KR102085967B1 - 토마토, 밤껍질 추출물을 이용한 항노화 효과를 가지는 조성물 - Google Patents

토마토, 밤껍질 추출물을 이용한 항노화 효과를 가지는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 토마토, 밤껍질 추출물을 함유하는 항노화성 조성물로 항산화 효과, 자외선(UVB, Ultraviolet B)에 대한 세포 보호 효과, MMP-3(Matrix metalloproteinase-3) 억제 효과 및 콜라겐 생성 효과를 가지며, 보다 상세하게는 토마토, 밤껍질의 에탄올 추출물로 12.5 내지 100㎍/mℓ의 농도를 포함하는 항노화성 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명의 토마토 및 밤껍질 추출물의 광노화 보호 효능 입증으로 토마토와 밤껍질의 추출물을 항주름 기능성 소재에 활용 가능하다.

Description

토마토, 밤껍질 추출물을 이용한 항노화 효과를 가지는 조성물{composition having anti-aging activity by using tomato and chestnut shell extract}
본 발명은 토마토, 밤껍질 추출물을 함유하는 항노화성 조성물로 항산화 효과, 자외선(UVB, Ultraviolet B)에 대한 세포 보호 효과, MMP-3(Matrix metalloproteinase-3) 억제 효과 및 콜라겐 생성 효과를 가지며, 보다 상세하게는 토마토, 밤껍질의 에탄올 추출물로 12.5 내지 100㎍/mℓ의 농도를 포함하는 항노화성 조성물에 관한 것이다.
노화란 나이가 많아짐에 따라 신체적, 정신적 기능이 쇠퇴해지는 것을 말한다. 아직 노화에 대한 정확한 원인이 밝혀져 있지는 않으나, 가장 주목받고 있는 원인으로는 유해산소에 의해 단백질, 지질, 당질 등이 과산화반응을 일으켜 세포노화기가 유발된다는 유해 산소설이 있다. 이에 따라, 노화의 예방을 위해 항산화 작용을 하는 물질을 섭취하기 위해 항노화성 조성물에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있다.
또한, 피부노화는 내인성 인자에 의한 자연노화와 장기간에 걸친 광 노출로 피부 변화의 현상이 오는 광노화로 나뉜다(Parrado et al., 1999). 광노화의 원인인 자외선은 피부에 존재하는 자외선 흡수 물질에 의해 흡수되며(Adhami et al., 2008), 이로 인해 피부 세포 또는 조직을 손상시키는 광화학적 반응들과 활성산소종을 경유한 이차적인 반응들에 의해 홍반, 부종, 과색소침착, 일광화상 세포 증가, 면역억제, 광노화, 광발암등을 유발한다(Afaq & Mukhtar, 2006; Bowden, 2004) 이러한 활성산소종은 피부 항산화제 파괴, 지질 과산화반응의 개시, 단백질 및 DNA 산화, 결합조직 성분(콜라젠, 히알루론산 등)의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합에 의한 주름 생성, 멜라닌 생성과정 등에 참여하여 피부노화를 가속화시킨다(Park, 2003). 또한 자외선 조사에 의해 콜라겐의 합성이 감소하는 동시에 기질 금속단백 분해효소(Matrix metalloproteinases, MMPs)의 발현이 증가하여 기질의 주요 구성 성분인 콜라겐과 엘라스틴 등의 분해가 증가되어 주름살이 형성되는 것으로 알려져 있다(Hashem et al., 2006).
따라서, 여러 가지 노화요인에 대해 천연물의 추출액이 활성을 가짐은 종래 기술인 대한민국 공개특허 제10-2017-0119422호 "파이퍼 캄보디아눔 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물" 및 대한민국 등록특허 제10-1249034호 "고수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 미백용 조성물"을 통해 알려져 있으며, 지속적으로 연구가 요구되고 있다.
한편, 본 발명의 토마토 및 밤껍질 추출물은 여러 노화 요인 중 활성산소종(ROS) 및 자외선(UVB, Ultraviolet B)에 대해 활성을 가지며, 항산화 효과, UVB(Ultraviolet B)에 대한 우수한 세포 보호 효과, MMP-3(Matrix metalloproteinase-3) 억제 효과 및 콜라겐 생성 효과를 가지며, 항노화성 조성물로서 화장품 및 식품으로 이용가능한 것이다.
대한민국 공개특허 제10-2017-0119422호 대한민국 등록특허 제10-1249034호
본 발명의 목적은 노화의 원인이 되는 다양한 요인에 대해 항노화성을 가지는 조성물에 관한 것이다. 그 중에서도 피부노화의 주요 원인이 되는 자외선(UVB, Ultraviolet B) 및 활성산소종에 대해 항노화성을 가지는 조성물에 관한 것이다.
이에 따라, 본 발명은 피부에 직접적 영향을 줄 수 있는 피부 노화의 외부요인인 자외선(UVB, Ultraviolet B)에 대한 콜라겐 분해효소인 MMP(Matrix metalloproteinase)의 증가에 따른 억제활성 효과, 활성산소종의 억제 및 콜라겐 생성에 관여하는 천연물인 토마토 및 밤껍질 추출물로서 항노화성 화장료 조성물 및 식품을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 의한 항노화성 조성물은 밤껍질 추출물을 함유하는 것이다.
본 발명의 다른 바람직한 일 실시예에 의한 항노화성 조성물은 토마토의 에탄올 추출물을 12.5 내지 100㎍/mℓ을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 밤껍질의 에탄올 추출물 및 토마토의 에탄올 추출물을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 밤껍질 추출물과 토마토 추출물을 둘 중 하나 내지 모두 포함하는 화장품일 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 밤껍질 추출물과 토마토 추출물을 둘 중 하나 내지 모두 포함하는 화장품으로, 스킨, 로션, 크림, 에센스, 자외선 차단제, 클렌징제, 파운데이션, 립스틱, 립 글로스, 립 틴트, 마스카라, 아이라이너, 아이브로우, 섀도우, 마스크 팩 및 패치로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 화장품을 제공할 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예로 밤껍질 추출물을 포함하거나, 토마토의 에탄올 추출물을 12.5 내지 100㎍/mℓ을 포함하거나, 둘 모두를 포함하는 식품일 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 밤껍질 추출물과 토마토 추출물을 둘 중 하나 내지 모두 포함하는 식품으로는 요구르트, 아이스크림, 주스, 젤리, 과자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 식품일 수 있다.
본 발명은 토마토, 밤껍질 추출물을 함유하는 항노화성 조성물로서, 토마토, 밤껍질의 에탄올 추출물로 12.5 내지 100㎍/mℓ의 농도를 포함하는 것으로, 항산화 효과, 자외선(UVB, Ultraviolet B)에 대한 세포 보호 효과, MMP-3(Matrix metalloproteinase-3) 억제 효과 및 콜라겐 생성 효과를 가지며, 광노화 보호 효능을 가지고 있어 항주름 기능성 소재에 활용 가능하다.
도 1은 토마토 에탄올 추출물의 각 농도에 따른 세포생존율에 관한 것이다.
도 2는 밤껍질 에탄올 추출물의 각 농도에 따른 세포생존율에 관한 것이다.
도 3은 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ일 때의 세포생존율에 관한 것이다.
도 4는 토마토 에탄올 추출물의 각 농도에 따른 세포 보호 효과에 관한 것이다.
도 5는 밤껍질 에탄올 추출물의 각 농도에 따른 세포 보호 효과에 관한 것이다.
도 6은 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ일 때의 세포 보호 효과에 관한 것이다.
도 7은 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ일 때의 UVB에 의해 노출되어 증가된 세포의 활성산소종 생성에 대해서 억제 효과를 도식화한 것이다.
도 8은 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ일 때의 UVB 조사에 따른 MMP-3의 억제 효과를 도식화한 것이다.
도 9는 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ일 때의 UVB 조사에 따른 콜라겐 생성에 관한 것이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 본 발명의 기술범위가 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지는 않는다. 본 발명에서 사용하는 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명의 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 발명에서 '포함하다' 또는 '가지다' 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명은 토마토, 밤껍질의 추출액을 함유하는 항노화성 조성물에 관한 것으로서, 좀 더 구체적으로는 토마토, 밤껍질의 에탄올 추출물로 12.5 내지 100㎍/mℓ을 함유하는 항노화성 화장료 조성물로 항산화 효과, 자외선(UVB, Ultraviolet B)에 대한 세포 보호 효과, MMP-3(Matrix metalloproteinase) 억제 효과 및 콜라겐 생성 효과 등이 우수한 항노화성 화장료 조성물에 관한 것이다.
토마토 추출물은 라이코펜(Lycopene)을 함유하고 있으며, 라이코펜은 항산화 물질로 각종 암과 혈관 질환에 대한 연구뿐만 아니라 광손상으로부터 피부를 보호하고 강력한 항산화제 기능으로 임상시험을 통한 피부거칠기 개선 효과가 있는 것으로 밝혀졌다.
밤껍질 추출물은 폴리페놀 성분, 흔히 탄닌이라는 성분을 함유하고 있으며 이것은 식품의 맛과 색을 띠는 강력한 항산화 물질로 위궤양과 위 염증을 막아준다. 또한 지방질의 산화를 막고, 혈액순환을 원활하게 하며 피로 회복에도 도움이 되며, 항 알러지, 뇌졸중 예방, 항암 효과가 있다. 또한, 밤껍질 추출물은 비타민 E인 토코페롤을 함유하여, 항산화 역할을 하여 노화를 예방한다.
또한, 미용분야에서의 밤껍질은 피부에 수분을 공급하거나 피부로부터 수분이 과도하게 증발되는 것을 막아주는 보습효과와 피부의 과다한 멜라닌 색소 형성에 의한 피부의 색소 침착을 억제해주는 미백효과와 탄닌 성분이 모공 축소 효과를 가진다고 알려져 있다.
본 발명의 다른 바람직한 일 실시예에 의한 세포 독성에 대한 생존력을 가지는 조성물의 토마토 추출물 농도는 12.5 내지 100㎍/mℓ이며, 밤껍질 추출물 농도는 12.5 내지 50㎍/mℓ인 항노화성 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 UVB에 대한 세포 보호 효과를 가지는 조성물의 토마토 추출물 농도는 12.5 내지 100㎍/mℓ이며, 밤껍질 추출물 농도는 25 내지 50㎍/mℓ인 항노화성 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 항산화 효과를 가지는 조성물의 토마토 및 밤껍질 추출물 농도는 50㎍/mℓ인 항노화성 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 MMP-3와 수용성 콜라겐 생성에 효과를 가지는 조성물의 토마토 및 밤껍질 추출물 농도는 50㎍/mℓ인 항노화성 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 밤껍질 추출물과 토마토 추출물을 둘 중 하나 내지 모두 포함하는 화장품으로, 스킨, 로션, 크림, 에센스, 자외선 차단제, 클렌징제, 파운데이션, 립스틱, 립 글로스, 립 틴트, 마스카라, 아이라이너, 아이브로우, 섀도우, 마스크 팩 및 패치로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 화장품을 제공할 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 의한 밤껍질 추출물과 토마토 추출물을 둘 중 하나 내지 모두 포함하는 식품으로는 요구르트, 아이스크림, 주스, 젤리, 과자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 식품일 수 있다.
[ 시험예 1] 토마토와 밤껍질 추출물 제조
토마토와 밤껍질은 건조된 시료를 균질화하여 5g을 에탄올 100mℓ을 넣고 셰이커(Shaker)를 이용하여, 24 h 동안 실온에서 추출하였으며, Whatman No.2 필터페이퍼(Filter paper)를 이용하여 필터한 후, 추출물을 진공 상태에서 농축하였다. 농축액을 DMSO(Dimethyl sulfoxide)로 재용해한 후 이어서 0.22 μm 멸균 필터로 여과하고, 분석 전까지 -20℃에서 보관하였다.
[ 시험예 2] 세포배양 및 세포 독성 실험
<세포배양>
본 실험에 사용된 인체 피부 섬유아세포주인 Hs68(Human foreskin fibroblast) 세포는 ATCC(American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA)에서 구입하였다. 10% FBS(Fetal bovine serum)와 페니실린(Penicillin, 100 unit/mℓ), 스트렙토마이신(Streptomycin, 50㎍/mℓ)이 함유된 DMEM(Dulbecco' s modified Eagle's medium) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2, 95% humid air로 조절된 배양기(Thermo Scientific, Tewksbury, MA, USA)에서 배양하였다. Hs68 세포를 96-well plate에 1.0 X 104 cells/well의 농도로 분주하여, 24 h 배양 후 배지를 토마토와 밤껍질의 에탄올 추출물이 함유하고, FBS가 함유되지 않은 배지로 교체하였다. 24 h 시료 처리 후 MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolimbromide] 1 mg/mℓ 용액 20 μℓ를 각 well에 첨가하고, 2 h 동안 배양하다. 마지막으로 상층액을 제거하고, 2 h 동안 배양하였다. 마지막으로 상층액을 제거하고, 생존 세포에서 생성된 청색 Formazan 결정을 DMSO로 가용화 시켜 마이크로 리더기(Microplate reader, BioTek, Inc., Winooski, VT, USA)를 사용하여 550 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 시료처리 시에는 DMSO의 최종 농도가 0.1% (v/v) 미만이 되도록 에탄올 추출물을 배지로 희석하여 사용하였다.
<세포 독성 실험>
토마토와 밤껍질 에탄올 추출물이 Hs68 세포에 대한 세포 독성을 가지는지 여부를 조사하였다. 표 1,2,3의 실시예들은 반복 실험하여, 신뢰성을 확인하였으며, 하기 도 1,2,3은 표 1,2,3의 실시예들의 평균값을 도식한 도면이다. 하기, 대조군은 토마토 및 밤껍질 추출물이 포함되지 않은 것이다.
[표 1]
Figure 112018030711151-pat00001
표 1은 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ일 때의 세포생존율에 관한 표이며, 여기서 농도 50㎍/mℓ은 1mℓ의 DMSO에 대해 50㎍의 추출물을 포함하는 것을 의미한다. 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물을 50㎍/mℓ 농도로 포함하는 군은 48 h 동안 세포에 대한 독성을 보이지 않았다.
[표 2]
Figure 112018030711151-pat00002
[표 3]
Figure 112018030711151-pat00003
표 2,3은 토마토 또는 밤껍질 추출물의 각 농도에 따른 세포생존율에 관한 것이다. 표 2를 살펴보면, 토마토 추출물의 농도가 12.5 내지 100㎍/mℓ일 때 세포 생존율이 우수함을 확인하였다. 표 3을 살펴보면 밤껍질 추출물의 농도가 100㎍/mℓ일 경우를 제외하고는, 12.5 내지 50㎍/mℓ일 때의 세포 생존율이 우수함을 확인하였다.
[ 시험예 3] UVB (Ultraviolet B) 조사 후 세포 보호 효과
Hs68세포를 96-well plate에 1.0 X 104 cells/well의 농도로 분주하여 24 h 동안 배양한 후, 각 웰(well)에 FBS (Fetal bovine serum)가 없는 배지로 에탄올 추출물을 희석한 후 처리하여 24 h 동안 배양하였다. 그 후 UVB 램프(Ultraviolet lamp, Sankyo Denki Lamps, GL20SE, Marine, Japan)를 이용하여 UVB(Ultraviolet B) 30 mJ/cm2를 조사하였고, 유브이 라이트 미터기(UV LIGHT METER, LT Lutron, UV-340A, Taiwan)를 사용하여 자외선 강도를 모니터링 하였다. 모든 UVB(Ultraviolet B) 조사는 96-well plate에 부착된 세포에 PBS를 얇게 도포한 후 수행하였다. 조사 후 FBS (Fetal bovine serum)가 없는 배지에서 에탄올 추출물을 희석하여 24 h 동안 세포에 처리하였다. 여기서 대조군은 토마토 및 밤껍질 추출물을 포함하지 않는 것이며, UVB 조사 없이 동일한 조건으로 진행하였다. 하기 UVB 수치들은 대조군에 UVB(Ultraviolet B) 30 mJ/cm2를 조사한 값이다. 표 4,5,6의 실시예들은 반복 실험하여 신뢰성을 확인하였으며, 하기 도 4,5,6은 표 4,5,6의 실시예의 평균값을 도식한 도면이다.
[표 4]
Figure 112018030711151-pat00004
표 4는 UVB 30 mJ/cm2를 조사 후, 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물이 UVB에 대한 세포 보호 효과에 미치는 영향에 관한 것이다. 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물의 측정농도는 50㎍/mℓ이며, 50㎍/mℓ의 농도는 1mℓ의 DMSO에 대해 50㎍의 토마토 및 에탄올 추출물을 포함하는 것을 의미한다.
표 4를 통해, UVB(Ultraviolet B) 30 mJ/cm2를 조사시 유의적으로 세포 보호 효과가 낮음을 UVB 값을 통해 확인할 수 있다. 반면, 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물을 포함하는 군은 UVB 값에 비해 세포 보호 효과가 있음을 알 수 있다.
따라서, UVB(Ultraviolet B)로 유도된 광노화에 대해 세포 보호 효과가 있는 것으로 확인할 수 있다. 특히, 토마토 추출물을 처리한 군은 높은 세포 보호 효과를 보여, UVB(Ultraviolet B)에 의한 광노화 보호 효과가 우수하다.
[표 5]
Figure 112018030711151-pat00005
[표 6]
Figure 112018030711151-pat00006
표 5,6은 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물의 각 농도에 따른 세포 보호 효과에 관한 것이다. 표 5는 토마토 에탄올 추출물의 농도가 12.5 내지 100㎍/mℓ의 농도일 때 세포 보호 효과가 우수함을 알 수 있다. 표 6은 밤껍질 에탄올 추출물의 농도가 100㎍/mℓ의 농도를 가질 때를 제외하고는, 12.5 내지 100㎍/mℓ의 농도일 때 세포 보호 효과가 우수함을 확인하였다.
[ 시험예 4] UVB (Ultraviolet B) 조사로 유도된 활성산소종 ( ROS ) 생성에 대한 토마토, 밤껍질 추출물의 억제효과
< 활성산소종 ( ROS ) 생성 측정>
Hs68 세포에 에탄올 추출물을 24 h 동안 전처리하고, PBS(Phosphate buffer saline)로 세척한 후 세포를 UVB(Ultraviolet B) 30 mJ/cm2로 조사하였다. UVB(Ultraviolet B) 조사 후 세포에 에탄올 추출물을 30분간 처리한 후 25μM의 DCFH-DA(Dichlorofluorescin diacetate)로 염색하였다. 세포내 활성산소종(ROS) 생성에 해당하는 형광 강도는 485 nm의 여기 파장 및 530 nm의 방출 파장에서 2시간 동안 형광분광광도계(Fluorescent spectrophotometer, Perkin-Elmer, Norwalk, CT, USA)로 측정하였다. 여기서 대조군은 토마토 및 밤껍질 추출물을 포함하지 않는 것이며, UVB 조사 없이 동일한 조건으로 진행하였다. 하기 UVB 수치들은 대조군에 UVB(Ultraviolet B) 30 mJ/cm2를 조사한 값이다. 또한, 하기 토마토 및 밤껍질 추출물은 50㎍/mℓ의 농도로 전처리하였으며, 여기서 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물의 농도가 50㎍/mℓ임은 1mℓ의 DMSO에 50㎍의 토마토 및 밤껍질 추출물의 포함하는 것의 농도를 의미한다.
< UVB (Ultraviolet B) 조사로 유도된 활성산소종 ( ROS ) 생성에 대한 토마토, 밤껍질 추출물의 억제효과>
세포 내에서 UVB(Ultraviolet B)의 노출에 의해 발생하는 활성산소종(ROS) 생성에 대한 토마토, 밤껍질 추출물의 억제활성을 알아보기 위해 Hs68 세포에 UVB(Ultraviolet B)로 광노화를 유도한 뒤, 디씨에프에이치-디에이 디텍션 어세이 (DCFH-DA, Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate detection assay)를 이용하여 ROS의 양에 따른 형광 발생 정도를 측정하였다. 표 7의 실시예들은 반복 실험하여 신뢰성을 확인하였으며, 하기 도 7은 표 7의 실시예들의 평균값을 도식한 도면이다.
[표 7]
Figure 112018030711151-pat00007
표 7을 살펴보면 UVB(Ultraviolet B)에 노출된 세포에서는 대조군에 비해 활성산소종(ROS)의 생성이 증가하며, 이는 형광강도(Fluorescene Intensity)를 통해 확인할 수 있다. 반면, 토마토, 밤껍질 추출물을 50㎍/mℓ의 농도로 전처리한 군에서는 UVB(Ultraviolet B)로 조사된 활성산소종(ROS)의 생성을 감소시켰으며, 이는 형광강도가 UVB만 쬔 군에 비해 토마토 및 밤껍질 추출물을 포함하는 군들의 형광강도가 UVB만을 쬔 군에 비해 낮음을 알 수 있다.
따라서, 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 50㎍/mℓ의 농도로 전처리한 군은 UVB에 의해 노출되어 증가된 세포의 활성산소종 생성에 대해서 억제 효과가 있음을 수치적으로 알 수 있다.
[ 시험예 5] UVB (Ultraviolet B) 조사에 따른 MMP -3(Matrix metalloproteinase-3) 및 수용성 콜라겐 생성에 대한 토마토, 밤껍질 추출물의 효과
기질 금속단백 분해효소이니 MMP-3(Matrix metalloproteinase-3)는 UVB 조사에 의해 콜라겐의 합성이 감소하는 동시에 발현이 증가하며, MMP-3의 측정은 휴먼 MMP-3 엘리샤 키트(Human MMP-3 ELISA kit, Merck & Co. Inc., Whitehouse Station, NJ, USA)를 이용하여 효소 결합 면역 침강 분석방법(Enzyme-linked immunosorbent assay)으로 배지 중의 프로-MMP-3-(Pro-MMP-3) 생성량을 측정하였다. UVB(Ultraviolet B) 조사 후 수용성 콜라겐 생성량은 SircolTM 가용성 콜라겐 농도(Soluble collagen assay kit)를 사용하여 측정하였다. 세포를 배양한 배지를 수집하여 Sirco 염색시약(Dye reagent)와 혼합, 반응하여 원심분리 후 차가운 산-염 워싱 시약(Acid-salt washing reagent)을 침전물에 첨가하여 혼합하였다. 혼합물을 원심분리한 후 침전물을 알칼리 시약(Alkali reagent)을 사용하여 용해시키고, 555 nm에서 흡광도를 측정하였다. 여기서 대조군은 토마토 및 밤껍질 추출물을 포함하지 않는 것이며, UVB 조사 없이 동일한 조건으로 진행하였다. 하기 UVB 수치들은 대조군에 UVB(Ultraviolet B) 30 mJ/cm2를 조사한 값이다. 또한, 토마토 및 밤껍질 추출물은 50㎍/mℓ의 농도로 전처리하였으며, 여기서 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물의 농도가 50㎍/mℓ임은 1mℓ의 DMSO에 50㎍의 토마토 및 밤껍질 추출물의 포함하는 것의 농도를 의미한다.
< UVB 조사에 따른 토마토, 밤껍질 추출물을 함유하는 배지의 MMP -3(Matrix metalloproteinase-3) 농도 감소 효과>
인체 피부 섬유아세포에서 UVB(Ultraviolet B) 조사로 증가한 MMP-3(Matrix metalloproteinase-3)에 대해 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물을 포함하는 것은 유의적으로 MMP-3(Matrix metalloproteinase-3)의 농도 감소 효과를 알아보았다. 표 8의 실시예들은 반복 실험하여 신뢰성을 확인하였으며, 하기 도 8은 표 8의 실시예들의 평균값을 도식한 도면이다.
[표 8]
Figure 112018030711151-pat00008
표 8을 살펴보면 UVB(Ultraviolet B) 조사로 인해 Hs68 세포의 배지에서 MMP-3 농도가 증가하였으며, 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물을 함유하는 배지는 UVB(Ultraviolet B)로 유도된 MMP-3의 농도가 감소하는 것을 알 수 있었다. 특히, 밤껍질의 MMP-3 생성 억제 효과가 크게 나타났다.
< UVB 조사에 따른 토마토, 밤껍질 추출물을 함유하는 배지의 콜라겐 생성 농도 감소 효과>
인체 피부 섬유아세포에서 UVB(Ultraviolet B) 조사가 수용성 콜라겐 생성에 대한 토마토 및 밤껍질의 에탄올 추출물 효과를 알아보았다. 표 9의 실시예들은 반복 실험하여 신뢰성을 확인하였으며, 하기 도 9는 표 9의 실시예들의 평균값을 도식한 도면이다.
[표 9]
Figure 112018030711151-pat00009
표 9의 수용성 콜라겐 생성의 변화를 살펴보면, UVB(Ultraviolet B) 조사로 인해 Hs68 세포의 배지에서 콜라겐 농도가 감소하였다. 반면, 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물들을 함유하는 군은 UVB(Ultraviolet B)에 의한 콜라겐 농도 감소가 적었을 뿐 아니라, 밤껍질 에탄올 추출물의 경우 콜라겐 농도가 증가하는 경향이 나타났다.
상기와 같이, 본 발명을 통해 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물의 세포독성, UVB 조사 후 세포보호, UVB 조사로 유도된 활성산소종 생성에 대한 토마토, 밤껍질 추출물의 억제효과, UVB 조사에 따른 MMP-3 및 수용성 콜라겐 생성에 대한 토마토, 밤껍질 추출물의 효과를 확인하였다. 따라서, 토마토 및 밤껍질 에탄올 추출물은 광노화에 따른 증상을 개선하는데 유용한 물질로 활용될 수 있는 효과적인 조성물이라 사료된다. 또한, 광노화 보호 효능 입증으로 토마토와 밤껍질의 추출물을 항주름 기능성 소재에 활용 가능할 것이다.

Claims (13)

  1. 밤껍질 추출물을 함유하고, 자외선에 대한 세포 보호 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 조성물.
  2. 토마토의 에탄올 추출물을 12.5 내지 100㎍/mℓ을 포함하고, 자외선에 대한 세포 보호 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 조성물.
  3. 삭제
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 항산화 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 콜라겐 생성 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 조성물.
  6. 삭제
  7. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 12.5 내지 50㎍/mℓ인 주름 개선용 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 조성물은 밤껍질의 에탄올 추출물 농도가 25 내지 50㎍/mℓ인 주름 개선용 조성물.
  9. 밤껍질의 에탄올 추출물 및 토마토의 에탄올 추출물을 포함하고, 자외선에 대한 세포 보호 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 조성물.
  10. 제1항, 제2항 또는 제9항 중 어느 한 항의 주름 개선용 조성물을 포함하는 화장품.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 화장품은, 스킨, 로션, 크림, 에센스, 자외선 차단제, 클렌징제, 파운데이션, 립스틱, 립 글로스, 립 틴트, 마스카라, 아이라이너, 아이브로우, 섀도우, 마스크 팩 및 패치로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 화장품.
  12. 제1항, 제2항 또는 제9항 중 어느 한 항의 주름 개선용 조성물을 포함하는 식품.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 식품은, 요구르트, 아이스크림, 주스, 젤리, 과자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 식품.
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