KR102229225B1 - 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증의 진단용 결합 분자 - Google Patents

사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증의 진단용 결합 분자 Download PDF

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Abstract

본 발명은 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증의 진단용 결합 분자에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 본 발명의 결합 분자는 SARS-CoV-2의 S 단백질에 대한 우수한 결합 능력을 가짐으로써 우수한 진단 효과를 나타내므로, 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)에 대한 신속한 진단에 매우 유용하다.

Description

사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증의 진단용 결합 분자{Binding Molecules Binding To A Spike Protein Of SARS-CoV-2 For Diagnosis Of COVID-19}
본 발명은 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증의 진단용 결합 분자에 관한 것이다.
사스-코로나바이러스-2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)는 유전적 배열(DNA sequencing)상 전도 기능(Positive sense) 단일 가닥 RNA(single-stranded RNA) 코로나바이러스로서, 인간에게 전염성이 있고 코로나바이러스감염증-19(coronavirus disease 2019, COVID-19)의 원인이다. COVID-19의 최초 발생지는 중국 후베이성의 우한시이다.
SARS-CoV-2에 감염된 사람들은 열, 기침, 호흡 곤란, 설사와 같이 경증에서 중증의 증상을 보일 수 있다. 합병증이나 병을 가진 사람들, 노인은 사망할 가능성이 크다.
특히 심장질환 및 당뇨병 등의 기저질환 보유자가 감염에 더 취약하며, 합병증이나 장기 손상 등을 겪기 때문에 조기 발견과 치료가 매우 중요하다. 2019년 12월 8일부터 2020년 3월 20일 현재까지 245,550명의 환자가 발생하였고, 그 중 10,049명이 사망하여 치사율은 4.09%에 달한다(WHO). 현재까지 한국을 포함한 177개국에서 발생하였다.
현재 코로나바이러스감염증-19(coronavirus disease 2019, COVID-19)의 치료제는 없고, 기존 치료제로 환자에게 투여하여 치료 효과를 기대하고 있는 실정이다. 에볼라 치료제 혹은 치료 후보 물질인 항바이러스제 파비피라비르 (favipiravir), 렘데시비르 (remdesivir), 갈리데시비어 (galidesivir)와 C형 간염 치료제인 리바비린 (ribavirin)을 코로나19 치료제로 사용하고 있다. 에볼라 치료제로 쓰이는 약물에 비해 C형 간염 치료제인 리바비린은 빈혈과 같은 부작용이 심할 수 있고, 항바이러스제인 인터페론 (interferon)도 여러 가지 부작용을 우려하여 주의해서 사용할 것을 권고하고 있다. 말라리아치료제 클로로퀸 (Chloroquine)도 코로나19에 효과를 보이는 것으로 나타나 공개 임상시험 진행 중에 있다.
그러나 이러한 약물들이 코로나19 환자 치료에 활용되어 효과를 보고 있지만 아직 어떠한 근거에서 효과를 내는지는 아직 명확히 입증되지 않았다. 중국에서 코로나19 회복 환자의 현장을 주입하는 혈장 요법을 시행하여 중증 환자의 치료에 효과를 보였다고 발표하였으나 치료 효과가 불분명하고 불확실성이 크기 때문에 신중해야 한다.
국내의 경우, 코로나19 중앙임상 TF(테스크포스)가 2020년 2월 13일 코로나19의 치료 원칙을 마련하여, 1차 치료제로 에이즈 치료제인 칼레트라 (Kaletra), 말라리아치료제인 클로로퀸과 하이드록시클로로퀸(Hydroxychloroquine)을 권하며, 리바비린과 인터페론은 부작용을 우려해 1차 치료제로 권하지 않기로 발표했다. 경증이거나 젊은 환자, 발병 10일이 지난 경우에는 항바이러스제를 투여하지 않아도 증상이 호전된다고 판단하고, 고령자, 기저질환자, 중증 환자에게는 항바이러스 치료제를 투여하기로 합의했다.
미국 CDC는 i) 코로나19가 계절성 유행 바이러스가 아닌 메르스처럼 토착화되어 감염을 일으킬 수 있다고 발표하였고, ii) 바이러스가 올해 또는 내년 어느 시점에 커뮤니티로 전파, 코로나 바이러스가 실제 커뮤니티에 잠복되어 있다는 증거는 없으나, 데이터 기반으로 결론을 내릴 수 있도록 감시강화 필요성을 언급하였다(2020.2.13).
한국 질병관리본부는 i) 코로나19도 인플루엔자처럼 장기적으로 유행할 수 있다고 판단하여, 인플루엔자와 같이 감시 체계에 포함하겠다고 발표하였고, ii) 사람 사이에 유행하는 코로나바이러스(4종)도 겨울~봄에 유행하고 있어서 코로나19도 토착화될 수 있다는 가능성을 열어두고 있다(2020.2.17).
사스나 메르스와는 다르게 코로나19의 세계적 유행 (pandemic) 현실화에 대한 우려가 있지만 봄 이후 (4월) 소강 상태가 될 가능성도 있어, 추이를 보며 신중하게 접근하는 전문가들이 많다. 아직 코로나19에 대한 정보 부족으로 전문가들도 추후 전개 양상에 대해서는 의견이 분분하나, 단시일 내에 해결되리라 전망하는 전문가는 거의 없다. 코로나19의 유행 양상과 특징이 정확히 분석되고 이번 코로나19로 인한 위기 상황이 얼마나 지속되는지에 영향을 받겠지만, 무증상 감염자가 전세계에 퍼지게 될 경우 풍토병화 될 가능성에 대한 우려가 있다. 중국 및 국내에서의 토착화를 통한 국내 코로나19 재발병 가능성에 대한 대응책 마련이 시급하다.
신속진단검사(Rapid diagnostic test, RDT)는 면역크로마토그래피 분석, 래피드 키트 분석 등 다양한 명칭으로 불리며, 주된 구성이 지지체, 검체패드, 컨쥬게이트 패드, 신호검출패드, 및 흡수패드를 포함하는 면역 크로마토그래피 스트립에 의한 분석방법으로서, 사용자가 생물학적 또는 화학적 샘플로부터 분석 물질을 특별한 기술이나 장비 없이 1-100 마이크로 리터의 샘플로 2-30분 사이에서 간단하게 검출할 수 있다. 신속진단검사는 생물학적 물질 또는 화학적 물질이 서로 특이적으로 부착하는 성질을 이용하여 분석 물질을 단시간에 정성 및 정량적으로 검사할 수 있는 방법으로, 신속진단검사는 단순히 면역 크로마토그래피 스트립을 사용하거나, 이와 같은 면역 크로마토그래피 스트립을 플라스틱 하우징 내부에 장착한 형태의 면역 크로마토그래피 키트가 사용된다. 단순히 면역 크로마토그래피 스트립을 사용할 때는 시료를 담은 용기가 별도로 필요하지만 하우징에 내장된 면역 크로마토그래피 키트는 하우징에 준비된 투입구에 시료를 직접 투입함으로서 별도의 실험용기가 필요 없어 사용하기 간편하다.
신속진단검사는 간편성 및 신속성 측면에서 최근까지 개발된 검출 방법 중 가장 진보된 분석 키트 중 하나로서 감염성 병원체의 항원 또는 항체, 암 인자, 심장 마커 등 다양한 질병원인 물질을 진단하는데 유용하게 사용한다.
이와 같은 면역크로마토그래피 스트립 또는 이를 포함하는 면역크로마토그래피 키트를 이용한 분석을 통해, 사람 또는 동물의 전혈, 혈장, 혈청, 눈물, 침, 소변, 콧물, 체액 등의 검체를 이용하여, 사스, 메르스, 인플루엔자바이러스, 조류독감 바이러스, 로타 바이러스, A형 간염, B형 간염, C형 간염, 에이즈, 매독, 클라미디아, 말라리아, 장티프스, 위궤양 원인균, 결핵, 뎅기열, 나병 등의 원인 병원체 및 항체의 유무 등을 신속하게 검사 및 진단할 수 있다.
