KR102083046B1 - 레티노이드 작용제를 이용하여 호중구감소증을 치료하기 위한 방법 - Google Patents

레티노이드 작용제를 이용하여 호중구감소증을 치료하기 위한 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR102083046B1
KR102083046B1 KR1020157000014A KR20157000014A KR102083046B1 KR 102083046 B1 KR102083046 B1 KR 102083046B1 KR 1020157000014 A KR1020157000014 A KR 1020157000014A KR 20157000014 A KR20157000014 A KR 20157000014A KR 102083046 B1 KR102083046 B1 KR 102083046B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
neutropenia
day
retinoid
pharmaceutical composition
csf
Prior art date
Application number
KR1020157000014A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20150035983A (ko
Inventor
링타오 우
Original Assignee
칠드런＇스 하스피틀 로스 앤젤레스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 칠드런＇스 하스피틀 로스 앤젤레스 filed Critical 칠드런＇스 하스피틀 로스 앤젤레스
Publication of KR20150035983A publication Critical patent/KR20150035983A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102083046B1 publication Critical patent/KR102083046B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/196—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino group being directly attached to a ring, e.g. anthranilic acid, mefenamic acid, diclofenac, chlorambucil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/382—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having six-membered rings, e.g. thioxanthenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증을 치료하기 위한 방법을 제시하고, 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 호중구감소증을 치료하기 위해 상기 조성물의 효과량을 개체에 투여하고, 따라서 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증을 치료하는 것을 포함한다.

Description

레티노이드 작용제를 이용하여 호중구감소증을 치료하기 위한 방법{METHODS FOR TREATING NEUTROPENIA USING RETINOID AGONISTS}
정부 권리
본 발명은 보조금 번호 CA111440, CA120512와 CA120512-02S1 하에 정부 지원을 받아 만들어졌고, 각각은 National Institutes of Health에 의해 제공되었다. 정부는 본 발명에 일정한 권리를 갖는다.
발명의 분야
본 발명은 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증을 치료하는, 호중구감소증을 저해하는, 호중구감소증을 감소시키는 및/또는 호중구감소증의 예방을 증진하는 방법에 관계하고, 이들 방법은 레티노이드 작용제, 예를 들면, 타미바로텐을 투여하는 것을 포함한다.
배경
본원에서 인용된 모든 간행물은 마치 각 개별 간행물 또는 특허 출원이 참조로서 편입되는 것으로 특정적으로 및 개별적으로 지시되는 것과 동일한 정도로 전체적으로 참조로서 편입된다. 하기 설명은 본 발명을 이해하는데 유용할 수 있는 정보를 포함한다. 본원에서 제공된 임의의 정보가 현재 청구된 발명의 선행 기술이거나 또는 이와 유관하고, 또는 구체적으로 또는 함축적으로 참고된 임의의 간행물이 선행 기술인 것으로 인정되지 않는다.
가장 통상의 과립구인 호중구는 병원체 감염에 대항하여 일차적으로 방어하는 순환 백혈구의 70%를 구성한다. 암 화학요법-유도된 호중구감소증은 혈류 내에 호중구의 숫자에서 큰 감소에 의해 두드러지는 혈액학적 장애이다. G-CSF가 HSC의 과립구형성을 증진함으로써 후천성과 선천성 호중구감소증(1,2)을 치료하는데 최초로 이용된 이후로, 20년 이상이 경과하였다. G-CSF의 낮은 치료 지수, 이의 투여의 역효과, 그리고 악성 전환의 위험(2)으로 인하여, 종양학에서 화학요법에 의해 유도된 호중구감소증은 이환율, 사망률, 그리고 건강관리 비용의 주요 근원이다(3,4). 최근 연구는 PBN에 대조적으로, CD34+ 세포로부터 G-CSF에 의해 유도된 호중구에서 손상된 세균 사멸이 분화 과정에서 초기에 비정상적인 과립구형성에 기인한 성숙 과립의 결여와 연관된다는 것을 보여준다(5). 따라서, 호중구감소증에 대한 더욱 효과적인 치료를 고안하는데 있어서 성공은 과립구형성이 호중구-기초된 면역성의 발생과 어떻게 협조하는 지를 결정하는데 의존할 지도 모른다.
레티노이드 작용제 Am80(6-8)은 백혈병 골수모세포와 HSC(13-17) 둘 모두의 과립구 분화를 제어하기 위해, RA(11,12)에 의해 활성화된 전사 인자인 레티노산 수용체 알파 (RARα)(6,9,10)에 선별적인 결합을 통해, 올-트랜스 레티노산 (RA)의 부작용을 개선하도록 설계된다. 비타민 A의 자연 발생 형태인 RA는 신체 계획의 발달에서 핵심적인 역할을 수행하고, 그리고 많은 유형의 정상적인 세포와 악성 세포의 분화를 유도한다(18-20). 현재까지, 급성 전골수성 백혈병 (APL)의 RA 치료는 임상 종양학(21)에서 성공적인 분화-유도 요법의 최선의 실례를 대표하지만, RA 치료와 연관된 부작용은 일반적으로 심각하고, 그리고 RA 내성은 통상적인 이벤트이다(22-24). 여러 연구는 RARα가 Am80-유도된 과립구 분화를 제어한다는 것을 증명하였다(25-27). 게다가, Am80은 APL 환자에서 분화 요법으로서 이용되는 RA 또는 다른 레티노이드보다 대략 10-배 더 효율적이고, 더욱 낮은 독성을 갖는다(7,8,28). 현재, Am80은 일본에서 APL의 치료용으로 승인되었고(7,8), 그리고 미국과 유럽에서 여러 다른 암/질병에 대해 임상적으로 조사되고 있다 (http://www.cytrx.com/tamibarotene.html; http://clinicaltrials.gov). 과립구 분화를 유도하기 위한 Am80의 용도에서 진전으로 인하여, 상기 약물은 면역 발달 동안 과립구형성으로부터 발생하는 호중구 살균 활성을 증강하는 수단으로서 시험되었다. 본 출원에서 Am80은 아마도, CD18 활성화에 대한 CD66의 차별적 효과를 매개함으로써 HSC-유래된 과립구형성의 증진을 통해, 호중구 분화와 면역 발달의 유도인자로서 G-CSF보다 훨씬 큰 활성을 소유하는 것으로 보고된다.
발명의 요약
본 발명은 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증, 급성 세균 감염, 암-화학요법 유도된 호중구감소증 및/또는 다양한 형태의 선천성 호중구감소증을 치료하는, 저해하는 및/또는 이들의 심각도를 감소시키는 방법을 제시한다. 이들 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 호중구감소증을 치료하고, 저해하고 및/또는 이의 심각도를 감소시키기 위해 상기 조성물의 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 이들 방법은 개체에서 호중구감소증, 급성 세균 감염, 암-화학요법 유도된 호중구감소증 및/또는 다양한 형태의 선천성 호중구감소증을 치료하고, 저해하고 및/또는 이들의 심각도를 감소시키기 위해, 본 발명의 조성물과 동시에 또는 순차적으로, 추가 치료제를 투여하는 것을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다.
본 발명은 또한, 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증, 급성 세균 감염, 암-화학요법 유도된 호중구감소증 및/또는 다양한 형태의 선천성 호중구감소증을 치료하고, 저해하고 및/또는 이들의 심각도를 감소시키기 위한 제약학적 조성물과 키트를 제시한다. 이들 제약학적 조성물과 키트는 일정량의 레티노이드 작용제를 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다.
도면의 간단한 설명
예시적인 구체예는 참고된 도면에서 도해된다. 본원에서 개시된 구체예와 도면은 제한적이기 보다는 예시적인 것으로 고려되는 것으로 의도된다.
도면 1은 본 발명의 다양한 구체예에 따라, Am80이 유사하게 낮은 독성을 보이면서, G-CSF보다 더욱 효과적으로 호중구 분화를 증진한다는 것을 묘사한다. (A)는 6 대 9 또는 12 일 동안 G-CSF로 처리된 CD34+ 세포에서 더욱 낮은 단핵구 유도와 연관된 더욱 나은 과립구 유도. (B & C) 감소된 농도의 Am80 (2.5 nM)은 더욱 낮은 세포독성 (패널 C)을 보이면서, G-CSF (패널 B)로 달성된 것보다 과립구 분화의 더욱 효과적인 유도를 야기한다. (D) 과립구 분화를 위해 최적인 것으로 밝혀진 조건 하에 Am80과 G-CSF의 전반적인 비교.
도면 2는 본 발명의 다양한 구체예에 따라, Am80-유도된 호중구 (AIN)가 G-CSF-유도된 호중구 (GIN)보다 더욱 효과적으로 과립을 생산하고 분비한다는 것을 묘사한다. (A) 대장균 (E. coli) 자극 시에, AIN 대 GIN에 의한 락토페린의 효과적인 분비. (B) AIN 대 GIN에 의한 LL-37의 더욱 큰 생산과 탈과립. (C) 대장균 (E. coli) 자극 시에 세포내 MMP9의 증가된 존재비, 하지만 GIN과 AIN 둘 모두에서 불충분한 탈과립.
도면 3은 본 발명의 다양한 구체예에 따라, 항-CD15 항체와 함께 분류되지 않은 AIN과 분류된 AIN 둘 모두 분류되지 않은 GIN과 분류된 GIN보다 세균의 청소에 대한 더욱 높은 능력을 전시한다는 것을 묘사한다. (A)는 단핵구 (GIN)의 정량을 보여준다. (B)는 띠/분엽 호중구 GIN 대 AIN의 정량을 보여준다. (C & D) 세포내 세균의 청소에 대한 분류되지 않은 GIN과 AIN 및 분류된 GIN과 AIN의 효과의 비교. 청소 효율은 감염 후 세포내 구획으로부터 회수된 생존가능 세균의 숫자로부터 결정되었다.
도면 4는 본 발명의 다양한 구체예에 따라, AIN이 GIN보다 훨씬 높은 식균과 살균 활성을 소유한다는 것을 묘사한다. (A-D) 세포외 세균 (패널 A), 식균된 세균 (패널 B), 회수된 세포내 세균 (패널 C), 그리고 사멸된 세균 (패널 D)의 숫자에 의해 결정된 식균과 살균 활성. 45 분의 실험 동안 세균 숫자가 1.26 ± 0.01-배 증가하였다. *: GIN 대 AIN, 최소한 P<0.03. (E) GIN, AIN과 인간 말초혈 호중구 (PBN)에서 감염 후 세포외 세균과 원지 사멸된 세균 둘 모두의 정량*: GIN 대 AIN 또는 PBN, 최소한 P<0.003.
도면 5는 본 발명의 다양한 구체예에 따라, ATRA (RA) 및 새로운 합성 레티노이드 작용제 Am80, CH55, 그리고 IT-YA01115 (IT-YA)의 구조를 묘사한다.
도면 6은 본 발명의 다양한 구체예에 따라, Am80이 G-CSF와 다른 레티노이드 화합물보다 더욱 효과적으로 CD34+ 세포의 과립구 형태적 분화를 유도한다는 것을 묘사한다. (A-B) 과립구 분화를 유도하는데 있어서 G-CSF보다 RA의 더욱 높은 효율 (패널 A)은 유의미한 세포 사멸과 연관되었다 (패널 B). CD34+ 세포의 과립구로의 분화를 유도하는데 있어서 G-CSF에 의한 더욱 낮은 효율은 12 일자에 더욱 높은 단핵구 유도와 연관되었다 (패널 A). (C-D) Am80 (10 nM)은 과립구 분화를 유도하는데 있어서 RA와 CH55와 비교하여 유사한 효율을 소유하고 (패널 A, C), 반면 G-CSF 또는 IT-YA 또는 CH55보다 더욱 적은 단핵구 유도 (패널 A, C) 및 RA와 CH55보다 더욱 낮은 비율의 세포 사멸 (패널 B, D)을 보여준다.
도면 7은 본 발명의 다양한 구체예에 따라, AM80이 G-CSF로 치료된 생쥐와 비교하여 호중구감소성 생쥐에서 경쟁적 호중구 회복을 유도한다는 것을 묘사한다. (A) 상이한 분량의 Am80과 G-CSF로 CPA 투여 후 3 일자에 측량된 호중구 회복의 분석을 위한 실험적 설계의 예시. (B) 말초혈 (PB)은 3 일자에, 안락사된 대조 생쥐로부터 수집되고, 그리고 PB 호중구는 피콜-파크 (1.084)를 이용함으로써 정제되었다. (C) 3 일자에 상이한 분량의 Am80 또는 G-CSF로 치료된 호중구감소성 생쥐로부터 백혈구 (WBC)와 호중구 회복의 분석.
도면 8은 본 발명의 다양한 구체예에 따라, 호중구감소성 생쥐에서 Am80에 의해 동원된 호중구가 G-CSF에 의해 동원된 호중구보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다는 것을 묘사한다. (A) G-CSF는 5 일자에 Am80 또는 운반제로 치료된 생쥐와 비교하여 두드러지게 가속된 호중구 회복을 유도하였다. (B) 5 일자에 PB 호중구의 분석. *G-CSF 대 Am80, P < 1.2 x 10-6; G-CSF 대 대조, P < 4.0 x 10-5; G-CSF 대 운반제, P < 8.2 x 10-8; Am80 대 운반제, P < 1.3 x 10-6; Am80 대 대조, P < 0.016. (C) 상이한 생쥐의 PB로부터 단리된 호중구의 식균과 살균 활성은 시험관내에서 황색포도상구균 (S. aureus)에 대한 단리된 호중구의 노출 후, 세포외 세균, 식균된 세균, 그리고 사멸된 세균의 숫자에 의해 반영되었다. *세포외: AINs 대 GINs, P < 0.043; AINs 대 C-MPBNs, P < 1.1 x 10-4; MPBNs 대 C-MPBNs, P < 3.7 X 10-4; GINs 대 C-MPBNs, P < 0.049. *식균작용: AINs 대 GINs, P < 0.026; AINs 대 C-MPBNs, P < 0.02; MPBNs 대 GINs, P < 0.042; MPBNs 대 C-MPBNs, P < 0.003; GINs 대 C-MPBNs, P < 0.009. *사멸: AINs 대 GINs, P < 0.026; AINs 대 C-MPBNs, P < 0.005; MPBNs 대 GINs, P < 0.015; MPBNs 대 C-MPBNs, P < 0.003; GINs 대 C-MPBNs, P < 0.009. (D) WBC와 호중구의 가속된 회복은 G-CSF 또는 Am80 또는 운반제로 96 시간의 자극 후, 7 일자에 중단되었다. (E) 9 일자에 PB 호중구의 분석. *G-CSF 대 대조, P < 0.005; Am80 대 대조, P < 3.9 x 10-4; Am80 대 운반제, P < 0.03; 운반제 대 대조, P < 0.03. (F) AIN은 가속된 호중구 회복의 중단 후 48 시간에서처럼, 9 일자에 GIN보다 훨씬 높은 식균과 살균 활성을 소유하였다. *세포외: AINs 대 GINs, P < 0.02; AINs 대 C-MPBNs, P < 0.007; MPBNs 대 GINs, P < 0.04; MPBNs 대 C-MPBNs, P < 0.02. *식균작용: AINs 대 C-MPBNs, P < 0.034; MPBNs 대 C-MPBNs, P < 0.043. *사멸: AINs 대 C-MPBNs, P < 0.034; MPBNs 대 C-MPBNs, P < 0.043. (G) 호중구감소성 생쥐에서, Am80이 G-CSF에 의한 살균 활성보다 더욱 큰 살균 활성을 전시하는 충분한 효과적인 호중구를 유도한다는 것을 증명하는 생체내 자료. 20마리의 C57BL6/J 생쥐는 실험을 위해 4가지 군으로 무작위로 나눠졌다. 200 mg/kg의 시클로포스파미드 (CPA)의 복강내 주사의 단일 투약은 0 일자에 수행되었다. Am80 또는 G-CSF 또는 운반제는 연속 3 일 동안 4 시간의 CPA 주사 후 투여되었다. 생쥐 호중구감소증은 CPA 주사 후 48-60 시간 시점에 유도되었다. 3 x 107 황색포도상구균 (S. aureus)의 16 시간 복강내 주사 후, 실험은 3 일자에 수행되었다. 정제된 호중구는 복강 (패널 G-i)과 PB (패널 G-ii)에서 생존가능한 세포외 세균의 숫자를 결정함으로써 그들의 살균 활성에 대해 분석되었다. 생존가능 세균의 숫자는 3 ml의 PBS-세척된 복막액으로부터 뿐만 아니라 추정된 1.5 ml의 전체 혈장으로 계수되었다. 복강에서 생존가능 세균의 P 값: Am80 대 G-CSF, P < 2.4 x 10-8; 대조 대 G-CSF, P < 4.7 x 10-9; 운반제 대 G-CSF, P < 8.3 x 10-3; Am80 대 운반제, P < 3.1 x 10-9; Am80 대 대조, P < 0.038. *패널 G-iii의 전체 생존가능한 세포외 세균: Am80 대 G-CSF, P < 1.9 x 10-6; 대조 대 G-CSF, P < 9.4 x 10-9; 운반제 대 G-CSF, P < 6.5 x 10-4; Am80 대 운반제, P < 6.8 x 10-7; 대조 대 Am80, P < 3.8 x 10-5. 생존가능 세균에서 배수적 변화는 패널 G-iv에서 도시되었다. 대조군에서 생존가능 세균은 1 배의 기준으로서 이용되었다.
발명의 상세한 설명
본원에서 인용된 모든 참고문헌은 마치 완전히 진술된 것처럼 전체적으로 참조로서 편입된다. 달리 정의되지 않으면, 본원에서 이용된 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3 rd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001); March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 5 th ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001); 그리고 Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, NY 2001)은 본원에서 설명된 발명 조성물의 제약학적 전달에 적합한 조성물과 제제를 설명하고, 그리고 당업자에게 본 출원에서 이용된 많은 용어에 일반적인 가이드를 제공한다.
당업자는 본원에서 설명된 것들에 유사한 또는 동등한 많은 방법과 물질을 인식할 것이고, 이들은 본 발명의 실시에 이용될 수 있다. 실제로, 본 발명은 설명된 방법과 물질에 결코 국한되지 않는다. 본 발명을 위해, 하기 용어가 아래에 정의된다.
"유익한 결과"는 질환 상태의 심각도를 줄이거나 또는 완화하고, 질환 상태가 악화되는 것을 예방하고, 질환 상태를 치료하고, 질환 상태가 발생하는 것을 예방하고, 질환 상태가 발생하는 환자의 기회를 낮추고, 그리고 환자의 수명 또는 기대 수명을 연장하는 것을 포함할 수 있지만, 이들에 결코 국한되지 않는다.
"포유동물"은 본원에서 이용된 바와 같이, 제한 없이 인간과 비인간 영장류, 예를 들면, 침팬지와 기타 유인원과 원숭이 종; 경작용 동물, 예를 들면, 소, 양, 돼지, 염소와 말; 사육 포유동물, 예를 들면, 개와 고양이; 설치류, 예를 들면, 생쥐, 쥐와 기니 피그를 비롯한 실험 동물, 기타 등등을 포함하는 포유류 (Mammalia)의 임의의 구성원을 지칭한다. 상기 용어는 특정 연령 또는 성별을 표시하지 않는다. 따라서, 수컷 또는 암컷인지에 상관없이, 성체와 신생의 개체뿐만 아니라 태아는 상기 용어의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
"호중구감소증"은 본원에서 이용된 바와 같이, 혈액 내에 호중구의 비정상적으로 낮은 수준을 지칭한다. 호중구감소증은 백혈구의 감소된 생산에 기인 (예로서, 제한 없이 골수에 영향을 주는 치료제, 골수에 영향을 주는 유전성/선천성 장애, 재생불량성 빈혈, 암, 방사선 요법, 비타민 B12, 엽산염 또는 구리 결핍 및/또는 살충제에 노출에 기인)할 수 있다. 호중구감소증은 또한, 백혈구의 파괴에 기인 (예로서, 제한 없이 급성 세균 감염, 일정한 자가면역질환, 화학요법 치료 및/또는 치료제에 기인)할 수 있다. 호중구감소증은 또한, 백혈구의 격리 및/또는 이주에 기인 (예로서, 제한 없이 혈액투석, 말라리아 및/또는 세균 감염에 기인)할 수 있다. 일정한 약제, 예를 들면, 플레카이니드, 페니토인, 인도메타신, 프로필티오우라실, 카비마졸, 클로르프로마진, 트리메토프림/술파메톡사졸 (코트리목사졸), 클로자핀, 티클로디핀 역시 호중구감소증을 유발할 수 있다. 본 발명의 방법과 조성물은 상기 원인 중에서 한 가지로부터 기인하는 호중구감소증을 치료하는, 저해하는, 이의 심각도를 감소시키는 및/또는 이의 예방을 증진하는데 이용될 수 있다. 본 발명의 방법과 조성물은 또한, 호중구감소증을 치료하고, 저해하고, 이의 증상을 감소시키고 및/또는 이의 예방을 증진함으로써, 호중구감소증의 상기 원인 중에서 한 가지로부터 기인하는 질환-상태를 치료하는, 저해하는, 이들의 심각도를 감소시키는 및/또는 이들의 예방을 증진하는데 이용될 수 있다.
"치료"와 "치료하는"은 본원에서 이용된 바와 같이, 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 모두를 지칭하는데, 여기서 목적은 치료가 궁극적으로 실패하더라도, 표적화된 병리학적 장애를 예방하거나 또는 둔화시키는 (줄이는), 병리학적 장애를 예방하는, 유익한 결과를 추구하거나 또는 획득하는, 또는 병리학적 장애가 발생하는 개체의 기회를 낮추는 것이다. 치료가 필요한 개체에는 장애를 이미 앓고 있는 개체뿐만 아니라 장애에 걸리기 쉬운 개체 또는 장애가 예방되어야 하는 개체가 포함될 수 있다.
"치료 효과량"은 본원에서 이용된 바와 같이, 호중구감소증을 앓는 포유류 개체에서 유익한 결과를 달성할 수 있는 양을 지칭한다. 치료 효과량은 개체 기초에서 결정될 수 있고, 그리고 최소한 부분적으로, 포유동물의 생리적 특성, 이용된 전달 시스템 또는 치료적 기술의 유형 및 질병의 진행에 상대적인 투여 시간의 고려 사항에 기초될 것이다.
인간 조혈 줄기 세포 (HSC)의 과립구형성을 증진하기 위한 재조합 과립구 집락 자극 인자 (G-CSF)의 치료적 용도에서 진전에도 불구하고, 호중구감소증은 여전히, 암 화학요법의 가장 심각한 합병증중의 하나이다. 원시 CD34+ 조혈 세포의 과립구 분화를 유도하는 탈체 모델을 이용하여, 신규한 레티노이드 작용제인 Am80 (타미바로텐)은 호중구 분화와 면역 발달을 조정하는데 있어서 G-CSF보다 더욱 강력한 것으로 발견되었다. 과립 생산, 대장균 (E. coli) 감염, 그리고 세균 사멸의 기능적 분석과 원지 영상화는 인간 말초혈 호중구 (PBN)와 유사하게, Am80-유도된 호중구 (AIN)가 G-CSF-유도된 호중구 (GIN)보다 더욱 큰 살균 활성을 소유한다는 것을 증명하였다. GIN에 대조적으로, 하지만 PBN과 유사하게, AIN에 의한 증강된 세균 사멸은 CD66 항원과 인테그린 β2 아단위 CD18의 더욱 큰 공동-발현과 연관되었다. 일관되게, 항-CD18 항체는 AIN의 Am80-유도된 살균 활성을 중화시켰다. 따라서, AIN은 아마도, 과립구형성 동안 호중구 면역성의 발달을 증강하기 위해 CD66과 CD18의 기능적 상호작용을 조정하는 것을 통해, G-CSF와 비교하여 호중구 분화와 살균 활성을 증진하는 더욱 효과적인 수단을 제공하는 것으로 보인다. 본원에서 이들 조사 결과는 Am80을 비용-효과적인 치료 옵션으로서 이용함으로써, 호중구감소증에 대한 신규한 치료법을 고안하기 위한 분자 이론적 근거를 제공한다.
따라서, 본 발명은 치료가 필요한 포유류 개체에서 호중구감소증을 치료하기 위한 방법을 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 호중구감소증을 치료하기 위해 조성물의 치료 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
본 발명은 치료가 필요한 포유류 개체에서 호중구감소증의 심각도를 감소시키기 위한 방법을 더욱 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 호중구감소증의 심각도를 감소시키기 위해 조성물의 치료 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
본 발명은 또한, 치료가 필요한 포유류 개체에서 호중구감소증을 저해하기 위한 방법을 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 호중구감소증을 저해하기 위해 조성물의 치료 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
부가적으로, 본 발명은 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증의 예방을 증진하기 위한 방법을 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 호중구감소증의 예방을 증진하기 위해 조성물의 치료 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
본 발명은 치료가 필요한 개체에서 암-화학요법 유도된 호중구감소증을 치료하는, 저해하는 및/또는 이의 심각도를 감소시키는 방법을 더욱 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 암-화학요법 유도된 호중구감소증을 치료하고, 저해하고 및/또는 이의 심각도를 감소시키기 위해 조성물의 치료 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법은 화학요법제를 투여하는 것을 더욱 포함한다. 한 구체예에서, 화학요법제 및 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물은 동시에 투여된다. 다른 구체예에서, 화학요법제 및 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물은 순차적으로 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
화학요법제의 실례에는 악티노마이신, 알리트레티노인, 올-트랜스 레티노산, 아자시티딘, 아자티오프린, 베바시주맙, 벡사토텐, 블레오마이신, 보르테조밉, 카르보플라틴, 카페시타빈, 세툭시맙, 시스플라틴, 클로람부실, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다우노루비신, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 에피루비신, 에포틸론, 에를로티닙, 에토포시드, 플루오르우라실, 제피티닙, 젬시타빈, 히드록시우레아, 이다루비신, 이마티닙, 이필리무맙, 이리노테칸, 메클로레타민, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 메토트렉사트, 미톡산트론, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파니투맙, 페멕트렉시드, 리툭시맙, 타플루포시드, 테니포시드, 티오구아닌, 토포테칸, 트레티노인, 발루비신, 베무라페닙, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 보리노스탯, 로미뎁신, 5-플루오르우라실 (5-FU), 6-메르캅토퓨린 (6-MP), 클라드리빈, 클로파라빈, 플록수리딘, 플루다라빈, 펜토스타틴, 미토마이신, 익사베필론, 에스트라무스틴, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 덱사메타손 또는 이들의 조합이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 발명은 또한, 치료가 필요한 개체에서 급성 세균 감염을 치료하는, 저해하는, 이의 심각도를 감소시키는 및/또는 이의 예방을 증진하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 항균 치료제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 급성 세균 감염을 치료하고, 저해하고, 이의 심각도를 감소시키고 및/또는 이의 예방을 증진하기 위해 치료 효과량의 각 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물 및 항균 치료제를 포함하는 조성물은 동시에 투여된다. 다른 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물 및 항균 치료제를 포함하는 조성물은 순차적으로 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
본 발명은 치료가 필요한 포유류 개체에서 선천성 호중구감소증 (코스트만 증후군, 주기 호중구감소증 또는 체디아크 히가시가 포함되지만 이들에 국한되지 않음)을 치료하는, 저해하는, 이의 심각도를 감소시키는 및/또는 이의 예방을 증진하는 방법을 더욱 제시한다. 상기 방법은 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물을 제공하고, 그리고 개체에서 선천성 호중구감소증을 치료하고, 저해하고, 이의 심각도를 감소시키고 및/또는 이의 예방을 증진하기 위해 조성물의 치료 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 조성물이 필요한 포유류 개체는 제한 없이, 골수에 영향을 주는 약제 (예를 들면, 암 약물, 정신병약, 항경련 약물), 골수에 영향을 주는 유전성 및/또는 선천성 장애, 방사선 요법을 받는 환자, 비타민 B12 결핍, 폴산 결핍 또는 이들의 조합으로부터 기인하는 감소된 백혈구 생산을 갖는 환자이다.
추가의 구체예에서, 본원에서 설명된 조성물이 필요한 포유류 개체는 제한 없이, 급성 세균 감염, 자가면역질환 (예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스), 술폰아미드 약제의 이용, 또는 이들의 조합에 기인한 손상된 백혈구, 파괴된 백혈구 및/또는 감소된 양의 백혈구를 갖는 개체이다.
추가의 구체예에서, 본원에서 설명된 조성물이 필요한 포유류 개체는 제한 없이, 혈액투석, 말라리아, 세균 감염 또는 이들의 조합에 기인한 백혈구 (예를 들면, 호중구)의 격리 및/또는 이주를 겪는 개체이다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 본 발명의 조성물은 화학요법제 및/또는 방사선 요법이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 다른 치료제와 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 화학요법제 및/또는 방사선 요법은 종종, 백혈구의 숫자를 감소시키고, 호중구감소증을 유발한다. 본 발명의 조성물을 화학요법제 및/또는 방사선 요법과 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것은 호중구감소증의 심각도를 저해하고 및/또는 감소시킬 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 본 발명의 조성물은 화학요법제 및/또는 방사선 요법의 투여 이전에, 동안 또는 이후에 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
유사하게, 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물은 항경련제 및/또는 정신병약의 이용으로부터 기인하는 호중구감소증을 저해하고 및/또는 이의 심각도를 감소시키기 위해 상기 약물과 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 본 발명의 조성물은 항경련제 및/또는 정신병약의 투여 이전에, 동안 또는 이후에 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
부가적으로, 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물은 세균과 곰팡이 감염 및/또는 자가면역질환에 기인하고 및/또는 세균 감염, 곰팡이 감염 및/또는 자가면역질환을 치료하는데 이용되는 치료제에 기인하여 발생할 수 있는 호중구감소증을 저해하고 및/또는 이의 심각도를 감소시키기 위해, 급성 세균 감염, 곰팡이 감염 및/또는 자가면역질환을 치료하는데 이용되는 치료제와 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 본 발명의 조성물은 급성 세균 감염, 곰팡이 감염 및/또는 자가면역질환을 치료하는데 이용되는 치료제의 투여 이전에, 동안 또는 이후에 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 정맥내, 근육내, 복강내, 경구 또는 흡입을 통해 투여된다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐이다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제의 효과량은 약 0.01 내지 0.05μg/kg/일, 0.05-0.1μg/kg/일, 0.1 내지 0.5μg/kg/일, 0.5 내지 5 μg/kg/일, 5 내지 10 μg/kg/일, 10 내지 20 μg/kg/일, 20 내지 50 μg/kg/일, 50 내지 100 μg/kg/일, 100 내지 150 μg/kg/일, 150 내지 200 μg/kg/일, 200 내지 250 μg/kg/일, 250 내지 300 μg/kg/일, 300 내지 350 μg/kg/일, 350 내지 400 μg/kg/일, 400 내지 500 μg/kg/일, 500 내지 600 μg/kg/일, 600 내지 700μg/kg/일, 700 내지 800μg/kg/일, 800 내지 900μg/kg/일, 900 내지 1000 μg/kg/일, 0.01 내지 0.05 mg/kg/일, 0.05-0.1 mg/kg/일, 0.1 내지 0.5 mg/kg/일, 0.5 내지 1 mg/kg/일, 1 내지 5 mg/kg/일, 5 내지 10 mg/kg/일, 10 내지 15 mg/kg/일, 15 내지 20 mg/kg/일, 20 내지 50 mg/kg/일, 50 내지 100 mg/kg/일, 100 내지 200 mg/kg/일, 200 내지 300 mg/kg/일, 300 내지 400 mg/kg/일, 400 내지 500 mg/kg/일, 500 내지 600 mg/kg/일, 600 내지 700 mg/kg/일, 700 내지 800 mg/kg/일, 800 내지 900 mg/kg/일, 900 내지 1000 mg/kg/일 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), 이의 유사체 및/또는 이의 염이다. 레티노이드 작용제의 효과량의 전형적인 용량은 공지된 치료 화합물이 이용되는 경우에 제조업체에 의해 권장되고, 그리고 또한, 시험관내 반응 또는 동물 모델에서 반응에 의해 당업자에게 지시된 바와 같은 범위 내에 있을 수 있다. 이런 용량은 전형적으로, 유관한 생물학적 활성을 상실하지 않으면서, 농도 또는 양에서 약 1 자릿수까지 감소될 수 있다. 실제 용량은 주치의의 판단, 환자의 상태, 그리고 예로서, 유관한 배양된 세포 또는 조직배양된 조직 시료, 예를 들면, 생검된 악성 종양의 시험관내 반응성, 또는 적절한 동물 모델에서 관찰된 반응에 기초된 치료 방법의 유용성에 좌우될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 작용제를 포함하는 본 발명의 조성물은 효과량의 레티노이드 작용제를 개체에 투여하기 위해, 하루 1회 (SID/QD), 하루 2회 (BID), 하루 3회 (TID), 하루 4회 (GID), 또는 그 이상 투여될 수 있는데, 여기서 효과량은 본원에서 설명된 분량 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다.
본 발명은 또한, 레티노이드 작용제를 확인하기 위한 방법을 제시한다. 상기 방법은 CD34+ 세포를 관심되는 분자와 접촉시키고, CD34+ 세포와 관심되는 분자를 면역 반응을 자극하는 항원과 더욱 접촉시키고, 그리고 CD34+ 세포, 관심되는 분자와 항원 사이에 접촉이 락토페린, LL-37 또는 이들의 조합의 증가된 분비를 유발하는 지를 사정하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 락토페린, LL-37 또는 이들의 조합의 증가된 분비는 관심되는 분자가 레티노이드 작용제임을 지시한다.
레티노이드 작용제인 화합물을 확인하는데 이용될 수 있는 검정에는 마이크로어레이 검정, 정량적 PCR, 노던 블롯 검정, 서던 블롯 검정, 웨스턴 블롯 검정, 면역조직화학 검정, 결합 검정, 겔 지연 검정 또는 효모 이중-하이브리드 시스템을 이용하는 검정이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 당업자는 특정 약물/관심되는 분자가 레티노이드 작용제인 지를 결정하기 위해 당분야에 공지된 무수한 기술을 쉽게 이용할 수 있다.
다양한 구체예에서, 개체는 인간, 비-인간 영장류, 원숭이, 유인원, 개, 고양이, 소, 말, 토끼, 생쥐와 쥐로 구성된 군에서 선택된다.
제약학적 조성물
다양한 구체예에서, 본 발명은 레티노이드 작용제, 예를 들면, 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합의 치료 효과량과 함께 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 조성물을 제시한다. "제약학적으로 허용되는 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비-독성이고, 그리고 바람직한 제약학적 조성물을 제조하는데 유용한 부형제를 의미하고, 그리고 수의학적 용도뿐만 아니라 인간 제약학적 용도를 위해 허용되는 부형제를 포함한다. 이런 부형제는 고체, 액체, 반고체, 또는 에어로졸 조성물의 경우에, 가스일 수 있다.
다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 제약학적 조성물은 임의의 투여 루트를 통한 전달을 위해 조제될 수 있다. "투여 루트"는 에어로졸, 코, 경구, 경점막, 경피, 비경구 또는 경장이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 당분야에 공지된 임의의 투여 경로를 지칭할 수 있다. "비경구"는 안와내, 주입, 동맥내, 관절내, 심장내, 피내, 근육내, 복강내, 폐내, 척주내, 흉골내, 척수강내, 자궁내, 정맥내, 거미막하, 피막하, 피하, 경점막, 또는 경기관을 비롯하여, 주사와 일반적으로 연관된 투여 루트를 지칭한다. 비경구 루트를 거쳐, 조성물은 주입 또는 주사를 위한 용액 또는 현탁액의 형태, 또는 냉동건조된 분말일 수 있다. 비경구 루트를 거쳐, 조성물은 주입 또는 주사를 위한 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 경장 루트를 거쳐, 제약학적 조성물은 정제, 겔 캡슐, 당-코팅된 정제, 시럽, 현탁액, 용액, 분말, 과립, 유제, 마이크로스피어 또는 나노스피어 또는 제어된 방출을 가능하게 하는 지질 소포 또는 중합체 소포의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물은 또한, 임의의 제약학적으로 허용되는 담체를 내포할 수 있다. "제약학적으로 허용되는 담체"는 본원에서 이용된 바와 같이, 관심되는 화합물을 신체의 한 조직, 장기, 또는 부분으로부터 신체의 다른 조직, 장기, 또는 부분으로 운반하거나 또는 수송하는데 관련된 제약학적으로 허용되는 물질, 조성물, 또는 운반제를 지칭한다. 예로서, 담체는 액체 또는 고체 충전물, 희석제, 부형제, 용매, 또는 피막화 물질, 또는 이들의 조합이다. 담체의 각 성분은 제제의 다른 성분과 양립해야한다는 점에서, "제약학적으로 허용가능"해야 한다. 또한, 접촉하게 되는 임의의 조직 또는 장기와의 접촉 동안 이용하기 적합해야 하는데, 이것은 치료적 이익을 과도하게 능가하는 독성, 자극, 알레르기성 반응, 면역원성, 또는 임의의 다른 합병증의 위험을 유발하지 않아야 한다는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물은 또한, 경구 투여를 위해 피막화되거나, 정제화되거나 또는 유제 또는 시럽으로 제조될 수 있다. 제약학적으로 허용되는 고체 또는 액체 담체가 조성물을 증강하거나 또는 안정시키기 위해, 또는 조성물의 제조를 용이하게 하기 위해 첨가될 수 있다. 액체 담체에는 시럽, 땅콩 기름, 올리브 기름, 글리세린, 식염수, 알코올과 물이 포함된다. 고체 담체에는 전분, 락토오스, 황산칼슘, 이수화물, 백토, 스테아르산마그네슘 또는 스테아르산, 활석, 팩틴, 아카시아, 한천 또는 젤라틴이 포함된다. 담체는 또한, 단독으로 또는 왁스와 함께, 지속된 방출 물질, 예를 들면, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 포함할 수 있다.
제약학적 제조물은 정제 형태의 경우에 제분, 혼합, 과립화, 그리고 필요할 때, 압축; 또는 경성 젤라틴 캡슐 형태의 경우에 제분, 혼합과 충전을 수반하는 약학의 전통적인 기술에 따라 만들어진다. 액체 담체가 이용될 때, 제조물은 시럽, 엘릭시르, 유제 또는 수성 또는 비-수성 현탁액의 형태일 것이다. 이런 액체 제제는 직접적으로 p.o. 투여되거나 또는 연성 젤라틴 캡슐 내로 채워진다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물은 치료 효과량으로 전달될 수 있다. 정확한 치료 효과량은 제공된 개체에서 치료 효능의 면에서 가장 효과적인 결과를 산출하는 조성물의 양이다. 이러한 양은 치료 화합물의 특징 (활성, 약물동력학, 약력학, 그리고 생체이용률 포함), 개체의 생리학적 상태 (연령, 성별, 질병 유형과 시기, 전반적인 신체 조건, 제공된 용량에 반응성, 그리고 약제 유형 포함), 제제 내에 제약학적으로 허용되는 담체 또는 담체들의 성격, 그리고 투여 루트가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 다양한 인자에 따라 변할 것이다. 임상과 약리학 분야에서 숙련자는 일과적인 실험을 통해, 예를 들면, 화합물의 투여에 대한 개체의 반응을 모니터링하고 용량을 이에 따라 조정함으로써 치료 효과량을 결정할 수 있을 것이다. 추가 보도를 위해, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro ed. 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA) (2000)을 참조한다.
발명의 키트
본 발명은 또한, 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증의 치료, 호중구감소증의 저해, 호중구감소증의 감소 또는 호중구감소증 예방의 증진을 위한 키트를 제시한다. 키트는 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물, 그리고 치료가 필요한 개체에서 호중구감소증, 급성 세균 감염, 암-화학요법 유도된 호중구감소증 및/또는 다양한 형태의 선천성 호중구감소증을 치료하고, 저해하고 및/또는 이들의 심각도를 감소시키기 위한 상기 조성물의 사용설명서를 포함한다. 일부 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80)이다.
키트는 최소한 하나의 발명 조성물을 포함하는, 물질 또는 성분의 기계조립이다. 따라서, 일부 구체예에서, 키트는 레티노이드 작용제, 예를 들면, 전술한 바와 같은 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상을 포함하는 조성물을 내포한다.
발명 키트에서 형성된 성분의 정확한 성격은 의도된 목적에 의존한다. 한 구체예에서, 키트는 특히, 인간 개체를 위해 형성된다. 추가의 구체예에서, 키트는 개체, 예를 들면, 하지만 제한 없이, 경작용 동물, 사육 동물, 그리고 실험 동물을 치료하는 수의학적 적용을 위해 형성된다.
사용설명서는 키트 내에 포함될 수 있다. "사용설명서"는 전형적으로, 원하는 결과를 달성하기 위해, 예를 들면, 개체에서 호중구감소증을 치료하고, 이의 심각도를 감소시키고, 저해하고 또는 예방하기 위해 키트의 성분을 이용하는데 활용될 수 있는 기술을 설명하는 확실한 표현을 포함한다. 임의선택적으로, 키트는 또한, 다른 유용한 성분, 예를 들면, 계량 도구, 희석제, 완충액, 제약학적으로 허용되는 담체, 주사기 또는 당업자에 의해 쉽게 인정되는 다른 유용한 용품을 내포한다.
키트 내에 조립된 물질 또는 성분은 그들의 실시가능성과 유용성을 보존하는 임의의 편의하고 적합한 방식으로 의사에 제공되고 보관될 수 있다. 예로서, 이들 성분은 용해된, 탈수된, 또는 냉동건조된 형태일 수 있다; 이들은 실온, 냉장 온도 또는 동결 온도에서 제공될 수 있다. 이들 성분은 전형적으로, 적합한 포장 물질(들)에 내포된다. 본원에서 이용된 바와 같이, 관용구 "포장 물질"은 키트의 내용물, 예를 들면, 발명 조성물 등을 수용하는데 이용되는 하나 또는 그 이상의 물리적 구조를 지칭한다. 포장 물질은 가급적 무균, 오염체-없는 환경을 제공하기 위해 널리 공지된 방법에 의해 구축된다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "포장물"은 개별 키트 성분을 유지할 수 있는, 적절한 고체 매트릭스 또는 물질, 예를 들면, 유리, 플라스틱, 종이, 포일 등을 지칭한다. 따라서, 예로서, 포장물은 레티노이드 작용제, 예를 들면, 타미바로텐 (AM80), CH55, ITYA (IT-YA-01115) 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상을 내포하는 발명 조성물의 적절한 양을 내포하는데 이용된 병일 수 있다. 포장 물질은 일반적으로, 키트 및/또는 이의 성분의 내용물 및/또는 목적을 지시하는 외부 라벨을 갖는다.
실시예
실시예 1
세포와 세포 배양
정상적인 인간 제대 혈액 CD34+ 세포는 AllCells (Emeryville, CA)로부터 구입되었다. CD34+ 세포는 제조업체의 프로토콜에 따라, 6 일 동안 StemSpan 혈청-없는 배지 (StemCell Technologies, Vancouver, Canada)를 이용함으로써 약 50x 확대되었다. 과립구형성을 유도하기 위해, CD34+ 세포는 25 ng/ml의 G-CSF(17,29)로 보충된 골수성 배지와 함께 6-12 일 동안 배양되었다. 림프구양 세포와 적혈구는 히드로코르티손의 첨가 및 에리트로포이에틴의 배제에 의해, 과립구형성 동안 차단되었다(17,29). 올-트랜스 레티노산 (RA)은 Sigma (St. Louis, MO)로부터 구입되었고, 반면 레티노이드 작용제 Am80, CH55, 그리고 IT-YA-01115 (ITYA)는 Research Foundation ITSUU Laboratory (Tokyo, Japan)로부터 구입되었다. 각 레티노이드 화합물은 에탄올에 용해되었다. 6 일 동안 과립구 유도 (도면 1)를 위해 25 ng/ml의 G-CSF(17,29) 또는 2.5 nM의 Am80을 이용하는 실험적으로 결정된 조건이 연구에서 적용되었다.
인간 PBN
말초 정맥 혈액은 Children's Hospital Los Angeles/University of Southern California Keck School of Medicine (CHLA/USC) Committee on Clinical Investigations에 의해 승인된 프로토콜과 합치하게 건강한 자원자로부터 채취되었다. 각 20 ml의 혈액이 진공채혈기 응고 튜브 (BD Biosciences, San Jose, CA) 내로 채취되고 실온에서 1 부피의 HBSS로 희석되었다. 희석된 혈액은 10 mL의 피콜-파크 프리미엄 (GE Healthcare, Piscataway, NJ) 위에 적하되고 400xg에서 40 분 동안 원심분리되었다. 수집된 PBN-적혈구 층은 이후, 침강을 위한 15 mL의 3% 덱스트란 T500 (Sigma)와 함께 실온에서 2시간 동안 혼합되었다. 적혈구는 18 초 동안 무균수를 이용한 저장성 용해에 의해 제거되고, 그리고 PBN-풍부한 층은 이후, 원심분리로 수집되었다. 수집된 PBN의 순도는 Wright-Giemsa 염료를 이용한 형태학적 분석에 의해 측량될 때, >95%이었다. 새로 정제된 PBN은 PBN 단리의 완결 직후에 검정에 이용되었다.
세포 증식과 세포 사멸
세포 증식은 설명된 바와 같이, 표준 혈구계를 이용한 세포 계산에 의해 결정되었다(17,29). 간단히 말하면, 삼중으로 도말된 동등한 숫자의 세포는72 시간의 도말 후, 최대 13 일 동안 계수되었다. 트리판 블루 배제를 이용함으로써, 배양액 내에서 세포 증식과 이의 연관된 세포 사멸이 동시에 측량되었다.
과립구 분화의 형태적 분석
세포 현탁액은 설명된 바와 같이, 마이크로 슬라이드 위에 세포원심분리되고, 그 이후에 메탄올 고정되고 Wright-Giemsa (Sigma)로 염색되었다(17,29). 분화의 형태적 지표는 Zeiss Axioplan 현미경 하에 평가되고, 그리고 이미지는 설명된 바와 같이 Adobe Photoshop으로 색채 균형되었다(17).
전파 전자 현미경검사
호중구와 세균 감염의 초미세구조 연구는 Electron Microscopy Laboratory, Department of Pathology and Laboratory Medicine, CHLA/USC의 구성원에 의해 수행되었다. 절차는 하기에 상술된다.
웨스턴 블롯팅
웨스턴 블롯팅 (WB)은 설명된 바와 같이 수행되었다(15). 락토페린에 대한 항체 (Abcam, Cambridge, UK), MMP-9 (Merck Chemicals, Darmstadt, Germany), 그리고 LL-37 (Biolegend, San Diego, CA)이 분석에 이용되었다.
탈과립 분석
세포는 혈청-없는 DMEM 배지에서 37℃에서 30 분 동안 대장균 (E. coli) DH5α (5의 MOI; 세포 대 세균 비율 1:5)과 함께 또는 이것 없이 배양되었다. 세포 펠릿과 상층액 둘 모두 7 분 동안 3,000-rpm 원심분리에 의해 수집되었다. 세포 펠릿은 100 μg/ml의 젠타마이신으로 현탁되고 37℃에서 1 시간 동안 배양되고, 그 이후에 세포의 수집 및 세포 단백질의 추출이 수행되었다. 상층액은 0.22-μm 필터 (Pall corporation, Ann Arbor, MI)로 여과되고, 그리고 상층액 내에 단백질은 이후, 3,000 달톤보다 큰 질량을 갖는 단백질을 수집하도록 설계된 Amicon Ultra-4 원심 필터 단위 (Millipore, Billerica, MA)를 이용함으로써 농축되었다. 단백질의 양은 Bio-Rad DC 단백질 검정 (Hercules, CA)을 이용함으로써 측량되었다(29). 대장균 (E. coli) 자극이 있거나 없는 과립 단백질 수준에서 변화가 WB에 의해 병렬적으로 분석되었다.
식균작용과 세균 사멸 검정
각각 5 x 105 내지 2 x 106의 새로 정제된 PBN뿐만 아니라 탈체-유도된 GIN과 AIN은 1.5-ml 튜브에서 500 μl의 배양 배지 (10%의 FBS를 갖는 DMEM)로 현탁되었다. 세포는 37℃에서 15, 30, 및/또는 60 분 동안 5 또는 10의 MOI에서 로그 기 대장균 (Escherichia coli) (E. coli) DH5α (협력자에 의해 제공됨) 또는 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus) (S. aureus; ATCC)과 함께 배양되었고, 반면 세포의 부재에서 세균은 성장을 결정하는데 이용되었다. 세포가 있거나 없는 시료는 각 시점에서 1000-rpm에서 원심분리되었다. 세포의 존재에서 세포외 세균은 상층액으로부터 수집되고, 그리고 상이한 희석액 (각각 20 μL)을 혈액 한천 상에 도말함으로써 계수되었다. 세균으로 감염된 시료로부터 수집된 세포 펠릿은 외부 세균을 죽이기 위해, 37℃에서 1 시간 동안 100 μg/ml의 젠타마이신 (Sigma)과 함께 더욱 배양되었다. 세포는 이후, 2회 세척되고 100 μL의 0.5% Triton X-100으로 용해되었다. 세포 용해물로부터 회수된 생존가능한 세포내 세균의 상이한-희석 분취량 (각각 20 μL)은 혈액 한천 상에 도말되었다. 각 시점에서 세포외 세균과 생존가능한 세포내 세균의 숫자는 설명된 바와 같이 CFU 계수에 의해 결정되고(5,30), 반면 식균되고 사멸된 세균의 숫자는 호중구-없는 조건에서 유관한 세균 대조의 숫자에 대한 세포외 세균과 생존가능한 세포내 세균의 계수에 기초되었다(5,30).
CD15+ 호중구의 자성 분류
0.5% BSA와 2 mM EDTA를 내포하는 PBS에서 현탁된 세포는 4℃에서 30 분의 배양 동안, 자성 마이크로비드 (Miltenyi Biotec, Bergish Gladbach, Germany)에 접합된 항-CD15 항체와 혼합되었다. CD15+ 아개체군은 이후, 제조업체의 프로토콜에 따라 자성 분류기 (Miltenyi Biotec, Bergish Gladbach, Germany)를 이용함으로써 정제되었다.
통계학적 분석
평균, 표준 편차, 그리고 범위를 비롯한 기술 통계학은 필요할 때 계산되고 스튜던트 비대칭 양측 t 검증으로 분석되었다. 0.05 또는 그 이하의 P 값은 통계학적으로 유의한 것으로 간주되었다.
원지 살균 사멸
세포는 15 분 및/또는 60 분 동안 대장균 (E. coli) 또는 황색포도상구균 (S. aureus)과 함께 배양되고, 그 이후에 5 분 동안 1,000-rpm 원심분리에 의해 수집되었다. 세포 펠릿은 100 μg/mL의 젠타마이신으로 현탁되고 37℃에서 1 시간 동안 배양되었다. 3회 세척 후, 세포는 4℃에서 20 분 동안 Cytofix/Cytoperm 용액 (BD Biosciences)으로 투과화되었다. 이들 세포는 다시 한 번 세척되고, 그리고 제조업체의 프로토콜에 따라 LIVE/DEAD BacLight 생활력 키트 (Life Technologies, Grand Island, NY)를 이용하여, 세포내 살아있는 세균과 죽은 세균을 표지화하기 위해 PBS에서 재현탁되었다. 세포는 마이크로-슬라이드 위에서 회전되고 공초점 현미경 하에 488-과 564-nm 라인의 크립톤/아르곤 레이저로 조사되었다. 무손상 막을 갖는 형광 염료 SYTO9-염색된 살아있는 세균은 녹색으로 나타나고, 반면 손상된 막을 갖는 죽은 세균은 형광 염료 프로피디움 요오드화물 (PI)로 적색으로 염색되었다.
세균 감염의 면역형광 검출
GIN, AIN, 그리고 PBN은 37℃에서 15 분과 60 분 동안 10의 MOI에서 대장균 (E. coli) 또는 황색포도상구균 (S. aureus)과 함께 배양되었다. 세포는 실온에서 20 분 동안 2% 파라포름알데히드로 고정되고, 그 이후에 5% 정상적인 염소 혈청을 내포하는 PBS로 30 분 동안 차단되었다. 감염 후 세포 표면 상에 유지된 세균의 OmpA 항원을 차단하기 위해, 세포는 먼저, 항-OmpA 항체와 함께 실온에서 1 시간 동안 배양되고, 그 이후에 외부 일차 항체 부위를 차단하기 위해 HRP-접합된 항-토끼 IgG 항체와 함께 실온에서 30 분 동안 배양되었다. 충분히 세척한 후, 세포는 투과화 용액 (BD Biosciences)으로 20 분 동안 투과화되고, 이후 세포내 세균을 표지화하기 위한 항-OmpA 항체와 함께 실온에서 1 시간 동안 배양되었다. FITC에 접합된 염소 항-토끼 IgG 항체와 함께 30 분 동안 세포의 배양 이후에, 세포는 이후, 마이크로 슬라이드 위에서 회전되고 Vectashield 안티-페이드 용액 (Vector laboratories, Burlingame, CA)으로 표본고정되었다. FITC-염색된 세균은 공초점 현미경으로 영상화되었다.
유세포 계측 분석
항-인간 CD66-PE (CD66a, CD66c, CD66d, 그리고 CD66e 아단위를 인식), CD11b-APC, CD18-FITC, 그리고 CD66b-PE 항체뿐만 아니라 이들의 상응하는 아이소타입은 BD Biosciences로부터 구입되었다. 항-인간 CD66a-PE와 이의 상응하는 아이소타입은 R&D systems (Minneapolis, MN)로부터 구입되었다. 자료는 획득되고 FlowJo 소프트웨어 (버전 7.6.5; Tree star, Ashland, OR)로 분석되었다.
실시예 2
Am80은 G-CSF보다 더욱 효과적으로 호중구 분화를 증진한다
Am80, CH55, 그리고 ITYA는 RA-유사 구조 내로 이종원자를 도입함으로써 합성된 일군의 레티노이드 작용제이다 (도면 5). 이들 작용제 모두 강력한 레티노이드 활성을 소유하기 때문에, 이들 화합물의 효율은 우리의 확립된 방법을 이용하여, CD34+ 세포로부터 과립구형성을 유도하는데 있어서 G-CSF와 RA와 비교되었다(17,29). 본 발명자들은 G-CSF가 CD34+ 세포의 과립구로의 형태적 분화를 유도하는데 있어서 RA보다 덜 효과적이고, 단핵구의 더욱 높은 유도를 동반한다는 것을 증명하였다 (도면 6a). 하지만, G-CSF는 RA와 비교하여, 더욱 큰 세포 증식 및 더욱 낮은 비율의 세포 사멸을 유도하였다 (도면 6b). 다른 레티노이드 작용제 중에서, Am80 (10 nM)과 CH55 (5 nM)은 >60% 단핵구를 생산하는 ITYA (5 nM)에 대조적으로, 13 일까지 >75% 과립구 분화를 증진하였다 (도면 6c). 비록 Am80과 CH55 둘 모두 RA (도면 6b)에서처럼 세포 증식을 저해 (도면 6d)하긴 하지만, Am80 처리와 연관된 세포 사멸 속도는 CH55 또는 RA로 관찰된 것보다 더욱 낮았다 (도면 6b, 6d). 종합하면, 이들 자료는 G-CSF가 과립구 분화의 유도인자로서, RA, CH55, 그리고 Am80보다 훨씬 덜 유효하고, 반면 ITYA는 단핵구 분화를 주로 유도한다는 것을 보여준다. Am80, RA, 그리고 CH55가 유사한 유용성으로 과립구 분화를 증진하긴 하지만, Am80은 더욱 낮은 비율의 세포 사멸을 유도한다.
12 일자에 G-CSF에 의해 유도된 CD34+ 세포의 과립구로의 분화의 더욱 낮은 수준이 단핵구 유도의 더욱 높은 수준과 연관되었기 때문에, G-CSF는 과립구 분화를 짧은 기간 내에 더욱 효과적으로 유도할 지도 모른다. 따라서, CD34+ 세포는 6, 9, 그리고 12 일 동안 G-CSF로 처리되었다. 이들 세포의 형태적 분화의 분석에 의해, 본 발명자들은 9 일 또는 12 일과 비교하여 6 일자에 단핵구 유도의 가장 낮은 속도에서 더욱 효과적인 과립구 분화를 발견하였다 (도면 1a). 이러한 최적 6-일 유도 조건을 이용하여, G-CSF와 Am80은 CD34+ 세포의 과립구 분화를 유도하는 그들의 능력에 대해 비교되었다. 10 nM의 Am80이 더욱 많은 세포 사멸을 유도했기 때문에 (도면 6c), 감소된 Am80 농도 (2.5 nM 또는 5 nM)가 이들 시험에서 대용되었다. 이들 결과는 2.5 nM의 Am80이 미미한 단핵구 유도와 함께 과립구 분화를 깊이 유도 (도면 1b)할 뿐만 아니라 5 nM의 Am80보다 더욱 적은 독성을 발생시킨다는 것을 보여주었다 (도면 1c). 따라서, 이들 결과는 G-CSF에 대한 6-일 최적 유도 기간이 Am80 (2.5 nM)에도 적합하다는 것을 지시하고, 이로 인하여 이런 약물 노출 시간과 약물 분량이 나머지 연구에 적용된다.
CD34+ 세포의 호중구 분화는 전골수구, 골수구, 후골수구, 그리고 띠 호중구 시기 내지 분엽 성숙 호중구 시기에서 분석되었다. CD34+ 세포는 6 일 동안 G-CSF 또는 Am80로 처리되었다. 과립구 형태적 분석은 호중구의 순차적 발달이 Am80에 의해 충분히 유도된다는 것을 보여주었다. 대조적으로, G-CSF는 띠와 분엽 호중구보다 골수모세포뿐만 아니라 전골수구와 골수구를 더욱 유도하였다 (도면 1d). 이에 더하여, G-CSF는 단핵구를 일관되게 유도하였다 (약 10%; 도면 1a, 1d). 이들 결과는 Am80이 세포 독성의 유사한 비율에서, 호중구 형태적 분화를 유도하는데 있어서 G-CSF보다 더욱 효과적이라는 것을 증명한다.
AIN은 과립을 생산하고 분비하는데 있어서 GIN보다 더욱 효과적이다
호중구 분화 동안, 과립 단백질의 비균질성 개체군은 순차적으로 생산되고 상이한 병원체에 대항하여 일선 방어를 위해 세포질에서 보관되었다(32,33). 본 발명자들은 Am80-증강된 호중구 성숙이 증가된 과립 생산과 연관되는 지를 조사하였다. G-CSF와 Am80에 의해 CD34+ 세포로부터 6 일 동안 유도된 호중구는 전파 전자 현미경검사에 의해 분석되었다. 초미세구조 이미지는 분엽 호중구 수준에서, GIN이 극소수 일차-와 이차-유사 과립과 함께, 덜 조밀한 무정형 물질을 종종 내포하는 가변 숫자의 소포를 소유한다는 것을 보여주었다. 대조적으로, AIN에서 발견된 소포는 조밀한 물질로 또는 무정형과 조밀한 물질 둘 모두로 빈번하게 채워졌다. GIN과 비교하여, AIN은 PBN에서 관찰되는 바와 같이, 증가된 숫자의 일차-와 이차-유사 과립을 내포하였다. 따라서, 이들 자료는 GIN과 AIN 사이에 소포 형성과 과립 생산에서 현저한 차이를 지시한다.
