KR102175244B1

KR102175244B1 - 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물 및 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR102175244B1
Application number: KR1020180135156A
Authority: KR
Inventors: 서경혜; 김형돈; 이대영; 김금숙; 이승은; 최재훈; 박정용; 이지연; 장귀영
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2018-11-06
Filing date: 2018-11-06
Publication date: 2020-11-06
Also published as: KR20200052055A

Abstract

본 발명은 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 항산화 효과 및 총페놀함량이 현저히 우수한 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물에 관한 것이다.

Description

황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물 및 이의 제조 방법{antioxidant composition comprising Astragalus membranaceus and method of manufacturing the same}

생체가 살아가기 위해서는 영양분의 섭취는 물론, 활발하게 호흡을 하며 이 호흡을 통하여 들어간 산소가 영양성분을 연소시켜 에너지를 방출함으로써 육체적인 운동을 포함한 두뇌활동도 가능하게 되고, 이 때 소량의 활성산소종(ROS)들과 반응성이 큰 유리기가 생성되는데, 신체가 노화되거나 기타 내외적인 요인에 의해서 활성산소 및/또는 유리기에 의한 조직손상이 야기된다. 활성산소는 단백질의 SH기와 반응하여 효소의 활성을 잃게 하거나 가교결합의 형성, DNA, RNA, 효소 및 세포막을 구성하는 불포화 지방산을 산화시켜 과산화지질을 형성하게 된다. 이러한 과산화지질은 생체에 매우 유독하여 동맥경화, 혈액순환장애, 피로, 당뇨병, 심장병, 간장장애, 발암, 암전이 등과 같은 질병의 원인이 된다. 이러한 지질의 과산화를 막아주는 물질을 항산화물질이라 한다.

한편 황기(Astragalus membranaceus)는 콩과에 속하는 다년생 초본으로 우리나라의 중북부 지역에 자생하며 약용을 목적으로 널리 재배되고 있는바, 한방에서는 그 뿌리를 주로 약재로 사용하고 있으며 간장보호작용, 면역촉진작용, 항암작용, 강장작용, 이뇨작용 등의 효능이 있고, 항균활성, 항산화능, 다량의 폴리페놀물질 및 이소플라보노이드(Isoflavonoid) 함유에 따른 생리활성이 보고되었다.

대한민국공개특허 제10-2010-0082250호

본 발명은 아세틸콜린에스테라제(AchE), NMDA 수용체 및 부티릴콜린에스테라제(BuchE) 저해 활성 효과가 우수한 털여뀌 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지능력 개선, 및 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하는데 목적이 있다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 약학적 조성물을 유효성분으로 포함하는 인지능력 개선, 및 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 건강기능식품을 제공하는데 또 다른 목적이 있다.

본 발명은 털여뀌 추출물을 (1) 황기를 건조하는 단계, (2) 건조된 황기를 130 ~ 230℃의 온도로 열처리하는 단계, (3) 열처리된 황기를 분쇄하여 황기 분말을 제조하는 단계, 및 (4) 상기 황기 분말을 용매와 혼합하여 황기 추출물을 추출하는 단계를 포함하는 항산화 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 용매는 물 및 탄소수1 내지 탄소수4의 저급 알코올 중에서 선택된 적어도 어느 하나를 포함할 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2)단계는 25 ~ 35분 동안 수행될 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2)단계는 적어도 1회 반복 수행될 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2)단계는 150 ~ 230℃의 온도로 열처리될 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2)단계는 170 ~ 210℃의 온도로 열처리될 수 있다.

또한 본 발명은 130 ~ 230℃의 온도로 열처리된 황기로부터 추출된 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 황기 추출물은 30 ~ 300 μg/ml의 농도로 포함될 수 있다.

또한 본 발명은 본 발명에 따른 항산화 조성물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

또한 본 발명은 본 발명에 따른 항산화 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장품을 제공한다.

본 발명의 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물의 제조 방법에 따르면, 황기 추출물의 총페놀함량 및 항산화 효과를 현저히 향상시킬 수 있으며, 제조된 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물은 항산화 화장품 또는 건강기능식품으로 널리 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 조성물의 제조 방법의 순서도다.
도 2a는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 황기 추출물의 대식세포에 대한 독성 평가 결과를 도시한 그래프이다.
도 2b는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 황기 추출물의 신경세포에 대한 독성 평가 결과를 도시한 그래프이다.
도 2c는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에서 제조된 황기 추출물의 피부세포에 대한 독성 평가 결과를 도시한 그래프이다.
도 2d는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 황기 추출물의 대식세포에 대한 독성 평가 결과를 도시한 그래프이다.
도 2e는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 황기 추출물의 신경세포에 대한 독성 평가 결과를 도시한 그래프이다.
도 2f는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에서 제조된 황기 추출물의 피부세포에 대한 독성 평가 결과를 도시한 그래프이다.

본 발명은 총페놀함량 및 항산화 효과가 현저히 향상된 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하고자 한다.

용어 “조성물(composition)”은 본 발명의 황기 추출물에 희석제 또는 담체와 같은 다른 화학 성분들을 혼합한 혼합물을 의미한다.

용어 “담체(carrier)”는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.

용어 “희석제(diluent)”는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상적으로 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.

이하, 첨부한 도면을 참고로 하여 본 발명의 실시예에 대하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 항산화 조성물의 제조 방법에 대하여 설명한다.

먼저 (1)단계로서, 황기를 건조한다. 황기를 건조함으로써 황기 내 수분을 제거할 수 있다. 상기 황기 건조 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 건조 방법을 사용할 수 있으며, 일예로 열풍 건조, 일광 건조 또는 동결 건조일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

다음으로 (2)단계로서, 상기 황기를 130 ~ 230℃의 온도로 열처리한다.

상기 황기를 열처리함으로써 황기 분말 내 총페놀함량 및 항산화 특성을 현저히 향상시킬 수 있다.

만일 상기 열처리 온도가 130℃ 미만일 경우, 제조되는 황기 추출물의 항산화특성 및 총페놀함량이 현저히 저하될 수 있으며, 230℃를 초과할 경우, 황기 분말이 탄화되거나, 황기 분말 내 유효성분이 파괴되는 등 본 발명의 목적을 달성하기에 어려울 수 있다.

더욱 바람직하게는 상기 열처리 온도는 150 ~ 230℃, 더욱 더 바람직하게는 170 ~ 210℃일 수 있다. 만일 상기 황기 분말을 150 ~ 230℃의 온도로 열처리할 경우, 제조되는 황기 추출물 내 총페놀함량 및 항산화 특성이 더욱 향상될 수 있고, 170 ~ 210℃의 온도로 열처리할 경우 제조되는 황기 추출물 내 총페놀함량 및 항산화 특성이 더욱 더 향상될 수 있다.

또한, 제조되는 황기 추출물의 항산화 특성을 더욱 향상시키기 위해서 상기 열처리는 25 ~ 35분 동안 수행될 수 있다.

또한, 상기 (2)단계의 수행이 적어도 1회 반복 수행될 수 있으며, 상기 (2)단계를 반복 수행함에 따라 제조되는 황기 추출물 내 총 플라보노이드 함량이 증가할 수 있다.

제조되는 황기 추출물의 항산화 특성을 저하시키지 않으면서, 상기 황기 추출물 내 총 플라보노이드 함량 및 총페놀 함량을 증가시키기 위해서 상기 (2)단계는 1회 반복 수행되는 것이 바람직할 수 있다.

먼저 (3)단계로서, 열처리된 황기를 분쇄하여 황기 분말을 제조한다.

상기 황기는 당업계에서 공지된 약초의 분쇄방법을 이용하여 분쇄될 수 있으며, 일예로 일반 가정용 분쇄기를 이용 하였으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 황기 분말은 0.1 내지 2cm의 입경 크기를 가질 수 있으며, 이에 따라 후술되는 (4)단계를 통해 제조되는 황기 추출물의 항산화 특성이 향상될 수 있다.

다음으로 (4)단계로서 상기 황기 분말을 용매와 혼합하여 황기 추출물을 추출한다.

상기 용매는 물 및 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 중에서 선택된 적어도 어느 하나를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 물, 또는 물과 에탄올로 이루어질 수 있다.

상기 황기 추출물의 추출 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 약초의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 일예로 용매와 단순 혼합하여 교반하는 방법을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 황기 추출물은 추출된 후 상기 용매를 제거하여 분말 형태로 수득될 수 있으며, 상기 용매를 제거하는 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 용매 제거 방법, 일예로 진공여과법을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

다음으로 본 발명에 따른 항산화 조성물에 대하여 설명한다.

본 발명의 항산화 조성물은 130 ~ 230℃의 온도로 열처리된 황기로부터 추출된 황기 추출물을 유효성분으로 포함한다.

상기 항산화 조성물은 상술한 온도 범위에서 열처리된 황기로부터 추출된 황기 추출물을 포함함으로써 항산화 특성이 현저히 우수할 수 있다.

또한 상기 항산화 조성물은 상기 황기 추출물을 30 ~ 300 μg/ml의 농도로 포함할 수 있으며, 만일 상기 황기 추출물이 30 μg/ml 미만의 농도로 포함될 경우, 목적하는 수준의 항산화 특성을 발현하기에 어려울 수 있고, 300 μg/ml를 초과하는 농도로 포함될 경우, 황기 추출물의 세포 독성이 증가할 우려가 있다.

또한 본 발명은 본 발명에 따른 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

상기 건강기능식품 조성물의 종류에는 통상적으로 제조 및/또는 판매되는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있고 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

상기 건강 음료 조성물은 본 발명에 따른 황기 추출물을 함유하는 것 외에는 액체성분에는 특별한 제한은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

통상적으로, 건강기능식품에 포함되는 황기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.1~20 중량%, 바람직하게는 0.1~10 중량%로 포함될 수 있다. 또한, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수도 있다.

이하, 본 발명의 항산화 조성물을 함유하는 건강기능식품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<제조예 1>

황기 추출물 200 ㎎

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B 1 0.13 ㎎

비타민 B 2 0.15 ㎎

비타민 B 6 0.5㎎

비타민 B 12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

또한, 본 발명에 따른 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물은 화장품에 활용될 수 있으며, 상기 화장품은 화장수류, 에센스류, 크림류, 팩류, 패치류, 피부접착용 겔류, 파운데이션류, 메이크업베이스류 등의 다양한 제형으로 제조될 수 있고, 통상적인 화장료 제조법에 적용시킬 수 있다. 구체적으로 액상, 크림상, 페이스트상 및 고체상 등 다양한 성상으로 적용이 가능하며, 이들 각 제형에 적합하고 당업계에 주지된 각종의 통상적인 보조제와 담체를 포함할 수 있다.

이하, 본 발명의 황기 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<제조예 2>

에틸 알코올 4.00 중량%

메틸 파라벤 0.10 중량%

향 0.10 중량%

수소처리된 캐스터 오일 0.60 중량%

DL-α-토코페릴 아세테이트 0.02 중량%

글리세린 5.00 중량%

1,3-부틸렌 글리콜 3.00 중량%

하이드록시 에틸 셀룰로오스 0.20 중량%

잔탄검 0.40 중량%

E.D.T.A-2Na 0.02 중량%

피쉬-콜라겐 4.00 중량%

황기 추출물 0.5~2.0 중량%

증류수 잔량

이하 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 또한 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경이 가능함은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

(실시예 1)

황기를 건조한 후 건조된 황기를 140℃에서 30분 동안 열처리하였다. 열처리된 황기를 분쇄하여 황기 분말을 제조하였다. 다음으로, 제조된 황기 분말을 용매(에탄올 70부피% + 물 30부피%)와 혼합한 후 상온에서 24시간 동안 교반하고, 용매를 제거하여 황기 추출물을 수득하였다.

(실시예2)

실시예1과 동일하게 실시하되, 160℃의 온도에서 열처리를 수행하였다.

(실시예3)

실시예1과 동일하게 실시하되, 180℃의 온도에서 열처리를 수행하였다.

(실시예4)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 20분 동안 열처리를 수행하였다.

(실시예5)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하였다.

(실시예6)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하되, 동일한 조건에서 1회 반복 수행하였다.

(실시예7)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하되, 동일한 조건에서 2회 반복 수행하였다.

(실시예8)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하되, 동일한 조건에서 3회 반복 수행하였다.

(실시예9)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 40분 동안 열처리를 수행하였다.

(실시예10)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 50분 동안 열처리를 수행하였다.

(실시예11)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 60분 동안 열처리를 수행하였다.

(실시예12)

실시예1과 동일하게 실시하되, 220℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하였다.

(실시예13)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하였으며, 용매로 에탄올 수용액 대신 물을 사용하였다.

(실시예14)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하되, 동일한 조건에서 1회 반복 수행하였다. 또한 용매로 에탄올 수용액 대신 물을 사용하였다.

(실시예15)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하되, 동일한 조건에서 2회 반복 수행하였다. 또한 용매로 에탄올 수용액 대신 물을 사용하였다.

(실시예16)

실시예1과 동일하게 실시하되, 200℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하되, 동일한 조건에서 3회 반복 수행하였다. 또한 용매로 에탄올 수용액 대신 물을 사용하였다.

(비교예 1)

실시예1과 동일하게 실시하되, 열처리를 수행하지 않았다.

(비교예 2)

실시예1과 동일하게 실시하되, 100℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하였다.

(비교예 3)

실시예1과 동일하게 실시하되, 열처리를 수행하지 않았으며 용매로 에탄올 수용액 대신 물을 사용하였다.

(비교예 4)

실시예1과 동일하게 실시하되, 100℃의 온도에서 30분 동안 열처리를 수행하였으며 용매로 에탄올 수용액 대신 물을 사용하였다.

(실험예1)

실시예 및 비교예에서 제조된 황기 추출물의 총페놀함량(total phenol content: TPC), 총 플라보노이드 함량(total flavonoid content: TFC) 및 항산화활성을 측정하였다.

1) 총페놀함량 측정

황기 추출물에 0.05N folin을 3분간 한 후 20% Na₂CO₃를 1시간 반응하여 725 nm흡광도에서 측정하였다. 실시예 및 비교예에서 제조된 황기 추출물 내 총페놀함량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

2) 총 플라보노이드 함량 측정

황기 추출물에 60 μl 5% NaNO₂를 넣고 6분 뒤 10% AlCl을 넣어 37 ℃에서 5분 반응시킨 후 510 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 실시예 및 비교예에서 제조된 황기 추출물 내 총 플라보노이드 함량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

3) 항산화 활성 측정

항산화 활성은 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl(DPPH) 및 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS) 소거능으로 측정하였다.

DPPH 소거활성은 공지된 논문(Blois ML, Nature, 181 (1958) 1199-1224)의 방법을 이용하여 측정하였다. DPPH(Sigma, MO, USA)에 대한 시료 용액과의 전자 공여 효과에 의해 DPPH 라디칼이 감소하는 정도를 분광광도계(Biotek instrument, WT, USA)로 측정하였다. 황기 추출물을 10 ~ 1000 μg/ml 농도로 포함하는 항산화 조성물 0.5 ml를 취하고 0.1mM DPPH 용액 1 ml를 가하고, 볼텍스를 이용하여 혼합한 후 상온에서 30분 동안 반응시켜 520 nm에서의 흡광도를 측정하였다.

다음으로, ABTS 소거활성 측정은 ABTS 7mM과 과황화칼륨(potassium persulfate) 2.45 mM을 증류수에 용해하고, 12시간 동안 암실에 방치하여 ABTS 양이온 라디칼을 생성시켰다. 라디칼이 형성된 ABTS 용액 1ml에 황기 추출물을 10 ~ 1000μg/ml 농도로 포함하는 항산화 조성물(3 ml)을 가하여 6분 동안 반응시킨 후, 734 nm에서 흡광도 값을 측정하였다.

흡광도 측정 결과를 통해 산출된 IC₅₀ 값을 하기 표 1에 나타내었다.

구분	열처리 조건			추출 용매	TPC(mg/g)	TFC(mg/g)	IC₅₀값(μg/ml)
구분	온도 (℃)	시간 (분)	처리횟수 (회)	추출 용매	TPC(mg/g)	TFC(mg/g)	DPPH	ABTS
비교예1	열처리 수행하지 않음.		0	E70	12.25±0.35	검출되지 않음.	2613.7±81.5	643.3±4.4
비교예2	100	30	1	E70	-	-	2189.1±95.0	332.6±13.4
실시예1	140	30	1	E70	17.96±0.40	-	714.2±2.3	226.2±10.3
실시예2	160	30	1	E70	23.80±0.32	-	561.2±5.9	186.0±0.5
실시예3	180	30	1	E70	36.47±0.25	-	333.6±14.1	76.6±4.5
실시예4	200	20	1	E70	54.62±0.99	-	493.5± 9.4	63.3± 1.1
실시예5	200	30	1	E70	59.90±0.54	4.79±0.20	177.9±12.2	30.8±2.2
실시예6	200	30	2	E70	57.30±0.80	5.95±0.31	139.1±6.9	37.9±1.1
실시예7	200	30	3	E70	55.31±0.48	6.89±0.41	117.7±9.4	40.1±1.5
실시예8	200	30	4	E70	55.61±0.52	7.22±0.36	131.8±4.1	35.5±0.6
실시예9	200	40	1	E70	59.83±0.40	-	433.4± 13.6	60.3±1.1
실시예10	200	50	1	E70	59.10±0.66	-	410.8± 13.5	65.6±0.2
실시예11	200	60	1	E70	56.49±0.71	-	432.8± 11.5	66.8±1.7
실시예12	220	30	1	E70	33.90±0.38	-	368.9±12.7	69.0±0.6
비교예3	열처리 수행하지 않음.		0	W	13.42±0.36	-	3125.1±82.7	1130.0±26.9
비교예4	100	30	1	W	-	-	1833.7±49.1	612.0±6.7
실시예13	200	30	1	W	42.47±1.96	1.85±0.16	305.1±13.6	68.5±3.7
실시예14	200	30	2	W	39.06±0.81	2.40±0.13	397.4±3.9	69.5±3.5
실시예15	200	30	3	W	37.30±1.40	2.50±0.15	524.3±9.8	58.8±4.7
실시예16	200	30	4	W	36.65±0.54	2.50±0.11	518.0±22.1	65.7±2.1
* 추출용매에 있어서, E70은 에탄올을 70부피%로 포함하는 에탄올 수용액이고, W는 물이다.

상기 표 1을 참조하면, 황기 분말에 대하여 열처리를 수행하지 않을 경우(비교예1), TPC가 현저히 낮고, 항산화 활성 또한 현저히 낮은 것을 확인할 수 있다. 또한, 열처리를 수행할지라도 열처리 온도가 100℃일 경우(비교예2) 항산화 활성이 현저히 낮은 것을 확인할 수 있다. 한편, 열처리 온도가 140℃일 경우, 비교예2보다 항산화 활성이 현저히 증가한 것을 확인할 수 있으며, 추출 용매로 물보다 에탄올 수용액을 사용할 경우, TPC, TFC 및 항산화 활성이 더욱 향상되는 것을 확인할 수 있다. 또한 열처리 횟수가 증가할수록 총 플라보노이드 함량이 증가하는 것을 확인할 수 있다.

(실험예2) 세포 독성 평가

세포 독성 측정은 대식세포-Raw 264.7, 신경세포-PC12, 피부세포-HDF를 5000 cells/㎖ 비율로 96 well plate에 분주한 다음 24시간 배양한 후, 황기 추출물을 12.5, 25, 50, 100 및 200 μg/ml의 농도로 포함하는 항산화 조성물을 처리하고 24시간 배양하고 MTS를 처리한 후 490 nm 파장에서 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 흡광도를 측정하였다.

세포 독성 측정 결과는 도 1a 내지 도 1f에 도시하였다.

도 2a 및 도 2b는 각각 대식세포-Raw 264 및 신경세포-PC12에 대하여 실시예5, 실시예6, 실시예7 및 실시예8에서 제조된 황기 추출물을 포함하는 시료로 처리하였을 때의 세포 독성 측정 결과를 도시한 것이다.

도 2c는 피부세포-HDF에 대하여 비교예1, 실시예5, 실시예6, 실시예7 및 실시예8에서 제조된 황기 추출물을 포함하는 시료로 처리하였을 때의 세포 독성 측정 결과를 도시한 것이다.

도 2d 및 도 2e는 각각 대식세포-Raw 264.7 및 신경세포-PC12에 대하여 실시예13, 실시예14, 실시예15 및 실시예16에서 제조된 황기 추출물포함하는 시료로 처리하였을 때의 세포 독성 측정 결과를 도시한 것이다.

도 2f는 피부세포-HDF에 대하여 비교예3, 실시예13, 실시예14, 실시예15 및 실시예16에서 제조된 황기 추출물포함하는 시료로 처리하였을 때의 세포 독성 측정 결과를 도시한 것이다.

도 2a 내지 도 2f 참조하면, 황기 추출물은 12.5~200 ㎍/ml 농도에서 세포 독성이 현저히 낮은 것을 확인할 수 있다.

Claims

(1) 황기를 건조하는 단계;
(2) 건조된 황기를 200℃에서 30분간 1 ~ 4회 열처리하는 단계;
(3) 열처리된 황기를 0.1 ~ 2 cm의 입경 크기로 분쇄하여 황기 분말을 제조하는 단계; 및
(4) 상기 황기 분말을 70% 에탄올 수용액과 혼합하여 황기 추출물을 추출하는 단계;
를 포함하는 플라보노이드 및 폴리페놀 함량이 증대된 항산화용 조성물의 제조 방법.
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황기 추출물을 유효성분으로 포함하는, 플라보노이드 및 폴리페놀 함량이 증대된 항산화용 건강기능식품 조성물로서,
상기 황기 추출물은 (1) 황기를 건조하는 단계;
(2) 건조된 황기를 200℃에서 30분간 1 ~ 4회 열처리하는 단계;
(3) 열처리된 황기를 0.1 ~ 2 cm의 입경 크기로 분쇄하여 황기 분말을 제조하는 단계; 및
(4) 상기 황기 분말을 70% 에탄올 수용액과 혼합하여 황기 추출물을 추출하는 단계;로 추출된 것인,
플라보노이드 및 폴리페놀 함량이 증대된 항산화용 건강기능식품 조성물.
황기 추출물을 유효성분으로 포함하는, 플라보노이드 및 폴리페놀 함량이 증대된 항산화용 화장료 조성물로서,
상기 황기 추출물은 (1) 황기를 건조하는 단계;
(2) 건조된 황기를 200℃에서 30분간 1 ~ 4회 열처리하는 단계;
(3) 열처리된 황기를 0.1 ~ 2 cm의 입경 크기로 분쇄하여 황기 분말을 제조하는 단계; 및
(4) 상기 황기 분말을 70% 에탄올 수용액과 혼합하여 황기 추출물을 추출하는 단계;로 추출된 것인,
플라보노이드 및 폴리페놀 함량이 증대된 항산화용 화장료 조성물.