RU2682646C2 - Применение растительного экстракта для предупреждения и лечения выпадения волос - Google Patents
Применение растительного экстракта для предупреждения и лечения выпадения волос Download PDFInfo
- Publication number
- RU2682646C2 RU2682646C2 RU2016120991A RU2016120991A RU2682646C2 RU 2682646 C2 RU2682646 C2 RU 2682646C2 RU 2016120991 A RU2016120991 A RU 2016120991A RU 2016120991 A RU2016120991 A RU 2016120991A RU 2682646 C2 RU2682646 C2 RU 2682646C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- extract
- galeopsis segetum
- allosyl
- cells
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title abstract description 95
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 title description 22
- 241001096606 Galeopsis segetum Species 0.000 claims abstract description 89
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 83
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 claims abstract description 23
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 claims abstract description 13
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 201000002996 androgenic alopecia Diseases 0.000 claims abstract description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 74
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 43
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 36
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 claims description 33
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 20
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims description 17
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 206010068168 androgenetic alopecia Diseases 0.000 claims description 6
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 5
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 4
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 claims description 4
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 claims description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims 2
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 36
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 239000012676 herbal extract Substances 0.000 abstract 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 84
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 25
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 16
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 16
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 14
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 14
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 13
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 10
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 10
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 10
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 108010066551 Cholestenone 5 alpha-Reductase Proteins 0.000 description 9
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 9
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 8
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 7
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- -1 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000003778 catagen phase Effects 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000005706 Keratin-6 Human genes 0.000 description 5
- 108010070557 Keratin-6 Proteins 0.000 description 5
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 5
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 229960004039 finasteride Drugs 0.000 description 5
- DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N finasteride Chemical compound N([C@@H]1CC2)C(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)NC(C)(C)C)[C@@]2(C)CC1 DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- XDFNWJDGWJVGGN-UHFFFAOYSA-N 2-(2,7-dichloro-3,6-dihydroxy-9h-xanthen-9-yl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1C2=CC(Cl)=C(O)C=C2OC2=CC(O)=C(Cl)C=C21 XDFNWJDGWJVGGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 4
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 4
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 4
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003797 telogen phase Effects 0.000 description 4
- 150000003536 tetrazoles Chemical group 0.000 description 4
- 229940035289 tobi Drugs 0.000 description 4
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 4
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 4
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 4
- VFNKZQNIXUFLBC-UHFFFAOYSA-N 2',7'-dichlorofluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Cl)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(Cl)C(O)=C1 VFNKZQNIXUFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 3
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 3
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 3
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 102100033875 3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000640851 Homo sapiens 3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 2
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- ZFMITUMMTDLWHR-UHFFFAOYSA-N Minoxidil Chemical compound NC1=[N+]([O-])C(N)=CC(N2CCCCC2)=N1 ZFMITUMMTDLWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N Streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 2
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 2
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 2
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N dibutyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCC DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FLKPEMZONWLCSK-UHFFFAOYSA-N diethyl phthalate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCC FLKPEMZONWLCSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 210000004186 follicle cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 229960003632 minoxidil Drugs 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical compound CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRWXDRXWUYUVJO-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxypropyl octadecanoate;hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO KRWXDRXWUYUVJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVCXVUHHCUYLGX-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpyrrole Chemical compound CC1=CC=CN1 TVCXVUHHCUYLGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N D-panthenol Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCCO SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 229920000896 Ethulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001859 Ethyl hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 244000059550 Galactia villosa Species 0.000 description 1
- 241000816457 Galeopsis Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- 235000019759 Maize starch Nutrition 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000000422 Matrix Metalloproteinase 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004376 Sucralose Substances 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007962 Type II Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010089374 Type II Keratins Proteins 0.000 description 1
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000003525 allosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- XAAHAAMILDNBPS-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Ca+2].OP([O-])([O-])=O XAAHAAMILDNBPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229920003064 carboxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 229920006217 cellulose acetate butyrate Polymers 0.000 description 1
- 229940082500 cetostearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001767 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000008387 emulsifying waxe Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 235000019326 ethyl hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000002337 follicle stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000031774 hair cycle Effects 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003660 hair regeneration Effects 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000399 hydroalcoholic extract Substances 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229940117841 methacrylic acid copolymer Drugs 0.000 description 1
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 230000003990 molecular pathway Effects 0.000 description 1
- 108700019599 monomethylolglycine Proteins 0.000 description 1
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940101267 panthenol Drugs 0.000 description 1
- 235000020957 pantothenol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011619 pantothenol Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000021178 picnic Nutrition 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001253 polyvinylpolypyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000034918 positive regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003658 preventing hair loss Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000018316 severe headache Diseases 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 229940101011 sodium hydroxymethylglycinate Drugs 0.000 description 1
- CITBNDNUEPMTFC-UHFFFAOYSA-M sodium;2-(hydroxymethylamino)acetate Chemical compound [Na+].OCNCC([O-])=O CITBNDNUEPMTFC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012496 stress study Methods 0.000 description 1
- 108091007196 stromelysin Proteins 0.000 description 1
- 235000019408 sucralose Nutrition 0.000 description 1
- BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N sucralose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](Cl)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@]1(CCl)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CCl)O1 BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N tetratriacontyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/92—Oral administration
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к средству для стимуляции физиологического роста волос. Применение растительного экстракта надземной части Galeopsis Segetum Necker для стимуляции физиологического роста волос. Применение композиции, включающей растительный экстракт надземной части Galeopsis Segetum Necker для стимуляции физиологического роста волос. Композиция для лечения или предупреждения андрогенной аллопеции или выпадения волос. Вышеописанный экстракт эффективен для стимуляции физиологического роста волос. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 9 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к применению растительного экстракта для предупреждения и лечения выпадения волос.
Настоящее изобретение берет свое начало в области трихологии и питательных продуктов или продуктов лечебного питания.
В особенности, настоящее изобретение относится к применению растительного экстракта для стимулирования физиологического роста волос в участках, подверженных поредению и/или облысению.
Уровень техники
Волосы имеют защитную функцию и рассматриваются в качестве дополнения к коже наряду с сальными железами, потовыми железами и ногтями. Волосы обладают уникальной и специфической особенностью: цикличностью.
Жизненный цикл волосяной луковицы в основном представлен тремя последовательными фазами: анаген (рост), катаген (инволюция) и телоген (фаза покоя).
Период роста волос сменяется фазой регрессии, во время которой самая глубокая часть фолликула претерпевает запрограммированную гибель клеток.
В конце этой фазы цикл запускается заново. Биологические фазы этого явления заключаются в способности стволовых клеток луковицы оставаться, на чередующихся стадиях, в состоянии покоя. Во время роста луковицы и фазы образования волос преобладают активности, направленные на пролиферацию, дифференцировку и выживаемость, которые регулируются факторами роста. Фаза регрессии, напротив, характеризуется активацией молекулярных путей, которые индуцируют апоптоз клеток луковицы.
Поскольку состояние волос важно во взаимоотношениях людей, то многие люди воспринимают потерю волос как проблему.
В фазе анагена дермальный сосочек генерирует химические сигналы, активирующие и направляющие стволовые клетки утолщения, которые путем миграции в основание фолликула формируют матрицу волоса. Путем такой «миграции» стволовые клетки утолщения создают «путь» клеток, который даст начало наружному корневому влагалищу или ORS.
В ответ на дальнейшие сигналы со стороны дермального сосочка, клетки матрицы, которые происходят из стволовых клеток, пролиферируют и запускают процесс дифференциации, перемещаясь вверх для формирования стержня и внутренней оболочки волосяного фолликула.
Начало катагена характеризуется концом клеточной пролиферации и апоптозом клеток матрицы. Во время катагена дермальный сосочек мигрирует в сторону самой нижней части утолщения. Считается, что эта непосредственная близость сосочка к утолщению имеет важное значение для инициации другого цикла продукции волос. Это обеспечивает взаимодействие/активацию клеток утолщения, находящихся в состоянии покоя, и новый цикл роста волос.
При переходе катаген/телоген, некоторые клетки утолщения мигрирующие, чтобы достичь сосочка, формируют матрицу волоса.
Волосы в телогене содержат в своем основании популяцию клеток, которые фактически называют матрица волоса, расположенные в непосредственной близости от дермальных сосочков. Матрица волоса активируется к пролиферации к концу фазы телогена, еще до утолщения, формируя, окружая сосочек, матрицу новой луковицы.
Различные факторы, среди которых стресс, недостаток питательных веществ и старение, негативно влияют на жизненный цикл волосяной луковицы, приводя к сокращению числа волос и их поредению.
У лиц, страдающих от андрогенной алопеции (AGA), с течением времени фолликулы, которые образуются вновь в начале новой фазы анагена, становятся меньше по размерам, что приводит к образованию волос с меньшим диаметром по сравнению с исходным диаметром. Как следствие, происходит формирование микроскопических волос.
Было отмечено, что, хотя фолликулы волосистой части головы атрофируются, все еще остается источник стволовых клеток, которые превращаются в клетки-предшественники, хотя и в меньшей степени, по сравнению с кожей головы в физиологических условиях.
Большинство доступных на рынке лекарственных препаратов для волос нацелены на волосяные луковицы и действуют на метаболизм, кормление, насыщения кислородом кожи головы и микроциркуляцию в ней, улучшая условия, способствующие физиологическому росту волос.
На рынке для лечения и предупреждения выпадения волос доступны различные изделия и терапии. Однако применение таких изделий, которые на сегодняшний день показали себя особенно эффективными в лечении выпадения волос, таких как миноксидил или некоторые антистероидные лекарственные препараты синтетического происхождения, не лишены недостатков. В частности, местное применение миноксидила может в некоторой степени привести к возникновению побочных эффектов, таких как кожная сыпь, местные воспаления, сильная головная боль, в то время как пероральное введение таких лекарственных препаратов, как финастерид, может вызвать появление гормональных дисфункций с потенциальными негативными последствиями для сексуальной жизни.
Другие изделия, в настоящее время применяемые в области трихологии, несмотря на то что они основаны на продуктах природного происхождения, напротив, имеют тот недостаток, что их изготавливают с помощью сложных способов получения и, следовательно, они особенно дорогостоящие.
Как следствие, в настоящее время существует необходимость в обеспечении изделия, содержащего вещества, которые активны в стимулировании физиологического процесса роста волос и применение которых не вызывает существенных побочных эффектов.
Одна из целей настоящего изобретения заключается в обеспечении композиции или лекарственного препарата, содержащего активные агенты несинтетического происхождения, которые пригодны для стимуляции физиологического роста волос у субъектов, страдающих от выпадения или поредения волос и применение которых практически свободно от существенных побочных эффектов.
Другая цель настоящего изобретения заключается в обеспечении композиции для применения в области трихологии, которая может быть применена местно или введена перорально, активные агенты которой имеют растительное происхождение и могут быть получены с помощью простых методов.
Раскрытие изобретения
В области техники изобретения, заявитель обнаружил, что растительный экстракт, полученный из выбранного травянистого растения, стимулирует физиологический процесс роста волос, при местном применении на волосистую часть головы или при пероральном введении.
В частности, заявитель неожиданно обнаружил, что растение Galeopsis segetum Necker содержит один или несколько активных ингредиентов, которые стимулируют активность волосяной луковицы и способствуют восстановлению физиологических условий роста волос.
В соответствии с первым аспектом изобретения, следовательно, обеспечивают применение растительного экстракта Galeopsis Segetum Necker для стимуляции физиологического роста волос.
В соответствии со вторым аспектом, изобретение обеспечивает растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker для применения при лечении или предупреждении выпадения волос.
Неожиданно было обнаружено, что растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker введенный местно или перорально субъекту, страдающему от поредения волос, вызывает постепенное сгущение более тонких участков волосистой части головы.
В соответствии с третьим аспектом, настоящее изобретение обеспечивает применение композиции, включающей растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker и физиологически приемлемый носитель для стимуляции физиологического роста волос.
В соответствии с четвертым аспектом, обеспечивают композицию, включающую растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker и физиологически приемлемый носитель для применения при лечении или предупреждении выпадения волос.
Как правило, композиция изобретения содержит трихологически активное количество одного или нескольких активных ингредиентов, присутствующих в экстракте Galeopsis Segetum Necker.
Краткое описание чертежей
Особенности и преимущества настоящего изобретения станут более очевидны из прилагаемых чертежей, в которых:
фиг. 1 показывает столбчатые диаграммы, относящиеся к результатам по цитотоксичности, полученным с помощью МТТ-анализа по примеру 8 на образцах: вегетативной биомассы, водно-спиртового экстракта Galeopsis Segetum, этилацетатного экстракта Galeopsis Segetum, экстракта Galeopsis Segetum в сверхкритическом CO2, в диапазоне доз 2-200 мкг/мл в течение 24, 48 и 72 часов;
фиг. 2 показывает гистограммы, представляющие результаты МТТ-анализа с окислительным стрессом, индуцированным на образцах α-токоферола, вегетативной биомассы, водно-спиртового экстракта, этилацетатного экстракта и экстракта Galeopsis Segetum в сверхкритическом CO2, как показано в таблице 1 по примеру 8;
фиг. 3 показывает гистограммы, представляющие результаты по продукции внутриклеточных АФК, полученные с помощью анализа по примеру 8 образцов, представленных α-токоферолом, вегетативной биомассой и водно-спиртовым экстрактом, этилацетатным экстрактом и экстрактом в сверхкритическом CO2 из Galeopsis Segetum;
фиг. 4 показывает гистограммы, представляющие эффекты Galeopsis Segetum на активность изоформы 2 5-альфа-редуктазы, образцов α-токоферола, вегетативной биомассы и водно-спиртового экстракта, этилацетатного экстракта и экстракта в сверхкритическом CO2, как описано в примере 8;
фиг. 5 показывает гистограммы, представляющие эффекты на экспрессию цитокератина 6А в двух концентрациях на каждое из следующего: вегетативная биомасса, водно-спиртовой экстракт Galeopsis Segetum, этилацетатный экстракт Galeopsis Segetum, экстракт Galeopsis Segetum в сверхкритическом CO2 , как описано в примере 8;
фиг. 6 показывает столбчатые диаграммы, относящиеся к МТТ-анализу на 24-х часах, демонстрирующие процент клеточной активности по сравнению с контролем, достигнутый путем обработки растительными экстрактами, содержащими возрастающие количества Galeopsis Segetum Necker, в соответствии с примером 7;
фиг. 7 показывает характеристики трех экстрактов Galeopsis Segetum, описанных в примере 9, с помощью ТСХ-хроматографии с высокой полярностью элюента;
фиг. 8 показывает характеристики трех экстрактов Galeopsis Segetum, описанных в примере 9 с помощью ТСХ-хроматографии с высокой полярностью элюента;
фиг. 9 показывает график с FT-IR-спектром водно-спиртового экстракта Galeopsis Segetum по примеру 9;
фиг. 10 показывает график с FT-IR-спектром этилацетатного экстракта Galeopsis Segetum по примеру 9;
фиг. 11 показывает график с FT-IR-спектром экстракта в сверхкритическом CO2 Galeopsis Segetum по примеру 9.
Осуществление изобретения
Заявитель обнаружил, что растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker, при введении локально или накожно, осуществляет стимулирующее действие на клетки фолликула, реактивируя жизненный цикл волосяных фолликулов.
Кроме того, неожиданно было обнаружено, что трихологическая активность экстракта Galeopsis Segetum Necker также приложима к волосяным луковицам волосистой части головы, находящимся в состоянии покоя, которые, как правило, присутствуют в тех областях волосистой части головы, где обнаруживают поредение волос.
В соответствии с первым аспектом изобретения, следовательно, обеспечивают применение растительного экстракта растения Galeopsis Segetum Necker для стимуляции физиологического роста волос.
В соответствии со вторым аспектом, обеспечивают растительный экстракт растения Galeopsis Segetum Necker для применения при стимулировании физиологического роста волос.
Растение, из которого получают растительный экстракт на основе изобретения, представляет собой Galeopsis Segetum Necker (G. ochroleuca Lam., G. dubia Leers, G. villosa Huds. также известное как пикульник пушистый), травянистые прямостоячие виды с типичными губоцветными цветками, принадлежащие к семейству Lamiaceae.
Растительный экстракт для применения изобретения может быть получен из корней, листьев, плодов или цветков растения Galeopsis Segetum Necker или из двух или нескольких данных частей растения.
В некоторых воплощениях, растительный экстракт получают из надземной части растения Galeopsis Segetum Necker.
В соответствии с некоторыми воплощениями, растительный экстракт изобретения получают с помощью экстракции из части растения, в особенности, наземных частей или их вегетативных тканей, применяя в качестве средства для экстракции физиологически приемлемый или годный к употреблению в пищу растворитель. Термин «годный к употреблению в пищу» означает физиологически приемлемый растворитель, который может усваиваться организмом человека.
Подходящий для получения растительного экстракта растворитель представляет собой физиологически приемлемую и/или годную к употреблению в пищу жидкость, в которой растворимы биологически активные компоненты и в которой они не подвергаются изменению, лишающему их свойственной им активности.
В некоторых воплощениях растворитель представляет собой гидрофильный растворитель, который выбирают из воды, этилацетата, этанола или их смесей.
Для того чтобы получить растительный экстракт растения Galeopsis Segetum Necker, могут быть применены способы экстракция с применением сверхкритического CO2 или твердожидкостные способы, подходящие для разделения/экстрагирования из вегетативных тканей растения одного или нескольких биологически активных компонентов для восстановления физиологических состояний активности волосяной луковицы.
В конкретных воплощениях, экстракция одного или нескольких биологически активных компонентов происходит путем мацерации вегетативной части или матрикса Galeopsis Segetum Necker в подходящем растворителе, например, в водно-спиртовой смеси.
Например, вегетативную часть или матрикс, как правило, надземные части, растения Galeopsis Segetum Necker погружают в подходящий растворитель, например, в водно-спиртовую смесь, на время, подходящее для обогащения растворителя одним или несколькими биологически активными компонентами. В этих условиях, путем диффузии и осмоса происходит экстракция в растворитель биологически активных компонентов, присутствующих в вегетативных тканях растения.
Как правило, во время мацерации матрикс растения Galeopsis Segetum Necker в течение различного времени вступает в контакт с растворителем для получения экстракции эффективного количества биологически активного компонента. В конкретных воплощениях время мацерации может варьировать от 1 до 48 часов.
В конкретных воплощениях растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker вводят в концентрации от 0,01 до 100 мг/мл.
В соответствии с конкретными воплощениями получение подходящего экстракта Galeopsis Segetum Necker включает следующие стадии:
- измельчение части растения, например, наземных частей,
- добавление растворителя для экстракции, например, для получения массового отношения лекарственное средство/водно-спиртовой растворитель в диапазоне от примерно 1:10 до примерно 1:50,
- мацерация,
- экстрагирование,
- фильтрование,
- концентрирование фильтрата, например, при пониженном давлении путем выпаривания растворителя,
- необязательно, продолжение выпаривания до устранения растворителя,
- необязательно, высушивание экстракта.
В конкретных воплощениях стадию экстракции можно повторить два или три раза, до истощения материала, который нужно экстрагировать.
На конечной стадии удаления растворителя путем выпаривания может быть необязательно добавлен твердый носитель, такой как, в качестве неограничивающего примера, крахмалы или мальтодекстрины, для получения экстракта в форме сухого порошка.
В соответствии с другим воплощением, способ экстракции из Galeopsis segetum Necker включает следующие стадии:
- измельчение, например, наземных частей растения;
- перенос полученного порошка в подходящий перколятор;
- промывание, например, с некоторым количеством растворителя для экстракции, так чтобы получить массовое отношение лекарственное средство/растворитель от примерно 1:20 до примерно 1:100;
- рециркулирование части фильтрата до истощения материала, который нужно экстрагировать;
- отжим экстрагированной вегетативной массы для извлечения всего растворителя для экстракции;
- фильтрование промывных вод;
- концентрирование фильтрата, например, при пониженном давлении путем выпаривания растворителя;
- необязательно, продолжение выпаривания до удаления растворителя;
- необязательно, высушивание экстракта.
В соответствии с некоторыми воплощениями, на конечной стадии удаления растворителя путем выпаривания добавляют твердый носитель, например, крахмал или мальтодекстрины, для получения экстракта в форме сухого порошка.
Как правило, полученный экстракт может быть жидким, мягким или сухим. Например, в жидком экстракте 1 мл экстракта содержит биологически активные компоненты, растворимые в 1 г растительного лекарственного средства, в мягком экстракте растворитель частично упаривают, в особенности, до тех пор, пока экстракт смачивает фильтровальную бумагу, в сухом экстракте растворитель выпаривают почти полностью для получения порошка.
Существует возможность получения экстрактов Galeopsis Segetum с различной полярностью. Например, возможно получить высокополярный экстракт, применяя полярный растворитель, такой как водно-спиртовой раствор, экстракт с промежуточной полярностью, применяя менее полярный растворитель, такой как этилацетат, или неполярный экстракт, применяя сверхкритический CO2. Предпочтительные методики экстракции приставляют собой методики с применением высокополярного растворителя и методики со сверхкритическим СO2. В особенности, при применении данных методик эффективно экстрагируют фракцию фитокомплекса, который проявляет ингибирующую активность в отношении фермента 5-альфа-редуктазы, играющую важную роль в андрогенной алопеции и представляющую собой мишень для финастерида, известного соединения с антиандрогенной активностью, эффективного при стимулировании роста волос и при реактивации физиологического цикла волосяных фолликулов.
В конкретных воплощениях, экстракцию осуществляют, применяя массовое отношение между растворителем и растительной матрицей, равное от 1:10 до 10:1.
Дополнительные способы получения растительного экстракта изобретения включают методики экстракции путем переваривания, настаивания, выдавливания, вываривания, промывания, противоточной экстракции, экстракции по способу Сокслета, экстракции в сверхкритических газах или ультразвуковой обработки.
В некоторых воплощениях, биологически активный компонент, содержащийся в экстракте Galeopsis Segetum Necker, включает, по меньшей мере, один флавоноид, в особенности, выбранный из группы, включающей гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2''-аллозил)глюкозид моноацетилированный, гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2''-аллозил)глюкозид диацетилированный, изоскутелареин-7-(2''-аллозил)глюкозид моноацетилированный, гиполаетин 4'-метил-этил-7-(2''-аллозил)глюкозид, гиполаетин-7-(2''-аллозил)глюкозид моноацетилированный, изоскутелареин-7-(2''-аллозил)глюкозид и гиполаетин-7-(2''-аллозил)глюкозид диацетилированный.
Заявитель обнаружил, что гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2''-аллозил)глюкозид моноацетилированный и/или гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2''-аллозил)глюкозид диацетилированный представляют собой флавоноиды, особенно активные для стимуляции активности волосяной луковицы.
В некоторых воплощениях, содержание растительного экстракта Galeopsis Segetum Necker в композиции изобретения составляло от 0,01 до 10% масс./масс., например, 3% масс./масс.
Биологически активные компоненты, содержащиеся в растительном экстракте изобретения, реактивируют жизненный цикл волосяных фолликулов, даже находящихся в состоянии покоя, на волосистой части головы в участках поредения и/или в участках, затронутых облысением. Это действие распространяется на восстановление роста волос также в участках волосистой части головы, где волосы поредели.
В соответствии с третьим аспектом, настоящее изобретение обеспечивает применение композиции, включающей растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker, и физиологически приемлемый носитель при лечении и/или предупреждении выпадения волос или для стимуляции физиологического роста волос.
В соответствии с четвертым аспектом, обеспечивают композицию, включающую растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker и физиологически приемлемый носитель, для применения при лечении или предупреждении выпадения волос.
В особенности, композиция изобретения включает активное количество одного или нескольких биологически активных компонентов, экстрагированных из растения Galeopsis Segetum Necker.
Как правило, композиция изобретения представляет собой медицинское устройство, фармацевтическую композицию, биологически активную или пищевую добавку или косметическое средство.
Композиция изобретения, введенная локально или системно, увеличивает жизнеспособность клеток волосяного фолликула, как в фазе анагена, так и в фазе миниатюризации и реактивирует в состоянии покоя клетки волосистой части головы путем регенерации волосяных фолликулов и стимулирования роста новых волос.
В некоторых воплощениях композиция изобретения включает физиологически и/или фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное средство.
Как правило, физиологически приемлемый носитель композиции изобретения представляет собой вспомогательное средство, носитель или разбавитель, подходящий для местного применения и/или перорального введения.
В объеме настоящего документа, термин «носитель» относится к вспомогательному средству, носителю, разбавителю или адъюванту, который может присутствовать в композиции изобретения. Любой носитель и/или вспомогательное средство, подходящее для формы лекарственного препарата, желаемой для введения, рассматривается для применения растительного экстракта или присутствующих в нем активных ингредиентов, описанных в настоящем документе.
Как правило, в композиции изобретения применяют компоненты растительного происхождения, которые биологически активны и в значительной степени свободны от побочных эффектов при пероральном или локальном введении.
В некоторых воплощениях, композицию изобретения вводят перорально. В других воплощениях, композицию наносят на кожу и; в особенности, на волосистую часть головы.
Физиологически и/или фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное средство может быть выбрано на основе пути введения, для которого полученная фармацевтическая композиция предназначена.
В некоторых воплощениях, путь введения композиции изобретения представляет собой местное введение. В этих случаях композиция изобретения может быть нанесена, в эффективном количестве, непосредственно на волосистую часть головы.
Например, при лечении андрогенной алопеции косметически активное количество композиции изобретения может быть нанесено непосредственно на волосистую часть головы один раз или несколько раз в день, обычно для циклов продолжительностью 2-3 месяца, чередующихся с периодами отдыха.
В соответствии с другим аспектом изобретения, обеспечивают способ косметического лечения, который включает нанесение на волосистую часть головы эффективного количества композиции описанного ранее типа.
Композиция для местного применения может быть представлена в твердой, мягкой или жидкой форме.
Подходящие композиции в твердой форме включают кремы, гели, пасты, мази.
В других воплощениях композиция для местного введения находится в жидкой форме, например, в форме лосьонов, гелей, шампуней, суспензий, эмульсий.
В случае композиций в жидкой или мягкой форме, растительный экстракт может быть разведен в носителе в физиологически приемлемой жидкой форме, таком как вода, спирт, водно-спиртовой или глицериновый раствор или смешан с другими жидкостями, подходящими для местного нанесения.
В качестве примера, композиции изобретения в жидкой форме могут быть получены путем растворения биологически активных компонентов экстракта в воде и/или спирту. Жидкая композиция может быть забуферена для достижения pH-диапазона, который обычно выбирают между 5 и 7, так, чтобы он был совместим с pH волосистой части головы, и затем фильтруют и упаковывают в подходящие контейнеры, такие как флаконы или ампулы.
В некоторых воплощениях, композиции изобретения может включать вспомогательные средства, обычно применяемые в композиции косметических или фармацевтических лекарственных препаратов, для местного применения, такие как консерванты, бактерицидные средства, стабилизирующие средства, эмульгаторы, буферы, увлажняющие средства, красители и другие вспомогательные средства, обычно применяемые в методиках получения косметических/фармацевтических лекарственных препаратов.
В одном из воплощений, композиция для местного нанесения находится в форме содержащего эмульсию экстракта, перенесенного в подходящее вспомогательное средство.
В качестве примера, подходящие вспомогательные средства представляют собой производные целлюлозы, такие как гидроксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиэтилцеллюлоза, этилгидроксиэтилцеллюлоза, ацетат-бутират целлюлозы, ацетат-фталат целлюлозы и их смеси.
Дополнительные примеры подходящих вспомогательных средств включают полимеры, принадлежащие к семейству лактамов, такие как пирролидон и его производные, например, поливинилпирролидон, поливинилполипирролидон и их смеси, неорганические соли, такие как кальция или дикальция фосфат, лубриканты, такие как, например, стеарат магния, триглицериды и их смеси.
В некоторых воплощениях, композиция для местного применения включает вспомогательное средство типа гидроксиметилцеллюлозы и/или желирующие средства с HLB, подходящие для композиции и веществ.
В соответствии с другими воплощениями, введение композиций изобретения осуществляют перорально.
Композиции для перорального введения могут быть в твердой или жидкой форме. Типичные композиции в твердой форме включают таблетки, капсулы, порошки, гранулы, пилюли. Типичные композиции в жидкой форме включают растворы, эмульсии, суспензии, сиропы. Все композиции также включают формы с контролируемым высвобождением того же самого.
Таблетки обычно включают подходящий носитель или вспомогательное средство, в котором диспергирован растительный экстракт, как правило, в сухой форме.
Биологически активные компоненты композиции изобретения могут присутствовать в различных количествах, например, от 0,0001% по массе идо 10% по массе, как правило, от 00,1 до 5% по массе.
В соответствии с конкретными воплощениями, композиция изобретения дополнительно включает один или несколько активных веществ, таких как витамины, минералы, микроэлементы и другие вещества, активные при стимулировании активности волосяного фолликула.
В соответствии с некоторыми воплощениями, композиция для перорального введения представляет собой функциональный пищевой продукт, нутрицевтическую композицию, продукт для лечебного питания, добавку или питательное изделие или медицинское устройство.
Функциональный пищевой продукт означает любые модифицированные продукты питания или пищевой ингредиент, которые могут обеспечить преимущества или защиту от недостатков или физиологического состояния, помимо традиционных питательных веществ, которые он содержит.
Нутрицевтическое изделие означает изделие, выделенное или очищенное из годного к употреблению в пищу вещества. Нутрицевтическое изделие является таковым, когда оно демонстрирует наличие физиологического преимущества или обеспечивает защиту от недостатка или физиологического расстройства.
Диетическая или пищевая добавка означает изделие, содержащее витамин, минерал, растительный экстракт, аминокислоту, метаболит, экстракт, концентрат или смеси данных ингредиентов.
Вводимое количество и частота введения композиции будет зависеть от типа и тяжести подлежащего лечению трихологического состояния.
Композиция изобретения эффективна в предупреждении и/или лечении форм облысения или поредения волос, таких как, например, выпадение волос и андрогенная алопеция.
Настоящее изобретение теперь будет описано с отсылкой к нижеследующим примерам, которые предусмотрены для иллюстрации и не должны быть предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Пример 1
Таблетки для перорального применения
Сухой экстракт Galeopsis Segetum | 100-300 мг |
Микрокристаллическая целлюлоза | 80-340 мг |
Дигидрат двухосновного фосфата кальция | 50-100 мг |
Коллоидный диоксид кремния | 2,5-10 мг |
Стеарат магния | 2,5-10 мг |
PEG-4000 | 0,5-2,5 мг |
Поперечносшитая натриевая | |
карбоксиметилцеллюлоза | 0,25-0,5 мг |
Альгинат натрия | 0,25-0,5 мг |
Гидроксипропилметилцеллюлоза | 0,25-0,5 мг |
Пример 2
Гранулированное изделие для перорального применения
Эритритол | 20-40% масс./масс. |
Сухой экстракт Galeopsis Segetum | 0,5-4% масс./масс. |
Маннитол | 10-30% масс./масс. |
Ароматизирующее вещество | 5-10% р/р |
Сукралоза | 0,1-0,3% р/р |
Крахмал по мере необходимости | 100 |
Пример 3
Таблетки для перорального применения
Рафинированная сахароза | 50-90 мг |
Мягкий экстракт Galeopsis Segetum | 50-100 мг |
Тальк | 10-20 мг |
Маисовый крахмал | 5-25 мг |
Порошкообразный сахар | 5-15 мг |
70% некристаллизующийся сорбитол | 5-10 мг |
Стеарат магния | 1-3 мг |
Аравийская камедь | 2-3 мг |
Диоксид титана | 1-2,5 мг |
Желатин | 1-3 мг |
Сополимер метакриловой кислоты типа А | 1 -2,5 мг |
Легкий карбонат магния | 0,5-1 мг |
Полиэтиленгликоль 6000 | 0,1-0,3 мг |
Дибутилфталат | 0,1-0,25 мг |
Метилпараоксибензоат | 0,01-0,03 мг |
Микрокристаллическая целлюлоза по мере необходимости | 300 мг |
Пример 4
Лосьон для нанесения на волосы и кожу головы
Денатурированный этиловый спирт типа C | 500-1500 мг |
Жидкий экстракт Galeopsis Segetum | 50-300 мг |
Полиоксиэтилированные гидрогенизированное | |
касторовое масло | 12,2-48,8 мг |
Ароматизирующее средство | 3-12 мг |
Дигидрат динатриевой соли ЭДТА | 1,5-6 мг |
Вода по мере необходимости | 5 мл |
Пример 5
Лечебный шампунь
Zetesol MGS | 30-50% масс./объем |
Protelan LS 9011 | 5-15% масс./объем |
Mirasheen CP 820/G | 2-6% масс./объем |
Rewoderm LI S 80 | 2-4% масс./объем |
ВС 2262 | 0,5-1,5% масс./объем |
Кокамид MIPA | 0,5-1,5% масс./объем |
Protelan AG 11 | 0,5-1,5% масс./объем |
Лимонная кислота | 0,5-1,5% масс./объем |
Ароматизирующее средство | 0,5-1,5% масс./объем |
Натрия гидроксиметилглицинат | 0,5-1,5% масс./объем |
Бетаин | 0,25-0,75% мас./объем |
Лаурилметилглюцет-10- | |
гидроксипропилдимониум хлорид | 0,25-0,75% масс./объем |
Поликватерниум-10 | 0,2-0,6% мас./объем |
Тетранатриевый ЭДТА | 0,1-0,3% масс./объем |
Пантенол | 0,1-0,3% масс./объем |
Жидкий экстракт Galeopsis Segetum | 0,05-1,0% масс./объем |
Бутилгидроксинизол (ВНА) | 0,005-0,02% р/объем |
Вода по мере необходимости | 100 мл |
Пример 6
Кожная эмульсия
Пропиленгликоль | 6-8 г |
Глицерил стеарат пальмитат | 3-5 г |
Кокосовое масло | 2-4 г |
Цетостеариловьш спирт (25) ОЕ | 1-3 г |
Эмульгирующий воск | 1-3 г |
Бензиловый спирт | 0,5-1,5 г |
Мягкий экстракт Galeopsis Segetum | 0,5-1,5 г |
Цетиловый спирт (6) ОЕ | 0,25-1,0 г |
Вода по мере необходимости | 100 г |
Пример 7
Пролиферативные эффекты экстракта Galeopsis Segetum изучали в клетках HFDPC-с (PromoCell®), которые поддерживали в культуре в присутствии среды роста для фолликулов дермального сосочка (Follicle Dermal Papilla Growth Medium), и следуя инструкциям производителя (PromoCell®).
Пролиферативную активность оценивали при помощи МТТ-анализа.
МТТ-анализ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид) представляет собой колориметрический анализ, применяемый для in vitro оценки пролиферация клеток [Mosmann Т, 1983], так как он позволяет измерять пролиферацию и жизнеспособность клеток по оценке активности митохондрий. Данный способ очень полезен для измерения роста клеток после лечения митогенами, антигенными стимулами, факторами роста и для исследования цитотоксичности.
Анализ предусматривает применение хромогенного окислителя, МТТ, состоящего из полициклической системы (C18H16BrN5S) с тетразольным кольцом, которое может быть легко восстановлено митохондриальными дегидрогеназами или другими системами транспорта электронов, формирующими, путем открытия тетразольного кольца, азотсодержащее хромогенное соединение, обозначаемое как формазан. Такой формазан образует нерастворимые кристаллы во внутриклеточной среде, для которых мембраны практически непроницаемы: следовательно, поступление молекул в клетку позволено, но выход продукта, если он был правильно метаболизирован, запрещен, это имеет место, если цепи переноса электронов все еще метаболически активны.
Кристаллы формазана затем солюбилизируют в диметилсульфоксиде (DMSO), что вызывает переход окраски раствора из желтого в темно-сине-фиолетовый.
Клетки HFDPC-c высевали с плотностью, равной 5*104 клеток/лунку в 96-луночные планшеты. Через 24 часа, как только было достигнуто слияние, равное примерно 80%, клетки обрабатывали 6-ю возрастающими концентрациями экстракта Galeopsis Segetum N.: 0,01; 0,05; 0,1; 0,5; 1 и 2 мг/мл в полной среде. Контрольные клетки, с другой стороны, поддерживали в культуре в полной среде.
Планшеты инкубировали при 37°C, под 5% CO2 в течение 24-х часов, по окончанию инкубации культуральную среду заменяли 100 мкл раствора МТТ (на лунку, St. Louis, МО, США) 0,5 мг/мл в полной культуральной среде.
Через 3 часа инкубации при 37°C, среду собирали и кристаллы формазана солюбилизировали 100 мкл на лунку DMSO («Sigma-Aldrich», St. Louis, МО, США). Планшет, покрытый алюминием, помещали на механическую мешалку (Arhos 160 - PBI International, Милан, Италия) при 120 rpm в течение 15 минут при комнатной температуре.
Оптическую плотность окрашенного раствора измеряли при помощи спектрофотометрического считывающего устройства для микропланшетов («BioTek Instruments Inc.», Bad Frieddrichshall, Германия) при длине волны 570 нм (опорная длина волны 630 нм).
Результаты были выражены как процент жизнеспособности клеток по сравнению с контрольными клетками (ctr), в соответствии со следующей формулой:
процент жизнеспособности клеток/ctr = (Abs образец/Abs ctr)*100
Все анализы выполняли в двух повторностях.
Результаты теста показали дозозависимое увеличение в пролиферации клеток, что указывает на стимуляцию клеточного роста клеток фолликула.
Стволовые клетки волосяного фолликула играют важную роль в цикле развития волос, но известно, что с возрастом происходит их потеря и утрачивается возможность восстановить регенерацию волос. Из стволовых клеток формируются клетки матрицы, чей рост и дифференциация находятся под влиянием веществ, продуцируемых клетками дермального сосочка. Секреторная активность дермального сосочка находится под контролем веществ, продуцируемых клетками шиповатого слоя наружной оболочки корня, или гормонов. Фактически, клетки шиповатого слоя продуцируют пептиды, размером более 3000 дальтон, которые способны вызывать от двух- до пятикратного увеличения числа митозов клеток сосочка. Недавно было обнаружено, что фактор роста фибробластов (bFGF) и фактор роста тромбоцитов (PDGF) усиливает рост клеток дермального сосочка. В особенности, эти белки увеличивают синтез стромелизина (фермент, металлопротеиназа), действующего на клетки сосочка и ускоряющего их рост. Клетки дермального сосочка вырабатывают многочисленные цитокины, которые оказывают влияние на пролиферацию клеток матрицы волоса. Соответственно, эффект, как тот, который оказывает экстракт Galeopsis, стимулирующий рост данных клеток, имеет преимущество при стимулировании роста волос.
Пример 8
Цель экспериментальной работы
Экспериментальная процедура, представленная далее в настоящем документе, ставила целью изучение in vitro активности различных образцов Galeopsis Segetum, подвергнутых различным способам экстракции, для характеристики их антиоксидантной активности и активности в отношении стимулирования роста волос.
Материалы
Все экстракты разводили до 100 мг/мл в DMSO и фильтровали в стерильных условиях.
Исходные растворы хранили при - 20°C.
Примененные биологические модели
Культуры мышиных эмбриональных фибробластов
Бессмертную линию мышиных эмбриональных фибробластов BALB/с3T3, клон A31 (АТСС, Manassas, VA, США), получали из Национального института исследований рака (Istituto Nazionale di Ricerca sul Cancro (Генуя, Италия)).
Клетки поддерживали в культуре в 25 см3 стерильных флаконах и инкубировали при 37°C во влажной атмосфере под 5%-ным CO2. Поскольку применяли культуральную среду DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, АТСС, Manassas, VA, США), то добавляли до 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS), 1% заменимых аминокислот (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix). Все эти последние реагенты были приобретены у компании Lonza, Inc. (Барселона, Испания)
В ходе стадии культивирования, каждые 2 дня проводили разведение 1:3, до достижения 80%-ного слияния, промыванием IX PBS («Lonza», Барселона, Испания) и отделением клеток раствором трипсин-ЭДТА («Lonza», Барселона, Испания) при 37°C в течение 2-х минут.
Культуры клеток наружного корневого влагалища волосяного фолликула человека
Клетки наружного корневого влагалища волосяного фолликула человека (HHFORSC), предоставленные «Innoprot», выделяли с помощью Scien Cell Research Labs из наружного корневого влагалища волоса. Клеточную линию культивировали в среде для мезенхимальных стволовых клеток (MS СМ): 500 мл основной среды, 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 1% ростовой добавки для мезенхимальных стволовых клеток (MSCGS), 1% раствора пенициллин/стрептомицин (P/S-раствор) и поддерживали в 25 см2 культуральных флаконах при 37°C и под 5% СO2.
Прежде чем приступить к посеву клеток, флакон должен быть покрыт поли-L-лизином (2 мкг/см2).
Каждые два дня сливающиеся культуры разводили 1:3-1:6, путем промывания DPBS (модифицированным по способу Дульбекко фосфатно-солевым буферным раствором), применяя Т/Е-раствор (раствор трипсин/ЭДТА) и TNS (раствор для нейтрализации трипсина) и высевали в количестве 2-5×104 клеток/см2, 37°C, 5% CO2.
Контроли
МТТ-АНАЛИЗ (BALB3T3)
Положительный контроль. Необработанные клетки в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, АТСС, Manassas, VA, США) добавляли к 10% фетальной бычьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix), и поддерживали в 25 см2 (96-луночных) культуральных планшетах при 37°C и под 5% CO2.
Анализ DCFH-DA и тест на МТТ-индуцированный окислительный стресс (BALB3T3)
Отрицательный контроль. Необработанные клетки в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, АТСС, Manassas, VA, США) добавляли к 2,5% фетальной бычьей сыворотке (FCS), 1% заменимыми аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина(Pen-Strep Mix), и поддерживали в 25 см2 (96-луночных) культуральных планшетах при 37°C и под 5% CO2.
Положительный контроль. Клетки, обработанные в течение 2-х часов 1 мМ перекисью водорода в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, АТСС, Manassas, VA, США), добавляли к 2,5% фетальной бычьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix), и поддерживали в 25 см2 (96-луночных) культуральных планшетах при 37°C и под 5% CO2 (в темноте).
Исследование активности индукции 5-АЛЬФА-РЕДУКТАЗЫ (BALB3T3)
Отрицательный контроль. Необработанные клетки в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, АТСС, Manassas, VA, США) добавляли к 10% фетальной бычьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix) и 10 нг/мл тестостерона, и поддерживали в 25 см2 (12-луночных) культуральных планшетах при 37°C и под 5% CO2.
Положительный контроль. Клетки, обработанные в течение 24-х часов финастеридом (0,05 мг/мл) в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, АТСС, Manassas, VA, США), добавляли к 10% фетальной бычьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix) и 10 нг/мл тестостерона, и поддерживали в 25 см2 (12-луночных) культуральных планшетах при 37°C и под 5% CO2.
Исследование экспрессии кератина 6А (ORS)
Отрицательный контроль. Необработанные клетки в MSCM, добавляли к 10% фетальной бычьей сыворотке (FBS), 1% ростовой добавке для мезенхимальных стволовых клеток (MSCGS), 1% раствору пенициллин/стрептомицин (P/S раствор) и поддерживали в 25 см2 (12-луночных) культуральных планшетах при 37°C и под 5% СO2.
Прежде чем приступить к посеву клеток, флакон покрывали поли-L-лизином (2 мкг/см2).
Способы
- Предварительный анализ на цитотоксичность (МТТ-анализ)-BALB3T3
Основы способа
МТТ-анализ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия) представляет собой колориметрический анализ, применяемый для оценки in vitro пролиферации клеток, так как он позволяет измерять пролиферацию и жизнеспособность клеток посредством оценки митохондриальной активности. Данный способ очень полезен для измерения клеточного роста после лечения митогенами, антигенными стимулами, факторами роста и для исследований цитотоксичности.
Анализ предусматривает применение хромогенного окислителя, МТТ, состоящего из полициклической системы (C18H16BrN5S) с тетразольным кольцом, которое может быть легко восстановлено митохондриальными дегидрогеназами или другими системами транспорта электронов, формирующими, путем открытия тетразольного кольца, азотсодержащее хромогенное соединение, обозначаемое как формазан. Формазан образует нерастворимые кристаллы во внутриклеточной среде, для которых мембраны практически непроницаемы: следовательно, поступление молекул в клетку позволено, но выход продукта, если он было правильно метаболизирован, запрещен, это имеет место, если цепи переноса электронов все еще метаболически активны.
Кристаллы формазана затем солюбилизируют в диметилсульфоксиде (DMSO), что вызывает переход окраски раствора из желтого в темно-сине-фиолетовый.
Экспериментальная процедура
Анализ проводили в соответствии со способом Мосмана (Mosmann (1983)), с некоторыми небольшими изменениями. Клетки BALB3T3 высевали с плотностью, равной 5*104 клеток/лунку в 96-луночные планшеты. Через 24 часа, сразу после достижения слияния, равного примерно 80%, клетки обрабатывали 6-ю различными возрастающими концентрациями экстрактов Galeopsis Segetum (вегетативная биомасса; сухой водно-спиртовой образец; образец в этилацетате; экстракт в CO2) 2-10-20-50-100-200 мг/мл в полной среде. Контрольные клетки, с другой стороны, поддерживали в культуре в полной среде.
Планшеты инкубировали при 37°C, под 5% CO2 в течение 24, 48 и 72 часов. По завершению всех обработок, среду собирали и заменяли 100 мкл 0,5 мг/мл раствора МТТ («Sigma-Aldrich», St. Louis, МО, США) в полной культуральной среде.
Через 3 часа инкубации при 37°C, среду собирали и кристаллы формазана солюбилизировали 100 мкл на лунку DMSO («Sigma-Aldrich», St. Louis, МО, США). Планшет, покрытый алюминием, помещали на механическую мешалку (Arhos 160 - PBI International, Милан, Италия) при 120 rpm в течение 15 минут при комнатной температуре.
Оптическую плотность окрашенного раствора измеряли при помощи спектрофотометрического считывающего устройства для микропланшетов («BioTek Instruments Inc.», Bad Frieddrichshall, Германия) при длине волны 570 нм (опорная длина волны 630 нм).
Результаты выражали как процент жизнеспособности клеток по сравнению с контрольными клетками (ctr), в соответствии со следующей формулой:
процент жизнеспособности клеток / ctr = (Abs образца/Abs ctr)*100
Все анализы проводили, по меньшей мере, дважды в двух повторностях.
МТТ с индуцированным окислительным стрессом-BALB3T3
Основы способа
Мышиные фибробласты BALB3T3 представляют собой одну из проверенных моделей для исследования окислительного стресса in vitro (Subiradeet al., 1995; Kutuk et al., 2004).
Исследования, проведенные в 2005 году Rajapakse и коллегами (2005), выявили возможность применения широко употребляемого и многостороннего способа, такого как МТТ-анализ, для исследования in vitro антиоксидантной активности активных соединений. В частности, с помощью данного способа возможно исследовать защитные эффекты таких соединений на клетки, которые впоследствии подвергают окислительному стрессу. Индукцию окислительного стресса осуществляли путем инкубации с перекисью водорода, агента, индуцирующего образование окислительного повреждения в клетках за счет продукции АФК. Возможные защитные эффекты могут быть установлены оценкой жизнеспособности клеток после окислительного стресса, клеток предварительно обработанных/преинкубированных с тестируемыми активными соединениями, в сравнении с клетками, подвергнутыми такому же окислительному стрессу. Большая клеточная жизнеспособность будет соответствовать защитному эффекту протестированных соединений.
Экспериментальная процедура
Анализ проводили в соответствии со способом, описанным Coda и соавторами (Coda et al., 2012), с некоторыми изменениями.
Мышиные фибробласты BALB3T3 высевали в 96-луночный планшет с плотностью, равной 5*104 клеток/лунку, и инкубировали при 37°C, под 5% CO2, пока не достигали 80%-ного слияния.
В дальнейшем клетки инкубировали в течение 16-ти часов с экстрактами Galeopsis segetum (вегетативная биомасса; сухой водно-спиртовой образец; образец в этилацетате; экстракт в CO2) в следующих концентрациях: 20-50 и 100 мкг/мл.
Разведения готовили, начиная с 1000Х исходного раствора в DMSO, фильтровали в стерильных условиях и, применяя среду DMEM, добавляли к 2,5% фетальной телячьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix).
Клетки, обработанные 1 мМ H2O2, применяли в качестве положительного контроля; с другой стороны, клетки, поддерживаемые только в культуральной среде (DMEM 2,5% FCS), применяли в качестве отрицательного контроля.
По окончанию 16 часов предварительной обработки, клетки промывали IX PBS и инкубировали в течение 90 минут с раствором 1 мМ Н2О2 («Sigma-Aldrich», St. Louis, МО, США) в бессывороточной среде, в темноте, при 37°C и 5% CO2.
Сразу же по окончанию стадии индукции окислительного стресса проводили оценку жизнеспособности клеток в различных образцах, в соответствии со способом, описанным в разделе 4.1.2 (МТТ-анализ).
Результаты выражали как процент жизнеспособности клеток по сравнению с контрольными клетками, не подвергавшимися стрессу (ctr), в соответствии со следующей формулой:
процент жизнеспособности клеток/ctr = (Abs образца/Abs ctr)*100
Все анализы проводили, по меньшей мере, дважды в двух повторностях.
Исследование эффектов экстрактов Galeopsis segetum на продукцию АФК с помощью DCFH-DA-анализа-BALB3T3
Основы способа
Продукцию АФК в клеточной линии мышиных фибробластов BALB3T3 определяли с помощью спектрофлуорометрии, анализируя 2,7-дихлорфлуоресцеина-диацетат (DCFH-DA), как описано у Tobi и соавторов (Tobi et al., 2000).
DCFH-DA в своей липофильной форме представляет собой нефлуоресцирующее соединение, способное диффундировать через клеточную мембрану. Оказавшись внутри клетки, он деацетилируется под действием внутриклеточных эстераз до восстановленного 2,7-дихлорфлуоресцеина (DCFH), который также не флуоресцирует. DCFH, будучи не способен пересечь клеточную мембрану снова, аккумулируется в клетках (Curtin et al., 2002). Взаимодействие с внутриклеточными АФК приводит к окислению DCFH до 2,7-дихлорфлуоресцина (DCF), сильно флуоресцирующего соединения. Интенсивность такой флуоресценции можно зарегистрировать с помощью флуориметра, что позволяет оценить количество АФК, продуцированных в клетках.
Экспериментальная процедура
Протокол, примененный для этого эксперимента, представляет собой модифицированную версию протокола, описанного в работе Tobi и соавторов (Tobi et al., 2000).
Мышиные фибробласты BALB3T3 высевали в 96-луночные планшеты с плотностью, равной 5*104 клеток/лунку, и инкубировали до достижения 80%-ного слияния.
В дальнейшем клетки инкубировали в течение 16-ти часов с экстрактами Galeopsis segetum (вегетативная биомасса; сухой водно-спиртовой образец; образец в этилацетате; экстракт в CO2) в следующих концентрациях: 20-50 и 100 мкг/мл.
Разведения готовили, начиная с 1000Х исходного раствора в DMSO, фильтровали в стерильных условиях и, применяя среду DMEM, добавляли к 2,5% фетальной телячьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix).
Клетки, обработанные 1 мМ Н2О2, применяли в качестве положительного контроля; клетки, поддерживаемые только в культуральной среде (DMEM 2,5% FCS), с другой стороны, применяли в качестве отрицательного контроля.
α-Токоферол тестировали в концентрации 25-50-250-500 мкМ;
По окончанию инкубации, индукцию окислительного стресса осуществляли, путем 90-минутной обработки 4 мМ раствором Н2О2, в темноте, при 37°C и 5% СО2.
Сразу же после окончания обработки клетки промывали дважды IX PBS и лизировали в буфере для лизиса CelLytic™ («Sigma-Aldrich», St. Louis, МО, США) в соответствии с протоколом производителя.
В дальнейшем лизаты переносили в черный 96-луночный планшет и регистрировали флуоресценцию DCF спектрофотометрически, применяя регистрирующее флуоресценцию считывающее устройство для микропланшетов FluoroskanAscent FL (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, США), с длиной волны возбуждения и излучения, равной 485 и 538 нм, соответственно.
Величины эмиссии (RFU), полученные для каждого образца, связанные с продукцией внутриклеточных АФК, сравнивали с величинами эмиссии, полученными для отрицательного контроля (ctr, клетки, обработанные 1 мМ Н2О2), и выражали в процентах продуцированных АФК в соответствии со следующим уравнением:
процент продуцированных АФК/ctr = (Ads538hm образец/Abs538 нм ctr)*100
Все анализы проводили, по меньшей мере, дважды в двух повторностях.
Исследование эффектов экстрактов Galeopsis segetum на активность 5-альфа-редуктазы (изоформа2)-BALB3T3
Экспериментальная процедура
Экспрессию генов изоформы 2 5-альфа-редуктазы (SRD5A2) в клетках BALB3T3 оценивали с помощью количественной ОТ-ПЦР (количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией - количественная ОТ-ПЦР).
Этот анализ включает 3 последовательные стадии:
- экстракция общей РНК;
- обратная транскрипция в кДНК;
- количественная ОТ-ПЦР.
Мышиные фибробласты BALB3T3 высевали в 12-луночные планшеты с плотностью, равной 0,5*106 клеток/лунку, и инкубировали до достижения 80%-ного слияния.
В дальнейшем, клетки инкубировали в течение 24-х часов с экстрактами Galeopsis segetum (вегетативная биомасса; сухой водно-спиртовой образец; образец в этилацетате; экстракт в CO2) в следующих концентрациях: 20-50 и 100 мкг/мл.
Разведения готовили, начиная с 1000Х исходного раствора в DMSO, фильтровали в стерильных условиях и, применяя среду DMEM, добавляли к 10% фетальной телячьей сыворотке (FCS), 1% заменимым аминокислотам (NEAA), 1% смеси пенициллина и стрептомицина (Pen-Strep Mix).
С другой стороны, клетки, поддерживаемые только в культуральной среде (DMEM 2,5% FCS), применяли в качестве отрицательного контроля.
Финастерид, селективный ингибитор изоформы 2 (SRD5A2) 5-альфа редуктазы, тестировали в концентрации 0,05 мг/мл.
По окончанию инкубации проводили экстракцию РНК.
Общую РНК экстрагировали из клеток BALB3T3, применяя коммерческий набор Ribospin™ (Gene All Biotechnology Co., LTD)
По окончанию инкубации с представляющими интерес активными соединениями, клетки промывали PBS (IX) и, наконец, подвергали процедуре экстракции РНК. По окончанию экстракции, применяя спектрофотометр (Jenway UV/VIS MOD: 6715, BS-6715В0), вычисляли концентрации в мкг/мл общей экстрагированной РНК, при длине волны 260 нм.
Наконец, целостность РНК (2 мкг/мл) оценивали с помощью электрофоретического анализа в 1%-ном агарозном геле.
Общую РНК преобразовывали в кДНК (комплементарную ДНК), применяя фермент, способный синтезировать молекулу ДНК с помощью цепи РНК в качестве матрицы; данная РНК-зависимый фермент ДНК-полимераза называется обратной транскриптазой.
Она связывается с 3'-концом одноцепочечной РНК и при помощи случайных праймеров и дезоксинуклеозидтрифосфата (DNTP) синтезирует цепь кДНК.
В этой связи, применяли набор реагентов «PrimeScript™ RT Reagent Kit (идеально подходит для режима реального времени)» (TakaraBioInc, Japan), содержащий буфер 5Х PrimeScript Buffer (для режима реального времени); смесь ферментов PrimeScript RT Enzyme Mix1; праймеры OligodTPrimer; случайные шестинуклеотидные праймеры; свободную от РНКазы dH2O.
Экстрагированную и количественно оцененную РНК разводили до концентрации 2 мкг/мл и обратной транскрибировали в кДНК. Готовили 10 мкл смеси Master Mix (содержащей буфер 5Х PrimeScript Buffer (для режима реального времени); смесь ферментов PrimeScript RT Enzyme Mixl; праймеры OligodTPrimer 50 мкМ; случайные шести-нуклеотидные праймеры (100 мкМ), к которым добавляли 10 мкл РНК (2 мкг/мл).
Образцы помещали в амплификатор (Stratagene Мх3000Р Real Time PCR System, Agilent Technologies Italia S.p.A., Милан, Италия) и подвергали обратной транскрипции в следующих условиях:
37°C в течение 15 минут;
85°C в течение 5 секунд;
хранили при 4°C.
По окончанию обратной транскрипции образцы дополняли 30 мкл воды DEPC для получения конечной концентрации кДНК, равной 40 нг/мкл.
Количественная ОТ-ПЦР представляет собой способ для амплификации и количественного определения в режиме реального времени полученных ампликонов, образование которых контролируют с помощью флуоресценции, выделяющейся при реакции.
Для амплификации ОТ-ПЦР применяли систему зондов TaqMan® (Applied Biosystems). Применяли следующие зонды TaqMan: Mm00446421ml (SDR5A2) и Mm00466519ml (β-актин). В качестве контрольного гена (гена домашнего хозяйства) применяли β-актин.
Зонд Taqman представляет собой тип зонда, позволяющего развиваться флуоресценция при продвижении амплификации. К его 5'-концу присоединен рипортер (флуорофор FAM™), а на 3'-конце находится гаситель флуоресценции. Близость между репортером и гасителем флуоресценции запрещает эмиссию сигнала флуоресценции. Флуоресценцию обнаруживают с помощью 5'-экзонуклеазной активности термостабильной ДНК-полимеразы (Taq полимераза), и накопление продукта амплификации может быть оценено за счет увеличения флуоресценции рипортера, которая увеличивается при каждом пробеге.
Для количественной ОТ-ПЦР смесь Master Mix была составлена следующим образом:
- 10 мкл «2Х Premix Ex Taq»;
- 1 мкл «20× TaqMan Gene ExpressionAssays» (содержит 2 праймера и флуорофор FAMTM-меченый флуоресцентный зонд);
- 0,4 мкл пассивного контроля Rox II;
- 5 мкл воды DEPC.
Master Mix дополняли 4 мкл кДНК для гена-мишени и 1 мкл кДНК для гена домашнего хозяйства.
Амплификацию проводили в следующих условиях для 40 пробегов:
- 95°C, 30 сек (активация Amplitaq);
- 95°C, 5 сек (денатурация);
- 60°C, 20 сек (отжиг - удлинение);
Каждый анализ проводили в двух повторностях.
Полученные результаты анализировали в соответствии с 2-ΔΔСt-способом, и, следовательно, была возможность вычислить значения соответствующей экспрессии представляющего интерес гена, нормализованного по отношению к гену домашнего хозяйства и откалибровать на контрольный образец (необработанные клетки):
Полагая эффективность амплификации равной 100%, вычисляли 2-ΔΔCt.
Исследование эффектов экстрактов Galeopsis segetum на экспрессию цитокератина 6A-ORS
Экспериментальная процедура
Для исследования экспрессии цитокератина 6А в клетках ORS применяли коммерческий набор: кератин человек, тип II, цитоскелетный 6A(KRT6A), набор для анализа ELISA 96Т (CSB).
День 1
Когда клетки (HHFORSC) достигали примерно 80% слияния, их отделяли с помощью трипсина/ЭДТА и высевали с плотностью, равной 1×106 клеток/мл, в 12-луночные планшеты и затем инкубировали при 37°C, 5% CO2 (24 часа).
День 2
Когда клетки достигали примерно 80% слияния, их инкубировали с тестируемыми активными соединениями: вегетативная биомасса; сухой водно-спиртовой образец; образец в этилацетате; экстракт в CO2, в следующих концентрациях: 20-50 и 100 мкг/мл.
Разведения готовили, начиная с 1000Х исходного раствора в DMSO, фильтровали в стерильных условиях и применяли среду для мезенхимальных стволовых клеток.
День 3
По окончанию инкубации клетки лизировали, применяя буфер для лизиса Cell Lytic™, дополненный до 1% смесью ингибиторов протеаз, и лизаты применяли для анализа ELISA.
Для того чтобы нормализовать экспрессию белка на общее содержание белков в образце, количество общего белка в каждом образце оценивали с помощью анализа по Брэдфорду (Bradford, 1976).
Результаты
Результаты, полученные с помощью экспериментов, проиллюстрированы в прилагаемых фиг. 1-5, которые показывают следующее:
5.1 Предварительный анализ на цитотоксичность (MTT-анализ)-BALB3T3
Фиг. 1 показывает результаты, полученные с помощью МТТ-анализа (среднее ± SD). В тесте экстракты Galeopsis Segetum: сухой экстракт (вегетативная биомасса), водно-спиртовой экстракт (сухой водно-спиртовой образец), экстракт в этилацетате (образец в этилацетате) и экстракт в CO2 (экстракт в CO2), оценивали в диапазоне доз, равном 2-200 мкг/мл, в течение 24, 48 и 72 часов. Результаты показали, что все протестированные соединения не цитотоксичны.
5.2 МТТ с индуцированным окислительным стрессом-BALB3T3
Фиг. 2 показывает результаты экспериментов МТТ с окислительным стрессом, индуцированным на образцах, указанных в нижеследующей таблице 1.
В частности, фиг. 2 показывает антиоксидантную активность вегетативной биомассы, водно-спиртового экстракта, этилацетатного экстракта, экстракта в CO2, тогда таблица 2 показывает результаты антиоксидантной активности.
Результаты показывают, как антиоксидантная активность выражена в экстрактах. Показано, как способы экстракции определяют усовершенствование такой активности, в особенности, экстракция в этилацетате и CO2. Если рассматривать антиоксидантную активность вегетативной биомассы (22,14), то она повысилась после водно-спиртовой экстракции (37,64; +70%) и в большей степени после экстракции этилацетатом и экстракции в CO2 (50,13 и 48,58, соответственно; в среднем +123%).
5.3 Исследование эффектов экстрактов Galeopsis Segetum на продукцию АФК при помощи DCFH-DA-анализа-BALB3T3
Результаты для защитной активности клеток против окислительного стресса, индуцированного под действием Н2О2, показаны на фиг. 3.
Индуцированный окислительный стресс создает ситуацию, в которой клетка страдает, что приводит к значительной потере в популяции клеток. Обработка соединениями (вегетативная биомасса, водно-спиртовой экстракт, этилацетатный экстракт, экстракт в CO2) показала защитную способность против апоптического процесса, индуцированного окислительным стрессом. Такая активность находится в соответствии с тем, что наблюдали для антиоксидантной активности и актуальна для этилацетатного и CO2-экстрактов.
5.4 Исследование эффектов экстрактов Galeopsis Segetum на активность 5-альфа-редуктазы (изоформа2)-BALB3T3
Фиг. 4 показывает результаты экспрессии гена изоформы 2 5-альфа-редуктазы, мишени для финастерида.
Galeopsis Segetum (вегетативная биомасса) проявил ингибирующую активность в отношении 5-альфа-редуктазы типа 2. Водно-спиртовой и CO2-экстракты (50 и 100 мкг/мл) также показали такую активность, в то время как это было менее очевидно при экстракции этилацетатом.
5.5 Исследование эффектов экстрактов Galeopsis Segetum на экспрессию цитокератина 6A-ORS
Фиг. 5 показывает величины, относящиеся к цитокератину 6А, хорошо известного маркера стволовых клеток фолликула, в котором он играет важную роль для гомеостаза и роста волос.
Полученные результаты показали, что вегетативная биомасса не способна стимулировать такой кератин, тогда как образцы, полученные с помощью водно-спиртовой и этилацетатной экстракции (в обеих протестированных дозах) и экстракции в СO2 (только большие дозы) способны его стимулировать.
Степень стимулирования такого кератина в этилацетатном образце была значительной.
Заключение
Проведенные тесты показали:
- отсутствие цитотоксичности всех образцов, протестированных в диапазоне 2-200 мкг/мл, вплоть до 72 часов обработки клеток (фибробластов) (МТТ-анализ)
- хорошую антиоксидантную активность всех соединений, необходимо отметить, что экстракции улучшают антиоксидантную активность. По сравнению с вегетативной биомассой, водно-спиртовая экстракция улучшает такую активность на + 70%, тогда как этилацетатная и CO2 экстракция на 123% (анализ с дихлорфлуоресцеином).
- такая активность также отражается в защите клеток после индукции окислительного стресса (тест на фибробластах)
- тест на стимулирование синтеза цитокератина 6А в ORS (клетки наружного корневого влагалища фолликула) установил, что вегетативная биомасса не способна стимулировать его синтез, тогда как водно-спиртовая, этилацетатная и CO2 экстракция (в этом случае только в большей из протестированных доз) индуцируют синтез такого кератина.
Пример 9
Введение
Настоящий пример относится к лекарственным препаратам из трех экстрактов, имеющих различную полярность, полученных из наземных частей Galeopsis Segetum. Наиболее полярный экстракт готовили экстракцией водным этанолом. Первоначально, скрининг растворителей проводили в целях выявления наиболее подходящего содержания спирта.
Неполярный экстракт готовили, применяя сверхкритический CO2.
Экстракт, имеющий промежуточную полярность, готовили экстрагированием менее полярных компонентов водно-спиртового экстракта этилацетатом.
Данные экстракты применяли для скрининга активности.
1. Объект испытаний
Лекарственный препарат из трех экстрактов, имеющих различную полярность, полученный из наземных частей Galeopsis Segetum и его характеристика.
Были получены следующие экстракты:
2. Экспериментальная стадия
2.1 Биомасса
Все работы, упомянутые в настоящем документе, осуществляли на наземных частях Galeopsis Segetum СоА 1054/9394.
2.2 Водно-спиртовой экстракт: скрининг содержания этанола
Для того чтобы найти наилучший растворитель для экстракции с точки зрения выхода, характеристик и образцов вторичных метаболитов с помощью ТСХ, проводили скрининг с различным содержанием этанола, а именно 20%, 40% и 70%. Для каждого теста, 20 г биомассы среды суспендировали в 400 мл растворителя при 50°C, перемешивая в течение 4-х часов. Суспензии фильтровали, и растворы концентрировали до сухого состояния.
Каждый экстракт оценивали в отношении выхода экстракции, характеристик и ТСХ. Результаты показаны в таблице 1
Согласно ТСХ, наилучший растворитель для экстракции - это 40% и 70% EtOH. С другой стороны, этот последний экстракт содержит больше хлорофилла, что приводит к зеленоватому и липкому экстракту. По этой причине, в качестве растворителя для экстракции выбрали 40% EtOH.
2.3 Получение сухого водно-спиртового экстракта Galeopsis Segetum - IDN6764 (контр, тест 921/30/D)
a) 100 г измельченных надземных частей Galeopsis Segetum, CofA 1054/9394, загружали в перколятор, покрывали 0,54 л 40%-ного этанола, нагревали до 50°C и оставляли в статических условиях в течение 4-х часов.
После проведения выгрузки, проводили три дополнительные экстракции (3×0,3 л), применяя такую же температуру и такое же время контакта.
b) Фильтраты собирали и концентрировали при пониженном давлении для того, чтобы получить суспензию, равную примерно 0,15 л и 10% сухого остатка.
c) Суспензию центрифугировали для отделения нерастворимого осадка, и прозрачный раствор концентрировали при пониженном давлении до тех пор, пока он не становился сухим.
Осадок высушивали при 50°C при пониженном давлении в течение 24-х часов.
Выход: 14,79 г сухого водно-спиртового экстракта Galeopsis Segetum - IDN6764, серия 921/30/D, CofA 14/0605/LRE
выход масс./масс.: 14,79%
2.4 Получение сухого экстракта с этилацетатом Galeopsis Segetum - IDN6765 (контр, тест 921/30/G)
a) 850 г измельченных надземных частей Galeopsis Segetum, CofA 1054/9394, загружали в перколятор, покрывали 4,6 л 40%-ного этилацетата, нагревали до 50°C и оставляли в статичном состоянии в течение 4-х часов.
После проведения выгрузки, проводили три дополнительные экстракции (4×2,5 л), поддерживая такую же температуру и такое же время контакта.
b) Фильтраты собирали и концентрировали при пониженном давлении для того, чтобы получить суспензию, равную примерно 1,4 л и 10% сухого остатка.
c) Суспензию центрифугировали для отделения нерастворимого осадка, и прозрачный раствор подвергали экстракции этилацетатом (3×0,35 л).
d) Органические фазы объединяли и концентрировали до получения мягкой основной массы. Добавляли воду (10 мл) и суспензию концентрировали снова до получения мягкой основной массы. Эту обработку повторяли для того, чтобы удалить любые остатки этилацетата.
Наконец, осадок высушивали при 50°C при пониженном давлении в течение 24-х часов.
Выход: 2,85 г сухого экстракта с этилацетатом Galeopsis Segetum - IDN6765, серия 921/30/G, CofA 14/0606/LRE
выход масс./масс.: 0,34%
2.5 Получение экстракта Galeopsis Segetum с CO2 - IDN6766
a) 5 кг измельченных надземных частей Galeopsis Segetum, CofA 1054/9394, помещали в контейнер экстрактора. Экстракцию проводили в соответствии со следующими условиями:
- температура - 55°C
- давление - 270-280 бар
- ток CO2 - 70 кг/час
- время экстракции - 4,5 часов
b) Экстракция обеспечивает эмульсию (94 г). Эмульсию высушивают при 60°C при пониженном давлении в течение 4-х часов.
Выход: 74 г экстракта Galeopsis Segetum с CO2 - IDN6766, серия 522/14/23A, CofA 14/0604/LRE.
выход масс./масс.: 1,48%
3. Результаты
Экстракты описывали, анализируя следующие характеристики:
- внешний вид
- идентификация с помощью ТСХ, как показано на прилагаемых фиг. 7 и 8
- идентификация с помощью FT-IR, как показано на прилагаемых фиг. 9-11
Результаты приведены в таблице 2.
4. Заключение
Из наземных частей Galeopsis Segetum были получены и охарактеризованы три экстракта, имеющие различную полярность.
Claims (15)
1. Применение растительного экстракта, полученного с помощью экстракции надземной части Galeopsis Segetum Necker физиологически приемлемым растворителем, для стимуляции физиологического роста волос.
2. Применение по п. 1, в котором указанный растительный экстракт получают с помощью экстракции части или ткани надземной части растения Galeopsis Segetum Necker физиологически приемлемым растворителем, который является полярным растворителем, выбранным из воды, этилового спирта, водно-спиртового растворителя, этилацетата и их смесей, или неполярным растворителем, которым является углекислый газ в сверхкритической фазе.
3. Применение композиции, включающей растительный экстракт, полученный с помощью экстракции надземной части Galeopsis Segetum Necker физиологически приемлемым растворителем, и физиологически приемлемый носитель для стимуляции физиологического роста волос.
4. Применение по п. 3, в котором растительный экстракт включает флавоноид, выбранный из группы, включающей гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2"-аллозил)глюкозид моноацетилированный, гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2"-аллозил)глюкозид диацетилированный, изоскутелареин-7-(2"-аллозил)глюкозид моноацетилированный, гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2"-аллозил)глюкозид, гиполаетин-7-(2"-аллозил)глюкозид моноацетилированный, изоскутелареин-7-(2"-аллозил)глюкозид и гиполаетин-7-(2’’-аллозил)глюкозид диацетилированный или их смеси.
5. Применение по п. 4, в котором указанный флавоноид представляет собой гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2"-аллозил)глюкозид моноацетилированный, гиполаетин-4'-метил-этил-7-(2"-аллозил)глюкозид диацетилированный или их смеси.
6. Применение по п. 3, в котором композиция находится в форме для перорального введения или местного нанесения.
7. Применение по п. 3, в котором композиция находится в форме для местного нанесения, выбранной из лосьона, эмульсии, шампуня, крема или мази.
8. Применение по п. 3, в котором композиция находится в форме для перорального введения, выбранной из таблетки, пилюли или гранулированного порошка.
9. Применение по п. 3, в котором композиция изготовлена в форме для перорального введения и дополнительно включает один или несколько ингредиентов, выбранных из витаминов, минералов, микроэлементов и их смесей.
10. Применение по п. 3, в котором композиция представляет собой нутрицевтик, функциональный пищевой продукт, биологически активную добавку или пищевую добавку для перорального введения.
11. Применение по п. 3, в котором композиция является косметической композицией для местного нанесения.
12. Применение по п. 3, в котором физиологически приемлемый растворитель выбирают из воды, водно-спиртового растворителя, этилацетата или их смесей или углекислого газа в сверхкритической фазе.
13. Применение по п. 3, в котором надземная часть Galeopsis segetum Necker является листьями, фруктами или цветами.
14. Композиция для лечения или предупреждения андрогенной алопеции или выпадения волос, включающая растительный экстракт Galeopsis Segetum Necker, полученный с помощью экстракции надземной части Galeopsis Segetum Necker физиологически приемлемым растворителем, и физиологически приемлемый носитель.
15. Композиция по п. 14, предназначенная для перорального введения или местного нанесения.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ITMI2013A001792 | 2013-10-28 | ||
IT001792A ITMI20131792A1 (it) | 2013-10-28 | 2013-10-28 | Uso di un estratto vegetale per la prevenzione e trattamento della caduta dei capelli |
PCT/IB2014/065655 WO2015063678A1 (en) | 2013-10-28 | 2014-10-28 | Use of a vegetal extract for the prevention and treatment of hair loss |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016120991A RU2016120991A (ru) | 2017-12-06 |
RU2682646C2 true RU2682646C2 (ru) | 2019-03-20 |
Family
ID=49725227
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016120991A RU2682646C2 (ru) | 2013-10-28 | 2014-10-28 | Применение растительного экстракта для предупреждения и лечения выпадения волос |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9498429B2 (ru) |
EP (1) | EP3062636B1 (ru) |
CN (1) | CN105658094B (ru) |
AU (1) | AU2014343266B2 (ru) |
CA (1) | CA2928443C (ru) |
CY (1) | CY1120869T1 (ru) |
DK (1) | DK3062636T3 (ru) |
ES (1) | ES2688202T3 (ru) |
HR (1) | HRP20181510T1 (ru) |
HU (1) | HUE039407T2 (ru) |
IT (1) | ITMI20131792A1 (ru) |
LT (1) | LT3062636T (ru) |
MX (1) | MX365920B (ru) |
PL (1) | PL3062636T3 (ru) |
PT (1) | PT3062636T (ru) |
RS (1) | RS57675B1 (ru) |
RU (1) | RU2682646C2 (ru) |
SI (1) | SI3062636T1 (ru) |
WO (1) | WO2015063678A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT201700003045A1 (it) * | 2017-01-12 | 2018-07-12 | Giuliani Spa | Estratto vegetale per prevenire e trattare la caduta dei capelli |
IT201700089680A1 (it) * | 2017-08-03 | 2019-02-03 | Giuliani Spa | Composizione sinergica come promoter di autofagia/a synergistic composition as a promoter of autophagy |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6060061A (en) * | 1996-07-30 | 2000-05-09 | Societe L'oreal S.A. | Method for preventing or treating disorders involving an inflammatory process |
WO2006100101A1 (en) * | 2005-03-24 | 2006-09-28 | Giuliani S.P.A. | Composition based on vegetal extracts of ajuga reptans for preventing hair loss, stimulating the growth of hair, regulating the production of sebum. |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HU222813B1 (hu) * | 1998-03-12 | 2003-11-28 | Mária Sendula | Haj-és bőrregeneráló hatású kozmetikai készítmény |
-
2013
- 2013-10-28 IT IT001792A patent/ITMI20131792A1/it unknown
-
2014
- 2014-10-28 RS RS20181096A patent/RS57675B1/sr unknown
- 2014-10-28 RU RU2016120991A patent/RU2682646C2/ru active
- 2014-10-28 PL PL14809516T patent/PL3062636T3/pl unknown
- 2014-10-28 SI SI201430862T patent/SI3062636T1/sl unknown
- 2014-10-28 AU AU2014343266A patent/AU2014343266B2/en active Active
- 2014-10-28 ES ES14809516.9T patent/ES2688202T3/es active Active
- 2014-10-28 DK DK14809516.9T patent/DK3062636T3/en active
- 2014-10-28 LT LTEP14809516.9T patent/LT3062636T/lt unknown
- 2014-10-28 CA CA2928443A patent/CA2928443C/en active Active
- 2014-10-28 US US15/031,937 patent/US9498429B2/en active Active
- 2014-10-28 PT PT14809516T patent/PT3062636T/pt unknown
- 2014-10-28 WO PCT/IB2014/065655 patent/WO2015063678A1/en active Application Filing
- 2014-10-28 CN CN201480058380.2A patent/CN105658094B/zh active Active
- 2014-10-28 HU HUE14809516A patent/HUE039407T2/hu unknown
- 2014-10-28 EP EP14809516.9A patent/EP3062636B1/en active Active
- 2014-10-28 MX MX2016004842A patent/MX365920B/es active IP Right Grant
-
2018
- 2018-09-19 CY CY181100968T patent/CY1120869T1/el unknown
- 2018-09-24 HR HRP20181510TT patent/HRP20181510T1/hr unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6060061A (en) * | 1996-07-30 | 2000-05-09 | Societe L'oreal S.A. | Method for preventing or treating disorders involving an inflammatory process |
WO2006100101A1 (en) * | 2005-03-24 | 2006-09-28 | Giuliani S.P.A. | Composition based on vegetal extracts of ajuga reptans for preventing hair loss, stimulating the growth of hair, regulating the production of sebum. |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
TOMAS-BARBERAN F.A. et all. Correlations between flavonoid composition and infrageneric taxonomy of some European Galeopsis species //91 53.00+0.00 Printed in great Britain, 1 January 1991, p.3311-3314. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2928443C (en) | 2022-05-03 |
EP3062636A1 (en) | 2016-09-07 |
US9498429B2 (en) | 2016-11-22 |
CA2928443A1 (en) | 2015-05-07 |
LT3062636T (lt) | 2018-09-10 |
CN105658094A (zh) | 2016-06-08 |
ITMI20131792A1 (it) | 2015-04-29 |
SI3062636T1 (sl) | 2019-01-31 |
PL3062636T3 (pl) | 2018-12-31 |
MX2016004842A (es) | 2016-07-26 |
AU2014343266B2 (en) | 2019-07-04 |
WO2015063678A1 (en) | 2015-05-07 |
US20160296462A1 (en) | 2016-10-13 |
HUE039407T2 (hu) | 2018-12-28 |
CN105658094B (zh) | 2022-04-19 |
RU2016120991A (ru) | 2017-12-06 |
PT3062636T (pt) | 2018-10-26 |
RS57675B1 (sr) | 2018-11-30 |
EP3062636B1 (en) | 2018-06-27 |
CY1120869T1 (el) | 2019-12-11 |
ES2688202T3 (es) | 2018-10-31 |
HRP20181510T1 (hr) | 2018-11-16 |
MX365920B (es) | 2019-06-20 |
DK3062636T3 (en) | 2018-09-24 |
AU2014343266A1 (en) | 2016-06-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2007526297A (ja) | 毛嚢のトロフィズム及び皮脂の皮膚形成を調整するための組成物及びアンドロゲン性脱毛症におけるそれらの使用 | |
KR20230117253A (ko) | 폴리페놀이 풍부한 아보카도 과육 및/또는 껍질 추출물및 이를 포함한 화장학적, 피부과학적 및 기능식품 조성물 | |
EP4099975A1 (fr) | Procédé d'obtention d'un extrait aqueux de lavande, compositions comprenant un tel extrait et leurs utilisations cosmétiques | |
JP2018534337A (ja) | 天然抽出物を含有する組成物、ならびに皮膚および毛髪に対するその使用 | |
KR20220166356A (ko) | 모링가 페레그리나 종자 케이크의 추출물, 이의 제조 방법 및 화장품 또는 뉴트리코스메틱 조성물에서의 이의 용도 | |
RU2682646C2 (ru) | Применение растительного экстракта для предупреждения и лечения выпадения волос | |
JP2018505883A (ja) | 化粧品におけるペパーミント抽出物の使用 | |
JP7307715B2 (ja) | オートファジーの促進剤としての相乗作用組成物 | |
FR2851916A1 (fr) | Utilisation de polyphenols catechiques pour la preparation de compositions destinees a favoriser la pigmentation naturelles de la peau | |
EP3980123B1 (fr) | Extrait de graines de moringa peregrina riche en 2,5-diformylfuran, son procédé d'obtention et son utilisation dans des compositions cosmétiques | |
RU2763545C2 (ru) | Растительный экстракт для профилактики и лечения выпадения волос | |
EP1317239B1 (fr) | Associations synergiques a base de plantes pour traiter la chute des cheveux | |
IT202100019727A1 (it) | Composizione per prevenire e trattare alterazioni e malattie delle unghie | |
TWI393568B (zh) | 抑制酪胺酸酶及黑色素生成之中草藥純化物及其製造方法 | |
CN117120067A (zh) | 可用于处理和/或护理皮肤的女贞提取物 | |
BR122024003219A2 (pt) | Extrato de semente de moringa peregrina, composição cosmética ou nutricosmética compreendendo o mesmo e seu uso | |
EA043929B1 (ru) | Синергетическая композиция для стимулирования роста волос и/или предупреждения потери волос, топический и пероральный препараты на ее основе, их применение (варианты) | |
FR2951942A1 (fr) | Utilisation d'un extrait de terminalia pour lutter contre la canitie |