KR101962209B1

KR101962209B1 - 간 질환 치료를 위한 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체의 용도

Info

Publication number: KR101962209B1
Application number: KR1020187008005A
Authority: KR
Inventors: 라파엘 다르떼일; 레미 앙프; 딘 움; 잉그리드 뒤푸르
Original assignee: 장피트
Priority date: 2009-11-26
Filing date: 2010-11-26
Publication date: 2019-03-26
Also published as: AU2010323066B2; JP5833016B2; LT2641596T; CN104434891B; WO2011064350A1; PT2504005E; DK2504005T3; BR112012012815B8; KR20180031825A; BR112012012815A8; ZA201204658B; US20140309165A1; HUE039731T2; AU2010323066A1; JP2018070642A; EP2504005B1; SI2504005T1; CA2781451A1; BR112012012815A2; DK2641596T3

Abstract

본 발명은 간 질환, 특히 아미노트랜스페라아제와 같은 생화학적 마커의 혈장 수준 감소를 필요로 하는 질환을 치료하기 위한 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 하기 일반식 (I)의 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체는 간손상보호 특성을 가지며, 이는 간 세포의 병리학적 붕괴, 염증, 변성 및/또는 증식을 포함하는 간 질환, 예컨대 간 섬유증 또는 지방 간 질환의 치료 방법에 사용될 수 있다:

Description

간 질환 치료를 위한 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체의 용도{USE OF 1,3-DIPHENYLPROP-2-EN-1-ONE DERIVATIVES FOR TREATING LIVER DISORDERS}

본 발명은 약학 조성물의 제조에서 그리고 간 질환의 치료 방법에서 간손상보호 효과를 갖는 화합물의 용도에 관한 것이다.

문헌 [Washington Manual of Medical Therapeutics(31^st ed.; 2004; Lippincott Williams & Wilkins)]에 따르면, 간 질환은 다양한 질환 군, 특히 바이러스 질환, 약물- 및 알코올-연관 간 질환, 면역-매개 간 질환, 대사성 간 질환, 기타 질환, 예컨대 비-알코올성 지방 간 질환, 및 간부전(예컨대 전격간기능상실 또는 간세포암종) 및 간 이식의 합병증으로 분류될 수 있다.

특히, 비-알코올성 지방 간 질환(NAFLD)은 알코올을 전혀 또는 거의 소비하지 않는 개체에서 알코올-유도 지방 간 질환의 조직학적 특징을 갖는 흔한 간 질환이다(Yeh M et al., 2007; Marchesini G et al., 2003). NAFLD는 간이 지질 대사를 일차적으로 담당하기 때문에 간에서 더욱 흔한 사건인 세포내 지질의 비정상적인 보유(통상적으로 지방증으로서 정의됨)로 인한 것이다. NAFLD는 간 세포의 파괴로 인한 간 염증, 지방증, 괴사 및 섬유증을 특징으로 하는 비-알코올성 지방간염(NASH) 및 간 지방증을 포함하는 조직학적 형태의 스펙트럼을 갖는다. NAFLD와 관련된 상태는 다양하며, 여기에는 제II유형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 대사 증후군, 간독성 약물, 독소, 감염제, 또는 기타 외인성 요인으로의 처치가 포함된다.

NAFLD가 전형적으로 양성의, 비-진행적 임상 경과를 따르더라도, NASH는 잠재적으로 심각한 상태이며; 환자들의 25%는 후기 섬유증, 경화증 및 문맥고혈압, 간부전 및 간세포암종의 경험 합병증으로 진행될 수 있으며, 이는 조기의 올바른 평가가 의무적이 되도록 하였다(Yeh M et al, 2007).

간 이미지화 시스템은 또한 간 구조 및 지방증의 존재를 평가하는데 유용하다. 그러나, 간 생검이 간 섬유증의 평가를 위한 절대적 표준으로 남아있지만, 이러한 분석방법은 이들의 침습성으로 인해 모든 단일 연구에 대해 수행될 수는 없었다. 간 생화학 및 대사의 비 침습성 평가가 종종 NAFLD 및 NASH와 같은 간 질환을 정의하는데 사용된다(Gressner A et al., 2009; Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009). 혈장을 사용함으로써, 알라닌 아미노트랜스페라아제(ALAT), 아스파테이트 아미노트랜스페라아제(ASAT), 알칼리 포스파타아제(AP) 및/또는 감마 글루타밀 트랜스펩티다아제(GGT)와 같은 효소의 높은 수준, 뿐만 아니라 기타 간 기원의 단백질들(합토글로빈, 총 빌리루빈, 알파-2-마이크로글로불린, 레시스틴, 분할된 또는 미손상 사이토케라틴-18을 포함함)의 존재가 통상적으로 혈청 글루코오스 및 인슐린 저항성 파라미터에 부가하여 측정된다. ALAT 활성 수준이 NASH 환자에서 종종 증가하므로(Angulo P et al, 2002), 상기 기준은 간 손상을 평가하기 위한 대리 마커로서 고려된다. 실제로, 신뢰할만한 비-침습성 방법은 NAFLD 또는 NASH를 정확하게 진단하는데 이용할 수 없으며, 심지어 조직학적 특징이 NAFLD 또는 NASH를 알코올성 간 질환과 같은 다른 상태와 적절하게 구별하는데 항상 충분한 것은 아니다(Yeh M et al., 2007, Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009).

간 섬유증 질환, 특히 NAFLD 및 NASH에 대한 효과적인 치료 수단은 여전히 불충분하다. NASH 환자에 대한 치료가 수립되어 있지 않으며, 여러 치료적 옵션들이 임상 실험에서 시험중이다(Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009, Dowman J.K et al., 2009). 상기 연구에는 많은 상이한 계열의 화학 화합물(피브레이트, 티아졸리딘디온, 비구아나이드, 스타틴, 칸나비노이드) 및 치료적 표적(핵 수용체, 안지오텐신 수용체, 칸나비노이드 수용체, HMG-CoA 리덕타아제)의 사용이 포함된다. 최근에, 티아졸리딘디온(로시글리타존 및 피오글리타존)에 관련된 연구에 따르면, 상기 약물이 간 상태를 개선할 수 있으나, 상기 약물에 의한 치료는 울혈성 심부전 및 골다공증의 더 높은 위험 뿐만 아니라 환자에게 심리적 영향을 미치는 체중 증가와 같은 원치않는 영향이 있다는 것을 입증하였다(Dowman J.K et al., 2009; Shiri-Sverdlov R et al., 2006; Neuschwander-Tetri et al., 2003). 칸나비노이드의 투여를 포함하는 임상 실험은 신경정신병학적 붕괴의 우려를 높였다(Vuppanchi R and Chalasani N, 2009). 현재 시행중인 다른 요법들은 항산화제로서 NASH 약물에서 평가하는 것을 찾고 있으나, 상기 치료들 중 어느 것도 아직 확실한 결과를 보여주지 않는다(Nelson A et al., 2009).

간 질환, 특히 간 섬유증 및/또는 지방증을 포함하는 간 질환의 관리를 위한 신규한 치료 옵션이 여전히 명백하고 시급하게 필요하다.

본 발명의 요약

임상 연구에서 놀랍게도 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체에 의한 환자의 치료가 혈장 내 간-특이적 생화학적 마커의 통계학적으로 적절한 감소를 제공한다는 점이 나타났으며, 이에 따라 일반식 (I)에 의해 정의된 화합물의 계열의 간손상보호 특성을 입증하였다.

본 발명은 간 질환, 특히 아미노트랜스페라아제와 같은 생화학적 마커의 혈장 수준의 증가를 초래하는 질환의 치료 방법에 사용하기 위한, 일반식 (I)의 신규한 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체(상기 유도체는 다른 곳에서 또한 "화합물"로서 언급됨) 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일반식 (I)의 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물은 간손상보호 특성을 가지며, 간 세포의 병리학적 붕괴, 염증, 변성 및/또는 증식을 포함하는 간 질환, 예컨대 간 섬유증, 지방 간 질환 및 비-알코올성 지방간염의 치료 방법에 사용될 수 있다.

본 발명의 추가 목적은 관심대상의 화합물의 특정 일반식을 포함하며, 이는 상세한 설명에 제시된다.

하기의 약어들이 도면 및 본문에 사용된다:
- ALAT = 알라닌 아미노트랜스페라아제
- CCL5 = 케모카인(C-C 모티프) 리간드 5
- Col1a1 = 콜라겐, 유형 I, 알파 1
- Cpd 1 = WO2007/147879의 화합물 1
- Cpd 29 = WO2004/005233의 화합물 29
- Ctrl = 대조군 또는 비히클
- Feno = 페노피브레이트
- HDL = 고밀도 지단백질
- LDL = 저밀도 지단백질
- NAFLD = 비-알코올성 지방 간 질환(non-alcoholic fatty liver disease)
- NASH = 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis)
- PPAR = 페록시좀 확산 활성화 수용체
- Rosi = 로시글리타존
- RT-PCR= 역전사 폴리머라아제 연쇄 반응
- TGFβ = 형질전환 성장 인자 베타
- TNFα = 종양 괴사 인자 알파
도 1: 일반식 (I)의 예시적 화합물의 구조
일반식 (I)의 예시적 화합물은 일반식 (II)(패널 A), 일반식 (IV)(패널 B), 및 일반식 (V)(패널 C)의 더욱 특이적인 정의에 따라 그룹화된다.
도 2: 일반식 (I)의 화합물의 항-염증 특성의 ob/ob 마우스에서의 생체내 평가
일반식 (I)의 화합물을 유형 II 당뇨병의 쥣과 모델인 ob/ob 마우스에서 시험하였다. WO2004/005233의 화합물 29를 2개의 상이한 투여량(10 및 30 mg/kg/일) 으로, 원형의(prototypical) PPAR알파- 및 PPAR감마-특이적 참조 화합물(각각, 페노피브레이트는 100mg/kg/일, 및 로시글리타존은 10mg/kg/일)을 마우스에게 매일 경구로 처리하였다. 처리 26일 후, 동물을 희생시키고, 혈장 샘플과 간을 수확하였다. 간 염증 과정에 연루되어 있는 것으로 알려진 유전자의 간 발현을 평가하였으며, ALAT의 혈장 수준을 측정하였다(패널 A-C). 통계적 관련성을 정의하는 3개의 p 값(*은 p<0.05; **은 p<0.01; ***은 p<0.001)을 갖는 비대응표본 T-검정을 사용하여, 통계 분석을 수행하였다.
도 3: 일반식 (I)의 화합물의 항-염증 및 항-섬유증 특성의 hApoE2 KI 마우스에서의 생체내 평가
일반식 (I)의 화합물을 고지방 식이 마우스 모델에서 생체 내에서 시험하였다. 이상지질혈증 "인간화" ApoE2 녹-인(knock-in) 마우스(hApoE2 KI)에게 웨스턴 식이를 공급하고, 12주 동안 처리하였다. WO2004/005233의 화합물 29를 포함하는 관심대상의 화합물 0.3 mg/kg/일 및 페노피브레이트 100 mg/kg/일(참조 화합물로서 사용됨)을 상기 식이 내에 도입하였다. 프로토콜 종결시, 동물을 희생시키고, 간을 수확하고, 정량적 RT-PCR에 의해 간 염증 및 섬유증 과정에 연루되는 것으로 알려진 유전자의 간 발현을 평가하였다(패널 A-D). 도 1에 대해 표시된 바와 같이 통계 분석을 수행하였다.
도 4: 일반식 (I)의 화합물의 항-염증 및 항-지방증 특성의 hApoE2 KI 및 hApoE2 KI / PPAR알파 KO 마우스에서의 생체내 평가
일반식 (I)의 화합물을 고지방 식이 마우스 모델에서 생체 내에서 시험하였다. PPAR알파에 대해 결핍된 이상지질혈증 "인간화" hApoE2 KI에게 웨스턴 식이를 공급하고, 6주 동안 처리하였다. WO2004/005233의 화합물 29를 포함하는 관심대상의 화합물 30 mg/kg/일 및 WO2007/147879의 화합물 1 30 mg/kg/일을 위관영양법에 의해 경구 투여하였다. 프로토콜 종결시, 동물을 희생시키고, 간을 수확하고, 정량적 RT-PCR에 의해 간 염증 및 섬유증 과정에 연루되는 관련 유전자의 간 발현을 평가하였다. 동시에, 간 트리글리세라이드 함량을 평가하였다(패널 A-D). 도 1에 대해 표시된 바와 같이 통계 분석을 수행하였다.

본 발명의 상세한 설명

본 발명은 간 질환을 치료하기 위한 일반식 (I)의 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물의 신규한 치료 용도 및 투여 방법을 제공한다. 두 페닐기에서 치환된 특이적 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체는 간 질환의 치료에 유용한 것으로 실시예에 따라 정의될 수 있으며, 그 이유는 상기 화합물이 인간 대상 및 동물 모델에서 간 염증 뿐만 아니라 간 세포의 붕괴, 변성 및/또는 증식의 특이적 마커를 놀라운 방식으로 감소시킴에 따라 간손상보호 효과를 제공할 수 있기 때문이다.

본 발명에 따라 사용되고 투여되며 본 발명에 따른 조성물에 포함되는 화합물은 하기 일반식 (I)을 갖는다:

(식 중:

X1은 할로겐, R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;

A는 CH=CH 또는 CH2-CH2 기를 나타내고;

X2는 G2-R2 기를 나타내고;

동일 또는 상이한 G1 및 G2는 산소 또는 황 원자를 나타내고;

R1은 수소 원자, 비치환된 알킬기, 하나 이상의 할로겐 원자, 알콕시 또는 알킬티오기, 시클로알킬기, 시클로알킬티오기 또는 헤테로시클릭기로 치환된 알킬기 또는 아릴기를 나타내고;

R2는 적어도 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은 수소 원자, 또는 하나 이상의 할로겐 원자, 시클로알킬기 또는 헤테로시클릭기로 치환되거나 치환되지 않은 알킬기를 나타내고;

동일 또는 상이한 R4 및 R5는 하나 이상의 할로겐 원자, 시클로알킬기 또는 헤테로시클릭기로 치환되거나 치환되지 않은 알킬기를 나타냄).

특정 구현예에서, 일반식 (I)의 화합물은 X1 및 X2 위치에서 적어도 알킬옥시기 또는 알킬티오기로 치환된다. 또한, 유도체는 상응하는 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체의 환원에 의해 수득되는 치환된 1,3-디페닐프로파논의 형태일 수 있다.

특정 구현예에서, X1은 G1-R1 기이고, 더욱 바람직하게는 G1은 황 원자이고, R1은 하나 이상의 할로겐 원자, 시클로알킬기, 헤테로시클릭기로 치환되거나 치환되지 않은 선형 또는 분지형 알킬기이다. 더욱 더 바람직하게는, X1은 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은, 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형인 알킬기를 포함하는 알킬티오기이다. 바람직한 구현예에서, X1은 메틸티오기이다.

특정 구현예에서, X2는 G2-R2 기이고, 여기서 G2는 산소 원자이고, R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기이고, 식 중 R3은 수소 원자 또는 1 내지 7 개의 탄소 원자, 더욱 바람직하게는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는, 비치환된 선형 또는 분지형 알킬기를 나타낸다. 바람직한 구현예에서, R4 및 R5 둘다는 메틸기를 나타낸다.

또한, 동일 또는 상이한 R4 및 R5는 바람직하게는 1 내지 7 개의 탄소 원자, 더욱 바람직하게는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 선형 분지형, 알킬기이다.

본 발명의 문맥에서, 용어 "알킬"은 바람직하게는 1 내지 24 개, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형인 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 테르티오(tertio)부틸, sec-부틸, 펜틸, 네오펜틸 또는 n-헥실을 말한다.

용어 "알킬옥시"는 산소 원자에 의해 화합물의 나머지에 연결되는 알킬기를 말한다.

용어 "알킬티오"는 황 원자에 의해 화합물의 나머지에 연결되는(티오에테르 결합) 알킬기를 말한다.

용어 "시클로알킬"은 바람직하게는 3 내지 14 개의 탄소 원자, 더욱 바람직하게는 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 하나의 사이클을 형성하는 알킬기, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸을 지칭한다.

용어 "시클로알킬티오"는 황 원자에 의해 화합물의 나머지에 연결되는(티오에테르 결합) 시클로알킬기를 말한다.

용어 "아릴"은 바람직하게는 6 내지 14 개의 탄소 원자를 갖는, 치환되거나 치환되지 않은 방향족 기, 예컨대 페닐, a-나프틸, b-나프틸, 비페닐 또는 안트라세닐을 말한다.

용어 "헤테로시클릭"은 헤테로시클로알킬기 또는 헤테로아릴기를 말한다.

용어 "헤테로시클로알킬" 기는 질소, 산소 또는 황 중에서 선택된 1 또는 수 개의 헤테로원자를 추가로 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 시클로알킬을 말한다. 이들은 일반적으로 4 내지 14 개의 탄소 원자를 포함한다(예컨대 모르폴리닐, 피페리디닐, 테트라히드로피라닐, 디티올라닐).

용어 "헤테로아릴"은 질소, 산소 또는 황 중에서 선택된 1 또는 수 개의 헤테로원자를 추가로 포함하는 상기 정의된 바와 같은 아릴기를 말한다. 이들은 일반적으로 4 내지 14 개의 탄소 원자를 포함한다(예컨대 푸라닐, 티오페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 퀴놀레이닐, 이소퀴놀레이닐).

할로겐 원자는, 브롬, 염소, 불소 또는 요오드 원자로 이해된다.

두 개의 페닐기에서 치환된 상이한 계열의 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체 및 1,3-디페닐프로파논은 종래 기술에서 발견될 수 있다(WO2003/037315, WO2001/046110, JP2006-303800, JP04-202129). 그러나, 상기 문헌들 중 어느 것도 특이적 간손상보호 효과가 일반식 (I)의 화합물과 관련이 있다는 점을 보여주지 않는다.

일반식 (I)에 포함되는 화합물의 구조, 합성 및 일부 활성들은 일련의 특허 출원들(WO2004/005243, WO2004/005233, WO2005/005369, US20070032543, WO2005/073184, WO2007/147879 및 WO2007/147880)에 기재되어 있으며, 이는 간 질환의 치료 방법에서의 상기 화합물의 용도에 대해서는 개시하지 않고 있다.

본 발명에 사용될 수 있고 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 일반식 (I)의 특이적 1,3-디페닐프로프-2-엔-1-온 유도체는 WO2004/005243 및 WO2004/005233에 기재된 화합물로부터 선택될 수 있으며, 특히 다음과 같다:

화합물 15로서 기재된, 1-[4-클로로페닐]-3-[3,5-디메틸-4-이소프로필옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 16으로서 기재된, 1-[4-클로로페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 17로서 기재된, 1-[4-클로로페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 27로서 기재된, 1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 28로서 기재된, 1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-이소프로필옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 29로서 기재된, 1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 32로서 기재된, 1-[4-헥실옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 33으로서 기재된, 1-[4-헥실옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 38로서 기재된, 1-[4-헵틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 39로서 기재된, 1-[4-헵틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 40으로서 기재된, 1-[4-브로모페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온;

화합물 41로서 기재된, 1-[4-브로모페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온.

본 발명의 추가의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되고 투여될 수 있으며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 WO2004/005243 및 WO2004/005233에 기재된 화합물(본원에서 일반식 (II)의 화합물로서 언급됨)은 하기 일반식 (I)을 갖는다:

(식 중:

X1은 할로겐, R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;

A는 CH=CH 기를 나타내고;

X2는 G2-R2 기를 나타내고;

동일 또는 상이한 G1 및 G2는 산소 또는 황 원자를 나타내고;

R1은 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 알킬 또는 시클로알킬기, 특히 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 알킬 또는 시클로알킬기를 나타내고;

R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은 수소 원자 또는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;

R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타냄).

WO2005/005369 및 US20070032543에는 또한 일반식 (I) 뿐만 아니라 일반식 (II)에 따른 화합물의 구조 및 대안적인 합성 방법이 기재되어 있으며, 특히 다음과 같다:

1-[4-트리플루오로메틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시 페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 57)

1-[4-트리플루오로메틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 58)

1-[4-트리플루오로메틸옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시 페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 61)

1-[4-트리플루오로메틸옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 62).

본 발명에 따라 사용되고 투여되며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 화합물의 부가적인 예는 WO2005/073184에 기재된 화합물로부터 선택될 수 있으며, 특히 다음과 같다:

화합물 1로서 기재된, 1-(4-(펜틸티오에틸옥시)페닐)-3-(4-tert-부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 2로서 기재된, 1-(4-(펜틸티오에틸옥시)페닐)-3-(4-카르복시디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 5로서 기재된, 1-(4-((R,S)-5-[1,2]디티올란-3-일펜틸옥시)페닐)-3-(4-tert-부틸옥시카르보닐디메틸 메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 6으로서 기재된, 1-(4-((R,S)-5-[1,2]디티올란-3-일펜틸옥시)페닐)-3-(4-카르복시디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 10으로서 기재된, 1-(4-시클로헥실에틸옥시페닐)-3-(4-tert-부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 11로서 기재된, 1-(4-시클로헥실에틸옥시페닐)-3-(4-카르복시디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 22로서 기재된, 1-(4-시클로헥실티오에틸옥시페닐)-3-(4-tert-부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 23으로서 기재된, 1-(4-시클로헥실티오에틸옥시페닐)-3-(4-카르복시디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 32로서 기재된, 1-(4-페닐옥시페닐)-3-(4-tert-부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온;

화합물 33으로서 기재된, 1-(4-페닐옥시페닐)-3-(4-카르복시디메틸메틸옥시-3,5-디메틸페닐)프로프-2-엔-1-온.

본 발명의 추가의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되고 투여될 수 있고 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 WO2005/073184에 기재된 화합물(본원에서 일반식 (III)의 화합물로서 언급됨)은 하기 일반식 (I)을 갖는다:

(식 중:

X1은 G1-R1 기를 나타내고;

A는 CH=CH 기를 나타내고;

X2는 G2-R2 기를 나타내고;

G1 및 G2는 산소 원자를 나타내고;

R1은 하나 이상의 알킬티오, 시클로알킬, 시클로알킬티오기 또는 헤테로시클로알킬기로 치환되거나 치환되지 않은 시클로알킬, 아릴 또는 알킬기, 또는 알킬티오기를 나타내고;

R2는 적어도 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은 수소 원자 또는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;

R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타냄).

본 발명에 따라 사용되고 투여되며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 화합물의 부가적인 예는 WO2004/005243, WO2004/005233, WO2005/005369, US20070032543 또는 WO2005/073184에 기재된 화합물로부터 선택될 수 있고, 이는 상응하는 치환된 1,3-디페닐프로파논의 형태로 환원될 수 있다.

따라서, 본 발명에 따라 사용되고 투여될 수 있으며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 화합물은 WO2007/147879에 기재된 화합물로부터 선택될 수 있으며, 특히 하기와 같다:

화합물 1로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 6으로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메톡시)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 7로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]에탄산;

화합물 8로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(프로필옥시)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 13으로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸 프로판산 이소프로필 에스테르.

본 발명의 추가의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되고 투여될 수 있으며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 WO2007/147879에 기재된 화합물(본원에서 일반식 (IV)의 화합물로서 언급됨)은 하기 일반식 (I)을 갖는다:

(식 중:

X1은 R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;

A는 CH2-CH2 기를 나타내고;

X2는 G2-R2 기를 나타내고;

G1은 산소 또는 황 원자를 나타내고, G2는 산소 원자를 나타내고;

R1은 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 알킬 또는 시클로알킬기를 나타내고;

R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타냄).

WO2007/147879와 유사하게, WO2007/147880에는 WO2004/005243, WO2004/005233, WO2005/005369, US20070032543 또는 WO2005/073184에 기재되었던 화합물들의 환원된, 치환된 1,3-디페닐프로파논 유도체에 상응하며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 화합물이 기재되어 있으며, 특히 하기와 같다:

화합물 1로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(트리플루오로메틸옥시)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸-프로판산;

화합물 2로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(트리플루오로메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 3으로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-브로모페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 4로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 11로서 기재된, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(3,3,3-트리플루오로프로필옥시)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산;

화합물 12로서 기재된, 2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)페닐)프로필)페녹시)-2-메틸프로판산;

화합물 13으로서 기재된, 2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(2,2,2-트리플루오로에틸티오)페닐)프로필)페녹시)-2-메틸프로판산;

화합물 29로서 기재된, 2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)페녹시)프로판산;

화합물 34로서 기재된, 4-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)페녹시)-2,2-디메틸부탄산;

화합물 35로서 기재된, 2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)페녹시)-2-메틸 프로판산 테르티오부틸 에스테르;

화합물 36으로서 기재된, 2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)페녹시)-2-메틸프로판 이소프로필 에스테르;

화합물 37로서 기재된, 2,2-디플루오로-2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)페녹시)아세트산.

본 발명의 추가의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되고 투여될 수 있으며 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 WO2007/147880에 기재된 화합물(본원에서 일반식 (V)에 따른 화합물로서 언급됨)은 하기 일반식 (I)을 갖는다:

(식 중:

X1은 할로겐 원자 또는 R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;

A는 CH2-CH2 기를 나타내고;

X2는 G2-R2 기를 나타내고;

R1은 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 알킬 또는 시클로알킬기를 나타내고;

R2는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않고 적어도 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은 수소 원자 또는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;

R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타냄).

본 발명에 따라 가장 바람직하게 사용되고 투여될 수 있고, 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 화합물은 일반식 (II), 일반식 (IV) 또는 일반식 (V)에 따라 정의된 화합물이며, 특히 하기와 같다:

1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(WO2004/005233의 화합물 29);

1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-이소프로필옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(WO2004/005233의 화합물 28);

1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(WO2004/005233의 화합물 27);

1-[4-트리플루오로메틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 57)

1-[4-트리플루오로메틸옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 61)

1-[4-트리플루오로메틸옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(US20070032543의 화합물 62)

2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산(WO2007/147879의 화합물 1);

2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸-프로판산 이소프로필 에스테르(WO2007/147879의 화합물 13);

2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(트리플루오로메틸옥시)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산(WO 2007147880의 화합물 1);

2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(트리플루오로메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산(WO 2007147880의 화합물 2);

2-(2,6-디메틸-4-(3-옥소-3-(4-(트리플루오로메틸옥시)페닐)프로필)페녹시)-2-메틸프로판산 tert-부틸 에스테르(WO 2007147880의 화합물 35).

본 발명은 일반식 (I)의 화합물 및 이를 포함하는 관련 약학 조성물의 특정 용도를 제공한다. 상기 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태이거나 아닐 수 있고, 간 질환의 치료를 위해 치료학적 유효량으로 사용된다. 일반식 (II), 일반식 (III), 일반식 (IV) 또는 일반식 (V)에 따라 정의된 임의의 화합물(이들 화학식들은 일반식 (I)에 포함됨)은, 특히 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물의 형태로, 간 질환의 치료를 위해 본 발명에서 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 일반식 (I)의 화합물을 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 간 질환의 치료 방법을 제공한다:

식 중,

X1은 할로겐, R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;

A는 CH=CH 또는 CH2-CH2 기를 나타내고;

X2는 G2-R2 기를 나타내고;

동일 또는 상이한 G1 및 G2는 산소 또는 황 원자를 나타내고;

R1은 수소 원자, 비치환된 알킬기, 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 아릴기 또는 알킬기, 알콕시 또는 알킬티오기, 시클로알킬기, 시클로알킬티오기 또는 헤테로시클릭기를 나타내고;

R2는 적어도 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은 수소 원자, 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 알킬기, 시클로알킬기 또는 헤테로시클릭기를 나타내고;

동일 또는 상이한 R4 및 R5는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 알킬기, 시클로알킬기, 헤테로시클릭기를 나타냄.

