição 111 tert-butil 4-(1 -(6-(3-hidroxiazetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (D 111)

[0324]Uma mistura de tert-butil 4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidina-1carboxilato (D52, 500 mg, 1,59 mmol), 1-(6-iodo-2-metoxipirimidin-4-il)azetidin-3-ol (D110, 537 mg, 1,75 mmol), A/,A/’-dimetilciclohexano-1,2-diamina (114 mg, 0,800 mmol), Cul (61,0 mg, 0,320 mmol) e K3PO4 (674 mg, 3,18 mmol) em tolueno (4 mL) foi agitada a 100 ^QC por 3 horas, diluída com EtOAc (60 mL) e lavada com NH3 H2O

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112/169 (20 mL) e salmoura (20 mL). A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em silica gel coluna (éter de petróleo/EtOAc = 2/1 a 1/1) para gerar o produto do título (445 mg, 58,0%) como um óleo amarelo.

[0325]¹H-RMN (CDCh, 400 MHz): δ 8,71 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 4,82 (br s, 1H), 4,43-4,26 (m, 4H), 4,26-3,92 (m, 5H), 3,01 -2,82 (m, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,45-2,39 (m, 1H), 1,88-1,85 (m, 2H), 1,71 -1,60 (m, 2H), 1,49 (s, 9H).

Descrição 112

-(2-metoxi-6-(5-metil-6-foioeridin-4-il)-1 H-indazol-1 -il)pirimidin-4-il)azet-idin3-ol (D112)

[0326]À uma solução de tert-butil 4-(1-(6-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2metoxipirimidin-4-il)-5-metil-1 /7-indazol-6-il)piperidina-1 -carboxilato (D111, 350 mg, 0,710 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas ajustada até o pH = 9~10 com NaHCOs sat., diluída com H2O (10 mL) e extraída com DCM (30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SCU, filtradas e concentradas para gerar 0 composto do título (270 mg, 97%) como um óleo amarelo.

[0327]LCMS [coluna: Cis; tamanho da coluna: 4,6 x 30 mm 5 pm; Dikwa Diamonsil plus; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NH4AC + 5% de CH3CN em água); gradiente (B%) em 4 mins. 10-95-POS; vazão: 1,5 ml/min]: Rt = 1,479 min; MS Calculada.: 394, MS encontrada: 395 [M + H]⁺.

Descrição 113 (S)-(4-(6-lodo-2-metiloirimidin-4-il)morfolin-2-il)metanol (D 113)

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113/169

N^N

N OH [0328]À uma solução de (S)-morfolin-2-ilmetanol cloridrato (430 mg bruto, 2,80 mmol) em CH3OH (5 mL) foi adicionado 4,6-di-iodo-2-metilpirimidina (1,10 g, 3,10 mmol) e TEA (850 mg, 8,40 mmol). A mistura resultante foi aquecida até 60 ^QC por 2 hrs. TLC mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída EtOAc (20 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas. O produto em bruto foi purificado por coluna de silico gel (PE: EtOAc = 5: 1) para gerar 0 composto do título (760 mg, rendimento de 81%) como um sólido branco.

[0329]¹ H RMN (300 MHz, CDCh): δ 6,79 (s, 1H), 4,18-4,01 (m, 3H), 3,79-3,58 (m, 4H), 3,08-2,99 (m, 1H), 2,92-2,84 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 1,97-1,90 (m, 1H).

Descrição 114

5-metil-6-(oioeridin-4-il)-1 -(tetrahidro-2/-/-piran-2-il)-1 H-indazol (D114)

THP / N %

[0330]À uma suspensão de 5-metil-6-(piperidin-4-il)-1 H-indazol (D51, 10,0 g, 46,5 mmol) e DHP (7,80 g, 93,0 mmol) em THF (200 mL) foi adicionado p-TsOH (884 mg, 4,70 mmol) em uma porção. A mistura de reação foi em seguida, agitada a 60 ^QC durante a noite. Em seguida, a mistura de reação foi concentrada, novamente dissolvida em DCM (1,5 L), lavada com NaHCCh sat. e salmoura, seca sobre Na2ÔO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia (MeOH/DCM = 1/15) para gerar 0 produto como um sólido marrom. (6,70 g, 48,0% de rendimento) [0331]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1%

TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 1,108 min; MS Calculada.:299,20, MS encontrada: 300,4 [M + H]⁺.

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Descrição 115 (fí)-Morfolin-2-ilmetanol cloridrato (D115) ^HCI/—\ HN O

OH [0332]À uma solução de (H)-tert-butil 2-(hidroximetil)morfolina-4-carboxilato (500 mg, 2,30 mmol) foi adicionado HCI/dioxano (4 M, 10 mL) e agitada por 1 h em temperatura ambiente. TLC mostrou que a reação estava completa. A reação foi concentrada para gerar o composto do título (420 mg, rendimento de >100%) como um sólido branco.

[0333]¹H RMN (300 MHz, DMSO-d6): δ 9,67 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 3,94-3,88 (m, 1H), 3,77-3,67 (m, 2H), 3,45-3,33 (m, 2H), 3,13 (t, J = 12,6 Hz, 2H), 2,95-2,87 (m, 1H), 2,78-2,67 (m, 1H).

Descrição 116 (fí)-(4-(6-lodo-2-metiloirimidin-4-il)morfolin-2-il)metanol (D116)

[0334]À uma solução de (H)-morfolin-2-ilmetanol cloridrato (423 mg bruto, 2,30 mmol) em CH3OH (10 mL) foi adicionado 4,6-di-iodo-2-metilpirimidina (954 mg, 2,75 mmol) e TEA (835 mg, 8,25 mmol). A mistura resultante foi aquecida até 70 ^QC e agitada for 2 hrs. LCMS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada para remover 0 solvente, vertida em água (40 mL) e extraída com EtOAc (40 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2ÔO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por coluna (PE:EA = 2:1) para gerar 0 composto do título (639 mg, rendimento de 83%) como um sólido branco.

[0335]¹H RMN (300 MHz, CDCh): δ 6,79 (s, 1H), 4,22-4,01 (m, 3H), 3,79-3,56 (m, 4H), 3,08-2,98 (m, 1H), 2,88-2,84 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,09-2,04 (m, 1H).

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Descrição 117 tert-butil 6-(1 -(tert-butoxicarbonil)Dioeridin-4-il)-5-cloro-1 /-/-indazol-1 carboxilato (D117) ^B0C | Boc

XX?

cr [0336]À uma solução de 5-cloro-6-(piperidin-4-il)-1 /7-indazol (D82,2,00 g, 8,49 mmol) e trietilamina (1,72 g, 17,0 mmol) em CH2CI2 (30 mL) foi adicionado (Boc)20 (2,03 g, 9,33 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 3 h. LC-MS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada até secura e 0 resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel eluída com PE:EtOAc = 5:1 para gerar 0 produto do título como um sólido branco (1,50 g, rendimento: 40,0%).

[0337]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 2,07 min; MS Calculada: 457,8, MS encontrada: 458,2 [M + H]⁺.

Descrição 118 tert-butil 4-(5-cloro-1 /7-indazol-6-il)oioeridina-1-carboxilato (D118) ^Boc^nV

I H

XX?

cr [0338]À uma solução de íerí-butil 6-(1-(tert-butoxicarbonil)piperidin-4-il)-5cloro-1/7-indazol-1-carboxilato (D117, 600 mg, 1,38 mmol) em MeOH (40 mL) foi adicionado NaOH aq. (1 M, 40 mL) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. LC-MS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi extraída com CH2CI2 (2 x 50 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secos sobre Na2SO4 anidro e filtrados. O filtrado foi concentrado até secura e 0 resíduo foi purificado por

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116/169 cromatografia em silica gel eluida com PE:EtOAc (1:1) para gerar o produto do título como um sólido branco (400 mg, rendimento: 86,0%).

[0339]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 1,57 min; MS Calculada: 335,8, MS encontrada: 336,1 [M + H]⁺.

Exemplo 1

2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-morfolinooirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6il)oioeridin-1-il)etanol (Isômero único desconhecido 1)

N ,'n o \-N

I cis single unknown isomer 1 [0340]À uma solução de etil 2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-morfolinopirimidin-4il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidin-1-il)acetato(D27, 90 mg, 0,18 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado L1AIH4 (33 mg, 0,88 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 30 min, em seguida, extinta com EtOAc e solução sat. De NH4CI, filtrada e concentrada. A purificação por coluna rápida Cis (acetonitrila: água = 5:95 - 90:10) para gerar 0 produto do título como um sólido branco (36 mg, rendimento: 44%).

[0341]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,87 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,92 (td, J= 9,2, 4,8 Hz, 0,5 H), 4,80 (td, J= 10,0, 4,8 Hz, 0,5 H), 4,11 (s, 3H), 3,81-3,67 (m, 10 H), 3,42-3,39 (m, 1H), 3,18-3,09 (m, 1H), 3,03 (d, J= 10,0 Hz, 1 H), 2,74-2,66 (m, 2H), 2,59-2,55 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,37 (td, J= 10,4, 4,4 Hz, 1 H), 2,26 (t, J= 12,0 Hz, 1 H), 2,00-1,96 (m, 1H), 1,90-1,80 (m, 1H).

[0342]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) [0343]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1%

FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9 min, pureza 97,59%]:

Rt = 3,56 min; MS Calculada: 470,2, MS encontrada: 471,3 [M + H]⁺.

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117/169 [0344]HPLC quiral (Coluna: AD Tamanho da coluna: 3 χ 100 mm, 3 μιτι (Daicel) (UPC). Injeção: 10 μΙ, Fase móvel: CCte/MeOH/DEA = 80/20/0,02, Vazão: 1,8 ml/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 °C): Rt = 2,653 min, ee: 100%

Exemplo 2

2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-morfolinooirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6il)Dioeridin-1-il)etanol (Isômero único desconhecido 2)

N ?N

I cis single unknown isomer 2 [0345]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para E1 partindo de LiAIH4 e uma solução de etil 2-(3-flúor4-(1 -(2-metoxi-6-morfolinop-irimidin-4-il) 5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidi n-1 -il)acetato em THF.

[0346]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,87 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,92-4,86 (m, 0,5 H), 4,80 (m, 0,5 H), 4,11 (s, 3H), 3,81 -3,67 (m, 10 H), 3,42-3,38 (m, 1H), 3,17-3,08 (m, 1H), 3,03 (d, J= 12,0 Hz, 1 H), 2,73-2,66 (m, 2H), 2,58-2,55 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,37-2,31 (m, 1 H), 2,29-2,23 (m, 1 H), 2,01-1,95 (m, 1H), 1,90-1,82 (m, 1H).

[0347]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) [0348]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9 min, pureza 98,79%]: Rt = 3,60 min; MS Calculada: 470,2, MS encontrada: 471,3 [M + H]⁺.

[0349]HPLC quiral [Coluna: AD Tamanho da coluna: 3x 100 mm,3 μιτι (Daicel) (UPC). Injeção: 10 μΙ, Fase móvel: CCte/MeOH/DEA = 80/20/0,02, Vazão: 1,8 ml/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 °C]: Rt = 3,174 min, ee: 100%

Exemplo 3

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118/169 cis-2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)DÍDeridin-1-il)etanol (isômero único desconhecido 1):

N

Cis

N ,N

N /(R) o single unknown isomer 1 [0350]0s compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para E1 partindo de uma mistura de Etil cis-2-(3-flúor-4-(1(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino) pi ri m idi n-4-i l)-5-meti I-1 H-indazol-6-il)piperidi n-1 il)acetato (D18) em THF seco, LiAIFU.

[0351]¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,87 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,88-4,76 (m, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,10 (s, 3H), 4,02-3,99 (d, J= 12Hz,1 H), 3,77-3,68 (m, 4H), 3,58-3,56 (m, 1H), 3,42-3,33 (m, 2H), 3,05-3,03 (m, 1H), 3,02-2,99 (m, 1H), 2,69 (s, 2H), 2,56 (s, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,02-1,98 (m, 2H), 2,34-2,26 (m, 2H), 2,00-1,98 (m, 1H), 1,86-1,82 (m, 1H), 1,35-1,33 (d, J= 8 Hz,3H).

[0352]¹⁹F RMN (376,5 MHz, CDCb): δ 183,92 (s) [0353]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 3,96 min; MS Calculada.:484,6, MS encontrada: 485,3 [M + H]⁺.

[0354]HPLC quiral [AD 3,0 χ 100 mm, 3 pm (Daicel) (UPC), Fase: CCh/MeOH/DEA = 85/15/0,15, vazão: 2 mL/min, temperatura: 35 ^QC]: Rt = 1,235 min, 96,3% ee.

Exemplo 4 cis-2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3-metilmorfolino)oirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)Dioeridin-1-il)etanol (Isômero único desconhecido 2):

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single unknown isomer 2 [0355]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante aos descritos para E1 partindo de 2-(3-flúor-4-(1-(2-metoxi-6-((R)-3metilmorfolino) pi ri m idin-4-i l)-5-meti I-1 H-i ndazol-6-i I) pi peridi n-1 -il)acetato (D21).

[0356]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,87 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,8 (s, 1H), 4,89-4,76 (m, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,10 (s, 3H), 4,02-3,98 (d, J= 16,0Hz,1H), 3,80-3,74 (m, 4H), 3,68-3,62 (m, 1H), 3,42-3,39 (m, 2H), 3,145-3,08 (m, 1H), 3,02-2,99 (m, 1H), 2,71-2,68 (m, 2H), 2,57 (s, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,36-2,25 (m, 2H), 2,23-2,00 (m, 1H), 1,97-1,89 (m, 2H), 1,35-1,33 (d, J= 8,0Hz,3H).

[0357]¹⁹F RMN (376,5 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) [0358]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 4,10 min; MS Calculada.:484,6, MS encontrada: 485,3 [M + H]⁺.

[0359]HPLC quiral [AD 3,0 χ 100 mm, 3 pm (Daicel) (UPC), Fase: CCh/MeOH/DEA = 85/15/0,15, vazão: 2 mL/min, temperatura: 35 ^QC]: Rt = 1,381 min, 98,1% ee.

Exemplos 5-12 [0360]Exemplo 5 a 32 foram preparados usado um procedimento semelhante

ao descril	to para E1.
Entrad a	Estruturas	Dados analíticos
E5	—o. _r—χ \--N / o HO. N Γ N : I cis / ~ single unknown isomer 1	¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,87 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,93-4,86 (m, 0,5H), 4,80-4,73 (m, 0,5 H),

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		4,47-4,43 (m, 1H), 4,11(s,3H), 4,11 -4,07 (m, 1H), 4,03 (dd, J = 11,6, 3,6 Hz, 1H), 3,81-3,71 (m, 4H), 3,62 (td, J = 12,0, 2,8 Hz, 1H), 3,42-3,39 (m, 1H), 3,37 (td, J= 13,6, 4,4 Hz, 1H), 3,18-3,10 (m, 1H), 3,03-2,98 (m, 1H), 2,72-2,68 (m, 2H), 2,58 (br, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,37 (td, J= 10,4, 3,6 Hz, 1H), 2,30 (td, J = 11,2, 2,0 Hz, 1H), 2,01-1,79 (m, 2H), 1,35 (d, J=6,8 Hz, 3H), ¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,93 (s) LC-MS: pureza 100%, Rt = 4,01 min; MS Calculada: 484,3, MS encontrada: 485,3 [M + H]⁺. HPLC quiral*: Rt = 2,443 min, ee: 99,16%
E6	\-N / ο HO. λ Z\~F N Γ '-⁷ 1 c/sl / ~ XX? single unknown isomer 2	¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,87 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 4,92-4,86 (m, 0,5H), 4,80-4,74 (m, 0,5 H), 4,47-4,43 (_m, 1H), 4,11 (s,3H), 4,11 -4,07 (m, 1H), 4,03 (dd, J = 11,6, 3,6 Hz, 1H), 3,81-3,71 (m,

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		4H), 3,62 (td, J = 12,4, 3,2 Hz, 1H), 3,42-3,39 (m, 1H), 3,37 (td, J= 12,8, 3,6 Hz, 1H), 3,18-3,10 (m, 1H), 3,03-2,98 (m, 1H), 2,72-2,68 (m, 2H), 2,58 (br, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,37 (td, J= 10,0, 4,0 Hz, 1H), 2,30 (td, J = 12,4, 2,4 Hz, 1H), 2,01-1,79 (m, 2H), 1,35 (d, J=6,8 Hz, 3H), ¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) LC-MS: Rt = 3,69 min; MS Calculada: 484,3, MS encontrada: 485,3 [M + H]⁺. HPLC quiral: Rt = 3,143 min, ee: 98,42%
E7	\—N Γ N / X—⁷ 1 c/sl / single unknown isomer 1	¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,92 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 4,96-4,82 (m, 1H), 3,84-3,72 (m, 10H), 3,48-3,44 (m, 1H), 3,17-3,04 (m, 2H), 2,75-2,69 (m, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,40-2,26 (m, 2H), 2,00-1,86 (m, 2H). ¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,90 (s)

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		LC-MS*: Rt = 5,20 min; MS Calculada: 454, MS encontrada: 455,3 [M + H]⁺. HPLC quiral**: Rt = 7,075 min, ee: 100%
E8	N F V-N / HO. /-x_k,/x~F N Γ x-' n γ 1 c/sl / XX? single unknown isomer 2	¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,95-4,80 (m, 1H), 3,82-3,71 (m, 10H), 3,49-3,43 (m, 1H), 3,12-2,99 (m, 2H), 2,72-2,71 (m, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 2,38-2,21 (m, 2H), 2,00-1,86 (m, 2H). ¹⁹F RMN (376 MHz, CDCb): δ 183,90 (s) LC-MS: fase móvel: de 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9 min, pureza 100%, Rt = 3,25 min; MS Calculada: 454, MS encontrada: 455,3 [M + H]⁺. HPLC quiral UPC, Coluna: AD, 5 pm 0,46 cm I.D. χ 25 cm L(Daicel). Injeção: 3 pl Fase

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		móvel: CO2/EtOH/ACN/DEA 75/21/9/0,025, Vazão: 3 mL/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 °C, Rt = 5,365 min, ee: 100%
E9	\—-N ! F v-n / HO. N Γ V —N f 1 I c/s / * XX/ single unknown isomer 1	¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,91 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,94-4,91 (m, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,16-4,13 (m, 1H), 4,02-4,00 (m, 1H), 3,78-3,57 (m, 4H), 3,45-3,44 (m, 1H), 3,32-3,26 (m, 1H), 3,12-3,11 (m, 1H), 3,05-3,03 (m, 1H), 2,71-2,61 (m, 2H), 2,48 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,02-1,98 (m, 2H), 2,01-1,88 (m, 3H), 1,35 (s, 3H). ¹⁹F RMN (376,5 MHz, CDCb): δ 183,90 (s). LC-MS [fase móvel: 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 3,88 min; MS Calculada.:468,5, MS encontrada: 469,3 [M + H]⁺.

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		HPLC quiral: AD 4,6 χ 250 mm, 3 pm (Daicel) (UPC), Fase: CO2/MeOH/ACN/DEA 70/18/12/0,03, vazão: 2,5 mL/min, temperatura: 35°C, Rt = 2,987 min, 99,5% ee.
E10	\—N / F \VN / HO. N / \' N Y / I eis í * single unknown isomer 2	¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8.90 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 4,93-4,80 (m, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,17-4,10 (m, 1H), 3,78-3,70 (m, 4H), 3,62-3,56 (m, 1H), 3,45-3,42 (m, 1H), 3,32-3,26 (m, 1H), 3,12-3,11 (m, 1H), 3,04-3,02 (m, 1H), 2,71-2,69 (m, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,36-2,24 (m, 3H), 1,97-1,88 (m, 2H), 1,33-1,31 (d, J=8Hz, 3H). ¹⁹F RMN (376,5 MHz, CDCh): δ 183.90 (s). LC-MS [fase móvel: 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 3,93 min; MS Calculada.:468,5, MS encontrada: 469,3 [M + H]⁺.

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		HPLC quiral [AD 4,6 χ 250 mm, 3 pm (Daicel) (UPC), Fase: CO2/MeOH/ACN/DEA 70/18/12/0,03, vazão: 2,5 mL/min, temperatura: 35 ^QC]: Rt = 3,544 min, 94,94% ee.
E11	F v-ν γ HO. Ν / Ν γ : I c/sl / ~ JU^^N single unknown isomer 1	¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,97-4,90 (m, 0,5H), 4,85-4,79 (m, 0,5 H), 4,47-4,45 (m, 1H), 4,19-4,14 (m, 1H), 4,04-4,00 (m, 1H), 3,81-3,71 (m, 4H), 3,63 (td, J = 11,6, 2,4 Hz, 1H), 3,46-3,43 (m, 1H), 3,33 (td, J = 12,8, 3,6 Hz, 1H), 3,18-3,03 (m, 2H), 2,73-2,72 (m, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 2,38-2,25 (m, 2H), 1,98-1,86 (m, 2H), 1,33 (d, J = 6,8 Hz, 3H), ¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) LC-MS*: Rt = 4,02 min; MS Calculada: 468,3, MS encontrada: 469,3 [M + H]⁺.

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		HPLC quiral [Coluna: AD Tamanho da coluna: 4,6 χ 250 mm, 5 μιτι (Daicel) (UPC). Injeção: 10 μΙ Fase móvel: CO₂/MeOH/ACN/DEA= 75/15/10/0,025, Vazão: 2,5 ml/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 °C]: Rt = 4,510 min, ee: 100%
E12	\—N ! ^SO HO. N Γ '--⁷ —N γ \==/ 2 I C/ S / ' XX/ single unknown isomer 2	¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8.90 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 4,93-4,80 (m, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,17-4,10 (m, 1H), 3,78-3,70 (m, 4H), 3,62-3,56 (m, 1H), 3,45-3,42 (m, 1H), 3,32-3,26 (m, 1H), 3,12-3,11 (m, 1H), 3,04-3,02 (m, 1H), 2,71-2,69 (m, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,36-2,24 (m, 3H), 1,97-1,88 (m, 2H), 1,33-1,31 (d, J=8Hz, 3H). ¹⁹F RMN (376,5 MHz, CDCh): δ 183.90 (s). LC-MS [fase móvel: 80% de água (0,1% FA) e 20% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 3,93 min; MS

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Calculada.:468,5, MS encontrada: 469,3[M + H]⁺. HPLC quiral [AD 4,6 χ 250 mm, 3 pm (Daicel) (UPC), Fase: CO₂/MeOH/ACN/DEA 70/18/12/0,03, vazão: 2,5 mL/min, temperatura: 35 ^QC]: Rt = 3,544 min, 94,94% ee.

fase móvel: de 90% de água (0,1 % FA) e 10% de CH3CN (0,1 % FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9 min,

Método quiral: Coluna: AD Tamanho da coluna: 3 χ 100 mm,3 pm (Daicel) (UPC). Injeção: 10 pl Fase móvel: CCte/MeOH/DEA =80/20/0,02, Vazão: 1,8 ml/min,

Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 °C, fase móvel: de 50% de água (0,1% NH3OH) e 20% de CH3CN (0,1%

NH3OH) a 5% de água (0,1% NH3OH) e 95% de CH3CN (0,1% NH3OH) em 9 min.

UPC, Coluna: AD, 5 pm, 0,46 cm I.D. χ 25 cm L. Injeção: 3 pl Fase móvel:

CCte/EtOH/ACN/DEA 75/21/9/0,025, Vazão: 3 mL/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 °C,

Exemplos 13 a 16

-(4-(6-(6-(1 -(2-f luoroeti l)pi peridi n-4-i l)-5-meti I-1 H-indazol-1 -il)-2metoxipirimidin-4-il)morfolin-2-il)etanol (Isômero único desconhecido 1; Isômero único desconhecido 2; Isômero único desconhecido3; Isômero único desconhecido4):

single unknown isomer 2

F.

F.

single unknown isomer 1

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128/169

single unknown isomer 3 single unknown isomer 4 [0361 ]À uma solução de 1 -(4-(6-(6-(1 -(2-fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-1-il)-2-metoxipirimidin-4-il)morfolin-2-il)etanona (257 mg, 0,520 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado NaBH4 (39,0 mg, 1,04 mmol) a 0 ^QC. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 3 h. LCMS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi diluída com CH2CI2 (20 mL) e H2O (20 mL). A camada aquosa separada foi extraída com CH2CI2 (2 X 30 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secas sobre Na2SCU anidro, filtradas e concentradas para gerar 0 produto em bruto como um sólido branco (254 mg, rendimento: 98%).

[0362]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% FA) e 50% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 2,6 min]: Rt = 0,79 min; MS Calculada: 498,6, MS encontrada: 499,2 [M + H]⁺.

Separação quiral:

[0363]Método: Coluna: AD-H; Tamanho da coluna: 0,46 cm I.D. x 15 cm L; Injeção: 2 ul; Fase móvel:CO2:EtOH (0,05% NH3H2O) = 60:40; Vazão: 0,5 ml; Comprimento de onda: UV 254 nm; Temperatura: 25 ^QC; solução de amostra em EtOH Isômero único desconhecido 1 [0364]¹H RMN (400 MHz, CDCh) δ 8,74 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,70-4,68 (m, 1H), 4,58-4,56 (m, 1H), 4,37-4,24 (m, 2H), 4,14 (s, 3H), 4,02-4,01 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 3,95-3,94 (m, 1H), 3,69-3,68 (m, 1H), 3,47-3,42 (m, 1H), 3,15-3,01 (m, 4H), 2,85-2,74 (m, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,32-2,25 (m, 2H), 2,10 (s, 1H), 1,92-1,90 (m, 4H), 1,30-1,28 (d, J= 8,0 Hz, 3H).

[0365]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCI₃):õ 217,725(s).

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129/169 [0366]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% FA) e 5% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10 min]: pureza 100%; Rt = 4,66 min; MS Calculada: 498,6, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

Isômero único desconhecido 2 [0367]¹H RMN (400 MHz, CDCh) δ 8,74 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,70-4,68 (m, 1H), 4,59-4,56 (m, 1H), 4,37-4,26 (m, 2H), 4,14 (s, 3H), 4,05-4,02 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,97-3,93 (m, 1H), 3,72-3,66 (m, 1H), 3,46-3,43 (m, 1H), 3,16-3,02 (m, 4H), 2,83-2,75 (m, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,32-2,26 (m, 2H), 2,10 (s, 1H), 1,92-1,90 (m, 4H), 1,30-1,28 (d, J= 8,0 Hz, 3H).

[0368]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh):0217,711 (s).

[0369]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% FA) e 5% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10 min]: pureza 98,59%; Rt = 4,65 min; MS Calculada: 498,6, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

Isômero único desconhecidos [0370]¹H RMN (400 MHz, CDCh) δ 8,75 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,70-4,68 (m, 1H), 4,58-4,56 (m, 1H), 4,34-4,22 (m, 2H), 4,14 (s, 3H), 4,08-4,06 (m, 1H), 3,79-3,76 (m, 1H), 3,70-3,65 (m, 1H), 3,36-3,32 (m, 1H), 3,16-3,09 (m, 3H), 2,94-2,74 (m, 4H), 2,46 (s, 4H), 2,32-2,26 (m, 2H), 1,92-1,90 (m, 4H), 1,30-1,28 (d, J =8,0 Hz, 3H).

[0371 ]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh):õ217,711 (s).

[0372]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% FA) e 5% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10 min]: pureza 97,14%; Rt = 4,55 min; MS Calculada: 498,6, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

Isômero único desconhecido4 [0373]¹H RMN (400 MHz, CDCh) δ 8,75 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,51 (s, 1H),

6,84 (s, 1H), 4,70-4,67 (m, 1H), 4,58-4,56 (m, 1H), 4,34-4,22 (m, 2H), 4,14 (s, 3H),

4,09-4,06 (m, 1H), 3,79-3,76 (m, 1H), 3,71-3,64 (m, 1H), 3,36-3,31 (m, 1H),

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 139/187

130/169

3,16-3,08 (m, 3H), 2,83-2,74 (m, 4H), 2,46 (s, 4H), 2,32-2,26 (m, 2H), 1,92-1,90 (m, 4H), 1,29-1,28 (d, J= 4,0 Hz, 3H).

[0374]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh):0217,732(s).

[0375]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% FA) e 5% de CH₃CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH₃CN (0,1% FA) em 10 min]: pureza 98,59%; Rt = 4,52 min; MS Calculada: 498,6, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

Exemplo 17

-(6-(6-((3S,4R)-3-flúor-1 -(2-fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-1 -il)2-metilpirimidin-4-il)azetidin-3-ol (isõmero cis único 1)

N. OH

N-V

I c/s

N \^N

N ?n

Single cis enatiomer 1 [0376]À uma solução de 6-((3S,4R)-3-flúor-1 -(2-fluoroetil)piperidin-4-il)-5metil-1 -(2-metil-6-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)azetidin-1 -il)pi rimidi n-4-i I)-1Hindazol (D62: 40 mg, 0,08 mmol) em DCM (6 mL) foi adicionado TFA (1 mL) a 0 ^QC. A mistura de reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante a noite. O solvente e TFA foi removido sob vácuo e purificado por pré-HPLC para gerar o produto do título (8,5 mg, rendimento de 25,3%) como um sólido marfim.