본 발명자들은 Am80-유도된 과립구 분화가 충분한 과립 생산과 실제로 연관되는 지를 실증하고, 그리고 세균 자극 시에 AIN의 탈과립 능력을 조사하였다. CD34+ 세포는 6 일 동안 G-CSF 또는 Am80로 처리되었다. 결과의 GIN과 AIN은 이후, 대장균 (E. coli)과 함께 또는 이것 없이 30 분 배양되고, 그 이후에 세포 용해물과 상층액 둘 모두로부터 단백질 추출되었다. 과립 생산과 분비의 WB 분석은 강력한 광범위한-스펙트럼 항균 활성을 갖는 이차성 과립인 락토페린(34,35)이 AIN에서 보관되고, 그리고 세균 자극 시에 충분한 양으로 배지 내로 분비된다는 것을 보여주었다. 대조적으로, 비록 락토페린의 수준이 GIN에서 세균 자극으로 증가되긴 하지만, GIN에 의한 락토페린 분비의 효율은 AIN으로 관찰된 것보다 훨씬 낮았다 (도면 2a). 유사하게, 높은 수준의 이차성 과립 LL-37이 AIN에서 관찰되었고, 그리고 세균 자극 시에, LL-37 과립이 배지 내로 효과적으로 방출되었다. GIN은 다른 한편, LL-37 생산과 탈과립 둘 모두의 결여를 보여주었다 (도면 2b). 따라서, 락토페린과 LL-37 둘 모두 AIN에 의해 효과적으로 생산되고 분비되지만 GIN에서는 그렇지 않다.
심지어 대장균 (E. coli)의 부재에서도, GIN은 MMP-9 (삼차 과립)를 배지 내로 분비하고, 그리고 이러한 분비는 세균 자극에 의해 저해되었다 (도면 2c). 다른 한편, 비록 대장균 (E. coli)이 AIN에서 MMP-9 발현을 증강하긴 하지만, 세균 자극은 MMP-9를 분비하도록 AIN을 유도하는데 실패하였다 (도면 2c). 이들 관찰 결과는 탈체-유도된 GIN과 AIN에서 MMP-9 유도 또는 탈과립 (또는 둘 모두)에서 가능한 결함을 지시한다.
AIN은 GIN보다 훨씬 높은 식균과 살균 활성을 소유한다
상기 연구는 Am80이 과립구 형태적 분화 및 과립 생산/분비 둘 모두를 증진하는데 있어서 G-CSF보다 더욱 효과적이라는 것을 보여준다 (도면 1, 2). 본 발명자들은 Am80에 의해 유도된 호중구 분화의 이러한 더욱 높은 정도가 세균 감염에 대항하여 더욱 큰 호중구 면역성으로 해석되는 지를 결정하였다. Am80이 G-CSF보다 더욱 많은 띠-형태와 분엽 호중구를 유도 (도면 1)하기 때문에, GIN과 AIN로부터 분류된 띠와 분엽 호중구가 유사한 살균 활성을 소유하는 지가 조사되었다. 호중구가 CD15+ 세포(36)이기 때문에, GIN과 AIN은 자성 마이크로비드에 접합된 항-CD15 항체를 이용하여 정제되었다. 정제 후, 분류되지 않은 GIN에서 띠/분엽 호중구의 비율은 분류된 AIN에서 조사 결과와 유사하게, 21%에서 분류된 GIN에서 63%로 증가하였다 (도면 3b). 게다가, 분류된 GIN 내에 잔류 단핵구의 분율은 단지 약 1%이었다 (도면 3a). 이들 분류되지 않은 GIN과 AIN 및 분류된 GIN과 AIN은 이후, >95% 분엽 호중구로 구성되는 새로 단리된/정제된 PBN과 함께, 로그 기 대장균 (E. coli)을 죽이는 그들의 능력에 대해 조사되었다 (도면 3b). 중요하게는, CFU 계수는 단지 소수의 생존가능 세균이 분류되지 않은 GIN과 비교하여, PBN과 분류되지 않은 AIN의 세포내 구획으로부터 회수된다는 것을 지시하였다 (도면 3c). 분류되지 않은 GIN에서처럼, 분류된 GIN 역시 세균을 죽이는 능력이 분류된 AIN보다 훨씬 적었다 (도면 3d). AIN에서 증강된 세균 청소는 대장균 (E. coli)의 외부 막을 특정적으로 인식하는 항-OmpA 항체를 이용하여, 대장균 (E. coli)의 원지 표지화에 의해 확증되었다. 이들 결과는 Am80에 의해 유도된 과립구형성으로부터 발생하는 호중구 분화의 수준이 세균 감염에 대항하는 효과적인 호중구 면역성에 필수적이라는 것을 지시한다. 이러한 관찰은 분엽 호중구 형태를 갖는 GIN이 더욱 낮은 수준의 과립-유사 분자를 여전히 전시하고 더욱 많은 숫자의 덜 조밀한, 무정형 소포를 내포한다는 자료에 의해 뒷받침된다.
세균 감염에 대항하는 선천성 면역은 호중구 분화 동안 발달한다. AIN과 GIN 사이에 이러한 기능을 비교하기 위해, CD34+ 세포는 6 일 동안 G-CSF 또는 Am80로 처리되고, 그 이후에 식균과 세균 사멸의 분석이 수행되었다. 이전에 설명된 방법(31,37)을 이용하여, GIN, AIN, 그리고 PBN이 15 또는 60 분 동안 5의 MOI에서 로그 기 대장균 (E. coli)과 함께 배양되거나, 또는 세균 성장을 모니터링하기 위해 호중구의 부재에서 대장균 (E. coli)이 이용되었다. 둘 모두, 세포외 세균과 회수된 생존가능한 세포내 세균은 호중구가 세균에 노출된 시료에서 CFU 계수에 의해 정량되었다. 식균되고 사멸된 세균의 숫자는 이후, 호중구-없는 조건에서 세균의 숫자로부터 세포외 세균 단독 또는 세포외와 세포내 세균 둘 모두를 각각 감산함으로써 계산되었다. 세포외 세균은 PBN과 AIN 시료 둘 모두에서 유의미하게 감소하였다 (도면 4a, 4b). PBN은 세균을 15 분 이내에 급속히 사멸시키고, 반면 60 분 시점에서, PBN 또는 AIN 시료에서 단지 소수의 생존가능한 세포내 세균만 존재하였다 (도면 4c). 대조적으로, GIN은 60 분의 감염에 의한 세포내 세균의 실제적으로 손상된 청소를 보이고, 더욱 높은 수준의 세포외 세균을 유지하고, 그리고 세균 사멸에서 결함이 있었다 (도면 4a-d). AIN이 GIN보다 더욱 큰 살균 활성을 소유한다는 것을 확증하기 위해, 원지 세균 사멸이 SYTO9 형광 염료로 표지화된 생존가능 세균 및 프로피디움 요오드화물 (PI) 형광 염료로 표지화된 죽은 세균 둘 모두의 공초점 현미경검사를 이용하여 조사되었다. 이들 결과는 훨씬 많은 생존 대장균 (E. coli)이 GIN 시료에서 유지된다는 것을 증명하였는데, 여기에는 AIN 또는 PBN 시료에서 관찰 결과와 대조적으로, 훨씬 적은 죽은 세균이 발견되었다. 감염 후 세포외 세균뿐만 아니라 원지 죽은 세균 둘 모두를 정량하는 것은 AIN과 PBN 둘 모두 GIN보다 더욱 큰 살균 활성을 소유하다는 것을 확증하였다 (도면 4e). 게다가, 전자현미경에 의한 대장균 (E. coli) 감염의 초미세구조 이미지는 무수한 무손상/생존 세균이 덜 조밀한 소포를 내포하는 GIN에서 유지되고, 반면 PBN과 유사하게, 단지 소수의 무손상/생존 세균이 세포질이 일부 일차-와 이차-유사 과립과 함께 조밀한 소포를 내포하는 AIN에서 확인된다는 것을 보여주었다. 함께 고려하면, 이들 자료는 Am80-유도된 과립구 분화가 세균 감염에 대항하여 증강된 호중구 선천성 면역과 연관된다는 것을 암시한다.
실시예 3
Am80은 G-CSF와 비교하여 경쟁적 호중구 회복을 유도한다
30마리의 C57BL6/J 생쥐는 실험을 위해 6가지 군으로 무작위로 나눠졌다. 상이한 분량의 Am80과 G-CSF를 이용함으로써 호중구 회복의 분석을 위한 실험적 설계는 도면 7a에 도해된다. 200 mg/kg의 시클로포스파미드 (CPA)의 복강내 주사의 단일 투약은 호중구감소증을 유도하기 위해 0 일자에 수행되었다. Am80 또는 G-CSF 또는 운반제는 연속 3 일 동안 4 시간의 CPA 주사 후 투여되었다. 생쥐 호중구감소증은 CPA 주사 후 48-60 시간 시점에 유도되었다. 실험은 3 일자에 수행되었다. 말초혈 (PB)은 3 일자에, 안락사된 대조 생쥐로부터 수집되고, 그리고 PB 호중구는 피콜-파크 (1.084)를 이용함으로써 정제되었다. 대다수의 호중구는 과립구 형태 분석에 의해 반영된 바와 같이, 피콜 파크의 하위 수준에서 확인되었다 (도면 7b). 3 일자에 상이한 분량의 Am80 또는 G-CSF로 치료된 호중구감소성 생쥐로부터 백혈구 (WBC)와 호중구 회복의 분석은 도면 7c에서 도시된다. 5 mg/kg의 Am80은 250 μg의 G-CSF와 비교하여 피콜-파크의 하위 수준에서 경쟁적 호중구 회복을 보였다.
실시예 4
호중구감소성 생쥐에서 Am80에 의해 동원된 호중구는 G-CSF에 의한 것들보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다
WBC와 호중구 둘 모두의 심각한 감소가 대조 생쥐와 비교하여, CPA의 주사 후 3 일 시점에 모든 실험 생쥐에서 발생하는 것으로 밝혀졌다 (도면 8a). 빠르게 그 이후 5 일자에, 2 연속일 동안 G-CSF 또는 Am80 또는 운반제의 주사에서, 두드러지게 가속된 호중구 회복이 Am80과 비교하여 G-CSF에 의해 유도되었고, 반면 운반제 군에서 호중구 계수 역시 거의 대조 값으로 복귀하였다 (도면 8a-b). 이들 호중구는 GIN 시료에 의해 도시된 바와 같이, 상이한 군의 생쥐 (총 20마리 생쥐)의 PB로부터 정제되고, 그리고 시험관내에서 황색포도상구균 (S. aureus) 감염에 대항하는 살균 활성을 분석하는데 이용되었다. 세포외 세균은 운반제로 처리된 C-MPBN으로부터 단리된 호중구보다 MPBN, AIN, 또는 GIN 중에서 어느 한쪽에 의해 유의미하게 제거되고, 반면 AIN은 세균을 제거하는데 있어서 GIN과 C-MPBN 둘 모두보다 훨씬 효과적인 것으로 밝혀졌다 (도면 8c). MPBN과 유사하게, AIN은 GIN 또는 C-MPBN 어느 한쪽보다 훨씬 많은 세균을 식균하고 사멸시켰다. 가속된 호중구 회복이 7 일자에 중단되었기 때문에 (도면 8d), 가속된 호중구 회복의 중단 후 살균 활성을 비교하기 위해 9 일자에 상이한 생쥐의 PB로부터 호중구가 정제되었다 (도면 8e). 이들 결과는 MPBN과 AIN 둘 모두 C-MPBN보다 훨씬 높은 살균 활성을 여전히 전시하고, 반면 GIN과 C-MPBN 사이에 식균작용 또는 세균 사멸에서 차이가 없음을 보여주었다 (도면 8f). 이들 조사 결과는 비록 G-CSF가 호중구 회복의 전기 시기에서 Am80보다 훨씬 많은 호중구를 유도할 수 있긴 하지만, MPBN과 유사하게, 호중구감소성 생쥐에서 Am80에 의해 동원된 호중구가 G-CSF에 의한 것들보다 황색포도상구균 (S. aureus) 감염에 대항하여 훨씬 유효하다는 것을 증명한다. 게다가, 비록 C-MPBN 계수가 호중구 회복의 후기 시기에서 대조 값보다 훨씬 높은 수준에 도달하긴 하지만, C-MPBN의 살균 활성은 MPBN 또는 AIN보다 여전히 훨씬 낮다.
설명된 바와 같이 단일 분량의 CPA에 의해 유도된 호중구감소성 생쥐 모델(31,32)을 이용하여, 본 발명자들은 Am80에 의한 생체내 동원된 호중구가 탈체 모델에서 관찰된 바와 같이, G-CSF에 의한 것들과 비교하여 세균 감염에 대항하여 동일한 더욱 큰 호중구 면역성을 실제로 소유하는 지를 조사하였다 (도면 8a-f). 20마리의 C57BL6/J 생쥐는 생체내 실험을 위해 4가지 군으로 무작위로 나눠졌다. 200 mg/Kg의 양에서 CPA는 0 일자에 투여되었다. G-CSF, 250μg/Kg 또는 Am80, 5 mg/Kg은 0, 1과 2 일자에 투여되었다. 대수 성장 기에서 3 x 107 황색포도상구균 (S. aureus)의 16 시간 복강내 접종 후, 정제된 호중구는 복강 (도면 8g-i) 및 PB (도면 8g-ii) 내에 생존가능한 세포외 세균의 숫자를 결정함으로써 그들의 살균 활성에 대해 분석되었다. 생존가능 세균의 숫자는 3 ml의 PBS-세척된 복막액으로부터 뿐만 아니라 추정된 1.5 ml의 전체 혈장으로 계수되었다. 복강 내에 생존가능 세균의 P 값: Am80 대 G-CSF, P <2.4E-8; 대조 대 G-CSF, P <4.7E-9; 운반제 대 G-CSF, P <8.3E-3; Am80 대 운반제, P <3.1E-9; Am80 대 대조, P <0.038. 도면 8a-iii는 도면 8g-i와 -ii로부터 전체 생존가능한 세포외 세균을 보여준다. Am80 대 G-CSF, P <1.9E-6; 대조 대 G-CSF, P <9.4E-9; 운반제 대 G-CSF, P <6.5E-4; Am80 대 운반제, P <6.8E-7; 대조 대 Am80, P <3.8E-5. 도면 8g-iv는 도면 8g-iii으로부터 생존가능 세균에서 배수적 변화를 보여준다. 대조군에서 생존가능 세균은 1 배의 기준으로서 이용된다.
설명된 바와 같이 단일 분량의 CPA에 의해 유도된 호중구감소성 생쥐 모델(31,32)을 이용하여, 본 발명자들은 Am80에 의한 생체내 동원된 호중구가 생체내 모델에서 관찰된 바와 같이, G-CSF에 의한 것들과 비교하여 세균 감염에 대항하여 동일한 더욱 큰 호중구 면역성을 실제로 소유하는 지를 조사하였다 (도면 8a). WBC와 호중구 둘 모두의 심각한 감소가 대조 생쥐와 비교하여, CPA의 주사 후 3 일 시점에 모든 실험 생쥐에서 발생하는 것으로 밝혀졌다 (도면 8b). 빠르게 그 이후 5 일자에, 2 연속일 동안 G-CSF 또는 Am80 또는 운반제의 주사에서, 두드러지게 가속된 호중구 회복이 Am80과 비교하여 G-CSF에 의해 유도되었고, 반면 운반제 군에서 호중구 계수 역시 거의 대조 값으로 복귀하였다 (도면 8b-c). 이들 호중구는 GIN 시료에 의해 도시된 바와 같이, 상이한 생쥐의 PB로부터 정제되고, 그리고 시험관내에서 황색포도상구균 (S. aureus) 감염에 대항하는 살균 활성을 분석하는데 이용되었다. 세포외 세균은 운반제로 처리된 C-MPBN으로부터 단리된 호중구보다 MPBN, AIN, 또는 GIN 중에서 어느 한쪽에 의해 유의미하게 제거되고, 반면 AIN은 세균을 제거하는데 있어서 GIN과 C-MPBN 둘 모두보다 훨씬 효과적인 것으로 밝혀졌다 (도면 8d). MPBN과 유사하게, AIN은 GIN 또는 C-MPBN 어느 한쪽보다 훨씬 많은 세균을 식균하고 사멸시켰다. 가속된 호중구 회복이 7 일자에 중단되었기 때문에 (도면 8e), 가속된 호중구 회복의 중단 후 살균 활성을 비교하기 위해 9 일자에 상이한 생쥐의 PB로부터 호중구가 정제되었다 (도면 8f). 이들 결과는 MPBN과 AIN 둘 모두 C-MPBN보다 훨씬 높은 살균 활성을 여전히 전시하고, 반면 GIN과 C-MPBN 사이에 식균작용 또는 세균 사멸에서 차이가 없음을 보여주었다 (도면 8g). 이들 조사 결과는 비록 G-CSF가 호중구 회복의 전기 시기에서 Am80보다 훨씬 많은 호중구를 유도할 수 있긴 하지만, MPBN과 유사하게, 호중구감소성 생쥐에서 Am80에 의해 동원된 호중구가 G-CSF에 의한 것들보다 황색포도상구균 (S. aureus) 감염에 대항하여 훨씬 유효하다는 것을 증명한다. 게다가, 비록 C-MPBN 계수가 호중구 회복의 후기 시기에서 대조 값보다 훨씬 높은 수준에 도달하긴 하지만, C-MPBN의 살균 활성은 MPBN 또는 AIN보다 여전히 훨씬 낮다.
본원에서 이들 연구는 CD34+ 세포의 Am80 처리에 의한 탈체와 생체내-산출된 호중구가 더욱 큰 분화 성숙도를 전시할 뿐만 아니라 G-CSF보다 세균 감염에 대항하여 더욱 높은 효능을 소유한다는 것을 증명한다. 이것은 아마도, 과립구형성으로부터 발생하는 호중구 선천성 면역의 발달을 증강하기 위해 CD66과 CD18의 기능적 상호작용을 조정하는 것을 통해 달성된다. 이런 조절 기전의 진전된 결정은 레티노이드-매개된 과립구형성과 호중구 분화에 새로운 통찰력을 제공할 것임에 틀림없다. 이것은 차례로, Am80을 비용-효과적인 치료적 분자로서 활용하여, 호중구감소증에 대항하여 효과적인 요법을 고안할 뿐만 아니라 호중구감소증의 지속 시간을 감소시키는 주입 치료를 위한 과립구를 탈체-산출하기 위한 설득력 있는 분자 기초를 제공할 것이다.
참고문헌
1. Huston A, Lyman GH. Agents under investigation for the treatment and prevention of neutropenia. Expert Opin Investig Drugs. 2007;16:1831-1840.
2. Beekman R, Touw IP. G-CSF and its receptor in myeloid malignancy. Blood. 2010;115:5131-5136.
3. Kuderer NM, Dale DC, Crawford J, Cosler LE, Lyman GH. Mortality, morbidity, and cost associated with febrile neutropenia in adult cancer patients. Cancer. 2006;106:2258-2266.
4. Marti FM, Cullen MH, Roila F. Management of febrile neutropenia: ESMO clinical recommendations. Ann Oncol. 2009;20 Suppl 4:166-169.
5. Dick EP, Prince LR, Sabroe I. Ex vivo-expanded bone marrow CD34+ derived neutrophils have limited bactericidal ability. Stem Cells. 2008;26:2552-2563.
6. Kagechika H. Novel synthetic retinoids and separation of the pleiotropic retinoidal activities. Curr Med Chem. 2002;9:591-608.
7. Miwako I, Kagechika H. Tamibarotene. Drugs Today (Barc). 2007;43:563-568.
8. Ohnishi K. PML-RARalpha inhibitors (ATRA, tamibaroten, arsenic troxide) for acute promyelocytic leukemia. Int J Clin Oncol. 2007;12:313-317.
9. Fukasawa H, Iijima T, Kagechika H, Hashimoto Y, Shudo K. Expression of the ligandbinding domain-containing region of retinoic acid receptors alpha, beta and gamma in Escherichia coli and evaluation of ligand-binding selectivity. Biol Pharm Bull. 1993;16:343- 348.
10. Hashimoto Y, Kagechika H, Shudo K. Expression of retinoic acid receptor genes and the ligand-binding selectivity of retinoic acid receptors (RAR's). Biochem Biophys Res Commun. 1990;166:1300-1307.
11. de The H, Marchio A, Tiollais P, Dejean A. Differential expression and ligand regulation of the retinoic acid receptor alpha and beta genes. Embo J. 1989;8:429-433.
12. Chambon P. A decade of molecular biology of retinoic acid receptors. Faseb J. 1996;10:940-954.
13. Evans T. Regulation of hematopoiesis by retinoid signaling. Exp Hematol. 2005;33:1055- 1061.
14. Douer D, Ramezani L, Parker J, Levine AM. All-trans-retinoic acid effects the growth, differentiation and apoptosis of normal human myeloid progenitors derived from purified CD34+ bone marrow cells. Leukemia. 2000;14:874-881.
15. Wang J, Barsky LW, Shum CH, et al. Retinoid-induced G1 arrest and differentiation activation are associated with a switch to cyclin-dependent kinase-activating kinase hypophosphorylation of retinoic acid receptor alpha. Journal of Biological Chemistry. 2002;277:43369-43376.
16. Wang JG, Barsky LW, Davicioni E, et al. Retinoic acid induces leukemia cell G1 arrest and transition into differentiation by inhibiting cyclin-dependent kinase-activating kinase binding and phosphorylation of PML/RARalpha. Faseb J. 2006;20:2142-2144.
17. Luo P, Wang A, Payne KJ, et al. Intrinsic retinoic acid receptor alpha-cyclin-dependent kinase-activating kinase signaling involves coordination of the restricted proliferation and granulocytic differentiation of human hematopoietic stem cells. Stem Cells. 2007;25:2628- 2637.
18. Gudas LJ. Emerging roles for retinoids in regeneration and differentiation in normal and disease states. Biochim Biophys Acta. 2012;1821:213-221.
19. Soprano DR, Qin P, Soprano KJ. Retinoic acid receptors and cancers. Annu Rev Nutr. 2004;24:201-221.
20. Melnick A, Licht JD. Deconstructing a disease: RARalpha, its fusion partners, and their roles in the pathogenesis of acute promyelocytic leukemia. Blood. 1999;93:3167-3215.
21. Collins SJ. Retinoic acid receptors, hematopoiesis and leukemogenesis. Curr Opin Hematol. 2008;15:346-351.
22. Cornic M, Delva L, Castaigne S, et al. In vitro all-trans retinoic acid (ATRA) sensitivity and cellular retinoic acid binding protein (CRABP) levels in relapse leukemic cells after remission induction by ATRA in acute promyelocytic leukemia. Leukemia. 1994;8 Suppl 2:S16-19.
23. Degos L, Dombret H, Chomienne C, et al. All-trans-retinoic acid as a differentiating agent in the treatment of acute promyelocytic leukemia. Blood. 1995;85:2643-2653.
24. Delva L, Cornic M, Balitrand N, et al. Resistance to all-trans retinoic acid (ATRA) therapy in relapsing acute promyelocytic leukemia: study of in vitro ATRA sensitivity and cellular retinoic acid binding protein levels in leukemic cells. Blood. 1993;82:2175-2181.
25. Ishida S, Shigemoto-Mogami Y, Shinozaki Y, et al. Differential modulation of PI3-kinase/Akt pathway during all-trans retinoic acid- and Am80-induced HL-60 cell differentiation revealed by DNA microarray analysis. Biochem Pharmacol. 2004;68:2177-2186.
26. Jimi S, Mashima K, Matsumoto T, Hara S, Suzumiya J, Tamura K. RARalpha is a regulatory factor for Am-80-induced cell growth inhibition of hematologic malignant cells. Int J Oncol. 2007;31:397-404.
27. Hashimoto Y, Kagechika H, Kawachi E, Fukasawa H, Saito G, Shudo K. Correlation of differentiation-inducing activity of retinoids on human leukemia cell lines HL-60 and NB4. J Cancer Res Clin Oncol. 1995;121:696-698.
28. Tobita T, Takeshita A, Kitamura K, et al. Treatment with a new synthetic retinoid, Am80, of acute promyelocytic leukemia relapsed from complete remission induced by all-trans retinoic acid. Blood. 1997;90:967-973.
29. Chaudhry P, Yang X, Wagner M, Jong AY, Wu L. Retinoid-regulated FGF8f secretion by osteoblasts bypasses retinoid stimuli to mediate granulocytic differentiation of myeloid leukemia cells. Mol Cancer Ther. 2012;11:267-276.
30. Mittal R, Krishnan S, Gonzalez-Gomez I, Prasadarao NV. Deciphering the roles of outer membrane protein A extracellular loops in the pathogenesis of Escherichia coli K1 meningitis. J Biol Chem. 2011;286:2183-2193.
31. Mittal R, Bulgheresi S, Emami C, Prasadarao NV. Enterobacter sakazakii targets DC-SIGN to induce immunosuppressive responses in dendritic cells by modulating MAPKs. J Immunol. 2009;183:6588-6599.
32. Hager M, Cowland JB, Borregaard N. Neutrophil granules in health and disease. J Intern Med. 2010;268:25-34.
33. Borregaard N, Sorensen OE, Theilgaard-Monch K. Neutrophil granules: a library of innate immunity proteins. Trends Immunol. 2007;28:340-345.
34. van der Velden WJ, Blijlevens NM, Donnelly JP. The potential role of lactoferrin and derivatives in the management of infectious and inflammatory complications of hematology patients receiving a hematopoietic stem cell transplantation. Transpl Infect Dis. 2008;10:80- 89.
35. Ward PP, Paz E, Conneely OM. Multifunctional roles of lactoferrin: a critical overview. Cell Mol Life Sci. 2005;62:2540-2548.
36. Kerr MA, Stocks SC. The role of CD15-(Le(X))-related carbohydrates in neutrophil adhesion. Histochem J. 1992;24:811-826.
37. Mittal R, Prasadarao NV. Outer membrane protein A expression in Escherichia coli K1 is required to prevent the maturation of myeloid dendritic cells and the induction of IL-10 and TGF-beta. J Immunol. 2008;181:2672-2682.
38. Groves E, Dart AE, Covarelli V, Caron E. Molecular mechanisms of phagocytic uptake in mammalian cells. Cell Mol Life Sci. 2008;65:1957-1976.
39. Kuespert K, Pils S, Hauck CR. CEACAMs: their role in physiology and pathophysiology. Curr Opin Cell Biol. 2006;18:565-571.
40. Kuijpers TW, van der Schoot CE, Hoogerwerf M, Roos D. Cross-linking of the carcinoembryonic antigen-like glycoproteins CD66 and CD67 induces neutrophil aggregation. J Immunol. 1993;151:4934-4940.
41. Lo SK, Lee S, Ramos RA, et al. Endothelial-leukocyte adhesion molecule 1 stimulates the adhesive activity of leukocyte integrin CR3 (CD11b/CD18, Mac-1, alpha m beta 2) on human neutrophils. J Exp Med. 1991;173:1493-1500.
42. Skubitz KM, Campbell KD, Skubitz AP. CD66a, CD66b, CD66c, and CD66d each independently stimulate neutrophils. J Leukoc Biol. 1996;60:106-117.
43. Ando K, Muguruma Y, Yahata T. Humanizing bone marrow in immune-deficient mice. Curr Top Microbiol Immunol. 2008;324:77-86.
44. Mayack SR, Wagers AJ. Osteolineage niche cells initiate hematopoietic stem cell mobilization. Blood. 2008;112:519-531.
45. Kuijpers TW, Hoogerwerf M, van der Laan LJ, et al. CD66 nonspecific cross-reacting antigens are involved in neutrophil adherence to cytokine-activated endothelial cells. J Cell Biol. 1992;118:457-466.
46. Park DJ, Chumakov AM, Vuong PT, et al. CCAAT/enhancer binding protein epsilon is a potential retinoid target gene in acute promyelocytic leukemia treatment. J Clin Invest. 1999;103:1399-1408.
47. Bush TS, St Coeur M, Resendes KK, Rosmarin AG. GA-binding protein (GABP) and Sp1 are required, along with retinoid receptors, to mediate retinoic acid responsiveness of CD18 (beta 2 leukocyte integrin): a novel mechanism of transcriptional regulation in myeloid cells. Blood. 2003;101:311-317.
48. Hickstein DD, Baker DM, Gollahon KA, Back AL. Identification of the promoter of the myelomonocytic leukocyte integrin CD11b. Proc Natl Acad Sci U S A. 1992;89:2105-2109.
49. Chih DY, Chumakov AM, Park DJ, Silla AG, Koeffler HP. Modulation of mRNA expression of a novel human myeloid-selective CCAAT/enhancer binding protein gene (C/EBP epsilon). Blood. 1997;90:2987-2994.
50. Faurschou M, Borregaard N. Neutrophil granules and secretory vesicles in inflammation. Microbes Infect. 2003;5:1317-1327.
앞서 설명된 다양한 방법과 기술은 본 출원을 실시하기 위한 다수의 방법을 제공한다. 당연히, 설명된 모든 목적 또는 이점이 본원에서 설명된 임의의 특정 구체예에 따라 반드시 달성될 수 있는 것은 아닌 것으로 이해된다. 따라서, 예로서, 당업자는 이들 방법이 본원에서 교시되거나 또는 암시된 바와 같은 다른 목적 또는 이점을 반드시 달성하는 것은 아니지만, 본원에서 교시된 바와 같은 한 가지 이점 또는 일군의 이점을 달성하거나 또는 최적화하는 방식으로 수행될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 다양한 대안이 본원에서 언급된다. 일부 바람직한 구체예는 한 가지, 다른, 또는 여러 특질을 특정적으로 포함하고, 다른 바람직한 구체예는 한 가지, 다른, 또는 여러 특질을 특정적으로 배제하고, 또 다른 바람직한 구체예는 한 가지, 다른, 또는 여러 유리한 특질의 포함에 의해 특정 특질을 경감하는 것으로 이해된다.
게다가, 당업자는 상이한 구체예로부터 다양한 특질의 적용가능성을 인식할 것이다. 유사하게, 앞서 논의된 다양한 원소, 특질과 단계뿐만 아니라 각각의 이런 원소, 특질 또는 단계에 대한 다른 공지된 등가물은 본원에서 설명된 원리에 따라 방법을 수행하기 위해 당업자에 의해 다양한 조합에서 이용될 수 있다. 다양한 구체예에서, 다양한 원소, 특질, 그리고 단계 중에서 일부는 특정적으로 포함될 것이고, 그리고 다른 일부는 특정적으로 배제될 것이다.
비록 본 출원이 일정한 구체예와 실시예의 문맥에서 개시되긴 했지만, 본 출원의 구체예는 특정적으로 개시된 구체예 내지 다른 대안적 구체예 및/또는 이들의 용도와 변형과 등가물을 뛰어넘어 확장하는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다.
일부 구체예에서, 본 출원의 특정 구체예를 설명하는 문맥에서 (특히, 하기의 일정한 청구항의 문맥에서) 이용된 용어 부정관사 ("a"와 "an")와 정관사 ("the") 및 유사한 참고물은 단수와 복수 둘 모두를 커버하는 것으로 간주될 수 있다. 본원에서 값의 범위의 열거는 단순히, 범위 내에 속하는 각 별개의 값을 개별적으로 지칭하는 속기 방법으로서 역할하는 것으로 의도된다. 본원에서 달리 지시되지 않으면, 각 개별 값은 마치 이러한 값이 본원에서 개별적으로 열거되는 것처럼 명세서 내로 통합된다. 본원에서 설명된 모든 방법은 본원에서 달리 지시되지 않으면 또는 만약 그렇지 않으면, 문맥에 의해 명백하게 부인되지 않으면 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본원에서 일정한 구체예에 대하여 제공된 임의의 모든 실례, 또는 예시적인 언어 (가령, "예를 들면")의 이용은 단지 본 출원을 더욱 설명하기 위한 것으로 의도되고, 그리고 만약 그렇지 않으면 청구되는 본 출원의 범위에 대한 한계를 부가하지 않는다. 명세서 내에 어떤 언어도 본 출원의 실시에 필수적인 임의의 청구되지 않은 원소를 표시하는 것으로 간주되지 않아야 한다.
본 출원을 수행하기 위해 본 발명자들에게 공지된 최적 방식을 비롯한 본 출원의 바람직한 구체예가 본원에서 설명된다. 이들 바람직한 구체예에서, 변이는 전술한 설명을 읽은 후, 당업자에게 명백해질 것이다. 당업자는 적절하면 이런 변형을 이용할 수 있고, 그리고 본 출원은 본원에서 특정적으로 설명된 것과 달리 실시될 수 있는 것으로 예기된다. 따라서, 본 출원의 많은 구체예는 근거 법률에 의해 허용되는, 여기에 첨부된 청구항 내에 열거된 요부의 모든 변형과 등가물을 포함한다. 게다가, 이의 모든 가능한 변이에서 전술한 원소의 임의의 조합은 본원에서 달리 지시되지 않으면 또는 만약 그렇지 않으면, 문맥에 의해 명백하게 부인되지 않으면, 본 출원에 의해 포괄된다.
본원에서 참고된 모든 특허, 특허 출원, 특허 출원의 공보, 그리고 다른 자료, 예를 들면, 논문, 서적, 명세서, 간행물, 문서, 물건, 및/또는 기타 등등은 동일한 것, 본 문서와 불일치하거나 충돌하는 임의의 동일한 것, 또는 본 문서와 현재 또는 이후에 관련된 청구항의 가장 넓은 범위에 제한 효과를 가질지도 모르는 임의의 동일한 것과 연관된 임의의 출원 파일 이력을 제외하고, 본원에 전체적으로 순전히 참조로서 편입된다. 실례로서, 임의의 편입된 자료와 연관된 용어의 설명, 정의 및/또는 이용, 그리고 본 문서와 연관된 용어의 설명, 정의 및/또는 이용 사이에 임의의 불일치 또는 충돌이 있는 경우에, 본 문서에서 상기 용어의 설명, 정의 및/또는 이용이 우선할 것이다.
끝으로, 본원에서 개시된 출원의 구체예는 본 출원의 구체예의 원리를 예시하는 것으로 이해된다. 이용될 수 있는 다른 변형은 본 출원의 범위 내에 있을 수 있다. 따라서, 실례로서, 하지만 제한 없이, 본 출원의 구체예의 대안적 형태가 본원에서 교시에 따라 활용될 수 있다. 따라서, 본 출원의 구체예는 도시되고 설명된 것에 엄밀하게 국한되지 않는다.

Claims (12)

  1. 호중구감소증을 치료하거나, 호중구감소증을 저해하거나, 호중구감소증의 심각도를 감소시키거나 또는 호중구감소증 예방을 증진하는 것이 필요한 포유류 개체에서 호중구감소증을 치료하거나, 호중구감소증을 저해하거나, 호중구감소증의 심각도를 감소시키거나 또는 호중구감소증 예방을 증진하기 위한, 레티노이드 작용제를 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55 또는 이들의 조합이고, 여기서 CH55는 하기 화학 구조식을 가지며
    Figure 112019116735074-pct00031
    ,
    상기 제약 조성물의 치료 효과량이 상기 개체에게 투여되는 것인 제약 조성물.
  2. 암-화학요법 유도된 호중구감소증의 치료가 필요한 개체에서 암-화학요법 유도된 호중구감소증을 치료하기 위한, 레티노이드 작용제를 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55 또는 이들의 조합이고, 여기서 CH55는 하기 화학 구조식을 가지며
    Figure 112019116735074-pct00032
    ,
    상기 개체에서 암-화학요법 유도된 호중구감소증을 치료하기 위해 상기 제약 조성물의 치료 효과량이 개체에게 투여되고, 그에 따라 개체에서 암-화학요법 유도된 호중구감소증이 치료되는 것인 제약 조성물.
  3. 청구항 2에 있어서, 화학요법제가 상기 레티노이드 작용제를 포함하는 제약 조성물과 조합하여 투여되는 것인 제약 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 화학요법제 및 상기 레티노이드 작용제를 포함하는 제약 조성물은 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
  5. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 레티노이드 작용제는 정맥내, 근육내, 복강내, 경구 또는 흡입을 통해 투여되는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
  6. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 레티노이드 작용제의 효과량은 0.1 내지 0.5 mg/kg/일, 0.5 내지 5 mg/kg/일, 5 내지 10 mg/kg/일, 10 내지 20 mg/kg/일, 20 내지 50 mg/kg/일, 50 내지 100 mg/kg/일, 100 내지 200 mg/kg/일, 200 내지 300 mg/kg/일, 300 내지 400 mg/kg/일, 400 내지 500 mg/kg/일, 500 내지 600 mg/kg/일, 600 내지 700 mg/kg/일, 700 내지 800 mg/kg/일, 800 내지 900 mg/kg/일 또는 900 내지 1000 mg/kg/일인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
  7. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 개체는 인간, 비-인간 영장류, 원숭이, 유인원, 개, 고양이, 소, 말, 토끼, 생쥐와 쥐로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
  8. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80)인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
  9. (i) 레티노이드 작용제를 포함하는 조성물의 일정량; 그리고
    (ii) 상기 조성물의 치료 효과량을 호중구감소증을 치료하거나, 호중구감소증을 저해하거나, 호중구감소증의 심각도를 감소시키거나, 호중구감소증 예방을 증진하거나, 또는 암-화학요법 유도된 호중구감소증을 치료하는 것이 필요한 포유류 개체에게 투여하기 위한 설명서
    를 포함하는 키트이며, 여기서 레티노이드 작용제는 타미바로텐 (AM80), CH55 또는 이들의 조합이고, 여기서 CH55는 하기 화학 구조식을 갖는 것인 키트.
    Figure 112019116735074-pct00033
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
KR1020157000014A 2012-06-07 2013-06-07 레티노이드 작용제를 이용하여 호중구감소증을 치료하기 위한 방법 KR102083046B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261656815P 2012-06-07 2012-06-07
US61/656,815 2012-06-07
PCT/US2013/044828 WO2013185105A1 (en) 2012-06-07 2013-06-07 Methods for treating neutropenia using retinoid agonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150035983A KR20150035983A (ko) 2015-04-07
KR102083046B1 true KR102083046B1 (ko) 2020-02-28

Family

ID=49712715

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157000014A KR102083046B1 (ko) 2012-06-07 2013-06-07 레티노이드 작용제를 이용하여 호중구감소증을 치료하기 위한 방법

Country Status (14)

Country Link
US (1) US11116738B2 (ko)
EP (1) EP2858636B1 (ko)
JP (1) JP6295249B2 (ko)
KR (1) KR102083046B1 (ko)
CN (1) CN104519879B (ko)
AU (1) AU2013270674B2 (ko)
BR (1) BR112014030279A2 (ko)
CA (1) CA2874850A1 (ko)
ES (1) ES2691493T3 (ko)
HK (1) HK1208630A1 (ko)
MX (1) MX365321B (ko)
NZ (1) NZ702415A (ko)
RU (1) RU2650962C2 (ko)
WO (1) WO2013185105A1 (ko)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2650962C2 (ru) 2012-06-07 2018-04-18 Чилдрен'З Хоспитал Лос Анджелес Способы лечения нейтропении с применением ретиноидных агонистов
JP2016518342A (ja) 2013-03-15 2016-06-23 アヴィセンナ・コスメティクス・エルエルシーAvisenna Cosmetics, Llc 加齢の影響を軽減するための局所組成物
EP3107533A4 (en) * 2014-02-18 2017-10-18 Children's Hospital Los Angeles Compositions and methods for treating neutropenia
BR122023024814A2 (pt) * 2015-03-31 2024-02-20 Syros Pharmaceuticals, Inc. Método ex vivo de previsão da eficácia de tamibaroteno, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo
US9868994B2 (en) 2016-04-08 2018-01-16 Syros Pharmaceuticals, Inc. Methods of stratifying patients for treatment with retinoic acid receptor-α agonists
WO2018067946A1 (en) * 2016-10-06 2018-04-12 Syros Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating patients with a retinoic acid receptor-alpha agonist and an anti-cd38 antibody
SG11202006376WA (en) * 2018-01-26 2020-07-29 Agency Science Tech & Res Neutrophil subtypes
CN113969261B (zh) * 2020-07-06 2024-04-09 苏州市立医院(北区) 三步法快速测定中性粒细胞趋化的方法
US20220378727A1 (en) * 2021-05-14 2022-12-01 The University Of Hong Kong Dry powder formulations of tamibarotene for pulmonary and intranasal delivery

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001506998A (ja) 1996-12-19 2001-05-29 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 好中球減少症の治療または抑制方法

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5691196A (en) * 1992-12-31 1997-11-25 American Cyanamid Company Recombinant nucleic acid containing a response element
US5965606A (en) * 1995-12-29 1999-10-12 Allergan Sales, Inc. Methods of treatment with compounds having RAR.sub.α receptor specific or selective activity
CA2421760A1 (en) 2000-09-08 2002-03-14 Massachusetts Institute Of Technology G-csf analog compositions and methods
US7119061B2 (en) 2002-11-18 2006-10-10 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
AR044315A1 (es) 2003-05-16 2005-09-07 Kyowa Hakko Kogyo Kk Agente para prevenir y/o tratar enfermedades acompañadas de alteraciones de tejidos que comprende un polipeptido
EP1621191A1 (en) 2004-07-29 2006-02-01 Werner Bollag Treatment of inflammatory diseases by RXR Antagonists
CA2577046A1 (en) 2004-08-13 2006-02-23 Anormed Inc. Chemokine combinations to mobilize progenitor/stem cells
KR20070067189A (ko) 2004-12-02 2007-06-27 비너스 레머디스 리미티드 주사제에 유용한 베타-락타마제 억제제를 이용한베타-락타마제-매개 항생제 내성에 대처하기 위한 조성물
US20090111786A1 (en) * 2004-12-03 2009-04-30 Glass Christopher K Compounds that Prevent Macrophage Apoptosis and Uses Thereof
DK2026778T3 (en) * 2006-05-16 2019-01-07 Io Therapeutics Llc RAR ANTAGONIST OR INVERSE AGONIST FOR USE IN THE TREATMENT OF CHEMOTHERAPY AND / OR RADIATION THERAPY SIDE EFFECTS
EP2143428B1 (en) * 2007-03-30 2015-11-04 TMRC Co., Ltd. Tamibarotene capsule preparation
AU2008331436A1 (en) * 2007-12-06 2009-06-11 Csl Limited Method of inhibition of leukemic stem cells
US8580516B2 (en) 2008-09-05 2013-11-12 University Of Chicago Methods and compositions for direct detection of DNA damage
EP2490543B1 (en) 2009-10-19 2015-07-22 Laila Nutraceuticals Extracts, fractions and compositions comprising acetogenins and their applications
RU2446173C1 (ru) 2010-08-13 2012-03-27 Зао "Биокад" Новый функционально активный, высокоочищенный стабильный конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем с пролонгированным биологическим действием, пригодный для медицинского применения, и иммунобиологическое средство на его основе
CN102380090A (zh) 2010-08-31 2012-03-21 健能隆医药技术（上海）有限公司 G-csf二聚体在治疗嗜中性粒细胞减少症中的应用
JP6005666B2 (ja) 2011-02-08 2016-10-12 セルラー ダイナミクス インターナショナル， インコーポレイテッド プログラミングによる造血前駆細胞の生産
JP6242868B2 (ja) * 2012-05-08 2017-12-06 リセラ・コーポレイションＬｙｃｅｒａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ＲＯＲγのアゴニストとしての使用のためおよび疾患の処置のためのテトラヒドロ［１，８］ナフチリジンスルホンアミドおよび関連化合物
RU2650962C2 (ru) 2012-06-07 2018-04-18 Чилдрен'З Хоспитал Лос Анджелес Способы лечения нейтропении с применением ретиноидных агонистов
DE102012011766B3 (de) 2012-06-15 2013-12-19 Voith Patent Gmbh Getriebeeinheit
CN110946993A (zh) 2014-01-03 2020-04-03 上海泽生科技开发股份有限公司 纽兰格林制剂的配方
EP3107533A4 (en) 2014-02-18 2017-10-18 Children's Hospital Los Angeles Compositions and methods for treating neutropenia

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001506998A (ja) 1996-12-19 2001-05-29 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 好中球減少症の治療または抑制方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. Hematol., 26, 47-61(2009.)
Journal of Leukocyte Biology, 90, 235-247(2011.)

Also Published As

Publication number Publication date
JP2015523346A (ja) 2015-08-13
ES2691493T3 (es) 2018-11-27
US11116738B2 (en) 2021-09-14
CN104519879A (zh) 2015-04-15
HK1208630A1 (en) 2016-03-11
EP2858636B1 (en) 2018-09-05
WO2013185105A1 (en) 2013-12-12
KR20150035983A (ko) 2015-04-07
AU2013270674B2 (en) 2017-12-07
AU2013270674A1 (en) 2014-12-18
EP2858636A4 (en) 2016-06-01
CN104519879B (zh) 2018-10-02
BR112014030279A2 (pt) 2017-09-12
EP2858636A1 (en) 2015-04-15
RU2650962C2 (ru) 2018-04-18
MX2014014930A (es) 2015-07-06
CA2874850A1 (en) 2013-12-12
NZ702415A (en) 2016-04-29
MX365321B (es) 2019-05-29
RU2014153988A (ru) 2016-07-27
US20150164836A1 (en) 2015-06-18
JP6295249B2 (ja) 2018-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102083046B1 (ko) 레티노이드 작용제를 이용하여 호중구감소증을 치료하기 위한 방법
JP2022169781A (ja) 治療用のプールされた血液アポトーシス細胞調製物及びそれらの使用
JP6353073B2 (ja) 細胞回復のための組成物並びにその作製及び使用方法
US20190192569A1 (en) Tumoricidal and antimicrobial compositions and methods
US20160082071A1 (en) Methods of treating myeloid leukemia
EA037117B1 (ru) Новая фармацевтическая композиция, содержащая частицы, содержащие комплекс двухнитевого полирибонуклеотида и полиалкиленимина
WO2024036005A1 (en) Method of treating alzheimer&#39;s disease with expanded natural killer cells
EP3682889B1 (en) Modulating inflammasome activation of myeloid-derived suppressor cells for treating gvhd
Salehi et al. Milk-Derived Extracellular Vesicles: Biomedical Applications, Current Challenges, and Future Perspectives
US20160045573A1 (en) Nanoparticles with effects on endothelial function and membrane permeability
Ding et al. Retinoid agonist Am80-enhanced neutrophil bactericidal activity arising from granulopoiesis in vitro and in a neutropenic mouse model
Zhang et al. Self-driven immune checkpoint blockade and spatiotemporal-sensitive immune response monitoring in acute myeloid leukemia using an all-in-one turn-on bionanoprobe
US7629316B2 (en) Method for proliferating natural killer cells
CN117980470A (zh) 治疗性nk细胞群
KR20220091426A (ko) 혈액 유래 물질 및 면역세포를 포함하는 암 또는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학조성물
CN114728068A (zh) Pd-1信号抑制剂的联合疗法
長澤貴宏 Studies on Phagocytosis and Immune-related Functions of Nucleated Thrombocytes in Early Vertebrates
CA2451674A1 (en) Biological response modifier composition and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant