KR101970144B1

KR101970144B1 - 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101970144B1
Application number: KR1020180140543A
Authority: KR
Inventors: 오용환
Original assignee: 주식회사 에스제이인터내셔널
Priority date: 2018-11-15
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2019-04-18
Also published as: US20200155443A1

Abstract

본 발명은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다

Description

그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for whitening with green tomato extracts, burdock root extracts and chickpea extracts}

본 발명은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백효과가 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 자극을 직접적으로 받아들이는 기관으로 몸을 보호하고 체온, 수분 증발 등을 조절하며 지각과 피부호흡 등의 작용을 한다. 또한, 피부는 미용적 측면을 가지고 있어 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위해 소비자들은 피부를 관리하는 것에 대해 관심이 높으며, 이로 인해 피부 제품 시장이 활발하게 성장하고 있다.

국내 화장품 시장은 2010년부터 2014년 까지 연평균 6.7%의 성장을 나타내고 있고, 미백 주름개선 등의 기능성 화장품의 경우 2010년부터 연평균 18.3%의 생산량 증가를 나타내며. 전체 화장품 시장의 33.2%가 기능성 화장품에 관련되어 있다. 기능성 화장품의 주요 원료는 천연 소재, 유기 합성물, 고분자화합물 등으로 이러한 원료를 이용하여 미백, 노화방지 등의 연구가 활발하게 진행되고 있다.

한편, 소비자들은 피부노화가 진행되면서 색소침착이 쉽게 되는 현상을 방지하기 위해 피부 미백이 강화된 피부 제품을 선호하고 있다. 피부 미백이란 불필요해진 멜라닌 색소 배출 또는 생성을 억제하여 본래 피부의 투명함을 되찾는 일로, 피부톤을 하얗고 환하게 만드는 것을 말한다. 최근에는 천연소재를 이용하여 피부나 체내에 독성을 나타내지 않아 자극적이지 않으면서 피부 미백 등에 효능이 있는 화장품에 대한 관심이 높아지고 있으며, 종래에는 대한민국 등록특허 제10-463081호(녹두추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물), 대한민국 등록특허 제10-0829831호(식물 추출물을 포함하는 미백 화장료 조성물), 대한민국 공개특허 제10-1999-0085941호(포도 추출물을 함유한 미백 화장료 조성물) 등과 같이 천연물을 이용한 미백 화장료 조성물에 대한 기술을 제시한 바 있다.

본 발명은 피부 미백효과가 뛰어난 천연물의 추출물들을 발굴하고, 이들의 복합물을 유효성분으로 함유한 화장료 조성물을 개발하여 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은, 바람직하게 세포 내 멜라닌 생성을 억제하는 것일 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은, 바람직하게 티로시나제 효소 활성을 억제하는 것일 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은, 바람직하게 DOPA 산화를 억제하는 것일 수 있다.

본 발명은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하여 뛰어난 피부 미백효과를 발휘할 수 있다.

도 1은 그린토마토(Green tomato) 물 추출물이 디하이드록시페닐알라닌(Dihydroxyphenylalanine, DOPA) 산화 억제 활성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 2는 병아리콩(Chickpea) 물 추출물이 세포 내 티로시나제(Tyrosinase) 저해 활성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 3은 우엉(Burdock root) 물 추출물이 세포 내 멜라닌(Melanine) 생성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 4는 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 세포 내 티로시나제(Tyrosinase) 저해 활성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 5는 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 세포 내 멜라닌(Melanine) 생성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 6은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 티로시나제(Tyrosinase) 저해 활성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 7은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 디하이드록시페닐알라닌(Dihydroxyphenylalanine, DOPA) 산화 억제 활성에 미치는 효과에 대한 실험 결과 그래프이다.

피부색은 표피의 기저층에 존재하는 흑갈색 색소인 멜라닌(Melanine)의 양에 따라 결정되게 되며, 이는 피부 미백에 있어서 중요한 요인이 된다. 멜라닌은 피부의 기저층에서 생합성되고 각질형성세포로 수송되어 각화과정에 의해 피부 바깥층으로 이동하게 된다. 멜라닌은 티로시나제(Tyrosinase), Tyrosinase related protein-1(TRP-1), Tyrosinase related protein-2(TRP-2) 등의 일련의 효소 반응에 의해 생성된다.

티로시나제는 티로신(Tyrosine)을 히드록시화하여 디하이드록시페닐알라닌(Dihydroxyphenylalanine, DOPA)을 형성하고, 이를 더 산화하여 도파퀴논(Dopa quinone)을 형성하는 단계인 멜라닌 생합성의 초기단계를 촉매하는 효소로 최종적으로 유멜라닌(eumelanin)과 페오멜라닌(pheomelanin)의 형태가 된다. 멜라닌은 자외선, 외부노출, 노화 등에 피부를 보호하지만 과도하게 생성될 경우 피부에 색소가 침착되어 기미, 주근깨를 형성하게 된다. 따라서 자외선을 차단하거나 ROS에 의한 세포보호를 통한 멜라닌의 생성억제로 피부노화 및 미백작용에 관한 연구가 이루어지고 있다.

본 발명은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

그린토마토(Green tomato)는 '풋토마토'라고도 하며, 충분히 열매가 익지 않은 상태에서 먹는 녹색 토마토를 말한다. 그린 토마토는 단단하고 떫은 맛이 나며, 미국에서 즐겨 먹는 토마토로서 여러 가지 종류의 음식에 섞어 먹기도 하고, 수프, 잼, 피클, 살사 등에 다양하게 사용된다. 그린토마토에는 토마틴(Tomatine), 토마티딘(Tomatidine) 및 토마티데놀(Tomatidenol) 등의 성분이 풍부한 것으로 알려져 있다.

우엉(Burdock root)은 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 두해살이 풀로 주로 일본에서 많이 재배하며 유럽, 시베리아, 중국 동북부에 야생한다. 우엉은 이눌린(inulin)과 셀룰로오스(cellulose) 등의 섬유질이 주된 성분이므로 장의 건강에 좋으며, 폴리페놀 화합물, 특히 이소클로로겐산(isochlorogenic acid)을 많이 함유하여 잘게 썰어 방치하면 산화되어 변색되는 특징이 있다. 우엉은 조림, 튀김, 절임류, 냄비요리 등 다양하게 식용재료로 사용된다.

병아리콩(Chickpea)은 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 한해살이 풀로 병아리머리를 닮아 병아리콩이라 명명되었으며, 인도, 아프리카, 중앙아메리카, 남아메리카 등에서 중요한 식용작물로 재배된다. 병아리콩은 밤과 비슷한 풍미로 씹을수록 고소하며 단맛이 특징이고, 칼슘, 비타민 C 및 철분 등이 풍부하여 빈혈과 면역력 증진에 좋은 것으로 알려져 있다. 병아리콩은 수프, 카레, 샐러드의 주요 재료로 사용되며, 그 외에도 다양한 식용재료로 사용된다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물은, 바람직하게 물 또는 유기용매를 가하여 추출하는 용매추출법; 또는 초고압 추출법;을 이용하여 수득하는 것일 수 있다. 이때, 상기 유기용매는, 일 예로, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용할 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 그린토마토 물 추출물은 흐르는 물에 세척 및 건조한 것을 사용하였으며, 건조시킨 그린토마토 100g에 10.7배의 물인 1,070 mL 물을 첨가한 뒤 60℃에서 24시간 추출하였다. 우엉 물 추출물과 병아리콩 물 추출물도 그린토마토와 동일한 방법으로 추출하였으며, 추출 후 원심분리 및 필터하여 불순물을 제거하고 동결건조하여 실험에 사용하였다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 그린토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은, 세포 내 멜라닌 생성을 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 그린토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은, 티로시나제 효소 활성을 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 그린토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은, DOPA 산화를 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 일 예로, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형 중 선택되는 어느 하나의 기초화장료 제형; 스킨; 로션; 아이크림; 수딩젤; 연고; 마스크팩용 제형; 바디워시용 제형; 필링젤; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스; 파운데이션; 스킨커버; 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류 중 선택되는 어느 하나의 색조화장료 제형; 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것일 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 본 발명에 대해 하기 실시예 및 실험예에서 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 모두 포함한다.

[제조 예 : 본 발명의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 제조]

본 실시예에서는 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물을 제조하였다.

그린토마토 물 추출물은 흐르는 물에 세척 및 건조한 것을 사용하였으며, 건조시킨 그린토마토 100g에 10.7배의 물인 1,070 mL 물을 첨가한 뒤 60℃에서 24시간 추출하였다. 우엉 물 추출물과 병아리콩 물 추출물도 그린토마토와 동일한 방법으로 추출하였으며, 추출 후 원심분리 및 필터하여 불순물을 제거하고 동결건조하여 실험에 사용하였다.

하기에서는 상기 실시예의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물을 이용하여 피부 미백에 대한 효과를 확인하기 위한 실험을 진행하였다.

[실험예 1 : 각 추출물의 미백 활성 관련 효능 확인]

본 실험예에서는 상기 제조예에서 제조한 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 피부 미백 활성 관련 인자에 대한 영향을 확인하고자 하였다.

피부색은 표피의 기저층에 존재하는 흑갈색 색소인 멜라닌(Melanine)의 양에 따라 결정되게 되며, 이는 피부 미백에 있어서 중요한 요인이 된다. 멜라닌 생성은 티로시나제(Tyrosinase), Tyrosinase related protein-1(TRP-1), Tyrosinase related protein-2(TRP-2) 등의 일련의 효소 반응에 의해 결정된다.

티로시나제는 티로신(Tyrosine)을 히드록시화하여 디하이드록시페닐알라닌(Dihydroxyphenylalanine, DOPA)을 형성하고, 이를 더 산화하여 도파퀴논(Dopa quinone)을 형성하는 단계인 멜라닌 생합성의 초기단계를 촉매하는 효소로 이 효소의 활성은 멜라닌 생성에 중요한 영향을 미치게 된다. 따라서 하기에서는 피부 미백 활성을 결정하는 멜라닌 및 이와 관련된 인자들에 각 추출물들이 미치는 영향을 확인하는 실험을 수행하였다.

1) 그린토마토 물 추출물의 DOPA 산화 억제 활성 효능

상기 제조예의 그린토마토 물 추출물이 멜라닌 생합성 첫 단계에서 생성되는 디하이드록시페닐알라닌(Dihydroxyphenylalanine, DOPA) 산화 활성에 미치는 영향을 확인하는 실험을 수행하였다.

96well plate에 0.1 M phosphate buffer 60 uL, 5mM DOPA 60 uL, 농도별로 희석시킨 그린토마토 물 추출물 150 uL, 250 unit/mL tyrosinase 30 uL를 혼합하고 37℃에서 5분 반응시킨 뒤 475 nm에서 흡광측정하여 결과를 확인하였다.

그린토마토 물 추출물의 DOPA 산화 억제 활성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 1과 같이 그린 토마토 물 추출물의 농도 의존적으로 DOPA 산화 억제 활성이 증가하는 것을 확인하였다.

2) 병아리콩 물 추출물의 세포 내 티로시나제 저해 활성 효능

상기 제조예의 병아리콩 물 추출물이 Mus musculus 피부 흑색종(skin melanoma)인 B16/F10 세포에서 세포 내에 존재하는 티로시나제(tyrosinase) 효소에 미치는 영향을 확인하였다.

B16/F10 세포는 10% fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin-streptomycin (PEST)을 포함하는 dulbecco’s modified eagle’s medium (DMEM) 배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 세포배양하였다. 충분한 양의 세포가 배양되면 6well에 1 x 10⁵ cell/mL 로 분주 후 2일 배양하였으며, 1%가 포함된 DMEM 배지에 병아리콩 물 추출물을 0.5 mg/mL, 1 mg/mL 농도로 희석한 뒤 세포에 처리하고 3일 배양하였다. 3일 배양 후 cell scraper를 이용하여 세포를 모은 뒤 5000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하여 cell pellet을 확보하였다. Cell pellet을 lysis 시키기 위해 1% triton X-100을 포함하는 PBS를 200 uL 넣고 pipette를 이용하여 세포를 풀어준 뒤 3회 얼렸다 녹이는 과정을 통해 세포를 분해하였다. Cell lysis 과정이 끝나고 12,000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하여 상층액을 모아 cell lysate를 확보하였다. 96well plate에 0.1 M phosphate buffer 100 uL, 2.5 mM DOPA 40 uL, cell lysate 60 uL를 넣고 37℃에서 1시간 반응시킨 뒤 475 nm에서 흡광도를 측정하였다.

병아리콩 물 추출물의 세포 내 티로시나제 저해 활성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 2와 같이 병아리콩 물 추출물의 농도 의존적으로 세포 내 티로시나제 저해 활성이 증가하는 것을 확인하였다.

3) 우엉 물 추출물의 세포 내 멜라닌 생성 억제 효능

상기 실시예의 우엉 물 추출물이 Mus musculus 피부 흑색종(skin melanoma)인 B16/F10 세포에서 세포내 멜라닌(melanin) 생성량에 미치는 영향을 확인하였다.

B16/F10 세포는 10% fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin-streptomycin (PEST)을 포함하는 dulbecco’s modified eagle’s medium (DMEM) 배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂조건에서 세포배양하였다. 충분한 양의 세포가 배양되면 6well에 1 x 10⁵ cell/mL 로 분주 후 2일 배양하였으며, 1%가 포함된 DMEM 배지에 우엉 물 추출물을 0.5 mg/mL, 1 mg/mL 농도로 희석한 뒤 세포에 처리하고 3일 배양하였다. 3일 배양 후 cell scraper를 이용하여 세포를 모은 뒤 5000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하여 cell pellet을 확보하였다. Cell pellet에 1N NaOH 200 uL을 넣고 60℃에서 24시간동안 세포를 용해시킨 뒤 12,000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하고, 상층액을 덜어 96well plate에 100 uL씩 분주 후 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.

우엉 물 추출물의 세포 내 멜라닌 생성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 3과 같이 우엉 물 추출물의 농도를 증가시켜 처리함에 따라 세포 내 멜라닌 생성이 크게 억제하는 것을 확인하였다.

이와 같이 그린토마토 물 추출물은 미백 활성 관련인자인 멜라닌 생합성 첫 단계에서 생성되는 DOPA 산화 활성을 억제하고, 병아리콩 물 추출물은 세포 내 티로시나제 활성을 저해하고, 우엉 물 추출물은 세포 내 멜라닌 생성을 억제하는 것으로 나타났다. 이를 통해 각 추출물들은 피부 미백 활성에 효능이 있는 물질로 이용할 수 있음을 알았고, 하기에서는 각 추출물들의 복합물을 제조하여 복합적인 피부 미백 효능이 나타나는지를 확인하고자 하였다.

[실시예 : 그린토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물의 제조]

본 실시예에서는 상기 제조예에서 제조한 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물을 다른 배합비로 배합하여 복합물을 제조하였다.

이들의 배합비는 하기 표 1과 같이 나타냈다.

종류	배합비
그린토마토: 우엉 : 병아리콩	1:1:1
	1.5:1:1
	2:1:1

[실험예 2 : 그린토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물의 미백 활성 관련 효능 확인]

본 실험예에서는 상기 실시예에서 제조한 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 피부 미백 활성 관련 인자에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.

1) 복합물의 세포 내 티로시나제 저해 활성 효능

상기 실시예의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 Mus musculus 피부 흑색종(skin melanoma)인 B16/F10 세포에서 세포 내에 존재하는 티로시나제(tyrosinase) 효소에 미치는 영향을 확인하였다.

B16/F10 세포는 10% fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin-streptomycin (PEST)을 포함하는 dulbecco’s modified eagle’s medium (DMEM) 배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 세포배양하였다. 충분한 양의 세포가 배양되면 6well에 1 x 10⁵ cell/mL 로 분주 후 2일 배양하였으며, 1%가 포함된 DMEM 배지에 ‘그린토마토 : 우엉 : 병아리콩’이 ‘1 : 1 : 1’, ‘1.5 : 1 : 1’, ‘2 : 1 : 1’ 세가지 배합비로 배합된 소재를 0.5 mg/mL, 0.75 mg/mL, 1 mg/mL 농도로 희석한 뒤 처리하고 3일 배양하였다. 3일 배양 후 cell scraper를 이용하여 세포를 모은 뒤 5000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하여 cell pellet의 형태로 확보하였다. Cell pellet를 lysis 시키기 위해 1% triton X-100을 포함하는 PBS를 200 uL 넣고 pipette를 이용하여 세포를 풀어준 뒤 3회 얼렸다 녹이는 과정을 통해 세포를 분해하였다. Cell lysis 과정이 끝나고 12,000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하여 상층액을 모아 cell lysate를 확보하였다. 96well plate에 0.1 M phosphate buffer 100 uL, 2.5 mM DOPA 40 uL, cell lysate 60 uL를 넣고 37℃에서 1시간 반응시킨 뒤 475 nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 복합물의 세포 내 티로시나제 저해 활성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 4와 같이 0.5mg/mL 농도로 2:1:1의 비율로 배합된 복합물에서 대조군에 비해 세포 내 티로시나제 저해 활성이 증가한 것을 확인하였다.

2) 복합물의 세포 내 멜라닌 생성 억제 효능

상기 실시예의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물이 Mus musculus 피부 흑색종(skin melanoma)인 B16/F10 세포에서 세포 내 멜라닌(melanin) 생성량에 미치는 영향을 확인하였다.

B16/F10 세포는 10% fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin-streptomycin (PEST)을 포함하는 dulbecco’s modified eagle’s medium (DMEM) 배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 세포배양하였다. 충분한 양의 세포가 배양되면 6well에 1 x 10⁵ cell/mL 로 분주 후 2일 배양하였으며, 1%가 포함된 DMEM 배지에 ‘그린토마토 : 우엉 : 병아리콩’이 ‘1 : 1 : 1’, ‘1.5 : 1 : 1’, ‘2 : 1 : 1’ 세가지 배합비로 배합된 소재를 0.5 mg/mL, 0.75 mg/mL, 1 mg/mL 농도로 희석한 뒤 처리하고 3일 배양하였다. 3일 배양 후 cell scraper를 이용하여 세포를 모은 뒤 5000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하여 cell pellet을 확보하였다. Cell pellet에 1N NaOH 200 uL씩 넣고 60℃에서 24시간동안 세포를 용해시킨 뒤 12,000 rpm, 4℃에서 10분 원심분리하고, 96well plate에 200 uL씩 분주 후 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 복합물의 세포 내 멜라닌 생성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 5와 같이 복합물의 배합비에 상관없이 복합물의 농도를 증가시켜 처리함에 따라 세포 내 멜라닌 생성이 크게 억제하는 것을 확인하였고, 특히 2:1:1의 비율로 배합된 복합물에서 멜라닌 생성 억제 정도가 크게 나타나는 것을 확인하였다.

따라서 하기에서는 세포 내 티로시나제 저해 활성 증가와 멜라닌 생성 억제에 현저한 효과를 나타냈던 '그린토마토 : 우엉 : 병아리콩'이 '2 : 1 : 1'의 비율로 배합된 복합물을 사용하여 실험을 진행하였다.

3) 복합물의 티로시나제 저해 활성 효능

상기 실시예의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물 중 ‘그린토마토 : 우엉 : 병아리콩’ 이 '2 : 1 : 1 '의 비율로 배합된 복합물이 티로시나제 저해 활성에 미치는 영향을 확인하는 실험을 수행하였다.

96well plate에 0.1 M phosphate buffer 220 uL와 1.5 mM tyrosine 40 uL, ‘그린토마토 : 우엉 : 병아리콩’ 이 '2 : 1 : 1 '의 비율로 배합 및 농도별로 희석한 복합물 20 uL, 1,000 unit/mL tyrosinase 20 uL를 혼합하고 37℃에서 5분 반응시킨 뒤 475 nm에서 흡광측정하여 결과를 확인하였다.

상기 복합물의 세포 내 티로시나제 저해 활성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 6과 같이 복합물의 농도 의존적으로 티로시나제 저해 활성이 증가한 것을 확인하였다.

4) 복합물의 DOPA 산화 억제 활성 효능

상기 실시예의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물 중 ‘그린토마토 : 우엉 : 병아리콩’ 이 '2 : 1 : 1 '의 비율로 배합된 복합물이 멜라닌 생합성 첫 단계에서 생성되는 DOPA 산화 활성에 미치는 영향을 확인하는 실험을 수행하였다.

96well plate에 0.1 M phosphate buffer 60 uL와 5mM DOPA 60 uL, ‘그린토마토 : 우엉 : 병아리콩’ 이 '2 : 1 : 1 '의 비율로 배합 및 다양한 농도로 희석시킨 복합물 150 uL, 250 unit/mL tyrosinase 30 uL를 혼합하고 37℃에서 5분 반응시킨 뒤 475 nm에서 흡광측정하여 결과를 확인하였다.

상기 복합물의 DOPA 산화 억제 활성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 도 7과 같이 복합물의 농도 의존적으로 DOPA 산화 억제 활성이 증가하는 것을 확인하였다.

이상과 같이, 본 발명의 화장료 조성물은 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물을 함유함에 따라 세포내 멜라닌 생성 억제, 티로시나제 활성 저해, DOPA 산화 억제하여 피부 미백에 효능이 있는 것을 확인하였다. 이에 본원발명의 그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물의 복합물은 미백화장품의 원료로 사용가능한 물질임을 알 수 있다.

Claims

그린 토마토 물 추출물, 우엉 물 추출물 및 병아리콩 물 추출물이 2: 1: 1의 중량비로 조성된 복합물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 복합물은,
세포 내 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 복합물은,
티로시나제 효소 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 복합물은,
DOPA 산화를 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.