EA043929B1

EA043929B1 - Синергетическая композиция для стимулирования роста волос и/или предупреждения потери волос, топический и пероральный препараты на ее основе, их применение (варианты)

Info

Publication number: EA043929B1
Application number: EA202090437
Authority: EA
Inventors: Джаммария Джулиани; Ральф Паус; Бенедетто Гримальди; Барбара МАРЦАНИ; Серджио Барони
Original assignee: ДЖУЛИАНИ С.п.А.
Priority date: 2017-08-03
Filing date: 2018-08-02
Publication date: 2023-07-06

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к синергетическим композициям и их применению в качестве промотора аутофагии в пищевой, медицинской или косметической областях техники.

Уровень техники

Аутофагия (или аутофагоцитоз) является естественным регулируемым механизмом клетки, который разбирает ненужные или дисфункциональные компоненты. Аутофагия допускает организованную деградацию и рециклинг клеточных компонентов. При макроаутофагии таргетированные циклоплазматические составляющие выделяются из остатка клетки в двухмембранной везикуле, известной как аутофагосома. Аутофагосома в конечном счете сливается с лизосомами, и содержимое разрушается и возвращается в оборот. Обычно описываются три формы аутофагии: макроаутофагия, микроаутофагия и шаперон-опосредованная аутофагия (СМА), наряду с миофагией. При заболевании аутофагия рассматривается как адаптивный ответ на стресс, который способствует выживанию, в то время как в других случаях оказывается, что он способствует гибели и заболеваемости клеток. В крайнем случае голодания разрушение клеточных компонентов способствует выживанию клеток, поддерживая клеточный энергетический уровень.

Следовательно, аутофагия играет ключевую роль в таких основных клеточных процессах, регулирующих здоровье, заболевание и старение, как адаптивные ответы на стресс, дифференцировка, развитие тканей и гомеостаз.

В работе Angeleen Fleming et al. Chemical modulators of autophagy as biological probes and potential therapeutics, Nature Chemical Biology, 7, 9-17 (2011), авторы показали, что аутофагия имеет неожиданные плейотропные функции, которые благоприятствуют выживанию клеток, включая снабжение питательными веществами при голодании, очистку внутренней части клетки, защиту от инфекции и представление антигенов. Поэтому недостаточная аутофагия ассоциируется с рядом различных болезненных состояний, включая нейродегенерацию, рак и болезнь Крона.

В работе Teng Yu et al. Targeting autophagy in skin diseases, J. Mol. Med. (2015), 93: 31-38 исследуются и описываются механизмы аутофагии в патогенезе кожных заболеваний. Конкретно сообщается о роли аутофагии при аутоиммунных кожных воспалениях, таких как псориаз, системная красная волчанка (SLE) и витилиго, инфекционных кожных воспалениях, раковых кожных заболеваниях, таких как сквамозная клеточная карцинома и меланома.

Для того, чтобы терапевтически модулировать аутофагию для исследования супрессоров и индукторов аутофагии, исследуют модели человеческих органов.

В работе Tobias Eiserberg et al. Induction of autophagy by spermidine promotes longevity, Nature cell biology, volume 11, number 11, November 2009, исследуют действие природного полиамина спермидина на дрожжах, мухах и червях. Авторы сообщают, что введение спермидина продлевает их жизнь. Кроме того, введение спермидина возможно ингибирует окислительный стресс у стареющих мышей. Показано, что аутофагия составляет основной путь лизосомной деградации для рециклинга поврежденного и потенциально вредного клеточного материала.

Авторы изобретения поняли, что в качестве полных циклически ремоделированных (мини)органов фолликулы волос скальпа человека (HF) могут предоставить такую модель, так как такие фолликулы после активности массового роста (анагена) спонтанно вступают в инволюцию органа, управляемую апоптозом (катаген). Как известно, жизненный цикл волосяной луковицы или фолликула по существу представлен тремя последовательными фазами: анагеном (рост), катагеном (инволюция) и телогеном (фаза покоя).

Неожиданно авторы изобретения обнаружили, что жизненный цикл волосяного фолликула можно модулировать механизмом аутофагии, и на основе модели фолликулы волоса скальпа человека исследовали способствующие агенты.

В связи с исследованием, авторы изобретения выдвинули гипотезу, что HF скальпа в поздней стадии анагена, эпителий матрикса волос которых пролиферирует с более высокой скоростью, чем большинство злокачественных опухолей, и подвергается воздействию ряда стрессоров, подвергаются возрастающему давлению для поддержания тканевого гомеостаза и могут требовать существенного потока аутофагии для их потока для поддержания их роста.

Как известно, различные стрессоры отрицательно влияют на жизненный цикл волосяного фолликула, определяя таким образом уменьшение числа волос и их истончение.

Поэтому задачей настоящего изобретения является композиция, подходящая в качестве промотора аутофагии в клетках волосяных фолликулов скальпа человека.

Следовательно, другой задачей является композиция для способствования росту волос и/или ингибирования или замедления потери волос скальпа человека.

Другой задачей является композиция для лечения состояний, опосредуемых аутофагией.

- 1 043929

Сущность изобретения

Начав с исследования органной культуры волосяных фолликулов скальпа человека (HF), авторы изобретения нашли комбинацию соединений, вызывающих аутофагию в исследуемой модели и показывающую синергетический эффект при промотировании аутофагии, особенно в клетках скальпа человека в волосяных фолликулах.

После исследования композицией, имеющей синергетический эффект, неожиданно стал экстракт растения рода Galeopsis в комбинации с другим соединением, промотирующем аутофагию особенно в клетках скальпа человека, выбранным из R-N¹-спермидина или его соли, биотина и их смеси.

В первом воплощении указанные выше задачи достигнуты с помощью синергетической композиции для стимулирования роста волос и/или предупреждения потери волос, включающей экстракт растения рода Galeopsis, который получен путем экстракции полярным протонным растворителем из воздушных частей растения, и соединение, промотирующее аутофагию, выбранное из R-N¹-спермидина или его соли, в которых R представляет собой водород или метил, биотина и их смесей.

Следовательно, указанные выше задачи могут быть достигнуты с помощью синергетической композиции, включающей экстракт растения рода Galeopsis и R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой водород или метил.

С другой стороны, указанные выше задачи достигнуты с помощью синергетической композиции, включающей экстракт растения рода Galeopsis и биотин.

В другом альтернативном воплощении указанные выше задачи достигнуты с помощью синергетической композиции, включающей экстракт растения рода Galeopsis, биотин и R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой водород.

В частном случае экстракт растения рода Galeopsis выбирают из экстрактов вида Galeopsis segetum и Galeopsis tetrahit и их смесей.

В частном случае экстракт растения рода Galeopsis представляет собой сухой экстракт, полученный способом, включающим следующие стадии:

измельчение по меньшей одной воздушной части растения рода Galeopsis;

экстрагирование физиологически приемлемым полярным протонным растворителем, - фильтрование экстракта;

очистка фильтрованного экстракта, предпочтительно путем элюирования полярного протонного растворителя из колонки;

сушка очищенного экстракта;

измельчение высушенного очищенного экстракта и, необязательно, добавление эксципиентов.

В частном случае эксципиенты включают мальтодекстрин и/или коллоидный безводный силикагель.

В частном случае спермидин присутствует в композиции в форме тригидрохлорида.

В другом воплощении изобретение представляет собой топический препарат, включающий синергетическую композицию по любому из частных вариантов воплощения и по меньшей мере один эксципиент, подходящий для топического/местного нанесения.

В частном случае - это топический препарат, где количество экстракта растения рода Galeopsis находится в интервале 0,0003-0,01 мас.% относительно общей массы композиции.

В другом частном случае - это топический препарат, где количество биотина находится в интервале 0,0006-0,075 мас.% относительно общей массы композиции.

В другом частном случае - это топический препарат, где композиция включает R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой метил или водород, в интервале 0,0005-0,1 мас.% относительно общей массы композиции.

В другом частном случае - это топический препарат, который находится в форме, выбранной из группы, включающей шампунь, гель, кондиционер, лосьон, бальзам, эмульсию, пенку, средство макияжа и крем.

В другом воплощении изобретение представляет собой пероральный препарат, включающий синергетическую композицию по любому из частных вариантов воплощения и по меньшей мере один эксципиент, подходящий для перорального введения.

В другом частном случае - это пероральный препарат, где количество сухого экстракта растения рода Galeopsis в пероральном препарате находится в интервале 0,1-20 мг на единичную дозу.

В другом частном случае - это пероральный препарат, где количество биотина в пероральном препарате находится в интервале 0,03-0,08 мг на единичную дозу.

В другом частном случае - это пероральный препарат, где композиция включает R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой метил или водород, в интервале 0,3-0,8 мг на единичную дозу.

В другом частном случае - это пероральный препарат, который представляет собой твердый препарат, выбранный из группы, включающей таблетку, капсулу, порошки, гранулы или пилюлю.

Предпочтительно и неожиданно авторы изобретения обнаружили, что введение указанных выше

- 2 043929 композиций топическим или пероральным путем введения синергетически промотирует аутофагию в клетках, в особенности, волосяных фолликулах, у субъекта, страдающего от поредения волос, определяя таким образом прогрессирующую густоту волос в пострадавших участках скальпа.

В другом воплощении изобретение касается косметического применения синергетической композиции или топического препарата, или перорального препарата при стимулировании роста волос и/или предупреждении потери волос.

Согласно с другим аспектам, настоящее изобретение предоставляет применение топического препарата или перорального препарата при лечении андрогенной алопеции или облысения.

Описание фигур

Фиг. 1 показывает характерные изображения клеток U2OS, трансдуцированных конструкцией, экспрессирующей аутофагический белок LC3, слитый с красным флуоресцентным белком (RFP), обработанных 6 ч указанными веществами. Ранее охарактеризованный индуктор аутофагии спермидин используют в качестве положительного эталона.

Фиг. 2 показывает характерные изображения клеток U2OS, трансдуцированных конструкцией, экспрессирующей белок SQSTM1/p62, слитый с красным флуоресцентным белком (RFP), обработанных 6 ч указанными веществами. Оборот SQSTM1/p62 зависит главным образом от опосредуемого аутофагией процесса деградации.

Фиг. 3 показывает уровни липидированного LC3 и SQSTM1 в человеческих клетках U2OS, обработанных эквимолярными дозами Ф-метилспермидина и спермидина, как описано в примере 14.

Раскрытие изобретения

Следовательно, изобретение относится к синергетической композиции, определенной в п.1. В предпочтительном и преимущественном воплощении изобретение относится к синергетической композиции экстракта растения рода Galeopsis, R-N¹-спермидина или его соли, в которых R представляет собой водород или метил, и биотина.

Экстракт композиции указанных выше композиций имеет происхождение из растения, принадлежащего к роду Galeopsis.

В одном воплощении экстракт Galeopsis представляет собой сухой экстракт, в частности, вида Galeopsis segetum, обычно известного как пикульник пушистый (Downy Hemp-nettle), т.е. вида цветущего растения в семействе яснотковых Lamiaceae.

В другом воплощении экстракт Galeopsis представляет собой экстракт, в частности, вида пикульник обыкновенный (Galeopsis tetrahit).

Экстракт по изобретению получают путем экстрагирования из части растения, такой как корни, листья, плоды и цветы, предпочтительно воздушных частей растения. Согласно некоторым воплощениям, экстракт растения по изобретению получают путем экстрагирования из части растения или его ткани с использованием физиологически приемлемого растворителя в качестве экстрагирующей среды.

Термином физиологически приемлемый растворитель обозначают растворитель, который не вызывает значительных вредных реакций, когда вводится в организм человека или применяется к организму человека. Типично термином растворитель обозначают растворитель, используемый для экстрагирования биологически активных компонентов из части растения Galeopsis.

Подходящим растворителем для получения экстракта растения является физиологически приемлемая жидкость, в которой растворяются по меньшей мере некоторые из физиологически активных компонентов выбранного растения, и в которой они не претерпевают изменения, которое лишает их активности.

Предпочтительными морфологическими частями растения, используемыми для осуществления экстрагирования, является растущая система, которая включает стебли, листья, распускающиеся цветки и цветки.

Растворитель, используемый для осуществления экстрагирования, может представлять собой физиологически приемлемый растворитель. Подходящими растворителями могут быть неполярные растворители, такие как диэтиловый эфир, хлороформ, полярные апротонные растворители, такие как этилацетат, дихлорэтан, и полярные протонные растворители, такие как спирты C₁-C6 и содержащие их водные растворы. Предпочтительно использование полярных протонных растворителей. Типичные полярные протонные растворители включают воду, этанол, пропанол, изопропиловый спирт и их смеси. Предпочтительными растворителями являются вода и этиловый спирт и их смеси.

В некоторых воплощениях после экстрагирования полярным протонным растворителем, предпочтительно этанолом, экстракт предпочтительно фильтруют, концентрируют и осветляют. Затем полученный экстракт предпочтительно очищают. Очистку предпочтительнее осуществляют путем элюирования растворителем из колонки. Растворителем может являться, например, вода или этанол. Затем очищенный экстракт предпочтительно концентрируют и сушат. Полученный таким образом сухой экстракт можно, необязательно, измельчить и, необязательно, добавить эксципиенты, и получить конечный сухой экстракт, который используют в композициях по изобретению.

Необязательные эксципиенты, включаемые в сухой экстракт, предпочтительно выбирают из группы, включающей мальтодекстрин и коллоидный безводный силикагель.

- 3 043929

Для того, чтобы получить экстракт Galeopsis tetrahit, для выделения/экстрагирования одного или нескольких биологически активных компонентов из растительных тканей растения можно использовать методы экстракции в системе твердое тело - жидкость.

В некоторых воплощениях экстрагирование одного или нескольких биологически активных компонентов происходит путем вымачивания растительной части или матрикса Galeopsis tetrahit в подходящем растворителе, указанном выше.

Например, подходящий экстракт можно получить путем окунания или вымачивания некой доли воздушных частей Galeopsis в смеси этанол-вода в течение времени, подходящего для обогащения растворителя одним или несколькими биологически активными компонентами, содержащимися в этой доле растения. В таких условиях происходит экстрагирование биологически активных компонентов из растительных тканей выбранного растения, по существу, за счет диффузии и/или осмоса. Время вымачивания долей растения в растворителе изменяется, например, от 1 до 48 ч.

В соответствии с некоторыми воплощениями, сухой экстракт Galeopsis можно получить с помощью следующих стадий:

измельчение по меньшей одной части растения Galeopsis;

экстрагирование растворителем, предпочтительно физиологически приемлемым растворителем;

фильтрование экстракта;

очистка фильтрованного экстракта, предпочтительно путем элюирования растворителем из колонки;

сушка очищенного экстракта;

измельчение высушенного очищенного экстракта.

В некоторых воплощениях стадию экстрагирования можно повторять два или три раза.

Когда растворитель удаляют, например, выпариванием, необязательно можно добавить твердый носитель или эксципиент, такой как, например, без ограничения, крахмалы или мальтодекстрины, и получить экстракт в форме сухого порошка.

Типично экстракт, полученный из Galeopsis tetrahit или segetum, может быть жидким, густым или сухим, и предпочтительно представляет собой сухое вещество.

Например, в жидком экстракте 1 мл экстракта содержит биологически активные компоненты, растворенные в 1 г растительного лекарственного средства;

в густом экстракте растворитель частично выпарен, в частности, до тех пор, пока экстракт не увлажняет фильтровальную бумагу;

в сухом экстракте растворитель выпарен почти полностью с образованием порошка.

Можно получить экстракты Galeopsis различной полярности.

Например, можно получить экстракт высокой полярности с использованием полярного растворителя, такого как водно-спиртовой раствор, экстракт промежуточной полярности с использованием менее полярного растворителя, такого как этилацетат, или неполярный экстракт с использованием сверхкритического CO2, которым можно экстрагировать фракции активных фитокомплексов.

В некоторых воплощениях экстрагирование выполняют, используя массовое соотношение между растворителем и растительным матриксом, колеблющееся от 1:10 до 10:1.

Возможно экстрагировать биологически активные компоненты из растения Galeopsis, используя другие методы экстрагирования, такие как, например, путем гидролиза, инфузии, сжатия, отваривания, перколяции, противоточное экстрагирование, экстрагирование в аппарате Сокслета, экстрагирование сверхкритическими газами или с помощью ультразвука.

Кроме экстракта растения синергетическая композиция может включать R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой водород или метил. Спермидин представляет собой полиамин, имеющий по номенклатуре ИЮПАК название К'-(3-аминопропил)бутан-1,4-диамин. Спермидин может присутствовать в композиции в форме соли, предпочтительно фармацевтически приемлемой соли, предпочтительнее в форме тригидрохлорида.

Кроме экстракта растения синергетическая композиция может включать биотин -водорастворимый витамин В, также называемый витамином В7 и известный ранее как витамин Н или кофермент R.

Биотин состоит из цикла уреидо, слитого с тетрагидротиофеновым циклом, имея по номенклатуре ИЮПАК название 5-[(3aS,4S,6aR)-2-оксогексагидро-1H-тиено[3,4-d]имидазол-4-ил]пентановαя кислота (номер CAS 58-85-5).

Авторы изобретения впервые показали свойство биотина быть промотором аутофагии в клетках человека, конкретно, клетках волосяных фолликулов скальпа человека.

Поэтому изобретение также относится к биотину или композиции, содержащей биотин согласно любому из воплощений, описанных выше, для применения в косметической или пищевой отрасли или медицине в качестве промотора аутофагии при лечении заболеваний, модулируемых аутофагией.

Заболевания, модулируемые аутофагией, выбирают, например, из группы, включающей нейродегенерацию, рак, болезнь Крона и кожные заболевания. Конкретно из кожных заболеваний можно назвать аутоиммунные воспаления кожи, такие как псориаз, системная красная волчанка (SLE) и витилиго, инфекционные воспаления кожи, раковые воспаления кожи, такие как сквамозно-клеточная карцинома и

- 4 043929 меланома.

Впервые экстракт растения рода Galeopsis, предпочтительно вида Galeopsis segetum и Galeopsis tetrahit, использован как промотор аутофагии при лечении кожных заболеваний.

Предпочтительно, и неожиданно, авторы изобретения обнаружили, что введение вышеуказанных композиций, типично топическим или пероральным путем введения, синергетически промотирует аутофагию в клетках волосяных фолликулов скальпа человека у субъекта, страдающего от истончения волос, определяя таким образом прогрессирующую густоту волос в пострадавших участках скальпа

Типично композиция по изобретению включает физиологически и/или фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

Физиологически или фармацевтически подходящий носитель, разбавитель или эксципиент можно выбрать, основываясь на пути введения, для которого предназначена получаемая фармацевтическая композиция. Любой носитель и/или эксципиент, подходящий для желательной формы препарата для введения, рассматривается в применениях экстракта растения или его активных ингредиентов, описанных в настоящем описании.

В рамках настоящего изобретения термин носитель относится к эксципиенту, среде, разбавителю или адъюванту, который может или не может присутствовать в композиции по изобретению.

Композицию по изобретению можно составить в форме для топического применения или в форме для перорального введения.

В некоторых воплощениях композиция является композицией для топического применения. При таком применении композицию по изобретению можно применить, в эффективном количестве, непосредственно к скальпу или коже человека.

Например, при лечении потери волос или форм истончения косметически/физиологически активное количество композиции можно наносить непосредственно на скальп один или несколько раз в день, обычно курсами, длящимися 2-3 месяца, чередующимися с периодами отсутствия лечения.

Согласно таким аспектам, изобретение также относится к косметическому методу лечения, включающему нанесение на скальп или его часть эффективного количества композиции согласно одному или нескольким воплощениям, описанным и/или заявленным в настоящем изобретении.

Количество сухого экстракта Galeopsis, предпочтительно в форме вида Galeopsis segetum или Galeopsis tetrahit, в топическом препарате композиций по изобретению находится в интервале 0,0003-0,01 мас.% относительно общей массы препарата.

Количество биотина в топическом препарате композиций по изобретению находится в интервале 0,0006-0,075 мас.% относительно общей массы препарата.

В топической форме композиция предпочтительно включает К1-метилспермидин. В топической форме К1-метилспермидин или спермидин предпочтительно включен в интервале 0,0005-0,1 мас.% относительно общей массы препарата.

Из обычных эксципиентов в топическом препарате для косметического применения или для фармацевтического применения можно назвать консерванты, антибактериальные вещества, эмульгаторы, буферы, лубриканты, смачивающие вещества, кондиционеры и красители.

Композиция для топического применения может находиться в твердой, полутвердой или жидкой форме. Подходящие препараты в твердой форме включают кремы, гели, мази, пасты.

В других воплощениях препарат для местного введения находится в жидкой форме, например, в форме лосьонов, гелей, шампуней, суспензий, эмульсий.

В случае препаратов в жидкой или полутвердой форме экстракт растения может быть разбавлен в носителе в физиологически приемлемой жидкой форме, такой как вода, водно-спиртовой раствор или раствор глицерина, или смешан с другими жидкостями, подходящими для местного нанесения.

Как пример, композиции по изобретению в жидкой форме можно получить путем растворения компонентов в воде и/или спирте. Жидкую композицию можно забуферить для достижения интервала рН, обычно выбранного от 5 до 7 для совместимости с рН скальпа, и затем отфильтровать и упаковать в подходящие контейнеры, такие как пузырьки или флаконы.

В некоторых воплощениях композиции по изобретению могут включать эксципиенты, обычно используемые при составлении косметических или фармацевтических препаратов для местного применения, такие как консерванты, антибактериальные вещества, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы, смачиватели, красители и другие эксципиенты, обычно используемые в методах получения.

В одном воплощении препарат для местного применения находится в форме эмульсии, содержащей экстракт в подходящем эксципиенте. В некоторых воплощениях композиция для топического применения включает эксципиент типа гидроксиметилцеллюлозы и/или загуститель с ГЛБ, подходящим для препарата и веществ.

Согласно другим воплощениям, композиция по изобретению находится в форме для перорального введения. В таких случаях композиция содержит компоненты, определенные ранее, и один или несколько носителей или эксципиентов, подходящих для перорального введения.

Количество экстракта Galeopsis, предпочтительно в форме вида Galeopsis segetum или Galeopsis tet- 5 043929 rahit, в пероральном препарате композиций по изобретению находится в интервале 0,1-20 мг на одну дозу.

Количество биотина в пероральном препарате композиций по изобретению находится в интервале 0,03-0,08 мг на одну дозу.

В пероральной форме композиция включает предпочтительно спермидин или его соль, предпочтительнее спермидин в форме соли.

В пероральной форме N¹-метилспермидин (или его соль) или спермидин (или его соль) предпочтительно включен в интервале 0,3-0,8 мг на одну дозу.

Как пример, подходящие эксципиенты для перорального введения включают производные целлюлозы, такие как гидроксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиэтилцеллюлоза, этилгидроксиэтилцеллюлоза, ацетобутират целлюлозы, ацетофталат целлюлозы и их смеси.

Другие примеры подходящих эксципиентов включают полимеры, принадлежащие к семейству лактамов, такие как пирролидон и его производные, например, поливинилпирролидон, поливинилполипропилпирролидон и их смеси, неорганические соли, такие как фосфат кальция или дикальцийфосфат, лубриканты, такие как стеарат магния, триацилглицерины и их смеси.

Композиции для перорального введения могут находиться в твердой или жидкой форме. Типичные композиции в твердой форме включают таблетки, капсулы, порошки, гранулы, пилюли. Примеры композиций в жидкой форме включают растворы, эмульсии, суспензии, сиропы. Композиции также могут находиться в форме с регулируемым высвобождением содержащихся в них активных компонентов.

Таблетки обычно включают подходящий носитель или эксципиент, в котором распределен экстракт растения, типично в сухой форме.

Из типичных эксципиентов или носителей для перорального введения в состав композиции могут быть включены дезинтеграторы, наполнители, консерванты.

В некоторых воплощениях композиция по изобретению представляет собой пищевой продукт, диэтический продукт или нутрицевтический продукт.

Термин пищевая добавка обозначает продукт, который улучшает питательный статус и может быть использован для поддержания или улучшения функциональной активности одного или нескольких органов или функциональности человеческого организма в физиологических границах. Композиции по изобретению, будучи промоторами аутофагии, являются поэтому способствующими росту волос нутрицевтиками и косметическими средствами.

Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится, следовательно, к применению описанных выше синергетических композиций для стимуляции физиологического роста волос и/или для лечения от потери волос.

Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится, следовательно, к применению топического или перорального препарата, включающего описанные выше композиции, для стимуляции физиологического роста волос.

Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение относится, следовательно, к описанным выше синергетическим композициям для применения в качестве промотора аутофагии в клетках волосяных фолликулов скальпа человека при лечении и предупреждении потери волос и для стимуляции роста волос.

Согласно другому специфическому аспекту, настоящее изобретение относится, следовательно, к применению топического или перорального препарата, включающего описанные выше композиции, для стимуляции роста волос или для лечения или предупреждения потери волос.

Связь между промотированием аутофагии и упомянутыми выше активностями композиций по изобретению доказывается испытаниями, описанными в приведенном далее примере 13. В частности, в научной статье Chiara Parodi et al.: Autophagy is essential for maintaining the growth of a human (mini)organ: Evidence from scalp hair follicle organ culture, опубликованной в PLOS Biology, vol. 16(3), 2018, 28. Mar: 10.1371/journal.pbio.2002864, показано, что испытание, выполненное на эпителиальных клетках остеосаркомы человека, является установленной моделью для доказательства эффективности композиции при стимуляции роста волос.

Эксперимент показывает синергизм при стимуляции аутофагии на проверенной модели in vitro. Результаты и публикация показывают, что аутофагия необходима для роста волосяного фолликула. Композиция по изобретению стимулирует аутофагию и, следовательно, является эффективной при стимуляции роста волос.

В некоторых аспектах изобретение относится к описанной выше композиции для применения при лечении расстройств роста волос, таких как в случае андрогенной алопеции или облысения.

В другом аспекте изобретение относится к применению описанных выше композиций в качестве промотора аутофагии при лечении воспаления кожи.

Авторы изобретения также обнаружили, что композиция, включающая N-метилспермидин и биотин, подходит в качестве промотора аутофагии при лечении кожных заболеваний.

Вводимые количества и частота введения композиции будут зависеть от типа и тяжести заболева- 6 043929 ний, от которых лечат.

Теперь изобретение будет описано подробнее с обращением к конкретным воплощениям, показывающим синергетические результаты, достигаемые композициями по изобретению, но не должны рассматриваться как ограничивающие. Количества указанных компонентов выражаются в массовых (мас./мас.) процентах (%) или в мг на одну дозу для введения.

Экспериментальные части.

Пример 1.

Получение экстракта Galeopsis segetum.

Получение сухого экстракта Galeopsis segetum выполняют путем экстрагирования 40% этанолом с последующей очисткой на колонке. Стадии описаны в последующих разделах.

Экстрагирование.

Измельченные высушенные воздушные части G. segetum экстрагируют дважды при 50°C в течение 2 ч 40% этанолом. Твердое вещество и жидкость разделяют с помощью декантатора.

Жидкие экстракты фильтруют, концентрируют в вакууме и затем осветляют центрифугированием.

Очистка.

Колонку заполняют ионообменной смолой-сорбентом XAD7HP, которую предварительно замачивают в 95% этаноле и выдерживают в течение 10 ч. Затем набитую колонку промывают водой, продолжая промывание до тех пор, пока проводимость элюата не достигнет такой же величины, как у загружаемой воды.

Очистку экстракта выполняют на колонке, набитой XAD7HP, с элюированием сначала водой и затем 70% этанолом.

Собранные элюаты концентрируют в вакууме.

К концентрированному раствору добавляют этанол, и затем раствор греют при 70-75°C в течение 30 мин для того, чтобы снизить уровень бионагрузки.

Раствор снова концентрируют в вакууме, сушат при 50°C в течение 24 ч, и затем остаток измельчают и смешивают с эксципиентами (смесью мальтодекстрина и коллоидного безводного силикагеля 90/10), и получают конечный продукт.

Пример 2.

Получение экстракта Galeopsis tetrahit.

Получение сухого экстракта Galeopsis tetrahit выполняют, точно следуя процедуре, описанной в предыдущих абзацах для экстрагирования Galeopsis segetum.

Пример 3. Оздоравливающий шампунь.

Ингредиенты	%, мас./мас.
Zetesol MGS/B	16-49
Лауроилсаркозинат натрия	4-12
Mirasheen СР 820/G	2-6
Rewoderm LI S 80	1-4
EuxylK701	1-2
ВС 2262	0,5-1,4
Кокамид MIPA	0,5-1,4
Калий-ундециленоил-гидролизованный белок пшеницы	0,5-1,4
Моногидрат лимонной кислоты	0,4-1,2
Моногидрат бетаина	0,2-0,7
Хлорид лаурилметилглюцит-10-гидроксипропилдимония	0,2-0,7
Gafquat 755 N-0	0,2-0,5
D-Пантенол	0,1-0,3
Тринатрия этилендиамин дисукцинат	о,1-о,з
BHA	0,01-0,02
Гидроксипропилтримониум гиалуронат	0,01-0,02
Сухой экстракт Galeopsis segetum	0,003-0,009
Биотин	0,001-0,03
Meditanox Η-10	0,0005-0,0015
У-Метилспермидин	0,0005-0,1
Лецитин	0,0004-0,0011
Fomblin HC/PU-CAT5	0,0002-0,0005
Вода до 100 мл

- 7 043929

Пример 4. Укрепляющий шампунь.

Ингредиенты

Zetesol MGS/B

N- лауроилсаркозинат натрия

Mirasheen СР 820/G

Rewoderm LI S 80

EuxylK701

Кокамид MIPA

Калий-ундециленоил-гидролизованный белок пшеницы

Моногидрат лимонной кислоты

ВС 2262

Моногидрат бетаина

Хлорид лаурилметилглюцит-10-гидроксипропилдимония

Abil Soft AF 100

Gafquat 755 N-0

D-Пантенол

Тринатрия этилендиамин дисукцинат

ВНА

Гидроксипропилтримониум гиалуронат

Сухой экстракт Galeopsis segetum

Биотин

Meditanox Η-10

У-Метилспермидин

Лецитин NAT 8539

Fomblin HC/PU-CAT5

Вода до 100 мл

Пример 5. Лосьон.

Ингредиенты

Этанол

Пантотенат кальция

ПЭГ-40-Гидрогенизированное касторовое масло

Молочная кислота, 80% р-р

Lypobelle soyaglycone

Гидроксипропилтримониум гиалуронат

У-Метилспермидин

Лецитин NAT 8539

Октадецил-ди-трет-бутил-4-гидроксигидроциннамат

Fomblin HC/PU-CAT5

Биотин

Meditanox Η-10

Вода до 100 мл %, мас./мас.

15-60

4-12

2-6

1-4

1-2

0,5-1,4

0,4-1,1

0,3-0,8

0,2-0,7

0,2-0,6

0,2-0,5

0,1-0,3

0,01-0,02

0,01-0,02 0,003-0,009

0,001-0,003

0,001-0,002

0,0004-0,0011

0,0002-0,0005 %, мас./мас.

9-27

1-2

0,1-0,4

0,04-0,13

0,03-0,1

0,03-0,09

0,02-0,07

0,009-0,027

0,007-0,022

0,0005-0,0015

- 8 043929

Пример 6. Укрепляющий кондиционер.

Ингредиенты	%, мас./мас.
Хлорид цетилтриметиламмония	3-9
Цетилстеариловый спирт	3-8
Sil soft 8812	2-7
Арлацел 165-PA-(MV)	2-5
Г лицер ил стеарат	2-5
Алкиллактат С12-13	1-3
Dow Coming СЕ 8401	1-2
Ксилит	1-2
Bioscontrol synergy BAS	0,3-0,9
Г идроксиэтилцеллюлоза	0,3-0,9
D-Пантенол	0,3-0,8
Униглюкан G-51	0,3-0,8
Жидкая молочная кислота	θ,Ι-0,4
Фитантриол	0,1-0,3
Бензоат натрия	0,1-0,3
Дегидроацетат натрия	ОД-0,3
Ц,иклопентасилоксан	0,1-0,2
Дигидрат динатриевой соли ЭДТК	0,1-0,2
Серицин	0,1-0,2
Гидроксипропилтримониум гиалуронат	0,01-0,02
Сухой экстракт Galeopsis segetum	0-0,01
Биотин	0,01-0,03
Meditanox Η-10	0,001-0,002
Лецитин NAT 8539	0,0004-0,0011
Fomblin HC/PU-CAT5	0,0002-0,0005
N¹-Meτилcπepмидин	0,025-0,075
Вода до 100 мл

- 9 043929

Пример 7. Укрепляющий кондиционер.

Ингредиенты

Цетостеариловый спирт

Хлорид цетилтриметиламмония

Катионный раствор Aquacat PF618

1,2- Пропандиол

SI-ТЕС АМЕ 6057

Incroquat behenyl ТМ S

D-Пантенол

Феноксиэтанол

Г лицер ил стеарат

Mycomplex

Церафил 60

Collasurge - LQ- (WD)

Сафлоровое масло

Amipearl intense silverl 161

Токоферилацетат

Г идроксиэтилцеллюлоза

Uvinul A plus В

Циклопентасилоксан

Декабен BL

Дигидрат динатриевой соли ЭДТК

Rewoteric АМ 2 С NM

Моногидрат лимонной кислоты

Бутилгидрокситолуол

Пантотенат кальция

Гидроксипропилтримониум гиалуронат

Биотин

SK-Influx V

Рутин

Сухой экстракт Galeopsis tetrahit

Meditanox Η-10

Сухой экстракт семян красного винограда

Лецитин NAT 8539

Масляный 20% р-р зеаксантина

Fomblin HC/PU-CAT5

N'-Метилспермидин

Вода до 100 мл

Пример 8. Укрепляющий гель.

Ингредиенты (INCI)

Полимер Fixate PLUS

Отдушка Apollon 436/F 0505436F

Сорбитол 70% некристаллизующийся

Гидроксиметилглицинат натрия

Г идроксипропилгуар

Бензофенон-4

Лувикват (поликватерниум 11)

Дигидрат динатриевой соли ЭДТК

Таурин

Пантотенат кальция

А-Метилспермидин

Сухой экстракт Galeopsis tetrahit

Биотин

Meditanox Η-10

Вода до 100 мл %, мас./мас.

4-11

3-8

2-6

2-5

1-3

1-2

0,4-1,2

0,3-0,8

0,2-0,5 о,1-о,з

0,1-0,3

0,1-0,2

0,03-0,08

0,01-0,03

0,01-0,02

0,001-0,02

0,001-0,003 0,0006-0,0017

0,001-0,002

0,0005-0,0015

0,0005-0,0015 0,0004-0,0012 0,0002-0,0006 0,0002-0,0005

0,0045-0,0135 %, мас./мас.

2-5

1-3

1-2

0,5-1,5

0,4-1,2

0,15-0,45

0,05-0,15

0,03-0,08

0,01-0,03 0,00275-0,00825 0,0003-0,0009 0,00075-0,0025

0,0001-0,0002

- 10 043929

Пример 9. Крем.

Ингредиенты	%, мае./мае.
Октилдодеканол	11,5-15,5
Цетилстеариловый спирт	8,5-11,5
Воск цетиловых эфиров	2,6-3,5
Моностеарат сорбитана	1,7-2,3
Полисорбат 60	1,3-1,7
Бензиловый спирт	0,9-1,2
Т^-Метилспермидин	0,0428-0,058
Биотин	0,0119-0,0161

Вода до 100 мл

Пример 10. Таблетки.

Ингредиенты Метионин	Количество (мг) 200-400
Витамин С с покрытием	50-150
Микрокристаллическая целлюлоза	40-160
Сухой экстракт семян красного винограда Гидроксипропилметилцеллюлоза К100 Зеаксантин 5%	30-90 20-70 20-70
Витамин Е (ацетат токоферола) 50% Селеновые дрожжи 2000 ч/млн Бисглицинат цинка 28,2%	20-50 20-40 10-40
Коллоидный диоксид кремния Сухой экстракт листьев оливы европейской	10-20 5-15
Пантотенат кальция	5-11
Полиэтиленгликоль 6000	4-12
Стеарат магния	4-12
Поливинилпирролидон К30 Сухой экстракт Galeopsis segetum Бисглицинат меди 30%	3-10 0,1-20 2-6
Рутин Витамин Вб	1-4 1-4
Гиалуроновая кислота	1-2
Тригидрохлорид спермидина	0,3-0,8
Фолиевая кислота	о,1-о,з
Биотин Пример 11. Таблетки. Ингредиенты	0,03-0,08 Количество (мг)
Микрокристаллическая целлюлоза Гидроксипропилметилцеллюлоза К100	40-160 20-70
Витамин Е (ацетат токоферола) 50% Бисглицинат цинка 28,2%	20-50 10-40
Коллоидный диоксид кремния	10-20
Полиэтиленгликоль 6000	4-12
Стеарат магния Поливинилпирролидон К30 Бисглицинат меди 30%	4-12 3-10 2-6
Витамин Вб	1-4
Гиалуроновая кислота	1-2
Тригидрохлорид спермидина	0,3-0,8
Биотин	0,03-0,08

- 11 043929

Пример 12. Таблетки.

Ингредиенты	Количество (мг)
Микрокристаллическая целлюлоза	40-160
Гидроксипропилметилцеллюлоза К100	20-70
Витамин Е (ацетат токоферола) 50%	20-50
Бисглицинат цинка 28,2%	10-40
Коллоидный диоксид кремния	10-20
Сухой экстракт Galeopsis segetum	5-20
Полиэтиленгликоль 6000	4-12
Стеарат магния	4-12
Поливинилпирролидон К30	3-10
Бисглицинат меди 30%	2-6
Витамин Вб	1-4

Пример 13.

Материалы и методы.

Анализ методом иммуноблоттинга.

Клетки U2OS выращивают до 80% слияния в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла с высоким содержанием глюкозы (4,5 г/Ю-глюкозы), содержащей 4 мМ L-глутамина, 10% сыворотки плода коровы (FBS), и обрабатывают спермидином (партия 2010112716), Galeopsis segetum (IDN 6781), биотином (партия 2014124160) или их комбинациями. Образцы белка экстрагируют в буфере RIPA, как описано ранее (De Mei С., Ercolani L., Parodi С., Veronesi M., Vecchio CL., Bottegoni G. et al., Dual inhibition of REV-ERBe and autophagy as a novel pharmacological approach to induce cytotoxicity in cancer cells. Oncogene. 2015; 34(20): 2597-608). Уровни p62/SQSTM1 и GAPDH анализируют со специфическими антителами анти-p62/SQSTM1 и анти-GADPH. Иммуноблотт-эксперименты выполняют в буфере TBS-T, содержащем 5% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Антитела αнти-LC3B и анти-GAPDH разводят 1:1000 и 1:50000, соответственно. Соответственно, HPR-конъюгированные вторичные антитела разводят 1:10000. После взаимодействии с ECL - реагентом для детекции для вестерн-блоттинга, обнаруживают хемилюминисцентные сигналы с помощью люминисцентого анализатора изображений LAS-4000, и вычисляют оптическую плотность полосы конкретного сигнала с помощью программы анализа изображений Photoshop. GAPDH принимают за контроль нагрузки, и сигналы GAPDH используют для нормализации уровней белка р62 в различных образцах.

Иммуноблоттинг повторяют по меньшей мере 4 раза для того, чтобы выразить величину как среднее ± ср.-кв. ошибка (SEM).

Флуоресцентный анализ ингибирования аутофагии.

Клетки U2OS высевают по 3000 клетки/лунка в 48-луночные планшеты № 1.5 Uncoated Coverslip, диаметр лунки 6 мм, предварительно сенсибилизированные раствором желатина, и трансдуцируют 0,2 мкл (di) бакуловирусом/10000 клеток, содержащим химерный белок р62-красный флуоресцентный белок (p62-RFP). Через 48 ч после трансдукции клетки обрабатывают спермидином, биотином, Galeopsis или средой и контролируют 24 ч с использованием микроскопии для визуализации клеток NIKON Live Cell Imaging microscopy.

Синергетическая активность спермидина, G. segetum и биотина для индукции аутофагии в человеческих клетках.

Для того чтобы оценить может ли биотин и/или экстракт Galeopsis segetum воздействовать на аутофагию, авторы изобретения проверяют накопление аутофагосом в культивированных клетках U2OS с помощью флуоресцентной микроскопии живых клеток (Klionsky DJ., Abdelmohsen K., Abe A., Abedin MJ., Abeliovich H., Acevedo Arozena A. et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy. Autophagy. 2016; 12(1):1-222). В соответствии с этим, клетки трансдуцируют конструкцией, содержащей белок аутофагии LC3, слитый с красным флуоресцентным белком (RFP). Затем после добавления биотина (200 нг/мл) или сухого экстракта Galeopsis (100 нг/мл) контролируют накопление флуоресцентных точек LC3 путем получения изображений каждые 30 мин в течение 6 час. Спремидин (10 мкМ) принимают за положительный контроль соединения-индуктора аутофагии (Pietrocola F., Lachkar S., Enot D., Niso-Santano M., Bravo-San Pedro J., Sica V. et al. Spermidine induces autophagy by inhibiting the acetyltransferase EP300. Cell Death & Differentiation, 2015; 22(3):509-16).

Анализ показывает заметное накопление флуоресцентных точек LC3 в клетках, обработанных как биотином, так и Galeopsis (см. характерные изображения на фиг. 1). Как видно из фиг. 1, обработка спермидином приводит к заметному накоплению флуоресцентных точек (т.е. накоплению аутофагосом). Как биотин, так и сухой экстракт вызывают схожее накопление точек LC3-красный белок.

Поскольку точки LC3-RFP также могут накаливаться после блокады аутофагического потока, в силу этого также контролируют зависимую от аутофагии деградацию белка SQSTM1/p62 (Klionsky DJ., Abdelmohsen K., Abe A., Abedin MJ., Abeliovich H., Acevedo Arozena A. et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy. Autophagy, 2016; 12(1):1-222). В качестве связующего

- 12 043929 звена между LC3 и убиквитинированными субстратами служит р62 (Pankiv S., Clausen TH., Lamark Т., Brech A., Bruun J-A., Outzen H. et al. p62/SQSTM1 binds directly to Atg8/LC3 to facilitate degradation of ubiquitinated protein aggregates by autophagy. Journal of Biological Chemistry, 2007; 282(33):24131-45). Белок р62 и связанные с р62 полиубиквитинированные белки оказываются включенными в завершенную аутофагосому и разрушаются в аутолизосомах, служа таким образом в качестве показателя аутофагической деградации (Klionsky DJ., Abdelmohsen K., Abe A., Abedin MJ., Abeliovich H., Acevedo Arozena A. et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy. Autophagy, 2016; 12(1):1-222).

Соответственно, действие биотина и Galeopsis на опосредуемую аутофагией деградацию р62 оценивают, анализируя число p62-RFP аутофагосом флуресцентной микроскопией живых клеток. В связи с этим клетки трансдуцируют конструкцией, экспрессирующей белок р62, слитый с RFP. Затем после добавления биотина, Galeopsis, спермидина или среды контролируют флуоресцентные точки р62.

Как полное подтверждение того, что как биотин, так и Galeopsis действуют как индукторы аутофагии, наблюдают резкое снижение точек p62-RFP в обработанных клетках по сравнению со средой (см. изображения, представленные на фиг. 2).

Как видно на фиг. 2, обработка ранее охарактеризованным индуктором аутофагии спермидином заметно снижает флуоресцентные точки р62 и флуоресцентные сигналы, показывая таким образом, что как биотин, так и экстракт Galeopsis segetum действуют как индукторы аутофагии, так как такие обработки вызывают резкое снижение флуоресцентных сигналов р62.