SARS-CoV-2는 아직까지 이 바이러스에 특이적인 진단용 항체 및 진단용 키트가 없다. 이에 따라, 본 발명자들은 SARS-CoV-2에 특이적인 항체를 개발하고자 하였다. 결합력 및 진단 효과가 우수한 항체를 개발하기 위해 지속적인 연구를 거듭한 결과, 본 발명을 완성하였다.
본 발명자들은 상기 문제점을 해결하고자 SARS-CoV-2의 S 단백질에 대한 결합 능력을 갖는 결합 분자를 개발하였고, 이 결합 분자가 SARS-CoV-2에 대하여 우수한 진단 효과를 가짐을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 스파이크 단백질(Spike protein, S protein)에 결합하는 결합 분자를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 결합 분자를 포함하는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19) 진단용 키트를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 검출 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19) 진단 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 스파이크 단백질(Spike protein, S protein)에 결합하는 결합 분자를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자에 추가적으로 하나 이상의 태그가 결합된 이뮤노컨쥬게이트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자를 암호화하는 핵산 분자를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 핵산 분자가 삽입된 발현 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 발현 벡터로 형질전환된 세포주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자를 포함하는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자를 포함하는 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자를 포함하는, 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 진단용 키트를 이용하여 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2)를 검출하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 진단용 키트를 이용하여 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)을 진단하는 방법을 제공한다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명은 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 스파이크 단백질(Spike protein, S protein)에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 결합 분자에 관한 것이다.
본 발명의 일 구체예로서, 상기 결합 분자는 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질의 RBD(Receptor binding domain) 영역에 결합할 수 있다.
사스-코로나바이러스-2는 세계보건기구(WHO)는 유전자 염기서열 차이로 인한 아미노산 변화를 기준으로 코로나 바이러스를 6개 유형으로 분류하고 있다. 먼저 S, L 유형으로 분류되었다가 다시 L, V, G 유형으로 나뉘고 G가 GH와 GR로 나뉘면서 S, L, V, G, GH, GR 의 총 6개 유형으로 분류하고 있다. 코로나19 발생 초기에 중국 우한을 비롯한 아시아 지역에는 S와 V 유형이 유행하였고, 이후 대륙별로 서로 다른 유형이 발견되었다. 이 중 GH 유형이 전파력이 높게 나타날 가능성이 있다고 보고된 바 있다. 국내의 경우 코로나바이러스 감염증 환자에서 채취한 유전자를 분류한 결과, 대부분은 유럽과 미국에서 유행한 G형의 변종인 GH형인 것으로 나타났고, 이 유형은 바이러스 전파력이 높은 것으로 알려져 있다. 이 중 바이러스의 세포 내 침입 시 중요한 역할을 하는 스파이크 단백질의 614번 아미노산을 아스파트산 (D)에서 글리신 (G)로 바뀐 G형의 바이러스는 3월 이후 유럽과 미국에서 급격히 증가해 현재는 거의 대부분 지역에서 나타나고 있다. 최근 보고된 바에 따르면 70여개 넘는 코로나바이러스 변이가 발생한 것으로 확인되었고, 전파력이 증가된 변이가 8개 (D614G 등), 중화항체를 회피하는 변이가 10개 (A841V 등), 혈장치료 효과가 낮은 변이 17개 (I472V 등)가 확인되었다.
일 구체예로, 본 발명의 결합 분자는 현재까지 단리된 사스-코로나바이러스-2 균주, 예를 들어 단리 일시와 장소를 알 수 없는 UNKNOWN-LR757996 균주(Strain), SARS-CoV-2/Hu/DP/Kng/19-027 균주; 2019년 12월 중국에서 단리된 Wuhan-Hu-1 균주; 2019년 12월 23일 최초로 중국에서 단리된 BetaCoV/Wuhan/IPBCAMS-WH-01/2019 균주; 2019년 12월 30일 중국에서 단리된 BetaCoV/Wuhan/IPBCAMS-WH-02/2019 균주, BetaCoV/Wuhan/IPBCAMS-WH-03/2019 균주, BetaCoV/Wuhan/IPBCAMS-WH-04/2019 균주, WIV02 균주, WIV04 균주, WIV05 균주, WIV06 균주, WIV07 균주; 2020년 1월 일본에서 단리된 2019-nCoV/Japan/TY/WK-521/2020 균주, 2019-nCoV/Japan/TY/WK-501/2020 균주, 2019-nCoV/Japan/TY/WK-012/2020 균주, 2019-nCoV/Japan/KY/V-029/2020 균주; 2020년 1월 대한민국에서 단리된 SNU01 균주; 대한민국에서 단리된 BetaCoV/Korea/KCDC03/2020 균주; 2020년 1월 1일 중국에서 단리된 BetaCoV/Wuhan/IPBCAMS-WH-05/2020 균주; 2020년 1월 2일 중국에서 단리된 2019-nCoV WHU02 균주, 2019-nCoV WHU01 균주; 2020년 1월 8일 중국에서 단리된 SARS-CoV-2/WH-09/human/2020/CHN 균주; 2020년 1월 10일 중국에서 단리된 2019-nCoV_HKU-SZ-002a_2020 균주; 2020년 1월 11일 중국에서 단리된 2019-nCoV_HKU-SZ-005b_2020 균주; 2020년 1월 17일 중국에서 단리된 SARS-CoV-2/Yunnan-01/human/2020/CHN 균주; 2020년 1월 19일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-WA1/2020 균주; 2020년 1월 20일 중국에서 단리된 HZ-1 균주; 2020년 1월 21일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-IL1/2020 균주; 2020년 1월 22일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-CA2/2020 균주, 2019-nCoV/USA-AZ1/2020 균주; 2020년 1월 23일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-CA1/2020 균주; 2020년 1월 25일 호주에서 단리된 Australia/VIC01/2020 균주; 2020년 1월 25일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-WA1-F6/2020 균주, 2019-nCoV/USA-WA1-A12/2020 균주; 2020년 1월 27일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-CA6/2020 균주; 2020년 1월 28일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-IL2/2020 균주; 2020년 1월 29일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-MA1/2020 균주, 2019-nCoV/USA-CA5/2020 균주, 2019-nCoV/USA-CA4/2020 균주, 2019-nCoV/USA-CA3/2020 균주; 2020년 1월 29일 핀란드에서 단리된 nCoV-FIN-29-Jan-2020 균주; 2020년 1월 29일 중국에서 단리된 SARS-CoV-2/IQTC02/human/2020/CHN 균주; 2020년 1월 31일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-WI1/2020 균주; 2020년 1월 31일 타이완에서 단리된 SARS-CoV-2/NTU01/2020/TWN 균주; 2020년 2월 5일 타이완에서 단리된 SARS-CoV-2/NTU02/2020/TWN 균주; 2020년 2월 6일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-CA7/2020 균주; 2020년 2월 7일 스웨덴에서 단리된 SARS-CoV-2/01/human/2020/SWE 균주; 2020년 2월 10일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-CA8/2020 균주; 2020년 2월 11일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-TX1/2020 균주; 2020년 2월 23일 미국에서 단리된 2019-nCoV/USA-CA9/2020 균주; 2020년 2월 28일 브라질에서 단리된 SARS-CoV-2/SP02/human/2020/BRA 균주; 단리 일시와 장소를 알 수 없는 UNKNOWN-LR757995, UNKNOWN-LR757997, UNKNOWN-LR757998, SARS-CoV-2/Hu/DP/Kng/19-020; 2020년 1월 일본에서 단리된 2019-nCoV/Japan/AI/I-004/2020; 2020년 1월 13일 네팔에서 단리된 SARS0CoV-2/61-TW/human/2020/ NPL; 2020년 2월 5일 중국에서 단리된 SARS-CoV-2/IQTC01/human/2020/CHN 균주; 대한민국에서 단리된 hCoV-19/South Korea/KUMC17/2020 균주와 향후 단리될 사스-코로나바이러스-2 균주에 대하여 결합 가능하나, 이들 균주에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예로서, 상기 결합 분자는 하기 특성 중 어느 하나 이상을 가질 수 있다:
a) 1 x 10-8 M 이하의 평형 해리 상수(KD)로 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합함;
b) 1 x 104 1/Ms 이상의 결합 상수(Ka)로 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합함; 또는
c) 1 x 10-2 1/s 이하의 해리 상수(Kd)로 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합함.