또한, 식 중 X1, X2, A, G1, G2, R1, R2, R3, R4 및 R5가 일반식 (II), 일반식 (III), 일반식 (IV) 또는 일반식 (V)에 따라 정의되는 화합물을 포함하는 조성물은 간 질환의 치료 방법을 수행하는데 사용될 수 있다.

용어 "간 질환"은 간에 영향을 주는 임의의 질환, 특히 간 세포의 병리학적 붕괴, 염증, 변성 및/또는 증식을 포함하는 임의의 급성 또는 만성 간 질환을 포함한다. 특히, 간 질환은 간세포 손상, 변형 또는 괴사의 일부 마커들의 혈장내 수준이 정상 혈장 수준에 비해 증대되어 있는 간 섬유증, 간 경화증 또는 임의의 기타 간 질환이다. 간 활성 및 상태와 연관되는 상기 생화학적 마커는 문헌에 개시된 것들, 특히 알라닌 아미노트랜스페라아제(ALAT), 아스파테이트 아미노트랜스페라아제(ASAT), 알칼리 포스파타아제(AP), 감마 글루타밀 트랜스펩티다아제(GGT), 사이토케라틴-18(CK-18) 또는 레시스틴 중에서 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 간 질환은 간 생검에 의해 확인될 수 있는 바와 같이 상기 마커들 중 하나 이상의 증가가 간에서의 다소 유의적인 지방증과 연관되어 있는 지방 간 질환이다. 지방 간 질환의 비제한적인 목록에는 NAFLD, NASH, 및 간염 또는 대사 증후군(비만, 인슐린 저항성, 과트리글리세라이드증 등)과 같은 질환과 연관되는 지방 간 질환이 포함된다.

용어 "간손상보호" 또는 "간손상보호성"은 특히 간 세포(예컨대 헤파토사이트)의 병리학적 붕괴, 염증, 변성 및/또는 증식을 감소, 역전 또는 방지함으로써 간에 대한 손상을 감소, 역전 또는 방지하기 위한 화합물의 능력을 말한다.

용어 "치료" 또는 "치료하기"는 질환, 특히 간 질환의 요법, 방지 및 예방을 말한다. 치료는 질환의 진행을 치유, 지체 또는 둔화시키기 위해 선언된 질환을 앓는 환자에게 화합물 또는 약학 조성물을 투여하여, 환자의 상태를 개선하는 것을 포함한다. 치료는 또한 간 질환 발달의 위험이 있는 건강한 대상에게 투여할 수 있다.

본 발명의 문맥상, 용어 "대상(subject)"은 포유동물, 특히 인간을 의미한다. 본 발명에 따라 치료되는 대상은 이전 약물 치료, 관련 병리학, 유전형, 위험인자에 대한 노출, 바이러스 감염, 뿐만 아니라 면역학적, 생화학적, 효소적, 화학적 또는 핵산 검출 방법에 의해 평가될 수 있는 임의의 기타 관련 생마커와 같이 간 질환과 연관되는 여러 기준들에 근거하여 적합하게 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 대상은 과체중 환자(특히, 과체중 전당뇨병 또는 당뇨병 환자) 또는 아테롬성 이상지질혈증을 앓는 비만 환자이다. 실제로, 상기 환자는 간 질환, 특히 NAFLD 또는 NASH이 진행될 위험이 있다. 본 발명자들은 상기에 정의된 화합물이 이러한 환자의 간 기능에 유리한 영향을 준다는 것을 입증하였다.

일반식 (I)의 화합물은 1 또는 수 개의 비대칭 중심을 함유할 수 있다. 거울상이성질체적으로 순수한(또는 풍부한) 화합물이 바람직한 경우, 이것은 당업자에게 알려진 전형적인 방법에 따라(예를 들어, 반응성이고 키랄인 촉매를 사용함으로써) 최종 생성물 또는 키랄 중간체의 정제에 의해 수득되거나, 또는 비대칭적 합성에 의해 수득될 수 있다. 상기 화합물들 중 일부는 상이한 안정한 토토머 형태를 가질 수 있다. 본 발명은 일반식 (I)의 화합물의 입체이성질체(부분입체이성질체, 거울상이성질체), 순수체 또는 혼합체 뿐만 아니라 라세믹 혼합물 및 기하학적 이성질체의 사용을 포함한다.

일반식 (I)의 화합물은 일반식 (I)의 화합물의 유기 또는 무기 염기 또는 산으로부터 수득된 약간- 또는 무-독성의 염인, "약학적으로 허용가능한" 염으로서 제형화될 수 있다. 상기 염은 화합물의 최종 정제 단계 동안 수득되거나, 또는 염을 미리 정제된 화합물 내로 도입함으로써 수득될 수 있다.

간 질환의 치료를 위한 일반식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물은 약학적 문맥 내에서 허용가능한 1 또는 여러 개의 부형제 또는 비히클(예를 들어, 약학적 용도에 적합하고 당업자에게 잘 알려져 있는 식염수, 생리학적 용액, 등장성 용액 등)을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 분산제, 가용화제, 안정화제, 보존제 등 중에서 선택되는 1 또는 여러 개의 제제 또는 비히클을 포함할 수 있다. 상기 제형(액체 및/또는 주사용 및/또는 고체)에 유용한 제제 또는 비히클은 특히 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리소르베이트 80, 만니톨, 젤라틴, 락토오스, 식물성 오일, 아카시아, 리포좀 등이다. 상기 조성물은 결국 지효성 및/또는 서방성 방출을 확보하기 위한 생약 형태 또는 장치에 의해, 주사용 현탁액, 젤, 오일, 알약, 좌제, 파우더, 젤 캡, 캡슐, 에어로졸 등의 형태로 제형화될 수 있다. 상기 종류의 제형의 경우, 셀룰로오스, 카보네이트 또는 전분과 같은 제제가 유리하게 사용될 수 있다.

일반식 (I)의 화합물은 상기 정의된 바와 같은 약학 조성물을 사용함으로써 화합물을 유효량으로 투여해야 한다. 본 발명의 문맥에서, 용어 "유효량"은 원하는 치료적 결과를 산출하는데 충분한 화합물의 양을 말한다.

일반식 (I)의 화합물은 상기 화합물을 치료적 유효량으로 투여할 수 있게 하는 상이한 방식과 상이한 형태로 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 이들은 전신적 방식으로, 경구로, 비경구로, 흡입에 의해, 또는 주사에 의해, 예컨대 정맥내로, 근육내 경로에 의해, 피하 경로에 의해, 경피 경로에 의해, 동맥내 경로 등에 의해 투여될 수 있다. 경구 투여는 간 질환의 치료를 위해 일반식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 투여하는 우선적인 경로이다.

투여와 연관되는 빈도 및/또는 투여량은 환자, 병리학, 투여형태 등의 작용으로 당업자에 의해 조정될 수 있다. 전형적으로, 일반식 (I)의 화합물은 투여 당 0.01 mg 내지 1 g, 바람직하게는 투여 당 1 mg 내지 100 mg의 투여량으로 간 질환의 치료를 위해 투여될 수 있다. 투여는 일일 1회 또는 필요하다면 심지어 일일 수회 수행될 수 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 유리하게는 대사 질환 및/또는 간 질환의 치료를 위해 현재 시판되거나 또는 개발중인 다른 치료제들, 예컨대 메트포르민, 인슐린, 티아졸리딘디온, 글리타존, 스타틴, 콜레스테롤 억제제 및/또는 기타 지질 저하 약물과 조합하여 투여될 수 있다.

추가의 구현예에서, 본 발명은 일반식 (I)의 화합물, 특히 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물의 형태를 투여하는 단계를 포함하는 간 질환의 치료방법을 제공한다. 이러한 방법은 일반식 (II), 일반식 (III), 일반식 (IV) 또는 일반식 (V)에 따라 정의되는 임의의 화합물의 투여를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 일반식 (I)의 화합물의 간손상보호 효과로 인해 간 질환, 특히 NAFLD 및 NASH를 비롯한 지방 간 질환의 치료를 위한 유리한 치료 도구를 제공한다. 특히, 상기 화합물은 X1, X2, A, G1, G2, R1, R2, R3, R4 및 R5가 일반식 (II), 일반식 (III), 일반식 (IV) 또는 일반식 (V)에 따라 정의된 화합물들 중에서 선택될 수 있다. 본 발명의 추가 목적은 지방 간 질환의 치료방법에 사용하기 위한 전술한 일반식 (I)의 화합물, 특히 일반식 (II), (III), (IV) 및 (V)의 화합물에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 치료대상이 되는 특이적 간 질환은 간 섬유증 또는 지방 간 질환과 같이 전술한 질환이다. 또다른 구현예에서, 상기 방법에 사용하기 위한 화합물은 상기 구체적으로 기술된 화합물이다.

일반적으로, 일반식 (I)의 화합물의 간-특이적 특성은 포함시에 NAFLD 및/또는 NASH와 같은 간 질환을 나타내는 특이적 환자 집단에서 평가될 수 있다. 예를 들어, 이중 맹검, 플라세보-대조군의, 랜덤화된 연구는 NAFLD(오직 지방증) 및/또는 NASH(지방증 및 섬유증)로 진단되고 증가된 아미노트랜스페라아제 수준을 나타내는 대상에서 3 내지 12 개월 동안 화합물의 경구 투여(80 mg/일 이상의 투여량)의 효능을 평가할 수 있다. 이미지화 기법 또는 간 생검의 조직학적 특성에 의해 측정된(지방증, 간 염증 및 섬유증의 측정) 간 지방증의 체적에 대한 주요 생화학적 파라미터(예컨대, 아미노트랜스페라아제, GGT 및/또는 사이토케라틴-18 수준의 감소 및/또는 레시스틴 수준의 감소)에 대해 임의의 통계적으로 관련된 향상을 연구 동안(매달 또는 그 이상의 빈도 기준으로) 상기 환자에서 정기적으로 평가할 수 있다. 부가적인 파라미터, 예컨대 총/LDL-/HDL-콜레스테롤, 혈류역학 파라미터, 체질량지수, 인슐린 저항성, 염증 또는 산화 스트레스의 마커, 혈장 인슐린 및 글루코스, 소변 내 신장 기능의 마커, MRI에 의한 간 이미지화, 및/또는 간 생검에서의 조직형태학은 또한 간 질환의 치료를 위한 화합물의 효능 프로파일을 완결시키기 위해 연구 동안 및/또는 연구 종결시 측정될 수 있다.

본원에서 인용된 모든 참조문헌들은 그 전체가 참조로서 전체적으로 인용된다. 이제 본 발명을 완전히 설명하면서, 당업자는 본 발명의 취지 또는 범주 또는 이의 임의의 구현예에 영향을 주지 않으면서 넓고 동등한 범주의 조건, 파라미터 등 내에서 본 발명이 실시될 수 있다는 점을 이해할 것이다. 본 발명의 여러 다른 장점들은 하기 실시예를 파악함으로서 상기될 것이며, 실시예는 제한적 데이터가 아닌 예증적 데이터로서 간주되어야만 한다.

실시예

실시예 1: 간-특이적 생화학 지수에 대한 일반식 (I)의 화합물의 효과

재료 및 방법

1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온(WO2004/005233의 Cpd 29)을 5, 10 또는 20 mg의 화합물을 함유하는 경질 쉘 캡슐로서 제형화하였다. 화합물(80 mg)을 경구로 매일 1회 28일 동안 투여하였다. 연구는 2개의 동시 그룹에서 이중 맹검 상태: 플라세보 또는 WO2004/005233의 Cpd 29로 수행하였다.

1일 1회 투여의 용인성 및 안정성 뿐만 아니라, 플라세보와 비교한 혈장 지질 및 글루코스 항상성 향상의 효능을, 관련 생화학적 파라미터들을 사용하여 2회 시범(two pilot) 실험으로 평가하였다. 데이터를 사용하여, 치료 28일 후 플라세보와 비교하였을 때 화합물로 인한 변화%를 계산하였다.

결과 및 결론:

WO2004/005233의 Cpd 29의 경구 투여량(80 mg/일의 투여량)의 1일 1회 투여의 용인성 및 안정성 뿐만 아니라, 혈장 트리글리세라이드 및 HDL-콜레스테롤에 대한 효능(1차 목적)을 평가하기 위하여, 아테롬성 이상지질혈증 및 복부 비만 환자에서 첫번째 시범, 이중 맹검, 플라세보 대조군의, 랜덤화 연구를 수행하였다.

플라세보 그룹에 비해, 상기 화합물의 치료 효능은 혈장 트리글리세라이드의 통계적으로 유의적인 21%(p<0.01) 감소 및 좋은 콜레스테롤(HDL-C) 수준의 9%(p<0.01) 증가로서 입증되었다. 상기 대사성 영향은 동일한 환자 집단에서 피브레이트(fibrate)로 공개된 영향에 필적하였다. 또한, 상기 화합물은 호모시스테인(공지된 심혈관 위험인자)에 대해 현저한 효과 결핍을 나타내었다. 상기 화합물은 피브리노겐 및 합토글로빈과 같은 간 급성 상 염증 마커의 감소를 비롯한 다중 이차 평가 기준에 대해 유의한 효과를 나타냈다(p<0.01). 간 기능의 생화학적 파라미터에 대한 효과를 또한 측정하였으며, WO2004/005233의 Cpd 29의 경구 투여량 투여는 예상치 않게 통계적으로 유의적인 감마 글루타밀 트랜스펩티다아제 수준의 23% 감소(p<0.001) 및 알라닌 아미노트랜스페라아제 수준의 13% 감소(p<0.01)를 야기하였다.

WO2004/005233의 Cpd 29의 경구 투여량(80 mg/일의 투여량)의 1일 1회 투여의 용인성 및 안정성 뿐만 아니라, 글루코스 및 지질 대사에 대한 효능을 평가하기 위하여, 공복혈당장애, 내당능장애 및 복부 비만 환자에서 두번째 시범, 이중 맹검, 플라세보 대조군의, 랜덤화 연구를 수행하였다.

플라세보 그룹에 비해, 상기 화합물의 치료 효능은 통계적으로 유의적인 공복 혈장 글루코스(-5%, p<0.05), 공복 인슐린혈증(-25%, p<0.01) 및 인슐린 저항성 지수, HOMA-IR(-31%, p<0.01)의 감소로서 입증되었다. 동시에, WO2004/005233의 Cpd 29는 HDL-C(+9%, p<0.01)는 증가시면서 혈장 트리글리세라이드(-25%, p<0.001) 및 LDL-C를 감소시켰다. 상기 화합물은 합토글로빈과 같은 간 급성 상 염증 마커의 감소를 비롯한 다중 이차 평가 기준에 대해 유의적인 효과를 보였다(p<0.01). 간 기능의 생화학적 파라미터들을 또한 계산하였으며, WO2004/005233의 Cpd 29의 경구 투여량 투여는 통계적으로 감마 글루타밀 트랜스펩티다아제 수준의 15% 감소(p<0.01)를 야기하였다.

상기 결과는 일반식 (I)의 화합물의 경구 제형이 환자에게 잘 용인될 뿐만 아니라, 간 효소, 인슐린 민감성, 지질 대사 및 간 염증 마커를 포함하는 NAFLD 및 NASH와 관련된 다중 생화학적 파라미터들에 대해 양성 효과를 가진다는 것을 입증하였다. 특히, WO2004/005233의 Cpd 29는 NAFLD 및 NASH 환자에서 증가된 간 기능이상의 2개의 공통적인 특이적 생마커인 ALAT 및 GGT의 혈장 수준을 유의적으로 감소시킨다.

실시예 2: 일반식 (I)의 화합물의 간-특이적 특성을 시험하기 위한 동물 모델

재료 및 방법

동물 모델 및 처리: ob/ob 마우스

수컷 ob/ob 마우스(8주령)를 Charles River(L'Arbresle, France)에서 구입하고, 20±3℃의 일정한 온도에서 12시간 광/암 주기로 유지하였다. 1주 순응 후, 마우스를, 실험 전에 측정된 이들의 체중 및 이들의 6시간 공복 당혈증의 분포가 균일하도록, 8마리 동물의 그룹으로 분리하였다. 동물들에게 표준 먹이 식이(R03, SAFE)를 공급하고, 관심대상의 화합물로 26일 동안 처리하였다. WO2004005233의 화합물 29(Cpd 29, 10 또는 30 mg/kg/일), 페노피브레이트(100 mg/kg/일) 및 로시글리타존(10 mg/kg/일)을 포함하는 화합물을 위관영양법에 의해 매일 투여하였다. 대조군 동물은 오직 비히클로만(카복시메틸셀룰로오스 1% + Tween-80 0.1%) 처리하였다. 동물을 먹이 및 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

동물 모델 및 처리: hApoE2 녹-인(knock-in) 마우스에서의 연구

암컷 hApoE2 녹-인(KI) 유전자이식 마우스(Sullivan et al., 1998)(4주령). 마우스를 20±3℃의 일정한 온도에서 12시간 광/암 주기로 유지하였다. 1주 순응 후, 마우스를, 실험 전에 측정된 이들의 체중 및 혈장 지질 수준의 분포가 균일하도록, 7 내지 10 마리 동물의 그룹으로 분리하였다. 동물에게 이유 및 12주 동안 웨스턴 식이(20% 포화지방 및 0.2% 콜레스테롤, Harlan Teklad TD88137)를 공급하였다. 관심대상의 화합물(Cpd 29, 0.3 mg/kg/일 및 페노피브레이트, 100 mg/kg/일)을 웨스턴 식이(SAFE, Augy, France)에 도입하였으며, 마우스에게 12주 동안 투여하였다. 대조군 동물에게는 오직 웨스턴 식이만 공급하였다. 동물을 먹이 및 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

동물 모델 및 처리: hApoE2 KI 및 hApoE2 KI PPAR알파 KO 마우스에서의 연구

암컷 hApoE2 녹-인(KI) 및 hApoE2 KI/PPAR알파 녹-아웃(KO) 연령-매치 유전자이식 마우스(제1실험에 대해서는 8 내지 25 주령 및 제2실험에 대해서는 10 내지 14 주령). hApoE2 KI/PPAR알파 KO 마우스는 동형접합 hApoE2 KI 마우스(Sullivan P et al., 1998)와 동형접합 PPAR알파 결핍 마우스(Lee et al., 1995)의 교배에 의해 생성되었다. 마우스를 20±3℃의 일정한 온도에서 12시간 광/암 주기로 유지하였다. 1주 순응 후, 마우스를, 실험 전에 측정된 이들의 연령, 체중 및 혈장 지질 수준의 분포가 균일하도록, 4-6 마리 동물의 그룹으로 분리하였다. 동물에게 Cpd 29의 매일 투여(경구 위관영양법에 의해 30 mg/kg/일)를 포함하여 첫번째 연구에서 2주 동안, WO2007147879의 화합물 1의 매일 투여(Cpd1, 경구 위관영양법에 의해 30 mg/kg/일)를 포함하여 두번째 연구에서 6주 동안, 웨스턴 식이(20% 포화지방 및 0.2% 콜레스테롤, Harlan Teklad TD88137)를 공급하였다. 대조군 동물은 오직 비히클로만(카복시메틸셀룰로오스 1% + Tween-80 0.1%) 처리하였다. 동물을 먹이 및 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

동물 모델로부터 수득된 생물학적 샘플의 제조

연구 말기에, 동물을 칭량하고 마취하에 희생시켰다. 후안와동으로부터 혈액을 수집하였으며; 원심분리(4000 rpm, 4℃에서 15분 동안)에 의해 혈장을 수득하고, 이어서 동결시키고 -20℃에서 보관하였다. 조직 및 간을 단리하고 액체 질소에서 순간 동결시키고, 후속 분석(유전자 발현 및 생화학)을 위해 -80℃에서 보관하거나 조직학을 위해 4% 파라포름알데하이드 내에 고정하였다.

혈장 분석

알라닌 아미노트랜스페라아제 수준을 RX Daytona™ 자동화 분석기(Randox) 및 적합한 투여 키트(Randox, cat# AL 3801)를 사용하여 혈장 내에서 측정하였다.

유전자 발현 분석

제조자의 지침에 따라 NucleoSpin® 96 RNA 키트(Macherey Nagel)를 사용하여 냉동 간으로부터 총 RNA를 단리하였다. 1시간 동안 37℃에서 30 ㎕의 총부피로, 1㎕의 MMLV-RT 효소(Invitrogen)의 작용에 의해 1㎍의 총 RNA에 대해 역전사를 수행하였다. 반응 조건은 1X 완충액(Invitrogen), 1.5 mM DTT(Invitrogen), 0.18 mM dNTPs(Promega), 200 ng pdN6(Amersham), 30U RNase 억제제(Promega)였다. 이어서, MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System(Biorad)을 사용하여 정량적 PCR을 실시하였다. 요약하면, PCR 반응을 iQ SYBR Green Supermix 키트를 사용하여 5 ㎕의 희석된 역전사 믹스에 대해 96 웰 플레이트에서 실시하였다. 반응 조건은 다음과 같았다: 25 ㎕의 반응액 부피, 3 mM의 MgCl2, 및 0.5 ㎕의 각각의 역방향 및 정방향 프라이머 용액(10 pMol), 60℃의 Tm. 각각의 표적 유전자의 특이적 증폭을 위해 디자인된 프라이머 쌍을 표 1에 요약한다.

유전자	역방향 프라이머(5'-3')	정방향 프라이머(5'-3')
36B4	GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG(SEQ ID NO:1)	CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC(SEQ ID NO:2)
TNF알파	AGGTACAACCCATCGGCTGG(SEQ ID NO:3)	CGTCGTAGCAAACCACCAAGTG(SEQ ID NO:4)
TGF베타	TGGTTGTAGAGGGCAAGGAC(SEQ ID NO:5)	TTGCTTCAGCTCCACAGAGA(SEQ ID NO:6)
CCL5	CACACTTGGCGGTTCCTTCG(SEQ ID NO:7)	CCCTCACCATCATCCTCACTGC(SEQ ID NO:8)
Col1a1	GCCAGGAGAACCAGCAGAG(SEQ ID NO:9)	AGGCGAACAAGGTGACAGAG(SEQ ID NO:10)

방출된 형광의 양은 반응 시작시에 존재하고 PCR 동안 증폭된 상보적 DNA의 양에 직접적으로 비례한다. 상대적 발현 수준을 각각의 전사물에 대한 표준 곡선을 사용하여 측정하였다. 이후 결과를 36B4 대조군(간 유전자 발현에 대한 참조 전사물)으로 수득된 신호에 대해 표준화하였다. 이어서, 유도 인자, 즉 본 발명에 따른 화합물에 의해 유도된 상대적 신호와 대조군 그룹에 대한 값의 평균 사이의 비를 각각의 샘플에 대해 계산하였다. 상기 인자가 높을수록, 화합물이 표적 유전자 발현을 더욱 촉진한다. 최종 결과는 각각의 실험 그룹 내 유도 값의 평균으로서 나타낸다.

간의 조직학적 분석

포리말린-고정된 간 조직을 가공하였으며, 5-㎛-두께의 파라핀 섹션을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 염색된 간 섹션의 조직학적 분석을 간 지방증 및 간 소엽내 염증을 정량화하기 위해 맹검 상태에서 실행하였다. 간 지방증을 하기와 같이 0 내지 3으로 점수를 매겼다: 0(매우 약간 영향을 받음), 1(약간 영향을 받음), 2(어느 정도 영향을 받음), 3(크게 영향을 받음). 간 소엽내 염증을 또한 관찰 시야에 의해 계산되는 염증 병소의 수에 따라 하기와 같이 점수를 매겼다: 0(1 미만의 병소/시야), 1(1 내지 2의 병소/시야), 2(2 내지 4의 병소/시야) 3(4 초과의 병소/시야).

간 지질 분석

대략 100 mg의 냉동 간 조직을 15.4 mM NaN3을 함유하는 150 mM NaCl 완충액 중에서 조직 호모게나이저(Precellys®24, Bertin Technologies, France)로 균질화하였다. 균질현탁액 내 지질 분획을 클로로포름-메탄올(2:1, v/v)로 추출한 후, 총 콜레스테롤(콜레스테롤 RTU™ 61218 키트, Biomerieux, France를 사용함) 및 참 트리글리세라이드(TR0100 키트, Sigma-Aldrich)의 측정을 수행하였다.

결과 및 결론

병인학, 질환 발달, 및 인간 간 질환의 병리학을 반영하기 때문에, 문헌에 여러 동물 모델들이 개시되어 있다. 그러나, 상기 모델들이 항상 특이적 간 질환과 연관되는 조직-병리학적 및 병리-생리학적 특징들의 범위를 나타내는 것은 아니다. 최근 검토된 바와 같이(Fan J and Qiao L, 2009), 이것은 특히 유전적(유전자이식 마우스에서), 영양적(래트 또는 마우스에서), 또는 혼합된 모델이 수립된 NAFLD 또는 NASH의 경우에 명백하다.

NASH는 지방증 및 간 염증에서 간 변성, 섬유증 및 경화증까지의 범위의 간의 병리학적 변화를 특징으로 한다. NASH의 발병은 거의 이해되지 않은 채로 남아있다. 이는 대사 증후군의 성분이고, 이에 따라 종종 고지질혈증과 연관된다. 다양한 유전자이식 동물 모델들이 일반식 (I), 더욱 구체적으로는 일반식 (I) 및 일반식 (IV)의 예시적 화합물들의 효과를 특징화하기 위해 사용되었다: 인슐린-저항성, 렙틴 결핍 ob/ob 마우스 및 이상지질혈증 hApoE2 녹-인 마우스(이것은 PPAR알파 유전자의 비활성화로 이루어지는 추가의 유전적 개질이 있거나 없음).

렙틴 결핍 ob/ob 마우스는 비만, 이상지질혈증, 인슐린 저항성이고, 간 손상 및 지방증이 발달된다. 간 지방증은 비교적 무증상적이지만, 상기 질환이 있는 개체는 NASH가 발달될 위험이 더 크다. 상기 첫번째 프로토콜은 NASH의 초기 단계, 즉 ob/ob 마우스의 지방증 간 내 염증에 대한 Cpd 29 및 참조 화합물 페노피브레이트 및 로시글리타존의 영향을 분석하기 위해 디자인되었다. ob/ob 마우스에서, 로시글리타존에 의한 26일 처리는 ob/ob 마우스에서 TNF알파의 간 발현 증가를 유도한 반면, 페노피브레이트를 처리한 동물에서는 상기 사이토카인의 발현에서 주요한 변화가 관찰되지 않았다. 반대로, Cpd 29의 투여는 상기 사이토카인의 발현을 투여량-반응 방식으로 억제하였다(도 2a). 동일한 처리 이후에, TGF베타의 간 발현 수준은 모든 대조 그룹 및 참조 그룹(대조군, 페노피브레이트 및 로시글리타존)에서 동등하였다. 다시, Cpd 29의 투여는 상기 성장 인자의 발현을 투여량-반응 방식으로 억제하였으며, Cpd 29가 30 mg/kg/일로 투여된 경우 효과가 통계학적으로 더욱 적절하다(도 2b).

혈장 ALAT를 상이한 화합물에 의한 처리 26일 후 상기 ob/ob 마우스에서 간 손상을 평가하기 위한 대리 마커로서 측정하였다. 혈장 ALAT의 수준을 대조군 또는 페노피브레이트-처리군과 비교할 때, 로시글리타존을 처리한 마우스 그룹이 ALAT의 혈장 수준의 유의한 증가를 나타냈다. 반대로, 30 mg/kg/일의 Cpd 29의 투여는 ALAT의 혈장 수준의 통계적으로 유의적인 감소를 유도하였다(도 2c).

NASH를 평가하기 위한 관련물로서 정상적으로 고려되는 생리학적 파라미터에 대한 Cpd 29 및 참조 화합물 페노피브레이트의 영향을 연구하기 위해, 또다른 생체 내 모델을 사용하였다. "인간화" ApoE2 녹-인 마우스(hApoE2 KI로서 언급됨)에서 인간 ApoE2 대립유전자는 쥣과 apoe 유전자를 대체하여, 상기 마우스는 생리학적 수준에서 내인성 프로모터 서열의 조절하에 인간 ApoE2(hApoE2)를 발현한다. 그러나, hApoE2는 LDL 수용체에 대해 현저히 감소된 친화성을 가지며, 이는 인간 유형 III 과지단백질혈증과 닮은 혈장 지단백질 프로파일을 초래한다(Sullivan et al., 1998). 인간과 유사하게, hApoE2 KI 마우스는 피브레이트(PPARα에 대한 리간드)와 같은 지질-저하 약물에 반응성이다. 상기 계열의 약물은 마우스에서 지방간을 역전시킨다고 제시되었으므로(Shiri-Sverdlov R et al., 2006), 상기 모델을 이용하여 일반식 (I)의 화합물의 간-특이적 항-염증 및 항-섬유증 효과를 평가할 수 있다. 특히, 상승된 TNFα 수준은 NASH의 전형적인 간 염증, 괴사 및 섬유증과 관련된다(Larter et al., 2008). TGFβ는 상처 치유 및 세포자멸사를 조절하는 많은 세포 유형들에서 발견되는 펩티드이다. 간 세포에서 발견되는 이소형태인 TGFβ1은 간 섬유증의 많은 모델들에서 발견되고, 그 수준은 만성 활성 간염 및 섬유성 알코올 간 질환에서 증가한다(Nan et al., 2009).

상이한 hApoE2 KI 마우스에게 웨스턴 식이를 공급하면서 12주 동안 처리하였다. 상기 모델에서, Cpd 29는 보다 높은 투여량으로 투여된 페노피브레이트와 유사한(우수하지 않다면) 효능으로 간 염증과 관련된 유전자의 간 발현을 억제하였다(TNFα, CCL5, TGFβ; 각각 도 3a, 3b, 3c).

그러나, Cpd 29를 처리한 마우스 그룹은 간 섬유증에 관여하는 특이적 콜라겐 사슬에 대한 것과 같은 유전자(Basaranoglu et al., 2010), 특히 Col1a1(도 3d)의 발현의 통계적으로 유의적인 억제를 보였다. 콜라겐 유전자에 대한 이러한 효과는 페노피브레이트로 처리된 마우스 그룹에서는 관찰되지 않았다. 상기 결과는 Cpd29가 NASH의 생체내 모델에서 항-염증 및 항-섬유증 특성을 나타낸다는 것을 입증한다.

일반식 (I)의 예시적 화합물들을 생체내에서 고지방 식이 마우스 모델에서 시험하였다. hApoE2 KI 및 hApoE2 KI/PPAR알파 KO(mPPAR알파 유전자가 결핍된 "인간화" ApoE2 녹-인 마우스)에게 웨스턴 식이를 공급하고, Cpd 29를 30 mg/kg/일로 2주 동안 매일 처리하였다. 프로토콜 종료시, 간 지방증 및 소엽 내 염증을 조직학적 분석 및 특정 점수에 의해 대조 및 처리 마우스에서 평가하였다.

상기 연구는 Cpd 29에 의한 처리가 hApoE2 KI 마우스에서, hApoE2 KI/PPAR알파 KO 마우스에서는 심지어 더 빠르게, 식이에 의해 유도되는 간 지방증 및 간 염증 모두의 발달을 억제하였음을 입증하였으며, 이는 PPAR알파의 결핍으로 인한 간 질환의 가속화의 증거이다(표 2 및 표 3).

간 지방증(점수)	hApoE2 KI		hApoE2 KI/PPAR알파 KO
간 지방증(점수)	비히클	Cpd 29 (30 mg/kg/일)	비히클	Cpd 29 (30 mg/kg/일)
0	17%	83%	0%	0%
1	50%	17%	33%	33%
2	33%	0%	33%	50%
3	0%	0%	33%	17%

간 염증(점수)	hApoE2 KI		hApoE2 KI/PPAR알파 KO
간 염증(점수)	비히클	Cpd 29 (30 mg/kg/일)	비히클	Cpd 29 (30 mg/kg/일)
0	50%	100%	17%	67%
1	50%	0%	33%	17%
2	0%	0%	33%	17%
3	0%	0%	17%	0%

또다른 연구에서, Cpd 29 및 WO2007/147879의 화합물 1(Cpd 1)의 간-특이적 항-염증 및 항-섬유증 특성 효과는 웨스턴 식이를 공급하고 6주 동안 선택된 화합물로 매일 처리한 hApoE2 KI/PPAR알파 KO 마우스에서 평가하였다.

Cpd 29 및 Cpd 1 모두는 hApoE2 KI/PPAR알파 KO 마우스에서 TNFα, TGFβ 및 콜라겐의 간 발현을 억제하였으며(각각 도 4a, 4b 및 4c), 이는 NASH에 대한 관련 생체내 모델에서 상기 화합물들의 간-특이적(주로 PPAR알파-독립적), 항-염증 및 항-섬유증 특성을 확인시켜준다. 간 지질 분석에 의해, Cpd 29 및 Cpd 1 모두가 hApoE2 KI/PPAR알파 KO 마우스의 간 내에 트리글리세라이드의 축척을 방지한다는 것이 추가로 입증되었다(도 4d).

모두 종합하면, 상기 결과는 생체내 WO2004/005233의 화합물 29(일반식 (I) 및 (II)에 포함됨) 및 WO2007/147879의 화합물 1(일반식 (I) 및 (IV)에 포함됨)의 간-특이적 항-염증, 항-지방증 및 항-섬유증 특성을 강조하였다.

일반식 (I)의 화합물을 시험하기 위한 부가적인 모델은 NASH의 영양 동물 모델, 예컨대 고 수크로스 및 지방을 함유하지만 간 대사에 필수 인자인 2가지 성분 메티오닌 및 콜린이 결핍된 식이에 근거하는 메티오닌- 및 콜린-결핍(MCD) 모델이다. 상기 식이를 공급한 마우스 또는 래트에서는 지방증, 괴사성 염증, 섬유증 및 산화 스트레스로 추가로 발전하는 간 염증이 빠르게 발달한다. 상기 접근법은 로시글리타존(Tahan V., et al. 2007), pan-캐스파제 억제제 VX-166(Witek R et al., 2009), 제아잔틴(Chamberlain S et al., 2009), 텔미사르탄(Kudo H et al., 2009) 또는 Wy-14,643(Ip E et al., 2004)과 같은 화합물의 투여와 관련되는 간 지방증, 섬유증, 산화 스트레스 및/또는 염증에 대한 잠재적 치료 효과를 나타내는데 사용되었다.

일반식 (I)의 화합물은 4 내지 12 주 동안 메티오닌- 및 콜린-결핍 식이를 공급한 Sprague Dawley 래트(8주령) 또는 C57Bl6 마우스에서 수립된 MCD 모델에서 시험될 수 있다. 음성 또는 양성 대조군으로서 선택된 화합물을 포함하는 관심대상의 화합물에 의한 처리는, 이후 위관영양법에 의해 10 마리 이상의 동물 그룹에 상이한 투여량으로 4 내지 12 주 동안 매일 투여된다. 여러 유형의 측정을 동물을 희생하거나 희생하지 않고, 처리 전, 동안 또는 종료시에 수행할 수 있다. 생화학적 투여량(아스파테이트 아미노트랜스페라아제 및 알라닌 아미노트랜스페라아제 활성, 총 빌리루빈, 알칼리 포스파타제, LDL/HDL-콜레스테롤, 혈청 히알루로네이트, 간 트리글리세라이드 및 혈장 트리글리세라이드) 및 조직형태학적 분석(섬유증 및/또는 지방증을 나타내는 간 영역을 측정하기 위함)이 더욱 관련된 측정이다. 염증 마커(예컨대, 인터류킨-1a, -1b, -2, -4, -6, -10, 인터페론 감마, 또는 TNF알파) 및/또는 관련 유전자의 발현(예컨대, 유형 I 콜라겐 또는 간-특이적 케모카인 수용체)의 투여량이 또한 평가될 수 있다.

대안적으로는, 화학적으로 유도된 간 섬유증에 기반한 동물 모델이 일반식 (I)의 화합물의 항섬유증 효과를 연구하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 티오아세타미드(TAA) 또는 탄소 테트라클로라이드(CCL4)의 투여는 지질 과산화, 간 성상 세포 증식 및 콜라겐 과생성을 촉진하는 반응성 산소 종(ROS)의 증가를 유도하여, 래트에서 만성 간 손상 및 섬유증을 초래한다. 상기 접근법은 커큐민(Fu Y et al., 2008) 또는 피오글리타존(Yuan G et al., 2004)과 같은 화합물에 의한 간 섬유증, 산화 스트레스 및/또는 염증에 대한 긍정적인 영향을 보여주는데 사용되었다.

일반식 (I)의 화합물은, 4 내지 12 주 동안 매 5일마다 액체 파라핀(50%) 중 복막내로 희석된 CCL4의 증가하는 투여량을 받은 Sprague Dawley 래트(8주령)에서 수립된 CCL4 모델에서 시험될 수 있다. 또한, 모델의 효력을 증가시키기 위해 첫번째 CCL4 투여 전 10일로부터 시작하여 페노바르비탈이 투여될 수 있다. 음성 또는 양성 대조군으로서 선택된 화합물을 비롯한, 관심대상의 화합물에 의한 처리를, 이후 4 내지 12 주 동안 위관영양법에 의해 10마리 이상의 래트 그룹에 상이한 투여량(0.01 내지 100 mg/kg/일에 포함됨)을 매일 투여한다. MCD 모델에서와 같이, 혈액역학 지표 및 염증 마커 및/또는 관련 유전자의 발현의 투여량과 함께, 생화학적 투여량 및 조직형태학적 분석에 근거한 처리의 효능을 평가하기 위해, 래트를 희생하거나 희생하지 않고, 처리 전, 동안 또는 종료시에 여러 유형의 측정들을 수행하였다.

상기 기재된 동물 모델은 그 중에서도 일반식 (I)의 화합물의 간-특이적 활성을 간-특이적(특히, NAFLD-/NASH-특이적) 치료 특성을 갖는 것으로 이미 공지된 화합물과 비교하는 것을 허용한다. 특히, 본 실시예에 제시된 데이터는 참조 화합물과 비교할 경우 일반식 (I)의 화합물의 우수성을 제안한다.

실시예 3: 일반식 (I)의 화합물의 간-특이적 특성을 시험하기 위한 시험관내 /생체외 모델

일부 시험관내/생체외 모델들이 간 섬유증, 산화 스트레스 및/또는 간 염증에 대한 긍정적인 효과를 가질 수 있는 화합물을 스크리닝하기 위해 수립되었다. 실제로, 간 섬유증의 핵심 사건은 간 성상 세포(HSC)의 활성화이다. 간세포 손상 후, 상기 세포 유형은 활성화되며, 증식하기 시작한다(Sato M et al., 2003). 활성화된 HSC(예를 들어, 간 또는 래트 HSC-T6 세포주로부터 단리된 래트 또는 인간 HSC)는 과량의 세포외 기질 화합물 및 매트릭스 분해 억제제를 활성화시키고 생성할 수 있다. 상기 접근법을 사용하여, 칼슘(Xu et al., 2003), 티아졸리딘디온(Miyahara T et al., 2000), 또는 17베타-에스트라디올(Liu Q et al., 2004)과 같은 화합물의 긍정적인 영향을 보여주었다.

상기 기재된 시험관내/생체외 모델은 그 중에서도 일반식 (I)의 화합물의 간-특이적 활성을 간-특이적(특히, NAFLD-/NASH-특이적) 치료 특성을 갖는 것으로 공지된 화합물과 비교하는 것을 허용한다.

참조문헌

Angulo P et al., 2002. Best Pract Res Clin Gastroenterol ; 16: 797-810.

Basasaranoglu, M et al., 2010. World J Gastroenterol; 16: 2223-6.

Chamberlain S et al., 2009. Dig Dis Sci ;54: 1460-4.

Dowman J.K et al., 2010, Q J Med; 103: 71-83

Fan J and Qiao L, 2009. Hepatobil Pancrat Dis Int; 8: 233-240.

Fu Y et al., 2008. Mol Pharmacol; 73: 399-409.

Gressner A et al., 2009. World J Gastroenterol; 15: 2433-2440.

Ip E et al., 2004. Hepatology; 39: 1286-96.

Kudo H et al., 2009. Liver Int; 29: 988-96.

Larter C et al., 2008. J Gastroenterol Hepatol; 23: 1635-48.

Lee S et al., 1995. Mol Cell Biol; 15: 3012-22.

Liu Q et al., 2004. World J Gastroenterol; 10: 1315-20.

Marchesini G et al.2003. Hepatology; 37:917-923.

Miyahara T et al., 2000. J Biol Chem; 275: 35715-22.

Nan Y et al., 2009. Scand J Gastroenterol, 44, 1121-31.

Nelson A et al., 2009. J Clin Gastroenterol; 43: 990-994

Neuschwander-Tetri et al., 2003. Hepatology; 38: 1008-1017.

Sato M et al., 2003. Cell Struct Funct; 28: 105-12.

Shiri-Sverdlov R et al., 2006. J Hepatol; 44: 732-41.

Sullivan P et al., J Clin Invest; 102: 130-5.

Tahan V et al., 2007 Dig Dis Sci; 52: 3465-3472.

Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009. Hepatology; 49: 306-317.

Witek R et al., 2009. Hepatology; 50:1421-30.

Xu et al., 2003. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol; 285 : G20-G30.

Yeh M et al., 2007. Am J Clin Pathol; 128:837-847.

Yuan G et al., 2004. World J Gastroenterol; 10: 1047-51.

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Claims

간 섬유증, 간 경화증, 지방 간 질환, 바이러스 간 질환 및 면역-매개 간 질환에서 선택되는 간 질환 치료용 약학 조성물로,
하기 일반식 (I)의 화합물을 포함하는, 약학 조성물:

(I)
식 중,
X1은 할로겐, R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;
A는 CH=CH 또는 CH2-CH2 기를 나타내고;
X2는 G2-R2 기를 나타내고;
동일 또는 상이한 G1 및 G2는 산소 또는 황 원자를 나타내고;
R1은 비치환된 알킬기, 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 알킬기를 나타내고;
R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고,
R3은 수소 원자, 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 알킬기를 나타내고;
동일 또는 상이한 R4 및 R5는 비치환된 알킬기를 나타내고,
상기에서, 알킬기는 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형인 포화 탄화수소 라디칼임.
제1항에 있어서,
상기 일반식 (I)의 화합물이 하기의 치환기를 갖는, 약학 조성물:
X1은 할로겐, R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;
A는 CH=CH 기를 나타내고;
X2는 G2-R2 기를 나타내고;
동일 또는 상이한 G1 및 G2는 산소 또는 황 원자를 나타내고;
R1은 비치환된 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;
R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은 수소 원자 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고; 및
R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 알킬기를 나타냄.
제1항에 있어서,
상기 일반식 (I)의 화합물이 하기의 치환기를 갖는, 약학 조성물:
X1은 R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;
A는 CH2-CH2 기를 나타내고;
X2는 G2-R2 기를 나타내고;
G1은 산소 또는 황 원자를 나타내고, G2는 산소 원자를 나타내고;
R1은 비치환된 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;
R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은, 수소 원자, 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;
R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 알킬기를 나타냄.
제1항에 있어서,
상기 일반식 (I)의 화합물이 하기의 치환기를 갖는, 약학 조성물:
X1은 할로겐 원자, R1 또는 G1-R1 기를 나타내고;
A는 CH2-CH2 기를 나타내고;
X2는 G2-R2 기를 나타내고;
G1은 산소 또는 황 원자를 나타내고, G2는 산소 원자를 나타내고;
R1은 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 1 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;
R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기를 나타내고, 상기 R3은, 수소 원자, 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환되거나 치환되지 않은 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타내고;
R4 및 R5는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 알킬기를 나타냄.
제1항에 있어서,
G2는 산소 원자이고, R2는 -COOR3 기로 치환된 알킬기이며, 상기 R3은 수소 원자 또는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 선형 또는 분지형 알킬기를 나타내는 약학 조성물.
제1항에 있어서,
X1은 비치환되거나 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 1 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는, 선형 또는 분지형 알킬기를 포함하는 알킬티오기인 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화합물이 1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-이소프로필옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온, 1-[4-메틸티오페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온, 1-[4-트리플루오로메틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온, 1-[4-트리플루오로메틸페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온, 1-[4-트리플루오로메틸옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-tert부틸옥시카르보닐디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온, 1-[4-트리플루오로메틸옥시페닐]-3-[3,5-디메틸-4-카르복시디메틸메틸옥시페닐]프로프-2-엔-1-온, 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸프로판산 및 2-[2,6-디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-프로필]페녹시]-2-메틸-프로판산 이소프로필 에스테르로 이루어진 군에서 선택되는 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 일반식 (I)의 화합물이 메트포르민, 인슐린, 티아졸리딘디온, 글리타존 또는 스타틴과 조합하여 투여되는 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 주사용 현탁액, 젤, 오일, 알약, 좌제, 파우더, 젤 캡, 캡슐, 에어로졸의 형태, 또는 지효성 및/또는 서방성 방출을 위한 생약 형태 또는 장치의 수단으로 제형화된 것인 약학 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
간 질환이 비-알코올성 지방간 및 알코올성 지방간으로 이루어진 군에서 선택되는 지방 간 질환인, 약학 조성물.
제10항에 있어서,
지방 간 질환이 비-알코올성 지방간인, 약학 조성물.