Как только подтверждена активность индуцирования аутофагии биотина и Galeopsis и подтверждается применение р62 в качестве подходящего маркера процесса аутофагии, оценивают действие комбинаций соединений на уровни белка р62 с помощью анализа методом иммуноблоттинга (De Mei С., Ercolani L., Parodi С., Veronesi M., Vecchio CL., Bottegoni G. et al. Dual inhibition of REV-ERBe and autophagy as a novel pharmacological approach to induce cytotoxicity in cancer cells. Oncogene, 2015; 34(20): 2597-608).

Такой анализ показывает значительное синергетическое действие спермидина, биотина и Galeopsis при индукции опосредуемой аутофагией деградации р62 (таблица). ____________

Обработка	Процент снижения р62 против среды (% ± SEM)	Ожидаемое снижение р62 от действия добавок	Синергетическое действие
Спермидин	5 ± 0,11
Биотин	21 ± 1,5
Galeop sis	24 ±2,1
Спермидин + биотин	45 ±2,5	26 ± 1,61	ДА
Спермидин + Galeop sis	51 ±3,3	29 ±2,21	ДА
Биотин + Galeop sis	67 ±5,5	45 ±3,6	ДА
Спермидин + Gal eop sis + биотин	78 ±3,9	50 ±3,71	ДА

Действительно, комбинация спермидина (0,5 мкМ) и биотина (19,91 нг/мл) приводит к снижению р62 почти в два раза большему, чем снижение, ожидаемое за счет аддитивного действия (45% против 26%). Схожие результаты получают для комбинации спермидина и Galeopsis (7,9 нг/мл) (51% против 29%) и смеси биотин/Galeopsis (67% против 45%). Наконец, комбинация всех трех соединений (0,5 мкМ спермидина + 7,9 нг/мл Galeopsis + 19,91 нг/мл биотина) дает замечательное 78% снижение уровней белка р62.

Пример 14.

Оценивают уровни липидированного LC3 и SQSTM1 в человеческих клетках U2OS, обработанных эквимолярными дозами N¹-метилспермидина и спермидина. В результате по сравнению со средой оба соединения повышают уровни липидированной формы LC3-II и опосредованной стимулированной аутофагией деградации SQSTM1. Конкретно, культивированные человеческие клетки U2OS обрабатывают 6 час средой или эквимолярными дозами спермидина и N¹-метилспермидина (100 мкМ). Затем уровни липидированного LC3 (LC3-II) и SQSTM1 оценивают анализом методом иммуноблоттинга как в примере 8 со специфическим антителом. Сигналы актина принимают за контроль нагрузки. Денситометрический анализ сигналов белков приводится в виде относительных уровней белков, нормализованных по актину. Величина для образца среды установлена как 1. Величины показаны как среднее ± SEM, n=3. *Р<0,05 и **Р<0,01, соединения против среды. Результаты приводятся на фиг. 3 (Е и F). Эти результаты подтверждают, что ^-метилспермидин сохраняет активность индукции аутофагии как и его деметилированный аналог.

-

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Синергетическая композиция для стимулирования роста волос и/или предупреждения потери волос, включающая экстракт растения рода Galeopsis, который получен путем экстракции полярным протонным растворителем из воздушных частей растения, и соединение, промотирующее аутофагию, выбранное из R-N¹-спермидина или его соли, в которых R представляет собой водород или метил, биотина и их смесей.
2. Синергетическая композиция по п.1, где экстракт растения рода Galeopsis выбирают из экстрактов вида Galeopsis segetum и Galeopsis tetrahit и их смесей.
3. Синергетическая композиция по п.2, где экстракт растения рода Galeopsis представляет собой сухой экстракт, полученный способом, включающим следующие стадии:

измельчение по меньшей одной воздушной части растения рода Galeopsis;

экстрагирование физиологически приемлемым полярным протонным растворителем - фильтрование экстракта;

очистка фильтрованного экстракта, предпочтительно путем элюирования полярного протонного растворителя из колонки;

сушка очищенного экстракта;

измельчение высушенного очищенного экстракта и, необязательно, добавление эксципиентов.
4. Синергетическая композиция по п.3, где эксципиенты включают мальтодекстрин и/или коллоидный безводный силикагель.
5. Синергетическая композиция по любому из пп.1-4, где спермидин присутствует в композиции в форме тригидрохлорида.
6. Топический препарат, включающий синергетическую композицию по любому из пп.1-5 и по меньшей мере один эксципиент, подходящий для топического/местного нанесения.
7. Топический препарат по п.6, где количество экстракта растения рода Galeopsis находится в интервале 0,0003-0,01 мас.% относительно общей массы композиции.
8. Топический препарат по п.6 или 7, где количество биотина находится в интервале 0,0006-0,075 мас.% относительно общей массы композиции.
9. Топический препарат по любому из пп.6-8, где композиция включает R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой метил или водород, в интервале 0,0005-0,1 мас.% относительно общей массы композиции.
10. Топический препарат по любому из пп.6-9, который находится в форме, выбранной из группы, включающей шампунь, гель, кондиционер, лосьон, бальзам, эмульсию, пенку, средство макияжа и крем.
11. Пероральный препарат, включающий синергетическую композицию по любому из пп.1-5 и по меньшей мере один эксципиент, подходящий для перорального введения.
12. Пероральный препарат по п.11, где количество сухого экстракта растения рода Galeopsis в пероральном препарате находится в интервале 0,1-20 мг на единичную дозу.
13. Пероральный препарат по п.11 или 12, где количество биотина в пероральном препарате находится в интервале 0,03-0,08 мг на единичную дозу.
14. Пероральный препарат по п.11 или 12, где композиция включает R-N¹-спермидин или его соль, в которых R представляет собой метил или водород, в интервале 0,3-0,8 мг на единичную дозу.
15. Пероральный препарат по любому из пп.11-14, где препарат представляет собой твердый препарат, выбранный из группы, включающей таблетку, капсулу, порошки, гранулы или пилюлю.
16. Косметическое применение синергетической композиции по любому из пп.1-5 или топического препарата по любому из пп.6-10, или перорального препарата по любому из пп.11-15 при стимулировании роста волос и/или предупреждении потери волос.
17. Применение топического препарата по любому из пп.6-10 при лечении андрогенной алопеции или облысения.
18. Применение перорального препарата по любому из пп.11-15 при лечении андрогенной алопеции или облысения.

-