KR102161387B1 - 루테인 포함 피부건강용 조성물 및 이를 포함하는 피부건강기능식품 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 루테인과 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물 및 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물을 포함하는 피부건강용 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 피부건강기능식품에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명의 피부건강용 조성물 및 이를 포함하는 피부건강기능식품은 피부에 보습효과를 주고 자외선으로 인한 피부손상을 방지하여 피부를 건강하게 유지하게 한다.

Description

루테인 포함 피부건강용 조성물 및 이를 포함하는 피부건강기능식품{A composition comprising lutein for improving skin condition and a fuctional food comprising the composition}
본 발명은 루테인(lutein)과 지아잔틴(zeaxanthin)을 포함하는 마리골드(Marigold)꽃 추출물 및 카르노식 애시드(carnosic acid)를 포함하는 로즈마리(rosemary) 추출물을 포함하는 피부건강용 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 피부건강기능식품에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명의 피부건강용 조성물 및 이를 포함하는 피부건강기능식품은 피부에 보습효과를 주고 자외선으로 인한 피부손상을 방지하여 피부를 건강하게 유지하게 한다.
피부는 우리 몸을 보호하며, 신경 끝이 묻혀 있어 접촉, 통증, 뜨겁거나 차가움, 진동 등을 느끼는 감각기능을 갖고 있다. 그 밖에 체온의 조절과 유지, 비타민 D의 합성, 외부 물질의 흡수 및 체내 성분의 휘발 제어기능도 담당하고 있다. 이외에도, 미적인 면에서 우리의 외모는 피부가 좌우한다 해도 과언이 아니다.
이러한 피부의 보습작용이 중요한데 그 이유는 이를 제대로 유지하지 못하면, 세포의 재생능력이 저하되면서 탄력이 줄어들고 주름이 생기면서 피부가 노화되기 때문이다. 따라서 주변 대기가 건조한 경우, 건강한 피부를 유지하기 위해서는 각질층에 존재하는 천연보습인자(NMF: Natural Moisturizing Factor)가 가진 수분 보유능력과 지질층의 수분증발 억제능력을 보완해 주어야 한다.
한편, 사람 피부는 주름 형성 및 조직 탄력성 저하를 촉진하는 자외선 (UV)과 같은 외부 영향에 대한 누적 노출(외인성 노화) 및 시간의 경과(내인성 노화)에 의하여 노화가 진행된다. 이러한 피부 노화 결과 주름과 비정형 색소 침착이 나타나고, 이 과정에서 활성산소 종 (reactive oxygen species, ROS)이 피부 색소 침착, 조기 피부 노화 및 피부암의 진행을 유발할 수 있다는 것은 잘 알려져 있다. 활성산소 종으로는 슈퍼옥사이드(O2 -), 과산화수소(H2O2), 히드록시라디칼(OH-) 등이 있다.
UV에 기인한 활성산소 종은 표피의 피부 착색을 촉진할 수 있다. 멜라노사이트(melanocytes)에 인접한 케라티노사이트(Keratinocytes)는 자외선 유발 피부 착색에 집중적으로 기여한다. 활성산소 종 중 각질형성세포에서 유래한 NO는 멜라닌 생성 인자인 티로시나제(tyrosinase)와 티로신 관련 단백질의 양을 증가시킴으로써 멜라닌 생성을 유도하는 역할을 한다.
피부에서의 활성산소 종의 불균형은 특히 노화된 피부에서 멜라노사이트의 분화 및 생존 또는 케라티노사이트로의 멜라닌 수송의 손상을 초래한다. 또한, 멜라닌 합성은 안료 형성 세포 내에서 활성산소 종의 잠재적인 공급원으로 작용하는 산소 의존적인 과정이다.
한편, 진피에서는 세포 외 기질 (extracellular matrix, ECM)의 파괴가 중요한 역할을 한다. 세포 외 기질 (ECM) 내의 효소는 탄성 섬유, 콜라겐 및 프로테오글리칸의 처리에 관여한다. 성숙한 콜라겐은 콜라겐 섬유(collagen fiber)로 자가조립되어 섬유 간 및 섬유 내 가교 결합으로 안정화된다. 일반적으로 진피기질(dermal matrix)의 변화로 주름이 생기는데, 진피기질에서는 촉진 분해에 의해 콜라겐 수치가 감소되고 콜라겐 합성이 감소된다. 기질금속단백질분해효소들(matrix metalloproteases, MMPs)에 의해 매개되는 콜라겐 섬유의 점진적 절단이 노화 중에 발생한다. 광 노화 과정에서 UV 조사에 의해 유발 된 활성산소 종 형성을 통한 이러한 분해는 세포 외 기질 턴오버 (ECM turnover)라는 프로세스에 의해 상당히 가속화된다.
UV-A 조사에 의해 생성 된 활성산소 종은 섬유아세포(fibroblasts) 및 케라티노사이트에서 MMP-1, 3 및 9와 관련된 전사 인자를 자극한다. 리놀레산 하이드로퍼옥사이드(linoleic acid hydroperoxide)와 같은 산화된 지질은 또한 MMP-1과 MMP-3 의 발현을 향상시킨다.
요컨대, 외부 환경에 직접 노출 된 피부가 자외선 또는 오염 물질에 과도하게 노출되면 피부 트러블이 생기고 피부트러블은 외형에 나쁜 영향을 미치고 심지어 염증 등의 생성에 의하여 색소 침착을 유발하고 피부 탄력 섬유의 붕괴를 촉진하여 주름이 증가하는 것으로 알려져 있다. 이는 피부가 충분한 수분을 유지하지 못하여서도 발생할 수 있다.
공개특허 10-2008-0108718 공개특허 10-2019-0072937 등록특허 10-0755190
자외선 노출로부터 피부의 손상을 줄여주거나 멜라닌 생성을 억제하는 다양한 제품이 알려져 있고 또한 피부에 보습을 주어 피부 노화를 방지하는 제품이 있으나 여전히 보다 효과적인 피부건강용 건강기능식품에 대한 요구가 있다.
본 발명은 루테인과 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물 및 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물을 포함하는 피부건강용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 피부건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 마리골드꽃에서 추출한 루테인과 지아잔틴 및 로즈마리에서 추출한 카르노식 애시드를 포함하는 피부건강용 조성물 및 식품은 피부건강에 유용하다는 효과가 있다. 특히 본 발명의 조성물은 자외선으로 인한 피부의 손상을 방지하는 효과가 있으며 피부보습효과가 우수하다.
본 발명은 루테인과 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물 및 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물을 포함하는 피부건강용 조성물을 제공한다.
본 발명은 피부건강을 위한 루테인과 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물 및 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물의 사용을 제공한다.
광 자극에 의한 피부 손상을 방지하고 적절한 수분을 보충하여 주면 피부 노화를 억제할 수 있음에 기초하여 본 발명자들은 루테인과 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물에 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물을 혼합하는 경우 자외선에 의한 피부 손상을 방지하면서 보습 효과까지 주어 피부노화를 방지할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다. 즉, 루테인이 뇌건강 및 피부건강에 좋다는 것이 알려져서 관련 개발을 하던 중 본 발명자들은 특히 카르노식 애시드를 혼합하는 경우 피부건강에 더 좋다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다. 본 발명은 특히 피부건강을 위한 경구용 건강기능식품을 개발하고자 하였다.
피부 노화 과정은 피부의 수분손실과 관련이 있다. 피부 보습과 관련된 주요 분자에는 히알루론산이 있는데, 피부 표피에서 히알루론산이 감소하면 피부 수분이 손실되게 된다. 본 발명의 피부건강용 조성물은 히알루론산 수준을 유의하게 증가시킨다.
피부가 자외선에 노출되면 MMPs의 합성이 증가하여 피부 콜라겐이 분해된다. Procollagen type 1은 collagen type 1의 전구물질로 Procollagen 수준이 감소하면 콜라겐 합성과 피부 섬유아세포의 분해를 통제하는 세포 및 분자 시스템에 손상이 발생한다. 본 발명의 피부건강용 조성물은 Procollagen type 1의 수준을 유의하게 증가시킨다.
콜라겐과 엘라스틴은 피부의 구조물로 피부의 탄력과 견고함을 유지시킨다. 노화 과정에서 콜라겐과 엘라스틴이 감소하는데, 본 발명의 피부건강용 조성물은 collagen type 1과 엘라스틴 유전자 발현을 상향 조절한다.
아쿠아포린(AQP)은 포유동물의 피부에서 발현되어 수분의 수송에 관여한다. AQP-3은 가장 풍부한 피부의 aquaglyceroporin으로 물과 글리세롤을 수송하며 피부 표피의 보습에 중요한 역할을 한다. 본 발명의 피부건강용 조성물은 AQP-3의 유전자 발현을 상향 조절한다.
즉, 본 발명의 피부건강용 조성물은 자외선으로 인한 수분 손실로부터 피부를 보호하여 피부 보습을 유지하는 효과적이다.
한편, 피부 노화 과정의 외인자인 ‘광노화’는 지속적인 자외선 노출로 인해 발생한다. 자외선으로 유발되는 산화적/염증성 손상은 광노화의 병인에 중요한 역할을 한다. UV를 조사하면 섬유아세포와 염증세포에서 MMPs를 생성하는데, MMPs는 과도한 기질 분해를 유도하고 광노화가 진행되는 동안 발생하는 결합조직손상에 실질적으로 기여한다. 본 발명의 피부건강용 조성물은 효과적으로 MMPs 유전자 발현을 하향 조절한다.
활성산소는 항산화물질인 SOD, 카탈라아제, GSH-Px에 의해 조절되는데 UV 조사는 이러한 항산화 시스템의 균형을 무너뜨리고 산화 스트레스는 피부 노화를 유발한다. 본 발명의 피부건강용 조성물은 SOD, 카탈라아제, GSH-Px 수준을 유의하게 증가시킨다.
UV로 유발된 과도한 활성산소는 NF-kB의 활성을 촉진하며 이를 통해 다양한 전염증성 시토카인이 생성된다. 이러한 전염증성 시토카인은 세포괴사 및 세포자연사를 촉진한다. 본 발명의 피부건강용 조성물은 전염증성 시토카인의 활성 수준을 유의하게 감소시킨다.
즉, 본 발명의 피부건강용 조성물은 자외선으로 인한 광노화로부터 피부를 보호하는 데 효과적이다.
이하 본 발명의 성분을 상세히 설명한다.
마리골드는 국화과의 천수국속을 통틀어 이르는 것으로 봄에 파종하는 한해살이풀로 꽃은 초여름에서 가을까지 핀다. 크게 아프리카종과 프랑스종으로 구분하는데, 잎의 가장자리에 잔톱니가 없고 꽃이 대륜인 것을 천수국이라 하고, 잎의 가장자리에 잔톱니가 있고 꽃이 소륜인 것을 만수국이라 한다. 멕시코가 원산지로 관상용으로 화단에 널리 재배한다.
이러한 마리골드는 주요성분으로 루테인과 지아잔틴을 함유하고 있다.
루테인은 엽록소와 함께 초록색의 잎에 들어 있고, 에스테르로서 여러 가지 꽃에 들어 있다. 또한 계란 노른자위 속에 지아잔틴과 함께 함유되어 있으며 알팔파 추출색소의 주색소성분이다. 루테인은 카로티노이드 중에서도 잔토필(xanthophylls)의 한 종류로 눈의 황반과 수정체 그리고 뇌, 피부, 심장, 척추조직에 집중되어 있는 성분으로 눈이 외부로부터 들어오는 강한 자외선, 특히 블루라이트라고 알려진 청색광을 흡수하여 눈을 보호하고 활성 산소를 산화시킨다. 체내에서 합성되지 않으므로 음식을 통해서 섭취해야한다.
본 발명의 루테인은 특히 피부에 유해한 활성산소인 슈퍼옥사이드 라디칼(O2 -), 을 감소시킨다. 또한 피부에 유해한 활성산소인 하이드록실 라디칼(OH-)을 감소시켜 외부 자극에 의한 피부 손상을 방지하여 준다. 또한 피부의 지방질, 과산화지방질 감소에 도움을 준다. 루테인은 블루라이트를 차단한다.
지아잔틴은 루테인과 같은 카르티노이드의 일종으로 황반에서 황반색소의 기능을 하는 것으로 공기와 빛에 노출되는 경우 산화작용을 하여 산화적 손상을 방지하여 준다.
로즈마리는 'Rosmarinus'라는 학명을 갖는 것으로 이는 라틴어의 'ros marinus'의 합성어로 '바다의 이슬'이라는 뜻으로 자생지의 해변가에서 독특한 향기를 발하는 의미에서 연유되었다. 로즈마리는 꿀풀과에 속하는 다년생(여러해살이) 식물로 자생지에서는 식물의 크기가 2m까지 자라는 관목(키가 작고 원줄기와 가지의 구별이 분명하지 않으며 밑동에서 가지를 많이 치는 나무)성으로 일반적인 크기는 50~150cm 정도이다. 줄기는 사각형이며 목질(나무와 같이 단단한 성질)이고 잔가지가 많으며 잎은 길이 1.5~3.5cm, 폭 1.5~3.5mm로 가늘고 길다. 잎 윗면은 광택이 나는 짙은 녹색이고 뒷면은 회색의 솜털이 많다. 보통 따뜻한 지역에서는 3월부터 그 외에는 5월~7월에 거쳐 연한 하늘색 또는 연한 보라색, 연한 분홍빛의 꽃이 피는데, 종류에 따라서 하얗게 피는 것도 있다.
로즈마리는 주요성분으로 카르노식 애시드를 포함하고 있다.
카르노식 애시드는 항산화 기능이 있는 것으로, 본 발명에서 마리골드꽃 추출물과 혼합됨으로써 피부에 보습효과를 제공한다.
본 발명의 피부건강용 조성물은 루테인 및 지아잔틴이 70중량% 이상~100중량%미만, 바람직하게는 80중량%이상~100중량%미만, 더욱 바람직하게는 85중량%이상~100중량%미만 함유된 마리골드꽃 추출물 분말을 포함한다.
