KR102155849B1 - 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도 - Google Patents

유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102155849B1
KR102155849B1 KR1020190077858A KR20190077858A KR102155849B1 KR 102155849 B1 KR102155849 B1 KR 102155849B1 KR 1020190077858 A KR1020190077858 A KR 1020190077858A KR 20190077858 A KR20190077858 A KR 20190077858A KR 102155849 B1 KR102155849 B1 KR 102155849B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
lactobacillus plantarum
srcm102369
lactic acid
activity against
Prior art date
Application number
KR1020190077858A
Other languages
English (en)
Inventor
김은지
조승화
정도연
조성호
Original Assignee
재단법인 발효미생물산업진흥원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 재단법인 발효미생물산업진흥원 filed Critical 재단법인 발효미생물산업진흥원
Priority to KR1020190077858A priority Critical patent/KR102155849B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102155849B1 publication Critical patent/KR102155849B1/ko

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/10Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23BPRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/10Preserving with acids; Acid fermentation
    • A23B7/105Leaf vegetables, e.g. sauerkraut
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065Microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00Function of food ingredients
    • A23V2200/30Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/32Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the digestive tract
    • A23V2200/3204Probiotics, living bacteria to be ingested for action in the digestive tract
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/169Plantarum
    • A23Y2220/67
    • C12R1/25
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus
    • C12R2001/25Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 유해 미생물에 대한 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주(KFCC11830P) 및 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물 및 김치 발효용 스타터 조성물에 관한 것이다.

Description

유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369 균주 및 이의 용도{Lactobacillus plantarum SRCM102369 strain having antimicrobial activity against pathogenic microorganism and lactic acid production ability and uses thereof}
본 발명은 유해 미생물에 대한 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주(KFCC11830P) 및 이의 용도에 관한 것이다.
유산균은 다양한 식품의 발효에 관여하여 독특한 풍미를 부여할 뿐 아니라, 항균성 물질을 생산하여 식품의 저장성 및 안정성을 증대시킨다. 이러한 유산균이 생산하는 항균성 물질로는 젖산 등의 유기산 이외에 과산화수소, 디아세틸, 박테리오신 등이 알려져 있다.
프로바이오틱스(Probiotics)란 살아있는 생균제로서 사람 및 동물에 투여된 생균이 장내의 소화관 벽에 밀집, 정착하여 유해균이 정착하지 못하게 하는 작용을 하며, 유산을 생성하여 장내의 pH를 낮추어서 유해세균이 증식하지 못하게 한다. 또한, 투여된 생균제는 박테리오신(Bacteriocin) 혹은 과산화물을 생성하여 병원균의 증식을 억제하며 영양분의 흡수를 담당하는 장융모의 활동을 도와준다. 이밖에도, 생균제는 영양소의 흡수와 이용을 돕는 물질을 생성하고, 사료요구율을 개선시키며, 병원균이 생성하는 독성물질을 중화하는 물질을 생성하기도 한다. 생균제는 대체로 동물 혹은 어류가 스트레스로 인한 소화관의 유용 균주 감소를 억제할 목적으로 이용되며, 항생물질을 경구투여하고 난 후 병원균보다 먼저 세균이 없는 소화관 벽에 부착하여 병원균이 정착하는 것을 방지한다.
한편, 유산균은 경구를 통해 장에 도달하기까지 생존율이 낮기 때문에 대부분의 경우 캡슐이나 밀크제제와 혼합하여 사용되고 있으나 아직까지 그 효과는 기대에 미치지 못하고 있다. 유산균으로 가장 많이 사용되는 균주는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus), 락토바실러스 카제이(L. casei) 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속들인데, 이들 균주는 대부분 위산과 담즙산에 저항성이 있어 생존한 상태로 장에 도달할 수 있다는 특징이 있다. 국내의 경우, 김치, 장류 및 젓갈류 등에서 분리한 내산성이 강한 균주에 대한 연구가 진행되면서 다양한 균주가 확보되고 있으나, 아직까지는 일본 등 다른 국가에 비하면 상당히 열악한 실정이다. 따라서 장까지 도달하는 생존율을 높일 수 있는 내산성 및 내답즙성이 강한 균주를 확보하는 것은 유산균 관련 분야에서 매우 중요하다고 할 수 있다.
한국등록특허 제1235561호에는 항바이러스 및 항균 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸 CLP-1 균주가 개시되어 있고, 한국공개특허 제2019-0070676호에는 항균 활성을 나타내는 락토바실러스 플란타룸 균주가 개시되어 있으나, 본 발명의 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369 균주와는 상이하다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 안출된 것으로서, 본 발명에서는 유해 미생물에 대한 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 갖는 유산균을 선별하고자 하여, 전통식품으로부터 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주를 분리하였고, 상기 균주는 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 지니는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 유해 미생물에 대한 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주(KFCC11830P)를 제공한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 발효용 스타터 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 프로바이오틱 조성물을 제공한다.
본 발명의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주는 유해 미생물에 대한 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 가지므로, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 미생물 제제는 식품, 식품 첨가제, 사료 첨가제 또는 의약품으로 매우 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369의 계통수(phyrogenetic tree)이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 에스케리키아 콜리(Escherichia coli), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 리스테리아 이바노비(Listeria ivanovii) 및 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)에 대한 항균 활성, 내산성, 내담즙성, 장내 부착능, 유산 생성능 및 프로테아제 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주(KFCC11830P)를 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 균주에서, 상기 내산성은 pH 2~3에 대한 내산성이며, 내담즙성은 0.1~1% 담즙산에 대한 내담즙성일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 유해 미생물에 대한 항균용 조성물을 제공한다.
"항균 (antimicrobial)"의 의미는 어떤 농도에서 미생물의 성장 또는 생존을 감소, 방지, 억제, 또는 제거하는 능력을 의미한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 항균용 조성물에서, 상기 유해 미생물은 에스케리키아 콜리(Escherichia coli), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 리스테리아 이바노비(Listeria ivanovii) 및 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 항균용 조성물에서, 상기 조성물은 바람직하게는 식품, 식품 첨가제, 사료 첨가제 또는 의약품 형태일 수 있고, 상기 식품은 유제품(우유, 두유, 가공우유), 발효유(액상 요구르트, 호상 요구르트), 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 상기 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주를 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 균주를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 균주는 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 사료 첨가제는 기초사료에 일정 비율로 첨가하는 것이다. 상기 기초사료는 주성분이 옥수수, 대두박, 유청, 어분, 당밀, 소금, 비타민 프리믹스 및 미네랄 프리믹스 등으로 이루어질 수 있다. 비타민 프리믹스는 비타민 A, 비타민 D, 비타민 E, 리보프라빈 및 나이아신으로 구성될 수 있으며, 미네랄 프리믹스는 망간, 철, 아연, 칼슘, 구리, 코발트 및 셀레니늄 등으로 구성될 수 있다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 발효용 스타터 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 김치 발효용 스타터(starter)란 김치 발효를 위해 발효에 관여하는 미생물을 포함하는 제제 또는 조성물을 의미한다. 김치 발효 시 첨가함으로써 발효된 김치에서 생장할 수 있는 미생물 또는 우점종으로 생장할 수 있는 미생물을 제공하기 위하여 사용된다. 상기 김치 발효용 스타터를 사용하여 김치를 제조하는 경우, 상기 김치 발효용 스타터에 포함된 미생물에 의하여, 김치를 속성으로 발효시키는 목적을 달성할 수 있다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 프로바이오틱 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 외에 통상적인 약학적 담체 및 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이러한 조성물은 통상적인 프로바이오틱 조성물 제조방법에 따라 열건조 또는 동결-건조하여 생균제 형태로 제조하여 이용할 수 있다.
상기와 같은 우수한 프로바이오틱 효과로 인해 상기 균주는 프로바이오틱 조성물 제조에 이용할 수 있으며, 특히, 우수한 효과로 인해서 다양한 프로바이오틱 조성물을 포함하는 식품, 의약품, 화장품, 건강식품 등의 제조에 이용될 수 있다.
