KR102165224B1 - 나트륨 글루코스 공동수송체 1의 억제제 - Google Patents

Abstract

나트륨 글루코스 공동수송체 1 (SGLT1)의 억제제, 그를 포함하는 조성물, 및 질환 및 장애, 예컨대 당뇨병을 치료하기 위한 그의 사용 방법이 개시되어 있다. 특정한 화합물은 하기 화학식 I의 화합물이고, 그의 다양한 치환기는 본원에 정의되어 있다.
<화학식 I>

Description

나트륨 글루코스 공동수송체 1의 억제제 {INHIBITORS OF SODIUM GLUCOSE COTRANSPORTER 1}

1. 발명의 분야

본 발명은 나트륨 글루코스 공동수송체 1 (SGLT1)을 억제하는데 사용될 수 있는 화합물, 그를 포함하는 조성물, 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.

2. 배경

제2형 당뇨병은 간의 글루코스 생산, 인슐린 분비 결핍 및/또는 말초 인슐린 저항성에 기인하는 고혈당증을 특징으로 하는 만성 질환이다. 최근, 상기 질환의 치료 방법을 발견하기 위한 상당한 노력이 지향되어 왔다. 한 비교적 새로운 접근법은 나트륨 글루코스 공동수송체 (SGLT)의 억제이고, 이는 혈류로부터 글루코스를 제거함으로써 혈액 글루코스 수준을 저하시킨다.

정상 조건하에, 혈장 글루코스는 신장 사구체에서 여과되고 건강한 성인에서는 거의 완전히 재흡수된다. 문헌 [Obermeier, M., et al., Drug Metabolism Disposition 38(3):405-414, 406 (2010)]. 그러한 재흡수는 두가지 나트륨-의존 글루코스 공동수송체: SGLT1 및 SGLT2에 의해 매개된다. SGLT1은 소화관, 심장 및 신장에서 발현되며, 한편 SGLT2는 주로 네프론의 근위 세관에서 발현된다. 상기 동일 문헌. 비록 수송체 둘 다를 억제하는 화합물이 기재되어 있긴 하지만, 연구는 주로 선택적 SGLT2 억제제를 발견하는데 집중되어 왔다. 이는, 부분적으로는, 소화관내 결함 SGLT1 수송체가 일부 글루코스 및 갈락토스 흡수불량 장애의 원인이라는 발견과, 따라서 SGLT1의 억제가 허용되지 않는 부작용을 수반할 것이라는 신념으로 인한 것이다. 상기 동일 문헌. 따라서, 다파글리플로진, 카나글리플로진 및 엠파글리플로진을 포함한, 현재 임상 시험에서의 대부분의 SGLT 억제제는 선택적 SGLT2 억제제이다.

그러나, 최근 임상 시험 결과는, SGLT1의 억제가 글루코스 재흡수의 억제에 의해서만 제공되는 것을 능가하여 확장되는 이점을 제공할 수 있음을 시사한다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 US-2011-0218159 참조. 특히, SGLT1의 억제가 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1) 수준을 증가시킬 수 있는 것으로 여겨진다. 예를 들어, 문헌 [Moriya, R., et al., Am J Physiol Endocrinol Metab 297: E1358-E1365 (2009)] 참조. 시타글립틴, 빌다글립틴 및 삭사글립틴을 포함한 다수의 주지된 당뇨병 약물은 GLP-1 분해의 원인 효소인 디펩티딜 펩티다제 IV (DPP-4)를 억제함으로써 작용한다.

3. 발명의 개요

본 발명은 나트륨 글루코스 공동수송체 1 (SGLT1)의 신규하고 강력한 억제제의 발견을 기반으로 한다. 특정한 억제제는 SGLT1의 선택적 억제제이다. 특정한 억제제는 낮은 전신 노출을 갖는다.

본 발명은, 부분적으로는, 하기 화학식의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 이량체 또는 삼량체를 포함하는 조성물 및 하기 화학식의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 이량체 또는 삼량체를 사용하는 방법에 관한 것이다:

상기 식에서, R₁은 수소 또는 임의로 치환된 C_1-10-알킬, C_1-5-시클로알킬 또는 5-원 헤테로사이클이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_1A에 의한 것이고; 각각의 R_1A는 독립적으로 아미노, 에스테르, 아미드, 티올, 카르복실산, 시아노, 할로, 히드록실, 또는 임의로 치환된 C_1-4-알콕시, C_1-5-시클로알킬 또는 5-원 헤테로사이클이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_1B에 의한 것이고; 각각의 R_1B는 독립적으로 C_1-4-알킬, 할로 또는 히드록실이고; n은 0, 1 또는 2이고; 각각의 R₂는 독립적으로 F 또는 OR_2A이고, 여기서 각각의 R_2A는 독립적으로 수소, C_1-4-알킬 또는 아실이고; 각각의 R₃은 독립적으로 할로, 히드록실, 또는 임의로 치환된 C_1-10-알킬 또는 C_1-10-알콕시이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_3A에 의한 것이고; 각각의 R_3A는 독립적으로 아미노, 에스테르, 아미드, 티올, 카르복실산, 시아노, 할로, 히드록실, 또는 임의로 치환된 C_1-4-알콕시, C_1-5-시클로알킬 또는 5-원 헤테로사이클이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_3B에 의한 것이고; 각각의 R_3B는 독립적으로 C_1-4-알킬, 아미노, 시아노, 할로 또는 히드록실이고; p는 0, 1 또는 2이고; 각각의 R₄는 독립적으로 R_4A, -N(R_4A)(R_4B), -OR_4A, -SR_4A, -S(O)R_4A, 또는 -S(O)₂R_4A이고; R_4A는 임의로 치환된 C_4-20-알킬 또는 4-20-원 헤테로알킬이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_4C에 의한 것이고, 이는 또 다른 R_4A 모이어티에 임의로 부착되어 이량체 또는 삼량체를 제공하고; R_4B는 수소 또는 R_4A이고; 각각의 R_4C는 독립적으로 아미노, 아미도, 아조, 카르보닐, 카르복실, 시아노, 포르밀, 구아니디노, 할로, 히드록실, 이미도, 이미노, 이소티오시아네이트, 니트릴, 니트로, 니트로소, 니트록시, 옥소, 술파닐, 술피닐, 술포닐, 티알, 티오시아네이트, 티온, 티오우레아, 우레아, 또는 X₁, X₁-L₁-X₂ 또는 X₁-L₁-X₂-L₂-X₃이고, 여기서 X₁, X₂ 및 X₃ 각각은 독립적으로 임의로 치환된 C_1-4-알킬, C_1-6-시클로알킬, 5- 또는 6-원 헤테로사이클 또는 아릴이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_4D에 의한 것이고, L₁ 및 L₂ 각각은 독립적으로 임의로 치환된 C_1-6-알킬 또는 1-10-원 헤테로알킬이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_4E에 의한 것이고; 각각의 R_4D는 독립적으로 R_4E이거나 하나 이상의 R_4E로 임의로 치환된 C_1-6-알킬이고; 각각의 R_4E는 독립적으로 아미노, 아미도, 아조, 카르보닐, 카르복실, 시아노, 포르밀, 구아니디노, 할로, 히드록실, 이미도, 이미노, 이소티오시아네이트, 니트릴, 니트로, 니트로소, 니트록시, 옥소, 술파닐, 술피닐, 술포닐, 티알, 티오시아네이트, 티온 또는 우레아이고; m은 1, 2 또는 3이다.

특정한 화합물은 하기 화학식의 화합물이다:

일부는 하기 화학식의 화합물이다:

추가로 본 발명은 본원에 개시된 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 심혈관 질환 및 장애, 대사 질환 및 장애, 장 질환 및 장애, 및 특정 유형의 암을 치료 및/또는 관리하기 위한 그의 사용 방법에 관한 것이다.

4. 도면의 간단한 설명
본 발명의 특정 측면은 도면을 참조하여 이해될 수 있다.
도 1A는 4일 동안 1일 1회 1.0 mg/kg ("mpk")의 용량으로 투여된 본 발명의 다섯가지 화합물이, 최종 투여 후 6시간에 글루코스-함유식이 공급된 후 18주령 수컷 C57/Blk6 마우스의 혈액 글루코스 수준에 미치는 영향을 도시한다. 실험에서의 각각의 동물에 대한 곡선하 면적은 도 1B에 도시되어 있다.
도 2는 각각의 마우스에 대해, 비히클과 비교하여, 혈장 tGLP-1에 미치는 화합물의 영향을 도시한다.
도 3은 마우스의 맹장 글루코스에 미치는 화합물의 영향을 도시한다.
도 4는 본 발명의 화합물 투여 후 15시간에 투여된 글루코스 시험투여(challenge) 수령 직후 글루코스 변동에서의 용량-의존 감소를 도시한다. 화합물은 45% 고지방식이 유지된 12주령 수컷 KKay 마우스에게 22일 동안 매일 투여되었다.
도 5A는 투여 26일 후 마우스의 HbA1c 수준에 미치는 화합물의 영향을 도시한다. 도 5B는 제0일 내지 제27일 사이에 마우스의 HbA1c 수준의 변화를 도시한다.
도 6은 투여 29일 후 마우스의 식후의 tGLP-1에 미치는 화합물의 영향을 도시한다.

5. 상세한 설명

본 발명은 나트륨 글루코스 공동수송체 1 (SGLT1)의 신규하고 강력한 억제제의 발견을 기반으로 한다.

5.1. 정의

달리 명시되지 않는 한, 용어 "알킬"은 1 내지 20개 (예를 들어, 1 내지 10개 또는 1 내지 4개)의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 알킬 모이어티는 "저급 알킬"로 지칭된다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 펜틸, 헥실, 이소헥실, 헵틸, 4,4-디메틸펜틸, 2,2,4-트리메틸펜틸, 노닐, 데실, 운데실 및 도데실을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 시클로알킬 모이어티는 모노시클릭 또는 멀티시클릭일 수 있고, 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 및 아다만틸을 포함한다. 알킬 모이어티의 추가의 예는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 부분 (예를 들어, 1-에틸-4-메틸-시클로헥실)을 갖는다. 용어 "알킬"은 포화 탄화수소뿐만 아니라 알케닐 및 알키닐 모이어티를 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "아릴"은 탄소 및 수소 원자로 이루어진 방향족 고리 또는 방향족 또는 부분 방향족 고리계를 의미한다. 아릴 모이어티는, 함께 결합되거나 융합된 다수의 고리를 포함할 수 있다. 특정한 아릴 모이어티는 그의 고리에 6 내지 12개의 탄소 원자를 포함하고, "C_6-12-아릴"로 지칭된다. 아릴 모이어티의 예는 안트라세닐, 아줄레닐, 비페닐, 플루오레닐, 인단, 인데닐, 나프틸, 페난트레닐, 페닐, 1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌, 및 톨릴을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "할로겐" 및 "할로"는 플루오린, 염소, 브로민, 및 아이오딘을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "헤테로알킬"은, 그의 탄소 원자 중 적어도 하나가 헤테로원자 (예를 들어, N, O 또는 S)로 대체된 알킬 모이어티를 지칭한다. 특정한 헤테로알킬 모이어티는 1-4-원, 1-10-원 및 4-20-원이고, 여기서 "원"의 수는 쇄를 구성하는 탄소 또는 헤테로원자의 수이다 (이 경우에, 각각 1-4개, 1-10개, 또는 4-20개). 예는 아세테이트, 아민, 아미드, 및 케톤 모이어티를 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "헤테로아릴"은, 그의 탄소 원자 중 적어도 하나가 헤테로원자 (예를 들어, N, O 또는 S)로 대체된 아릴 모이어티를 의미한다. 예는 아크리디닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조이소티아졸릴, 벤조이속사졸릴, 벤조퀴나졸리닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 푸릴, 이미다졸릴, 인돌릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 프탈라지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리미딜, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 테트라졸릴, 티아졸릴, 및 트리아지닐을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "헤테로사이클"은, 탄소, 수소 및 하나 이상의 헤테로원자 (예를 들어, N, O 또는 S)로 이루어진 방향족, 부분 방향족 또는 비-방향족 모노시클릭 또는 폴리시클릭 고리 또는 고리계를 지칭한다. 헤테로사이클은, 함께 융합되거나 결합된 다수의 (즉, 2개 이상의) 고리를 포함할 수 있다. 헤테로사이클은 헤테로아릴을 포함한다. 예는 벤조[1,3]디옥솔릴, 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥시닐, 시놀리닐, 푸라닐, 히단토이닐, 모르폴리닐, 옥세타닐, 옥시라닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피롤리디노닐, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로피리디닐, 테트라히드로피리미디닐, 테트라히드로티오페닐, 테트라히드로티오피라닐 및 발레로락트아밀을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "국소적으로 작용하는"은 불량한 전신 노출을 갖는 화합물을 지칭한다. 특정한 국소적으로 작용하는 화합물은 마우스, 래트 또는 인간에게 10 mg/kg의 용량으로 경구 투여되는 경우 250, 100, 50, 또는 10 nM 미만의 최대 혈장 농도 (C_max)를 갖는다. 전신 노출 (예를 들어, C_max)은 액체 크로마토그래피 질량 분광측정법을 포함한, 관련 기술분야에 주지된 방법에 의해 측정될 수 있다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "관리하다", "관리하는" 및 "관리"는 명시된 질환 또는 장애를 이미 앓았던 환자에서 질환 또는 장애의 재발을 방지하는 것, 및/또는 질환 또는 장애를 앓았던 환자가 완화 상태로 유지되는 시간을 연장시키는 것을 포함한다. 상기 용어는 질환 또는 장애의 역치, 진행 및/또는 지속기간을 조절하는 것, 또는 환자가 질환 또는 장애에 반응하는 방식을 변화시키는 것을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "제약상 허용되는 염"은 제약상 허용되는 무독성 산 또는 염기 (무기 산 및 무기 염기, 및 유기 산 및 유기 염기 포함)로부터 제조된 염을 지칭한다. 적합한 제약상 허용되는 염기 부가 염은 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연으로부터 제조된 금속 염, 또는 리신, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민 (N-메틸글루카민) 및 프로카인으로부터 제조된 유기 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적합한 무독성 산은 무기 산 및 유기 산, 예컨대 아세트산, 알긴산, 안트라닐산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포술폰산, 시트르산, 에텐술폰산, 포름산, 푸마르산, 푸로산, 갈락투론산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글리콜산, 브로민화수소산, 염산, 이세티온산, 락트산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 뮤신산, 질산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 인산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 술파닐산, 황산, 타르타르산, 및 p-톨루엔술폰산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 구체적 무독성 산은 염산, 브로민화수소산, 인산, 황산, 및 메탄술폰산을 포함한다. 따라서 구체적 염의 예는 히드로클로라이드 및 메실레이트 염을 포함한다. 다른 것은 관련 기술분야에 주지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 18^th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990)] 및 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1995)] 참조.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "방지하다", "방지하는" 및 "방지"는, 환자가 명시된 질환 또는 장애를 앓기 시작하기 전에 취하는, 질환 또는 장애의 중증도를 억제하거나 감소시키는 조치를 고려한다. 환언하면, 상기 용어는 예방을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 화합물의 "예방 유효량"은 질환 또는 병태, 또는 질환 또는 병태와 연관된 하나 이상의 증상을 방지하거나, 그의 재발을 방지하기에 충분한 양이다. 화합물의 "예방 유효량"은, 질환의 방지에 있어 예방적 이점을 제공하는, 단독의 또는 다른 작용제와 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "예방 유효량"은 전반적인 예방을 개선하거나 또 다른 예방제의 예방적 효능을 증진시키는 양을 포괄할 수 있다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "SGLT1 IC₅₀"은 하기 실시예에 기재된 시험관내 인간 SGLT1 억제 검정을 사용하여 결정된 화합물의 IC₅₀을 지칭한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "SGLT1 억제제"는 100 nM 미만의 SGLT1 IC₅₀을 갖는 화합물을 지칭한다. 특정한 SGLT1 억제제는 50, 25 또는 10 nM 미만의 SGLT1 IC₅₀을 갖는다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "SGLT2 IC₅₀"은 하기 실시예에 기재된 시험관내 인간 SGLT2 억제 검정을 사용하여 결정된 화합물의 IC₅₀을 지칭한다.