본 발명의 일 구체예로서, 본 발명의 결합분자는 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 1.0×10-8 M 이하 또는 3.0×10-9M 이하의 결합친화도(KD)로 결합할 수 있다.
본 발명의 일 구체예로서, 본 발명의 결합분자는 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 1 x 104 1/Ms 이상 또는 1 x 105 1/Ms 이상의 결합 상수(Ka)로 결합할 수 있다.
본 발명의 일 구체예로서, 본 발명의 결합분자는 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 1 x 10-2 1/s 이하 또는 5 x 10-3 1/s 이하의 해리 상수(Kd)로 결합할 수 있다.
본 발명의 일 구체예로서, 상기 결합 분자는 하기 표 1의 결합 분자들로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 결합 분자일 수 있다. 하기 표 1에서 No.는 각 결합 분자의 번호를 의미한다.
Figure 112020138291099-pat00021
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본 발명에 있어서, 가변영역의 CDR은 Kabat 등에 의해 고안된 시스템에 따라 통상적인 방법으로 결정되었다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest(5th), National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). 본 발명에 사용된 CDR 넘버링은 Kabat 방법을 사용했지만, 이외에 IMGT 방법, Chothia 방법, AbM 방법 등 다른 방법에 따라 결정된 CDR을 포함하는 결합 분자도 본 발명에 포함된다.
본 발명의 일 구체예로서, 상기 결합 분자는 하기 표 2의 결합 분자들로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 결합 분자일 수 있다. 하기 표 2에서 No.는 각 결합 분자의 번호를 의미한다.
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본 발명의 일 구체예에서, 상기 결합 분자는 scFv 절편, scFv-Fc 절편, Fab 절편, Fv 절편, 디아바디(diabody), 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 일 실시예는 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 scFv-Fc 절편을 제공한다. 또한, 본 발명의 다른 일 실시예는 SARS-CoV-2 S 단백질에 결합하는 완전한 인간 항체(Full IgG)를 제공한다.
본 명세서에서 '항체'는 최대한 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 무손상(intact) 단일클론 항체, 다클론 항체, 2종 이상의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체), 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편을 포함한다. 항체는 특이적인 항원을 인식하고 결합할 수 있는 면역계에 의하여 생성되는 단백질이다. 그 구조적인 면에서, 항체는 통상적으로 4개의 아미노산 쇄(2개의 중쇄 및 2개의 경쇄)로 이루어진 Y-형상의 단백질을 가진다. 각각의 항체는 주로 가변 영역 및 불변 영역의 2개의 영역을 가진다. Y의 팔의 말단 부분에 위치한 가변 영역은 표적 항원에 결합하고 상호작용한다. 상기 가변 영역은 특정 항원 상의 특이적 결합 부위를 인식하고 결합하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. Y의 꼬리 부분에 위치한 불변 영역은 면역계에 의하여 인식되고 상호작용한다. 표적 항원은 일반적으로 다수의 항체 상의 CDR에 의하여 인식되는, 에피토프라고 하는 다수의 결합 부위를 가지고 있다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 가진다. 그러므로 한 항원은 하나 이상의 상응하는 항체를 가질 수 있다.
아울러 본 발명은 상기 결합 분자의 기능적 변이체를 포함한다. 결합 분자들은 변이체들이 SARS-CoV-2 또는 이것의 S 단백질에 특이적으로 결합하기 위해 본 발명의 결합 분자와 경쟁할 수 있고, SARS-CoV-2에 결합 능력을 보유한다면 본 발명의 결합 분자의 기능적 변이체로 간주된다. 기능적 변이체는 1차 구조적 서열이 실질적으로 유사한 유도체를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니며, 예를 들면, 생체외(in vitro) 또는 생체내(in vivo) 변형, 화학약품 및/또는 생화학 약품을 포함하며, 이들은 본원 발명의 부모 단일클론 항체에서는 발견되지 않는다. 이와 같은 변형으로는 예를 들어 아세틸화, 아실화, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 결합, 지질 또는 지질 유도체의 공유 결합, 가교, 이황화 결합 형성, 글리코실화, 수산화, 메틸화, 산화, 페길화, 단백질 분해 및 인산화 등이 포함된다. 기능적 변이체는 선택적으로 부모 항체의 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산의 치환, 삽입, 결실 또는 그들의 조합을 함유하는 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다. 더욱이 기능적 변이체는 아미노 말단 또는 카르복시 말단 중 하나 또는 모두에서 아미노산 서열의 절단체(truncated form)를 포함할 수 있다. 본 발명의 기능적 변이체는 본 발명의 부모 항체와 비교하여 동일하거나 다르거나, 더 높거나 낮은 결합 친화력을 가질 수 있지만, 여전히 SARS-CoV-2 또는 이것의 S 단백질에 결합할 수 있다. 일 예로, 골격구조, 초가변(Hypervariable) 영역, 특히 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정 영역(Complementarity-determining region, CDR)을 포함하나 이에 한정되지 않는 가변 영역의 아미노산 서열이 변형될 수 있다. 일반적으로 경쇄 또는 중쇄 영역은 3개의 CDR 영역을 포함하는, 3개의 초가변 영역 및 더욱 보존된 영역, 즉 골격 영역(FR)을 포함한다. 초가변 영역은 CDR로부터의 아미노산 잔기와 초가변 루프로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. 본 발명의 범위에 속하는 기능적 변이체는 본 명세서의 부모 항체와 약 50%~99%, 약 60%~99%, 약 80%~99%, 약 90%~99%, 약 95%~99%, 또는 약 97%~99% 아미노산 서열 동질성을 가질 수 있다. 비교될 아미노산 서열을 최적으로 배열하고 유사하거나 또는 동일한 아미노산 잔기를 정의하기 위해 컴퓨터 알고리즘 중 당업자에게 알려진 Gap 또는 Bestfit를 사용할 수 있다. 기능적 변이체는 부모 항체 또는 그것의 일부를 PCR 방법, 올리고머 뉴클레오티드를 이용한 돌연변이 생성 및 부분 돌연변이 생성을 포함하는 공지의 일반 분자생물학적 방법에 의해 변화시키거나 유기합성 방법으로 얻을 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자에 추가적으로 하나 이상의 태그가 결합된 이뮤노컨쥬게이트를 제공한다. 일 구체예에서, 상기 결합 분자에 약물이 추가로 부착될 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 결합 분자는 약제가 결합된 항체-약물 접합체(conjugate)의 형태로 사용될 수 있다. 약물을 국소 전달하기 위해 항체-약물 접합체(ADC), 즉 면역접합체를 사용하게 되면 상기 약물 모이어티를 감염된 세포에 표적화 전달할 수 있는데, 상기 약물 작용제를 접합시키지 않은 채로 투여하게 되면, 정상 세포에 대해서도 허용될 수 없는 수준의 독성이 야기될 수 있기 때문이다. 약물-연결성 및 약물-방출성 뿐만 아니라 폴리클로날 및 모노클로날 항체(mAb)의 선택성을 높임으로써 ADC의 최대 효능과 최소 독성을 개선할 수 있다.
약물 모이어티를 항체에 부착시키는, 즉 공유 결합을 통하여 연결시키는 통상적인 수단으로는, 일반적으로 약물 모이어티가 항체 상의 수 많은 부위에 부착되는 불균질한 분자 혼합물이 유발된다. 예를 들어, 세포독성 약물을 전형적으로, 종종 항체의 수 많은 리신 잔기를 통하여 항체와 접합시켜 불균질한 항체-약물 접합체 혼합물을 생성킬 수 있다. 반응 조건에 따라서, 이러한 불균질한 혼합물은 전형적으로, 약물 모이어티에 부착된 항체 분포도가 0 내지 약 8 이상이다. 또한, 특별한 정수 비의 약물 모이어티 대 항체를 수반한 접합체의 각 아군은, 약물 모이어티가 항체 상의 각종 부위에 부착되는 잠재적으로 불균질한 혼합물이다. 항체는 크고, 복잡하며 구조적으로 다양한 생체 분자이고, 종종 많은 반응성 관능기를 갖고 있다. 링커 시약 및 약물-링커 중간체와의 반응성은 pH, 농도, 염 농도 및 조용매와 같은 요인들에 의해 좌우된다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예는 상기 결합 분자를 암호화하는 핵산 분자를 제공한다.
본 발명의 핵산 분자는 본 발명에서 제공하는 항체의 아미노산 서열을 당업자에게 알려진 바와 같이 폴리뉴클레오티드 서열로 번역된 핵산 분자 모두를 포함한다. 그러므로 ORF(open reading frame)에 의한 다양한 폴리뉴클레오티드 서열이 제조될 수 있으며 이 또한 모두 본 발명의 핵산 분자에 포함된다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예는 상기 핵산 분자가 삽입된 발현 벡터를 제공한다.
상기 발현 벡터로는 셀트리온 고유의 발현 벡터인 MarEx 벡터(한국특허등록 제10-1076602호 참조) 및 상업적으로 널리 사용되는 pCDNA 벡터, F, R1, RP1, Col, pBR322, ToL, Ti 벡터; 코스미드; 람다, 람도이드(lambdoid), M13, Mu, p1 P22, Qμ, T-even, T2, T3, T7 등의 파아지; 식물 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나에서 선택된 발현 벡터를 이용할 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 당업자에게 발현 벡터로 알려진 모든 발현 벡터는 본 발명에 사용 가능하며, 발현 벡터를 선택할 때에는 목적으로 하는 숙주 세포의 성질에 따른다. 숙주세포로의 벡터 도입시 인산칼슘 트랜스펙션, 바이러스 감염, DEAE-덱스트란 조절 트랜스펙션, 리포펙타민 트랜스펙션 또는 전기천공법에 의해 수행될 수 있으나 이에 한정되지 않으며 당업자는 사용하는 발현 벡터 및 숙주 세포에 알맞은 도입 방법을 선택하여 이용할 수 있다. 예를 들어, 벡터는 하나 이상의 선별 마커를 함유하나 이에 한정되지 않으며, 선별 마커를 포함하지 않은 벡터도 이용하여 생산물 생산 여부에 따라 선별이 가능하다. 선별 마커의 선택은 목적하는 숙주 세포에 의해 선택되며, 이는 이미 당업자에게 알려진 방법을 이용하므로 본 발명은 이에 제한을 두지 않는다.
본 발명의 결합 분자의 정제를 용이하게 하기 위하여 태그 서열을 발현 벡터 상에 삽입하여 융합시킬 수 있다. 상기 태그로는 헥사-히스티딘 태그, 헤마글루티닌 태그, myc 태그 또는 flag 태그를 포함하나 이에 한정되지 않으며 당업자에게 알려진 정제를 용이하게 하는 태그는 모두 본 발명에서 이용 가능하다.
또한, 본 발명은 상기 발현 벡터로 형질전환된 세포주를 제공한다. 본 발명의 일 구체예로서, 상기 발현 벡터가 숙주 세포에 형질전환되어, SARS-CoV-2에 결합 능력을 가지는 결합 분자를 생산하는 세포주를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 세포주는 포유동물, 식물, 곤충, 균류 또는 세포성 기원의 세포를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 상기 포유동물 세포로는 CHO 세포, F2N 세포, COS 세포, BHK 세포, 바우스(Bowes) 흑색종 세포, HeLa 세포, 911 세포, HT1080 세포, A549 세포, HEK 293 세포 및 HEK293T 세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 사용할 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 당업자에게 알려진 포유동물 숙주세포로 사용 가능한 세포는 모두 이용 가능하다.
또한, 본 발명은 상기 결합 분자를 포함하는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 상기 결합 분자 이외에 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 당업자에게 이미 잘 알려져 있다. 본 발명의 일 구체예로서, 상기 조성물은 멸균 주사용액, 동결건조(lyophilized) 제형, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe) 용액제, 경구형 제형, 외용제 또는 좌제일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 추가로 적어도 하나의 다른 진단제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 결합 분자와 함께 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 N 단백질(Nucleocapsid protein, N protein)에 결합하는 결합 분자를 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예로, 본 발명은 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 스파이크 단백질(Spike protein, S protein)에 결합하는 결합 분자를 포함하는 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 제공한다. 상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 코로나바이러스의 뉴클레오캡시드 단백질(Nucleocapsid protein, N protein)에 결합하는 결합 분자를 추가로 포함할 수 있다. 상기 코로나바이러스는 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2), 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 인간 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 인간 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 인간 코로나바이러스 HKU1 및 중동호흡기증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은
i) 지지체;
ii) 분석하고자 하는 검체를 수용하고 버퍼 투입부 및 검체 투입부를 구비하는 검체 패드;
iii) 상기 검체 패드에서 유입된 검체에 함유되어 있는 코로나바이러스와 특이적으로 결합하는 결합 분자를 함유하는, 컨쥬게이트 패드;
iv) 상기 검체에 코로나바이러스가 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석 물질의 존재 유무와 관계없이 검체가 흡수 패드로 이동하였는지 여부를 확인하는 대조부를 포함하는 신호 검출 패드; 및
v) 신호 검출 반응이 종료된 검체를 흡수하는 흡수 패드
를 포함할 수 있다.
상기 검체패드는 셀룰로오스, 아크릴 섬유, 레이온, 폴리에스터 섬유, 유리섬유, 울섬유, 실크섬유, 면사, 아마섬유 또는 펄프로 제조되거나, 한 종류 이상이 혼합되어 제조될 수 있다.
상기 컨쥬게이트 패드는 유리섬유, 폴리에틸렌섬유 등으로 제조될 수 있다.
상기 신호검출패드는 다공성 멤브레인 패드로 구성되며, 니트로셀룰로오스, 셀룰로오즈, 폴리에틸렌, 폴리에테르설폰, 또는 나일론 등으로 제조될 수 있다. 신호 검출부는 1 개 이상 포함될 수 있다.
상기 흡수패드는 버퍼의 이동을 촉진시킬 수 있는 임의의 패드일 수 있으며, 예를 들어 펄프, 셀룰로즈, 또는 면섬유 등으로 제조될 수 있다.
상기 스트립은 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 스파이크 단백질(Spike protein, S protein)에 결합하는 결합 분자를 컨쥬게이트 패드 및 신호 검출 패드에 각각 포함할 수 있다. 상기 컨쥬게이트 패드와 신호 검출 패드에 포함된 SARS-CoV-2 S 단백질 결합 분자는 동일하거나, 다를 수 있다. 또한, 상기 컨쥬게이트 패드와 신호 검출 패드에 포함된 SARS-CoV-2 S 단백질 결합 분자는 앞서 상술한 서열을 포함하는 결합 분자일 수 있다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립에 있어서, 상기 컨쥬게이트 패드에 함유된 결합 분자는 금속 입자, 라텍스 입자, 형광물질 또는 효소로 라벨링될 수 있다. 일 예로서, 상기 금속 입자는 금 입자일 수 있다.
보다 자세히 설명하면, 상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립의 컨쥬게이트 패드에 본 발명의 결합 분자는 검출 가능하게 표식될 수 있다. 생분자들을 표식시키는데 사용 가능한 다양한 방법들이 당업자에게 잘 알려져 있고, 본 발명의 범주 내에서 고려된다. 본 발명에서 사용될 수 있는 표식 종류의 예로는 효소, 방사성 동위원소, 콜로이드금속, 형광 화합물, 화학발광 화합물 및 생발광 화합물이 있다. 통상적으로 사용되는 표식들은 형광물질(가령, 플루레신, 로다민, 텍사스 레드 등), 효소(가령, 고추냉이 퍼옥시다아제, 베타-갈락토시다아제, 알칼리포스파타 아제), 방사성 동위원소(가령, 32P 또는 125I), 바이오틴, 디곡시게닌, 콜로이드 금속, 화학발광 또는 생발광 화합물(가령, 디옥세탄, 루미놀 또는 아크리디늄)을 포함한다. 효소 또는 바이오티닐기의 공유 결합법, 요오드화법, 인산화법, 바이오틴화법 등과 같은 표식 방법들이 당 분야에 잘 알려져 있다. 검출 방법들로는 오토라디오그래피, 형광 현미경, 직접 및 간접 효소반응 등이 있으며, 이에 제한되지는 않는다. 통상적으로 사용되는 검출 분석법으로는 방사성 동위원소 또는 비-방사성 동위원소 방법이 있다. 이들은 그 중에서도 웨스턴블롯팅, 오버레이-분석법, RIA(Radioimmuno Assay) 및 IRMA(ImmuneRadioimmunometric Assay), EIA(Enzyme Immuno Assay), ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), FIA(Fluorescent Immuno Assay) 및 CLIA(Chemioluminescent Immune Assay)이 있다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립에 있어서, 상기 검출은 육안, 광학, 전기화학, 또는 전기전도도에 의해 판독할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예로, 본 발명은 상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 포함하는, 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예로, 본 발명은 상기 결합 분자를 포함하는, 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 다른 일 구체예로, 상기 진단용 키트는 코로나바이러스의 뉴클레오캡시드 단백질(Nucleocapsid protein, N protein)에 결합하는 결합 분자를 추가로 포함할 수 있다. 상기 코로나바이러스는 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2), 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 인간 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 인간 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 인간 코로나바이러스 HKU1 및 중동호흡기증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 진단용 키트는 샘플과 상기 결합 분자를 접촉시킨 후, 반응을 확인하여 SARS-CoV-2의 존재 여부를 검출하는 데 사용될 수 있다. 상기 샘플은 대상의 가래, 침, 혈액, 땀, 폐 세포, 폐 조직의 점액, 호흡기 조직 및 타액으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 당업자에게 알려진 통상적인 방법으로 샘플 준비가 가능하다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예는
a) 상기 결합 분자; 및
b) 용기
를 포함하는 SARS-CoV-2로 인하여 발생하는 질환의 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 진단용 키트에 있어서, 키트 용기에는 고체 담체가 포함될 수 있다. 본 발명의 항체는 고체 담체에 부착될 수 있고, 이와 같은 고체 담체는 다공성 또는 비다공성, 평면 또는 비평면일 수 있다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예로, 본 발명은 상기 진단용 키트를 이용하여 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2)를 검출하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 일 구체예로, 본 발명은 상기 진단용 키트를 이용하여 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)을 진단하는 방법을 제공한다.
이하 본 발명에서 사용되는 용어를 다음과 같이 정의한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "결합 분자"는 키메라, 인간화 또는 인간 단일클론 항체와 같은 단일클론 항체를 포함하는 온전한(intact)이뮤노글로블린(immunoglobulin), 또는 항원에 결합하는 이뮤노글로블린인 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들면 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질(spike protein)과 결합에 있어서, 온전한(intact) 이뮤노글로블린과 경쟁하는 이뮤노글로블린 단편을 포함하는 가변성 도메인, 효소, 수용체, 단백질을 뜻한다. 구조와는 상관없이 항원-결합 단편은 온전한(intact) 이뮤노글로블린에 의해 인식된 동일한 항원과 결합된다. 항원-결합 단편은 항체의 아미노산 서열의 2개 이상의 연속기, 20개 이상의 연속 아미노산 잔기, 25개 이상의 연속 아미노산 잔기, 30개 이상의 연속 아미노산 잔기, 35개 이상의 연속 아미노산 잔기, 40개 이상의 연속 아미노산 잔기, 50개 이상의 연속 아미노산 잔기, 60개 이상의 연속 아미노산 잔기, 70개 이상의 연속 아미노산 잔기, 80개 이상의 연속 아미노산 잔기, 90개 이상의 연속 아미노산 잔기, 100개 이상의 연속 아미노산 잔기, 125개 이상의 연속 아미노산 잔기, 150개 이상의 연속 아미노산 잔기, 175개 이상 연속 아미노산 잔기, 200개 이상의 연속 아미노산 잔기, 또는 250개 이상의 연속 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
"항원-결합 단편"은 특히 Fab, F(ab'), F(ab')2, Fv, dAb, Fd, 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일-쇄 항체(scFv-Fc), 2가(bivalent) 단일-쇄 항체, 단일-쇄 파지 항체, 디아바디(diabody), 트리아바디, 테트라바디, 폴리펩티드로의 특정 항원에 결합하기에 충분한 이뮤노글로블린의 하나 이상의 단편을 함유하는 폴리펩티드 등을 포함한다. 상기 단편은 합성으로 또는 완전한 이뮤노글로블린의 효소적 또는 화학적 분해에 의해 생성되거나, 재조합 DNA 기술에 의해 유전공학적으로 생성될 수 있다. 생성 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"라는 용어는 용인 가능한 또는 편리한 투약 형태를 제조하기 위한 약물, 제제 또는 항체와 같은 활성 분자로 조합되는 불활성 물질을 의미한다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 비독성이거나, 적어도 독성이 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 이의 의도된 용도를 위해 허용될 수 있는 부형제이고, 약물, 제제 또는 결합 분제를 포함하는 제형화의 다른 성분과 양립할 수 있다.
본원에 기재된 상기 각 특징들은 조합되어 사용될 수 있으며, 상기 각 특징들이 특허청구범위의 서로 다른 종속항에 기재된다는 사실은 이들이 조합되어 사용될 수 없음을 나타내는 것은 아니다.
본 발명의 결합 분자는 SARS-CoV-2의 S 단백질에 대한 우수한 결합 능력을 가짐으로써 우수한 진단 효과를 나타내므로, 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)에 대한 신속한 진단에 매우 유용하다.
도 1은 본 발명의 일 구체예에 따른 진단 키트의 면역크로마토그래피 분석용 스트립의 작동 원리를 도시한 모식도이다. 도 1은 SARS-CoV-2의 표면 단백질 S에 결합하는 항체 Anti-S 가 탑재된 면역크로마토그래피 분석용 스트립에 관한 설명이다.
도 2는 SARS-CoV-2의 표면 단백질 S에 결합하는 항체 Anti-S 및 SARS-CoV-2 내에 존재하는 단백질 N에 결합하는 항체 Anti-N 두 항체가 탑재된 면역크로마토그래피 분석용 스트립에 관한 설명이다.
도 3a 내지 3r은 본 발명의 일 구체예에 따른 본 발명 항체 No. 1 내지 No. 18의 표면 플라스몬 공명(Surface Plasmon Resonance) 기술을 이용한 항원-항체 결합 친화도 측정 결과를 각각 나타낸 것이다.
이하 본 발명을 실시예를 통해 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예들은 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되지 않는다. 본 발명에서 인용된 문헌은 본 발명의 명세서에 참조로서 통합된다.
실시예 1: SARS-CoV-2 회복 환자의 혈액으로부터 PBMC 분리
혈액의 공여자는 2020년 SARS-CoV-2에 감염되었음을 확진 받고 치료를 통하여 더 이상 바이러스가 검출되지 않은 사람들을 대상으로 하였으며 공여자 선정과 채혈 과정은 임상시험심사 위원회(IRB)의 승인을 받고 이루어졌다. 공여자 선정 후 약 30㎖의 전혈을 채혈하여 Ficoll-PaqueTM PLUS(GE Healthcare) 방법을 사용하여 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)를 분리하였다. 분리된 PBMC는 인산 완충용액으로 2회 세척한 후, 냉동 배지(RPMI:FBS:DMSO = 5:4:1)로 1x107cells/㎖ 농도로 맞추어 액체 질소 탱크(Liquid Nitrogen Tank)에 보관하였다.
실시예 2: 항체 디스플레이된 파아지 라이브러리(phage library) 제작
실시예 1 에서 분리한 PBMC에서 Trizol Reagent(Invitrogen)를 이용하여 전체 RNA를 추출한 후 the SuperScriptTM III First-Strand cDNA synthesis system(Invitrogen, USA)을 이용하여 cDNA를 합성하였다.
합성된 cDNA로부터 항체 라이브러리의 제작은 선행문헌을 참고하였다(Barbas C. et. al. Phage display a laboratory manual. 2001. CSHL Press). 간단히 기술하면 합성된 cDNA로부터 High fidelity Taq polymerase(Roche)와 디제너레이티브 프라이머 세트(degenerative primer set)(IDT)을 이용하여 항체의 경쇄와 중쇄의 가변 영역을 PCR(polymerase chain reaction) 방법으로 증폭하였다. 분리된 경쇄와 중쇄의 가변영역 절편들이 무작위 조합으로 하나의 서열로서 연결되도록 overlap PCR 방법으로 scFv 형태의 유전자로 만들어 증폭한 후 제한 효소로 절단하고 1% 아가로스 겔 전기영동(agarose gel electrophoresis)과 gel extraction kit(Qiagen) 방법을 사용하여 scFv를 분리하였다. 파아지 벡터도 동일한 제한 효소로 절단하고 분리한 뒤 상기 scFv 유전자와 섞고 T4 DNA ligase(New England Biolab)를 넣은 후 16℃에서 12시간 이상 반응하였다. 반응액을 ER2738 수용성 세포(competent cell)과 섞고 전기천공(electroporation) 방법으로 형질 전환하였다. 형질 전환된 ER2738은 진탕 배양 후 VCSM13 helper phage(Agilent Technologies)를 넣고 12시간 이상 배양하였다.
실시예 3: 파아지 효소 면역분석을 이용한 선별
실시예 2 에서 제작한 파아지 라이브러리 배양액을 원심 분리하여 숙주세포를 제거한 뒤 4% PEG와 0.5M NaCl을 넣고 원심 분리하여 파아지를 침강 시키고 상층액을 제거하였다. 침강된 파아지를 1% BSA/TBS 에 희석하여 파아지 라이브러리를 얻고, 이후 다양한 SARS-CoV-2 Spike 단백질(이하, S 단백질)들에 대한 결합 및 해리 반응으로 패닝(panning)을 독립적으로 진행하여 SARS-CoV-2 S 단백질에 대한 결합능력을 갖는 scFv-파아지를 분리하였다. 예를 들어, SARS-CoV-2 S 단백질의 한 부분인 RBD(Receptor binding domain) 영역(residues N331 to V524 on S1 glycoprotein)이 결합된 ELISA 플레이트(plate)에 파아지 라이브러리를 넣고 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액을 제거한 뒤 ELISA 플레이트를 0.05% tween 20이 포함된 PBS로 세척한 뒤 60㎕ 의 0.1M glycine-HCl(pH 2.2)를 넣어 항원에 결합한 scFv-파아지를 떼어내고 2M Tris(pH 9.1)를 이용하여 중화 하였다. 중화된 scFv-파아지는 ER2738에 감염시킨 뒤 보조(helper) 파아지를 넣고 배양하여 다음 번 패닝에 사용하였다. 감염시킨 ER2738의 일부는 보조 파아지를 넣기 전에 LB 플레이트에 도말하여 다음날 콜로니(colony)를 얻었다.
각 패닝 마다 형성된 콜로니는 96-well deep well plate(Axygen)에 담긴 배양액에 넣어 진탕 배양하고 OD600이 0.7 이상의 값이 되었을 때 보조 파아지를 넣은 후 37℃에서 12시간 이상 진탕 배양하였다. 배양액을 원심 분리하여 숙주세포를 제거하고 scFv-파아지를 포함하는 상등액을 준비하였다.
준비된 scFv-파아지 상등액을 6% BSA/PBS 와 1:1 희석한 뒤 SARS-CoV-2 S 단백질들을 흡착 후 블로킹(blocking)한 96-웰 마이크로타이터 플레이트의 각 웰에 넣고 37℃에서 2시간 동안 정치하였다. 각 웰을 0.05% Tween 20가 포함된 PBS로 3회 세척한 뒤 HRP(겨자무과산화효소, horseradish peroxidase)가 표지 된 항 M13 항체를 넣고 37℃에서 1시간 동안 정치하였다. 각 웰을 0.05% Tween 20가 포함된 PBS로 3회 세척한 뒤 ABTS(2,2'-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt)를 넣고 405nm 에서의 흡광도를 측정하여 SARS-CoV-2 S 항원 단백질에 대한 결합력을 갖는 scFv-파아지를 선별하였다.
실시예 4: scFv-Fc 항체 분절의 결합능 확인
실시예 3에서 선별된 scFv-파아지는 이후 콜로니를 진탕 배양하여 DNA를 얻은 다음 항체 가변영역에 대한 서열을 분석하였다. 이 중에서 아미노산 서열로서 중복된 클론을 제외하고 선정된 scFv-파아지를 후보 항체 동물 세포 주에서의 발현능력을 평가하기 위하여 scFv 항체 분절(scFv-Fc) 형태로 벡터에 클로닝하였다. 형질도입 시약(Transfection reagent)을 이용하여 CHO 세포에 형질 감염시켜 발현시킨 후 그 배양액을 이용하여 scFv 항체 분절의 SARS-CoV-2의 S 단백질 2종에 대한 결합 능력을 ELISA로 확인하였다. 간단하게는, ELISA 플레이트에 SARS-CoV-2 S 단백질들을 붙이고 발현된 항체 분절을 넣어주었다. 결합하지 않은 항체를 0.05% Tween 20가 포함된 PBS로 씻어낸 후 HRP(겨자무과산화효소, horseradish peroxidase)가 결합된 항-인간 IgG 항체를 이용하여 항원과 결합한 항체 분절들을 선별 및 평가하였다.
그 결과, [표 3]의 17종 항체 분절들은 다른 코로나바이러스들(메르스 코로나바이러스(MERS-CoV), 사스코로나바이러스(SARS-CoV), HCoV 코로나바이러스)에 대해서는 결합하지 않았으며 (데이터 표시하지 않음), SARS-CoV-2의 S 단백질들에 대해서는 강한 결합력을 가지는 것을 확인하였다. 양성 대조군 항체로 SARS-CoV-2 S 단백질에 강하게 결합한다고 알려진 항체를 이용하였으며, 결합력은 양성 대조군 항체 대비하여 상대적인 값으로 결합력을 표기하였다(Xiaolong Tian et al., Emerg Microbes Infect. 2020 Feb 17;9(1):382-385). 하기 표 3에서 No.는 표 1, 2에 기재된 각 결합 분자의 No.와 동일한 결합 분자를 지칭한다.
No. 결합력 No. 결합력
1 1.48 11 2.09
2 1.43 12 2.08
3 1.37 13 2.51
4 1.47 14 1.43
5 2.86 15 1.7
6 2.29 16 1.45
7 1.82 17 1.46
8 1.4 18 0.85
9 1.42
10 1.47 양성 대조군 항체 1.00
상기 scFv-Fc 항체 분절의 유전정보를 이용하여 추가로 완전 인간 항체(Full IgG)로 변환하였다.
실시예 5: 표면 플라스몬 공명 기술을 이용한 항원-항체 결합친화도 결정
표면 플라스몬 공명(Surface Plasmon Resonance) 검정은 정반응 속도 상수 및 역반응 속도 상수의 역학적 측정에 의해 항체의 결합친화도를 결정한다.
실시예 4에서 scFv-Fc 항체 분절을 변환한 완전 인간 항체(Full IgG)의 SARS-CoV-2의 S RBD 단백질에 대한 결합친화도 값(KD)을 확인하기 위해 Biacore T200 장비로 SPR(표면 플라스몬 공명; Surface Plasmon Resonance) 분석을 진행하였다. 간단하게는 CM5 칩에 SARS-CoV-2 S 단백질들을 붙이고 HBS-EP 버퍼 (pH 7.4)를 사용하여 항체 분절을 연속적으로 희석하여 5개 농도를 만들었다. 각 농도를 SARS-CoV-2 S 단백질이 붙어있는 CM5 칩에 흘려준 다음, HBS-EP 버퍼를 주입하여 결합 및 해리 곡선을 생성해 이를 Biacore T200 콘트롤 소프트웨어, Biacore T200 이벨루에이션 소프트웨어를 통해 결합 친화도(KD)를 측정하였다(표 4 및 도 3a 내지 3r). 항체와 표적 항원 사이의 반응에 대한 평형 해리 상수 KD(M)는 반응 속도 상수로부터 다음의 등식에 의해 계산하였다: KD = Kd/Ka. 결합은 시간과 반응 속도 상수의 함수를 계산하여 기록한다. 하기 표 4에서 No.는 표 1, 2에 기재된 각 결합 분자의 No.와 동일한 결합 분자를 지칭한다.
표 4에 나타낸 바와 같이, No. 1 내지 No. 18 항체는 모두 SARS-CoV-2 S 항원에 대하여 높은 결합친화도를 나타내었다.
No. K a (1/Ms) K d (1/s) K D (M)
1 4.91.E+05 3.83.E-05 7.80.E-11
2 1.50.E+05 4.87.E-05 3.25.E-10
3 1.58.E+06 2.64.E-04 1.67.E-10
4 2.56.E+06 2.08.E-04 8.12.E-11
5 2.31.E+06 5.03.E-04 2.18.E-10
6 2.96.E+06 2.52.E-04 8.53.E-11
7 2.46.E+06 3.56.E-04 1.45.E-10
8 2.46.E+06 1.74.E-04 7.07.E-11
9 3.03.E+06 3.83.E-04 1.27.E-10
10 2.20.E+06 1.67.E-04 7.57.E-11
11 5.61.E+05 1.87.E-05 3.33.E-11
12 9.83.E+05 2.98.E-05 3.04.E-11
13 1.82.E+06 1.56.E-04 8.57.E-11
14 3.07.E+06 4.80.E-03 1.56.E-09
15 1.85.E+06 1.48.E-04 8.03.E-11
16 2.89.E+06 1.14.E-03 4.34.E-10
17 3.81.E+05 1.11.E-03 2.92.E-09
18 1.65.E+06 3.30.E-03 2.00.E-09
<110> CELLTRION, INC. <120> Binding Molecules Binding To A Spike Protein Of SARS-CoV-2 For Diagnosis Of COVID-19 <130> CPD2020030KR <160> 144 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 LC CDR1 <400> 1 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 LC CDR2 <400> 2 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 LC CDR3 <400> 3 Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Ile Thr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 HC CDR1 <400> 4 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 HC CDR2 <400> 5 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 HC CDR3 <400> 6 Ser Leu Val Ser Gly Arg Tyr Cys Ser Gly Val Thr Cys Tyr Ser Trp 1 5 10 15 Phe Asp Pro <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 LC CDR1 <400> 7 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 LC CDR2 <400> 8 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 LC CDR3 <400> 9 Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Ile Thr 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 HC CDR1 <400> 10 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 HC CDR2 <400> 11 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 HC CDR3 <400> 12 Ser Leu Val Ser Gly Arg Tyr Cys Ser Gly Val Thr Cys Tyr Ser Trp 1 5 10 15 Phe Asp Pro <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 LC CDR1 <400> 13 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 LC CDR2 <400> 14 Asp Asn Asp Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 LC CDR3 <400> 15 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Val Val 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 HC CDR1 <400> 16 Thr Ser Gly Met Gly Val Gly 1 5 <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 HC CDR2 <400> 17 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 18 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 HC CDR3 <400> 18 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 LC CDR1 <400> 19 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 LC CDR2 <400> 20 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 21 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 LC CDR3 <400> 21 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Gly Val 1 5 10 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 HC CDR1 <400> 22 Thr Ser Gly Met Gly Val Gly 1 5 <210> 23 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 HC CDR2 <400> 23 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 HC CDR3 <400> 24 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 25 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 5 LC CDR1 <400> 25 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 5 LC CDR2 <400> 26 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 5 LC CDR3 <400> 27 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Gly Arg 1 5 10 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 5 HC CDR1 <400> 28 Thr Ser Gly Val Gly Val Gly 1 5 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 5 HC CDR2 <400> 29 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 30 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 5 HC CDR3 <400> 30 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 31 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 LC CDR1 <400> 31 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 LC CDR2 <400> 32 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 LC CDR3 <400> 33 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Gly Val 1 5 10 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 HC CDR1 <400> 34 Thr Ser Gly Val Gly Val Gly 1 5 <210> 35 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 HC CDR2 <400> 35 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 36 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 HC CDR3 <400> 36 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 37 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 LC CDR1 <400> 37 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 LC CDR2 <400> 38 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 LC CDR3 <400> 39 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Gly Val 1 5 10 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 HC CDR1 <400> 40 Thr Ser Gly Met Gly Val Gly 1 5 <210> 41 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 HC CDR2 <400> 41 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 42 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 HC CDR3 <400> 42 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 43 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 LC CDR1 <400> 43 Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn Phe Val Ser 1 5 10 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 LC CDR2 <400> 44 Asp Asn Asp Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 LC CDR3 <400> 45 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Gly Val 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 HC CDR1 <400> 46 Thr Ser Gly Val Gly Val Gly 1 5 <210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 HC CDR2 <400> 47 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 48 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 HC CDR3 <400> 48 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 LC CDR1 <400> 49 Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 50 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 LC CDR2 <400> 50 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 LC CDR3 <400> 51 Gly Thr Trp Asp Asn Asn Leu Ser Ala Gly Val 1 5 10 <210> 52 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 HC CDR1 <400> 52 Thr Ser Gly Val Gly Val Gly 1 5 <210> 53 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 HC CDR2 <400> 53 Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser Leu Lys Thr 1 5 10 15 <210> 54 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 HC CDR3 <400> 54 Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 55 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 LC CDR1 <400> 55 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn 1 5 10 <210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 LC CDR2 <400> 56 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 LC CDR3 <400> 57 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Val Trp Val 1 5 10 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 HC CDR1 <400> 58 Arg Phe Ala Met His 1 5 <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 HC CDR2 <400> 59 Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 60 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 HC CDR3 <400> 60 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro Phe Phe 1 5 10 15 Asp Tyr <210> 61 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 LC CDR1 <400> 61 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His 1 5 10 <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 LC CDR2 <400> 62 Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 LC CDR3 <400> 63 Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Ile 1 5 10 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 HC CDR1 <400> 64 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 65 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 HC CDR2 <400> 65 Gly Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 HC CDR3 <400> 66 Val Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Gly Ser Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 67 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 LC CDR1 <400> 67 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His 1 5 10 <210> 68 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 LC CDR2 <400> 68 Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 LC CDR3 <400> 69 Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Val 1 5 10 <210> 70 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 HC CDR1 <400> 70 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 HC CDR2 <400> 71 Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 72 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 HC CDR3 <400> 72 Val Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 73 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 LC CDR1 <400> 73 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn 1 5 10 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 LC CDR2 <400> 74 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 LC CDR3 <400> 75 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val 1 5 10 <210> 76 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 HC CDR1 <400> 76 Arg Phe Ala Met His 1 5 <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 HC CDR2 <400> 77 Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 78 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 HC CDR3 <400> 78 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro Phe Phe 1 5 10 15 Asp Tyr <210> 79 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 LC CDR1 <400> 79 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Lys Ala Val Asn 1 5 10 <210> 80 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 LC CDR2 <400> 80 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 LC CDR3 <400> 81 Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val 1 5 10 <210> 82 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 HC CDR1 <400> 82 Ser Phe Ala Met His 1 5 <210> 83 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 HC CDR2 <400> 83 Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 84 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 HC CDR3 <400> 84 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro Phe Phe 1 5 10 15 Asp Tyr <210> 85 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 LC CDR1 <400> 85 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn 1 5 10 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 LC CDR2 <400> 86 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 87 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 LC CDR3 <400> 87 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val 1 5 10 <210> 88 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 HC CDR1 <400> 88 Arg Phe Ala Met His 1 5 <210> 89 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 HC CDR2 <400> 89 Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 90 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 HC CDR3 <400> 90 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro Phe Phe 1 5 10 15 Asp Tyr <210> 91 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 LC CDR1 <400> 91 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Lys Thr Val Asn 1 5 10 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 LC CDR2 <400> 92 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 LC CDR3 <400> 93 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val 1 5 10 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 HC CDR1 <400> 94 Asn Phe Ala Met His 1 5 <210> 95 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 HC CDR2 <400> 95 Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 96 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 HC CDR3 <400> 96 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro Phe Phe 1 5 10 15 Asp Tyr <210> 97 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 LC CDR1 <400> 97 Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 98 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 LC CDR2 <400> 98 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 99 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 LC CDR3 <400> 99 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 100 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 HC CDR1 <400> 100 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 HC CDR2 <400> 101 Gly Ile Asp Trp Asn Ser Gly Leu Ile Gly Tyr Ala Asp Ala Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 102 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 HC CDR3 <400> 102 Asp Met Gly Ser Thr Gly Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 LC CDR1 <400> 103 Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn 1 5 10 <210> 104 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 LC CDR2 <400> 104 Ser Asn Asn Leu Arg Pro Ser 1 5 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 LC CDR3 <400> 105 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 106 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 HC CDR1 <400> 106 Ser Asn Tyr Met Thr 1 5 <210> 107 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 HC CDR2 <400> 107 Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 108 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 HC CDR3 <400> 108 Asp Leu Val Val Tyr Gly Met Asp Val 1 5 <210> 109 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 LC variable region <400> 109 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 110 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 1 HC variable region <400> 110 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Val Ser Gly Arg Tyr Cys Ser Gly Val Thr Cys Tyr 100 105 110 Ser Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 111 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 LC variable region <400> 111 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 112 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 2 HC variable region <400> 112 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Val Ser Gly Arg Tyr Cys Ser Gly Val Thr Cys Tyr 100 105 110 Ser Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 113 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 LC variable region <400> 113 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Arg Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 114 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 3 HC variable region <400> 114 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser 20 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 115 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 4 LC variable region <400> 115 Glu Leu Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr 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Arg Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 119 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 LC variable region <400> 119 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 120 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 6 HC variable region <400> 120 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 121 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 LC variable region <400> 121 Glu Leu Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 122 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 7 HC variable region <400> 122 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 123 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 LC variable region <400> 123 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Phe Val Ser Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 124 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 8 HC variable region <400> 124 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 125 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 LC variable region <400> 125 Glu Leu Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Ser Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Asn Asn Leu 85 90 95 Ser Ala Gly Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 126 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 9 HC variable region <400> 126 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Thr Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 127 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 LC variable region <400> 127 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 128 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 10 HC variable region <400> 128 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro 100 105 110 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 129 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 LC variable region <400> 129 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Ser Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 130 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 11 HC variable region <400> 130 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Gly Ser Thr Tyr Tyr Phe Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 131 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 LC variable region <400> 131 Glu Leu Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 132 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 12 HC variable region <400> 132 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 133 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 LC variable region <400> 133 Glu Leu Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 134 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 13 HC variable region <400> 134 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro 100 105 110 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 135 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 LC variable region <400> 135 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Lys 20 25 30 Ala Val Asn Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 136 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 14 HC variable region <400> 136 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro 100 105 110 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 137 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 LC variable region <400> 137 Glu Leu Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 138 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 15 HC variable region <400> 138 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro 100 105 110 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 139 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 LC variable region <400> 139 Asp Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Lys 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 140 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 16 HC variable region <400> 140 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Pro 100 105 110 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 141 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 LC variable region <400> 141 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 142 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 17 HC variable region <400> 142 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Thr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Asp Trp Asn Ser Gly Leu Ile Gly Tyr Ala Asp Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ile Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Asp Met Gly Ser Thr Gly Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 143 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 LC variable region <400> 143 Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Ser Asn Asn Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly 85 90 95 Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 144 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> No. 18 HC variable region <400> 144 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Leu Val Val Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115

Claims (18)

  1. 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2) 표면의 스파이크 단백질(Spike protein, S protein)에 결합하는 항체 또는 그의 결합 단편을 포함하는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 조성물로서,
    상기 항체 또는 그의 결합 단편은 하기 1) 내지 18)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 항체 또는 그의 결합 단편임을 특징으로 하는 진단용 조성물:
    1) a) 서열번호 1로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 2로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 3으로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 4로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 5로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 6으로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    2) a) 서열번호 7로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 8로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 9로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 10으로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 11로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 12로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    3) a) 서열번호 13으로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 14로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 15로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 16으로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 17로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 18로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    4) a) 서열번호 19로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 20으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 21로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 22로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 23으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 24로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    5) a) 서열번호 25로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 26으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 27로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 28로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 29으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 30로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    6) a) 서열번호 31로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 32으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 33로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 34로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 35으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 36로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    7) a) 서열번호 37로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 38으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 39로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 40로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 41으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 42로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    8) a) 서열번호 43로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 44으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 45로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 46로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 47으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 48로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    9) a) 서열번호 49로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 50으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 51로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 52로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 53으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 54로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    10) a) 서열번호 55로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 56으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 57로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 58로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 59으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 60로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    11) a) 서열번호 61로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 62으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 63로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 64로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 65으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 66로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    12) a) 서열번호 67로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 68으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 69로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 70로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 71으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 72로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    13) a) 서열번호 73로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 74으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 75로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 76로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 77으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 78로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    14) a) 서열번호 79로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 80으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 81로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 82로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 83으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 84로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    15) a) 서열번호 85로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 86으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 87로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 88로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 89으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 90로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    16) a) 서열번호 91로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 92으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 93로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 94로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 95으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 96로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    17) a) 서열번호 97로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 98으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 99로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 100로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 101으로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 102로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체; 및
    18) a) 서열번호 103로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 104으로 기재되는 CDR2 영역, 및 서열번호 105로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 106로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 107로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 108로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 그의 결합 단편은 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질의 RBD(Receptor binding domain) 영역에 결합하는, 진단용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 그의 결합 단편은 하기 특성 중 어느 하나 이상을 갖는, 진단용 조성물:
    a) 1 x 10-8 M 이하의 평형 해리 상수(KD)로 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합함;
    b) 1 x 104 1/Ms 이상의 결합 상수(Ka)로 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합함; 또는
    c) 1 x 10-2 1/s 이하의 해리 상수(Kd)로 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합함.
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 그의 결합 단편은 하기 1) 내지 18)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 항체 또는 그의 결합 단편임을 특징으로 하는 진단용 조성물:
    1) a) 서열번호 109로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 110으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    2) a) 서열번호 111로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 112으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    3) a) 서열번호 113로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 114으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    4) a) 서열번호 115로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 116으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    5) a) 서열번호 117로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 118으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    6) a) 서열번호 119로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 120으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    7) a) 서열번호 121로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 122으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    8) a) 서열번호 123로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 124으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    9) a) 서열번호 125로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 126으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    10) a) 서열번호 127로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 128으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    11) a) 서열번호 129로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 130으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    12) a) 서열번호 131로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 132으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    13) a) 서열번호 133로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 134으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    14) a) 서열번호 135로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 136으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    15) a) 서열번호 137로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 138으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    16) a) 서열번호 139로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 140으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체;
    17) a) 서열번호 141로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 142으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체; 및
    18) a) 서열번호 143로 기재되는 경쇄 가변 영역; 및 b) 서열번호 144으로 기재되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
  6. 제1항 내지 제3항, 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그의 결합 단편은 scFv 절편, scFv-Fc 절편, Fab 절편, Fv 절편, 디아바디(diabody), 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인, 진단용 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항, 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그의 결합 단편에 추가적으로 하나 이상의 태그가 결합된 이뮤노컨쥬게이트를 포함하는 진단용 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제1항에 있어서,
    상기 진단용 조성물은 멸균 주사용액, 동결건조(lyophilized) 제형, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe) 용액제, 경구형 제형, 외용제 또는 좌제임을 특징으로 하는 진단용 조성물.
  14. 제1항 내지 제3항, 제5항 중 어느 한 항의 진단용 조성물을 포함하는 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 진단용 키트.
  15. 제14항에 있어서,
    코로나바이러스의 뉴클레오캡시드 단백질(Nucleocapsid protein, N protein)에 결합하는 항체 또는 그의 결합 단편을 추가로 포함함을 특징으로 하는, 진단용 키트.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 코로나바이러스는 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2), 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 인간 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 인간 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 인간 코로나바이러스 HKU1 및 중동호흡기증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 진단용 키트.
  17. 제14항의 진단용 키트를 이용하여 사스-코로나바이러스-2(SARS-CoV-2)를 검출하는 방법.
  18. 제14항의 진단용 키트를 이용하여 사스-코로나바이러스 감염증(COVID-19) 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
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