본 발명의 루테인 및 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물은 마리골드 꽃을 용매로 추출하여 얻을 수 있다. 상기 용매로는 바람직하게는 헥산, 이산화탄소, 주정(발효알콜)을 단독으로 이용하거나 또는 혼합하여 사용할 수 있으며 혼합하여 사용할 경우는 순차적으로 사용할 수 있다. 이때, 추출온도는 예를 들어 10∼80℃일 수 있으며, 예를 들어 1∼10시간 동안 추출할 수 있다.
본 발명의 루테인 및 지아잔틴을 함유하는 마리골드꽃 추출물은 상기 추출물에서 용매를 제거하고 비누화 후, 분말화하여 얻는다. 즉, 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조된다. 마리골드꽃 추출물 분말에 포함되는 루테인과 지아잔틴의 중량비는 10:1~20:1 일 수 있고 바람직하게는 15:1~20:1이다. 루테인과 지아잔틴의 함량비가 상기와 같은 경우 자외선에 의한 피부손상 방지효과가 우수하다.
상기 마리골드꽃 추출물은 루테인 및 지아잔틴 이외에 마리골드꽃에 존재하는 색소(pigment), 섬유질(fiber), 카로티노이드(carotenoid), 폴리페놀(polyphenol)에서 선택되는 1종 이상이 포함될 수 있다.
본 발명의 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물은 로즈마리를 바람직하게는 주정으로 추출하여 용매를 제거하고 분말화 하여 얻을 수 있다. 상기 분말화 과정은 주정 추출액을 농축하고 이를 스프레이드라이 하는 방법일 수 있다. 이때, 추출온도는 예를 들어 10∼80℃일 수 있으며, 예를 들어 1∼10시간 동안 추출할 수 있다. 본 발명의 로즈마리 추출물은 카르노식 애시드를 6 중량%이상, 바람직하게는 8중량%이상 함유할 수 있다. 로즈마리 추출물은 카르노식 애시드 이외에 로즈마리에 존재하는 색소(pigment), 섬유질(fiber), 카로티노이드(carotenoid), 폴리페놀(polyphenol)에서 선택되는 1종 이상이 포함될 수 있다.
본 발명은 루테인 및 지아잔틴이 함유된 마리골드꽃 추출물 분말과 카르노식 애시드를 함유하는 로즈마리 추출물 분말을 1:5~1:15 중량비, 바람직하게는 1:6~1:10 중량비로 포함하는 피부건강용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명은 상기 피부건강용 조성물을 10 ~ 90 중량%, 바람직하게는 20 ~ 80중량% 포함하는 건강기능식품을 제공한다.
상기 건강기능식품은 추가로 비타민 C, 아연, 구리, 등의 성분과 부형제, 첨가제, 활택제, 유화제 및 유지에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 건강기능식품은 정제, 하드캡슐, 소프트캡슐, 젤리, 액상, 분말, 페이스트, 겔, 환, 과립, 시럽 형태의 경구용일 수 있다.
상기 건강기능식품은 캡슐형태의 경구제일 수 있으며, 상기 캡슐은 하드캡슐 또는 소프트 캡슐일 수 있다. 상기 하드캡슐은 활택제를 포함할 수 있다. 상기 소프트 캡슐은 해바라기유, 올리브유, 대두유, 카놀라유, 홍화씨유 등의 유지를 포함하여 제조될 수 있다. 유화제로 황납(bees wax)와 레시틴을 포함할 수 있다.
건강기능식품의 1일 섭취량은 마리골드꽃 추출물 및 로즈마리 추출물 포함 피부건강용 조성물 중량기준 150~300mg, 바람직하게는 200~250 mg이다. 마리골드꽃 추출물 및 로즈마리 추출물 포함 피부건강용 조성물 함량 기준으로 상기 함량을 섭취하는 경우 자외선에 의한 피부 손상을 방지하고 피부에 적절한 보습을 제공할 수 있다.
이하 일 실시예에 의해 당업자가 본 개시 내용을 이해할 수 있도록 상세하게 설명한다. 그러나, 하기 실시 예는 설명의 목적으로 제공되며 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 요컨대, 본 발명의 사상 및 범주를 벗어나거나 모든 물질적 이점을 희생하지 않으면서 다양한 변화가 이루어질 수 있음이 명백하다.
실시예 1. 마리골드꽃 추출물 분말 제조
건조된 마리골드꽃 1kg에 헥산 3L를 넣고 55℃에서 3시간 동안 추출공정을 진행하고, 비누화공정(saponification)을 수행하였다. 이후 반응물을 여과하여 추출액을 얻었다. 얻어진 추출물을 감압증류하여 루테인 75.6중량% 및 지아잔틴 4.4중량% 포함하는 마리골드꽃 추출물 분말을 얻었다.
실시예 2. 로즈마리 추출물 분말 제조
건조된 로즈마리 1kg에 주정 4L를 넣고 72℃에서 3시간 동안 추출공정을 진행하였다. 얻어진 주정 추출액을 농축하고 이를 스프레이드라이 하여 카르노식 애시드를 8중량% 함유하는 로즈마리 추출물 분말을 얻었다.
실시예 3. 피부건강용 조성물 A
실시예 1에서 제조한 마리골드꽃 추출물 분말 20mg과 실시예 2에서 제조한 로즈마리 추출물 분말 200mg을 혼합하여 피부건강용 조성물을 제조하였다.
실시예 4. 피부건강용 조성물 B
실시예 1에서 제조한 마리골드꽃 추출물 분말 25mg과 실시예 2에서 제조한 로즈마리 추출물 분말 200mg을 혼합하여 피부건강용 조성물을 제조하였다.
실시예 5. 피부건강용 조성물 C
실시예 1에서 제조한 마리골드꽃 추출물 분말 30mg과 실시예 2에서 제조한 로즈마리 추출물 분말 200mg을 혼합하여 피부건강용 조성물을 제조하였다.
실시예 6. 하드캡슐 형태의 피부건강기능식품 제조
실시예 4에서 제조한 피부건강용 조성물 225mg과 말토덱스트린 200mg, 스테아린산마그네슘 5mg을 혼합하고 이를 하드캡슐에 넣어 하드캡슐 형태의 피부건강용 식품을 제조하였다.
실시예 7. 소프트 캡슐 형태의 피부건강기능식품 제조
실시예 4에서 제조한 피부건강용 조성물 225mg과 해바라기씨유 425mg을 혼합하여 소프트캡슐 형태의 피부건강용 식품을 제조하였다.
실험예 1. 시험관내 실험
시료준비
시험물질 A: 대조물질(해바라기씨유)
시험물질 B: 실시예 4의 조성물 및 해바라기씨유 425mg 포함
약 10mg의 시험물질 A를 DMEM/Ham’s F12에 녹이고 동일한 양의 시험물질 B를 100㎕d의 DMSO에 녹였다. 2% 비활성화 FBS를 보충한 DMEM-HG/Ham’s F12 배지로 부피를 맞추어 시험물질을 각각 1mg/ml 농도의 원액으로 제조하고 0.22μ의 실린지로 여과하여 멸균 및 필요에 따라 희석하여 사용하였다.
A. 보습효과
시험물질이 프로콜라겐, 세포 히알루론산 수준에 미치는 보습활성을 평가하고 각질형성세포 및 피부섬유아세포에서 AQP-3, 콜라겐-1, 엘라스틴 유전자 발현 수준에 미치는 영향을 평가하였다.
사용 세포: HDF 및 HaCat
그룹 설계: 총 7개의 그룹으로 나눔. 1~3번 그룹은 대조군으로 함. 1번 그룹은 시험물질로 처리하지 않고, UV 조사도 하지 않음. 2번과 3번 그룹은 UV 조사를 하고 2번에는 시험물질을 처리하지 않고 3번 그룹에는 일반적인 표준물질(Tiron: 1mg/ml, Retinoic acid: 100μM 용액)로 처리함. 4번과 5번 그룹은 각각 UV를 조사한 뒤에 높은 농도와 낮은 농도의 시험물질 A를 처리함. 6번과 7번 그룹에는 각각 UV를 조사한 뒤에 높은 농도와 낮은 농도의 시험물질 B를 처리함.
사용 UV: 스펙트럼 범위(295-300nm)를 갖는 Solar simulator를 사용했으며, 시뮬레이터에는 315-380nm의 파장을 전달하는 UVA 흡수 H1/H2 필터를 장착함.
Procollagen Type 1 단백질 및 히알루론산 수준: HDF 세포를 단층으로 배양하고 각기 다른 농도의 시험물질로 처리하여 배양함. 배양 24시간 후 세포 상층액을 수집하여 원심분리하고 ELISA 분석 수행. 흡광도 값을 통해 Procollagen type 1 및 히알루론산 수준을 결정하고, UV 대조군과 비교하여 비율을 결정.
콜라겐, 엘라스틴, AQP-3 유전자 발현: 콜라겐, 엘라스틴, AQP-3 유전자 발현 수준을 semi quantitative RT-PCR로 측정. 간단히 서술하면, 비처리군(대조군)과 처리군의 세포로부터 RNA를 분리하여 cDNA를 합성함. 50㎕의 반응 혼합물을 설계된 프라이머를 사용하여 HDF의 cDNA의 증폭시키기 위해 PCR을 적용하고 내부 대조군으로 세포 유지 유전자인 GAPDH를 각각의 반응과 함께 증폭시킴. gel 속의 앰플리콘은 alpha view software generated data를 기반으로 계산하고 분석함.
결과를 하기 표 1 내지 표 3에 나타내었다.
시험물질 A 시험물질 B
HDF 세포에서 농도 62.5㎍/ml 31.25㎍/ml 31.25㎍/ml 15.6㎍/ml
Procollagen type 1 1.41±0.004 ng/ml 1.39±0.03 ng/ml 1.87±0.04 ng/ml 1.66±0.02 ng/ml
히알루론산 수준 2.93±0.03 ng/ml 2.94±0.01 ng/ml 3.34±0.02 ng/ml 3.26±0.02 ng/ml
시험물질 B는 UV 대조군과 비교하여 두 농도에서 모두 Procollagen type 1 수준을 유의하게 증가시켰다.
시험물질 B는 UV 대조군과 비교하여 두 농도에서 모두 히알루론산 수준을 유의하게 증가시켰다.
시험물질 A 시험물질 B
HaCat 세포에서 농도 250㎍/ml 125 ㎍/ml 125㎍/ml 62.5 ㎍/ml
AQP-3 유전자 발현 UV 대조군 대비 0.08배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.06배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.43배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.33배 상향 조절됨
시험물질 A 시험물질 B
HDF 세포에서 농도 62.5㎍/ml 31.25 ㎍/ml 31.25㎍/ml 15.6 ㎍/ml
Collagen type 1 유전자 발현 UV 대조군 대비 0.04배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.01배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.32배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.24배 상향 조절됨
엘라스틴 유전자 발현 UV 대조군 대비 0.02배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.01배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.38배 상향 조절됨 UV 대조군 대비 0.32배 상향 조절됨
시험물질 B는 AQP-3 유전자 발현에서 시험물질 A 대비 우수하다.
시험물질 B는 Collagen type 1 및 엘라스틴 유전자 발현에서 시험물질 A 대비 우수하다.
이는 시험물질 B가 자외선으로 인한 수분 손실로부터 피부를 보호하여 피부 보습을 유지하는 효과적임을 알 수 있다.
피부 노화 과정은 피부의 수분손실과 관련이 있다. 피부 보습과 관련된 주요 분자에는 히알루론산이 있는데, 피부 표피에서 히알루론산이 감소하면 피부 수분이 손실되게 된다. 시험물질 B는 히알루론산 수준을 유의하게 증가시켰다. 피부가 자외선에 노출되면 MMPs의 합성이 증가하여 피부 콜라겐이 분해된다. Procollagen type 1은 collagen type 1의 전구물질로 Procollagen 수준이 감소하면 콜라겐 합성과 피부 섬유아세포의 분해를 통제하는 세포 및 분자 시스템에 손상이 발생한다. 시험물질 B는 대조군과 비교하여 Procollagen type 1의 수준을 유의하게 증가시켰다. 콜라겐과 엘라스틴은 피부의 구조물로 피부의 탄력과 견고함을 유지시킨다. 노화 과정에서 콜라겐과 엘라스틴이 감소하는데, 시험물질 B는 collagen type 1과 엘라스틴 유전자 발현을 상향 조절하였다.
아쿠아포린(AQP)은 포유동물의 피부에서 발현되어 수분의 수송에 관여한다. AQP-3은 가장 풍부한 피부의 aquaglyceroporin으로 물과 글리세롤을 수송하며 피부 표피의 보습에 중요한 역할을 한다. 시험물질 B는 AQP-3의 유전자 발현을 상향 조절하였다. 위와 같은 연구결과는 시험물질 B가 자외선으로 인한 수분 손실로부터 피부를 보호하여 피부 보습을 유지하는 효과적임을 시사한다.
B. 자외선 자극에 의한 피부손상 방지 효과
시험물질이 세포주기, 광노화 유도물질의 유전자 발현, 세포 항산화 지표, 염증성 시토카인에 미치는 영향을 평가하였다.
사용 세포: RAW264.7, HDF 및 HaCat
그룹 설계: 총 7개의 그룹으로 나눔. 1~3번 그룹은 대조군으로 함. 1번 그룹은 시험물질로 처리하지 않고, UV 조사도 하지 않음. 2번과 3번 그룹은 UV 조사를 하고 2번에는 시험물질을 처리하지 않고 3번 그룹에는 일반적인 표준물질(Tiron, dexamethasone 1mg/ml)로 처리함. 4번과 5번 그룹은 각각 UV를 조사한 뒤에 높은 농도와 낮은 농도의 시험물질 A를 처리함. 6번과 7번 그룹에는 각각 UV를 조사한 뒤에 높은 농도와 낮은 농도의 시험물질 B를 처리함.
UV 조사에 자연 태양광에 대응하는 스펙트럼 범위(295-300nm)를 갖는 Solar simulator를 사용했으며, 시뮬레이터에는 315-380nm의 파장을 전달하는 UVA 흡수 H1/H2 필터를 장착함.
PI staining을 이용한 세포주기분석 (Flow cytometry): 프로피디움 요오드화물, 형광 핵산 염료 PI를 사용하여 세포 주기의 3가지 간기 중 하나에 있는 세포의 비율을 식별하는 세포 주기 분석 방법을 사용. HDF 세포를 페트리 디쉬에 배양하고 배지를 흡입한 뒤, 시험물질로 처리하고 배양함. 70% 에탄올로 고정하여 유동세포계수법으로 측정.
MMPs 유전자 발현 시험: MMP-1, MMP-3, MMP-10, MMP-13의 mRNA 발현 수준을 semi quantitative RT-PCR로 측정. 간단히 서술하면, 비처리군(대조군)과 처리군의 세포로부터 RNA를 분리하여 cDNA를 합성함. 50㎕의 반응 혼합물을 설계된 프라이머를 사용하여 HDF 및 RAW 264.7의 cDNA의 증폭시키기 위해 PCR을 적용하고 내부 대조군으로 세포 유지 유전자인 GAPDH를 각각의 반응과 함께 증폭시킴. gel 속의 앰플리콘은 alpha view software generated data를 기반으로 계산하고 분석함.
염증지표 평가: RAW 264.7세포 단층을 배양하고 세포를 각기 다른 비독성 농도의 시험물질로 처리하여 배양함. 상층액을 수집하고 원심 분리하여 ELISA 분석 수행. TNF-α, IL-1, IL-6, IL-10, IL-12의 수준 측정. 시험물질에 의해 조절된 수준을 대조군과 비교.
세포 항산화 지표 평가: HaCat 세포 단층을 배양하고 세포를 각기 다른 농도의 시험물질로 처리하여 배양함. 배양 24시간 후에 상층액을 수집하고 원심 분리하여 ELISA 분석. 흡광도 값으로부터 SOD, 카탈라아제, GPX 수준을 결정. 시험물질로 조절된 수준을 대조군과 비교.
<MMP 및 COX-2 유전자 발현에 미치는 영향>
결과를 하기 표 4 내지 표 5에 나타내었다.
시험물질 A 시험물질 B
농도 62.5㎍/ml 31.25 ㎍/ml 31.25㎍/ml 15.6 ㎍/ml
MMP-1,3,10,13의 유전자 발현 UV 대조군 대비 0.19, 0.03, 0.03, 0.05배 하향 조절됨 UV 대조군 대비 0.14, 0.01, 0.01, 0.03 배 하향 조절됨 UV 대조군 대비 0.54, 0.29, 0.26, 0.29배 하향 조절됨 UV 대조군 대비 0.52, 0.24, 0.23, 0.23배 하향 조절됨
시험물질 A 시험물질 B
농도 62.5㎍/ml 31.25 ㎍/ml 15.6㎍/ml 7.8 ㎍/ml
COX-2 유전자 발현 UV 대조군 대비 0.05배 하향 조절됨 UV 대조군 대비 0.03배 하향 조절됨 UV 대조군 대비 0.23배 하향 조절됨 UV 대조군 대비 0.20배 하향 조절됨
<항산화 지표에 미치는 영향>
시험물질 A는 두 농도 모두에서 UV 대조군 대비 유의한 변화가 없었다. 시험물질 B의 SOD, 카탈라아제, GPx 수준은 고농도(SOD 421.25±2.38, 카탈라아제 3.77±0.07, GPx 37.54±0.73)와 저농도(SOD 405.88±1.13, 카탈라아제 3.64±0.02, GPx 31.90±0.23)에서 모두 UV 대조군 대비 유의하게 증가하였다.
<염증성 시토카인에 미치는 영향>
시험물질 A는 두 농도 모두 IL-1, IL-6, IL-10, IL-12, and TNF-α활성도 수준을 억제하지 않았다. 시험물질 B는 UV 대조군과 비교하여 높은 농도에서 IL-1 (4.01±0.03), IL -6 (3.5±0.02), IL-10 (3.98±0.03), IL-12 (2.91±0.04), and TNF-α(3.47±0.10) 활성도 수준을 유의하게 억제하였으며, 낮은 농도에서도 IL-1 (4.24±0.08), IL -6 (3.66±0.04), IL-10 (4.15±0.06), IL-12 (3.07±0.02), and TNF-α(3.63±0.13) 활성도 수준을 유의하게 억제하였다.
피부 노화 과정의 외인자인 ‘광노화’는 지속적인 자외선 노출로 인해 발생한다. 자외선으로 유발되는 산화적/염증성 손상은 광노화의 병인에 중요한 역할을 한다. UV를 조사하면 섬유아세포와 염증세포에서 MMPs를 생성하는데, MMPs는 과도한 기질 분해를 유도하고 광노화가 진행되는 동안 발생하는 결합조직손상에 실질적으로 기여한다. 이 연구에서 시험물질 B는 대조군과 비교하여 효과적으로 MMPs 유전자 발현을 하향 조절하였다.
활성산소는 항산화물질인 SOD, 카탈라아제, GSH-Px에 의해 조절되는데 UV 조사는 이러한 항산화 시스템의 균형을 무너뜨리고 산화 스트레스는 피부 노화를 유발한다. 시험물질 B는 대조군과 비교하여 SOD, 카탈라아제, GSH-Px 수준을 유의하게 증가시켰다.
UV로 유발된 과도한 활성산소는 NF-kB의 활성을 촉진하며 이를 통해 다양한 전염증성 시토카인이 생성된다. 이러한 전염증성 시토카인은 세포괴사 및 세포자연사를 촉진한다. 시험물질 B는 대조군과 비교하여 전염증성 시토카인의 활성 수준을 유의하게 감소시켰다. 위와 같은 연구결과들은 시험물질 B가 자외선으로 인한 광노화로부터 피부를 보호하는 데 효과적임을 시사한다.
즉, 시험물질 B가 자외선으로 인한 광노화로부터 피부를 보호하는 데 효과적이다.
실험예 2. 동물 실험
A. 보습효과
쥐를 대상으로 시험물질이 보습효과가 있는지 잠재성을 평가하였다.
Study Title DETERMINATION OF SKIN HYDRATION POTENTIAL OF TEST PRODUCT AGAINST UV IRRADIATION IN MICE
연구목적 쥐를 대상으로 시험물질이 지닌 피부 보습 잠재성을 평가함
연구유형 동물시험
Species Mice Age 8 - 12 주령
Strain Swiss Albino Sex ▣ male □ female
시험물질 시험물질 A, 시험물질 B
투입형태 □ 식이 □ 음료 ▣ 강제경구 □ 기타
시
험
디
자
인		 대조군 1. 그룹 1: 시험물질 처리 X, 피부 면도 X, UV 조사 X (n=6, Normal 대조군)
2. 그룹 2: 시험물질 처리 X, 피부 면도 O (n=6, Sham 대조군)
3. 그룹 3: 시험물질 처리 X, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, Path 대조군)
4. 그룹 4: 표준물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, Hyaluronic acid 120 mg)
시험군 그룹 5: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 A 66.28 mg/kg)
그룹 6: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 A 133.57 mg/kg)
그룹 7: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 B 66.28 mg/kg)
그룹 8: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 B 133.57 mg/kg)
디자인 48마리의 쥐를 각각 6마리씩 8 그룹으로 나누고 그룹 3~8의 쥐는 마취 후 등 쪽 피부를 제모제를 사용하여 면도함. 제모제는 격일로 바르고 UV/Blue light를 15분간 조사함.
램프와 쥐의 등 사이의 간격은 35cm로 유지시키며 6주간 일주일에 5번씩 수행함.
쥐는 표준물질과 시험물질로 6주간 처치함. Normal 대조군과 Sham 대조군, Pathological 대조군에는 아무 처치도 하지 않음.
처치기간 동안 시험부위의 피부를 관찰하고 경피수분손실량을 측정함.
6주 후 쥐를 마취하고 혈액 샘플을 수집, 쥐를 희생시킨 후 하여 피부를 분리하여 생화학적 분석을 진행		 섭취량 그룹 5: A 66.28 mg/kg/일
그룹 6: A 133.57 mg/kg/일
그룹 7: B 66.28 mg/kg/일
그룹 8: B 133.57 mg/kg/일
섭취기간 42일
바이오마커 TEWL(경피수분손실량), 각질 수분량, 피부 탄력, 콜라겐 분해효소, Collagen type 1 mRNA 발현, 히알루론산, 히드록시프롤린, 세라마이드
통계처리 One way anova, Dunnet test
결과는 다음과 같다.
1. TEWL(경피수분손실량)
UV를 조사한 path 대조군에서 Sham 대조군 대비 TEWL이 유의하게 증가함(121%).
표준물질로 처치한 군에서는 Sham 대조군과 비교하여 TEWL이 40% 증가하여 Path 대조군보다 유의하게 감소함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 Path 대조군과 유의한 차이가 없음.
시험물질 B는 Path 대조군대비 용량 의존적으로 TEWL을 감소시켜, 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Sham 대조군보다 각각 76.95, 52.88% 증가함.
2. 각질 수분량
Sham 대조군과 비교하여 Path 대조군에서 각질 수분량이 유의하게 감소함(52.04%).
표준물질로 처치한 군에서는 수분 손실을 유의하게 감소시켜 Sham 대조군 대비 각질 수분량이 5.33% 감소함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 Path 대조군과 유의한 차이가 없음.
시험물질 B는 용량 의존적으로 수분 손실을 억제하여 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 각각 Sham 대조군 대비 각질 수분량이 22.92%, 14.27% 감소함.
3. 피부 탄력
Normal 대조군 대비 Path 대조군의 피부 탄력도(0.481±0.01)가 유의하게 감소함.
Path 대조군과 비교하여 표준물질로 처치한 그룹에서는 피부 탄력도(0.794±0.015)의 감소가 유의하게 억제되어 Normal 대조군과 비슷한 정도를 유지함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 피부탄력도를 유지하는데 실패하여 Path 대조군과 비교했을 때 그 차이가 유의하지 않음.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 용량 의존적으로 피부 탄력도를 정상화 하여 각각의 피부 탄력도가 0.716±0.02, 0.757±0.004로 Path 대조군보다 유의하게 높았음.
4. 콜라겐 분해효소
Path 대조군의 콜라겐 분해효소 수준은 2.18713±0.07 ng/ml로 대조군보다 유의하게 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 콜라겐 분해효소가 1.42485±0.01 ng/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 감소함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 콜라겐 분해효소를 억제하는데 실패하여 Path 대조군과의 차이가 유의하지 않음.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 각각 콜라겐 분해효소가 1.80785±0.09, 1.57347±0.02 ng/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 감소함.
5. Collagen type 1 mRNA 발현
시험물질 A는 Path 대조군과 비교하여 66.28, 133.57 mg/kg 투여량에서 Collagen type 1 mRNA 발현 수준을 각각 0.12, 0.08배 상향 조절함.
시험물질 B는 Path 대조군과 비교하여 66.28, 133.57 mg/kg 투여량에서 Collagen type 1 mRNA 발현 수준을 각각 0.39, 0.31배 상향 조절함.
6. 히알루론산
Path 대조군의 히알루론산 수준은 1.46±0.01 Pg/ml로 Normal 대조군(1.79±0.01)보다 유의하게 감소함.
표준물질로 처치한 군에서는 히알루론산이 1.69±0.004 Pg/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 증가함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 Path 대조군과의 차이가 유의하지 않음.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 히알루론산이 각각 1.59±0.08, 1.63±0.01 Pg/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 증가함.
7. 히드록시프롤린
Path 대조군의 히드록시프롤린 수준은 1.09±0.004 ng/ml로 Normal 대조군(1.29±0.01)보다 유의하게 감소함.
표준물질로 처치한 군에서는 히드록시프롤린이 1.22±0.001 ng/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 증가함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 Path 대조군과의 차이가 유의하지 않음.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 히드록시프롤린이 각각 1.16±0.04, 1.19±0.004 ng/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 증가함.
8. 세라마이드
Path 대조군의 세라마이드 수준은 2.59±0.02 ng/ml로 Normal 대조군(2.23±0.01)보다 유의하게 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 세라마이드가 2.44±0.02 ng/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 감소함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 Path 대조군과의 차이가 유의하지 않음.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 세라마이드 수준이 각각 2.52±0.01, 2.50±0.004 ng/ml로 Path 대조군과 비교하여 유의하게 감소함.
피부의 건조함은 pH 변화와 TEWL(경피수분손실량), 각질층과 같은 피부장벽 기능과 산화 스트레스 징후와 같은 다양한 피부 변화와 관련 있다. 콜라겐은 피부의 구조적 기능적인 단위로 광노화로 인한 콜라겐 합성의 하향 조절 및 콜라겐 분해효소의 증가는 피부 탄력을 감소시키고 주름을 발생시킨다. 상기 실험에 의하면 본 발명의 시험물질은 광노화 및 피부 보습에 관한 지표를 일관적으로 개선시킴으로써, 자외선에 의한 수분 손실로부터 피부를 보호하고 피부 건강을 유지하는데 도움을 줄 수 있다.
B. 자외선 자극에 의한 피부손상 방지 효과
쥐를 대상으로 시험물질이 자외선에 대한 광노화를 예방할 수 있는지 잠재성을 평가하였다.
Study Title ANTI-PHOTOAGING POTENTIAL OF TEST PRODUCT AGAINST UV IRRADIATION IN MICE
연구목적 쥐를 대상으로 시험물질이 자외선에 대한 광노화를 예방할 수 있는지 잠재성을 평가함
연구유형 동물시험
Speices Mice Age 8 - 12 주령
Strain Swiss Albino Sex ▣ male □ female
시험물질 시험물질 A, 시험물질 B
투입형태 □ 식이 □ 음료 ▣ 강제경구 □ 기타
시
험
디
자
인		 대조군 1. 그룹 1: 시험물질 처리 X, 피부 면도 X, UV 조사 X (n=6, Normal 대조군)
2. 그룹 2: 시험물질 처리 X, 피부 면도 O (n=6, Sham 대조군)
3. 그룹 3: 시험물질 처리 X, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, Path 대조군)
4. 그룹 4: 표준물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, Hyaluronic acid 120 mg)
시험군 그룹 5: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 A 66.28 mg/kg)
그룹 6: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 A 133.57 mg/kg)
그룹 7: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 B 66.28 mg/kg)
그룹 8: 시험물질 처리 O, 피부 면도 O, UV 조사 O (n=6, 시험물질 B 133.57 mg/kg)
디자인 48마리의 쥐를 각각 6마리씩 8 그룹으로 나누고 그룹 3~8의 쥐는 마취후 등쪽 피부를 제모제를 사용하여 면도함. 제모제는 격일로 바르고 UV/Blue light를 15분간 조사함.
램프와 쥐의 등 사이의 간격은 35cm로 유지시키며 6주간 일주일에 5번씩 수행함.
쥐는 표준물질과 시험물질로 6주간 처치함. Normal 대조군과 Sham 대조군, Pathological 대조군에는 아무 처치도 하지 않음.
처치기간 동안 시험부위의 피부를 관찰하고 주름에 대해 점수를 산정함.
6주 후 쥐를 마취하고 혈액 샘플을 수집하여 생화학적 분석을 진행. 쥐를 희생시킨후 피부를 분리하여 병리조직학적 평가를 진행. 		섭취량 그룹 5: A 66.28 mg/kg/일
그룹 6: A 133.57 mg/kg/일
그룹 7: B 66.28 mg/kg/일
그룹 8: B 133.57 mg/kg/일
섭취기간 42일
바이오마커 피부 주름 점수, Ki-67 발현, MMPs(MMP-1, 3, 10, 13), 전염증성 시토카인(IL-1, 6, 10, 12), TNF-α, COX 2, 8-OHG, SOD, GPx, 카탈라아제, Procollagen type 1, 표피·진피두께
통계처리 one way anova, Dunnet test
결과는 다음과 같다.
1. 피부 주름
UV를 조사한 path 대조군(15.33±0.49)에서 대조군(1.33±0.21) 대비 피부 주름 점수가 유의하게 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 UV를 조사한 대조군과 비교하여 Normal 대조군과 비슷한 정도로 주름 형성이 축소됨(5.83±0.48).
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 UV 조사로 인한 주름 형성을 감소시키는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 path 대조군과 비교하여 UV 조사로 인한 피부 주름 점수를 각각 11.67±0.67, 9.17±0.40 % 감소시킴.
2. Ki-67 발현
대조군(10.09±0.88)과 비교하여 path 대조군(113.10±6.40)에서 Ki-67의 발현이 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 UV 조사로 인한 Ki-67의 발현을 유의하게 하향조절하여 정상화 시킴(12.93±0.98).
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 Ki-67의 발현을 억제하여 정상화시키는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Ki-67 발현을 유의하게 억제함(각각 32.83±7.90, 20.28±2.65).
3. MMPs(MMP-1, MMP-3, MMP-10, MMP-13) 수준
대조군(MMP-1 1.78±0.01, MMP-3 3.42±0.17, MMP-10 4.40±0.17, MMP-13 3.28±0.28)과 비교하여 Path 대조군에서 MMPs 수준이 유의하게 증가함 (MMP-1 2.06±0.01, MMP-3 7.60±0.18, MMP-10 9.55±0.29, MMP-13 10.88±0.46) 수준이 유의하게 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 Path 대조군과 비교하여 MMP-1(1.87±0.02), MMP-3(5.52±0.12) MMP-10(6.29±0.18), MMP-13(5.64±0.28)의 활성 수준을 유의하게 억제함.
시험물질 A는 두 가지 투여량에서 모두 MMP-1, 3, 10, 13의 활성을 억제하는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Path 대조군과 비교하여 MMP-1(각각 2.00±0.01, 1.90±0.01), MMP-3(각각 6.86±0.18, 5.86±0.11), MM-10(각각 8.14±0.30, 7.46±0.10), MMP-13(각각 7.98±0.24, 6.61±0.18) 활성을 유의하게 억제함.
4. 전염증성 시토카인(IL-1, 6, 10, 12) 및 TNF-α, COX 2
UV를 조사한 Path 대조군에서 IL-1(4.61±0.05→6.25±0.05), IL-6(1.51±0.02→2.47±0.08), IL-10(1.61±0.02→2.59±0.04), IL-12(1.32±0.02→2.08±0.01), TNF-α(1.54±0.01→2.80±0.14), COX 2(1.30±0.004→1.71±0.01)의 수준이 대조군과 비교하여 유의하게 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 Path 대조군과 비교하여 IL-1(5.09±0.07), IL-6(1.80±0.01), IL-10(1.85±0.01), IL-12(1.72±0.02), TNF-α(1.77±0.01), COX 2(1.49±0.004) 활성 수준이 유의하게 억제됨.
시험물질 A는 두가지 투여량에서 모두 IL-1, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, COX 2 활성을 억제하는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Path 대조군과 비교하여 IL-1(각각 5.98±0.04, 5.38±0.03), IL-6(각각 2.28±0.01, 1.95±0.01), IL-10(각각 2.19±0.01, 1.96±0.01), IL-12(각각 1.67±0.04, 1.54±0.01), TNF-α(각각 1.95±0.01, 1.88±0.004), COX 2(각각 1.67±0.004, 1.54±0.01) 활성을 유의하게 억제함.
5. 8-OHG
UV를 조사한 Path 대조군에서 8-OHG 수준은 대조군과 비교하여 유의하게 증가함(3.58±0.05→4.40±0.03).
표준물질로 처치한 군에서는 Path 대조군과 비교하여 8-OHG 수준이 유의하게 감소함(3.90±0.03).
시험물질 A는 두가지 투여량에서 모두 8-OHG 수준을 억제하는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Path 대조군과 비교하여 8-OHG 수준(각각 4.06±0.03, 3.96±0.02)을 유의하게 감소시킴.
6. SOD, GPx, 카탈라아제
UV를 조사한 Path 대조군에서 SOD(2.59±0.03→2.27±0.01), GPx(1.53±0.01→1.17±0.02), 카탈라아제(2.40±0.09→1.72±0.01) 수준은 대조군과 비교하여 유의하게 감소함.
표준물질로 처치한 군에서는 Path 대조군과 비교하여 SOD(2.46±0.01), GPx(1.45±0.01), 카탈라아제(2.12±0.03) 수준이 유의하게 증가함.
시험물질 A는 두가지 투여량에서 모두 SOD, GPx, 카탈라아제 수준에 유의한 변화 없음.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Path 대조군과 비교하여 SOD(각각 2.34±0.01, 2.41±0.02), GPx(각각 1.22±0.01, 1.40±0.02), 카탈라아제(각각 1.89±0.02, 2.01±0.02) 수준을 유의하게 증가시킴.
7. Procollagen type 1
UV를 조사한 Path 대조군에서 Procollagen type 1 수준은 대조군과 비교하여 유의하게 감소함(3.71±0.09→2.28±0.02).
표준물질로 처치한 군에서는 Path 대조군과 비교하여 Procollagen type 1 수준이 유의하게 증가함(3.34±0.15).
시험물질 A는 두가지 투여량에서 모두 Procollagen type 1 수준을 증가시키는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Path 대조군과 비교하여 Procollagen type 1 수준(각각 2.81±0.08, 3.29±0.10)을 유의하게 증가시킴.
8. 표피·진피두께
UV를 조사한 Path 대조군에서 진피두께(242.1±1.66→622.5±6.56)와 표피두께(62.7±2.33→131.2±5.35)가 대조군과 비교하여 유의하게 증가함.
표준물질로 처치한 군에서는 Path 대조군과 비교하여 진피두께(322.3±3.32), 표피두께(91.4±1.31)가 유의하게 감소함.
시험물질 A는 두가지 투여량에서 모두 표피두께, 진피두께를 감소시키는데 실패함.
시험물질 B는 66.28, 133.57 mg/kg 투여시 Path 대조군과 비교하여 진피두께(각각 450.7±11.56, 334.4±6.56), 표피두께(각각 117.3±1.05, 104.7±3.55)를 유의하게 감소시킴.
자외선으로 인한 산화적(8-OHG), 염증성 손상은 광노화의 병인이 된다. 일반적으로 활성산소 수준은 항산화물질인 SOD와 카탈라아제, GPx로 조절되는데 이러한 항산화 시스템이 자외선으로 인해 손상되면 피부에 산화스트레스가 발생되고, 염증성 시토카인이 생성되며 주름과 진피·표피 두께 증가와 같은 피부 노화현상을 유발한다. 상기 실험결과 본 발명의 시험물질은 다양한 피부 노화 지표를 일관적으로 개선시킴으로써 자외선에 의한 피부 손상으로부터 피부 건강을 유지할 수 있음을 보여준다.

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  5. 루테인과 지아잔틴을 포함하는 마리골드꽃 추출물 및 카르노식 애시드를 포함하는 로즈마리 추출물을 포함하는 피부건강용 조성물로
    상기 마리골드꽃 추출물 및 로즈마리 추출물이 1:6~1:10의 중량비로 포함되고,
    마리골드꽃 추출물이 루테인과 지아잔틴을 80중량%이상 포함하고, 마리골드꽃 추출물이 루테인 및 지아잔틴을 15:1~20:1 중량비로 포함하고
    상기 로즈마리 추출물이 카르노식 애시드를 6중량%이상 포함하고
    마리골드꽃 추출물이 마리골드꽃을 헥산 용매를 사용하여 추출온도 10∼80℃에서 1∼10시간 동안 추출하여 얻고,
    로즈마리 추출물이 로즈마리를 주정으로 10-80℃ 및 1-10시간 동안 추출하여 얻는 것을 특징으로 하고,
    자외선으로 인한 피부 손상 방지 및 피부보습용이고 경구용인 피부건강용 조성물
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  8. 청구항 5의 피부건강용 조성물을 포함하는 피부건강기능식품으로 피부건강기능식품의 1일 섭취량은 마리골드꽃 추출물 및 로즈마리 추출물 포함 피부건강용 조성물 중량기준 150~300mg임을 특징으로 하는 피부건강기능식품
  9. 청구항 8에 있어서, 피부건강기능식품이 정제, 하드캡슐, 소프트캡슐, 젤리, 액상, 분말, 페이스트, 겔, 환, 과립 또는 시럽 형태인 피부건강기능식품
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999020587A1 (en) * 1997-10-21 1999-04-29 Office Of Technology Liaison Process for extraction and purification of lutein, zeaxanthin and rare carotenoids from marigold flowers and plants
JP2004518682A (ja) * 2001-01-30 2004-06-24 サビンサ コーポレーション 安定なルテインおよびルテイン誘導体の組成物を得るためのプロセス
KR20060085229A (ko) * 2006-07-06 2006-07-26 (주)에취제이시 금잔화에서 추출과 비누화를 동시에 수행하고, 유해한용매를 사용하지 않고 고순도 루테인을 제조하는 방법
KR100755190B1 (ko) 2006-01-24 2007-09-04 주식회사 참선진 종합식품 장미꽃잎 열수추출물 및 이를 이용한 기능성음료 제조방법
KR20080108718A (ko) 2007-06-11 2008-12-16 한국콜마 주식회사 천연 연화식물체를 포함하는 피부 마사지 화장료 조성물 및그의 제조방법
KR20130077953A (ko) * 2011-12-30 2013-07-10 (주)아모레퍼시픽 카르노스산 또는 그 유도체를 함유하는 엘라스테이즈 활성 저해제
KR20190072937A (ko) 2017-12-18 2019-06-26 주식회사 웰파인 식용꽃 추출물과 이를 유효성분으로 함유하는 항산화 기능성 음료 및 식품 조성물 및 그 제조방법

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999020587A1 (en) * 1997-10-21 1999-04-29 Office Of Technology Liaison Process for extraction and purification of lutein, zeaxanthin and rare carotenoids from marigold flowers and plants
JP2004518682A (ja) * 2001-01-30 2004-06-24 サビンサ コーポレーション 安定なルテインおよびルテイン誘導体の組成物を得るためのプロセス
KR100755190B1 (ko) 2006-01-24 2007-09-04 주식회사 참선진 종합식품 장미꽃잎 열수추출물 및 이를 이용한 기능성음료 제조방법
KR20060085229A (ko) * 2006-07-06 2006-07-26 (주)에취제이시 금잔화에서 추출과 비누화를 동시에 수행하고, 유해한용매를 사용하지 않고 고순도 루테인을 제조하는 방법
KR20080108718A (ko) 2007-06-11 2008-12-16 한국콜마 주식회사 천연 연화식물체를 포함하는 피부 마사지 화장료 조성물 및그의 제조방법
KR20130077953A (ko) * 2011-12-30 2013-07-10 (주)아모레퍼시픽 카르노스산 또는 그 유도체를 함유하는 엘라스테이즈 활성 저해제
KR20190072937A (ko) 2017-12-18 2019-06-26 주식회사 웰파인 식용꽃 추출물과 이를 유효성분으로 함유하는 항산화 기능성 음료 및 식품 조성물 및 그 제조방법

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
박은선 외 2인. 메리골드(Tagetes L.)와 카렌듈라(Calendula officinalis L.) 추출물이 인간 섬유아세포에서 콜라겐 생성 및 MMP-1 발현에 미치는 영향. Journal of Oil & Applied Science. Vol. 34, No. 4, pp. 769~777(2017.12.) 1부.* *

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