[0377]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,52 (s, 1H),

6,60 (s, 1H), 4,84(m,2H), 4,69 - 4,71 (t, J= 4,4Hz, 1H), 4,57 - 4,59 (t, J= 4,4Hz, 1H), 4,40- 4,44 (t, J= 7,6Hz, 2H), 4,00 - 4,02 (m, 1H), 3,44 - 3,48 (m, 1H), 3,05 - 3,07 (d, 2H), 2,83 - 2,90 (m, 2H), 2,64 (s, 1H), 2,48 (s, 1H), 2,30- 2,37 (m, 2H), 1,93 - 1,95 (m, 2H).

[0378]¹⁹F RMN (400 MHz, CDCh): δ -181,7 (s, 1F), -216,8(s, 1F).

[0379]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH₃CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH₃CN (0,1% TFA) em 10 min, pureza

95,9%]: Rt = 5,15 min; MS Calculada.: 442,23, MS encontrada: 443,7 [M + H]⁺.

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 140/187

131/169

Exemplo 18

-(6-(6-((3S,4R)-3-flúor-1 -(2-fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-1 -il)2-metilpirimidin-4-il)azetidin-3-ol (enantiômero cis único2)

N. OH n-T^f

I c/s n \^N

N ,'n

Single cis enatiomer 2 [0380]0 composto do título foi preparado por um procedimento semelhante aos descritos para E17 partindo de uma solução de 6-((3F?,4S)-3-flúor-1-(2fluoroetil)piperidin-4-il)-5-metil-1-(2-metil-6-(3-((tetrahidro-2/7-piran-2-il)oxi)azetidin-1il)pirimidin-4-il)-1 /7-indazol (D63) em DCM e TFA.

[0381]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,52 (s, 1H),

6,60 (s, 1H), 4,83 - 4,84(m,2H), 4,70 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,40- 4,44 (t, J = 7,6Hz, 2H), 3,99 - 4,02 (m, 1H), 3,44 - 3,48 (m, 1H), 3,05 - 3,07 (d, 2H), 2,83 - 2,90 (m, 2H), 2,64 (s, 1H), 2,48 (s, 1H), 2,30- 2,37 (m, 2H), 1,93 - 1,95 (m, 2H).

[0382]¹⁹F RMN (400 MHz, CDCh): δ -181,789 (s, 1F), -216,896(d, J = 6,0

Hz,1F).

[0383]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 10 min, pureza 100%]: Rt = 2,62 min; MS Calculada.: 442,23, MS encontrada: 443,7 [M + H]⁺.

Exemplo 19 (F?)-2-(4-(5-metil-1-(2-metil-6-(3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-6il)piperidin-1 -il)etanol

N

N [0384]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para E1 partindo de uma solução de (F?)-etil 2-(4-(5-metil-1-(2-metil-6-(3Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 141/187

132/169 metilmorfolino)pirimi-din-4-il)-1 H-indazol-6-il)piperidin-1-il)acetato em THF seco e LÍAIH4.

[0385]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,81 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 4,47-4,46 (m, 1H), 4,16-4,13 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 4,02-3,99 (m, 1H), 3,81-3,73 (m, 2H), 3,68 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 3,63 (td, J= 12,0, 2,8 Hz, 1H), 3,32 (td, J = 12,8, 3,6 Hz, 1H), 3,14(d, J= 11,6 Hz, 2H), 2,88-2,84 (m, 2H), 2,65-2,64 (m, 1 H), 2,63 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,29-2,27 (m, 2H), 1,93-1,72 (m, 4H), 1,33 (d, J= 6,8 Hz, 3H).

[0386]LC-MS [fase móvel: 70% de água (0,1% FA) e 30% de CH3CN (0,1% FA) em 10,0 min]: Rt = 4,12 min; MS Calculada.: 450,6, MS encontrada: 451,4 [M + H]+.

Exemplo 20 (F?)-2-(4-(1-(2-metoxi-6-(3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6il)piperidin-1 -il)etanol

[0387]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para E1 partindo de L1AIH4 e uma solução de (F?)-etil 2-(4-(1 -(2-metoxi-6-(3metilmor-pholino)pirimidin-4-il)-5-metiI-1 H-indazol-6-il)piperidin-1 -il)acetato em THF.

[0388]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,77 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 4,47 (br, 1H), 4,14 (s, 3H), 4,14-4,07 (m, 1H), 4,02-3,99 (m, 1H), 3,78-3,73 (m, 2H0, 3,68-3,64 (m, 2H), 3,61 -3,55 (m, 1H), 3,37-3,29 (m, 1H), 3,10 (d, J= 11,6 Hz, 2H), 2,86 (m, 1H), 2,64-2,60 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,28-2,26 (m, 2H), 1,90-1,82 (m, 4H), 1,34 (d, J= 6,8 Hz, 3H).

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 142/187

133/169 [0389]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 10 min, pureza 96,9%]: Rt = 4,85 min; MS Calculada: 466,6, MS encontrada: 467,4 [M + H]⁺.

Exemplo 21 (S)-2-(4-(1-(2-metoxi-6-(3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6il)piperidin-1 -il)etanol

N

N [0390]0 composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para E1 partindo de uma solução de (S)-etil 2-(4-(1 -(2-metoxi-6-(3metilmorfolino)pirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidin-1-il)acetato em THF e LÍAIH4.

[0391]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,77 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,47-4,45 (m, 1H), 4,14 (s, 3H), 4,11 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,02 (dd, J = 11,2, 3,2 Hz, 1H), 3,81-3,71 (m, 2H), 3,65 (t, J= 5,2 Hz, 2H), 3,62 (td, J= 12,0, 2,8 Hz, 1H), 3,36 (td, J= 13,2, 4,0 Hz, 1H), 3,11 (d, J= 11,2 Hz, 2H), 2,89-2,83 (m, 1H),

2,61 (t, J=5,2 Hz, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,30-2,24 (m, 2H), 1,93-1,72 (m, 4H), 1,35 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

[0392]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% FA) e 10% de CH3CN (0,1% FA) a 5% de água (0,1% FA) e 95% de CH3CN (0,1% FA) em 9 min, pureza 98,9%]: Rt = 4,96 min; MS Calculada: 466,3, MS encontrada: 467,4 [M + H]⁺.

Exemplo 22

2-(4-(1 -(6-(azetidin-1 -i l)-2-metoxi piri m idi n-4-i l)-5-meti 1-1 /-/-indazol-6-il)-3fluoropiperidin-1 -il)etanol (Isômero único desconhecido, Rt = 3,381 min)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 143/187

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[0393]À uma solução de etil 2-(4-(1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-5metil-1/-/-indazol-6-il)-3-fluoropiperidin-1-il)acetato (D76, 49 mg, 0,10 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado L1AIH4 (19 mg, 0,51 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 60 min., extinta com EtOAc e NH4CI sat. e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado por Cis coluna rápida (acetonitrila:água = 5:95 - 95:5) para gerar 0 produto do título (18,0 mg, rendimento: 40,0%) como um sólido branco.

[0394]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,89 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,43 (s, 1H), 4,90 (td, J= 9,6, 4,4 Hz, 0,5 H), 4,78 (td, J= 9,6, 4,4 Hz, 0,5 H), 4,18(t, J = 7,6 Hz, 4 H), 4,11 (s, 3H), 3,68(s, 2H), 3,41 -3,38 (m, 1 H), 3,18-3,08 (m, 1H), 3,02 (d, J= 11,6 Hz, 1 H), 2,73-2,64 (m, 2H), 2,54-2,51 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,48-2,39 (m, 2 H), 2,37 (td, J= 10,0, 4,4 Hz, 1 H), 2,29 (td, J= 11,6, 2,4 Hz, 1 H), 2,02-1,96 (m, 1H), 1,88-1,77 (m, 1H).

[0395]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) [0396]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1 %T FA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9 min]: Rt = 4,02 min; MS Calculada: 440,2, MS encontrada: 441,3 [M + H]⁺.

[0397]HPLC quiral [método: Coluna: AD Tamanho da coluna: 3 χ 100 mm, 3 pm (Daicel) (UPC). Injeção: 10 pl, Fase móvel: CCh/MeOH/DEA = 80/20/0,02, Vazão: 1,8 ml/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 ^QC]: Rt = 3,381 min, ee: 99,92%

Exemplo 23

2-(4-(1 -(6-(azetidin-1 -i l)-2-metoxi piri m idi n-4-i l)-5-meti 1-1 H-i ndazol-6-i l)-3fluoropiperidin-1 -il)etanol (Isômero único desconhecido, Rt = 3,381 min)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 144/187

135/169

[0398]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para E22 partindo de L1AIH4 e uma solução de etil 2-(4-(1 -(6-(azetidin-1-il)-2metoxipi ri m idi n-4-i l)-5-meti 1-1 H-i ndazol-6-il)-3-f I uoropi peridin-1 -il)acetato (D79) em THF.

[0399]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,89 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,90 (td, J= 10,0, 4,4 Hz, 0,5 H), 4,78 (td, J= 10,0, 4,4 Hz, 0,5 H), 4,18 (t, J= 7,2 Hz, 4 H), 4,11 (s, 3H), 3,68 (s, 2H), 3,41-3,38 (m, 1 H), 3,18-3,09 (m, 1H), 3,02 (d, J= 10,8 Hz, 1 H), 2,74-2,64 (m, 2H), 2,54-2,51 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,48-2,38 (m, 2 H), 2,37 (td, J= 10,4, 4,0 Hz, 1 H), 2,29 (td, J= 12,0, 2,4 Hz, 1 H), 2,00-1,94 (m, 1H), 1,87-1,78 (m, 1H).

[0400]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,92 (s) [0401]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9 min]: Rt = 4,00 min; MS Calculada: 440,2, MS encontrada: 441,3 [M + H]⁺.

[0402]HPLC quiral [método: Coluna: AD Tamanho da coluna: 3 mm x 100 mm, 3 pm (Daicel) (UPC). Injeção: 10 μΙ, Fase móvel: CCh/MeOH/DEA = 80/20/0,02, Vazão: 1,8 ml/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 35 ^QC]: Rt = 4,868 min, ee: 97,22%

Exemplos 24 e 25

-(4-(5-cloro-1 - (6-(( F?)-2-(h idroximeti l)morf oli no)-2-meti Ipi ri m idi n-4-i I)-1Hindazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ol (Isômero único desconhecido 1, Rt = 4,323 min;

Isômero único desconhecido 2, Rt = 4,550 min)

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OH

[0403]A mistura (D85) foi separada quiralmente por SFC para gerar os isômeros abaixo.

Separação quiral:

[0404] Método: Coluna: AD-H; Tamanho da coluna: 0,46 cm x 15 cm; Fase móvel: CChJPA (0,1% NH3H2O) = 70:30; Vazão: 0,5 ml; Comprimento de onda: UV 254 nm; Temperatura: 25 ^QC; amostra em EtOH

Pico 1 (E24): Isômero único desconhecido 1 [0405]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,74 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,32-4,28 (m, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,88 (s, 1H), 3,78-3,74 (m, 1H),

3,71 -3,68 (m, 3H), 3,23-3,09 (m, 3H), 3,01 -2,92 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,56-2,50 (m, 1H), 2,41-2,39 (m, 1H), 2,38-2,34 (m, 1H), 2,16-2,13 (m, 1H), 2,04-2,01 (m, 2H), 1,91-1,75 (m, 3H), 1,18 (s, 1H), 1,16 (s, 3H).

[0406]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,77 min; MS Calculada: 500,2, MS encontrada: 501,2 [M + H]⁺.

[0407]HPLC quiral: Rt = 4,323 min, ee: 100%

Pico 2 (E25): Isômero único desconhecido 2 [0408]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,74 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,30 (s, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,78-3,74 (m, 1H), 3,71-3,68 (m, 3H), 3,22-3,11 (m, 3H), 2,98-2,96 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,52 (s, 1H), 2,38-2,37 (m, 1H), 2,30 (s, 1H), 2,15 (s, 1H), 2,04-2,01 (m, 2H), 1,87-1,78 (m, 3H), 1,17 (s, 1H), 1,16 (s, 3H).

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 146/187

137/169 [0409]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,78 min; MS Calculada: 500,2, MS encontrada: 501,2 [M + H]⁺.

[0410]HPLC quiral: Rt = 4,550 min, ee: 98,1%

Exemplos 26 e 27

-(4-(5-cloro-1 - (6-(( S)-2-(hidroxi meti I) morfoli no)-2-meti Ipi ri m idi n-4-i I)-1Hindazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ol (Isômero único desconhecido 1, Rt = 4,203 min; Isômero único desconhecido 2, Rt = 4,413 min)

[0411]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante ao descrito para E24 e E25 partindo de uma solução de (S)-1-(4-(5-cloro1 - (6-(2-(hidroxi metil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-i I)-1 /-/-indazol-6-i l)pi peridi n-1 il)propan-2-ona (D86) em MeOH e NaBH4 a 0 ^QC por 3 h.

[0412]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,77 min; MS Calculada: 500,2, MS encontrada: 501,2 [M + H]⁺.

Separação quiral:

[0413]Método: Coluna: AD-H; Tamanho da coluna: 0,46 cm χ 15 cm, Fase móvel: CO2:IPA (0,1% NH3 H2O) = 70:30; Vazão: 0,5 ml; Comprimento de onda: UV 254 nm; Temperatura: 25 ^QC; Sample em EtOH

Pico 1 (E26): Isômero único desconhecido 1 [0414]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,74 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,30 (s, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,80-3,74 (m, 1H),

3,71-3,68 (m, 3H), 3,22-3,11 (m, 3H), 3,00-2,95 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,52 (s, 1H),

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 147/187

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2,40-2,37 (m, 1H), 2,33-2,30 (m, 1H), 2,15 (s, 1H), 2,04-2,01 (m, 2H), 1,88-1,75 (m, 3H), 1,17 (s, 1H), 1,16 (s, 3H).

[0415]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,78 min; MS Calculada: 500,2, MS encontrada: 501,2 [M + H]⁺.

[0416]HPLC quiral: Rt = 4,203 min, ee: 100%

Pico 2 (E27): Isômero único desconhecido 2 [0417]¹H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,30 (s, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,80-3,74 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 3H), 3,22-3,11 (m, 3H), 3,00-2,95 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,52 (s, 1H), 2,41 -2,37 (m, 1H), 2,33-2,30 (m, 1H), 2,15 (s, 1H), 2,04-2,01 (m, 2H), 1,88-1,75 (m, 3H), 1,17 (s, 1H), 1,16 (s, 3H)..

[0418]LC-MS [fase móvel: de 50% de água (0,1% TFA) e 50% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,6 min]: Rt = 0,78 min; MS Calculada: 500,2, MS encontrada: 501,2 [M + H]⁺.

[0419]HPLC quiral: Rt = 4,413 min, ee: 99,7%

Exemplos 28 e 29

C/s-1 -(3-flúor-4-(1 -(6-(( F?)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5metil-1 H-indazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ol (isômero único desconhecido 1, Rt = 5,609 min; isômero único desconhecido 2, Rt = 6,101 min)

[0420]À uma solução de 1-(c/s-3-flúor-4-(1-(6-((F?)-2-(hidroximetil)morfolino)2-metilp-irimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ona (D90, 79 mg,

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0,16 mmol, a partir do Pico 1) em MeOH (5 mL) foi adicionado NaBHk (12 mg, 0,32 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h, extinta com água (0,5 mL) e diluída com DCM (30 mL). A camada orgânica separada foi seca, filtrada e concentrada para gerar o produto do título como um sólido branco (82 mg, bruto) [0421]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CFbCN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,24 min; MS Calculada.:498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

Separação quiral:

[0422]Método: AD-H, Tamanho da coluna : 0,46 cm x 15 cm, Fase móvel: CO2/ETOH (0,1% NH3 H2O) = 60/40, Vazão : 0,5 mL/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura : 25 ^QC.

Pico 1 (E28): Isômero único desconhecido 1 [0423]¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,97-4,79 (m, 1H), 4,31-4,29 (m, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,92 (br, 1H), 3,81 -3,67 (m, 4H), 3,40-3,34 (m, 2H), 3,14-3,11 (m, 3H), 2,98-2,91 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,62-2,51 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,39-2,33 (m, 1H), 2,15-2,07 (m, 1H), 2,01 -1,97 (m, 2H), 1,90-1,81 (m, 1H), 1,19 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

[0424]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCb): δ 183,93 (s) [0425]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,16 min; MS Calculada.: 498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

[0426]HPLC quiral: Rt = 5,609 min, ee: 100%

Pico 2 (E29): Isômero único desconhecido 2 [0427]¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,94-4,76 (m, 1H), 4,33-4,27 (m, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,93-3,88 (m,

1H), 3,79-3,67 (m, 4H), 3,52-3,49 (m, 1H), 3,33 (brs, 1H), 3,15-3,08 (m, 2H),

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 149/187

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2,98-2,91 (m, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,50-2,40 (m, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,23-2,20 (m, 1H), 2,01-1,95 (m, 3H), 1,19 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

[0428]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCb): δ 183,93 (s) [0429]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,17 min; MS Calculada.: 498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

[0430]HPLC quiral: Rt = 6,101 min, ee: 99,22%

Exemplos 30 e 31

-(c/s-3-flúor-4-(1 -(6-(( F?)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5metil-1 H-indazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ol (Isômero único desconhecido 1, Rt = 4,967 min; Isômero único desconhecido 2, Rt = 5,706 min)

Cis

N ?N

Y N OH l

N 7 (^r>q X—-N /

N 7 r^R>o X-—N / [0431 ]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante ao descrito para E28 e E29 partindo de NaBH4 e uma solução de 1-(c/s3-flúor-4-(1 -(6-((F?)-2-(hidroxi-metil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 H-indazol-

6-il)piperidin-1-il)-propan-2-ona (E95) em MeOH (5 mL) em uma porção em temperatura ambiente por 1 hora.

[0432]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,29 min; MS Calculada.: 498,28, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

Separação quiral:

[0433]Método: Coluna: AD-H; Tamanho da coluna: 0,46 cm x 15 cm; Fase móvel: CO2:EtOH (0,1% NH3 H2O) = 60:40; Vazão: 0,5 mL/min; Comprimento de onda: UV 254 nm; Temperatura: 25 ^QC; Amostra em EtOH

Pico 1 (E30): Isômero único desconhecido 1

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 150/187

141/169 [0434]¹H RMN (400 MHz, CDCh) δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,93-4,72 (m, 1H), 4,33-4,27 (m, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,95-3,90 (m, 1H), 3,80-3,67 (m, 4H), 3,54-3,48 (m, 1H), 3,33 (br, 1H), 3,15-3,11 (m, 2H), 2,95-2,91 (m, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,51-2,40 (m, 3H), 2,25-2,18 (m, 1H), 1,98-1,89 (m, 3H), 1,19 (d, J =6,0 Hz, 3H).

[0435]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh) δ 183,93 (s, 1F), [0436]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,17 min; MS Calculada: 498,28, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

[0437]HPLC quiral: Rt = 4,967 min, ee 100%;

Pico 2 (E31): Isômero único desconhecido 2 [0438]¹H RMN (400 MHz, CDCh) δ 8,92 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,98-4,86 (m, 1H), 4,33-4,28 (m, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,96 (br, 1H), 3,78-3,67 (m, 4H), 3,39-3,36 (m, 2H), 3,15-3,11 (m, 3H), 2,97-2,91 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,60-2,37 (m, 3H), 2,16 (br, 1H), 2,02-1,97 (m, 3H), 1,19 (d, J=6,4 Hz, 3H).

[0439]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh) δ 184,01 (s, 1F) [0440]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,18 min; MS Calculada: 498,28, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

[0441]HPLC quiral: Rt = 5,706 min, ee 98,48%;

Exemplos 32 e 33

C/s-1-(3-flúor-4-(1-(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ol (isômero único desconhecido 1, Rt = 4,930 min; isômero único desconhecido 2, Rt = 5,263 min)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 151/187

142/169

[0442]À uma solução de 1-(c/s-3-flúor-4-(1-(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)2-metilpir-imidin-4-il)-5-metiI-1 H-indazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ona (D91,110 mg, 0,220 mmol, a partir do Pico 1) em MeOH (5 mL) foi adicionado NaBHh (42,0 mg, 1,10 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h, diluída com NH4CI sat. (60 mL) e extraída com EtOAc (60 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas e filtradas. O filtrado foi concentrado para gerar 0 produto do título (100 mg, bruto) como um sólido branco.

[0443]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 10,0 min]: Rt = 4,46 min; MS Calculada.: 498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

Separação quiral:

[0444]Método: AD-H, Tamanho da coluna : 0,46 cm x 15 cm, Fase móvel : CO2:EtOH (0,1% NH3 H20)=60:40, Vazão : 0,5 mL/min, Comprimento de onda : UV 254 nm, Temperatura : 25 ^QC

Pico 1 (E32): Isômero único desconhecido 1 [0445]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,94-4,80 (m, 1H), 4,29-4,27 (m, 2H), 4,06-4,03 (m, 1H), 3,91 (br, 1H), 3,77-3,75 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 3H), 3. 34-3,32 (m, 2H), 3,14-3,08 (m, 2H), 2,97-2,95 (m, 1H), 2,84 (s, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,53-2,50 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,39-2,33 (m, 2H), 2,11-2,09 (m, 1H), 2,00-1,98 (m, 2H), 1,97-1,85 (m, 1H), 1,19-1,18 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

[0446]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,391 (s)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 152/187

143/169 [0447]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CFhCN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH₃CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 4,33 min; MS Calculada.:498,3, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

[0448]HPLC quiral: Rt = 4,930 min, ee: 100%

Pico 2 (E33): Isômero único desconhecido 2 [0449]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,95 (s, 1H), 4,92-4,79 (m, 1H), 4,30-4,27 (m, 2H), 4,06-4,05 (m, 1H), 3,92-3,90 (m, 1H), 3,77-3,72 (m, 1H), 3,69-3,65 (m, 3H), 3,51-3,50 (m, 1H), 3,33-3,31 (m, 1H), 3,15-3,08 (m, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,47-2,40 (m, 2H), 2,22-2,18 (s, 1H), 1,96-1,94 (m, 3H), 1,61-1,58 (m, 1H), 1,20-1,18 (d, J= 6,4 Hz, 3H).

[0450]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,917 (s) [0451]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 4,34 min; MS Calculada.:498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

[0452]HPLC quiral: Rt = 5,263 min, ee: 100%

Exemplos 34 e 35

C/s-1-(3-flúor-4-(1-(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5metil-1 /7-indazol-6-il)piperidin-1-il)propan-2-ol (a partir do Pico 2) (isômero único desconhecido 1, Rt = 4,861 min; isômero único desconhecido 2, Rt = 5,947 min)

Cis

N ,N γ N OH l

N 7 A

V-N [0453]Os compostos do título foram preparados por um procedimento semelhante ao descrito para E27 e E28 partindo de NaBH4 e uma solução de 1-(cisPetição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 153/187

144/169

3-flúor-4-(1 -(6-((S)-2-(hidroximeth-il)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil-1 Hindazol-6-il)piperidin-1 -il)propan-2-ona (D96).

[0454]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 2,0 min]: Rt = 1,30 min; MS Calculada.:498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

Separação quiral:

[0455]Método: AD-H, Tamanho da coluna: 0,46 cm x 15 cm, Fase móvel: CO2:EtOH (0,1 % NH3 H20)=60:40, Vazão: 0,5 mL/min, Comprimento de onda: UV 254 nm, Temperatura: 25 ^QC

Pico 1 (E34): Isômero único desconhecido 1 [0456]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,90 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,95 (s, 1H), 4,90-4,77 (m, 1H), 4,32-4,29 (m, 2H), 4,07-4,05 (m, 1H), 3,92 (br, 1H), 3,79-3,74 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 3H), 3. 52-3,49 (m, 1H), 3,32 (br, 1H), 3,13-3,11 (m, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,48-2,40 (m, 2H), 2,18-2,17 (m, 1H), 2,04 (br, 1H), 1,97-1,94 (m, 2H), 1,19-1,18 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

[0457]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,913 (s) [0458]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 4,33 min, MS Calculada.:498,3, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

[0459]HPLC quiral: Rt = 4,861 min, ee: 100%

Pico 2 (E35): Isômero único desconhecido 2 [0460]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,91 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,53 (s, 1H),

6,95 (s, 1H), 4,97-4,84 (m, 1H), 4,30-4,28 (m, 2H), 4,09-4,04 (m, 1H), 3,93 (br, 1H), 3,74-3,70 (m, 1H), 3,69-3,67 (m, 3H), 3,39-3,34 (m, 1H), 3,14-3,11 (m, 3H), 2,94-2,90 (m, 1H), 2,84 (br, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,54-2,50 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,37-2,34 (m, 1H), 2,16 (s, 1H), 2,16-2,01 (m, 2H), 1,63-1,62 (m, 1H), 1,20-1,18 (d, J=6,4 Hz, 3H).

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 154/187

145/169 [0461 ]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ 183,593 (s) [0462]LC-MS [fase móvel: de 95% de água (0,1% TFA) e 5% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 4,34 min, MS Calculada.:498,3, MS encontrada: 499,4 [M + H]⁺.

[0463]HPLC quiral: Rt = 5,947 min, ee: 100%

Exemplo 36

-(2-metil-6-(5-metil-6-(1 - (3,3,3-trif luoro-2-h idroxi propi I) pi peridi n-4-i I)-1Hindazol-1 -il)pirimidin-4-il)azetidin-3-ol

N

N ,'n [0464]À uma solução de 1-(2-metil-6-(5-metil-6-(piperidin-4-il)-1 H-indazol-1il)pirimidin-4-il)azetidin-3-ol (D98, 330 mg, 0,870 mmol) em acetonitrila (4 mL) foi adicionado 2-(trifluorom-etil)oxirano (489 mg, 4,40 mmol). A mistura de reação foi agitada a 30 ^QC durante a noite e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia rápida (DCM/MeOH = 20:1) para gerar 0 produto do título (200 mg, 47%) como um sólido branco.

[0465]¹HRMN (400 MHz, DMSO-ofe): δ 8,74 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,13 (d, J=5,2 Hz, 1H), 5,79 (d, J=6,8 Hz, 1H), 4,63-4,61 (m, 1H),4,314,27 (m, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,83-3,79 (m, 2H), 3,31 (s, 9H), 3,10-3,07 (m, 2H), 2,332,21 (m, 2H), 1,83-1,67 (m, 4H).

[0466]LCMS [coluna: Waters X-bridge C18 5um; tamanho da coluna: 4,6 mm x 50 mm; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NH4AC em água); gradiente (B%) em 6 mins]: Rt = 2,966 min, MS Calculada.: 490, MS encontrada: 491 [M + H]⁺.

Exemplo 37

-flúor-3-(4-(1 -(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil1 H-indazol-6-i I) piperidin-1 -il)propan-2-ol

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 155/187

146/169

[0467]À uma suspensão de 1-flúor-3-(4-(5-metil-1 /-/-indazol-6-il)piperidin-1il)propan-2-ol (D100, 150 mg, 0,510 mmol), (S)-(4-(6-iodo-2-metilpirimidin-4il)morfolin-2-il)metanol (D113, 173 mg, 0,510 mmol), Cul (98,0 mg, 0,510 mmol) e K3PO4 (219 mg, 1,03 mmol) em tolueno (10 mL) foi adicionado A/í,AUdimetiletano-1,2diamina (91,0 mg, 1,03 mmol). A mistura resultante foi desgaseificada com N2 três vezes, agitada a 80 ^QC por 2 h sob N2, diluída com EtOAc (30 mL), lavada com NH4CI sat. (30 mL x 2) e salmoura (30 mL), seca sobre Na2SCU anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (CH2CI2: MeOH=10:1) seguido por Cis eluído com MeCN/HteO (de 5/95 a 95/5) para gerar 0 produto do título (60 mg, rendimento: 23%) como um sólido branco.

[0468]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,80 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,50 (s, 1H),

6,96 (s, 1H), 4,60-4,57 (m, 0,5 H), 4,49-4,45 (m, 1H), 4,37-4,27 (m, 2,5H), 4,08-3,95 (m, 2H), 3,77-3,65 (m, 5H), 3,20-2,82 (m, 5H), 2,64 (s, 3H), 2,59-2,49 (m, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,23-2,17 (m, 1H), 2,00-1,81 (m, 5H).

[0469]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ -231,972 [0470]LC-MS [fase móvel: de 90% de água (0,1% TFA) e 10% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9 min]: Rt = 4,41 min; MS Calculada: 498,3, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

Exemplo 38

2-flúor-3-(4-(1-(6-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)-2-metilpirimidin-4-il)-5-metil1 /-/-indazol-6-i I) piperidin-1 -il)propan-1 -ol

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 156/187

147/169

[0471 ]À uma suspensão de 2-flúor-3-(4-(5-metil-1 H-indazol-6-il)piperidin-1il)propan-1-ol (D100, 150 mg, 0,510 mmol), (S)-(4-(6-iodo-2-metilpirimidin-4il)morfolin-2-il)metanol (D113, 173 mg, 0,510 mmol), Cul (98,0 mg, 0,510 mmol) e K3PO4 (219 mg, 1,03 mmol) em tolueno (10 mL) foi adicionado A/í,AUdimetiletano-1,2diamina (91,0 mg, 1,03 mmol). A mistura resultante foi desgaseificada com N2 três vezes, agitada a 80 ^QC por 3 h sob N2, diluída com DCM (50 mL), lavada com NH4CI sat. (50 mL) e salmoura (50 mL). A solução orgânica foi seca sobre Na2ÔO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel (CH2Cl2:MeOH=10:1) seguido por C18 eluída com MeCN/hhO (de 5/95 a 95/5) para gerar 0 produto do título (85,0 mg, rendimento: 33,0%) como um sólido branco.

[0472]¹H RMN (400 MHz, CDCh): δ 8,77 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,50 (s, 1H),

6,95 (s, 1H), 4,83-4,78 (m, 0,5 H), 4,71 -4,66 (m, 0,5 H), 4,32-4,28 (m, 2H), 4,08-4,04 (m, 1H), 3,97-3,95 (m, 1H), 3,92-3,90 (m, 1H), 3,79-3,65 (m, 4H), 3,32-3,29 (m, 1H), 3,18-3,07 (m, 2H), 2,98-2,82 (m, 4H), 2,64 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,38-2,29 (m, 2H), 1,94-1,88 (m, 4).

[0473]¹⁹F RMN (376 MHz, CDCh): δ -190,88 [0474]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9 min]: Rt = 3,50 min; MS Calculada: 498,3, MS encontrada: 499,3 [M + H]⁺.

Exemplo 39 (S)-(4-(2-metil-6-(5-metil-6-(1 - (2-(metilsulf on il)eti l)pi peridi n-4-i I)-1 H-\ndazol-1 il)pirimidin-4-il)morfolin-2-il)metanol

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 157/187

148/169 °Ί

OH [0475]À uma mistura de (S)-(4-(2-metiI-6-(5-metil-6-(piperidin-4-iI)-1 H-indazol1 -il)pirimi-din-4-il)morfolin-2-il)metanol (D100, 120 mg, 0,284 mmol) e NazCCh (75,0 mg, 0,710 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado (metilsulfonil)eteno (66,0 mg, 0,625 mmol). A mistura de reação foi agitada a 65 ^QC por 3 horas, diluída com H2O (20 mL) e extraída com EtOAc (20 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas e purificado por TLC preparativa (DCM/MeOH = 20/1) para gerar 0 produto do título (19,0 mg, 13,0%) como um sólido amarelo.

[0476]¹HRMN (400 MHz, CDCh): δ 8,79 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,30 (t, J = 11,2 Hz, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,81 -3,77 (m, 1 H), 3,75-3,65 (m,

3H), 3,22 (br s, 2H), 3,15-3,08 (m, 6H), 2,98-2,92 (m, 3H), 2,86 (t, J= 11,2 Hz, 1H),

2,60 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,28 (t, J= 10,4 Hz, 2H), 1,98-1,82 (m, 5H).

[0477]LC-MS [coluna: C18; tamanho da coluna: 4,6 x 50 mm; fase móvel: B (MeCN), A (0,02% NH4AC em água); gradiente (B%)]: Rt = 3,637 min, MS Calculada.:

528, MS encontrada: 529 [M + H]⁺.

Exemplo 40

-(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxi piri m idi n-4-i l)-5-meti l-6-( 1 - (2-(metilsulfon il)ethil)pi peridi n-4-i I)-1 H-indazol °Ί

[0478]À uma mistura de 1 -(6-(azetidin-1 -il)-2-metoxipirimidin-4-il)-5-metil-6(piperidin-4-il)-1 H-indazol (D112,150 mg, 0,40 mmol) e NazCCh (110 mg, 1,00 mmol)

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 158/187

149/169 em THF (5 mL) foi adicionado (metilsulfonil)eteno (93,0 mg, 0,880 mmol). A mistura de reação foi agitada a 65 ^QC por 2 horas, diluída com H2O (20 mL) e extraída com EtOAc (20 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas, trituradas com MeOH (5 mL) e filtradas. A torta foi purificada por TLC preparativa (DCM/MeOH = 20/1) para gerar 0 produto do título (27,0 mg, 14,0%) como um sólido branco.

[0479]¹HRMN (400 MHz, CDCb): δ 8,74 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,43 (s, 1H), 4,17 (t, J= 7,2 Hz, 4H), 4,09 (s, 3H), 3,20 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 3,10-3,09 (m, 5H), 2,98-2,93 (m, 2H), 2,85 (t, J= 11,2 Hz, 1H), 2,45-2,40 (m, 5H), 2,25 (t, J= 11,2 Hz, 2H), 1,94-1,91 (m, 2H), 1,83-1,75 (m, 2H).

[0480]LC-MS [coluna: Cis; tamanho da coluna: 4,6 x 50 mm; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NH4AC em água); gradiente (B%)]: Rt = 3,817 min, MS Calculada.: 484, MS encontrada: 485 [M + H]⁺.

Exemplo 41 (fí)-(4-(2-metil-6-(5-metil-6-(1-(2-(metilsulfonil)etil)piperidin-4-il)-1 /-/-indaz-ol1 -il)pirimidin-4-il)morfolin-2-il)metanol

N

N ,'n (^R>O [0481 ]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para E40 partindo de uma mistura de (fí)-(4-(2-metil-6-(5-metil-6-(piperidin-4il)-1 H-indazol-1 -i l)pi ri-midin-4-il)morfolin-2-il)metanol (D109),

NazCCb, (metilsulfonil)eteno em THF a 65 ^QC por 3 hrs.

[0482]¹HRMN (400 MHz, CDCb): δ 8,79 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 4,33-4,26 (m, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,80-3,65 (m, 4H), 3,23-3,19 (m, 2H), 3,14-3,11 (m, 6H), 2,98-2,95 (m, 3H), 2,89-2,83 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,30-2,25 (m, 2H), 1,99-1,84 (m, 5H).

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 159/187

150/169 [0483]LCMS [coluna: Waters X-bridge Cis 5 pm; tamanho da coluna: 4,6 mm x 50 mm; fase móvel: B (CH3CN), A (0,02% NHhAc em água); gradiente (B%) em 6 mins]: Rt = 3,375 min, MS Calculada.: 528, MS encontrada: 529 [M + H]⁺.

Exemplo 42

-(2-metoxi-6-(5-metil-6-(1 - (2-(metilsulfon i l)eti I) pi peridi n-4-i I)-1 /-/-indazol-1 il)pirimidin-4-il)azetidin-3-ol o

II oT

OH [0484]O composto do título foi preparado por um procedimento semelhante ao descrito para E40 partindo de uma solução de 1-(2-metoxi-6-(5-metil-6-(piperidin-4-il)

H-indazol-1 -il)pirimi-din-4-il)azetidin-3-ol e NazCCh em THF.

[0485]¹HRMN (400 MHz, CDCh): δ 8,73 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 4,83 (br s, 1H), 4,43-4,39 (m, 2H), 4,09 (s, 3H), 4,03-3,99 (m, 2H), 3,21-3,17 (m, 2H), 3,10-3,07 (m, 5H), 2,95-2,84 (m, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,29-2,21 (m, 3H), 1,94

1,76 (m, 4H).

[0486]LC-MS [coluna: Cis; tamanho da coluna: 4,6 mm x 50 mm; fase móvel:

B (CH3CN), A (0,02% NH4AC em água); gradiente (B%)]: Rt = 3,531 min, MS

Calculada.: 500, MS encontrada: 501 [M + H]⁺.

Exemplo 43

-(2-metil-6-(5-metil-6-(1 - (2-(metilsulfon il)eti l)pi peridi n-4-i I)-1 /-/-indazol-1 il)pirimidin-4-il)azetidin-3-ol o \ O

OH

Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 160/187

151/169 [0487]À uma mistura de 1 -(2-metil-6-(5-metil-6-(piperidin-4-il)-1 /-/-indazol-1 -il) pirimidin-4-il)azetidin-3-ol (D98,100 mg, 0,260 mmol) foi em EtOH (5 mL) foi adicionado 1 -bromo-2-(metilsulfonil)etano (35,0 mg, 0,310 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 hrs e concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC eluída com CH3CN/H2O (0,1% TFA, de 15/85 a 95/5) para gerar 0 produto do título como um sólido branco (18,0 mg, rendimento: 14,0%).

[0488]¹H RMN (400 MHz, CDCb): δ 8,73 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,53 (s, 1H), 5,58 (br, 1H), 4,75 (br, 1H), 4,39-4,34 (m, 2H), 3,96-3,95 (m, 2H), 3,57-3,51 (m, 3H), 3,35-3,34 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 2,71 (br, 1H), 2,56(s, 3H), 2,40-2,37 (m, 4H), 2,16-2,13 (m, 2H), 2,04-2,00 (m, 2H), 1,99-1,97 (m, 2H).

[0489]LC-MS [fase móvel: de 80% de água (0,1% TFA) e 20% de CH3CN (0,1% TFA) a 5% de água (0,1% TFA) e 95% de CH3CN (0,1% TFA) em 9,0 min]: Rt = 2,56 min, MS Calculada.: 484,6, MS encontrada: 485,3 [M + H]⁺.

F.Ensaios e Dados [0490]Como afirmado acima, os compostos da presente invenção são inibidores da LRRK2 quinase e podem ser úteis no tratamento de doenças mediadas por LRRK2. As atividades e / ou propriedades biológicas dos compostos da presente invenção podem ser determinadas utilizando qualquer ensaio adequado, incluindo ensaios para determinar a atividade de um composto candidato como um inibidor de LRRK2 quinase, bem como modelos teciduais e in vivo.

.Ensaios

a.Ensaio de Espectrometria de Massa de Inibição de LRRK2 Humana de Comprimento completo G2019 [0491]Este ensaio para inibição da quinase de repetição rica em leucina 2 (LRRK2) é baseado na medição direta do peptídeo ‘LRRKtide’ (LRRKtide:

RLGRDKYKT*LRQIRQ e “*” se refere ao sítio da fosforilação. e 'LRRKtide' fosforilado

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152/169 usando um ensaio de espectrometria de massa RapidFire de alto rendimento. Os inibidores são compostos que reduzem a conversão de LRRKtide em fosfo-LRRKtide.

Preparação de plasmídeo de LRRK2 Humana G2019 [0492]lniciadores utilizados para clonagem de PCR:

pHTBV-F:SEQ ID No: 1

LRRK2 wt-F1 :SEQ ID No: 2

LRRK2 wt-R1: SEQ ID No: 3

LRRK2 wt-F2: SEQ ID No: 4

LRRK2 wt-R2: SEQ ID No: 5

LRRK2 wt-F3:SEQ ID No: 6 pHTBV-R: SEQ ID No: 7 [0493]pHTBV1-N-Flag-hu LRRK2 foi gerado por amplificação em PCR da sequência de LRRK2 completa com tag Flag N terminal de pcDNA3,1 (+)_Human_LRRK2 (sequência de referência da NCBI: NP_940980,3) com os iniciadores descritos acima e clonados em vetor pHTBV1mcs3 e entre os sítios BamHI e Kpnl.

[0494]A sequência de codificação Flag-LRRK2 de comprimento completo G2019éSEQ ID No: 8.

[0495]A sequência de aminoácidos traduzida para a proteína LRRK2 flag tagged em N terminal de comprimento completo G2019 é SEQ ID No: 9.

Culturas de células de insetos [0496]As células de inseto Sf9 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) foram mantidas a 27^QC em SFM SF 900 II em frascos de agitação de 500 mL (Erlenmeyer, Corning). As células foram mantidas em fase exponencial de crescimento e subcultivadas duas vezes por semana. Para volumes maiores, as células foram cultivadas em frascos de agitação de 2 litros (Erlenmeyer, Corning) enquanto eram agitadas com 120 rpm a 27° C em incubadora agitadora.

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153/169

Geração do vírus BacMam [0497]Para gerar o vírus BacMam recombinante, as células competentes DHlOBac (10361-012, Invitrogen) foram transformadas pelo plasmídeo LRRK2 BacMam humano genotipicamente normal para gerar o DNA de baculovírus recombinante. As células de inseto Sf9 foram co-transfectadas com uma mistura de DNA de baculovírus recombinante e celfectina (10362-100, Invitrogen). Após 4 h de incubação a 27 ^QC, o meio de transfecção foi substituído por meio Sf-900 III SFM contendo 5% HI FBS (10100147, Invitrogen). As células foram ainda incubadas durante 4 dias. O meio de cultura de células infectadas contendo o baculovírus (estoque de vírus P0) foi coletado e amplificado por infecção adicional das 200 ml de células Sf9 via 200-300μ P0.

Quantificação do Título Viral de BacMam por titulador BacPAKRapid [0498]O título viral, medido como unidade de formação de placas (pfu) / ml, foi determinado utilizando o kit de titulação BacPAK Papid (631406, Clontech) de acordo com o protocolo do fabricante. As células Sf9 semeadas em placas de 96 poços com 3 x 10⁵ células por poço foram incubadas com uma série de diluições dos estoques virais por 1 ha 27 ^QC, 50 μΙ de cobertura de metil celulose foram adicionadas a cada poço seguido por 43 ~ 47 h de incubação. As células foram então fixadas em paraformaldeído a 4% (PFA). Após o bloqueio das células com soro de cabra normal diluído, o anticorpo anti-gp64 de camundongo foi adicionado às células. Após 30 min de incubação, as células foram lavadas com fosfato tamponadas com solução salina contendo 0,2% de Triton-X100 (PBST) e incubadas durante mais 30 min com conjugado de anticorpo anti-camundongo de cabra /HRP. Isto foi seguido por substrato de peroxidase azul que detecta as células infectadas e os focos de células infectadas pela sua cor azul escura.

Expressão e Purificação de Proteínas

a)Expressão da LRRK2 humana Tagged de comprimento completo G2019

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154/169 [0499]As células HEK293 6E foram incubadas em uma incubadora a 37 ^QC com uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 em um agitador orbital rotativo a 110 rpm. No dia da transdução, a viabilidade celular foi superior a 98% e a densidade celular estava na faixa de 1 x10⁶ ~ 1,5x10⁶ células / ml.

[0500]As células HEK293 6E foram centrifugadas a 1000 rpm durante 10 min e depois as células foram ressuspensas em meio de expressão Freestyle 293 fresco (Invitrogen: 12338) com 0,1% de F-68 (Invitrogen: 24040-032), mas sem antibióticos (G418) na densidade de 1 x10⁶ células/ml.

[0501 ]O gene do vírus BacMam com Flag-hu LRRK2 (genotipicamente normal) foi centrifugado a 40.000 g por 2 horas, em seguida, ressuspenso em meio de expressão Freestyle 293 fresco. O vírus ressuspenso foi incluído nas células em MOI de 10. As células foram incubadas em uma incubadora a 37 ^QC com atmosfera umidificada de 5% de CO2 em ar em um agitador orbital girando a 110 rpm. As culturas foram coletadas aproximadamente 48 horas depois da transdução por centrifugação a 4.000 rpm durante 20 min e os pellets foram congelados para purificação.

b)Purificação da LRRK2 humana Tagged de comprimento completo G2019 [0502]0 sedimento celular foi ressuspenso em tampão de lise (20 mL / litro de cultura celular) (TrisHCI 50 mM pH 7,5 a 4 ^QC, NaCI 500 mM, EDTA 0,5 mM, TritonX100 a 0,1%, glicerol a 10%, recém-adicionado DTT 2 mM ), inibidores de protease (Roche: 04693132001) e benzonase (Merck Millipore: 70746-3CN) na concentração recomendada sugerida pelos fornecedores. As células suspensas foram lisadas por sonicação em gelo por 30 min (2 seg ligado/ 4 seg desligado, 20% de amplitude) e centrifugadas a 10.000 rpm por 30 minutos a 4 ^QC. O sobrenadante foi incubado com 1 mL por litro de cultura celular de grânulos magnéticos anti-Flag (Sigma-Aldrich: M8823) a 4 ^QC por 3 horas, em seguida, os grânulos foram lavados com 5 mL (5 volumes de ligação) de tampão de ligação (50 mM Tris, pH 7,5 @ 4C, 500 mM NaCI, 0,5 mM EDTA, 0,1% TritonX-100 , 10% de glicerol, 2mM de DTT recém-adicionado)

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155/169 por três vezes. As proteínas LRRK2 flag tagged com foram eluídas por tampão de eluição (50 mM Tris, pH 7,5@ 4C, 500 mM NaCI, 0,5 mM EDTA, 0,1% TritonX-100, 10% glicerol, 2mM DTT recém-adicionado, 250ug/ml peptídeo Flag ( Sigma-Aldrich: F3290)) a 4°C durante 2 horas. O peptídeo Flag foi removido por Colunas de Dessalinização de Zeba Spin, 7K MWCO (Thermo-Fisher:89893) e o tampão de proteínas LRRK2 eluídas foi trocado para Tampão de Armazenamento (50 mM Tris pH7,5@4C, 150 mM NaCI, 0,5 mM EDTA, 0,02% Triton X-100, 2 mM DTT e 50% de glicerol) usando as Unidades de Filtro de Ultra Centrífugas da Amicon (1 OOkD) (Merck: UFC910096). As frações contendo proteínas LRRK2 foram agrupadas, aliquotadas e armazenadas a -80 °C. A concentração de proteína foi determinada pelo ensaio de proteínas de Bradford a pureza da proteína foi analisada por meio de géis de Proteína Bis-Tris NuPAG Novex 4-12% (Invitrogen: NP0322BOX).

Protocolo de Ensaio )Um composto de teste de 10mM foi dissolvido em 100% de DMSO e diluído em série 1 em 4. 100nL desta diluição em série foram então adicionados a uma placa de polipropileno de fundo em V de 384 poços, excluindo colunas as 6 e 18. 100nL de DMSO foram adicionados às colunas 6 e 18 como poços de controle. A diluição do ensaio gerou uma concentração final do composto de teste de 100 μΜ

2) 50 pl de ácido fórmico a 1% em água de grau laboratorial foi usado para a coluna 18 usando um misturador combinado de múltiplas gotas para agir como um controle previamente interrompido do ensaio.

3) 5 μΙ de 'solução enzimática' contendo 50nM de Flag-LRRK2 de comprimento completo recombinante purificada em tampão de ensaio (50 mM Hepes (pH 7,2), MgCI2 10 mM, 150 mM NaCI, glicerol a 5%, triton X-100 0,0025% e 1mM TDT) foi adicionado a todos os poços utilizando um dispensador combinado de múltiplas gotas, gerando uma concentração final de ensaio de 25 nM de enzima LRRK2. Isto resultou

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156/169 na coluna 6 (enzima mais DMSO) gerando 0% de inibição e a coluna 18 gerando 100% de inibição (controle previamente interrompido). As placas de teste foram então incubadas por 30 minutos em temperatura ambiente.

4) 5 μΙ de 'solução de substrato’ contendo 50μΜ de substrato de peptídeo LRRKtide e 4 mM de ATP foi adicionado a todos os poços da placa utilizando um dispensador combinado de múltiplas gotas gerando uma concentração final de ensaio de 25μΜ de LRRKtide e 2mM de ATP. As placas de teste foram então incubadas por 1 hora em temperatura ambiente. (A incubação pode variar dependendo da taxa e linearidade da reação com diferentes lotes de enzimas).

5) 50 μΙ de ácido fórmico a 1% em água de grau de laboratório foram adicionados a todos os poços (exceto a coluna 18) para extinguir a reação e as placas foram centrifugadas a 3000 rpm por 10 minutos. As placas de teste foram então analisadas em um sistema de extração em fase sólida Agilent RapidFire de alto rendimento acoplado ao espectrômetro de massa quadripole triplo AB Sciex API 4000 com a seguinte configuração:

Configurações do RapidFire:

•Altura do Sip = 2mm, Aspirado = 500 ms, Tempo de carregamento = 3000 ms, Tempo de eluição = 3000 ms, Re-equilíbrio = 500 ms.

•Vazões: bomba 1 = 1,5 mL / min, bomba 2 1,25 mL / min bomba 3 = 0,8 mL / min

Configurações do espectrômetro de massa:

•Configurações de detecção de LRRKtide: massa de Q1 644,8Da, massa de Q3 638,8, potencial de declustering 76 volts, energia de colisão 37 volts, CXP 34 volts.

•Configurações de detecção de Fosfo-LRRKtide: Massa de Q1 671,4 Da, massa de Q3 638,8, potencial de declustering 76 volts, energia de colisão 37 volts,

CXP 34 volts.

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157/169 •Um cartucho C4 foi usado e tampões de corrida foram: A (aquoso) 0,1% de ácido fórmico em água B (orgânico) 0,1% de ácido fórmico, 80% de acetonitrila, 20% de água.

•Gás de colisão: 12, gás de cortina: 25, gás da fonte de íon (1): 60, gás da fonte de íon (2): 60, Voltagem de Pulverização de íon: 5500, Temperatura: 600, aquecedor Interfaec: LIGADO.

•Resolução Q1: baixa, resolução Q3: baixa.

6)Os dados foram analisados utilizando o software ActivityBase (IDBS). Uma conversão percentual de LRRKtide para Fosfo-LRRKtide foi calculada utilizando a seguinte fórmula:

% de conversão = (área do pico do produto Fosfo-LRRKtide / (área do pico do produto Fosfo-LRRKtide + área do pico do substrato LRRKtide)) * 100

b. Ensaio Celular AlphaScreen LRRK2 Recombinante [0503]Para determinar a atividade de compostos contra a atividade de LRRK2 quinase em células, a modulação dependente de LRRK2 quinase da fosforilação de LRRK2 Ser 935 (Dzamko et al., 2010, Biochem. J. 430: 405-413) foi utilizada para desenvolver um imunoensaio quantitativo baseado em placas de 384 poços da fosforilação de LRRK2 Ser935 na linhagem de células de neuroblastoma humano SHSY5Y, modificada para sobre-expressar a proteína LRRK2 de comprimento completo recombinante.

[0504]Um vírus BacMam expressando LRRK2 recombinante de comprimento completo foi adquirido da Invitrogen e amplificado por inoculação de células SF-9 em MOI 0,3 durante 4-5 dias em meio SFF Sf-900 III SFM suplementado com soro fetal de bovino a 3%. As culturas de células infectadas foram então centrifugadas a 2000 g por 20 minutos, o título do sobrenadante viral determinado pelo ensaio de placa antigp64 e armazenado a 4 ^QC.

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158/169 [0505]Anticorpo policlonal anti-fosfo LRRK2 Ser935 de ovelha purificado por afinidade (Dzamko et al., 2010, Biochem. J. 430: 405-413) foi biotinilado por meio de métodos padrão (Perkin Elmer). O anticorpo policlonal anti-LRRK2 de coelho foi adquirido da Novus Biologicals. O Kit AlphaScreen de IgG de proteína A (incluindo os grânulos aceitadores e doadores) foi adquirido da Perkin Elmer.

[0506]As células SH-SY5Y foram cultivadas em meio DMEM/F12 com 10% de soro fetal bovino dialisado e coletadas por tratamento com 0,5% de tripsina-EDTA por 5 minutos a 37 ^QC seguido por centrifugação a 1000 rpm por 4 minutos. O sedimento celular foi ressuspenso em meio de soro reduzido Opti-MEM (Invitrogen) a 200.000 células/ml e misturado com o vírus BacMam LRRK2 a MOI = 50. Em seguida, 50 ui de soluções de células foram dispensadas para cada poço de uma placa de 384 poços e incubadas a 37 ^QC, 5% de CO2 durante 24 horas.

[0507]As diluições em série de compostos de teste foram preparadas em meio de soro reduzido Opti-MEM (Invitrogen) e 5,6 ui transferidos da placa de composto para a placa de ensaio celular para alcançar uma concentração de ensaio final superior de 10 uM. O DMSO foi usado em certos poços como controle. As células foram incubadas a 37 ^QC, 5% de CO2 durante 60 minutos. O meio foi então removido e as células lisadas por adição de 20 ui de tampão de lise celular (Cell Signaling Technology) e incubação a 4 ^QC por 20 minutos. 10 pi de mistura de anticorpo / grânulos aceitadores [1/1000 anticorpo biotinilado-pS935 LRRK2, 1/1000 anticorpo total-LRRK2, 1/100 grânulos aceitadores em tampão de detecção AlphaScreen (25 mM Hepes (pH 7,4), 0,5% Triton X-100, 1mg / ml de Dextran 500 e 0,1% de BSA)] foram então adicionados a cada poço e as placas foram incubadas durante 2 horas em temperatura ambiente no escuro. 10 μΙ de solução de grânulos doadores (1/33,3 grânulos doadores em tampão de detecção AlphaScreen) foram então adicionados a cada poço. Após a incubação durante mais 2 horas em temperatura ambiente no escuro, as placas foram lidas em um leitor de placas EnVision™ com emissão de 520Petição 870190070709, de 24/07/2019, pág. 168/187

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620nm com excitação a 680nm. Os dados da curva de resposta à dose foram baseados no modelo sigmoidal dose-resposta.

c.Ensaio de Solubilidade FASSIF [0508]A solubilidade do composto pode ser avaliada no meio intestinal simulado em estado de jejum (FaSSIF) em pH 6,5. Certa quantidade de composto de teste foi misturada com um certo volume de FaSSIF para preparar uma suspensão de cerca de 1 mg / ml. A suspensão foi incubada a 37 ^QC no banho de água por 24 horas. Na 4^â e 24^â horas, a suspensão foi centrifugada a 14K rpm durante 15 minutos. 100 μΙ do sobrenadante foram retirados e diluídos com o mesmo volume de solução de acetonitrila a 50% e analisados com UPLC (Cromatografia Líquida de Ultra performance). A solubilidade de FaSSIF foi calculada com base na área do pico do composto de teste.

[0509]Preparação de FaSSIF (170 m/)100 mg de lecitina e 274 mg (equiv em anidro) de Taurocolato de Na foram dissolvidos em cerca de 150 mL de tampão de pH 6,5. A solução foi avolumada para 170 ml com o tampão pH 6,5.

[0510] Preparação da solução tampão com pH 6,5 (1 /.)4,083 g de KH2PO4 e 7,456 g de KCI foram dissolvidos em 800 ml de água, com 100 ml de NaOH 0,1 M adicionados subsequentemente. A solução foi avolumada para 1 L com água. O valor de pH da solução tampão foi medido e ajustado para ser de 6,50 ± 0,1.

[0511]Soluções padrão para calibração de UPLC e cálculo de solubilidade Soluções de 2 μΜ, 20 μΜ e 200 pM DMSO (50% ACN água).

Parâmetro e método UPM

Instrumento: Sistema Waters ACQUITY UPLC

Coluna: Waters ACQUITY UPLC BEH C18 (1,7 pm, 2,1 χ 50 mm)

Fase móvel: A: 0,1% TFA em água / B: 0,1% TFA em CAN

Gradiente: 0 min (A 95%/B 5%), 2 min (A 5%/B 95%), 2,5 min (A 5%/B 95%),

2,6 min (A 95%/B 5%), 3 min (A 95%/B 5%)

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Vazão: 0,8 mL/min; temperatura de coluna: 40 ^QC; volume de injeção 1,0 pL; Detecção de UV: 280 nm

d.Ensaio de solubilidade de CLND [0512]A solubilidade cinética de um composto pode ser avaliada pelo ensaio de solubilidade de CLND (detecção de nitrogênio quimioluminescente), baseado em protocolos conhecidos (ver, por exemplo, Bhattachar S. N.; Wesley J. A.; Seadeek C., Evaluation of the Chemiluminescent nitrogênio Detector for Solubility Determinations to Support Drug Discovery, J. Pharm. Biomed. Anal. 2006 (41 ):152-157; Kestranek A, Chervenek A, Logenberger J, Placko S. Chemiluminescent Nitrogen Detection (CLND) to Measure Kinetic Aqueous Solubility, Curr Protoc Chem Biol., 2013, 5(4):269-80). Tipicamente, 5 pl de solução estoque de 10mM DMSO fo composto de teste foi diluída para 100 pl com salina tamponada com fosfato em pH 7,4, equilibrada por 1 hora em temperatura ambiente, filtrada por placas de filtro MultiscreenHTS-PCF da Millipore (MSSL BPC). O filtrado é quantificado por um fluxo adequadamente calibrado. A Detecção é por nitrogênio quimioluminescente.

2.Dados do ensaio [0513]Compostos dos Exemplos E1-E21, E25-E28, E30, E31, E34 e E37-E41 foram testados no ensaio LRRK2 AlphaScreen celular recombinante e apresentaram uma plC50 de > 6,5.

[0514]Compostos dos Exemplos E1-E9, E11, E13-E17, E25-E28, E30, E31, E34 e E37-E41 foram testados no ensaio LRRK2 AlphaScreen celular recombinante e apresentaram uma plC50 de > 7.

[0515]O Exemplo 1 apresentou uma plC50 de 8,3 no ensaio LRRK2 AlphaScreen celular recombinante. Além disso, E29, E32, E33 e E42 apresentaram uma plC50 de 8,2, 8,0, 8,0 e 8,7, respectivamente.

[0516]Os compostos dos Exemplos E3-E6, E10-E12, E17-E21 e E25-E31 foram testados no ensaio de espectrometria de massa de inibição de LRRK2 humana

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G2019 de comprimento completo e apresentaram uma plC50 de > 6,5. O Exemplo 32 exibido apresentou uma plC50 de 8,0.

3.Listaoem de sequência [0517]SEQ ID NO: 1 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 humana G2019: pHTBV-F

5’GATCTCGACGGGCGCGGATCCACCATGGATTACAAGGATGACGACGAT-3’ [0518]SEQ ID NO: 2 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 Humana G2019: LRRK2 wt-F1

5’CATGGATTACAAGGATGACGACGATAAGATGGCTAGTGGCAGCTGTCAG-3’ [0519]SEQ ID NO: 3 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 Humana G2019: LRRK2 wt-R1

5’-GTTCACGAGATCCACTATTCAGTAAGAGTTCCACCAATTTGGGACTG3’ [0520]SEQ ID NO: 4 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 Humana G2019: LRRK2 wt-F2

5’- GAATAGTGGATCTCGTGAACAAG -3’ [0521 ]SEQ ID NO: 5 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 Humana G2019: LRRK2 wt-R2

5’- GTCAGACAAACTGCTTGGAACCAGC-3’ [0522]SEQ ID NO: 6 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 Humana G2019: LRRK2 wt-F3

5’-CTGGTTCCAAGCAGTTTGTCTGACCACAGGCCTGTGATAG-3’ [0523]SEQ ID NO: 7 Iniciadores usados para clonagem por PCR da preparação de plasmídeos LRRK2 Humana G2019: pHTBV-R

5’- GTTCTAGCCAAGCTTGGTACCCTATTACTCAACAGATGTTCGTCTC -3’

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162/169 [0524]SEQ ID NO: 8 sequência de codificação de Flag-LRRK2 de comprimento completo G2019 atggattacaaggatgacgacgataag ATGGCT AGTGGCAGCT GT CAGGGGTGCG A AGAGGACGAGGAAACTCTGAAGAAGTTGATAGTCAGGCTGAACAATGTCCAGG AAGGAAAACAGATAGAAACGCTGGTCCAAATCCTGGAGGATCTGCTGGTGTTCA CGTACTCCGAGCACGCCTCCAAGTTATTTCAAGGCAAAAATATCCATGTGCCTC TGTTGATCGTCTTGGACTCCTATATGAGAGTCGCGAGTGTGCAGCAGGTGGGTT GGTCACTTCTGTGCAAATTAATAGAAGTCTGTCCAGGTACAATGCAAAGCTTAAT GGGACCCCAGGATGTTGGAAATGATTGGGAAGTCCTTGGTGTTCACCAATTGAT TCTTAAAATGCTAACAGTTCATAATGCCAGTGTAAACTTGTCAGTGATTGGACTG AAGACCTTAGATCTCCTCCTAACTTCAGGTAAAATCACCTTGCTGATACTGGATG AAGAAAGTGATATTTTCATGTTAATTTTTGATGCCATGCACTCATTTCCAGCCAAT GATGAAGTCCAGAAACTTGGATGCAAAGCTTTACATGTGCTGTTTGAGAGAGTC TCAGAGGAGCAACTGACTGAATTTGTTGAGAACAAAGATTATATGATATTGTTAA GTGCGTTAACAAATTTTAAAGATGAAGAGGAAATTGTGCTTCATGTGCTGCATTG TTTACATTCCCTAGCGATTCCTTGCAATAATGTGGAAGTCCTCATGAGTGGCAAT GTCAGGTGTTATAATATTGTGGTGGAAGCTATGAAAGCATTCCCTATGAGTGAAA GAATTCAAGAAGTGAGTTGCTGTTTGCTCCATAGGCTTACATTAGGTAATTTTTT CAATATCCTGGTATTAAACGAAGTCCATGAGTTTGTGGTGAAAGCTGTGCAGCA GTACCCAGAGAATGCAGCATTGCAGATCTCAGCGCTCAGCTGTTTGGCCCTCCT CACTGAGACTATTTTCTTAAATCAAGATTTAGAGGAAAAGAATGAGAATCAAGAG AATGATGATGAGGGGGAAGAAGATAAATTGTTTTGGCTGGAAGCCTGTTACAAA GCATTAACGTGGCATAGAAAGAACAAGCACGTGCAGGAGGCCGCATGCTGGGC ACTAAATAATCTCCTTATGTACCAAAACAGTTTACATGAGAAGATTGGAGATGAA GATGGCCATTTCCCAGCTCATAGGGAAGTGATGCTCTCCATGCTGATGCATTCT TCATCAAAGGAAGTTTTCCAGGCATCTGCGAATGCATTGTCAACTCTCTTAGAAC AAAATGTTAATTTCAGAAAAATACTGTTATCAAAAGGAATACACCTGAATGTTTTG

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GAGTTAATGCAGAAGCATATACATTCTCCTGAAGTGGCTGAAAGTGGCTGTAAA

ATGCTAAATCATCTTTTTGAAGGAAGCAACACTTCCCTGGATATAATGGCAGCAG

TGGTCCCCAAAATACTAACAGTTATGAAACGTCATGAGACATCATTACCAGTGCA

GCTGGAGGCGCTTCGAGCTATTTTACATTTTATAGTGCCTGGCATGCCAGAAGA

ATCCAGGGAGGATACAGAATTTCATCATAAGCTAAATATGGTTAAAAAACAGTGT

TTCAAGAATGATATTCACAAACTGGTCCTAGCAGCTTTGAACAGGTTCATTGGAA

ATCCTGGGATTCAGAAATGTGGATTAAAAGTAATTTCTTCTATTGTACATTTTCCT

GATGCATTAGAGATGTTATCCCTGGAAGGTGCTATGGATTCAGTGCTTCACACA

CTGCAGATGTATCCAGATGACCAAGAAATTCAGTGTCTGGGTTTAAGTCTTATAG

GATACTTGATTACAAAGAAGAATGTGTTCATAGGAACTGGACATCTGCTGGCAAA

AATTCTGGTTTCCAGCTTATACCGATTTAAGGATGTTGCTGAAATACAGACTAAA

GGATTTCAGACAATCTTAGCAATCCTCAAATTGTCAGCATCTTTTTCTAAGCTGC

TGGTGCATCATTCATTTGACTTAGTAATATTCCATCAAATGTCTTCCAATATCATG

GAACAAAAGGATCAACAGTTTCTAAACCTCTGTTGCAAGTGTTTTGCAAAAGTAG

CTATGGATGATTACTTAAAAAATGTGATGCTAGAGAGAGCGTGTGATCAGAATAA

CAGCATCATGGTTGAATGCTTGCTTCTATTGGGAGCAGATGCCAATCAAGCAAA

GGAGGGATCTTCTTTAATTTGTCAGGTATGTGAGAAAGAGAGCAGTCCCAAATT

GGTGGAACTCTTACTGAATAGTGGATCTCGTGAACAAGATGTACGAAAAGCGTT

GACGATAAGCATTGGGAAAGGTGACAGCCAGATCATCAGCTTGCTCTTAAGGAG

GCTGGCCCTGGATGTGGCCAACAATAGCATTTGCCTTGGAGGATTTTGTATAGG

AAAAGTTGAACCTTCTTGGCTTGGTCCTTTATTTCCAGATAAGACTTCTAATTTAA

GGAAACAAACAAATATAGCATCTACACTAGCAAGAATGGTGATCAGATATCAGAT

GAAAAGTGCTGTGGAAGAAGGAACAGCCTCAGGCAGCGATGGAAATTTTTCTGA

AGATGTGCTGTCTAAATTTGATGAATGGACCTTTATTCCTGACTCTTCTATGGAC

AGTGTGTTTGCTCAAAGTGATGACCTGGATAGTGAAGGAAGTGAAGGCTCATTT

CTTGTGAAAAAGAAATCTAATTCAATTAGTGTAGGAGAATTTTACCGAGATGCCG

TATTACAGCGTTGCTCACCAAATTTGCAAAGACATTCCAATTCCTTGGGGCCCAT

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TTTTGATCATGAAGATTTACTGAAGCGAAAAAGAAAAATATTATCTTCAGATGATT

CACTCAGGTCATCAAAACTTCAATCCCATATGAGGCATTCAGACAGCATTTCTTC

TCTGGCTTCTGAGAGAGAATATATTACATCACTAGACCTTTCAGCAAATGAACTA

AGAGATATTGATGCCCTAAGCCAGAAATGCTGTATAAGTGTTCATTTGGAGCATC

TTGAAAAGCTGGAGCTTCACCAGAATGCACTCACGAGCTTTCCACAACAGCTAT

GTGAAACTCTGAAGAGTTTGACACATTTGGACTTGCACAGTAATAAATTTACATC

ATTTCCTTCTTATTTGTTGAAAATGAGTTGTATTGCTAATCTTGATGTCTCTCGAA

ATGACATTGGACCCTCAGTGGTTTTAGATCCTACAGTGAAATGTCCAACTCTGAA

ACAGTTTAACCTGTCATATAACCAGCTGTCTTTTGTACCTGAGAACCTCACTGAT

GTGGTAGAGAAACTGGAGCAGCTCATTTTAGAAGGAAATAAAATATCAGGGATA

TGCTCCCCCTTGAGACTGAAGGAACTGAAGATTTTAAACCTTAGTAAGAACCACA

TTTCATCCCTATCAGAGAACTTTCTTGAGGCTTGTCCTAAAGTGGAGAGTTTCAG

TGCCAGAATGAATTTTCTTGCTGCTATGCCTTTCTTGCCTCCTTCTATGACAATC

CTAAAATTATCTCAGAACAAATTTTCCTGTATTCCAGAAGCAATTTTAAATCTTCC

ACACTTGCGGTCTTTAGATATGAGCAGCAATGATATTCAGTACCTACCAGGTCC

CGCACACTGGAAATCTTTGAACTTAAGGGAACTCTTATTTAGCCATAATCAGATC

AGCATCTTGGACTTGAGTGAAAAAGCATATTTATGGTCTAGAGTAGAGAAACTGC

ATCTTTCTCACAATAAACTGAAAGAGATTCCTCCTGAGATTGGCTGTCTTGAAAA

TCTGACATCTCTGGATGTCAGTTACAACTTGGAACTAAGATCCTTTCCCAATGAA

ATGGGGAAATTAAGCAAAATATGGGATCTTCCTTTGGATGAACTGCATCTTAACT

TTGATTTTAAACATATAGGATGTAAAGCCAAAGACATCATAAGGTTTCTTCAACA

GCGATTAAAAAAGGCTGTGCCTTATAACCGAATGAAACTTATGATTGTGGGAAAT

ACTGGGAGTGGTAAAACCACCTTATTGCAGCAATTAATGAAAACCAAGAAATCA

GATCTTGGAATGCAAAGTGCCACAGTTGGCATAGATGTGAAAGACTGGCCTATC

CAAATAAGAGACAAAAGAAAGAGAGATCTCGTCCTAAATGTGTGGGATTTTGCA

GGTCGTGAGGAATTCTATAGTACTCATCCCCATTTTATGACGCAGCGAGCATTG

TACCTTGCTGTCTATGACCTCAGCAAGGGACAGGCTGAAGTTGATGCCATGAAG

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CCTTGGCTCTTCAATATAAAGGCTCGCGCTTCTTCTTCCCCTGTGATTCTCGTTG

GCACACATTTGGATGTTTCTGATGAGAAGCAACGCAAAGCCTGCATGAGTAAAA

TCACCAAGGAACTCCTGAATAAGCGAGGGTTCCCTGCCATACGAGATTACCACT

TTGTGAATGCCACCGAGGAATCTGATGCTTTGGCAAAACTTCGGAAAACCATCA

TAAACGAGAGCCTTAATTTCAAGATCCGAGATCAGCTTGTTGTTGGACAGCTGAT

TCCAGACTGCTATGTAGAACTTGAAAAAATCATTTTATCGGAGCGTAAAAATGTG

CCAATTGAATTTCCCGTAATTGACCGGAAACGATTATTACAACTAGTGAGAGAAA

ATCAGCTGCAGTTAGATGAAAATGAGCTTCCTCACGCAGTTCACTTTCTAAATGA

ATCAGGAGTCCTTCTTCATTTTCAAGACCCAGCACTGCAGTTAAGTGACTTGTAC

TTTGTGGAACCCAAGTGGCTTTGTAAAATCATGGCACAGATTTTGACAGTGAAAG

TGGAAGGTTGTCCAAAACACCCTAAGGGAATTATTTCGCGTAGAGATGTGGAAA

AATTTCTTTCAAAGAAAAGGAAATTTCCAAAGAACTACATGTCACAGTATTTTAAG

CTCCTAGAAAAATTCCAGATTGCTTTGCCAATAGGAGAAGAATATTTGCTGGTTC

CAAGCAGTTTGTCTGACCACAGGCCTGTGATAGAGCTTCCCCATTGTGAGAACT

CTGAAATTATCATCCGACTATATGAAATGCCTTATTTTCCAATGGGATTTTGGTCA

AGATTAATCAATCGATTACTTGAGATTTCACCTTACATGCTTTCAGGGAGAGAAC

GAGCACTTCGCCCAAACAGAATGTATTGGCGACAAGGCATTTACTTAAATTGGT

CTCCTGAAGCTTATTGTCTGGTAGGATCTGAAGTCTTAGACAATCATCCAGAGA

GTTTCTTAAAAATTACAGTTCCTTCTTGTAGAAAAGGCTGTATTCTTTTGGGCCAA

GTTGTGGACCACATTGATTCTCTCATGGAAGAATGGTTTCCTGGGTTGCTGGAG

ATTGATATTTGTGGTGAAGGAGAAACTCTGTTGAAGAAATGGGCATTATATAGTT

TTAATGATGGTGAAGAACATCAAAAAATCTTACTTGATGACTTGATGAAGAAAGC

AGAGGAAGGAGATCTCTTAGTAAATCCAGATCAACCAAGGCTCACCATTCCAAT

ATCTCAGATTGCCCCTGACTTGATTTTGGCTGACCTGCCTAGAAATATTATGTTG

AATAATGATGAGTTGGAATTTGAACAAGCTCCAGAGTTTCTCCTAGGTGATGGCA

GTTTTGGATCAGTTTACCGAGCAGCCTATGAAGGAGAAGAAGTGGCTGTGAAGA

TTTTTAATAAACATACATCACTCAGGCTGTTAAGACAAGAGCTTGTGGTGCTTTG

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CCACCTCCACCACCCCAGTTTGATATCTTTGCTGGCAGCTGGGATTCGTCCCCG

GATGTTGGTGATGGAGTTAGCCTCCAAGGGTTCCTTGGATCGCCTGCTTCAGCA

GGACAAAGCCAGCCTCACTAGAACCCTACAGCACAGGATTGCACTCCACGTAG

CTGATGGTTTGAGATACCTCCACTCAGCCATGATTATATACCGAGACCTGAAAC

CCCACAATGTGCTGCTTTTCACACTGTATCCCAATGCTGCCATCATTGCAAAGAT

TGCTGACTACGGCATTGCTCAGTACTGCTGTAGAATGGGGATAAAAACATCAGA

GGGCACACCAGGGTTTCGTGCACCTGAAGTTGCCAGAGGAAATGTCATTTATAA

CCAACAGGCTGATGTTTATTCATTTGGTTTACTACTCTATGACATTTTGACAACTG

GAGGTAGAATAGTAGAGGGTTTGAAGTTTCCAAATGAGTTTGATGAATTAGAAAT

ACAAGGAAAATTACCTGATCCAGTTAAAGAATATGGTTGTGCCCCATGGCCTAT

GGTTGAGAAATTAATTAAACAGTGTTTGAAAGAAAATCCTCAAGAAAGGCCTACT

TCTGCCCAGGTCTTTGACATTTTGAATTCAGCTGAATTAGTCTGTCTGACGAGAC

GCATTTT ATT ACCT AAAAACGTAATTGTTGAATGCATGGTTGCTACACATCACAA

CAGCAGGAATGCAAGCATTTGGCTGGGCTGTGGGCACACCGACAGAGGACAGC

TCTCATTTCTTGACTTAAATACTGAAGGATACACTTCTGAGGAAGTTGCTGATAG

TAGAATATTGTGCTTAGCCTTGGTGCATCTTCCTGTTGAAAAGGAAAGCTGGATT

GTGTCTGGGACACAGTCTGGTACTCTCCTGGTCATCAATACCGAAGATGGGAAA

AAGAGACATACCCTAGAAAAGATGACTGATTCTGTCACTTGTTTGTATTGCAATT

CCTTTTCCAAGCAAAGCAAACAAAAAAATTTTCTTTTGGTTGGAACCGCTGATGG

CAAGTTAGCAATTTTTGAAGATAAGACTGTTAAGCTTAAAGGAGCTGCTCCTTTG

AAGATACTAAATATAGGAAATGTCAGTACTCCATTGATGTGTTTGAGTGAATCCA

CAAATTCAACGGAAAGAAATGTAATGTGGGGAGGATGTGGCACAAAGATTTTCT

CCTTTTCTAATGATTTCACCATTCAGAAACTCATTGAGACAAGAACAAGCCAACT

GTTTTCTTATGCAGCTTTCAGTGATTCCAACATCATAACAGTGGTGGTAGACACT

GCTCTCTATATTGCTAAGCAAAATAGCCCTGTTGTGGAAGTGTGGGATAAGAAA

ACTGAAAAACTCTGTGGACTAATAGACTGCGTGCACTTTTTAAGGGAGGTAATG

GTAAAAGAAAACAAGGAATCAAAACACAAAATGTCTTATTCTGGGAGAGTGAAAA

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CCCTCTGCCTTCAGAAGAACACTGCTCTTTGGATAGGAACTGGAGGAGGCCATA

TTTTACTCCTGGATCTTTCAACTCGTCGACTTATACGTGTAATTTACAACTTTTGT

AATTCGGTCAGAGTCATGATGACAGCACAGCTAGGAAGCCTTAAAAATGTCATG

CTGGTATTGGGCTACAACCGGAAAAATACTGAAGGTACACAAAAGCAGAAAGAG

ATACAATCTTGCTTGACCGTTTGGGACATCAATCTTCCACATGAAGTGCAAAATT

TAGAAAAACACATTGAAGTGAGAAAAGAATTAGCTGAAAAAATGAGACGAACATC

TGTTGAGTAA [0525]SEQ ID NO: 9 Sequência da proteína traduzida para a proteína LRRK2 flag tagged de comprimento completo G2019

MDYKDDDDKMASGSCQGCEEDEETLKKLIVRLNNVQEGKQIETLVQILEDL

LVFTYSEHASKLFQGKNIHVPLLIVLDSYMRVASVQQVGWSLLCKLIEVCPGTMQSL

MGPQDVGNDWEVLGVHQLILKMLTVHNASVNLSVIGLKTLDLLLTSGKITLLILDEES

DIFMLIFDAMHSFPANDEVQKLGCKALHVLFERVSEEQLTEFVENKDYMILLSALTNF

KDEEEIVLHVLHCLHSLAIPCNNVEVLMSGNVRCYNIVVEAMKAFPMSERIQEVSCC

LLHRLTLGNFFNILVLNEVHEFVVKAVQQYPENAALQISALSCLALLTETIFLNQDLEE

KNENQENDDEGEEDKLFWLEACYKALTWHRKNKHVQEAACWALNNLLMYQNSLH

EKIGDEDGHFPAHREVMLSMLMHSSSKEVFQASANALSTLLEQNVNFRKILLSKGIH

LNVLELMQKHIHSPEVAESGCKMLNHLFEGSNTSLDIMAAVVPKILTVMKRHETSLP

VQLEALRAILHFIVPGMPEESREDTEFHHKLNMVKKQCFKNDIHKLVLAALNRFIGNP

GIQKCGLKVISSIVHFPDALEMLSLEGAMDSVLHTLQMYPDDQEIQCLGLSLIGYLITK

KNVFIGTGHLLAKILVSSLYRFKDVAEIQTKGFQTILAILKLSASFSKLLVHHSFDLVIFH

QMSSNIMEQKDQQFLNLCCKCFAKVAMDDYLKNVMLERACDQNNSIMVECLLLLG

ADANQAKEGSSLICQVCEKESSPKLVELLLNSGSREQDVRKALTISIGKGDSQIISLLL

RRLALDVANNSICLGGFCIGKVEPSWLGPLFPDKTSNLRKQTNIASTLARMVIRYQM

KSAVEEGTASGSDGNFSEDVLSKFDEWTFIPDSSMDSVFAQSDDLDSEGSEGSFL

VKKKSNSISVGEFYRDAVLQRCSPNLQRHSNSLGPIFDHEDLLKRKRKILSSDDSLR

SSKLQSHMRHSDSISSLASEREYITSLDLSANELRDIDALSQKCCISVHLEHLEKLEL

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HQNALTSFPQQLCETLKSLTHLDLHSNKFTSFPSYLLKMSCIANLDVSRNDIGPSVVL

DPTVKCPTLKQFNLSYNQLSFVPENLTDVVEKLEQLILEGNKISGICSPLRLKELKILN

LSKNHISSLSENFLEACPKVESFSARMNFLAAMPFLPPSMTILKLSQNKFSCIPEAILN

LPHLRSLDMSSNDIQYLPGPAHWKSLNLRELLFSHNQISILDLSEKAYLWSRVEKLHL

SHNKLKEIPPEIGCLENLTSLDVSYNLELRSFPNEMGKLSKIWDLPLDELHLNFDFKHI

GCKAKDIIRFLQQRLKKAVPYNRMKLMIVGNTGSGKTTLLQQLMKTKKSDLGMQSA

TVGIDVKDWPIQIRDKRKRDLVLNVWDFAGREEFYSTHPHFMTQRALYLAVYDLSK

GQAEVDAMKPWLFNIKARASSSPVILVGTHLDVSDEKQRKACMSKITKELLNKRGFP

AIRDYHFVNATEESDALAKLRKTIINESLNFKIRDQLVVGQLIPDCYVELEKIILSERKN

VPIEFPVIDRKRLLQLVRENQLQLDENELPHAVHFLNESGVLLHFQDPALQLSDLYFV

EPKWLCKIMAQILTVKVEGCPKHPKGIISRRDVEKFLSKKRKFPKNYMSQYFKLLEKF

QIALPIGEEYLLVPSSLSDHRPVIELPHCENSEIIIRLYEMPYFPMGFWSRLINRLLEIS

PYMLSGRERALRPNRMYWRQGIYLNWSPEAYCLVGSEVLDNHPESFLKITVPSCR

KGCILLGQVVDHIDSLMEEWFPGLLEIDICGEGETLLKKWALYSFNDGEEHQKILLDD

LMKKAEEGDLLVNPDQPRLTIPISQIAPDLILADLPRNIMLNNDELEFEQAPEFLLGDG

SFGSVYRAAYEGEEVAVKIFNKHTSLRLLRQELVVLCHLHHPSLISLLAAGIRPRMLV

MELASKGSLDRLLQQDKASLTRTLQHRIALHVADGLRYLHSAMIIYRDLKPHNVLLFT

LYPNAAIIAKIADYGIAQYCCRMGIKTSEGTPGFRAPEVARGNVIYNQQADVYSFGLL

LYDILTTGGRIVEGLKFPNEFDELEIQGKLPDPVKEYGCAPWPMVEKLIKQCLKENP

QERPTSAQVFDILNSAELVCLTRRILLPKNVIVECMVATHHNSRNASIWLGCGHTDR

GQLSFLDLNTEGYTSEEVADSRILCLALVHLPVEKESWIVSGTQSGTLLVINTEDGKK

RHTLEKMTDSVTCLYCNSFSKQSKQKNFLLVGTADGKLAIFEDKTVKLKGAAPLKIL

NIGNVSTPLMCLSESTNSTERNVMWGGCGTKIFSFSNDFTIQKLIETRTSQLFSYAA

FSDSNIITVVVDTALYIAKQNSPVVEVWDKKTEKLCGLIDCVHFLREVMVKENKESKH

KMSYSGRVKTLCLQKNTALWIGTGGGHILLLDLSTRRLIRVIYNFCNSVRVMMTAQL

GSLKNVMLVLGYNRKNTEGTQKQKEIQSCLTVWDINLPHEVQNLEKHIEVRKELAEK

MRRTSVE

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169/169 [0526]SEQ ID NO: 10: peptídeo ‘LRRKtide’

H-RLGRDKYKTLRQIRQ-OH

Claims

REIVINDICAÇÕES

1 .Composto CARACTERIZADO pelo fato de que é de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

Formula (I) em que

R¹ é selecionado a partir do grupo que consiste em CN, C1-3 alquil, C1-3 alcoxi, Ci-3haloalquil e C3 cicloalquil;

R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, halo, CN, C1-3 alquil e C1-3 haloalquil;

R³ é selecionado a partir do grupo que consiste em:

a)um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil,

C1-6 alquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil, C1-3 alcoxi e ciclopropil, e

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2/6

Ci-6 alcoxil, cujo grupo alcoxil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil e C1-3 alcoxil, em que quando 0 anel heterociclil de 4 a 6 membros ligado ao N contém um átomo de nitrogênio substituível, 0 grupo de substituintes ainda inclui um anel heterociclil de 4 a 6 membros que é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil, com a condição de que 0 anel heterociclil de 4 a 6 membros está ligado ao referido átomo de nitrogênio substituível;

b) NHR⁸; e

c) OR⁸;

R⁴ e R⁵ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, hidroxil e halo;

R⁶ é halo, hidroxil ou -(CH2)nSO2Ci-3alquil, em que n é 0, 1,2 ou 3;

R⁷ é selecionado a partir do grupo que consiste em

H,

Ciclopropil,

C1-3 alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil e C1-3 alcoxil,

-CH2CH2- e -CH2CH2CH2-, em que um carbono terminal se liga ao átomo de carbono ao qual 0 outro átomo de carbono terminal está ligado para formar um anel;

R⁸ é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em:

C4-6 cicloalquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil,

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3/6

Ci-3 alcoxil e

C1-3 alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo e hidroxil; e urn heterociclil de 4 a 6 membros que contém nitrogênio ou oxigênio e é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxil,

C1-3 alcoxil e

C1-3 alquil, opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados a partir de halo ou hidroxil.

2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R¹ é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-3 alquil e C1-3 alcoxil.

3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que R² é selecionado a partir do grupo que consiste em H, halo e Ci-salquiL
4. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que R⁴ e R⁵ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H e fluoro.
5. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que R⁴ e R⁵ são ambos H.
6. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que R³ é um anel heterociclil ligado ao N de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em:

halo, hidroxil,

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4/6

Ci-3 alquil, cujo grupo alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: halo, hidroxil e Ci salcoxi, e

C1-3 alcoxil, cujo grupo alcoxil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados a partir de halo, hidroxil e C1-3 alcoxil.
7. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que R⁶ é flúor ou hidroxil.
8. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que R⁷ é H.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é

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5/6

ou ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
10.Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
11 .Composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que é para uso em terapia.
12. Composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que é para uso no tratamento de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).
13. Composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que é para uso no tratamento de doença de Parkinson.
14. Método de tratamento de uma doença neurodegenerativa, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um

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6/6 composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença neurodegenerativa é doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).
16. Método, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença neurodegenerativa é doença de Parkinson.
17. Método, de acordo com a reivindicação 14, 15 ou 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é um humano.
18. Método, de acordo com a reivindicação 14, 15, 16 ou 17, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é um humano que expressa a mutação G2019S na LRRK2 quinase.
19. Uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica (ALS).
20. Uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de doença de Parkinson.