본 발명의 프로바이오틱 조성물이 포함되는 식품, 의약품, 화장품, 건강식품 등의 제조는 업계에서 일반적으로 실시하는 방법을 통하여 제조될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 묵은지 페이스트 소스 제조
(1) 배추를 10%(w/v) 소금물에 20~25℃에서 8~10시간 동안 절이고 세척하여 배추 내 염분 농도가 1.8%(w/w)가 되도록 탈염시켰다.
(2) 김치 혼합물 총 중량 기준으로, 상기 (1)단계의 탈염시킨 절임 배추 69.6 중량%에 다진 마늘 1 중량%, 다진 생강 0.3 중량%, 채썬 무 14.6 중량%, 세절한 대파 0.5 중량%, 갈은 배 0.8 중량%, 멸치액젓 2 중량%, 고과당(high fructose corn syrup, 55 brix) 0.3 중량%, 고춧가루 1.5 중량%, 설탕 0.3 중량%, 찹쌀가루 0.3 중량%, 고추박(생고추를 갈아서 즙을 짜고 남은 박) 3.9 중량%, 정제수 3.9 중량% 및 105~6 CFU/ml 농도의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주(기탁번호: KFCC11830P) 1 중량%를 버무려 김치 혼합물을 제조하였다.
(3) 상기 (2)단계의 제조한 김치 혼합물을 30℃에서 1일 동안 숙성시킨 묵은지를 분쇄하였다.
(4) 상기 (3)단계의 분쇄한 묵은지를 80℃에서 20분 동안 가열하면서 농축하였다.
실시예 1. 유산균의 분리, 동정 및 계통도
국내에 있는 가정에서 담근 전통식 된장, 간장, 고추장, 누룩, 갓김치, 총각김치, 배추김치, 갓김치, 알타리 김치 등의 시료 100여 종을 사용하여 각 시료 10 g을 멸균 생리식염수 90 ml에 단계 희석하여 lactobacilli MRS(Difco, MI, USA) 배지에 도말하여 37℃에서 48시간 배양하였다. 각각의 균주 200여 종을 순수 분리하였고, 그 중 내산성, 내담즙성에서 활성이 뛰어난 균주를 마크로젠(Seoul, Korea)에 16S rDNA sequence 분석을 의뢰하였고, 분석된 염기서열은 NCBI의 data base와 비교하여 동정하였다. 16S rRNA 염기서열 분석을 위해 universal 프라이머인 27F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'; 서열번호 2)와 1492R (5'-GGTTAC CTTGTTACGACTT-3'; 서열번호 3)을 사용하여 유전자를 증폭 후 염기서열을 해독하였다. 염기서열의 chromatogram을 이용하여 gap을 최소화한 후 NCBI에서 서열 일치도가 높은 표준 균주들의 16S rRNA 유전자 염기서열을 확보하여 계통도를 작성하였다. 계통도 분석은 tamura-Nei 모델에 기초한 maximum likelihood 방법을 사용하여 분석하였고, 산출한 각각의 계통수에서 각 분지에 대한 통계학적 신뢰도를 산출하기 위해 bootstrap 분석을 1,000회 실행하였으며, 분석은 MEGA 7.0.26 program을 사용하였다.
균주 선발을 위한 실험 균주 리스트
No. 균주명 strain
1 Lactobacillus brevis EJ1895
2 Lactobacillus sakei EJ5384
3 Leuconostoc mesenteroides EJ4682
4 Lactobacillus plantarum SRCM102369
그 결과, 본 발명의 SRCM102369 균주는 16S rRNA 유전자 DNA 서열(서열번호 1) 분석에서 락토바실러스 플란타룸 CIP 및 JCM 1149 균주와 가장 높은 유사도를 보였다. 계통수 분석의 결과도 본 발명의 SRCM102369 균주가 락토바실러스 플란타룸 CIP 및 JCM 1149 균주와 가장 가까운 근연 균주임을 확인하였다(도 1). 또한 본 발명자들은 동정한 균주가 기존에 존재하지 않는 신규한 균주임을 확인함으로써, 2019년 06월 19일 한국미생물보존센터(KCCM)에 기탁하여 기탁번호 KFCC11830P를 부여받았다.
이하 본 발명에서는 상기 동정한 신균주를 “락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369”로 명명하였다.
실시예 2. 내산성 내담즙성 측정
선별 균주 내산성 평가는 pH 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 (in 5N HCl)로 조정한 MRS broth에 위산에 대한 저항성을 확인할 균주를 접종하여 30분 정치 후, 시료를 회수하여 생균수를 측정하였다. 대조구와 비교하여 생균수가 증가한 실험구를 내산성을 가진 것으로 평가하였다. 내담즙성 평가를 하기 위하여 oxgall(Neogen, Lansing, MI, USA)을 0.1%, 0.3%, 0.5%, 1.0%의 농도로 첨가한 MRS broth와 oxgall을 첨가하지 않은 MRS broth에 균주를 접종하여 37℃에서 6시간 배양하여 대조구와 비교하여 내담즙성을 평가하였다.
내산성 확인(Unit: Log CFU/ml)
Strains Survival of cells
pH 2.0 pH 3.0 pH 4.0 pH 5.0 pH 6.5
SRCM102369 4.00±0.07 8.00±0.03 7.11±0.21 8.35±0.21 8.21±0.00
EJ1895 3.30±0.05 7.19±0.12 7.40±0.24 7.34±0.11 8.01±0.02
EJ5384 3.30±0.05 6.79±0.06 7.51±0.31 7.41±0.21 7.56±0.03
EJ4682 3.00±0.01 7.41±0.07 7.40±0.15 7.52±0.64 8.11±0.09
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주는 pH 2~3의 조건에서 다른 균주에 비해 높은 생존율을 나타내어, 내산성이 있음을 확인할 수 있었다.
내담즙성 확인(Unit: Log CFU/ml)
Strains Survival of cells
0 0.1% 0.3% 0.5% 1.0%
SRCM102369 8.56±0.02 8.53±0.14 8.47±0.12 8.60±0.01 8.73±0.04
EJ1895 8.47±0.02 8.58±0.05 8.26±0.11 8.64±0.05 8.53±0.01
EJ5384 8.40±0.00 8.20±0.12 8.27±0.03 7.96±0.15 7.85±0.01
EJ4682 8.37±0.15 8.51±0.16 8.33±0.00 8.01±0.00 7.95±0.05
또한, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369 균주는 옥스갈 0.1~1% 농도에서 높은 농도로 생존함을 확인하여 내담즙성을 보유한 것으로 판단되었다.
실시예 3. 세포 표면 소수성
세포의 장내 부착성은 세포표면의 조성 및 구조에 따라 많은 영향을 받아 세포표면의 소수성이 주요한 요인으로 알려져 있다. 용매에 대한 세포 표면 소수성 (cell-surface hydrophobicity) 검사는 Doyle 등의 방법으로 실시하였다. 각각의 균주를 MRS broth에 접종한 뒤 37℃에서 18시간 배양하였다. 배양액의 균체 회수한 후, PBS로 두번 세척한 다음 같은 용액으로 현탁하였다. 현탁액과 클로로포름(Sigma aldrich)을 각각 1:1의 비율로 첨가한 다음 2분 동안 볼텍싱 후, 30분 동안 상온에 방치하였다. 현탁액(OD 580 nm reading 1)과 분리된 층에서 수용액 층(OD 580 nm reading 2)에 대한 흡광도를 580 nm에서 측정하였으며, 소수성은 다음과 같이 계산하여 측정하였다.
소수성(hydrophobicity, %) = [OD 580 nm reading 1 - OD 580 nm reading 2] / OD 580 nm reading 1 × 100
세포 표면 소수성(%)
Strains Hydrophobicity
SRCM102369 97.73±3.18
EJ1895 76.78±1.34
EJ5384 83.51±2.24
EJ4682 71.25±1.65
그 결과, 다른 균주에 비해 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369 균주가 소수성이 가장 높은 것으로 확인되어 장내 부착성이 높을 것으로 예상되었다.
실시예 4. 항균력 조사
항균 활성은 디스크확산법(paper disc method)을 이용하여 조사하였다. 에스케리키아 콜리(Escherichia coli) ATCC 10798, 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus) KCTC1056, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) KCCM 11593, 리스테리아 이바노비(Listeria ivanovii) KCTC34440, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) ATCC11778 및 살모넬라 타이피(Salmonella typhi) KCTC1926에 대한 선별 균주의 항균력을 조사하였다. 선별 균주를 37℃에서 24시간 배양한 후 0.4 ㎛ 멤브레인 필터(Millipore, Membrane filter, Ireland)를 이용하여 제균한 상등액을 시료로 사용하여 항균력을 측정하였다. 각각의 지시균주가 105 CFU/ml로 도말된 고체배지에 8 mm 직경의 페이퍼 디스크(Advantec, Tokyo, Japan)를 놓고 시료 100 ㎕씩 분주하여 생육저지환을 측정하였다.
항균력 조사
Strains E. coli
ATCC 10798
M. luteus
KCTC 1056
Staphy. aureus KCCM 11593 L. invanovii KCTC 3444 S. enterica serovar. Typhi KCTC 1926 B. cereus ATCC 11778
SRCM102369 ++ ++ + ++ - +
EJ1895 + + + ++ - +
EJ5384 ++ + + + - +
EJ4682 + + + + - +
+, positive activity; -, negative activity.
그 결과, 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369 균주는 에스케리키아 콜리(Escherichia coli), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 리스테리아 이바노비(Listeria ivanovii) 및 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)에 대한 항균 활성을 지니는 것을 확인하였다.
실시예 5. 효소활성
프로테아제(protease) 활성을 확인하기 위하여 2% 탈지유(skim milk)가 첨가된 BHI agar(Brain Heart Infusion medium)에 균주를 투스픽(toothpick) 법으로 배지에 접종한 다음 37℃에서 48시간 배양하였다. 이후 투명환의 생성 여부를 확인하였다.
프로테아제 활성(mm)
Strains Protease activity
SRCM102369 13.12±0.08
EJ1895 9.58±0.04
EJ5384 8.11±0.04
EJ4682 7.21±0.09
그 결과, 다른 균주에 비해 락토바실러스 플란타룸 SRCM102369 균주는 프로테아제 활성이 우수함을 확인하였다.
실시예 6. 균주 종류에 따른 묵은지 페이스트 소스의 이화학적 특성
락토바실러스 시트레움(Leuconostoc citreum) SRCM102178 균주, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) SRCM102228 균주 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주를 이용하여 제조예 1의 방법으로 묵은지 페이스트 소스를 제조하되, (3)단계에서 숙성 시간 및 기간을 달리하여 제조한 묵은지 페이스트 소스의 이화학적 특성을 실험하였다.
15℃에서 숙성기간에 따른 묵은지 페이스트 소스의 이화학적 특성
No. SRCM No. 숙성기간
(일)
pH 산도
(%)
염도
(%)
당도
(Brix)
유산균 수
(log CFU/mL)
1 102178 0 5.69 0.47 9.4 9.5 5.18
1 5.45 0.54 9.3 9.7 7.30
2 4.95 0.75 9.4 9.6 8.48
3 4.10 0.89 9.4 9.5 8.80
2 102228 0 5.69 0.47 9.4 9.5 5.30
1 5.24 0.51 9.3 9.6 7.26
2 4.90 0.79 9.5 9.6 8.41
3 4.34 0.84 9.5 9.5 8.70
3 102369 0 5.69 0.47 9.4 9.5 5.19
1 5.02 0.56 9.4 9.8 8.53
2 4.80 0.83 9.3 9.7 9.41
3 3.90 1.08 9.4 9.6 9.47
15℃에서 숙성 시, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주를 이용한 묵은지 페이스트 소스가 숙성 3일 만에 pH가 4 이하, 산도가 1% 이상으로 나타났고, 유산균 수도 다른 균주를 이용한 묵은지 페이스트 소스에 비해 높게 측정되었다.
30℃에서 숙성기간에 따른 묵은지 페이스트 소스의 이화학적 특성
No. SRCM No. 숙성기간
(일)
pH 산도
(%)
염도
(%)
당도
(Brix)
유산균 수
(log CFU/mL)
1 102178 0 5.69 0.47 9.4 9.5 5.18
0.5 4.87 0.78 9.5 9.7 8.84
1 4.21 0.89 9.4 9.6 8.91
2 102228 0 5.69 0.47 9.4 9.5 5.30
0.5 4.30 0.84 9.5 9.6 8.26
1 3.98 0.92 9.5 9.6 8.65
3 102369 0 5.69 0.47 9.4 9.5 5.19
0.5 4.75 0.96 9.4 9.7 9.01
1 3.87 1.12 9.4 9.8 9.51
또한, 30℃에서 숙성 시 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주를 이용한 묵은지 페이스트 소스가 숙성 1일 만에 pH가 4 이하, 산도가 1% 이상으로 나타났고, 유산균 수도 다른 균주를 이용한 묵은지 페이스트 소스에 비해 높게 측정됨을 확인할 수 있었다.
한국미생물보존센터(국내) KFCC11830P 20190619
<110> Microbial Institute for Fermentation Industyry Kyochon F&B Co., Ltd <120> Lactobacillus plantarum SRCM102369 strain having antimicrobial activity against pathogenic microorganism and lactic acid production ability and uses thereof <130> PN19222 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1362 <212> DNA <213> Lactobacillus plantarum <400> 1 gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gaactctggt attgattggt 60 gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg tgagtaacac gtgggaaacc 120 tgcccagaag cgggggataa cacctggaaa cagatgctaa taccgcataa caacttggac 180 cgcatggtcc gagcttgaaa gatggcttcg gctatcactt ttggatggtc ccgcggcgta 240 ttagctagat ggtggggtaa cggctcacca tggcaatgat acgtagccga cctgagaggg 300 taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360 atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420 gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac atatctgaga gtaactgttc aggtattgac 480 ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540 gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggttttt taagtctgat 600 gtgaaagcct tcggctcaac cgaagaagtg catcggaaac tgggaaactt gagtgcagaa 660 gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720 ggcgaaggcg gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagtatg ggtagcaaac 780 aggattagat accctggtag tccataccgt aaacgatgaa tgctaagtgt tggagggttt 840 ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcattccgc ctggggagta cggccgcaag 900 gctgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960 gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt gacatactat gcaaatctaa gagattagac 1020 gttcccttcg gggacatgga tacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080 tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttattatc agttgccagc attaagttgg 1140 gcactctggt gagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc 1200 atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga tggtacaacg agttgcgaac 1260 tcgcgagagt aagctaatct cttaaagcca ttctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg 1320 cctacatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tg 1362 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (5)

  1. 에스케리키아 콜리(Escherichia coli), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 리스테리아 이바노비(Listeria ivanovii) 및 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)에 대한 항균 활성, 유산 생성능, pH 2~3에 대한 내산성, 0.1~1% 담즙산에 대한 내담즙성, 장내 부착능 및 프로테아제 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주(KFCC11830P).
  2. 삭제
  3. 제1항의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 에스케리키아 콜리(Escherichia coli), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 리스테리아 이바노비(Listeria ivanovii) 또는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)에 대한 항균용 조성물.
  4. 제1항의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 발효용 스타터 조성물.
  5. 제1항의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) SRCM102369 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 프로바이오틱 조성물.
KR1020190077858A 2019-06-28 2019-06-28 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도 KR102155849B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190077858A KR102155849B1 (ko) 2019-06-28 2019-06-28 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190077858A KR102155849B1 (ko) 2019-06-28 2019-06-28 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102155849B1 true KR102155849B1 (ko) 2020-09-14

Family

ID=72471223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190077858A KR102155849B1 (ko) 2019-06-28 2019-06-28 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102155849B1 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113755360A (zh) * 2021-04-29 2021-12-07 湖北安琪生物集团有限公司 一株广谱抑菌高海拔源植物乳杆菌及应用
CN116555075A (zh) * 2023-03-13 2023-08-08 广东悦创生物科技有限公司 一株植物乳植杆菌jf1及其在制备抗衰老食品药品中的应用
CN117106619A (zh) * 2023-06-13 2023-11-24 陕西科技大学 一株富硒植物乳植杆菌kd-2及其在发酵乳和奶粉中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090105171A (ko) * 2008-04-01 2009-10-07 (주)오비티 항균물질을 생산하는 유산균 및 이를 함유하는 생균제조성물

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090105171A (ko) * 2008-04-01 2009-10-07 (주)오비티 항균물질을 생산하는 유산균 및 이를 함유하는 생균제조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
2019 KoSFoST International Symposium and Annual Meeting, Poster Presentation 1, Poster No.P12-070(2019.06.26.14:00-17:00)* *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113755360A (zh) * 2021-04-29 2021-12-07 湖北安琪生物集团有限公司 一株广谱抑菌高海拔源植物乳杆菌及应用
CN116555075A (zh) * 2023-03-13 2023-08-08 广东悦创生物科技有限公司 一株植物乳植杆菌jf1及其在制备抗衰老食品药品中的应用
CN116555075B (zh) * 2023-03-13 2023-12-01 广东悦创生物科技有限公司 一株植物乳植杆菌jf1及其在制备抗衰老食品药品中的应用
CN117106619A (zh) * 2023-06-13 2023-11-24 陕西科技大学 一株富硒植物乳植杆菌kd-2及其在发酵乳和奶粉中的应用
CN117106619B (zh) * 2023-06-13 2024-04-05 陕西科技大学 一株富硒植物乳植杆菌kd-2及其在发酵乳和奶粉中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101836862B1 (ko) 락토바실루스·플란타룸에 속하는 신규 유산균 및 그의 이용
KR100878799B1 (ko) 항생제 내성 병원성 미생물 또는 장내 유해 미생물의생장을 억제하는 바실러스 아밀로리퀴페시언스 k317
Gupta et al. 'Lactic Acid Bacteria: Probiotic Characteristic, Selection Criteria, and its Role in Human Health (A Review)'
KR102238633B1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 균주 및 이의 용도
KR101825836B1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 Lb41 균주 및 이를 포함하는 당뇨 또는 인슐린 저항성 증후군의 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101650328B1 (ko) 바이오제닉 아민 분해 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성이 있는 페디오코커스 펜토사세우스 균주 및 이의 용도
Park et al. Lactic acid bacteria in vegetable fermentations
Jeon et al. Characterization of Lactobacillus plantarum Lb41, an isolate from kimchi and its application as a probiotic in cottage cheese
KR102135879B1 (ko) 신규 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) KC3 균주를 이용한 면역장애, 호흡기 염증 질환, 알레르기 및 천식의 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 용도
CZ300143B6 (cs) Kmen Lactobacillus, jeho použití a výrobek jej obsahující
KR102155849B1 (ko) 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도
KR101381547B1 (ko) 병원성 세균의 생육을 억제하는 김치에서 분리한 신규류코노스톡 메센트로이드 및 이의 용도
KR101274467B1 (ko) 유해세균에 대해 항균 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸 jbmi f5 균주 및 이의 용도
KR20190063795A (ko) 락토바실러스 플란타룸 mifi-sy3 균주를 이용한 아로니아 발효액의 제조방법
KR100991456B1 (ko) 김치로부터 분리된 유산균 및 그의 용도
KR101005747B1 (ko) 김치로부터 분리된 유산균 및 그의 용도
KR102065580B1 (ko) 항균 활성과 프로바이오틱스 특성을 갖는 락토바실러스 브레비스 scml 432 균주 및 이의 용도
KR20100119875A (ko) 아디포넥틴의 분비 촉진 및/또는 감소 억제용 제제
KR102286350B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주를 이용한 속성 묵은지 페이스트 소스의 제조방법
KR101884634B1 (ko) 체중 조절 효과를 지닌 유산균 발효액
JP2019187251A (ja) 発酵物の製造方法及び発酵物
Tsuda et al. Selection of lactic acid bacteria as starter cultures for fermented meat products
KR101702206B1 (ko) 유산균발효액을 함유하는 두유푸딩 및 그 제조방법
KR20180040894A (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 Lb41 균주 및 이를 포함하는 비만의 예방 및 치료용 약학적 조성물
JP6052721B2 (ja) 新規乳酸菌

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant