KR101853711B1 - 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물 - Google Patents
파이퍼 캄보디아눔 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 포함하는 피부개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 천연 추출물로 인체에 무해할 뿐 아니라, 콜라겐(collagen), 엘라스틴(Elastin) 및 HAS-2 유전자의 발현을 증가시키고 MMP-1 유전자의 발현 및 ROS 활성을 저해함으로써 우수한 항산화, 항노화 효과 및 상처치료 효과를 나타내므로 피부개선용 조성물, 상처치료용 조성물 및 항산화용 조성물 등으로 유용하게 활용할 수 있다.
Description
본 발명은 파이퍼 캄보디아눔 (Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체의 대부분을 차지하며 체온조절, 분비, 배설, 흡수 등의 다양한 작용을 하고, 특히 인체의 최외부에 존재함으로써 외부로부터 물리적, 화학적, 생물학적으로 인체를 보호하는 기능을 가진다. 피부는 표피, 진피, 피하지방으로 이루어져 있으며, 표피는 인체의 외부와 내부로부터 방어작용을 하고, 진피는 피부의 탄력 및 지지 역할, 피하지방은 체온을 유지하는 기능을 가진다.
콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소는 노화방지 및 상처개선에 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되거나 자외선 조사에 의해 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 콜라겐을 분해하는 기질 금속 단백질 분해 효소의 발현이 감소되면 상처가 잘 아물지 않게 된다.
한편, 활성 산소종은 여러 신호전달 과정을 변경하여 유전자 발현, 세포흡착, 물질대사, 세포주기, 세포사멸에 영향을 주는 것으로 알려져 있으며, 활성 산소종이 유도하는 신호전달에는 MAPK(mitogen-activated protein kinase), NF-κB (nuclear factor-κB), PI3K(phosphatidylinositol 3-kinase), p53, β-catenin/Wnt를 매개로 하는 신호전달이 알려져 있다. 최근, 활성 산소종에 의한 인체 내 손상을 보호하는 항산화를 통한 노화방지에 대한 연구가 다양하게 이루어지고 있다.
잘 먹고 잘사는 웰빙(well-being) 트랜드에 부응하여, 상기와 같이 보호, 탄력 및 지지역할을 하는 피부에 이용하기 위한 화장품은 선택이 아닌 필수 요소로서 부가가치가 높은 산업으로 자리잡아 가고 있고, 소비자들은 현재 널리 사용되고 있는 화학 합성물질이 아닌 천연자원을 이용한, 고품질의 제품을 선호하는 현상이 두드러지고 있으며, 이러한 소비자의 요구에 부합하여 화장품 및 건강기능식품 시장에서도 기능성 화장품 및 기능성 식품과 같은 화장품과 의약품의 중간 단계의 약학적 치료 효능을 가진 천연 자원을 바탕으로 하는 기능성 화장품에 대한 개발이 각광받고 있다. 이에 천연물, 미생물, 단백질 배양액, 줄기세포 유래 배양액까지 화장품의 원료로 이용될 수 있는 다양한 소재 개발이 진행되고 있다.
특히, 최근에는 화장품 성분의 유전자 변형이나 환경 호르몬으로 인한 문제점이 대두되면서 장기적으로 인체에 유해하지 않고 안전하게 사용할 수 있는 천연물질 추출물을 주성분으로 하는 기능성 화장품에 기대가 높아지고 있다.
한편, 파이퍼 캄보디아눔 (Piper cambodianum)은 베트남을 원산지로 하는 후추과의 식물로서 아직까지 학명이 알려지지 않았으며 그 효과 또한 거의 연구된 바 없다.
본 발명자들은 천연물질을 이용한 기능성 화장품을 연구하던 중 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 억제 및 활성산소종의 감소를 통한 우수한 상처치유 효과를 나타내며, 항산화 및 주름개선을 통한 항노화 효과를 나타내는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
발명의 목적은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 피부개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 상처치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 항산화용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 상처치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 상처치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 항산화용 또는 상처개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum)의 추출물은 천연 추출물로 인체에 무해할 뿐 아니라, 콜라겐(collagen), 엘라스틴(Elastin) 및 HAS-2 유전자의 발현을 증가시키고 MMP-1 유전자의 발현 및 ROS 활성을 저해함으로써 우수한 항산화, 항노화 효과 및 상처치료 효과를 나타내므로 피부개선용 조성물, 상처치료용 조성물 및 항산화용 조성물 등으로 유용하게 활용할 수 있다.
도 1은 본 발명에서 사용된 파이퍼 캄보디아눔의 잎과 나무의 외관을 나타낸 도이다.
도 2는 MTT 분석법을 통하여 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 세포 생존률에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 3은 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처 재생 효과를 확인한 도이다.
도 4는 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 유전자 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 5는 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 단백질 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 6은 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 UV 조사 후 단백질 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 7은 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 UV 조사 후 ROS 활성 변화에 미치는 영향을 확인한 도이다. (ROS-NHDF-control 1: UV를 처리하지 않은 파이퍼 캄보디아눔 처리군, ROS-NHDF-40J/3min: 180초 동안 40J의 UV를 처리한 파이퍼 캄보디아눔 처리군)
도 8은 상처 모델 마우스에서 상처 부위의 비율 변화를 통해 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처재생 효과를 확인한 도이다.
도 2는 MTT 분석법을 통하여 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 세포 생존률에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 3은 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처 재생 효과를 확인한 도이다.
도 4는 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 유전자 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 5는 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 단백질 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 6은 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 UV 조사 후 단백질 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 7은 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 UV 조사 후 ROS 활성 변화에 미치는 영향을 확인한 도이다. (ROS-NHDF-control 1: UV를 처리하지 않은 파이퍼 캄보디아눔 처리군, ROS-NHDF-40J/3min: 180초 동안 40J의 UV를 처리한 파이퍼 캄보디아눔 처리군)
도 8은 상처 모델 마우스에서 상처 부위의 비율 변화를 통해 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처재생 효과를 확인한 도이다.
본 발명은 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명에서 피부개선은 노화방지와 상처개선을 포함한다.
본 발명에서 노화방지는 항산화 효과와 주름개선 효과를 포함한다.
본 발명의 유효성분인 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리 방법을 이용하여 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 '추출물'은 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다.
상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 추출하기 위한 추출 용매는 이에 제한되지 않으나, 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매를 이용할 수 있으며, 바람직하게는 메탄올이다.
상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 파이퍼 캄보디아눔의 줄기 또는 잎에서 추출할 수 있다.
상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 파이퍼 캄보디아눔 피 포름(Piper cambodianum P.Fourn) 추출물일 수 있다.
상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 세포외 기질과 관련된 콜라겐, 엘라스틴 또는 HAS-2 유전자의 활성을 증가시키며, MMP-1 유전자의 활성을 억제함으로써 상처치료, 주름개선 및 피부 노화방지 효과를 나타낼 수 있다.
또한 상기 캄보디아눔 추출물은 활성산소종(ROS; reactive oxygen species)의 활성을 억제하며, 이를 통해 산화적 스트레스를 저해하는바, 항산화를 통한 피부 노화방지 효과를 나타낼 수 있다.
또한 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 생체 외 및 상처 동물 모델에서 우수한 상처 치료 효과를 나타낼 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 피부상태개선을 위한 화장료 조성물에 유효성분으로 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물과 함께 노화방지 또는 상처 개선 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 유탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산 제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 페이스트, 팩, 세안제, 비누, 계면활성제 함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스, 파운데이션 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분인 파이퍼 캄보디아눔 추출물 이외에 추가로 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속 이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부 과학 분야 에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프 로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄 올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01-10% 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01-5% 중량 백분율로 배합된다.
또한 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물과 함께 상처 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 약학적 조성물은 1일 1 mg/ kg 내지 10000 mg/kg의 양으로 투여할 수 있으며, 하루에 한 번 또는 수 회 나누어 투여할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상처 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 피부외용제 조성물은 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물과 함께 상처 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.
본 발명의 피부외용제 조성물은 신체 부위에 따라 그 제형이 특별히 한정되지 않으며, 당업계의 공지기술을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 액제, 연고제, 크림제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 오일제, 왁스제, 유탁액제, 현탁액제, 겔제 또는 에어로졸제 등 형태로 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 피부외용제 조성물은 통상적인 첨가제, 예를 들어 보존제, 의약 침투를 보조하는 용매, 연고 및 크림의 경우 연화제 등을 포함할 수 있으며, 에탄올 또는 올레일 알코올과 같은 통상적 담체를 함유할 수 있다.
본 발명의 피부외용제 조성물은 상술한 성분에 한정되지 않고, 필요에 따라 통상의 화장료 조성물 또는 약학 조성물에 배합되는 다른 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면활성제, 유기 또는 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 포함할 수 있다.
또한 본 발명은 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 상처개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품은 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물과 함께 항산화 또는 상처 개선 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.
본 발명에서, "건강기능식품"이란, 질병의 예방 및 개선, 생체방어, 면역, 병후의 회복, 노화 억제 등 생체조절 기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해해야 한다.
본 발명의 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명은 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 실험예 및 제조예를 제시한다. 다만 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명를 한정하는 것은 아니다.
실시예 1. 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 제조
베트남이 원산지인 파이퍼 캄보디아눔 피 포름(Piper cambodianum P.Fourn) 의 줄기와 잎을 메탄올로 추출한 것을 생명공학연구원 해외허브센터에서 공급받아 사용하였다 (분양번호 FBM151-010, 바코드 PBVN12811). 사용한 파이퍼 캄보디아눔의 줄기와 잎의 모양을 도 1에 나타내었다.
실시예 2. 인간 피부 섬유아(NHDF; Normal Human Dermal Fibroblast) 세포주 배양 방법
인간 피부 섬유아 세포주의 배양을 위해 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM; Dulbecco's modified Eagle's medium)에 우태아 혈청 10 %, 항생제 1 %를 첨가한 후 37 ℃의 5 % CO2 배양기에서 배양하여 사용하였다.
실험예 1. MTT 분석법(Assay)를 통한 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 세포 성장률에 미치는 영향 확인
파이퍼 캄보디아눔 추출물의 세포 생존률을 확인을 위하여 MTT 분석법을 수행하였다. 먼저, 인간 피부 섬유아 세포주(NHDF)를 96웰 플레이트에 1X103 개씩 분주하고 24시간 동안 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 배양하였으며, 다음날 상기 실시예 1에서 얻은 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml의 농도로 웰 당 100 μl씩 첨가한 후 24시간 동안 배양하였다. 대조군에는 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 미처리하였다. 24시간 후 각 웰 당 90 μl의 새 배지에 Ez-Cyto(MTT) 시약 10 μl을 넣은 후 30분 동안 유지하다 배양한 색이 변하기 시작하면 450 nm(기준 650 nm)의 파장에서의 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 농도가 증가하여도 세포 생존률에는 크게 변화가 없어, 상기 추출물은 세포 독성이 없음을 확인하였다.
실험예 2. 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처재생효과 확인
파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처재생효과를 확인하기 위하여 인간 피부 섬유아 세포주를 이용하였다. 상기 실시예 2와 동일한 조건에서 배양한 인간 피부 섬유아 세포주를 6 웰 플레이트 중 4 웰에 각각 106개씩 분주하고, 다음 날 세포가 약 70 % 이상 자랐을 때 10 μl용 피펫을 이용하여 동일한 간격으로 세포 표면을 긁었다. 대조군인 웰에는 아무것도 첨가하지 않고 새 배지를 2 ml 넣어주었으며, 실험군인 나머지 세 개의 웰에는 배지 2 ml에 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml의 농도로 첨가하였다. 24시간 동안 배양 후 현미경으로 그 이미지를 확인하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 농도가 증가함에 따라 인간 피부 섬유아 세포주에서 상처재생이 잘 되는 것을 확인할 수 있었다. 이는 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 농도의존적 상처재생효과를 가짐을 나타낸다.
실험예 3. Q-PCR을 통한 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 유전자 발현에 미치는 영향 확인
인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔이 유전자 발현 수준에 미치는 영향을 확인하기 위해 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 배양한 인간 피부 섬유아 세포주를 6 웰 플레이트에 각각 3X105개씩 분주하고, 새 배지에 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml의 농도로 처리한 후 24 시간 동안 배양하였다. 대조군에는 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 미처리하였다. 이 후 각 웰을 1X PBS로 세척한 후 상용화된 RNA 추출 키트(Nanohelix; Pure Helix RNA Extraction Solution Nanohelix)를 이용하여 제공된 프로토콜에 따라 mRNA를 추출한 뒤 GE Nano vue로 정량하였다. Q-PCR 실시를 위해 cDNA합성 키트를 이용하여 mRNA로부터 cDNA를 합성하고, 세포외 기질 활성 유전자인 콜라겐, 엘라스틴, HAS-2 및 세포간 기질 분해 효소인 MMP-1의 활성을 확인하였다.
이때, 이용한 프라이머는 하기 표 1에 나타내었으며, PCR Cycle은 하기 표 2에 나타내었다. 결과의 통계처리는 평균 반복 역치값(normalized cycle threshold; CT)과 표준편차 값을 구하고, 편도 ANOVA(one-way ANOVA)로 분석한 후에 p<0.05 수준에서 유의성을 검증하였으며, 항존유전자로 GAPDH의 활성을 비교하여 보정하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
이름 | 프라이머 | 5' 말단에서 3'말단까지의 DNA 서열 |
콜라겐 | F (Forward) | TCC CCA GCC ACA AAG AGT CTA |
R (Reverse) | TTT CCA CAC GTC TCG GTC A | |
MMP-1 | F | CGA CTC TAG AAA CAC AAG AGC AAG A |
R | AAG GTT AGC TTA CTG TCA CAC GCT T | |
엘라스틴 | F | CTGCAAAGGCAGCCAAATAC |
R | CACCAGGAACTAACCCAAACT | |
HAS-2 | F | GCT ACC AGT TTA TCC AAA CG |
R | GGC TGT CAG AGC CTC GTG GCT TTG G |
온도 | 소요시간 | |
최초 변성 | 95 ℃ | 10~15 분 |
변성 | 95 ℃ | 10 초 |
접합(Annealing) | 60 ℃ | 15 초 |
신장(Elingation) | 72 ℃ | 15~30 초 |
반복 횟수(Number of Cycles) | 40회 |
도 4에서 나타낸 바와 같이, 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐, 엘라스틴, HAS-2의 발현이 증가하고, MMP-1의 발현은 감소하는 것을 확인하였다. 이는 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 MMP-1의 발현을 억제하고 및 이에 따른 콜라겐, 엘라스틴, HAS-2(hyaluronan synthase 2)의 발현을 증가시켜 세포 탄성 재건 능력 향상을 통한 상처치료 및 주름개선 등 노화방지 효과를 가짐을 나타낸다.
실험예 4. 인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 단백질 활성에 미치는 영향 확인
인간 피부 섬유아 세포주에서 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 단백질 활성에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 2와 같이 배양한 인간 피부 섬유아 세포주를 6 웰 플레이트에 각각 1X106개씩 분주하였다. 대조군에는 아무것도 첨가하지 않은 새 배지를 2 ml씩만 넣어주고, 나머지 세 개의 실험군에는 배지 2 ml에 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 농도별로 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml의 농도로 처리하고, 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고, 1X PBS로 세척하였으며 세포 용해 버퍼(lysis buffer)로 단백질을 추출하고 정량화하였다. 이 후 웨스턴 블로팅(western blot)을 수행하여 세포 외 기질 활성 단백질인 콜라겐, 엘라스틴 및 ERK2와 활성 억제 단백질인 MMP-3의 활성을 확인하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 파이퍼 캄보디아눔 추출물의 농도가 증가함에 따라 인간 피부 섬유아 세포주에서 콜라겐, 엘라스틴 및 ERK2 단백질의 발현양은 증가하고, MMP-3의 발현양은 감소하는 결과를 확인하였다. 이는 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 콜라겐, 엘라스틴 및 ERK2 합성 증가를 통해 세포 탄성 재건 능력을 향상시켜 주름을 개선하며 상처치료 효과를 가짐을 나타낸다.
실험예 5. 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 UV 조사 후 단백질 활성에 미치는 영향 확인
노화를 유발하는 것으로 알려진 UV 조사 후 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 단백질 활성에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실시예 2와 같이 배양한 인간 피부 섬유아 세포주를 6 웰 플레이트에 각각 1X106개씩 분주하고 30 초 동안 40 J의 UV를 조사하였다. 대조군에는 새 배지를 2 ml씩만 넣어주고, 나머지 세 개의 실험군에는 배지 2 ml에 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 농도별로 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml씩 넣어주고, 24 시간 동안 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 1X PBS로 세척하였으며 세포 용해 버퍼(lysis buffer)로 단백질을 추출 및 정량하였다. 이 후 웨스턴 블로팅(western blot)을 통해 UV에 의해 활성화되는 것으로 알려진 TNFR, EGFR과 p38, p53 및 cJUN의 활성을 확인하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 처리한 실험군에서 농도의존적으로 UV에 활성화되는 것으로 알려진 TNFR, EGFR, p38, p53과 cJUN 활성이 감소됨을 확인하였다. 이는 파이퍼 캄보디아눔이 UV 조사에 의해 조절되는 하위 단백질들의 활성을 억제함으로써 항산화 및 이에 따른 항노화 효과가 있음을 나타낸다.
실험예 6. 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 UV 조사 후 ROS 활성 변화에 미치는 영향 확인
UV 조사 후 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 ROS 활성에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 2와 같이 배양한 인간 피부 섬유아 세포주를 6 웰 플레이트에 각각 1X106개씩 분주하고 30 초 동안 40 J로 UV를 조사하였으며 실험군인 세 개의 웰에는 배지 2 ml에 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml의 농도로 첨가한 후 24 시간 동안 배양 하였다. 대조군에는 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 미처리하였다. 그 후 DCFDA(2',7'-dichlorofluorescin diacetate)와 CM-H2DCFDA를 넣고 30 분 동안 전처리한 후 FACS(Flow Cytometery)로 ROS 생성을 측정하였으며, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타낸 바와 같이, UV를 조사한 경우 ROS 생성이 증가하였으나, 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 처리한 경우 이러한 ROS 생성이 확연히 감소함을 확인하였다. 이는 파이퍼 캄보디아눔이 ROS 생성을 억제함으로서 항산화 및 이에 따른 항노화 효과가 있음을 나타낸다.
실험예 7. 파이퍼 캄보디아눔 추출물의
in vivo
에서 상처재생효과 확인
파이퍼 캄보디아눔 추출물의 상처재생 효과를 확인하기 위하여 상처 모델 마우스의 등을 제모하여 동일한 크기로 상처 4 곳을 낸 후, 대조군인 한 상처부위는 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 처리하지 않고, 실험군인 나머지 세 상처부위에는 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 각각 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 50 μg/ml의 농도로 처리한 후 하루 단위로 사진을 찍어 관찰하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8에 나타낸 바와 같이, 파이퍼 캄보디아눔 추출물을 처리한 실험군에서 상처 크기가 작아짐을 확인하였고, 이러한 효과는 농도가 증가함에 따라 그 효과가 더 현저하게 나타남을 확인하였다. 이는 파이퍼 캄보디아눔 추출물이 in vivo에서 상처치료 효과가 있음을 나타낸다.
상기 실험들의 통계는 ±S.D를 사용하였고, p<0.05(*), p<0.01로 기록하였다.
이상의 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 파이퍼 캄보디아눔 (Piper cambodianum) 추출물은 콜라겐(collagen), 엘라스틴(Elastin) 및 HAS-2 유전자의 발현을 증가시키고 MMP-1 유전자의 발현 및 ROS 활성을 저해함으로써 우수한 상처치료 및 항노화 효과를 나타낼 수 있는바 화장료 조성물, 약학적 조성물, 피부외용제 조성물 및 건강기능식품 조성물 등으로 다양하게 활용할 수 있음을 확인하였다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
제제예 1. 화장료 제제의 제조
1. 유연화장수 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 0.1중량%
1,3-부틸렌글리콜 5.2중량%, 올레일알코올 1.5중량%
에탄올 3.2중량%
폴리솔베이트 20 3.2중량%
벤조페논-9 2.0중량%
카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 글리세린 3.5중량%
미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 유연화장수를 제조하였다.
2. 밀크로션 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 0.1중량%
글리세린 5.1중량%
프로필렌글리콜 4.2중량%
토코페릴아세테이트 3.0중량%
유동파라핀 4.6중량%
트리에탄올아민 1.0중량%
스쿠알란 3.1중량%
마카다미아너트오일 2.5중량%
폴리솔베이트 60 1.6중량%
비탄세스퀴롤레이트 1.6중량%
프로필파라벤 0.6중량%
카르복실비닐폴리머 1.5중량%
미량의 향, 미량의 방부제, 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 밀크로션을 제조하였다.
3. 영양크림 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 0.5중량%
글리세린 4.0중량%
바셀린 3.5중량%
트리에탄올아민 2.1중량%
유동파라핀 5.3중량%
스쿠알란 3.0중량%
밀납 2.6중량%
토코페릴아세테이트 5.4중량%
폴리솔베이트 60 3.2중량%
카르복실비닐폴리머 1.0중량%
솔비탄세스퀴올레이트 3.1중량%
미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 영양크림을 제조하였다.
4. 마사지크림 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 0.5중량%
글리세린 4.0중량%
바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 0.5중량%
유동파라핀 24.0중량%
스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.1중량%
토코페릴아세테이트 0.1중량%
폴리솔베이트 60 2.4중량%
카르복실비닐폴리머 1.0중량%
솔비탄세스퀴올레이트 2.3중량%
미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 마사지크림을 제조하였다.
제제예 2. 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
2. 정제의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
3. 캡슐제의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
4. 주사제의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO42H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
5. 액제의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 3. 식품 제제의 제조
1. 건강식품의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2. 건강음료의 제조
파이퍼 캄보디아눔 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (11)
- 파이퍼 캄보디아눔(Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 주름 개선용 또는 피부 탄력 저하 방지용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 파이퍼 캄보디아눔 추출물은 파이어 캄보디아눔 피 포름(Piper cambodianum P.Fourn) 추출물인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 또는 피부 탄력 저하 방지용 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1-C4 알코올 및 이들의 혼합용매로 추출된 것을 특징으로 하는 주름 개선용 또는 피부 탄력 저하 방지용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 줄기 또는 잎에서 추출된 것을 특징으로 하는 주름 개선용 또는 피부 탄력 저하 방지용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 콜라겐(collagen), 엘라스틴(Elastin) 및 HAS-2(hyaluronan synthase 2) 유전자로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 또는 피부 탄력 저하 방지용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 ROS(reactive oxygen species)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 또는 피부 탄력 저하 방지용 화장료 조성물.
- 파이퍼 캄보디아눔 (Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 상처치료용 약학적 조성물.
- 제9항의 약학적 조성물을 포함하는 상처치료용 피부외용제 조성물.
- 파이퍼 캄보디아눔 (Piper cambodianum) 추출물을 포함하는 항산화용 건강기능식품 조성물.
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