달리 명시되지 않는 한, 화학 구조 또는 모이어티를 기재하는데 사용되는 경우의 용어 "치환된"은, 그의 수소 원자 중 하나 이상이 원자, 화학 모이어티 또는 관능기, 예컨대 알콜, 알데히드, 알콕시, 알카노일옥시, 알콕시카르보닐, 알케닐, 알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, t-부틸), 알키닐, 알킬카르보닐옥시 (-OC(O)알킬), 아미드 (-C(O)NH-알킬- 또는 -알킬NHC(O)알킬), 아미디닐 (-C(NH)NH-알킬, -C(NR)NH₂), 아민 (1급, 2급 및 3급, 예컨대 알킬아미노, 아릴아미노, 아릴알킬아미노), 아로일, 아릴, 아릴옥시, 아조, 카르바모일 (-NHC(O)O-알킬- 또는 -OC(O)NH-알킬), 카르바밀 (예를 들어, CONH₂뿐만 아니라, CONH-알킬, CONH-아릴, 및 CONH-아릴알킬), 카르보닐, 카르복실, 카르복실산, 카르복실산 무수물, 카르복실산 클로라이드, 시아노, 에스테르, 에폭시드, 에테르 (예를 들어, 메톡시, 에톡시), 구아니디노, 할로, 할로알킬 (예를 들어, -CCl₃, -CF₃, -C(CF₃)₃), 헤테로알킬, 헤미아세탈, 이민 (1급 및 2급), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 케톤, 니트릴, 니트로, 산소 (즉, 옥소 기를 제공하는), 포스포디에스테르, 술피드, 술폰아미도 (예를 들어, SO₂NH₂), 술폰, 술포닐 (알킬술포닐, 아릴술포닐 및 아릴알킬술포닐 포함), 술폭시드, 티올 (예를 들어, 술프히드릴, 티오에테르) 및 우레아 (예를 들어 -NHCONH-알킬-) (이에 제한되지는 않음)로 치환되는, 그러한 구조 또는 모이어티의 유도체를 지칭한다. 특정한 실시양태에서, 용어 치환된은, 그의 수소 원자 중 하나 이상이 알콜, 알콕시, 알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, t-부틸), 아미드 (-C(O)NH-알킬- 또는 -알킬NHC(O)알킬), 아미디닐 (-C(NH)NH-알킬, -C(NR)NH₂), 아민 (1급, 2급 및 3급, 예컨대 알킬아미노, 아릴아미노, 아릴알킬아미노), 아릴, 카르바모일 (-NHC(O)O-알킬- 또는 -OC(O)NH-알킬), 카르바밀 (예를 들어, CONH₂뿐만 아니라, CONH-알킬, CONH-아릴, 및 CONH-아릴알킬), 할로, 할로알킬 (예를 들어, -CCl₃, -CF₃, -C(CF₃)₃), 헤테로알킬, 이민 (1급 및 2급), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 티올 (예를 들어, 술프히드릴, 티오에테르) 또는 우레아 (예를 들어 -NHCONH-알킬-)로 치환되는, 그러한 구조 또는 모이어티의 유도체를 지칭한다.

달리 명시되지 않는 한, 화합물의 "치료 유효량"은 질환 또는 병태의 치료 또는 관리에 있어 치료적 이점을 제공하거나, 질환 또는 병태와 연관된 하나 이상의 증상을 지연시키거나 최소화하기에 충분한 양이다. 화합물의 "치료 유효량"은 질환 또는 병태의 치료 또는 관리에 있어 치료적 이점을 제공하는, 단독의 또는 다른 치료제와 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "치료 유효량"은, 전반적인 요법을 개선하거나, 질환 또는 병태의 증상 또는 원인을 감소시키거나 없애거나, 또 다른 치료제의 치료 효능을 증진시키는 양을 포함할 수 있다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는, 환자가 명시된 질환 또는 장애를 앓는 동안 취하는, 질환 또는 장애의 중증도를 감소시키거나, 질환 또는 장애의 진행을 지연시키거나 둔화시키는 조치를 고려한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "포함한다"는 "을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다"와 동일한 의미를 갖는다. 유사하게, 용어 "예컨대"는 용어 "예컨대, ~이나, 이에 제한되지는 않는다"와 동일한 의미를 갖는다.

달리 명시되지 않는 한, 일련의 명사 바로 앞의 하나 이상의 형용사는 명사 각각에 적용되는 것으로서 간주되어야 한다. 예를 들어, 어구 "임의로 치환된 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴"은 "임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴"과 동일한 의미를 갖는다.

보다 큰 화합물의 부분을 형성하는 화학 모이어티는, 단일 분자로서 존재하는 경우에 그에 흔히 부여되는 명칭 또는 그의 라디칼에 흔히 부여되는 명칭을 사용하여 본원에 기재될 수 있음을 주목하여야 한다. 예를 들어, 용어 "피리딘" 및 "피리딜"은 다른 화학 모이어티에 부착된 모이어티를 기재하기 위해 사용되는 경우, 동일한 의미가 부여된다. 따라서, 두 어구 "X가 피리딜인 XOH" 및 "X가 피리딘인 XOH"는 동일한 의미가 부여되고, 화합물 피리딘-2-올, 피리딘-3-올 및 피리딘-4-올을 포괄한다.

또한, 구조식 또는 구조식의 일부의 입체화학이, 예를 들어, 볼드체 또는 파선으로 명시되지 않은 경우, 구조식 또는 구조식의 일부는 그의 모든 입체이성질체를 포함하는 것으로서 이해되어야 함을 주목하여야 한다. 더욱이, 그림에 불충족 원자가를 갖는 것으로 도시된 임의의 원자는 원자가를 충족시키기에 충분한 수소 원자에 부착되는 것으로 추정된다. 게다가, 하나의 파선에 평행한 하나의 실선으로 묘사된 화학 결합은, 원자가가 허용한다면, 단일 및 이중 (예를 들어, 방향족) 결합 둘 다를 포함한다.

5.2. 화합물

본 발명은, 부분적으로는, 하기 화학식의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 이량체 또는 삼량체를 포함하는 조성물 및 하기 화학식의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 이량체 또는 삼량체를 사용하는 방법에 관한 것이다:

상기 식에서, R₁은 수소 또는 임의로 치환된 C_1-10-알킬, C_1-5-시클로알킬 또는 5-원 헤테로사이클이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_1A에 의한 것이고; 각각의 R_1A는 독립적으로 아미노, 에스테르, 아미드, 티올, 카르복실산, 시아노, 할로, 히드록실, 또는 임의로 치환된 C_1-4-알콕시, C_1-5-시클로알킬 또는 5-원 헤테로사이클이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_1B에 의한 것이고; 각각의 R_1B는 독립적으로 C_1-4-알킬, 할로 또는 히드록실이고; n은 0, 1 또는 2이고; 각각의 R₂는 독립적으로 F 또는 OR_2A이고, 여기서 각각의 R_2A는 독립적으로 수소, C_1-4-알킬 또는 아실이고; 각각의 R₃은 독립적으로 할로, 히드록실, 또는 임의로 치환된 C_1-10-알킬 또는 C_1-10-알콕시이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_3A에 의한 것이고; 각각의 R_3A는 독립적으로 아미노, 에스테르, 아미드, 티올, 카르복실산, 시아노, 할로, 히드록실, 또는 임의로 치환된 C_1-4-알콕시, C_1-5-시클로알킬 또는 5-원 헤테로사이클이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_3B에 의한 것이고; 각각의 R_3B는 독립적으로 C_1-4-알킬, 아미노, 시아노, 할로 또는 히드록실이고; p는 0, 1 또는 2이고; 각각의 R₄는 독립적으로 R_4A, -N(R_4A)(R_4B), -OR_4A, -SR_4A, -S(O)R_4A 또는 -S(O)₂R_4A이고; R_4A는 임의로 치환된 C_4-20-알킬 또는 4-20-원 헤테로알킬이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_4C에 의한 것이고, 이는 또 다른 R_4A 모이어티에 임의로 부착되어 이량체 또는 삼량체를 제공하고; R_4B는 수소 또는 R_4A이고; 각각의 R_4C는 독립적으로 아미노, 아미도, 아조, 카르보닐, 카르복실, 시아노, 포르밀, 구아니디노, 할로, 히드록실, 이미도, 이미노, 이소티오시아네이트, 니트릴, 니트로, 니트로소, 니트록시, 옥소, 술파닐, 술피닐, 술포닐, 티알, 티오시아네이트, 티온, 티오우레아, 우레아, 또는 X₁, X₁-L₁-X₂ 또는 X₁-L₁-X₂-L₂-X₃이고, 여기서 X₁, X₂ 및 X₃ 각각은 독립적으로 임의로 치환된 C_1-4-알킬, C_1-6-시클로알킬, 5- 또는 6-원 헤테로사이클 또는 아릴이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_4D에 의한 것이고, L₁ 및 L₂ 각각은 독립적으로 임의로 치환된 C_1-6-알킬 또는 1-10-원 헤테로알킬이고, 이러한 임의적 치환은 하나 이상의 R_4E에 의한 것이고; 각각의 R_4D는 독립적으로 R_4E이거나 하나 이상의 R_4E로 임의로 치환된 C_1-6-알킬이고; 각각의 R_4E는 독립적으로 아미노, 아미도, 아조, 카르보닐, 카르복실, 시아노, 포르밀, 구아니디노, 할로, 히드록실, 이미도, 이미노, 이소티오시아네이트, 니트릴, 니트로, 니트로소, 니트록시, 옥소, 술파닐, 술피닐, 술포닐, 티알, 티오시아네이트, 티온 또는 우레아이고; m은 1, 2 또는 3이다.

본 발명의 한 실시양태는 하기 화학식의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:

특정한 화합물은 하기 화학식의 화합물이다:

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물은 단량체이다.

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물에서, R₁은 임의로 치환된 C_1-4-알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필)이다.

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물에서, n은 0이다. 다른 화합물에서, n은 1이다. 다른 화합물에서, n은 2이다.

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물에서, R₂는 OR_2A이다. 한 실시양태에서, 하나 이상의 R_2A는 수소이다. 한 실시양태에서, 하나 이상의 R_2A는 아실이다.

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물에서, R₃은 임의로 치환된 C_1-4-알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필)이다. 다른 화합물에서, R₃은 할로 (예를 들어, 클로로)이다. 다른 화합물에서, R₃은 임의로 치환된 C_1-4-알콕시이다.

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물에서, p는 1이다.

본원에 나타낸 화학식을 참조하면, 본 발명의 특정한 화합물에서, R₄는 R_4A이다. 다른 화합물에서, R₄는 -OR_4A이다. 한 실시양태에서, R_4A는 임의로 치환된 C_4-10-알킬이다. 또 다른 실시양태에서, R_4A는 임의로 치환된 4-10-원 헤테로알킬이다. 본 발명의 특정 실시양태에서, R_4A는 -C_1-10-알킬-N(R_4C)₂; -C_1-10-알킬-N(R_4C)C(O)R_4C; -C_1-10-알킬-C(O)N(R_4C)₂; -C_1-10-알킬-C(O)N(R_4C)-C_0-6-알킬-C(O)R_4C; -C_1-10-알킬-C(O)N(R_4C)-C_0-6-알킬-C(O)N(R_4C)₂; -C_1-10-알킬-N(R_4C)C(O)-C_0-6-알킬-N(R_4C)₂; 또는 -C_1-10-알킬-N(R_4C)C(O)-C_0-6-알킬-N(R_4C)C(O)R_4C이다.

본 발명의 특정한 화합물은 SGLT1 억제제이고, 50, 25 또는 10 nM 미만의 SGLT1 IC₅₀을 갖는다.

본 발명의 특정한 화합물은 소화관에서 국소적으로 작용하며, 낮은 전신 노출을 갖는다. 낮은 전신 노출은 보다 소수의 표적 이탈 부작용 및 SGLT2의 감소된 억제를 포함한 이점을 제공할 수 있다.

낮은 전신 노출의 예는 마우스에게 150 mg/kg의 용량으로 경구 투여되는 경우 3000 nM 미만의 최대 농도 (C_max); 마우스에게 50 mg/kg의 용량으로 경구 투여되는 경우 500 nM 미만의 C_max; 또는 마우스에게 15 mg/kg의 용량으로 경구 투여되는 경우 100 nM 미만의 C_max를 포함한다. 본 발명의 특정한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 마우스, 래트 또는 인간에게 10 mg/kg의 용량으로 경구 투여되는 경우 250, 100, 50, 또는 10 nM 미만의 혈장 C_max를 갖는다. 노출은 관련 기술분야에 주지된 기법인 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법을 사용하여 혈장 약물 함량을 측정함으로써 결정된다.

5.3. 합성

본 발명의 화합물은 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해, 본원에 기재된 일반적이고 구체적인 방법에 의해, 그리고 이들 방법의 개조 또는 변형에 의해 제조될 수 있고, 이는 통상의 기술자에 의해 쉽게 완수될 수 있다.

반응식 1은 본 발명의 화합물의 특정한 하위세트에 적용된 바와 같은 한 일반적 접근법을 나타낸다.

<반응식 1>

또 다른 일반적 접근법은 반응식 2로 나타내어진다:

<반응식 2>

반응식 1 및 2를 참조하면, 실시예에 개시된 구체적 화합물과 관련하여, 아릴 클로라이드의 헤크 반응에 관한 일반적 절차는 이하에 도시된다:

여기서, 마이크로파 바이알을 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (7, 1.0 당량), 헤크 올레핀 기질 (3.0 당량), Pd₂dba₃ (0.2 당량), 트리(tert-부틸)포스포늄 테트라플루오로보레이트 (0.8 당량), 디시클로헥실메틸아민 (3.0 당량), 및 N-메틸피롤리디논 (0.1 M)으로 충전한다. 반응물을 20분 동안 160℃에서 마이크로파에서 가열한다. 반응물을 과량의 EtOAc로 셀라이트 상에서 여과한다. 유기 층을 H₂O, 포화 수성 NaHSO₄, 및 염수로 세척한다. 이를 MgSO₄로 건조시키고, 진공중에서 농축한다. 플래시 크로마토그래피하여 헤크 부가물을 제공한다.

실시예에 개시된 구체적 화합물과 관련하여, 페놀의 알킬화에 관한 일반적 절차는 이하에 도시된다:

여기서, 질소하에 DMF 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-히드록시벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (33, 1 당량)와 K₂CO₃ (5 당량)의 혼합물에 알킬 할라이드 (1.5 당량)를 첨가한다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 다음에, Et₂O로 희석한다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축한다. 잔류물을 실리카겔 플래시 크로마토그래피에 의해 정제한다.

HATU 아미드 커플링에 관한 일반적 절차는 이하에 도시된다:

여기서, 카르복실산 기질 (1 당량), 아민 (1.5 당량), HATU (1.2 당량), 및 DIPEA (3 당량)를 CH₃CN (0.2 M) 중에서 합하고, 실온에서 1-16시간 동안 교반한다. 반응물을 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출한다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축한다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 동결건조 후 원하는 화합물을 수득한다.

알킬 메실레이트의 아민 친핵성 치환에 관한 일반적 절차는 이하에 도시된다:

여기서, 아민 (2.5 당량), 촉매적 아이오딘화나트륨, 및 알킬 메실레이트 (1.0 당량)를 이소프로판올/CH₃CN (1:1 v:v) 중에서 80℃로 가열한다. 완전한 전환 직후, 반응물을 실온으로 냉각하고, MeOH로 희석하고, 소듐 메톡시드를 첨가한다. 아세테이트 탈보호는 전형적으로 30분 내에 완료된다. 휘발성 물질을 진공중에서 제거하고, 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 동결건조 후 원하는 화합물을 수득한다.

1급 아민으로부터 우레아 형성에 관한 일반적 절차는 이하에 도시된다:

여기서, CH₂Cl₂ 중 알킬 아민 (1 당량) 및 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (1.2 당량)의 용액에 트리에틸아민 (1.4 당량)을 첨가한다. 반응물을 4시간 동안 교반한 다음에, 아민 (R₂NH, 1.4 당량) 및 DIPEA (1.5 당량)를 첨가한다. 반응물을 90분 동안 교반한 다음에, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축한다. 조 잔류물을 MeOH로 희석하고, 소듐 메톡시드를 첨가한다. 아세테이트 탈보호는 30분 내에 전형적으로 완료된다. 휘발성 물질을 진공중에서 제거하고, 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 동결건조 후 원하는 화합물을 수득한다.

1급 아민으로부터 구아니딘 형성에 관한 일반적 절차는 이하에 도시된다:

여기서, CH₃CN 중 알킬 아민 (1 당량 0.090 mmol) 및 3,5-디메틸-1H-피라졸-1-카르복스이미드아미드 니트레이트 (3.6 당량)의 용액에 DIPEA (4 당량)를 첨가한다. 반응물을 2시간 동안 70℃에서 가열한 다음에, 실온으로 냉각하고, 진공하에 농축한다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 1시간 동안 소듐 메톡시드로 처리한다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 동결건조 후 원하는 화합물을 수득한다.

5.4. 사용 방법

본 발명은 심혈관 질환 및 장애, 대사 질환 및 장애, 장 질환 및 장애, 및 특정 유형의 암을 치료 또는 관리하는 방법을 포괄한다.

본 발명의 한 실시양태는 심혈관 또는 대사 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 안전하고 효과적인 양의 본 발명의 SGLT1 억제제 (즉, 본원에 개시된 화합물)를 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 또는 대사 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 포괄한다. 특정한 심혈관 질환 및 장애는 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환, 울혈성 심부전, 당뇨병 (제1형 및 제2형), 혈액농축과 연관된 장애 (예를 들어, 혈색소증, 진성 다혈구혈증), 고혈당증, 고혈압, 저마그네슘혈증, 저나트륨혈증, 지질 장애, 비만, 신부전 (예를 들어, 1, 2, 또는 3기 신부전), 및 증후군 X를 포함한다. 특정한 환자는 제2형 당뇨병을 앓고 있거나 앓을 위험성이 있다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 변비-우세형 과민성 장 증후군 (IBS-C) 또는 만성 변비의 치료 또는 관리를 필요로 하는 환자에게 안전하고 효과적인 양의 본 발명의 SGLT1 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 IBS-C 또는 만성 변비를 치료 또는 관리하는 방법을 포괄한다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 암의 치료 또는 관리를 필요로 하는 환자에게 안전하고 효과적인 양의 본 발명의 SGLT1 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암을 치료 또는 관리하는 방법을 포괄한다. 특정한 유형의 암은 암세포가 증진된 SGLT 유전자 발현을 나타내는 것들이다. 예를 들어, 문헌 [Calvo, M.B., et al., Int. J. Endocrinology, vol. 2010, article ID 205357] 참조. 예는 췌장암 및 폐암을 포함한다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 보조적으로 또 다른 약물 또는 약리학적 활성 성분 ("치료제")과 함께 투여된다. 심혈관 또는 대사 질환 또는 장애의 치료에서, 제2 치료제의 예는 그의 치료에서 유용할 것으로 알려진 것들, 예컨대 항당뇨병제; 항고혈당제; 혈중지질저하제/지질 강하제; 항비만제; 항고혈압제 및 식욕 억제제를 포함한다.

항당뇨병제의 예는 비스구아니드 (예를 들어, 메트포르민, 펜포르민), 글루코시다제 억제제 (예를 들어, 아카르보스, 미글리톨), 인슐린 (인슐린 분비촉진제 및 인슐린 감작제 포함), 메글리티니드 (예를 들어, 레파글리니드), 술포닐우레아 (예를 들어, 글리메피리드, 글리부리드, 글리클라지드, 클로르프로파미드, 및 글리피지드), 비구아니드/글리부리드 조합 (예를 들어, 글루코반스(Glucovance)), 티아 졸리딘디온 (예를 들어, 트로글리타존, 로시글리타존, 및 피오글리타존), PPAR-알파 효능제, PPAR-감마 효능제, PPAR 알파/감마 이중 효능제, 글리코겐 포스포릴라제 억제제, 지방산 결합 단백질 (aP2)의 억제제, 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1) 또는 GLP-1 수용체의 다른 효능제, 및 디펩티딜 펩티다제 IV (DPP-4) 억제제를 포함한다.

메글리티니드의 예는 나테그릴니드 (노파르티스(Novartis)) 및 KAD1229 (PF/키세이(Kissei))를 포함한다.

티아졸리딘디온의 예는 미츠비시(Mitsubishi)의 MCC-555 (미국 특허 번호 5,594,016에 개시), 글락소-웰콤(Glaxo-Welcome)의 GL-262570, 엔글리타존 (CP-68722, 화이자(Pfizer)), 다르글리타존 (CP-86325, 화이자, 이사글리타존 (MIT/J&J), JTT-501 (JPNT/P&U), L-895645 (머크(Merck)), R-119702 (산쿄(Sankyo)/WL), NN-2344 (닥터 레디(Dr. Reddy)/NN), 또는 YM-440 (야마노우치(Yamanouchi))을 포함한다.

PPAR-알파 효능제, PPAR-감마 효능제 및 PPAR 알파/감마 이중 효능제의 예는 무라글리티자르, 펠리글리타자르, AR-HO39242 (아스트라(Astra)/제네카(Zeneca)), GW-409544 (글락소-웰콤), GW-501516 (글락소-웰콤), KRP297 (교린 머크(Kyorin Merck))뿐만 아니라 문헌 [Murakami et al, Diabetes 47, 1841-1847 (1998)], WO 01/21602 및 미국 특허 번호 6,653,314에 개시된 것들을 포함한다.

aP2 억제제의 예는 1999년 9월 7일에 출원된 미국 출원 일련 번호 09/391,053, 및 2000년 3월 6일에 출원된 미국 출원 일련 번호 09/519,079에 개시된 것들 (본원에 제시된 바와 같은 투여량을 사용)을 포함한다.

DPP-4 억제제의 예는 시타글립틴 (자누비아(Januvia)®, 머크), 빌다글립틴 (갈부스(Galvus)®, 노파르티스), 삭사글립틴 (온글리자(Onglyza)®, BMS-477118), 리나글립틴 (BI-1356), 두토글립틴 (PHX1149T), 게미글립틴 (LG 생명과학(LG Life Sciences)), 알로글립틴(SYR-322, 다케다(Takeda)), WO99/38501, WO99/46272, WO99/67279 (프로바이오드러그(PROBIODRUG)), WO99/67278 (프로바이오드러그), 및 WO99/61431 (프로바이오드러그)에 개시된 것들, NVP-DPP728A (1-[[[2-[(5-시아노피리딘-2-일)아미노]에틸]아미노]아세틸]-2-시아노-(S)-피롤리딘) (노파르티스) (문헌 [Hughes et al, Biochemistry, 38(36), 11597-11603, 1999]에 개시된 바와 같음), TSL-225 (트립토필-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실산 (문헌 [Yamada et al, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 8 (1998) 1537-1540]에 개시), 2-시아노피롤리드 및 4-시아노피롤리드 (문헌 [Ashworth et al, Bioorg. & Med. Chem. Lett., Vol. 6, No. 22, pp 1163-1166 and 2745-2748 (1996)]에 개시된 바와 같음), 미국 출원 일련 번호 10/899,641, WO 01/868603 및 미국 특허 번호 6,395,767에 개시된 화합물 (상기 참고문헌에 제시된 바와 같은 투여량을 사용)을 포함한다.

항고혈당제의 예는 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1), GLP-1(1-36) 아미드, GLP-1(7-36) 아미드, GLP-1(7-37) (미국 특허 번호 5,614,492에 개시된 바와 같음), 엑세나티드 (아밀린(Amylin)/릴리(Lilly)), LY-315902 (릴리), 리라글루티드 (노보노르디스크(NovoNordisk)), ZP-10 (질랜드 파르마슈티칼즈 아/에스(Zealand Pharmaceuticals A/S)), CJC-1131 (콘주켐 인크(Conjuchem Inc)), 및 WO 03/033671에 개시된 화합물을 포함한다.

혈중지질저하제/지질 강하제의 예는 MTP 억제제, HMG CoA 리덕타제 억제제, 스쿠알렌 신테타제 억제제, 피브르산 유도체, ACAT 억제제, 리폭시게나제 억제제, 콜레스테롤 흡수 억제제, Na⁺/담즙산 공동수송체 억제제, LDL 수용체 활성의 상향-조절제, 담즙산 격리제, 콜레스테롤 에스테르 전달 단백질 (예를 들어, CETP 억제제, 예컨대 CP-529414 (화이자) 및 JTT-705 (아크로스 파르마(Akros Pharma)), 및 니코틴산 및 그의 유도체를 포함한다.

MTP 억제제의 예는 미국 특허 번호 5,595,872, 미국 특허 번호 5,739,135, 미국 특허 번호 5,712,279, 미국 특허 번호 5,760,246, 미국 특허 번호 5,827,875, 미국 특허 번호 5,885,983 및 미국 특허 번호 5,962,440에 개시된 것들을 포함한다.

HMG CoA 리덕타제 억제제의 예는 메바스타틴 및 관련 화합물 (미국 특허 번호 3,983,140에 개시된 바와 같음), 로바스타틴 (메비놀린) 및 관련 화합물 (미국 특허 번호 4,231,938에 개시된 바와 같음), 프라바스타틴 및 관련 화합물 (예컨대, 미국 특허 번호 4,346,227에 개시), 심바스타틴 및 관련 화합물 (미국 특허 번호 4,448,784 및 4,450,171에 개시된 바와 같음)을 포함한다. 본원에서 이용될 수 있는 다른 HMG CoA 리덕타제 억제제는, 플루바스타틴 (미국 특허 번호 5,354,772에 개시), 세리바스타틴 (미국 특허 번호 5,006,530 및 5,177,080에 개시된 바와 같음), 아토르바스타틴 (미국 특허 번호 4,681,893, 5,273,995, 5,385,929 및 5,686,104에 개시된 바와 같음), 아타바스타틴 (니산(Nissan)/산쿄의 니스바스타틴 (NK-104)) (미국 특허 번호 5,011,930에 개시된 바와 같음), 비사스타틴 (시오노기-아스트라(Shionogi-Astra)/제네카 (ZD-4522)) (미국 특허 번호 5,260,440에 개시된 바와 같음), 및 관련 스타틴 화합물 (미국 특허 번호 5,753,675에 개시), 메발로노락톤 유도체의 피라졸 유사체 (미국 특허 번호 4,613,610에 개시된 바와 같음), 메발로노락톤 유도체의 인덴 유사체 (PCT 출원 WO 86/03488에 개시된 바와 같음), 6-[2-(치환된-피롤-1-일)-알킬)피란-2-온 및 그의 유도체 (미국 특허 번호 4,647,576에 개시된 바와 같음), 서얼(Searle)의 SC-45355 (3-치환된 펜탄디오산 유도체) 디클로로아세테이트, 메발로노락톤의 이미다졸 유사체 (PCT 출원 WO 86/07054에 개시된 바와 같음), 3-카르복시-2-히드록시-프로판-포스폰산 유도체 (프랑스 특허 번호 2,596,393에 개시된 바와 같음), 2,3-이치환된 피롤, 푸란 및 티오펜 유도체 (유럽 특허 출원 번호 0221025에 개시된 바와 같음), 메발로노락톤의 나프틸 유사체 (미국 특허 번호 4,686,237에 개시된 바와 같음), 옥타히드로나프탈렌 (예컨대 미국 특허 번호 4,499,289에 개시), 메비놀린 (로바스타틴)의 케토 유사체 (유럽 특허 출원 번호 0142146 A2에 개시된 바와 같음), 및 퀴놀린 및 피리딘 유도체 (미국 특허 번호 5,506,219 및 5,691,322에 개시된 바와 같음)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

혈중지질저하제의 예는 프라바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 세리바스타틴, 아타바스타틴, 및 ZD-4522를 포함한다.

HMG CoA 리덕타제를 억제하는데 유용한 포스핀산 화합물의 예는 GB 2205837에 개시된 것들을 포함한다.

스쿠알렌 신테타제 억제제의 예는 α-포스포노-술포네이트 (미국 특허 번호 5,712,396에 개시), 문헌 [Biller et al., J. Med. Chem. 1988, Vol. 31, No. 10, pp 1869-1871]에 개시된 것들 (이소프레노이드 (포스피닐-메틸)포스포네이트 포함)뿐만 아니라, 다른 공지된 스쿠알렌 신테타제 억제제 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,871,721 및 4,924,024 및 문헌 [Biller, S. A., et al., Current Pharmaceutical Design, 2, 1-40 (1996)]에 개시된 바와 같음)를 포함한다.

본원에서 사용하기에 적합한 추가의 스쿠알렌 신테타제 억제제의 예는 테르페노이드 피로포스페이트 (문헌 [P. Ortiz de Montellano et al., J. Med. Chem., 1977, 20, 243-249]에 개시), 파르네실 디포스페이트 유사체 A 및 프리스쿠알렌 피로포스페이트 (PSQ-PP) 유사체 (문헌 [Corey and Volante, J. Am. Chem. Soc. 1976, 98, 1291-1293]에 개시된 바와 같음), 포스피닐포스포네이트 (문헌 [McClard, R. W. et al., J.A.C.S., 1987, 109, 5544]에 의해 보고) 및 시클로프로판 (문헌 [Capson, T. L., PhD dissertation, June, 1987, Dept. Med. Chem. U of Utah, Abstract, Table of Contents, pp 16, 17, 40-43, 48-51, Summary]에 의해 보고)을 포함한다.

본 발명의 화합물과 조합하여 이용될 수 있는 피브르산 유도체의 예는 페노피브레이트, 겜피브로질, 클로피브레이트, 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클리노피브레이트 등, 프로부콜, 및 관련 화합물 (미국 특허 번호 3,674,836에 개시된 바와 같음) (프로부콜 및 겜피브로질이 바람직함), 담즙산 격리제, 예컨대 콜레스티르아민, 콜레스티폴 및 DEAE-세파덱스(Sephadex) (세콜렉스(Secholex), 폴리섹시드(Policexide))뿐만 아니라, 리포스타빌 (롱-프랑(Rhone-Poulenc)), 에이사이(Eisai) E-5050 (N-치환된 에탄올아민 유도체), 이마닉실 (HOE-402), 테트라히드로립스타틴 (THL), 이스티그마스타닐포스포릴콜린 (SPC, 로슈(Roche)), 아미노시클로덱스트린 (다나베 세이요쿠(Tanabe Seiyoku)), 아지노모토(Ajinomoto) AJ-814 (아줄렌 유도체), 멜리나미드 (스미토모(Sumitomo)), 산도즈(Sandoz) 58-035, 아메리칸 시아나미드(American Cyanamid) CL-277,082 및 CL-283,546 (이치환된 우레아 유도체), 니코틴산, 아시피목스, 아시프란, 네오마이신, p-아미노살리실산, 아스피린, 폴리(디알릴메틸아민) 유도체 (예컨대, 미국 특허 번호 4,759,923에 개시), 4급 아민 폴리(디알릴디메틸암모늄 클로라이드) 및 아이오넨 (예컨대, 미국 특허 번호 4,027,009에 개시), 및 다른 공지된 혈청 콜레스테롤 강하제를 포함한다.

본 발명의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 ACAT 억제제의 예는 문헌 [Drugs of the Future 24, 9-15 (1999)] (아바시미브(Avasimibe)); [Nicolosi et al., Atherosclerosis (Shannon, Irel). (1998), 137(1), 77-85]; [Ghiselli, Giancarlo, Cardiovasc. Drug Rev. (1998), 16(1), 16-30]; [Smith, C., et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. (1996), 6(1), 47-50]; [Krause et al., Editor(s): Ruffolo, Robert R., Jr.; Hollinger, Mannfred A., Inflammation: Mediators Pathways (1995), 173-98, Publisher: CRC, Boca Raton, Fla.]; [Sliskovic et al., Curr. Med. Chem. (1994), 1(3), 204-25]; [Stout et al., Chemtracts: Org. Chem. (1995), 8(6), 359-62]에 개시된 것들, 또는 TS-962 (다이쇼 파마슈티칼 캄파니 리미티드(Taisho Pharmaceutical Co. Ltd))를 포함한다.

혈중지질저하제의 예는 LD2 수용체 활성의 상향-조절제, 예컨대 MD-700 (다이쇼 파마슈티칼 캄파니 리미티드) 및 LY295427 (일라이 릴리(Eli Lilly))을 포함한다.

콜레스테롤 흡수 억제제의 예는 SCH48461 (쉐링-플라우(Schering-Plough)) 뿐만 아니라, 문헌 [Atherosclerosis 115, 45-63 (1995)] 및 [J. Med. Chem. 41, 973 (1998)]에 기재된 것들을 포함한다.

회장 Na⁺/담즙산 공동수송체 억제제의 예는 문헌 [Drugs of the Future, 24, 425-430 (1999)]에 개시된 바와 같은 화합물을 포함한다.

리폭시게나제 억제제의 예는 15-리폭시게나제 (15-LO) 억제제, 예컨대 벤즈이미다졸 유도체 (WO 97/12615에 개시된 바와 같음), 15-LO 억제제 (WO 97/12613에 개시된 바와 같음), 이소티아졸론 (WO 96/38144에 개시된 바와 같음), 및 15-LO 억제제 (문헌 [Sendobry et al., Brit. J. Pharmacology (1997) 120, 1199-1206], 및 [Cornicelli et al., Current Pharmaceutical Design, 1999, 5, 11-20]에 개시된 바와 같음)를 포함한다.

본 발명의 화합물과 조합하여 사용하기에 적합한 항고혈압제의 예는 베타 아드레날린성 차단제, 칼슘 채널 차단제 (L-유형 및 T-유형; 예를 들어, 딜티아젬, 베라파밀, 니페디핀, 암로디핀 및 미베프라딜), 이뇨제 (예를 들어, 클로로티아지드, 히드로클로로티아지드, 플루메티아지드, 히드로플루메티아지드, 벤드로플루메티아지드, 메틸클로로티아지드, 트리클로로메티아지드, 폴리티아지드, 벤즈티아지드, 에타크린산 티리크리나펜, 클로르탈리돈, 푸로세미드, 무솔리민, 부메타미드, 트리암테렌, 아밀로리드, 스피로놀락톤), 레닌 억제제, ACE 억제제 (예를 들어, 캅토프릴, 조페노프릴, 포시노프릴, 에날라프릴, 세라노프릴, 실라조프릴, 델라프릴, 펜토프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 리시노프릴), AT-1 수용체 길항제 (예를 들어, 로사르탄, 이르베사르탄, 발사르탄), ET 수용체 길항제 (예를 들어, 시탁센탄, 아트라센탄 및, 미국 특허 번호 5,612,359 및 6,043,265에 개시된 화합물), 이중 ET/AII 길항제 (예를 들어, WO 00/01389에 개시된 화합물), 중성 엔도펩티다제 (NEP) 억제제, 바소펩티다제 억제제 (이중 NEP-ACE 억제제) (예를 들어, 오마파트릴라트 및 게모파트릴라트) 및 니트레이트를 포함한다.

항비만제의 예는 베타 3 아드레날린성 효능제, 리파제 억제제, 세로토닌 (및 도파민) 재흡수 억제제, 티로이드 수용체 베타 약물, 5HT_2C 효능제 (예컨대, 아레나(Arena) APD-356); MCHR1 길항제 (예컨대, 시냅틱(Synaptic) SNAP-7941 및 다케다 T-226926), 멜라노코르틴 수용체 (MC4R) 효능제, 멜라닌-농축 호르몬 수용체 (MCHR) 길항제 (예컨대, 시냅틱 SNAP-7941 및 다케다 T-226926), 갈라닌 수용체 조절제, 오렉신 길항제, CCK 효능제, NPY1 또는 NPY5 길항제, NPY2 및 NPY4 조절제, 코르티코트로핀 방출 인자 효능제, 히스타민 수용체-3 (H3) 조절제, 11-베타-HSD-1 억제제, 아디노펙틴 수용체 조절제, 모노아민 재흡수 억제제 또는 방출제, 섬모 신경영양 인자 (CNTF, 예컨대 레게네론(Regeneron)에 의한 악소킨(AXOKINE)), BDNF (뇌-유래 신경영양 인자), 렙틴 및 렙틴 수용체 조절제, 칸나비노이드-1 수용체 길항제 (예컨대, SR-141716 (사노피(Sanofi)) 또는 SLV-319 (솔베이(Solvay))), 및/또는 식욕감퇴제를 포함한다.

베타 3 아드레날린성 효능제의 예는 AJ9677 (다케다/다이니폰(Dainippon)), L750355 (머크) 또는 CP331648 (화이자), 또는 다른 공지된 베타 3 효능제 (미국 특허 번호 5,541,204, 5,770,615, 5,491,134, 5,776,983 및 5,488,064에 개시)를 포함한다.

리파제 억제제의 예는 오를리스타트 및 ATL-962 (알리짐(Alizyme))를 포함한다.

세로토닌 (및 도파민) 재흡수 억제제 (또는 세로토닌 수용체 효능제)의 예는 BVT-933 (바이오비트룸(Biovitrum)), 시부트라민, 토피라메이트 (존슨 앤 존슨(Johnson ＆ Johnson)) 및 악소킨 (레게네론)을 포함한다.

티로이드 수용체 베타 화합물의 예는 티로이드 수용체 리간드, 예컨대 WO97/21993 (U. Cal SF), WO99/00353 (카로바이오(KaroBio)) 및 GB98/284425 (카로바이오)에 개시되어 있는 것들을 포함한다.

모노아민 재흡수 억제제의 예는 펜플루라민, 덱스펜플루라민, 플루복사민, 플루옥세틴, 파록세틴, 세르트랄린, 클로르펜테르민, 클로포렉스, 클로르테르민, 피실로렉스, 시부트라민, 덱스암페타민, 펜테르민, 페닐프로판올아민 및 마진돌을 포함한다.

식욕감퇴제의 예는 덱스암페타민, 펜테르민, 페닐프로판올아민, 및 마진돌을 포함한다.

5.5. 제약 제제

본 발명은 본 발명의 화합물을 임의로 하나 이상의 제2 활성 성분, 예컨대 섹션 5.4에서 상기 기재된 것들과 조합하여 포함하는 제약 조성물을 포괄한다.

특정 제약 조성물은 환자에게 경구 투여용으로 적합한 단일 단위 투여 형태이다. 경구 투여용으로 적합한 개별 투여 형태는 정제 (예를 들어, 저작성 정제), 캐플릿, 캡슐, 및 액체 (예를 들어, 향미첨가 시럽)를 포함한다. 이러한 투여 형태는 미리결정된 양의 활성 성분을 함유하고, 통상의 기술자에게 주지된 조제 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990)] 참조.

전형적인 경구 투여 형태는 통상적인 제약 배합 기법에 따라, 활성 성분(들)을 하나 이상의 부형제와 친밀 혼합물로 조합함으로써 제조된다. 정제 및 캡슐은, 이들의 투여 용이성으로 인해, 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 나타낸다. 목적하는 경우, 정제는 표준 수성 또는 비수성 기법에 의해 코팅될 수 있다. 이러한 투여 형태는 통상적인 조제 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 제약 조성물 및 투여 형태는, 활성 성분을 액체 담체, 미분 고체 담체, 또는 이들 둘 다와 균일하게 그리고 친밀하게 혼합한 다음에, 필요한 경우에, 생성물을 목적하는 형태로 성형함으로써 제조된다. 붕해제를 신속한 용해를 용이하게 하기 위해 고체 투여 형태에 혼입시킬 수 있다. 윤활제를 또한 투여 형태 (예를 들어, 정제)의 제조를 용이하게 하기 위해 혼입시킬 수 있다.

본 발명의 특정한 화합물은 그의 전달, 대사 및/또는 활성을 교정하는데 사용될 수 있는 중합체 및/또는 비드에 결합될 수 있다. 예를 들어, 특정 화합물은 R_4A를 통해 환자로의 장내 전달용으로 설계된 비드에 결합될 수 있다.

6. 실시예

6.1. ( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4- 클로로벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 ) 테트라히드로 -2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 7)의 제조

(5- 브로모 -2- 메틸페닐 )(4- 클로로페닐 ) 메탄온 ( 2 )의 제조. 2-메틸-4-브로모벤조산 (1, 26.0 g, 121 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (13.2 mL, 152 mmol)를 520 mL의 CH₂Cl₂에 현탁시켰다. 촉매량의 DMAP (0.5 mL)를 적가하고, 반응물이 균질해질 때까지 반응물을 실온에서 교반하였다. 휘발성 물질을 진공중에서 제거하였다. 조 물질을 200 mL의 CH₂Cl₂에 용해시키고, N,O-디메틸히드록실아민 히드로클로라이드 (23.6 g, 242 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0℃로 냉각하고, 트리에틸아민 (55 mL, 399 mmol)을 서서히 첨가하였다. 트리에틸아민의 첨가 완료 직후, 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 50% 포화 수성 NaHSO₄로 켄칭하였다. 수성 층을 CH₂Cl₂로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 생성된 바인렙(Weinreb) 아미드 (31.3 g, 99% 수율)를 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다.

바인렙 아미드 (31.3 g, 121 mmol)를 250 mL의 건조 THF에 용해시켰다. 4-클로로마그네슘 브로마이드 (Et₂O 중 1M, 182 mL, 182 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되지 않은 경우, 추가의 그리냐르(Grignard) 시약을 LCMS가 반응 완료를 나타낼 때까지 첨가하였다. 반응물을 포화 수성 NH₄Cl/염수의 (1:1 v:v) 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. (5-브로모-2-메틸페닐)(4-클로로페닐)메탄온 (2, 37.0 g, 99% 수율)을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다.

4- 브로모 -2-(4- 클로로벤질 )-1-메틸벤젠 ( 3 )의 제조. (5-브로모-2-메틸페닐)(4-클로로페닐)메탄온 (2, 37.0 g, 121 mmol) 및 트리에틸실란 (77.3 mL, 484 mmol)을 300 mL의 CH₃CN에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. BF₃OEt₂ (91 mL, 726 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 60℃로 가열하였다. GCMS를 사용하여 반응을 모니터링하였다. 완료 직후, 반응물을 0℃로 냉각하고, 500 mL 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 조 고체를 20% EtOAc/헥산에서 슬러리화하고, 실리카 플러그 상에서 통과시켜 잔류 염을 제거하였다. 여과물을 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체 (22.0 g, 62% 수율)로서 수득하였다.

(3-(4- 클로로벤질 )-4- 메틸페닐 )(( 3aS,5R,6S,6aS )-6-히드록시-2,2- 디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔 -5-일)메탄온 ( 4 )의 제조. 0℃에서 질소하에 THF (200 mL) 중 ((3aS,5R,6S,6aS)-6-히드록시-2,2-디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일)(모르폴리노)메탄온 (25.3 g, 92.6 mmol)의 용액에 tert-부틸마그네슘 클로라이드 (THF 중 1 M, 100 mL, 100 mmol)를 첨가하였다. 이 용액을 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 한편, 질소하에 THF (330 mL) 중 4-브로모-2-(4-클로로벤질)-1-메틸벤젠 (3, 32.9 g, 111.1 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각하였다. n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M, 48 mL, 120 mmol)을 시린지를 통해 적가하고, 10분 동안 교반하였다. 마그네슘 알콕시드 용액을 캐뉼라를 통해 -78℃에서 아릴리튬 용액으로 옮겼다. 반응물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 실온으로 가온하고, 60분 동안 교반하고, 포화 수성 NH₄Cl/염수의 1:1 (v:v) 용액 500 mL로 켄칭하였다. 수성 층을 300 mL의 EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 조 잔류물을 100 mL의 EtOAc에 용해시키고, 고형물 대부분이 용해될 때까지 가열하였다. 250 mL의 헥산을 첨가하고, 플라스크를 2시간 동안 빙조에서 칠링하였다. 백색 침전물을 여과해내고 20% EtOAc/헥산으로 세척하여, 표제 화합물을 백색 고체 (26.09 g, 70% 수율)로서 수득하였다.

( 3aS,5S,6R,6aS )-5-((S)-(3-(4- 클로로벤질 )-4- 메틸페닐 )(히드록시)- 메틸 )-2,2-디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올 ( 5 )의 제조. (3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)((3aS,5R,6S,6aS)-6-히드록시-2,2-디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일)메탄온 (4, 26.1 g, 64.9 mmol) 및 CeCl₃·7 H₂O (29.0 g, 77.9 mmol)를 520 mL의 MeOH에 현탁시켰다. 수소화붕소나트륨 (982 mg, 26.0 mmol, 10 mL의 1N 수성 NaOH에 용해시킴)을 첨가하고, 반응물은 약 5분에 걸쳐 서서히 용액으로 되었다. 또 다른 100 mg (2.6 mmol)의 수소화붕소나트륨을 첨가하여 반응이 완료되도록 강력히 추진하였다. 반응물을 10분 동안 교반하고, 500 mL의 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭하였다. MeOH의 대부분을 진공중에서 제거하고, 잔류 용매를 포화 수성 NH₄Cl:염수의 1:1 (v:v) 용액으로 희석하였다. 수성 층을 500 mL의 EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 조 생성물을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다 (26.2 g, 99% 수율, >10:1 d.r.).

( 3S,4R,5S,6S )-6-(3-(4- 클로로벤질 )-4- 메틸페닐 ) 테트라히드로 -2H-피란-2,3,4,5-테트라일 테트라아세테이트 ( 6 )의 제조. (3aS,5S,6R,6aS)-5-((S)-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)(히드록시)-메틸)-2,2-디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올 (5, 26.2 g, 64.8 mmol)을 150 mL H₂O 및 150 mL 빙초산에 현탁시켰다. 반응물을 7시간 동안 100℃로 가열하였다. 용매를 진공중에서 제거하고, 조 잔류물을 톨루엔으로부터 3회 공비혼합하였다. 조 물질을 밤새 고진공 상에 배치하고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

조 물질을 350 mL의 CH₃CN에 용해시켰다. 트리에틸아민 (57.5 mL, 414 mmol) 및 아세트산 무수물 (46.0 mL, 414 mmol), 이어서 촉매량의 DMAP (100 mg)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 약 200 mL의 CH₃CN을 진공중에서 제거하고, 잔여물을 600 mL의 EtOAc로 희석하였다. 유기 층을 50% 포화 수성 NaHSO₄로 2회 세척하였다. 산성 수성 층을 300 mL의 EtOAc로 역추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 조 잔류물을 톨루엔으로부터 2회 그리고 헥산으로부터 1회 공비혼합하여 표제 화합물을 용이하게 이송가능한 베이지색 고체 (34.0 g, 92% 수율, α와 β 아노머의 혼합물)로서 수득하였다.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4- 클로로벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 ) 테트라히드 로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 7 )의 제조. 트리메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (19.7 mL, 108.5 mmol)를 340 mL의 디옥산 중 (3S,4R,5S,6S)-6-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)테트라히드로-2H-피란-2,3,4,5-테트라일 테트라아세테이트 (6, 33.9 g, 63.8 mmol) 및 티오우레아 (9.71 g, 128 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 80℃로 가열하고, 그 시점에서 LCMS 분석에 의하면 반응이 지연된 것으로 나타났다. 추가의 TMSOTf (2 mL, 10.8 mmol)를 첨가하고, 반응물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각하였다. 메틸 아이오다이드 (11.9 mL, 191 mmol), 이어서 DIPEA (55.6 mL, 319 mmol)의 순차적 첨가를 수행하여, 반응물을 18시간 동안 교반하였다. 500 mL의 H₂O를 서서히 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 수성 층을 300 mL EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 포화 수성 NaHSO₄ 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 조 고체를 300 mL의 MeOH에서 슬러리화하였다. 초음파처리하여 연한 베이지색 침전물을 침전시키고, 이를 여과하고, 냉 MeOH로 세척하였다. 여과물을 농축하고, 슬러리 절차를 1회 더 반복하여 제공된 것을 제1 배치와 합하였다. 생성물을 연한 베이지색 고체로서 순수한 베타 아노머 (20.4 g, 60% 수율)로서 단리하였다.

6.2. N-(1-아미노-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 (11)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-((E)-4- 메톡시 -4- 옥소부트 -1-엔-1-일) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 8 )의 제 조. 마이크로파 바이알을 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (7, 1.04 g, 2.0 mmol), 메틸 부트-5-에노에이트 (600 mg, 6.0 mmol), Pd₂dba₃ (183 mg, 0.20 mmol), 트리(tert-부틸)포스포늄 테트라플루오로보레이트 (235 mg, 0.80 mmol), 디시클로헥실메틸아민 (1.27 mL, 6.0 mmol), 및 N-메틸피롤리디논 (10 mL)으로 충전하였다. 반응물을 20분 동안 160℃에서 마이크로파에서 가열하였다. 반응물을 과량의 EtOAc로 셀라이트 상에서 여과하였다. 유기 층을 H₂O, 포화 수성 NaHSO₄, 및 염수로 세척하였다. 이를 MgSO₄로 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 10-50% EtOAc/헥산)하여 헤크 부가물 8을 담황색 고체 (700 mg, 60% 수율)로서 수득하였다. 소량의 이성질체화된 올레핀이 ¹H NMR에서 관찰되었다.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4- 메톡시 -4- 옥소부틸 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸 티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 9 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-((E)-4-메톡시-4-옥소부트-1-엔-1-일)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (8, 1.74 g, 3.0 mmol)를 1:1 (v:v) THF/MeOH 용액에 용해시켰다. Pd/C (10% 습윤, 174 mg)를 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 40 psi에서 수소화하였다. 1H NMR에 의해 반응을 모니터링하였다. 완료 직후, 반응물을 과량의 MeOH로 셀라이트 상에서 여과하였다. 용매를 진공중에서 제거하여 생성물을 담황색 고체 (1.65 g, 94% 수율)로서 수득하였다.

4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 ) 테트라 히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄산 ( 10 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-메톡시-4-옥소부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (9, 1.65 g, 2.81 mmol)를 MeOH/THF/H₂O 용액 (25 mL, 2:1:2 부피비)에 용해시켰다. 수산화리튬 (674 mg, 28.1 mmol)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 포화 수성 NaHSO₄를 이용하여 pH = 1-2로 반응물을 산성화하였다. 산성 수성 층을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공중에서 농축하였다. 조 생성물을 헥산으로부터 1회 회전증발시켜 생성물을 백색의 이송가능한 고체 (1.27 g, 99% 수율)로서 수득하였다.

N-(1-아미노-2- 메틸 -1- 옥소프로판 -2-일)-4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 ( 11 )의 제조. 4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄산 (10, 157 mg, 0.35 mmol), 2-아미노-2-메틸프로판아미드 히드로클로라이드 (73 mg, 0.53 mmol), HATU (161 mg, 0.42 mmol), 및 DIPEA (0.15 mL, 1.06 mmol)를 DMF (2 mL) 중에서 합하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-100% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 동결건조 후 표제 화합물 11을 수득하였다 (75 mg, 40% 수율).

6.3. N-(2-메틸-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 (12)의 제조

2-아미노-2-메틸-1-(4-메틸피페라진-1-일)프로판-1-온 히드로클로라이드를 사용하여 아미드 11에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 12를 비스포르메이트 염으로서 수득하였다.

6.4. N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 (13)의 제조

2-아미노-2-메틸-1-(4-메틸피페라진-1-일)프로판-1-온 히드로클로라이드를 사용하여 아미드 11에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 13을 포르메이트 염으로서 수득하였다.

6.5. (S,R,R,S,R)-N,N'-((메틸아잔디일)비스(프로판-3,1-디일))비스(4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드) ( 14)의 제조

N1-(3-아미노프로필)-N1-메틸프로판-1,3-디아민 (0.5 당량)을 사용하여 아미드 11에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 14를 포르메이트 염으로서 수득하였다.

6.6. ( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(5- 아미노펜틸 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 16)의 제조

마이크로파 바이알을 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (7, 520 mg, 1.0 mmol), tert-부틸 펜트-4-엔-1-일카르바메이트 (555 mg, 3.0 mmol.), Pd₂dba₃ (183 mg, 0.20 mmol), 트리(tert-부틸)포스포늄 테트라플루오로보레이트 (232 mg, 0.80 mmol), 디시클로헥실메틸아민 (0.64 mL, 3.0 mmol), 및 N-메틸피롤리디논 (15 mL)으로 충전하였다. 반응물을 20분 동안 160℃에서 마이크로파에서 가열하였다. 반응물을 과량의 EtOAc로 셀라이트 상에서 여과하였다. 유기 층을 H₂O, 포화 수성 NaHSO₄, 및 염수로 세척하였다. 이를 MgSO₄로 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 10-50% EtOAc/헥산)하여 헤크 부가물 15를 담황색 고체 (360 mg, 54% 수율)로서 수득하였다.

헤크 생성물 (15, 360 mg, 0.63 mmol)을 10 mL의 MeOH에 용해시켰다. Pd/C (10% 습윤, 100 mg)를 첨가하고, 반응물을 4시간 동안 50 psi에서 수소화하였다. 완전한 전환 직후, 반응물을 셀라이트 상에서 여과하여 촉매를 제거하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 조 잔류물을 4 mL의 CH₂Cl₂에 용해시키고, 2 mL의 TFA를 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 표제 화합물 16 (260 mg, 85% 수율)을 수득하였다.

6.7. ( 2S,3R,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(5-( 비스((S)-2,3-디히드록시프로필)아미노 )펜틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 17)의 제조

(2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(5-아미노펜틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (16, 75 mg, 0.13 mmol) 및 (R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르브알데히드 (26 mg, 0.20 mmol)를 1 mL의 디클로로에탄에 용해시켰다. 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (55 mg, 0.26 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, 수성 상을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다.

조 잔류물을 1 mL H₂O 및 1 mL MeOH에 용해시켰다. 수산화리튬 (26 mg, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 1 mL의 THF를 첨가하여 출발 물질의 용해에 도움이 되도록 하였다. 16시간 후, 반응물을 H₂O로 희석하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다.

조 생성물을 1 mL의 MeOH에 용해시켰다. TFA (1 mL)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하고, 그 직후, 무시해도 될 정도의 반응이 일어났다. H₂O (0.5 mL)를 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 용매를 진공중에서 제거하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-100% CH₃CN /10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 동결건조 후 표제 화합물 17을 비스포르메이트 염으로서 수득하였다.

6.8. 2- 메틸 -2-(3-(5-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)펜틸)우레이도)프로판아미드 (18)의 제조

CH₂Cl₂ (4 mL) 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(5-아미노펜틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (16, 100 mg, 0.18 mmol) 및 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (43 mg, 0.22 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (35 μL, 0.25 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반한 다음에, 2-아미노-2-메틸프로판아미드 히드로클로라이드 (17 mg, 0.25 mmol) 및 DIPEA (23 μL, 0.27 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 90분 동안 교반한 다음에, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다.

이 물질을 2시간 동안 MeOH (2 mL) 중 NaOMe (50 μL, MeOH 중 25 wt%, 0.22 mmol)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 10-70% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 동결건조 후 10 mg의 표제 화합물 18을 백색 고체로서 수득하였다.

6.9. 1-(4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부틸)구아니딘 ( 20)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4- 아미노부틸 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 ) 테 트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 19 )의 제조. 헤크 반응을 위한 시약으로서 tert-부틸 부트-3-엔-1-일카르바메이트를 사용하여, (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(5-아미노펜틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (16)의 합성에 사용된 바와 동일 절차를 이용하였다.

1-(4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 ) 테트라히드로 -2H-피란-2-일)벤질)페닐)부틸)구아니딘 ( 20 )의 제조. CH₃CN 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-아미노부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (19, 50 mg, 0.090 mmol) 및 3,5-디메틸-1H-피라졸-1-카르복스이미드아미드 니트레이트 (66 mg, 0.33 mmol)의 용액에 DIPEA (62 μL, 0.35 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 70℃에서 가열한 다음에, 실온으로 냉각하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 1시간 동안 몇 방울의 NaOMe (MeOH 중 25 wt%)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-40% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 20을 포르메이트 염 (22 mg, 43% 수율)으로서 수득하였다.

6.10. 3-히드록시-2,2-디메틸-N-(4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부틸)프로판아미드 (21)의 제조

(2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-아미노부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (19, 55 mg, 0.10 mmol), 3-히드록시-2,2-디메틸프로판산 (18 mg, 0.15 mmol), HATU (57 mg, 0.15 mmol), 및 DIPEA (52 μL, 0.30 mmol)를 DMF (1 mL) 중에서 합하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 1시간 동안 몇 방울의 NaOMe (MeOH 중 25 wt%)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-40% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 21을 백색 고체 (22 mg, 41% 수율)로서 수득하였다.

6.11. ( 2S,3R,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4-((1-히드록시-2- 메틸프로판 -2-일)아미노)부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 24)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4- 히드록시부틸 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 22 )의 제조. 20 mL 마이크로파 바이알을 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (7, 520 mg, 1.0 mmol), 3-부테놀 (0.26 mL, 3.0 mmol), Pd₂dba₃ (183 mg, 0.20 mmol), 트리(tert-부틸)포스포늄 테트라플루오로보레이트 (232 mg, 0.80 mmol), 디시클로헥실메틸아민 (0.64 mL, 3.0 mmol), 및 10 mL의 N-메틸피롤리디논으로 충전하였다. 반응물을 20분 동안 160℃에서 마이크로파에서 가열하였다. 반응물을 과량의 EtOAc로 셀라이트 상에서 여과하였다. 유기 층을 H₂O, 포화 수성 NaHSO₄, 및 염수로 세척하였다. 이를 MgSO₄로 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (구배 10-80% EtOAc/헥산)하여 헤크 부가물 (257 mg)을 수득하였다. 이러한 정제된 생성물을 MeOH/THF의 1:1 (v:v) 혼합물 5 mL에 용해시켰다. Pd/C (10% 습윤, 26 mg)를 첨가하고, 5시간 동안 40 psi 수소압에 적용시켰다. 반응물을 과량의 MeOH로 셀라이트 상에서 여과하고, 진공중에서 농축하여 표제 화합물 22 (247 mg, 44% 수율)를 수득하였다.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(4- 메틸 -3-(4-(4-(( 메틸술포닐 ) 옥시 )부틸)- 벤질 )페닐) -6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 23 )의 제조. 메탄술포닐 클로라이드 (41 μL, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (80 μL, 0.58 mmol)을 5 mL CH₂Cl₂ 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-히드록시부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (22, 247 mg, 0.44 mmol)의 용액에 첨가하고, 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 1N 수성 HCl로 켄칭하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공중에서 농축하여 생성물 23 (279 mg, 99% 수율)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

( 2S,3R,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4-((1-히드록시-2- 메틸프로판 -2-일)아미노)부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 24 )의 제조. 2-아미노-2-메틸프로판-1-올 (23 mg, 0.25 mmol), 촉매적 아이오딘화나트륨, 및 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(4-메틸-3-(4-(4-((메틸술포닐)옥시)부틸)벤질)페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (65 mg, 0.10 mmol)를 64시간 동안 0.5 mL의 이소프로판올/CH₃CN (1:1 v:v)에서 80℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 2 mL의 MeOH로 희석하고, NaOMe (MeOH 중 25 wt%, 0.5 mL)를 첨가하였다. 아세테이트 탈보호를 30분 내에 완료하였다. 휘발성 물질을 진공중에서 제거하고, 조 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-100% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 생성물을 동결건조 후 비스포르메이트 염 (17 mg, 34% 수율)으로서 수득하였다.

6.12. (2S,3R,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-((1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일)아미노)부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 25)의 제조

2-아미노-2-(히드록실메틸)프로판-1,3-디올을 사용하여 아민 24에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 25를 비스포르메이트 염으로서 수득하였다.

6.13. 1-((4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부틸)아미노)시클로펜탄카르복스아미드 (26)의 제조

1-아미노시클로펜탄카르복스아미드를 사용하여 아민 24에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 0.5 당량의 포름산을 갖는 생성물 26을 수득하였다.

6.14. 1-((4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부틸)아미노)시클로펜탄카르복스아미드 (27)의 제조

3-아미노-2,2-디메틸프로판아미드를 사용하여 아민 24에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 1.5 당량의 포름산을 갖는 생성물 27을 수득하였다.

6.15. 테트라졸 유도체 (30 및 31)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-((E)-3- 시아노프로프 -1-엔-1-일) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 28 )의 제조. 5 mL 마이크로파 바이알을 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-클로로벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (7, 208 mg, 0.40 mmol), 부트-3-엔니트릴 (0.10 mL, 1.2 mmol), Pd₂dba₃ (37 mg, 0.040 mmol), 트리(tert-부틸)포스포늄 테트라플루오로보레이트 (46 mg, 0.16 mmol), 디시클로헥실메틸아민 (0.25 mL, 1.2 mmol), 및 2 mL의 N-메틸피롤리디논으로 충전하였다. 반응물을 20분 동안 160℃에서 마이크로파에서 가열하였다. 반응물을 과량의 EtOAc로 셀라이트 상에서 여과하였다. 유기 층을 H₂O, 포화 수성 NaHSO₄, 및 염수로 세척하였다. 이를 MgSO₄로 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (구배 10-80% EtOAc/헥산)하여 헤크 부가물 28 (140 mg, 64% 수율)을 수득하였다.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(3-(2H- 테트라졸 -5-일)프로필) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 29 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-((E)-3-시아노프로프-1-엔-1-일)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (28, 140 mg, 0.25 mmol)를 6 mL MeOH에 용해시켰다. Pd/C (10% 습윤, 14 mg)를 첨가하고, 5시간 동안 40 psi 수소압에 적용시켰다. 반응물을 과량의 MeOH로 셀라이트 상에서 여과하고, 진공중에서 농축하였다. 조 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다 (120 mg, 87% 수율). MS (ES+) [M+NH₄]⁺ = 569.

60 mg의 이러한 수소화 생성물 (0.108 mmol)을 톨루엔 (1.1 mL, 0.1 M)에 용해시켰다. 트리메틸실릴아지드 (43 μL, 0.324 mmol) 및 디부틸틴 옥시드 (8 mg, 0.0324 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 18시간 동안 90℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, H₂O로 켄칭하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 5-80% EtOAc/헥산 이어서 10% MeOH/CH₂Cl₂)하여 테트라졸 29 (32 mg, 50% 수율)를 수득하였다. MS (ES+) [M+NH₄]⁺ = 597.

2-(5-(3-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)프로필)-2H-테트라졸-2-일)-1-(4-메틸피페라진-1-일)에탄온 ( 30 ) 및 2-(5-(3-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)프로필)-1H-테트라졸-1-일)-1-(4-메틸피페라진-1-일)에탄온 ( 31 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(3-(2H-테트라졸-5-일)프로필)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (29, 32 mg, 0.0537 mmol)를 0.5 mL의 CH₃CN 중 2-클로로-1-(4-메틸피페라진-1-일)에탄온 (14 mg, 0.0644 mmol) 및 트리에틸아민 (22 μL, 0.161 mmol)과 합하였다. 반응물을 18시간 동안 60℃에서 교반하여, 두 위치이성질체의 혼합물을 수득하였다. 반응물을 H₂O로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-100% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하였다. 위치이성질체를 깔끔하게 분리하였다. 각각의 생성물 잔류물을 30분 동안 질소하에 MeOH (2 mL) 중 소듐 메톡시드 (0.10 mL, MeOH 중 25 wt%)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 반응물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-100% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 알킬화 테트라졸 위치이성질체 30 및 31 (비스포르메이트 염으로서 각각 4.3 mg 및 3.1 mg)을 수득하였다. 위치화학을 NOESY 상관관계에 의해 확인하였다.

1,2-이치환된 테트라졸 30:

1,3-이치환된 테트라졸 31:

6.16 ( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4- 히드록시벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 ) 테 트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (37)의 제조

(4-( 벤질옥시 )페닐)(5- 브로모 -2- 메틸페닐 )메탄올 ( 33 )의 제조. 질소하에 -78℃에서 THF (50 mL) 중 4-벤질옥시브로모벤젠 (2.63 g, 10 mmol)의 용액에 n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M, 4.4 mL, 11 mmol)을 서서히 첨가하였다. 반응물을 30분 동안 교반하였다. THF (4 mL에 더하여 1 mL 세정) 중 5-브로모-2-메틸벤즈알데히드 (32, 1.99 g, 10 mmol)를 서서히 첨가하였다. 반응물을 2시간에 걸쳐 약 0℃로 서서히 가온한 다음에, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭하고, 에테르로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 0-25% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 3.12 g (82% 수율)의 표제 화합물 33을 투명 오일로서 수득하였다.

(4-( 벤질옥시 )페닐)(5- 브로모 -2- 메틸페닐 )메탄올 ( 34 )의 제조. 질소하에 0℃에서 CH₂Cl₂ (40 mL) 중 (4-(벤질옥시)페닐)(5-브로모-2-메틸페닐)메탄올 (33, 3.12 g, 8.2 mmol) 및 트리에틸실란 (1.6 mL, 9.8 mmol)의 용액에 BF₃OEt₂ (1.4 mL, 11.4 mmol)를 서서히 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온에서 교반한 후, 이를 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, 30분 동안 교반하였다. 반응물을 에테르로 희석하고, 추가의 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 0-10% EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 2.71 g (91% 수율)의 생성물 34를 백색 고체로서 수득하였다.

(3-(4-( 벤질옥시 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )(( 3aS,5R,6S,6aS )-6-히드록시-2,2- 디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔 -5-일)메탄온 ( 35 )의 제조. -78℃에서 질소하에 THF (37 mL) 중 2-(4-(벤질옥시)벤질)-4-브로모-1-메틸벤젠 (34, 2.71 g, 7.4 mmol)의 용액에 n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M 용액 3.3 mL, 8.1 mmol)을 서서히 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 한편, 0℃에서 질소하에 THF (37 mL) 중 ((3aS,5R,6S,6aS)-6-히드록시-2,2-디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일)(모르폴리노)메탄온 (2.02 g, 7.4 mmol)의 용액에 tert-부틸마그네슘 클로라이드 (THF 중 1 M 용액 8.1 mL, 8.1 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 20분 동안 교반한 다음에, 캐뉼라에 의해 -78℃에서 아릴리튬 용액에 서서히 첨가하였다. 반응물을 3시간에 걸쳐 실온으로 점차로 가온한 다음에, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭하고, EtOAc로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 0-50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 2.44 g (70% 수율)의 생성물 35를 백색 발포체로서 수득하였다.

( 3S,4R,5S,6S )-6-(3-(4-( 벤질옥시 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 ) 테트라히드로 -2H-피란-2,3,4,5-테트라일 테트라아세테이트 ( 36 )의 제조. 0℃에서 MeOH 중 (3-(4-(벤질옥시)벤질)-4-메틸페닐)((3aS,5R,6S,6aS)-6-히드록시-2,2-디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일)메탄온 (35, 2.44 g, 5.1 mmol) 및 CeCl₃·7 H₂O (2.30 g, 6.2 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨 (78 mg, 1 mL 1 M 수성 NaOH 중 2.1 mmol)을 서서히 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 15분 및 실온에서 15분 동안 교반한 다음에, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭하였다. 반응물을 진공하에 부분 농축하고, EtOAc로 희석하고, H₂O로 세척하고, 염수로 2회 세척하고 (역추출과 함께), Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 진공하에 농축하여 2.4 g의 디올을 백색 고체로서 수득하였다.

이 물질을 22시간 동안 질소하에 100℃에서 1:1 AcOH/H₂O (20 mL)로 처리하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 진공하에 농축하고, 톨루엔으로 2회 공비혼합하고, 고진공하에 배치하였다. 잔류물을, DMAP (61 mg, 0.5 mmol)와 함께 0℃에서 질소하에 CH₂Cl₂ (25 mL)에 용해시키고, 트리에틸아민 (6.2 mL, 45 mmol), 이어서 아세트산 무수물 (3.8 mL, 40 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 18시간 동안 실온에서 교반한 다음에, 포화 수성 NaHCO₃ (60 mL)로 켄칭하고, 50분 동안 교반하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 0-50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 생성물 36의 α:β 아노머의 1:1 혼합물 2.80 g (90% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4- 히드록시벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 ) 테트라히 드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 37 )의 제조. (3S,4R,5S,6S)-6-(3-(4-(벤질옥시)벤질)-4-메틸페닐)테트라히드로-2H-피란-2,3,4,5-테트라일 테트라아세테이트 (36, 5.29 g, 8.8 mmol)를 1시간 동안 대기압에서 수소하에 THF (44 mL) 중 10% Pd/C (50% 습윤) (0.93 g, 0.44 mmol) 상에서 수소화하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공하에 농축하고, 톨루엔으로 2회 공비혼합하고, 고진공하에 배치하여 철저히 건조시켰다. 생성된 페놀을 추가의 정제 없이 다음 단계에 적용하였다. 이를 티오우레아 (2.01 g, 26 mmol)와 합하고, 디옥산 (44 mL)에 용해시켰다. TMSOTf (4.8 mL, 26 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 80℃에서 가열한 다음에 실온으로 냉각하였다. 메틸 아이오다이드 (2.2 mL, 35 mmol), 이어서 DIPEA (12 mL, 70 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반한 다음에, 포화 수성 NaHSO₄ (150 mL)로 켄칭하고, 2시간 동안 격렬하게 교반하고, EtOAc로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (구배 0-50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 3.88 g (88% 수율)의 생성물 37을 백색 발포체로서 수득하였다.

6.17. ( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(4- 클로로 -3-(4- 히드록시벤질 )페닐)-6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (38)의 제조

페놀 38을 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-히드록시벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (37)와 유사한 방식으로 제조하였다.

6.18. N-(2-메틸-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)부탄아미드 (40)의 제조

4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 ) 테트라 히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)부탄산 ( 39 )의 제조. 질소하에 DMF (8 mL) 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-히드록시벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (37, 2.01 g, 4.0 mmol)와 K₂CO₃ (2.76 g, 20 mmol)의 혼합물에 메틸 4-아이오도부타노에이트 (0.81 mL, 6.0 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 다음에, Et₂O로 희석하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 플래시 크로마토그래피 (구배 0-50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 2.18 g (90% 수율)의 에스테르를 백색 발포체로서 수득하였다.

이 물질을 1시간 동안 60℃에서 질소하에 MeOH (14 mL) 및 THF (29 mL) 중LiOH (29 mL, 1 M 수성, 29 mmol)로 처리하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 1 M 수성 NaHSO₄에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 H₂O 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 1.71 g (100% 수율)의 산 39을 수득하였다.

N-(2- 메틸 -1-(4- 메틸피페라진 -1-일)-1- 옥소프로판 -2-일)-4-(4-(2- 메틸 -5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)부탄아미드 ( 40 )의 제조. 4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)부탄산 (39, 1.47 g, 3.2 mmol), 2-아미노-2-메틸-1-(4-메틸피페라진-1-일)프로판-1-온 (1.07 g, 2 HCl 염, 4.1 mmol), HATU (1.45 g, 3.8 mmol), 및 DIPEA (2.2 mL, 13 mmol)를 CH₃CN (32 mL) 중에서 합하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물에 DMAP (39 mg, 0.32 mmol), DIPEA (3.3 mL, 19 mmol), 및 아세트산 무수물 (1.5 mL, 16 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반한 다음에, 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, 1시간 동안 교반하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (구배 2-10% MeOH/CH₂Cl₂)에 의해 정제하여 2.27 g (94% 수율)의 트리아세테이트를 황색 발포체로서 수득하였다.

이 물질을 18시간 동안 질소하에 MeOH (30 mL) 중 소듐 메톡시드 (0.55 mL, MeOH 중 25 wt%, 2.4 mmol)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 C18 플러그 (0-25-75% MeOH/H₂O)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 1.40 g (74% 수율)의 표제 화합물 40을 백색 고체로서 수득하였다.

6.19. 1-(4-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)부탄아미도)시클로펜탄카르복스아미드 (41)의 제조

4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)부탄산 (39, 46 mg, 0.10 mmol), 1-아미노시클로펜탄카르복스아미드 (26 mg, 0.20 mmol), HATU (57 mg, 0.15 mmol), 및 DIPEA (52 μL, 0.30 mmol)를 DMF (0.5 mL) 중에서 합하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 물질을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 20-60% CH₃CN /10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 35 mg (61% 수율)의 아미드 41을 백색 고체로서 수득하였다.

6.20. 4-(4-(2- 클로로 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 ) 테트 라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)-N-(1-히드록시-2-메틸프로판-2-일)부탄아미드 (42)의 제조

2-아미노-2-메틸프로판-1-올을 사용하여 아미드 41에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 42를 수득하였다.

6.21. 2- 메틸 -2-(2-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)아세트아미도)프로판아미드 (43)의 제조

2-아미노-2-메틸프로판아미드를 사용하여 아미드 41에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 43을 수득하였다.

6.22. 1-(1-히드록시-2-메틸프로판-2-일)-3-(2-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)에틸)우레아 (45)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(2- 아미노에톡시 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 44 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-히드록시벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (37, 0.50 g, 1.0 mmol), tert-부틸 (2-브로모에틸)카르바메이트 (0.62 g, 3.0 mmol), 및 K₂CO₃ (0.64 g, 5.0 mmol)를 질소하에 DMF (2 mL) 중에서 합하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 추가의 tert-부틸 (2-브로모에틸)카르바메이트 (0.62 g, 3.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 추가의 3일 동안 교반하였다. 반응물을 Et₂O로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (구배 0-50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 0.37 g (58% 수율)의 알킬화 생성물을 백색 발포체로서 수득하였다.

약간의 이 물질 (0.34 g, 0.53 mmol)을 2시간 동안 CH₂Cl₂ (4.5 mL) 중 TFA (0.5 mL)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하였다. 조 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 진공하에 농축하여 0.30 g (100% 수율)의 아민 44를 황갈색 발포체로서 수득하였다.

1-(1-히드록시-2- 메틸프로판 -2-일)-3-(2-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)에틸)우레아 ( 45 )의 제조. CH₂Cl₂ (1 mL) 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(2-아미노에톡시)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (44, 55 mg, 0.10 mmol) 및 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (24 mg, 0.12 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (19 μL, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반한 다음에, 2-아미노-2-메틸프로판-1-올 (19 μL, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90분 동안 교반한 다음에, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다.

이 물질을 2시간 동안 MeOH (1 mL) 중 소듐 메톡시드 (23 μL, MeOH 중 25 wt%, 0.10 mmol)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 10-70% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 21 mg (40% 수율)의 우레아 45를 백색 고체로서 수득하였다.

6.23. 1-(2-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)에틸)구아니딘 ( 46)의 제조

CH₃CN 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(2-아미노에톡시)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (44, 31 mg, 0.057 mmol) 및 3,5-디메틸-1H-피라졸-1-카르복스이미드아미드 니트레이트 (23 mg, 0.11 mmol)의 용액에 DIPEA (30 μL, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 60℃에서 가열한 다음에, 실온으로 냉각하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 1시간 동안 몇 방울의 NaOMe (MeOH 중 25 wt%)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-40% CH₃CN /10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 우레아 46 (9 mg, 34% 수율)을 포르메이트 염으로서 수득하였다.

6.24. ( 2S,3R,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(3-((1-히드록시-2- 메틸프로판 -2-일)아미노)프로폭시)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 (49)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(3-( 벤질옥시 ) 프로폭시 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 47 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-히드록시벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (37, 2.01 g, 4.0 mmol), ((3-브로모프로폭시)메틸)벤젠 (1.41 mL, 8.0 mmol), Bu₄NI (148 mg, 0.40 mmol), 및 K₂CO₃ (2.76 g, 20 mmol)를 질소하에 DMF (8 mL) 중에서 합하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 Et₂O로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (구배 0-50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 알킬화 생성물 47을 유리질 고체 (2.36 g, 91% 수율)로서 수득하였다.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(4- 메틸 -3-(4-(3-(( 메틸술포닐 ) 옥시 ) 프로폭시 ) 벤질 ) 페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 48 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(3-(벤질옥시)프로폭시)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (47, 2.36 g, 3.6 mmol)를 18시간 동안 대기압에서 수소하에 THF (36 mL) 중 10% Pd/C (50% 습윤, 0.38 g, 0.18 mmol) 상에서 수소화하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (구배 0-70% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 상응하는 알콜을 백색 고체 (1.90 g, 93% 수율)로서 수득하였다.

이 물질을 질소하에 CH₂Cl₂ (34 mL)에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.61 mL, 4.4 mmol), 이어서 메탄술포닐 클로라이드 (0.32 mL, 4.1 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 이를 EtOAc로 희석하고, 1 M 수성 HCl, H₂O, 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 메실레이트 48을 백색 발포체 (2.20 g, 100% 수율)로서 수득하였다.

( 2S,3R,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(3-((1-히드록시-2- 메틸프로판 -2-일)아미노) 프로폭시 )벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 49 )의 제조. (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(4-메틸-3-(4-(3-((메틸술포닐)옥시)프로폭시)벤질)페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (48, 1.23 g, 1.9 mmol) 및 2-아미노-2-메틸프로판-1-올 (0.52 g, 5.8 mmol)을 질소하에 이소프로필알콜 (3.9 mL) 및 CH₃CN (3.9 mL)에 용해시켰다. 반응물을 90℃에서 밤새 가열한 다음에, 실온으로 냉각하였다. 이를 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (구배 0-10% [10% NH₄OH/MeOH]CH₂Cl₂)에 의해 정제하여 1.04 g의 보호된 당을 백색 고체로서 수득하였다.

이 물질을 질소하에 MeOH (16 mL)에 용해시키고, 2시간 동안 NaOMe (0.19 mL, MeOH 중 25 wt%, 0.8 mmol)로 처리하였다. 반응물을 진공하에 농축하고, 잔류물을 C18 플러그 (0-25-80% MeOH/H₂O)에 의해 정제하였다. 물질을 정제용 HPLC (C18 30 x 250 mm 칼럼, 5-80% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 다시 정제하고, H₂O에 용해시키고, 동결건조시켜 아미노알콜 49의 포르메이트 염을 백색 고체 (710 mg, 68% 수율)로서 수득하였다.

6.25. (2S,3R,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(3-((3-(디메틸아미노)-2,2-디메틸프로필)아미노)프로폭시)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 50)의 제조

(2S,3S,4R,5S,6R)-2-(4-메틸-3-(4-(3-((메틸술포닐)옥시)프로폭시)벤질)페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (48, 1.28 g, 2.0 mmol) 및 N¹,N¹,2,2-테트라메틸프로판-1,3-디아민 (0.64 mL, 4.0 mmol)을 질소하에 이소프로필알콜 (4 mL) 및 CH₃CN (4 mL)에 용해시켰다. 반응물을 90℃에서 밤새 가열한 다음에, 실온으로 냉각하였다. MeOH (8 mL) 및 소듐 메톡시드 (0.69 mL, MeOH 중 25 wt%, 3.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반한 다음에, 아세트산으로 중화시키고, 진공하에 농축하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 250 mm 칼럼, 5-60% CH₃CN /10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분 및 C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-92% MeOH/H₂O (0.1% 포름산 함유), 45 mL/분)에 의해 2회 정제하고, 동결건조시켜 생성물 50의 포르메이트 염을 백색 고체 (0.52 g, 44% 수율)로서 수득하였다.

6.26. 2,2-디메틸-3-((3-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)프로필)-아미노)프로판아미드 (51)의 제조

3-아미노-2,2-디메틸프로판아미드를 사용하여 아미드 50에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 51을 수득하였다. 물질을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-60% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 포르메이트 염 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.

6.27. 1-((2-(4-(2- 메틸 -5-(( 2S,3R,4R,5S,6R )-3,4,5- 트리히드록시 -6-( 메틸티오 )테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페녹시)에틸)아미노)시클로펜탄카르복스아미드 (52)의 제조

1-아미노시클로펜탄카르복스아미드를 사용하여 아민 50에 대해서와 동일 절차를 이용하여, 생성물 52를 수득하였다.

6.28. ( 2S,3R,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(2,3- 디히드록시프로폭시 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올 ( 53)의 제조

질소하에 EtOH (1 mL) 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-히드록시벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (37, 50 mg, 0.10 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.4 μL, 0.010 mmol) 및 글리시돌 (10 μL, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 밤새 80℃에서 가열한 다음에, 트리에틸아민 및 글리시돌로 재충전하고, 5시간 동안 90℃에서 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고 (역추출과 함께), MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하였다. 물질을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 20-60% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 2회 정제하고, 동결건조시켜 디올 53을 백색 고체 (12 mg, 27% 수율)로서 수득하였다.

6.29. 2-아미노-2- 메틸 -1-(4- 메틸피페라진 -1-일)프로판-1-온 ( 55)의 합성

2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸프로판산 (Boc-Aib-OH, 54, 10.0 g, 49.2 mol), EDC·HCl (11.3 g, 59.0 mmol), HOBt (9.97 g, 73.8 mmol) 및 DIPEA (25.6 mL, 148 mmol)를 모든 고체가 용해될 때까지 250 mL의 THF 중에서 교반하였다. N-메틸-피페라진 (10.9 mL, 98.4 mmol)을 첨가하고, 반응물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 300 mL의 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃으로 2회 세척하였다. 그 다음에 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 이러한 조 물질을 300 mL의 CH₃CN에 용해시켰다. HCl (디옥산 중 4N, 49 mL, 196 mmol)을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 8시간 동안 교반하고, 그 동안 생성물은 백색 침전물을 형성하였다. 생성물을 여과하고, CH₂Cl₂로 세척하고, 밤새 고진공하에 건조시켜 생성물 55를 비스-히드로클로라이드 염 (10.4 g, 82% 수율)으로서 수득하였다.

6.30. (1- 아미노시클로펜틸 )(4- 메틸피페라진 -1-일) 메탄온 ( 56)의 제조

1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로펜탄카르복실산으로 출발하여 아미드 55에 대해서 사용된 바와 동일 절차를 이용하여, 생성물 56을 수득하였다.

6.31. 2-아미노-2- 메틸 -N-(1- 메틸피페리딘 -4-일) 프로판아미드 ( 58)의 제조

2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-2-메틸프로판산 (Z-Aib-OH, 57, 25.0 g, 105 mol), EDC·HCl (24.2 g, 126 mmol), HOBt (21.2 g, 157 mmol) 및 DIPEA (54.9 mL, 315 mmol)를 모든 고체가 용해될 때까지 500 mL의 THF 중에서 교반하였다. N-메틸피페리딘-4-아민 (15.9 mL, 126 mmol)을 첨가하고, 반응물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 600 mL의 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃으로 2회 세척하였다. 그 다음에 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 이러한 조 물질을 150 mL의 THF 및 150 mL의 MeOH에 용해시켰다. Pd/C (10% 습윤, 2.92 g)를 첨가하고, 반응물을 8시간 동안 대기 수소압하에 교반하였다. 반응물을 과량의 MeOH로 셀라이트 상에서 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하고, 생성된 담황색 고체를 밤새 고진공하에 건조시켜 생성물 57을 유리 염기 (17.4 g, 85% 수율)로서 수득하였다.

6.32. 2-아미노-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-2- 메틸프로판아미드 ( 59)의 제조

N,N-디메틸에탄-1,2-디아민을 사용하여 아미드 57에 대해 사용된 바와 동일 절차를 이용하여, 생성물 59를 수득하였다.

6.33. N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-((S)-메틸술피닐)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 (61)의 제조

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4- 메톡시 -4- 옥소부틸 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-((S)-메틸술피닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 60 )의 제조. 퍼아세트산 (희석 HOAc 중 32%, 0.12 mL, 0.512 mmol)을 0℃에서 1 mL의 HOAc 및 2 mL의 CH₃CN 중 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-메톡시-4-옥소부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (9, 100 mg, 0.170 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응물을 1N 수성 NaOH로 켄칭한 다음에, EtOAc로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하여 술폭시드 60의 2:1 부분입체이성질체 혼합물 (60 mg, 58% 수율)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 적용하였다.

N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2- 메틸 -1- 옥소프로판 -2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-((S)-메틸술피닐)-테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 ( 61 )의 제조. 술폭시드 60 (60 mg, 0.10 mmol)을 MeOH/H₂O/THF의 2:2:1 혼합물 2.5 mL에 현탁시켰다. LiOH (24 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 실온에서 교반하고, 그 시간에 걸쳐 출발 물질은 용액으로 되었다. 반응물을 포화 수성 NaHSO₄로 켄칭하였다. 이 산성 층을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 이러한 조 잔류물을 1 mL의 CH₃CN에 용해시켰다. EDC·HCl (31 mg, 0.16 mmol), HOBt (31 mg, 0.16 mmol), 및 DIPEA (50 μL, 0.30 mmol)를 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 0.5 mL의 CH₃CN 중 2-아미노-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-2-메틸-프로판아미드 (30 mg, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 완료 직후, 용매를 진공중에서 제거하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-95% MeOH/10 mM 수성 포름산, 45 mL/분)에 의해 정제하여 포르메이트 염으로서의 술폭시드 61을 술폭시드의 2:1 부분입체이성질체 혼합물 (23 mg, 35% 수율)로서 수득하였다.

6.34. N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸술포닐)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 (63)의 제조.

( 2S,3S,4R,5S,6R )-2-(3-(4-(4- 메톡시 -4- 옥소부틸 ) 벤질 )-4- 메틸페닐 )-6-( 메틸 술포닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 62 )의 제조. 우레아 과산화수소 (UHP, 48 mg, 0.512 mmol) 및 프탈산 무수물 (151 mg, 1.02 mmol)을 1.5 mL의 CH₃CN 및 0.3 mL의 MeOH에 용해시켰다. 2 mL의 CH₃CN에 용해시킨 (2S,3S,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(4-메톡시-4-옥소부틸)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (9, 100 mg, 0.170 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 추가의 UHP (12 mg, 0.128 mmol) 및 프탈산 무수물 (38 mg, 0.255 mmol)로 충전하고, 1시간 동안 교반하였다. 술폰으로 전부 전환 직후, 반응물을 포화 수성 NaHCO₃으로 켄칭하였다. 이러한 수성 층을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하여 술폰 62 (95 mg, 92% 수율)를 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 적용하였다.

N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2- 메틸 -1- 옥소프로판 -2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸술포닐)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 ( 63 )의 제조. 술폰 62 (95 mg, 0.15 mmol)를 MeOH/H₂O/THF의 2:2:1 혼합물 5 mL에 현탁시켰다. LiOH (37 mg, 1.53 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 실온에서 교반하고, 그 시간에 걸쳐 출발 물질은 용액으로 되었다. 반응물을 포화 수성 NaHSO₄로 켄칭하였다. 이 산성 층을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 이러한 조 잔류물을 1.5 mL의 CH₃CN에 용해시켰다. EDC·HCl (43 mg, 0.22 mmol), HOBt (43 mg, 0.22 mmol), 및 DIPEA (75 μL, 0.30 mmol)를 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 0.5 mL의 CH₃CN 중 2-아미노-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-2-메틸프로판아미드 (30 mg, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 완료 직후, 용매를 진공중에서 제거하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-95% MeOH/10 mM 수성 포름산, 45 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 63을 포르메이트 염 (30 mg, 30% 수율)으로서 수득하였다.

6.35. 술폭시드 /N- 옥시드 (64) 및 술폰 /N- 옥시드 ( 65)의 제조

0.5 mL의 CH₂Cl₂ 중 N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드 (13, 30 mg, 0.050 mmol)의 용액에 m-클로로퍼벤조산 (22 mg, 0.125 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 교반하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (C18 30 x 100 mm 칼럼, 5-100% CH₃CN/10 mM 수성 포름산암모늄, 45 mL/분)에 의해 정제하여 산화 생성물 64 (16 mg, 50% 수율) 및 65 (3 mg, 9% 수율)를 수득하였다.

N,N-디메틸-2-(2-메틸-2-(4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-((S)-메틸술피닐)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미도)프로판아미도) 에탄아민 옥시드 (64, 주 H_a 및 부 H_b로서 표기된, S에서 부분입체이성질체의 2:1 혼합물):

N,N-디메틸-2-(2-메틸-2-(4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸술포닐)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미도)프로판아미도) 에탄아민 옥시드 (65):

6.36. 추가의 화합물

본 발명의 많은 추가의 화합물을 상기 기재된 것들과 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 그러한 화합물은 표 1에 포함되어 있다. "SGLT1" 및 "SGLT2"라는 제목의 세로열은 하기에 기재된 바와 같이 수득된 인간 SGLT1 IC₅₀ 및 SGLT1 IC₅₀ 측정을 제공하며, 여기서 ***는 0.01 μM 미만의 값을 지칭하고; **는 0.1 μM 미만의 값을 지칭하고; *는 1 μM 미만의 값을 지칭하고; --는 측정되지 않았거나 μM을 초과하는 값을 지칭한다.

6.37. 시험관내 인간 SGLT1 억제 검정

인간 나트륨/글루코스 공동수송체 유형 1 (SGLT1; 등록 번호 NP_000334; GI: 4507031)을 포유동물 발현용 pIRESpuro2 벡터로 클로닝하였다 (구축물: HA-SGLT1-pIRESpuro2).

HEK293 세포를 인간 HA-SGLT1-pIRESpuro2 벡터로 형질감염시키고, 안정한 벌크 세포주를 0.5 ㎍/mL의 퓨로마이신의 존재하에 선택하였다. 인간 HA-SGLT1 세포를 10% FBS, 1% GPS 및 0.5 ㎍/mL의 퓨로마이신을 함유하는 DMEM 배지에서 유지하였다.

인간 HA-SGLT1을 발현시키는 HEK293 세포를 10% FBS, 1% GPS 및 0.5 μg/mL의 퓨로마이신을 함유하는 DMEM 배지 중의 384개 웰 플레이트 (30,000개 세포/웰)에 시딩한 다음에, 37℃, 5% CO₂에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음에, 세포를 흡수 완충제 (140 mM NaCl, 2 mM KCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂, 10 mM HEPES, 5 mM Tris, 1 mg/mL 소 혈청 알부민 (BSA), pH 7.3)로 세척하였다. 시험 화합물과 함께, 또는 시험 화합물 없이, 20 마이크로리터의 흡수 완충제를 세포에 첨가하였다. 그 다음에, ¹⁴C-AMG (100 nCi)를 함유하는 20 마이크로리터의 흡수 완충제를 세포에 또한 첨가하였다. 세포 플레이트를 1 내지 2시간 동안 37℃, 5% CO₂에서 인큐베이션하였다. 세포를 흡수 완충제로 세척한 후, 섬광 유체 (40 마이크로리터/웰)를 첨가하고, 섬광 쿨터 (톱쿨터(TopCoulter) NXT; 팩커드 인스트루먼츠(Packard Instruments))를 사용하여 방사능을 계수함으로써 ¹⁴C-AMG 흡수를 측정하였다.

6.38. 시험관내 인간 SGLT2 억제 검정

인간 나트륨/글루코스 공동수송체 유형 2 (SGLT2; 등록 번호 P31639; GI:400337)를 포유동물 발현용 pIRESpuro2 벡터로 클로닝하였다 (구축물: HA-SGLT2-pIRESpuro2).

HEK293 세포를 인간 HA-SGLT2-pIRESpuro2 벡터로 형질감염시키고, 안정한 벌크 세포주를 0.5 ㎍/mL의 퓨로마이신의 존재하에 선택하였다. 인간 HA-SGLT2 세포를 10% FBS, 1% GPS 및 0.5 ㎍/mL의 퓨로마이신을 함유하는 DMEM 배지에서 유지하였다.

인간 HA-SGLT2를 발현시키는 HEK293 세포를 10% FBS, 1% GPS 및 0.5 μg/mL의 퓨로마이신을 함유하는 DMEM 배지 중의 384개 웰 플레이트 (30,000개 세포/웰)에 시딩한 다음에, 37℃, 5% CO₂에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음에, 세포를 흡수 완충제 (140 mM NaCl, 2 mM KCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂, 10 mM HEPES, 5 mM Tris, 1 mg/mL 소 혈청 알부민 (BSA), pH 7.3)로 세척하였다. 시험 화합물과 함께, 또는 시험 화합물 없이, 20 마이크로리터의 흡수 완충제를 세포에 첨가하였다. 그 다음에, ¹⁴C-AMG (100 nCi)를 함유하는 20 마이크로리터의 흡수 완충제를 세포에 첨가하였다. 세포 플레이트를 1 내지 2시간 동안 37℃, 5% CO₂에서 인큐베이션하였다. 세포를 흡수 완충제로 세척한 후, 섬광 유체 (40 마이크로리터/웰)를 첨가하고, 섬광 쿨터 (톱쿨터 NXT; 팩커드 인스트루먼츠)를 사용하여 방사능을 계수함으로써 ¹⁴C-AMG 흡수를 측정하였다.

6.39. 내약성 및 약리학

본 발명의 화합물의 생체내 내약성 및 약리학을 18주령 수컷 C57/Blk6 마우스를 사용하여 결정하였다. 마우스를 정규식에서 10% 저지방식 (LFD, D12450Bi)으로 교체하고 연구전 1주 동안 개별 수용하였다. 그 다음에 마우스를 그의 체중에 의해 하기 군으로 무작위화하였다:

마우스에게 4일 동안 1일 1회 1 mg/kg으로 및 10 mL/kg의 부피로 비히클 또는 화합물 중 어느 하나를 경구 위관영양에 의해 공급하였다. 체중, 사료 소비 및 설사를 매일 모니터링하였다. 최종 투여 후 6시간에, 기준선 글루코스 용으로 안와후방 채혈에 의해 마우스로부터 혈액을 수집하였다. 그 다음에 마우스에게 60 mL의 물에 50 g의 저지방식 (LFD) 분말 (지방으로서 10% kcal; 식이 D12450B, 리서치 다이어트(Research Diets), 뉴저지주 뉴브런즈윅)을 현탁시킴으로써 제조된, 글루코스-함유식을 제공하였다. 의식있는 마우스에게 경구 위관영양에 의해, 20 mL/kg의 이러한 현탁액을 5 mL/kg의 50% 덱스트로스와 함께 공급하고, 이는 마우스에게 9.2 g/kg 글루코스, 2.5 g/kg 단백질 및 0.6 g/kg 지방을 제공하였다.

혈액을 식후 10, 30, 및 60분에 수집하여 식후의 글루코스 변동을 평가하였다. 아큐-첵-아비바(Accu-Chek Aviva) 혈당측정기 (로슈 다이아그노스틱스(Roche Diagnostics), 인디애나주 인디애나폴리스)를 사용하여 제조업체에 의해 권장된 프로토콜에 따라 혈액 글루코스를 측정하였다. 도 1A는 1.0 mg/kg ("mpk")의 화합물 A-E가 그의 식후 시험투여 후 시간의 함수로서, 비히클과 비교하여, 마우스의 혈액 글루코스 수준에 미치는 영향을 도시한다. 실험에서의 각각의 동물에 대한 곡선하 면적은 도 1B에 도시되어 있다.

식후 시험투여 60분에, 총 글루카곤-유사 펩티드-1 (tGLP-1) 분석을 위해 추가의 혈액을 수집하였다. 이러한 측정을 위해, 혈장을 4℃에서 10분 동안 1000 rpm에서 혈액 샘플을 원심분리함으로써 준비하였다. tGPL-1을 ELISA (글루카곤-유사 펩티드-1 총 ELISA 키트, 카탈로그 번호 EZGLP1T-36K, 밀리포어(Millipore), 미주리주 세인트 찰스)에 의해 밀리포어에 의해 권장된 프로토콜에 따라 분석하였다. 도 2는 각각의 마우스에 대해, 비히클과 비교하여, 혈장 tGLP-1에 미치는 화합물의 영향을 도시한다.

맹장 내용물을 최종 혈액 샘플의 수집 직후 글루코스 분석용으로 수집하였다. 이러한 분석은 5 mL의 냉 밀리큐(MilliQ) 물을 1 그램의 맹장 내용물에 첨가함으로써 수행하였다. 그 다음에 미니 비드비터(Mini Beadbeater) (바이오스펙 프로덕츠(Biospec Products), 오클라호마주 바틀즈빌)를 사용하여 혼합물을 1분 동안 균질화하였다. 균질물을 3750 rpm의 속도로 25분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 상청액을 수집하였다. 맹장 글루코스를 코바스 인테그라(Cobas Integra) 400 자동분석기(Autoanalyzer) (로슈 다이아그노스틱스)에 의해 분석하였다. 도 3은 각각의 마우스에 대한 이러한 분석의 결과를 도시한다.

6.40. KKAy 당뇨병 마우스에 미치는 영향

12주령 수컷 KKay 마우스를 더 잭슨 래보러토리(The Jackson Laboratory) (메인주 바 하버)로부터 구매하였다. 마우스를 45% 고지방식 (HFD; 식이 D12451i, 리서치 다이어트)로 교체하고 연구전 1주 동안 개별 수용하였다. 마우스를 그의 HbA1c 수준 및 체중에 의해 하기 군으로 무작위화하였다:

여기서 화합물 C는 (2S,3R,4R,5S,6R)-2-(3-(4-(3-((1-히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)프로폭시)벤질)-4-메틸페닐)-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올이다.

마우스에게 36일 동안 오후 5시에 1일 1회 비히클 또는 화합물 C 중 어느 하나를 공급하였다. 체중 및 사료 소비를 매일 모니터링하였다. 제22일에, 기준선 글루코스용 글루코스 시험투여 전에 혈액을 수집하였다. 그 다음에 마우스에게 볼루스 용량의 글루코스 (2 g/kg, 10 mL/kg)를 제공하였다. 혈액을 글루코스 시험투여 후 30, 60 및 120분에 수집하여 글루코스 변동을 평가하였다. 혈액 글루코스를 코바스 인테그라 400 자동분석기 (로슈 다이아그노스틱스)에 의해 분석하였다. 도 4는 화합물 C 투여 후 15시간에 글루코스 변동에서의 용량-의존 감소를 도시하며, 여기서 시간 t = 0은 글루코스 볼루스가 투여된 시간이다.

투여 후 제26일에, HbA1c 용으로 혈액을 수집하였다. HbA1c를 바이엘(Bayer)에 의해 제조된 측정기를 사용하여 바이엘에 의해 권장된 프로토콜에 따라 측정하였다. 도 5A에 도시된 바와 같이, 화합물 C로 처리된 마우스는 HbA1c에서 상당한 용량-의존 감소를 나타냈다. 도 5B는 제0일 내지 제27일 사이에 마우스의 HbA1c의 변화를 도시한다.

제29일에, 마우스에게 글루코스 볼루스 (2 g/kg, 10 mL/kg)를 다시 공급하였다. 글루코스 시험투여 후 60분에 혈액을 수집하고 tGLP-1에 관해 분석하였다. 4℃에서 10분 동안 1000 rpm에서 혈액 샘플을 원심분리함으로써 혈장을 준비하였다. tGPL-1을 ELISA (글루카곤-유사 펩티드-1 총 ELISA 키트, 카탈로그 번호 EZGLP1T-36K, 밀리포어, 미주리주 세인트 찰스)에 의해 밀리포어에 의해 권장된 프로토콜에 따라 분석하였다. 도 6에 도시된 바와 같이, 식후의 tGLP-1에서의 상당한 증가가 4.5 mpk 군에서 관찰되었다 (p < 0.5).

상기에서 인용된 모든 간행물 (예를 들어, 특허 및 특허 출원)은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

Claims (20)

1. N-(1-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-4-(4-(2-메틸-5-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(메틸티오)테트라히드로-2H-피란-2-일)벤질)페닐)부탄아미드인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
   

   
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