KR102273611B1 - 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도 - Google Patents

흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102273611B1
KR102273611B1 KR1020200067563A KR20200067563A KR102273611B1 KR 102273611 B1 KR102273611 B1 KR 102273611B1 KR 1020200067563 A KR1020200067563 A KR 1020200067563A KR 20200067563 A KR20200067563 A KR 20200067563A KR 102273611 B1 KR102273611 B1 KR 102273611B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
powdery mildew
primer sets
oligonucleotide primer
pumpkin
Prior art date
Application number
KR1020200067563A
Other languages
English (en)
Inventor
서상기
박범석
Original Assignee
농업회사법인 홍익바이오 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 농업회사법인 홍익바이오 주식회사 filed Critical 농업회사법인 홍익바이오 주식회사
Priority to KR1020200067563A priority Critical patent/KR102273611B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102273611B1 publication Critical patent/KR102273611B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
    • C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
    • C12Q2531/113—PCR
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits

Abstract

본 발명은 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명의 InDel 분자마커는 흰가루병 저항성 호박 자원을 효율적으로 판별 및 육성할 수 있어 육종에 소요되는 시간, 비용 및 노력을 절감하는데 매우 유용하게 활용될 것이다.

Description

흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도{Molecular marker for discriminating powdery mildew-resistant pumpkin resource and uses thereof}
본 발명은 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도에 관한 것이다.
호박 속 식물에는 15종이 알려져 있으며, 주로 서양 호박(Cucurbita maxima), 동양 호박(C. moschata), 페포 호박(C. pepo) 3종이 식용으로 재배되고 있다. 국내에서는 주로 동양 호박의 재배종인 애호박과 페포 호박의 재배종인 쥬키니 호박이 생산되고 있으며, 생산량은 우리나라 박과 작물 중 수박에 있어 2위를 차지하고 있다.
호박 흰가루병은 포도스패라 잔티이(Podosphaera xanthii)라는 곰팡이 병원균에 의해 발생하는 식물병으로, 특히 쥬키니와 애호박에서 피해가 크다. 흰가루병은 감염된지 4~7일 후에 증상이 나타나며, 호박의 줄기, 엽병, 잎 표면에서 하얀 균사체의 증식으로 인해 쉽게 알아볼 수 있다. P. xanthii는 호박뿐만 아니라 다양한 국화과, 박과, 꿀풀과, 현삼과, 가지과, 마편초과 등의 중요한 경제작물을 포함한 약 1만종의 속씨식물에 감염될 수 있으며, 흰가루병의 발병으로 인해 볕데임(sunburn) 증상, 불완전한 숙성, 저장성 부진 등을 야기하여 과실 수확 및 품질을 저해시키거나, 결국 백화병변(chlorosis lesions)으로 인한 광합성 저해로 식물체를 사멸시킬 수 있다.
호박 흰가루병 방제는 일반적으로 살균제에 의존하고 있으나, 살균제에 대해 저항성을 보이는 병원균이 출현하는 문제가 발생하고 있다. 이에 따라 자연 생산물과 오일, 길항기작을 갖는 세균과 진균(bio-agent), 세균 배양 부산물 등을 이용한 다양한 생물적 방제가 시도되고 있으며, 효과가 지속적이고 경제적인 장점을 가진 저항성 유전자원을 이용한 육종방법도 각광받고 있다. 최근에 동양 호박, 서양 호박 및 페포 호박에 대한 유전체 염기서열 분석을 통해 조기개화, 과형, 과피 및 과육색 등과 관련된 QTL(quantitative trait locus) 분석이 수행되고 있다. 또한, 페포 호박의 pepo 아종과 ovifera 아종 7종의 전장 유전체 해독(whole-genome resequencing)을 수행하여 생물학적 진화(순화) 과정 중의 유전적 변이를 해석하고 형태적 변이와 관련된 유전자들을 추정하는 연구가 이루어지고 있다.
한편, 한국등록특허 제1755321호에는 '바이러스병과 흰가루병 복합내병성 쥬키니호박 신품종'이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2019-0045190호에는 MSP_17500, MSP_8 또는 MSP_41353의 저항성 유전자좌에 존재하는 SNP에 기반한 '서양 호박 식물의 흰가루병 저항성 마커, 흰가루병 저항성 서양 호박 식물, 그것을 이용한 흰가루병 저항성 서양 호박 식물의 제조 방법 및 서양 호박 식물에 대한 흰가루병 저항성의 부여 방법'이 개시되어 있으나, 본 발명의 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 흰가루병에 대해 저항성을 갖는 애호박 계통 TG10과 감수성을 갖는 애호박 계통 TG201의 유전체 염기서열을 비교·분석하여 TG10의 3번 염색체에서 단일염기다형성(SNP)이 가장 많이 존재하는 것을 확인한 후, 표준유전체 'Rifu', TG10(저항성) 및 TG201(감수성) 계통의 3번 염색체 염기서열을 비교하여 TG10 및 TG201 게놈 서열 간에 삽입 또는 결실된 염기서열을 기반으로 InDel 분자마커 7개를 개발하였으며, 상기 개발된 InDel 분자마커들을 이용하여 TG10 및 TG201을 대상으로 PCR을 수행한 결과, 본 발명의 분자마커가 흰가루병에 저항성 또는 감수성을 가지는 호박 자원을 정확하게 구별할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 서열번호 1 및 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 11 및 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 프라이머 세트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 호박 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 상기 증폭 단계의 산물을 검출하는 단계;를 포함하는, 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 InDel 분자마커는 흰가루병 저항성 호박 자원을 효율적으로 판별할 수 있으므로 흰가루병에 대해 저항성을 가지는 호박을 육종하는데 소요되는 시간, 비용 및 노력을 절감하는데 매우 유용할 것으로 기대되며, 본 발명의 InDel 분자마커를 이용하여 육성한 흰가루병 저항성 호박 자원의 보급은 호박 재배 농가의 소득 창출에 기여할 수 있을 것이다.
도 1은 흰가루병에 대해 저항성을 갖는 애호박 계통 TG10 및 감수성을 갖는 애호박 계통 TG201의 게놈 염기서열을 비교하여, 각 염색체별(chromosome 1~20)로 단일염기다형성(SNP) 분포 정도를 보여주는 히트맵이다. 색상 막대는 10 kb 당 SNP 의 밀도를 나타낸다.
도 2는 흰가루병에 대해 저항성을 갖는 애호박 계통 TG10의 3번 염색체 상에서 본 발명의 InDel 마커 7개(PMR 1, PMR 2, PMR 3, PMR 4, PMR 5, PMR 6 및 PMR 7)의 위치를 나타낸 그림이다.
도 3은 흰가루병에 대해 저항성을 갖는 애호박 계통 TG10(R) 및 감수성을 갖는 애호박 계통 TG201(S)을 대상으로 본 발명의 InDel 마커 7개(PMR 1, PMR 2, PMR 3, PMR 4, PMR 5, PMR 6 및 PMR 7)를 각각 이용하여 PCR을 수행한 결과이다.
도 4는 시판되고 있는 흰가루병 저항성 애호박 품종(1, 2, 4, 5 및 6번 레인)과 흰가루병 감수성 애호박 품종(3번 레인)을 대상으로 본 발명의 InDel 마커(PMR2)를 이용하여 PCR을 수행한 결과이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 및 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 11 및 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 흰가루병(powdery mildew) 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 프라이머 세트를 제공한다.
본 발명의 프라이머 세트는 흰가루병 저항성 호박의 육종 과정에서 사용되는 다양한 호박 자원, 호박 개체, 호박 품종 등의 식물체에 흰가루병원균을 접종하여 병징을 직접 확인하지 않아도 흰가루병 저항성 유무를 정확하게 판별할 수 있으므로, 호박 육종 단계의 초기에 어린 식물체 또는 종자의 게놈 DNA를 대상으로 흰가루병에 대한 저항성 또는 감수성을 평가 및 예측하여 흰가루병 저항성 육종소재를 개발할 수 있다. 또한, 흰가루병 저항성 호박의 육종 과정에서 초기 단계 이외에 여러 단계에 적용할 수 있으며, 다양한 흰가루병 저항성 자원, 개체 또는 품종 간 교잡에 적용하여 흰가루병 저항성 신품종을 육성하는데 유용하게 활용할 수 있다.
본 발명의 프라이머 세트에 있어서, 상기 호박 자원은 서양 호박(Cucurbita maxima), 동양 호박(C. moschata), 페포 호박(C. pepo) 또는 이들의 재배종일 수 있고, 바람직하게는 동양 호박의 재배종인 애호박일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 프라이머 세트에 있어서, 상기 흰가루병은 포도스패라 잔티이(Podosphaera xanthii)에 의해 유발되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 프라이머 세트는 바람직하게는 상기 7개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 프라이머 세트를 포함하며, 7개의 프라이머 세트, 즉 서열번호 1 및 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 11 및 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;를 모두 포함할 수도 있다. 상기 7개의 프라이머 세트를 동시에 이용하면 흰가루병 저항성 호박 자원을 더욱 효율적으로 구별할 수 있다.
상기 프라이머는 각 프라이머의 서열 길이에 따라 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 및 14의 서열 내의 13개 이상, 14개 이상, 15개 이상, 16개 이상, 17개 이상의 연속 뉴클레오드티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열번호 1의 프라이머(20개 올리고뉴클레오티드)는 서열번호 1의 서열 내의 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 또한, 상기 프라이머는 서열번호 1 내지 서열번호 14의 염기서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열도 포함할 수 있다. 상기 서열번호 중 홀수 번호의 올리고뉴클레오티드 프라이머는 정방향 프라이머이며, 짝수 번호의 올리고뉴클레오티드 프라이머는 역방향 프라이머이다.
본 발명에 따른 서열번호 1 및 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 11 및 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;는 흰가루병에 대해 저항성을 갖는 애호박 자원과 감수성을 갖는 애호박 자원의 게놈 서열을 분석하여 도출된 InDel 마커를 증폭할 수 있는 프라이머 세트로, 흰가루병에 대해 저항성을 갖는 애호박 자원과 감수성을 갖는 애호박 자원에서 각각 다른 크기의 증폭산물이 확인되어 이들을 서로 정확하게 판별할 수 있다.
본 발명에 있어서, "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity)뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.
본 명세서에 있어서, 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오티드는 또한 뉴클레오티드 유사체(analogue), 예를 들면, 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩티드 핵산(peptide nucleic acid)를 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(intercalating agent)를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명에 따른 프라이머 세트; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 키트를 제공한다.
본 발명의 키트에 있어서, 상기 프라이머 세트 및 호박 자원은 전술한 바와 같다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 키트는 또한 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 안내서를 추가로 포함할 수 있다. 안내서는 키트 사용법, 예를 들면, 역전사 완충액 및 PCR 완충액 제조 방법, 제시되는 반응 조건 등을 설명하는 인쇄물이다. 안내서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함한다. 또한, 안내서는 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함한다.
본 발명은 또한,
호박 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;
상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및
상기 증폭 단계의 산물을 검출하는 단계;를 포함하는, 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현에 따른 방법에 있어서, 상기 프라이머 세트는 전술한 것과 같다.
본 발명의 일 구현에 따른 방법에 있어서, 상기 호박 자원은 서양 호박(Cucurbita maxima), 동양 호박(C. moschata), 페포 호박(C. pepo) 또는 이들의 재배종일 수 있고, 바람직하게는 동양 호박의 재배종인 애호박일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에 있어서, 상기 흰가루병은 포도스패라 잔티이(P. xanthii)에 의해 유발되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 방법은 호박 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계를 포함한다. 상기 호박은 이에 한정되지 않으나, 호박 식물체의 잎, 꽃, 열매 혹은 열매가 건조된 형태로 가공된 산물일 수 있다. 상기 게놈 DNA를 분리하는 방법은 당업계에 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들면, CTAB 방법을 이용할수도 있고, Wizard prep 키트(Promega 사)를 이용할 수도 있다. 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 본 발명의 일 실시예에 따른 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 프라이머로 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭할 수 있다. 표적 핵산을 증폭하는 방법은 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction), 핵산 서열 기재 증폭(nucleic acid sequence-based amplification), 전사 기재 증폭시스템(transcription-based amplification system), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification) 또는 Qβ 복제효소(replicase)를 통한 증폭 또는 당업계에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법이 있다. 이 중에서, PCR이란 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍으로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법이다. 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수도 있다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 증폭된 표적 서열은 검출가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 상기 표지 물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy-5 또는 Cy-3이다. 표적 서열의 증폭시 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 PCR 수행시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하면 증폭 산물이 합성되면서 방사성이 증폭 산물에 혼입되어 증폭 산물이 방사성으로 표지될 수 있다. 표적 서열을 증폭하기 위해 이용된 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트는 전술한 것과 같다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 흰가루병 저항성 호박 자원을 구별하기 위한 방법은 상기 증폭 단계의 산물을 검출하는 단계를 포함하며, 상기 증폭 단계 산물의 검출은 DNA 칩, 겔 전기영동, 모세관 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 증폭 산물을 검출하는 방법 중의 하나로서, 모세관 전기영동을 수행할 수 있다. 모세관 전기영동은 예를 들면, ABi Sequencer를 이용할 수 있다. 또한, 겔 전기영동을 수행할 수 있으며, 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다. 또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 방사성 측정 방법은 PCR 수행시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사성 측정기구, 예를 들면, 가이거 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사성을 측정할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
1. 식물재료
홍익바이오(주) 보유 육종소재 중에서 순계로 정착된 흰가루병 감수성 계통 TG201을 모계로 사용하고 흰가루병 저항성 계통 TG10을 부계로 사용하여 F2 집단을 작성한 후, F2 집단에서 무작위로 선정된 204개체를 흰가루병 저항성 유전분석에 사용하였다. TG10은 흰가루병에 저항성을 갖는 C. okeechobeensis subsp. martinezii 계통과 애호박(C. moschata)의 교잡 후대로, 국내에서 개발된 계통으로부터 유래된 육종소재이다.
2. TG10 및 TG201의 전장 유전체 해독(whole-genome resequencing)과 SNP/InDel 분석
애호박 육종소재 TG10(흰가루병 저항성) 및 TG201(흰가루병 감수성) 유전체의 염기서열을 분석하였고, 염기서열 생산은 일루미나(Illumina) 체계를 이용하였다. 생산된 초기 데이터(raw data)에서 Trimmomatic을 이용하여 어댑터와 불량 염기서열을 제거하고 SOAPec을 이용하여 서열을 수정하였다. KmerGenie를 사용하여 유전체 조립을 위한 최상의 k-mer 값과 유전체 크기를 계산하고 SOAPdenovo2로 유전체를 조립한 후, Gapcloser를 사용하여 조립된 스캐폴드의 빈 곳 채우기를 반복적으로 수행하였다. 또한 조립과정에서 발생할 수 있는 부정확한 공통 염기서열 또는 삽입(insertion)/결실(deletion) 등을 교정하기 위하여 Pilon 프로그램으로 5회에 걸쳐 교정하였다. 교정이 완료된 TG10 및 TG201 유전체 염기서열은 C. moschata의 표준유전체 'Rifu' (http://cucurbitgenomics.org/pub/cucurbit/genome/Cucurbita_moschata/)를 대상으로 nucmer를 이용하여 정렬한 후 컨티그의 순서와 방향을 결정하고, 인위적으로 100개의 N을 삽입하여 컨티그들을 연결하고 가상염색체(pseudomolecule)를 완성하였다.
단일염기다형성(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)과 삽입 또는 결실(Indel)된 다형성 영역을 추출하기 위해 TG201의 유전체 염기서열을 기준으로 하여 BWA-mem을 이용하여 TG10의 염기서열을 정렬하고, 중복 염기서열의 영향 등을 보정한 후 GATK haplotypeCaller를 이용하여 SNP와 Indel 다형성을 추출하였다. Raw Variant는 vcftools로 minimum depth 50, minimum genotype quality 20, no missing sample allowed의 조건으로 필터링하였고, TG201의 SNP 중에서 참조 대립유전자(reference allele)가 아닌 것을 제거하고, TG10에서 이형접합성(heterozygous) SNP를 제거하여 최종적으로 337,373개의 SNP을 선발하였다.
3. 호박 흰가루병 저항성 검정
애호박 육종소재 TG10(흰가루병 저항성), TG201(흰가루병 감수성) 및 TG10과 TG201의 F2 집단을 발아시켜 직경 9 cm, 토양 400 ㎖의 포트에 정식하였고, 파종 후 10일된 유식물체를 흰가루병 저항성 검정에 사용하였다. 식물체 재배는 온도 25±5℃, 광 L16:D8의 온실 조건에서 이루어졌다. 오이를 이용하여 계대배양한 흰가루병균(Podosphaera xanthii) 레이스 1을 접종원으로 사용하였고, 접종은 공기전염 방법을 사용하였는데 접종할 호박 유식물체 포트 주변에 이병 식물체를 배치하여 공기전염이 되도록 하였다. 실험 중에 흰가루병의 발생이 촉진되도록 수분을 공급하였고, 잎에 물이 닫지 않도록 주의하면서 포트에 직접 물을 주었다. 저항성 판정은 파종 후 35일(접종 후 2주)에 제1 본엽과 제2 본엽에 발생한 흰가루병의 병반면적율(%) 및 포자형성 병반면적율(%)을 조사하였다. 저항성 판정기준은 병반면적율 또는 포자형성 병반면적율(%)에 따라 0~10%는 저항성, 11~35%는 중도저항성, 36~100%는 감수성으로 평가하였다.
4. 흰가루병 저항성 애호박 자원 판별용 InDel 마커 개발 및 검정
애호박 육종소재 TG10(흰가루병 저항성)의 3번 염색체 86.2 cM(물리적 위치는 약 7.1Mb) 위치의 좌우 약 200 kb에 해당하는 영역을 기준으로, TG10 및 TG201(흰가루병 감수성)의 염기서열을 비교하여 삽입(insertion) 또는 결실(deletion)의 차이를 보이는 InDel 다형성에 기반한 프라이머 세트를 제작하였다(표 3). 프라이머 세트는 Primer3Plus(Untergasser et al., 2007)를 이용하여 디자인하였다. 각 프라이머 세트의 흰가루병 저항성 판정의 유효성은 TG10과 TG201을 포함하여 TG10 및 TG201의 F2 개체 및 시판 품종 등을 대상으로 PCR 전기영동을 통해 확인하였다.
본 발명의 프라이머 세트 정보
프라이머 명칭 위치(1) 서열(5'-3') (서열번호) 크기(R/S)(2)
PMR 1 6927388 F: TCGTTTTTCTTCTTGCAACC (1) 419/334
6927806 R: AAACAGGTCAAAGTGCACCAG (2)
PMR 2 6934112 F:CAAGTAAGCACAACAAAGTTCATTC (3) 360/178
6934471 R: AATTGCCCTTTCTGTTTTACCAC (4)
PMR 3 6962145 F: CCGCATTCAACCTATAAGTCTTT (5) 275/296
6962419 R: AGCACAAATCAAAGAAGAGTTCG (6)
PMR 4 7066951 F: GTTTTGATTGGAGGAGAGGTTTATG (7) 420/381
7067370 R: TTCTCGGGGAAAGCTATAGATTAGT (8)
PMR 5 7168080 F: CTGACTCAAGCAACAGTTTAGACC (9) 295/353
7168374 R: GATCAATGCCACAGATTTCGAG (10)
PMR 6 7263794 F: CGGTTATGGTTACCAATCAGGT (11) 324/360
7264117 R: GATCGATAAAAACCACCACGAC (12)
PMR 7 7324826 F: CATGTAAGGTTTTATTGTGGGCTTG (13) 254/298
7325079 R: TAAATTCTGGGAACTAGTGCTCTTC (14)
(1) TG10의 염색체 3번에서 PCR 증폭산물의 시작과 끝 위치를 나타냄
(2) R: 저항성(resistant variety), S: 감수성(susceptible variey)
실시예 1. 호박 유전체 염기서열 분석 및 변이 분석
애호박 육종소재 TG10(흰가루병 저항성)과 TG201(흰가루병 감수성) 유전체의 염기서열을 일루미나 방식으로 분석한 결과, TG10(NABIC 등록번호: NU-1206-000001∼000004)과 TG201(NABIC 등록번호: NU-1207-000001∼000004)의 조립된 유전체 길이의 합은 각각 232,213,264 bp 및 230,939,891 bp이고, Mummer로 비교한 'Rifu' 유전체의 97.3% 및 96.7% 크기임을 확인하였다. 조립과정의 통계를 참고했을 때 조립 결과는 신뢰할 수 있는 정도로 판단되었다.
또한, TG10 및 TG201의 게놈 서열을 비교하여 총 337,373개의 SNP를 추출하였다. 추출된 SNP는 3번 염색체에서 40,127개로 가장 많이 분포되어 있었고(38 SNPs/10 kb), 5번 염색체에서는 5,319개로 가장 적게 분포되어 있어(5 SNPs/10 kb) 두 염색체 간에 7배 이상의 차이를 보였다(도 1). 염색체 3번의 7-9 Mb 지역과 15번의 4.5-5.2 Mb지역의 경우 10 kb 내에 200개 이상의 SNP가 밀집되어 있었다(결과 미제시). 염색체 5번, 7번, 8번, 13번, 17번 및 19번에서 전체적으로 SNP 빈도가 낮은 이유는 TG10과 TG201 모두 육종 과정 중에 특정 염색체 또는 재조합 블록(recombination block)을 공유하기 때문일 것으로 사료되었다.
실시예 2. 호박 흰가루병 저항성 검정
TG201 및 TG10의 F2 집단 204개체의 유식물체에 흰가루병을 공기감염으로 접종하고, 2주 후에 병 발생 정도를 전체 병반면적율(%)과 포자형성 병반면적율(%)을 각각 측정하여 저항성 정도로 환산하였다. 저항성 정도는 저항성, 중도저항성 및 감수성의 3단계로 구분하였고, 저항성과 중도저항성을 합하여 저항성으로 간주하였다.
그 결과, 하기 표 2 및 표 3에 개시된 F2 집단 204개체의 평균 병반면적율과 평균 포자형성 병반면적율에 따라, 흰가루병 저항성 및 감수성 애호박 자원의 비율이 각각 57:43(≒1.3:1), 78:22(≒3.5:1)인 것으로 확인되었다. 평균 포자형성 병반면적율에 의한 저항성 판정이 3.5:1 정도를 보이는데, 이러한 검정 결과는 다른 연구에서도 C. moschata와 C. martinezii의 종간교잡 및 여교배 분석으로 흰가루병 저항성은 단인자 우성이며 일부 마이너 유전자(minor gene)의 영향이 있다는 보고와 유사하다.
TG10(흰가루병 저항성) 및 TG201(흰가루병 감수성)의 F2 집단 204개체를 대상으로 잎에서의 병반면적율을 측정한 결과
병반면적율(%) 1-5 6-10 11-25 26-35 36-80 81-100
개체수 10 22 57 27 74 14
저항성/감수성 저항성 중도 저항성 감수성
개체수 32 84 88
비율(%) 57 43
TG10(흰가루병 저항성) 및 TG201(흰가루병 감수성)의 F2 집단 204개체를 대상으로 잎에서의 포자형성 병반면적율을 측정한 결과
병반면적율(%) 1-5 6-10 11-25 26-35 36-80 81-100
개체수 105 35 16 3 37 8
저항성/감수성 저항성 중도 저항성 감수성
개체수 140 19 45
비율(%) 78 22
호박 포장이나 하우스에서 흰가루병의 만연은 균사체 증식 후의 포자형성과 산포에 의해 일어나는데, 흰가루병 저항성 자원의 경우 하엽에서는 흰가루병이 발생해도 포자형성이 심하지 않아 병의 전파가 잘 일어나지 않는 특성을 보인다. 아직까지 흰가루병의 포자형성 기작과 요인들에 대해 연구된 결과는 없으나, 상기 흰가루병 검정 결과를 통해 흰가루병 저항성은 포자형성 및 전파와 관련이 있고 포자형성 병반면적율에 의해 흰가루병 저항성 판단이 가능함을 알 수 있다.
실시예 3. InDel 분자마커를 이용한 흰가루병 저항성 또는 감수성 애호박 자원 구별
애호박 육종소재 TG10(흰가루병 저항성)과 TG201(흰가루병 감수성)의 게놈 서열에서 SNP가 가장 많이 분포되어 있었던 3번 염색체를 기준으로 하여, TG10의 3번 염색체 6.9-7.3 Mb 부분의 염기서열과 TG201의 3번 염색체 7.1-7.5 Mb 부분의 염기서열을 비교하여, 6,927,388-7,325,079의 약 400 kb 영역 내에서 TG10 및 TG201의 게놈 서열 간 삽입 또는 결실된 영역에 특이적인 InDel 마커를 개발하였다(표 1 및 도 2).
상기 개발된 InDel 분자마커가 흰가루병 저항성 또는 감수성 애호박 자원을 판별할 수 있는지 검증하기 위해 TG10과 TG201의 DNA 시료를 주형으로 PCR을 수행하고, PCR 증폭산물을 아가로스 겔에 전기영동하여 분석하였다.
그 결과, 프라이머 세트 7개(PMR 1, PMR 2, PMR 3, PMR 4, PMR 5, PMR 6 및 PMR 7)를 각각 사용한 경우 TG10 및 TG201에서 각각 419/334 bp, 360/178 bp, 275/296 bp, 420/381 bp, 295/353 bp, 324/360 bp, 254/298 bp의 서로 다른 크기의 밴드가 확인되었다(도 3A 및 3B).
또한, 프라이머 세트 PMR 2를 사용하여 시판되고 있는 흰가루병 저항성 품종(도 4의 1, 2, 4, 5 및 6번 레인; 1 및 2번은 홍익바이오 보유) 및 흰가루병 감수성 품종(도 4의 3번 레인)을 대상으로 PCR을 수행한 결과, 흰가루병에 대해 저항성 또는 감수성을 가지는 품종을 정확하게 판별할 수 있음을 확인하였다. 시판되고 있는 호박은 흰가루병에 대한 저항성을 갖는 호박 계통과 감수성을 갖는 호박 계통을 교배하여 얻어진 F1 집단의 개체로, 흰가루병 저항성 호박 개체는 이형접합(hetero)의 유전자형을 가지고 있고 흰가루병 감수성 호박 개체는 동형접합(homo)의 유전자형을 가지고 있음을 확인하였고, 이를 통해 흰가루병 저항성 관련 유전자는 우성임을 알 수 있었다.
<110> Hongikbio Inc. <120> Molecular marker for discriminating powdery mildew-resistant pumpkin resource and uses thereof <130> PN20091 <160> 14 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 tcgtttttct tcttgcaacc 20 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 aaacaggtca aagtgcacca g 21 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 caagtaagca caacaaagtt cattc 25 <210> 4 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 aattgccctt tctgttttac cac 23 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ccgcattcaa cctataagtc ttt 23 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 agcacaaatc aaagaagagt tcg 23 <210> 7 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 gttttgattg gaggagaggt ttatg 25 <210> 8 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 ttctcgggga aagctataga ttagt 25 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 ctgactcaag caacagttta gacc 24 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 gatcaatgcc acagatttcg ag 22 <210> 11 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 cggttatggt taccaatcag gt 22 <210> 12 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 gatcgataaa aaccaccacg ac 22 <210> 13 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 13 catgtaaggt tttattgtgg gcttg 25 <210> 14 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 14 taaattctgg gaactagtgc tcttc 25

Claims (6)

  1. 서열번호 1 및 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 11 및 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 흰가루병(powdery mildew) 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 프라이머 세트.
  2. 제1항에 있어서, 서열번호 1 및 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 11 및 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;를 포함하는, 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 프라이머 세트.
  3. 제1항 또는 제2항에 따른 프라이머 세트; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 흰가루병(powdery mildew) 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 키트.
  4. 제3항에 있어서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  5. 호박 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;
    상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 제1항 또는 제2항의 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및
    상기 증폭 단계의 산물을 검출하는 단계;를 포함하는, 흰가루병(powdery mildew) 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 증폭 산물의 검출은 겔 전기영동, DNA 칩, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행되는 것인 방법.
KR1020200067563A 2020-06-04 2020-06-04 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도 KR102273611B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200067563A KR102273611B1 (ko) 2020-06-04 2020-06-04 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200067563A KR102273611B1 (ko) 2020-06-04 2020-06-04 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102273611B1 true KR102273611B1 (ko) 2021-07-06

Family

ID=76860558

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020200067563A KR102273611B1 (ko) 2020-06-04 2020-06-04 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102273611B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220169190A (ko) * 2021-06-18 2022-12-27 대한민국(농촌진흥청장) 수박의 여교배 세대단축 육종을 위한 단일염기 다형성 마커세트 및 이의 용도

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190045190A (ko) * 2017-07-31 2019-05-02 타키이 슈뵤우 가부시키가이샤 서양 호박 식물의 흰가루병 저항성 마커, 흰가루병 저항성 서양 호박 식물, 그것을 이용한 흰가루병 저항성 서양 호박 식물의 제조 방법 및 서양 호박 식물에 대한 흰가루병 저항성의 부여 방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190045190A (ko) * 2017-07-31 2019-05-02 타키이 슈뵤우 가부시키가이샤 서양 호박 식물의 흰가루병 저항성 마커, 흰가루병 저항성 서양 호박 식물, 그것을 이용한 흰가루병 저항성 서양 호박 식물의 제조 방법 및 서양 호박 식물에 대한 흰가루병 저항성의 부여 방법

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BEOM_SEOK PARK ET AL, HORTICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY, 2020, VOL.38, NO.5, PP.717_729 *
GENBANK ACCESSION NO. NEWM01000015 *
NAM NGOC NGUYEN ET AL, KOREAN SOCIETY FOR HORTICULTURAL SCIENCE(한국원예학회) ABSTRACT, 2018, PP.247, P_7, 500 *
Nam Ngoc Nguyen et al., Korean Society for Horiticultural ScienceL (한국원예학회) 요약, 2017, PP.122, P-1-4, 169.* *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220169190A (ko) * 2021-06-18 2022-12-27 대한민국(농촌진흥청장) 수박의 여교배 세대단축 육종을 위한 단일염기 다형성 마커세트 및 이의 용도
KR102578134B1 (ko) 2021-06-18 2023-09-14 대한민국 수박의 여교배 세대단축 육종을 위한 단일염기 다형성 마커세트 및 이의 용도

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101912192B1 (ko) 도라지 품종 판별을 위한 분자마커와 프라이머 세트 및 이의 용도
US10337072B2 (en) Copy number detection and methods
CN109913577B (zh) 与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记及其应用
KR20170051866A (ko) 더덕 품종 구별을 위한 ssr 분자마커 및 이의 용도
KR102273611B1 (ko) 흰가루병 저항성 호박 자원을 판별하기 위한 분자마커 및 이의 용도
KR102116428B1 (ko) 뿌리혹병 저항성 배추 품종의 판별을 위한 프라이머 세트 및 이의 용도
KR101734922B1 (ko) 양배추 검은썩음병 저항성 또는 이병성 품종 선별용 분자 마커 및 이의 용도
CN104946630B (zh) 黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记及其专用引物和应用
KR101961656B1 (ko) 가야벼 유래 ⅠｎＤｅｌ ＤＮＡ 마커를 포함하는 벼멸구 저항성 벼 품종 선별용 조성물 및 상기 ⅠｎＤｅｌ ＤＮＡ 마커를 이용한 벼멸구 저항성 벼 품종 선별 방법
KR101783347B1 (ko) 배의 화분 유무 판별용 caps 마커 및 이의 용도
KR101793042B1 (ko) 수박 흰가루병 저항성 유전자 선발용 분자마커
KR102429219B1 (ko) 콩 역병균에 대한 저항성 또는 감수성을 가지는 콩 품종 판별용 마커 조성물 및 이의 용도
KR102186239B1 (ko) 순무의 유전자형 또는 브라시카 라파의 아종 구별용 분자마커 및 이의 용도
JP2008237175A (ja) いもち病抵抗性イネ科植物の作出法
KR101649589B1 (ko) 사과에서 유래된 ssr 프라이머 및 이의 용도
KR20130091434A (ko) 벼 줄무늬잎마름병 저항성 유전자 Ｓｔｖ－ｂｉ를 가진 벼 품종 선별용 프라이머 및 이를 이용한 벼 품종 선별 방법
KR101817463B1 (ko) 수박 탄저병 저항성 개체 선발용 분자마커 및 이의 이용
KR101322345B1 (ko) ＤＮＡ 마커를 포함하는 끝동매미충 저항성 유전자 Ｇｒｈ１을 가진 벼 품종 선별용 조성물 및 ＤＮＡ 마커를 이용한 끝동매미충 저항성 벼 품종 선별 방법
Sanghvi et al. Molecular markers in plant biotechnology
KR102438610B1 (ko) 시들음병 저항성 또는 감수성 무 품종을 판별하기 위한 프라이머 세트 조성물 및 이의 용도
KR101570754B1 (ko) DNA 마커인 RM18166, RM18171 및 Indel 15040을 포함하는 끝동매미충 저항성 유전자 Ｇrh1을 가진 벼 품종 선별용 조성물
KR102504390B1 (ko) 수박 덩굴마름병 저항성 개체 선발을 위한 분자마커 및 이의 용도
KR101818420B1 (ko) 고추 흰가루병 저항성 품종의 구별을 위한 분자마커 및 이의 용도
KR102178356B1 (ko) 순무의 유전자형 또는 브라시카 라파의 아종 구별용 분자마커 및 이의 용도
CN112094940B (zh) 与黄瓜长下胚轴基因lh1连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant