KR101954053B1 - 무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈 치료용 인자 ｘｉｉ 억제제 - Google Patents

무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈 치료용 인자 ｘｉｉ 억제제 Download PDF

Info

Publication number
KR101954053B1
KR101954053B1 KR1020137026671A KR20137026671A KR101954053B1 KR 101954053 B1 KR101954053 B1 KR 101954053B1 KR 1020137026671 A KR1020137026671 A KR 1020137026671A KR 20137026671 A KR20137026671 A KR 20137026671A KR 101954053 B1 KR101954053 B1 KR 101954053B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fxii
artery
inhibitor
ischemia
sbi
Prior art date
Application number
KR1020137026671A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140026399A (ko
Inventor
마티아스 나렌도르프
랄프 바이쓸레더
게르하르트 딕나이테
귀도 스톨
마르크 놀테
Original Assignee
체에스엘 베링 게엠베하
더 제너럴 하스피탈 코포레이션
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 체에스엘 베링 게엠베하, 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 filed Critical 체에스엘 베링 게엠베하
Publication of KR20140026399A publication Critical patent/KR20140026399A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101954053B1 publication Critical patent/KR101954053B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/556—Angiotensin converting enzyme inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8114—Kunitz type inhibitors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)

Abstract

무증상 뇌 허혈(SBI) 또는 다른 기관의 허혈은 의료 시술 동안 동맥계에 도입되는 색전증으로부터 초래될 수 있다. 본 출원은 의료 시술을 받는 환자에서 FXII 억제제를 투여하는 방법, 및 SBI 및 다른 기관의 허혈을 포함한 허혈을 연구하고 후보 치료제를 평가하는데 유용한 동물 모델을 제공한다.

Description

무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈 치료용 인자 ＸＩＩ 억제제{FACTOR XII INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF SILENT BRAIN ISCHEMIA AND ISCHEMIA OF OTHER ORGANS}
본 출원은 무증상 뇌 허혈(silent brain ischemia) 및 다른 기관의 허혈에 관한 것이고, 또한, 의료 시술을 받는 환자에서 인자 XII 억제제를 투여하는 방법에 관한 것이며, 또한, 무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈을 연구하고 잠재적인 치료요법을 평가하는데 유용한 동물 모델에 관한 것이다.
무증상 뇌 허혈(SBI)은 의료 시술, 특히 혈관 시술 및 수술의 부작용인 뇌에서의 작은 허혈성 손상 병태이다. 허혈은 다른 기관에서도 발생할 수 있다. 의료 시술 동안 뜻하기 않게 동맥 순환계로 방출되는 임의의 외인성 또는 내인성 물질은 SBI 또는 다른 기관의 허혈, 예를 들면, 확산성 색전성 허혈(diffuse embolic ischemia)을 초래할 수 있다. SBI는 이질성 증후군이며, 여기서, 색전의 정확한 공급원은 다양할 수 있다. 예를 들면, SBI 또는 다른 기관의 허혈을 유발하는 색전(embolus) 또는 미세색전(microembolus)은 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해를 포함한 다양한 물질들로 이루어질 수 있다. 통상적으로, 허혈성 손상은 확산성이다. SBI에서, 뇌 영역에는 미세색전이 쏟아져 내리며, 통상의 자기 공명 영상법(MRI)으로는 각각의 병소(foci)를 검출하기가 어렵다. 예를 들면, 미세색전 신호는 조영제의 주사 동안 및 혈관의 프로빙 동안 발견된다(Bendszus M and Stoll G, 5 Lancet Neurol. 364-372, 2006). SBI에서의 조직 손상의 정확한 메커니즘은 알려져 있지 않다(Bendszus M and Stoll G, 5 Lancet Neurol. 364-372, 2006).
손상의 확산 성질로 인하여, SBI를 앓는 환자는 통상적으로 뇌졸중에서와 같이 국소의 명백하게 정의된 신경 결손이 없다. 그러나, 주요 수술(예를 들면, 관상 동맥 우회술, 판막 치환 수술, 경동맥 내막 절제술 또는 스텐트 삽입술) 후의 다수의 환자에서, 및 중환자실에서 혈관 중재술, 관상 동맥 조영술, 동맥관 또는 대동맥내 역박동 장치를 갖는 다수의 환자에서, 행동 변화, 신경심리학적 결손 및 악화된 혈관성 치매가 자주 관찰된다. 이러한 증상들은 의료 시술 후에 매우 일반적이지만, 드물게는 의료 시술와 직접적으로 관련된 것으로 보인다. 확산-강조 MRI(DWI: Diffusion-Weighted MRI)와 같은 점점 민감한 영상화 장비의 출현으로, 마비 또는 민감도 결함과 같은 명백한 임상적 증상 없이 나타나는 뇌 손상에 대해 점점 더 의식하게 되었다.
수술 및 시술을 받은 환자, 특히 심장 및 혈관 구조물을 수반하는 환자의 45% 이하가 SBI를 발병한다. 미국에서 해마다 200만회 이상 실시되는 관상 동맥 조영술은 11 내지 15%의 SBI 위험을 갖는다(Bendszus M and Stoll G, 5 Lancet Neurol. 364-372, 2006). 진단용 혈관조영술을 받은 환자의 26% 이하, 경동맥 스텐트 삽입술을 받은 환자의 54% 이하 및 심장 수술 후 환자의 45% 이하가 SBI로 고통받을 수 있다(Bendszus M and Stoll G, 5 Lancet Neurol. 364-372, 2006).
SBI의 임상적 징후로는, 인지력 감퇴에 대한 위험 증가, 뇌졸중의 위험 증가 및 치매 악화 이외에, 행동적 및 신경심리학적 변화가 포함된다(Vermeer SE et al. 34 Stroke 1126-1129, 2003; Kobayashi S et al. 28 Stroke 1932-1939, 1997). SBI의 존재는 60 내지 90세 연령의 환자에서의 2배 이상의 치매 위험을 나타냈고, 전반적인 인지 기능에 있어서 보다 급격한 감퇴를 초래하고, 신경심리학적 시험의 성과를 악화시키는 것으로 나타났다(Vermeer SE et al. 34 Stroke 1126-1129, 2003; Lopez OL et al. 60 Arch. Neurol. 1394-1399, 2003).
SBI는 임상적 뇌졸중(clinical stroke)과는 별개이다. 임상적 뇌졸중은 명백하게 정의된 신경 결손을 초래하며, 뇌에 산소화된 혈액을 공급하는 동맥의 취약한 플라크의 자연적 파열을 종종 수반하거나, 심방 세동에 의해 야기되는 심장으로부터의 혈전색전증으로 인한 것이다. 뇌졸중과는 반대로, SBI의 위험이 있는 환자는 근원적인 아테롬성 동맥 경화 질환 또는 뇌졸중이나 혈전증에 대한 위험 인자를 갖지 않을 수 있다. 혈관 시술을 받은 환자는, 예를 들면, 선천성 심장 결함을 지닌 환자를 포함할 수 있다. 이러한 환자는, 달리 건강하더라도, 의료 시술 동안 도입되는 미세색전의 부작용으로서 여전히 SBI에 대한 위험이 있다(Harrison's Principles of Internal Medicine 16th Ed. (Kasper DL, Fauci, AS, Longo, DL, Braunwald E, Hauser SL, Jameson JL eds., 2005)). 따라서, SBI의 예방 치료요법 또는 치료로부터 이익을 얻는 환자 집단은 혈관계의 구조물과의 접촉을 수반하는 의료 시술을 받는 환자를 포함한다.
헤파린이 동맥내 뇌혈관 조영술에 의해 유발되는 무증상 색전성 사례를 임상적으로 감소시키는 것으로 나타났지만(Bendszus et al., Circulation 110:2110-2115, 2004), 이것은 두개외 및 두개내 출혈 합병증의 위험이 비교적 높다. 또한, 상이한 유형의 색전에 의해 유발되는 상이한 SBI 사례가 유사한 분자 메커니즘을 수반하고/하거나 유사한 치료제를 사용하여 치료가능한지는 명확하지 않다. 바람직한 치료요법은 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해로 이루어진 미세색전을 포함한 모든 유형의 색전에 의해 유발되는 허혈성 손상을 감소시키지만, 헤파린과 마찬가지로 지혈에는 영향을 미치지 않을 것이다. 따라서, 원인과 무관하게, SBI 및 다른 기관의 허혈, 예를 들면, 확산형 색전성 허혈에 대한 효과적이고 안전한 치료가 요구된다. 확산성 미세-손상이 명백한 뇌졸중을 야기하지 않으면서 생성될 필요가 있기 때문에, SBI를 연구하고 치료를 평가하기 위한 동물 모델을 개발하는 것이 시도되고 있다. 따라서, SBI의 현실적인 동물 모델은 조직 손상의 분자 메커니즘을 연구하고 치료제 후보물질을 평가하기 위해 여전히 요구된다.
인자 XII(FXII)는 내인성 응고 캐스케이드의 활성화에 관여하는 세린 프로테아제이다. 최근에, 마우스에서 인자 XII의 결핍 또는 억제가 뇌졸중 모델에서 뇌 손상을 감소시키고, 동맥 혈전 형성에 대해 보호적이었지만 출혈의 위험을 증가시키지 않는 것으로 밝혀졌다(제WO 2006/066878호; 제WO 2008/098720호; Kleinschnitz C et al. 203 J. Exp. Med. 513-518, 2006; Renne T et al. 202 J. Exp. Med. 271-281, 2005). FXII 결핍 마우스와 유사하게, FXII가 결핍된 사람은 주요 수술 절차 동안에도 비정상적인 출혈 소질을 앓지 않는다(Ratnoff OD and Colopy JE, 34 J. Clin. Invest. 602-613, 1955; Colman RW, Hemostasis and Thrombosis. Basic Principles & Clinical Practice 103-122 (Colman RW, Hirsch J, Mader VJ, Clowes AW, George J eds., Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2001); Schmaier AH, 118 J. Clin. Invest. 3006-3009, 2008).
최근에, 인페스틴-4가 활성화 FXII(FXIIa)의 신규한 억제제인 것으로 보고되었다. 인페스틴은 샤가스 질환을 유발하는 것으로 공지된 기생충 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)에 대한 주요 벡터인 흡혈 곤충 트리아토마 인페스탄스(Triatoma infestans)의 중장으로부터 유도된 한 부류의 세린 프로테아제 억제제이다(Campos ITN et al. 32 Insect Biochem. Mol. Bio. 991-997, 2002; Campos ITN et al. 577 FEBS Lett. 512-516, 2004). 이러한 곤충은 이들 억제제를 사용하여 섭취된 혈액의 응고를 방지한다. 인페스틴 유전자는 응고 경로의 다양한 인자들을 억제할 수 있는 단백질을 초래하는 4개의 도메인을 암호화한다. 특히, 도메인 4는 FXIIa의 강력한 억제제인 단백질(인페스틴-4)을 암호화한다. 인페스틴-4는 마우스에서 출혈 합병증없이 투여되었다(제WO 2008/098720호).
SBI 및 확산형 색전성 허혈을 포함한 다른 기관의 허혈을 초래하는 이질성 메커니즘에도 불구하고, 본 출원의 실시형태는 SBI 및 다른 기관의 허혈을 치료하기 위한 FXII의 억제제, 특히 인페스틴-4를 포함하는 단백질 및 이의 변이체를 제공한다. 또한, 본 출원은 의료 시술 동안 순환계로 들어갈 수 있는 다양한 유형의 색전을 모방하는 SBI의 동물 모델을 제공한다. 본원에 기재된 동물 모델은 SBI를 연구하고 치료제 후보물질을 평가하기 위한 도구로서 유용할 수 있다.
요약
본 출원은 의료 시술을 받는 환자에서 인자 XII(FXII) 억제제를 투여하는 방법을 제공하며, 여기서, 의료 시술은 심장; 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관으로부터 선택된 하나 이상의 혈관; 및 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관 중 하나 이상과의 접촉을 포함한다. 의료 시술은 표적 기관의 허혈을 초래할 수 있는 신체 내의 상기 하나 이상의 혈관에서의 하나 이상의 색전의 방출, 및 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후의 FXII 억제제의 투여를 포함한다. "FXII 억제제"는 인자 XII와 활성화 인자 XII(FXIIa) 중 어느 하나 또는 둘 다의 억제제를 나타낸다.
색전은 다양한 물질로 이루어질 수 있다. 예를 들면, 색전은 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해로 이루어진다. 한 실시형태에서, 색전은 혈전이 아니다.
한 실시형태에서, 표적 기관은 뇌이며, 환자는 (i) 무증상 뇌 허혈, 또는 (ii) 비혈전용해성 물질(nonthrombolysable substance)에 의해 유발된 뇌졸중을 갖고 있거나, 갖고 있었거나, 상기 뇌졸중의 위험이 있다. 다른 실시형태에서, 표적 기관은 심장, 신장, 간, 및/또는 식도, 위, 소장 및/또는 대장(결장 및/또는 직장 포함)을 포함한 위장관 기관이다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 상기 혈관 중 하나 이상의 내면과의 접촉을 포함한다. 다른 실시형태에서, 의료 시술은 상기 혈관 중 하나 이상의 클램핑을 포함한다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 혈관 수술이다. 특정 실시형태에서, 의료 시술은 관상 동맥 조영술, 경동맥 스텐트 삽입술, 경피적 관상 동맥 중재술, 경동맥 내막절제술 또는 심혈관 수술이다. 다른 실시형태에서, 의료 시술은 협착 신동맥의 확장이다. 한 실시형태에서, 의료 시술은 진단용의 혈관 시술이다. 특정 실시형태에서, 의료 시술은 카테터, 스텐트, 벌룬 및/또는 그래프트 중 임의의 하나 이상을 포함하는 혈관 시술이다. 다른 실시형태에서, 의료 시술은 조영제를 투여함을 포함하고, 특히, 조영제의 주사는 기포를 부주의하게 생성하고/하거나 잔해를 제거할 수 있기 때문이다.
한 실시형태에서, FXII 억제제는 야생형 인페스틴-4(서열번호 1) 폴리펩타이드 서열, 또는 이의 변이체를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인페스틴-4의 변이체는 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함하고/하거나, 6개의 보존된 시스테인 잔기 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다. 도 2를 참조한다. 다른 실시형태에서, FXII 억제제는 서열번호 3으로서 제공된, 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13을 포함하도록 돌연변이된, 췌장에서 발현되는 사람 단백질인 SPINK-1(서열번호 2), 또는 상기 돌연변이된 SPINK-1의 변이체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13을 포함하고, 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 갖고/갖거나, 6개의 보존된 시스테인 잔기 및 야생형 SPINK-1 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다. 한 실시형태에서, FXII 억제제는 SPINK K1, K2 또는 K3(서열번호 3, 4 또는 5)이다.
다른 실시형태에서, FXII 억제제는 AT III 억제제, 안지오텐신 전환 효소 억제제, C1 억제제, 아프로티닌, 알파-1 프로테아제 억제제, 안티파인(antipain)([(S)-1카복시-2-페닐에틸]-카바모일-L-Arg-L-Val-Arginal), Z-Pro-Pro-알데하이드-디메틸 아세테이트, DX88, 류펩틴, 프롤릴 올리고펩티다제의 억제제, 예를 들면, Fmoc-Ala-Pyr-CN, 옥수수-트립신 억제제, 소 췌장 트립신 억제제의 돌연변이체, 에코틴, YAP(yellowfin sole anticoagulant protein), 서양계 호박(Cucurbita maxima) 트립신 억제제-V 및/또는 서양계 호박 동형억제제로부터 선택된다.
다른 실시형태에서, FXII 억제제는 항-FXII 항체이다. 항-FXII 항체는 FXII 및/또는 FXIIa에 결합하여 이를 억제하는 항체를 나타낸다.
특정 실시형태에서, FXII 억제제는 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)에 연결된다. 한 실시형태에서, HLEP는, 예를 들면, 알부민, 아파민, 알파-페토프로테인 또는 비타민-D 결합 단백질일 수 있다. 한 실시형태에서, HLEP는 사람 알부민 또는 이의 변이체일 수 있다. 다른 실시형태에서, HLEP는 면역글로불린이다. 면역글로불린 부분은 IgG로부터의 Fc일 수 있다.
다른 실시형태에서, FXII 억제제는 링커를 통해 HLEP에 연결된다. 한 실시형태에서, 링커는 절단가능할 수 있다. 특정 실시형태에서, 링커는 내인성, 외인성 및/또는 공통의 응고 경로의 응고 프로테아제에 의해 절단된다. 한 실시형태에서, 링커는 FXIIa에 의해 절단된다.
본 출원의 다른 양상은 뇌에 허혈성 손상을 초래할 수 있는 동물의 동맥계로의 하나 이상의 색전의 방출을 포함하는 시술, 및 뇌에서의 허혈성 손상의 징후에 대한 동물의 평가를 포함하는 SBI의 동물 모델에 관한 것이다. 허혈성 손상은 임상적으로 무증상이다. 이러한 문맥에서 용어 "방출" 또는 "방출하는"은 동물의 동맥계로 색전의 외부 공급원을 제공하는 것 및 내부적으로 색전을 생성하는 기술을 사용하는 것 둘 다를 포함하지만, 트레드(thread)를 혈관에 삽입하여 혈전을 생성하는 것을 포함하지는 않는다. 한 실시형태에서, 시술은 색전을 동맥계로 방출함을 포함한다. 한 실시형태에서, 시술은 색전을 경동맥으로 방출함을 포함한다. 특정 실시형태에서, 시술은 카테터를 사용하여 색전을 방출함을 포함한다. 다른 실시형태에서, 시술은 클램핑 및/또는 수술을 포함한다. 한 실시형태에서, 동물 모델은 심장 및/또는 신장을 포함한 다른 표적 기관에서 허혈성 손상에 대해 동물을 평가함을 포함한다. 한 실시형태에서, 시술은 트레드를 혈관에 삽입하여 혈전을 생성하는 것을 포함하지 않는다. 한 실시형태에서, 시술은 동물에서 뇌졸중을 유발하지 않는다.
한 실시형태에서, 색전은 형광 물질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 색전은 비혈전용해성 물질로 이루어진다(이는 혈전용해제를 사용하여 색전을 용해시킬 수 없음을 의미함). 이러한 실시형태에서, 색전은 혈전이 아니다. 예를 들면, 색전은 중합체, 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 및/또는 잔해로 이루어질 수 있다. 한 실시형태에서, 색전은 마이크로비드(미소구체 또는 미소입자를 포함함)이다. 색전은 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 비혈전용해성 물질(들)로 이루어질 수 있다. 다른 실시형태에서, 색전은 응고 혈액으로 이루어진다. 실시형태들에서, 평가는 영상화 및/또는 조직학(histology)을 포함한다. 한 실시형태에서, 영상화는 MRI 및/또는 SPECT를 포함한다. 한 실시형태에서, 동물 모델은 마우스이다. 다른 실시형태에서, 동물 모델은 래트이다.
다른 실시형태에서, 동물 모델은 SBI를 감소시키는 치료제 후보물질을 평가하기 위한 것이다. 이러한 실시형태에서, 치료제를 동물에게 투여하고, 뇌에서 허혈성 손상을 감소시키는 상기 치료제 후보물질의 능력에 대해 시험한다. 다른 실시형태에서, 치료제를 동물에게 투여하고, 확산형 색전성 허혈을 포함한, 다른 표적 기관에서의 허혈성 손상을 감소시키는 상기 치료제 후보물질의 능력에 대해 시험한다. 특정 실시형태에서, 치료제 후보물질은 응고 경로의 억제제이다. 한 실시형태에서, 치료제는 FXII의 억제제이다. 한 실시형태에서, 치료제는 항체이다. 다른 실시형태에서, 치료제는 단백질, 펩타이드, 핵산 또는 소분자이다. 실시형태들에서, 치료제 후보물질은 시술 전, 시술 동안 및/또는 시술 후에 동물에게 투여된다.
한 실시형태에서, MRI 및/또는 SPECT 영상화를 포함한 영상화 방법이 FXII의 억제제를 개발하기 위해 표적 기관에서의 허혈성 손상을 평가하는데 사용된다. 영상화 방법은 FXII의 억제제를 투여하기 전 및/또는 투여한 후에 수행된다. 한 실시형태에서, 표적 기관은 뇌이다.
추가의 실시형태들이 하기 항목들에 기재되어 있다.
항목 1. 의료 시술을 받는 환자에서 허혈의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 인자 XII(FXII)의 억제제로서, 상기 의료 시술은
(a) 심장,
(b) 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 심장에 인접하는 동맥계의 혈관으로부터 선택된 하나 이상의 혈관,
(c) 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관
중 하나 이상과의 접촉을 포함하고;
여기서, 상기 의료 시술은 하나 이상의 표적 기관에서 상기 허혈을 초래할 수 있는 신체의 상기 혈관들 중 하나 이상에서의 하나 이상의 색전의 방출을 포함하고, 여기서, 상기 FXII 억제제는 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 투여되는,
의료 시술을 받는 환자에서 허혈의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 인자 XII(FXII)의 억제제.
항목 2. 항목 1에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 색전이 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해로 이루어지는, FXII의 억제제.
항목 3. 항목 1 및 항목 2에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 표적 기관이
(a) 뇌(여기서, 환자는 무증상 뇌 허혈, 또는 비혈전용해성 물질에 의해 유발되는 뇌졸중을 갖고 있거나, 갖고 있었거나, 상기 뇌졸중의 위험이 있다); 및/또는
(b) 심장, 신장, 간; 및/또는 위장관 기관인, FXII의 억제제.
항목 4. 항목 1 내지 항목 3에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 의료 시술이
(i) 상기 혈관들 중 적어도 하나 이상의 내면과의 접촉;
(ii) 상기 혈관들 중 적어도 하나 이상의 클램핑;
(iii) 카테터, 스텐트, 벌룬, 그래프트 및/또는 조영제 투여 중 어느 하나 이상을 포함하는 혈관 시술;
(iv) 혈관 수술 및/또는 진단용의 혈관 시술; 및/또는
(v) 관상 동맥 조영술, 경동맥 스텐트 삽입술, 경피적 관상 동맥 중재술, 경동맥 내막절제술, 심혈관 수술 또는 협착 신동맥의 확장을 포함하는, FXII의 억제제.
항목 5. 항목 1 내지 항목 4에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 FXII 억제제가
(i) 야생형 인페스틴-4 폴리펩타이드 서열(서열번호 1) 또는 이의 변이체(여기서, 상기 변이체는
(a) 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 및/또는
(b) 6개의 보존된 시스테인 잔기 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다);
(ii) 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13을 포함하도록 돌연변이된 SPINK-1, 또는 상기 돌연변이된 SPINK-1의 변이체(여기서, 상기 변이체는
(a) 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13, 및 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 및/또는
(b) 6개의 보존된 시스테인 잔기 및 야생형 SPINK-1 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다);
(iii) AT III 억제제, 안지오텐신 전환 효소 억제제, C1 억제제, 아프로티닌, 알파-1 프로테아제 억제제, 안티파인([(S)-1 카복시-2-페닐에틸]-카바모일-L-Arg-L-Val-Arginal), Z-Pro-Pro-알데하이드-디메틸 아세테이트, DX88, 류펩틴, 프롤릴 올리고펩티다제의 억제제, 예를 들면, Fmoc-Ala-Pyr-CN, 옥수수-트립신 억제제, 소 췌장 트립신 억제제의 돌연변이체, 에코틴, YAP(yellowfin sole anticoagulant protein), 서양계 호박 트립신 억제제-V, 서양계 호박 동형억제제 및/또는 Pro-Phe-Arg-클로로메틸-케톤(PCK); 및/또는
(iv) 항-FXII 항체(여기서, 상기 항체는 FXII에 결합하여 이의 활성 및/또는 활성화를 억제한다)를 포함하는, FXII의 억제제.
항목 6. 항목 5에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 돌연변이된 SPINK-1의 변이체가 SPINK K1, K2 또는 K3(서열번호 3, 4 또는 5)인, FXII의 억제제.
항목 7. 항목 1 내지 항목 5에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 FXII 억제제가 반감기 증진 폴리펩타이드에 연결되고, 여기서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드는 임의로
(i) 알부민, 아파민, 알파-페토프로테인 또는 비타민 D 결합 단백질; 또는
(ii) 사람 알부민 또는 이의 변이체; 또는
(iii) 면역글로불린 또는 이의 변이체; 또는
(iv) IgG의 Fc인,
FXII의 억제제.
항목 8. 항목 7에 따라 사용하기 위한 인자 XII의 억제제로서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드가 링커를 통해 FXII 억제제에 연결되고, 여기서, 상기 링커는 내인성, 외인성 또는 공통의 응고 경로의 응고 프로테아제에 의해 임의로 절단가능한, FXII의 억제제.
항목 9. 인자 XII 억제제 후보물질을 투여하고, 방사선학 또는 핵 의학, 예를 들면, CT(임의로 SPECT-CT 및/또는 FMT-CT); MRI(임의로 확산-강조 MRI(DWI) 및/또는 fMRI); PET; 광학 영상법(임의로 형광 반사 영상법; 초음파, 현미경법, 형광투시법, 자기방사법 및/또는 인광 영상법)을 사용하여 동물의 표적 기관에서의 허혈에 대한 인자 XII 억제제 후보물질의 효과를 평가함을 포함하는, 인자 XII의 억제제를 개발하기 위한 영상화 방법의 용도로서, 상기 허혈은 색전에 의해 야기되며,
(i) 표적 기관은 뇌, 심장, 신장, 간 및/또는 위장관 기관이고,
(ii) 표적 기관이 뇌인 경우, 추가로 허혈성 손상은 임상적으로 무증상이고/이거나 색전은 비혈전용해성인, 인자 XII의 억제제를 개발하기 위한 영상화 방법의 용도.
항목 10. 인자 XII 억제제 후보물질을 투여하고, TTC 염색법, 면역조직화학법 및/또는 조직화학법을 사용하여 동물의 표적 기관에서의 허혈에 대한 인자 XII 억제제 후보물질의 효과를 평가함을 포함하는, 인자 XII의 억제제를 개발하기 위한 조직학 방법의 용도로서, 상기 허혈은 색전에 의해 야기되고,
(i) 표적 기관은 뇌, 심장, 신장, 간 및/또는 위장관 기관이고,
(ii) 표적 기관이 뇌인 경우, 추가로 허혈성 손상은 임상적으로 무증상이고/이거나 색전은 비혈전용해성인, 인자 XII의 억제제를 개발하기 위한 조직학 방법의 용도.
항목 11. 허혈의 동물 모델로서,
(a) 하나 이상의 표적 기관에서 허혈성 손상을 초래할 수 있는 동맥계에서의 하나 이상의 색전을 고의로 방출함을 포함하는 시술,
(i) 여기서, 상기 표적 기관은 뇌, 심장, 신장, 간 및/또는 위장관 기관이고,
(ii) 상기 표적 기관이 뇌인 경우, 추가로 허혈성 손상은 임상적으로 무증상이고/이거나 색전은 비혈전용해성이고; 및
(b) 표적 기관에서의 허혈성 손상의 지표에 대한 동물의 평가를 포함하는, 허혈의 동물 모델.
항목 12. 항목 9 내지 항목 11에 따른 방법으로서, 상기 시술은
(i) 색전을 혈관으로 방출함;
(ii) 색전을 동맥으로 방출함;
(iii) 색전을 심장, 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관으로 방출함; 및/또는
(iv) 색전을 경동맥으로 방출함을 포함하는, 방법.
항목 13. 항목 9 내지 항목 11에 따른 방법으로서, 평가 단계는 자기 공명 영상법 및/또는 SPECT 영상법을 포함하는, 방법.
항목 14. 허혈을 치료하기 위한 치료제 후보물질을 평가하기 위한 항목 9 내지 항목 11에 따른 방법으로서,
(i) 치료제 후보물질은 표적 기관에서의 허혈성 손상을 감소시키는 상기 치료제 후보물질의 능력에 대해 평가되고, 여기서, 상기 치료제 후보물질은 시술 전, 시술 동안 및/또는 시술 후에 동물에게 투여되고/되거나;
(ii) 상기 치료제 후보물질은 응고 경로의 억제제인, 방법.
항목 15. 항목 9 내지 항목 14에 따른 방법으로서, 상기 치료제 후보물질이
(i) FXII 억제제,
(ii) 항체, 또는
(iii) 소분자인, 방법.
본 출원에서 실시형태의 추가의 목적 및 이점은 일부는 다음의 기술내용에서 나타나고, 일부는 이러한 기술내용으로부터 자명해지거나, 이들은 실행하여 수득될 수 있다. 실시형태의 목적 및 이점은 특히 첨부된 청구항에 지적되어 있는 구성요소 및 조합에 의해 자체로 명백해질 것이다.
특허 또는 출원 파일은 컬러로 제작된 하나 이상의 도면을 함유한다. 컬러 도면을 갖는 이러한 특허 또는 특허 출원의 사본은 요청시 필요 비용을 지불하면 해당 관청에 의해 제공될 것이다.
도 1. 로드니우스 프롤릭수스(R. prolixus) 억제제와 트롬빈 및 SPINK-1과 키모트립신의 접촉 부위. #은 로드니우스 프롤릭수스 억제제와 트롬빈 사이의 접촉 부위인 아미노산을 나타내고; +는 SPINK-1과 키모트립신 사이의 접촉 부위인 아미노산을 나타낸다.
도 2. 인페스틴-4(I4)와 SPINK-1(SP) 사이의 아미노산 서열 유사성. *는 동일한 아미노산을 나타내고; |는 유사한 아미노산을 나타내며; 진하게 표시된 아미노산은 보존된 시스테인이고; 인페스틴-4 서열의 밑줄 그어진 아미노산 2 내지 13은 보존된다.
도 3. 인페스틴-4, SPINK1 및 3개의 SPINK1 변이체(K1, K2 및 K3)의 아미노산 서열. *는 인페스틴-4 서열과 관련하여 동일한 아미노산을 나타내고; |는 유사한 아미노산을 나타낸다. I4의 밑줄 그어진 서열을 사용하여 SPINK-1의 15개 아미노산을 대체하여 K1을 생성하였다. 변이체 K2 및 K3은 K1 서열에 대한 추가의 점 돌연변이(밑줄 그어진 아미노산)에 의해 생성되었다.
도 4. 모델. (A) 주사 전의 FTC + 마이크로비드의 형광 영상. (B) 신선한 마우스 혈액으로부터 제조된 생체외 형성되고 표지된 응고 혈액의 형광 영상. (C) 색전의 투여를 설명하는 도면. 전달 카테터를 외부 경동맥(ECA)에 삽입한다. ICA: 내부 경동맥, CCA: 총경동맥. 주사 동안, CCA를 임시로 결절시켜 색전을 ICA로 들어가게 한다. (D, E) 마이크로비드(D) 또는 응고 혈액(E)의 주사 후의 뇌 표면의 형광 영상.
도 5. rHA-인페스틴-4는 트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)에 의해 정량되는 손상을 감소시킨다. 색전 투여 후 3일째의 TTC 염색에 의한 조직 손상의 평가가 막대 그래프로 나타내어져 있다. 상응하는 뇌 절편의 대표적인 TTC 슬라이스 및 형광 반사 영상이 도시되어 있다. 데이터는 평균 + 평균의 표준 오차로서 나타내어져 있다. * p < 0.05.
도 6. 이차 출혈은 rHA-인페스틴-4에 의해 증가되지 않는다(3일째). 비드 또는 응고 혈액의 주사 후 3일째의 이차 출혈의 평가. 마우스마다 대표적인 하나의 뇌 슬라이스가 나타내어져 있다. 적색 프레임은 출혈이 검출된 마우스를 나타낸다(화살표).
도 7. rHA-인페스틴-4는 SPECT-CT에 의해 평가되는 응고 혈액의 투여 후의 손상 부위에서 FXIII 활성을 감소시킨다. 혈장 트랜스글루타미나제 활성(FXIIIa)은 응고 혈액으로 이루어진 색전을 투여한지 3시간 후에 평가하였다. FRI: 응고 혈액의 위치를 보여주는 형광 반사 영상법. %IDGT는 조직 그램당 주사된 용량을 나타낸다. TBR: 표적 대 백그라운드 비. 데이터는 평균 + 평균의 표준 오차로 나타냄. * p < 0.05.
도 8. rHA-인페스틴-4는 SPECT-CT에 의해 평가되는 마이크로비드의 투여 후의 손상 부위에서 FXIII 활성을 감소시킨다. 혈장 트랜스글루타미나제 활성(FXIIIa)은 비드 색전을 적용한지 3시간 후에 평가하였다. FRI: 비드의 위치를 보여주는 형광 반사 영상법. %IDGT는 조직 그램당 주사된 용량을 나타낸다. TBR: 표적 대 백그라운드 비. 데이터는 평균 + 평균의 표준 오차로 나타냄. * p < 0.05.
도 9. FXIII에 대한 면역조직화학법. 비드 또는 응고 혈액을 투여한지 3시간 후의 FXIII에 대한 면역조직화학 염색. 막대는 50㎛을 나타낸다.
도 10. 응고 혈액의 투여 후 MRI에 의해 측정되는 MPO 활성의 변화는 없다. 응고 혈액으로 이루어진 색전을 투여한지 3일 후 MPO 활성의 평가. FRI: 응고 혈액의 위치를 보여주는 형광 반사 영상법. AU: 임의 단위. CNR: 대조도 대 잡음 비. 데이터는 평균 + 평균의 표준 오차로 나타냄, p > 0.05.
도 11. 마이크로비드의 투여 후 MRI에 의해 측정되는 MPO 활성의 변화는 없다. 마이크로비드 색전을 투여한지 3일 후 MPO 활성의 평가. FRI: 비드의 위치를 보여주는 형광 반사 영상법. AU: 임의 단위. CNR: 대조도 대 잡음 비. 데이터는 평균 + 평균의 표준 오차로 나타냄, p > 0.05.
본 출원의 실시형태는 의료 시술을 받는 환자에서 인자 XII(FXII) 억제제를 투여하는 방법에 관한 것으로서, 상기 의료 시술은 심장; 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관으로부터 선택된 하나 이상의 혈관; 및 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관 중 하나 이상과의 접촉을 포함한다. 의료 시술은 표적 기관의 허혈을 초래할 수 있는 신체의 상기 혈관들 중 하나 이상에서의 하나 이상의 색전의 방출 및 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후의 FXII 억제제의 투여를 포함한다. 허혈은, 색전이 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해로 이루어지는지에 관계없이, 다양한 유형의 색전에 의해 야기될 수 있다. 한 실시형태에서, 표적 기관은 뇌이고, 환자는 SBI를 갖고 있거나, 갖고 있었거나, 상기 SBI의 위험이 있다. 또한, 본 출원의 실시형태는 SBI의 연구 및 치료제 후보물질의 평가에 유용할 수 있는 SBI의 동물 모델을 제공한다.
본 출원의 실시형태의 하나의 이점은 일련의 의료 시술을 받거나, 다른 질환 병태를 나타내거나 나타내지 않는 환자에서 SBI를 감소시킬 수 있다는 것이다. 청구된 방법의 성공 여부는 환자가 다음의 시술 또는 질환 병태 중 어느 하나를 갖는지 갖지 않는지에 의존하지 않는다. 따라서, 청구된 방법의 성공여부는 환자가 근본적인 질환, 또는 예를 들면, 혈전증의 근본적인 위험을 갖는지 갖지 않는지에 의존하지 않는다. 사실상, 청구된 방법은, 예를 들면, 혈전증의 근본적인 위험은 없지만, 의료 시술, 예를 들면, 선천성 심장 결함을 고치기 위해 의료 시술을 받은 환자에서 효과적으로 기능할 것으로 생각된다. 따라서, 환자 집단이 혈전증의 위험이 있는 환자 집단보다 넓고, 이에 따라, 이들과는 구분된다. 본 출원은 특정 시술 또는 질환 병태를 갖는 환자 집단을 포함하거나 배제한 환자 집단 하위세트를 청구하고자 의도된다.
I. 정의
본 출원에서 사용되는 약어 "FXII"은 인자 XII 및 활성화 인자 XII(FXIIa) 중 어느 하나 또는 둘 다를 나타낸다. 따라서, 용어 "FXII 억제제"는 FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다의 억제제를 포함한다. 또한, 항-FXII 항체는 FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다에 결합하여 이를 억제하는 항체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "허혈"은 사람 환자 또는 동물에서, 치료되지 않는 경우, 허혈성 손상을 초래하는 조직 또는 표적 기관으로의 불충분한 혈액 공급 상태를 나타낸다. 예를 들면, 대뇌 또는 "뇌 허혈"은 산소 공급이 뇌 조직의 요구를 충족시키지 않도록 하는 뇌로의 혈액 감소를 나타낸다. 뇌 "경색"은 허혈 또는 혈류의 중단이 세포사를 초래할 만큼 길게 지속될 경우 초래될 수 있는 죽은 뇌 조직을 나타낸다. 경색은 컴퓨터 단층촬영(CT) 또는 MRI을 사용하여 확인할 수 있다. 경색은 또한 통상의 MRI에서 뚜렷한 변화를 초래하기에는 너무 작고 분산되어 있음을 특징으로 하는 작은 허혈성 손상 또는 미소병변에 의해 야기되는 죽은 조직을 나타낼 수 있다. 이러한 작은 경색은 확산 강조 MRI와 같은 보다 민감한 영상화 장비를 사용해야 볼 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "허혈성 손상"은 확산형 또는 국소형 허혈, 미소-손상, 일과성 허혈, 미소-병변, 병변, 미소-경색 또는 경색과 같이 허혈의 결과로서 표적 기관에 발생할 수 있는 광범위한 손상을 나타낸다. 허혈성 손상은 추가로, 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해를 포함하는 색전에 의해 야기될 수 있음을 특징으로 할 수 있다.
색전의 크기에 따라, 상이한 사례가 초래될 수 있다. 예를 들면, 색전, 예를 들면, 비혈전용해성 물질(기포를 포함함)이 보다 크다면, 이것은 뇌졸중을 유발할 수 있다. 이러한 사례는 심장 수술 또는 동맥내 시술의 부작용일 수 있다. 색전, 예를 들면, 기포가 보다 작거나, 다수의 작은 색전, 예를 들면, 다수의 기포가 존재한다면, 이것은 SBI를 유발할 수 있다. 한 실시형태에서, 뇌졸중은, 예를 들면, 기포로 이루어진 색전에 의해 유발된다.
용어 "무증상"은, "무증상 뇌 허혈"("SBI") 또는 "무증상 뇌 경색" 또는 "임상적으로 무증상인"으로 언급되는 경우, 예를 들면, 편측 마미, 감각 감퇴 및/또는 실어증과 같은 급성의 명백한 뇌졸중-정의 증상들이 없는 뇌 조직에서의 허혈 병태를 나타낸다. 뇌졸중은 24시간 이상 지속되는 국소형 신경 결손을 초래하는 뇌 순환의 장애(impairment)와 관련된 임의의 급성 임상 사례로서 정의될 수 있다. SBI는 행동 변화, 인지 능력 악화, 시야 결손, 사지 장애(arm and leg disturbances), 노쇠, 우울 증상, 신체 기능의 저하 및 악화된 혈관성 치매를 포함하지만 이에 제한되지 않는 보다 미약한 신경학적 결손과 관련될 수 있다. 예를 들면, 이전의 일과성 허혈 발작 또는 뇌졸중-유사 증상과 관련된 경색은 증상성(symptomatic)으로서 정의할 수 있고, 반면 상응하는 뇌졸중-유사 증상을 갖지 않는 경색은 "무증상"으로서 정의할 수 있다. 용어 "무증상"은 증상이 없음을 의미하는 것은 아니고; 이것은 증상이 전형적인 뇌졸중과는 구분되며 일반적으로 보다 미약하고, 특정 경우에, 정교한 영상법 또는 보다 강력한 시험, 예를 들면, 인지 시험에 의해서만 검출할 수 있는 기타의 방법으로 자체를 나타냄을 의미한다. 용어 "확산형(diffuse)"은, 기관에서의 확산형 색전성 허혈로 언급되는 경우, 기관의 하나 이상의 위치로의 색전의 산란에 의해 야기되는 허혈의 특징을 나타내고, 즉 허혈은 국소성이 아니다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "감소시키는(reducing)"은 개체에서 또는 동물에서 SBI의 가능성을 저하시키고, 증상의 중증도를 저하시키고/저하시키거나 실제 SBI를 갖는 SBI의 위험이 있는 집단에서 환자의 비율을 저하시키는 것을 포함한다.
따라서, "감소시키는"은 SBI의 병태를 줄이거나, 저하시키거나, 약화시키거나, 제한하거나, 경감시키거나, 개선함을 나타낸다. SBI를 감소시킴은, 예를 들면, SBI의 발병으로부터 보호하거나; SBI의 위험을 감소시키거나, 발병함에 따라 또는 일단 발병했다면 SBI의 중증도를 감소시키거나; SBI의 손상을 제한하거나, 예를 들면, 허혈성 손상이 경색으로 진행되는 것을 제한하거나; SBI의 확산을 감소시키거나, 예를 들면, 허혈성 손상에 의해 영향을 받거나 손상을 받은 뇌 영역 또는 혈관의 양을 제한하거나; 염증 또는 부종과 같은 SBI와 관련된 뇌에서의 병태를 개선함을 포함할 수 있다.
한 실시형태에서, 환자는 SBI를 갖고 있거나, 갖고 있었다. 특정 실시형태에서, 환자는 SBI에 대해 "위험이 있다". SBI에 대해 "위험이 있는" 환자는 심장; 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관; 및 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관 중 어느 하나와의 접촉을 포함하는 의료 시술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정인 환자를 포함한다. SBI에 대해 "위험이 있는" 환자는 신체내 혈관에서 하나 이상의 색전의 방출을 포함하는 의료 시술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정이다. SBI를 갖고 있거나, 갖고 있었거나, 상기 SBI의 위험이 있는 환자에게 FXII 억제제를 투여하는 방법은 SBI의 발병을 제한하거나, SBI의 진행을 제한하거나 SBI의 손상을 경감시키기 위한 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 일어날 수 있다. 특정 실시형태에서, 환자는 FXII 억제제를 투여하기 위해 SBI를 가질 필요는 없다. 예를 들면, 환자는 의료 시술 전에 SBI를 갖지 않을 수 있거나, 또는 환자가 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 SBI를 갖고 있는지 모를 수도 있지만, 이러한 경우에, 환자는 의료 시술로 인해 SBI의 "위험이 있고", 따라서, FXII 억제제가 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 환자 또는 동물은 FXII 억제제를 투여하기 전, 투여하는 동안 및/또는 투여한 후에 SBI를 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 환자 또는 동물은 FXII 억제제를 투여하기 전, 투여하는 동안 및/또는 투여한 후에 SBI를 갖지 않을 수 있다.
용어 "초래할 수 있다(could result)"는 표적 기관으로의 허혈이 색전을 발생시키는 시술을 받은 환자 또는 동물에서 발생하고 환자 또는 동물이 아직 FXII 억제제를 제공받지 않은 시나리오를 포함하도록 의도되며; 이것은 또한 환자 또는 동물이 이전에 또는 동시에 FXII 억제제의 투여를 받았기 때문에 시술을 받은 환자 또는 동물에서 표적 기관으로의 허혈이 발생하지 않는 시나리오를 포함한다. 허혈(및 허혈이 지속되는 경우 발생되는 임의의 경색)은 환자 또는 동물이 시술 후 단시간내에, 예를 들면, 시술을 종료한지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 또는 30분 내에, 1시간 내에 또는 2, 4, 6, 8, 12, 24, 28, 72 또는 96시간 내에 FXII 억제제를 제공받는다면 일어나지 않을 수도 있다.
예를 들면, 동물 모델의 한 실시형태에서, FXII 억제제는 시술 전, 시술 동안 및/또는 시술 직후(상기에 정의된 바와 같이) 투여될 수 있고, 따라서, 동물이 SBI를 발병하지 않을 수 있다. 동물 모델의 다른 실시형태에서, FXII 억제제는 시술 후에 투여될 수 있으며, 동물은 SBI를 발병할 수 있다. 이 용어는 또한 포함된 의료 시술들 중 하나를 갖는 각각 모든 환자가 사실상 색전을 제거하지는 못한다는 사실을 나타낸다. 이러한 각각의 시나리오는 본 출원의 실시형태에 포함된다.
동물 대상체에서 어구 "무증상 뇌 허혈을 유도하는"은 상기 동물이, 예를 들면, 영상법 및/또는 조직학에 의해 뇌에서 경색과 같은 허혈성 손상의 지표를 가지며, 증상이 상기에 및 실시예 2A에 기재된 바와 같이 임상적으로 무증상인 방법을 나타낸다.
의료 시술을 "받는(receiving)" 환자는 의료 시술을 받으려 하고 있거나, 의료 시술을 받고 있거나, 의료 시술을 받았던 환자를 나타낸다.
"FXII 억제제가 허혈성 손상을 감소시키도록 허용하는"에서 사용되는 용어 "허용하는(allowing)"은 뇌에서 허혈성 손상을 감소시키기에 충분한 투여량으로 및 투여 경로를 통해 FXII 억제제를 투여하는 것으로서 정의된다. 용어 "감소시키다(reduce)" 및 "허혈성 손상"은 위에 정의되어 있다. 허혈성 손상의 양은 MRI 및/또는 CT를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 영상화 장비로 평가할 수 있다.
"색전"은 혈관을 폐색시킬 수 있는 고체, 액체 또는 기체로 이루어진 임의의 탈착된 혈관내 물질을 나타낸다. 폐색은 시작점(point of origin)으로부터 떨어진 부위에서 발생할 수 있다. 색전의 조성은 거품 또는 CO2; 오일, 지방, 콜레스테롤; 잔해, 예를 들면, 혈관 잔해, 예를 들면, 석회화, 조직, 또는 종양 단편; 응고 혈액, 유기체, 예를 들면, 박테리아 또는 기생충, 또는 기타의 감염성 제제; 또는 이물질을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 용어 "거품"은 공기 또는 기타의 가스, 또는 특정 경우에는, 혈액 또는 응고 혈액이 아닌 액체로 형성된 색전을 포함한다. 거품은 형상이 구형이거나 비-구형일 수 있다. 한 실시형태에서, 색전은 혈전이 아니다. 다른 실시형태에서, 색전은 응고 혈액으로 구성된다. 용어 "미세색전"은 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "색전"에 포함되며, 미시적인 크기의 색전을 나타내고, 위에 정의된 바와 같은 색전과 동일한 물질로 구성될 수 있다. 따라서, "색전"은 단수 또는 다수의 색전, 미세색전, 색전의 샤워(shower) 또는 미세색전의 샤워를 포함한다.
색전은 동맥 색전일 수 있으며, 여기서, 탈착된 혈관내 물질이 동맥 또는 동맥계의 혈관 내에 존재한다. 한 실시형태에서, 색전은 "역핵성 색전(paradoxical embolus)"이며, 이것은, 예를 들면, 중격 결손으로 인해 동맥계로 통과하는 정맥 기원의 색전을 나타낸다.
"상동성"은 동일하거나 보존적 치환을 구성하는 아미노산의 수 %를 나타낸다. 상동성은 GAP와 같은 서열 비교 프로그램을 사용하여 측정할 수 있으며(Deveraux et al., 1984, Nucleic Acids Research 12, 387-395), 이는 본원에 참조로 인용된다. 이러한 방식으로, 갭(gap)을 얼라인먼트(alignment)에 삽입함으로써 본원에 인용된 것과 유사하거나 실질적으로 상이한 길이의 서열을 비교할 수 있으며, 이러한 갭은, 예를 들면, GAP에 의해 사용되는 비교 알고리즘에 의해 결정된다.
II . 의료 시술
한 실시형태에서, FXII 억제제는 의료 시술을 받는 환자에게 투여된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "의료 시술"은 진단, 중재, 치료 또는 수술의 행위를 나타낸다. 한 실시형태에서, 의료 시술은 심장; 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관으로부터 선택된 하나 이상의 혈관; 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관 중 하나 이상과의 접촉을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "접촉"은 기구, 외적 대상, 사람, 예를 들면, 외과의, 또는 의료 시술로 인해 상기 혈관 구조를 건드리는 임의의 다른 대상에 의한 상기 혈관 구조의 물리적 터치(physical touching)를 나타낸다. 한 실시형태에서, 의료 시술은 상기 혈관 중 하나 이상의 내부와의 접촉을 포함한다. 특정 실시형태에서, 의료 시술은 상기 혈관 중 하나 이상의 클램핑을 포함한다. 실시형태들에서, 의료 시술은 색전의 방출을 포함하며, 색전은 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해로 이루어질 수 있다. 실시형태들에서, 의료 시술은 카테터, 스텐트, 벌룬, 그래프트, 및/또는 조영제의 투여 중의 어느 하나 또는 그 이상을 포함하며, 그 중에서도 특히, 조영제의 주사는 의도하지 않게도 기포를 생성하고/하거나 잔해를 제거할 수 있다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 혈관 시술이다. 용어 "혈관 시술"은 심장 또는 혈관에 영향을 미치는 임의의 시술을 포함하며, 여기서, 혈관은 혈액을 운반하거나 함유하고 있는 구조물로서 정의된다. 혈관 시술은, 예를 들면, 카테터 사용 또는 조영제 투여를 수반할 수 있다. 특정 실시형태에서, 의료 시술은 동맥계를 수반하며, 이는 동맥, 동맥 가지, 소동맥, 모세혈관, 또는 심장으로부터 혈액을 운반하는데 관여하는 혈관을 포함하는 시술을 나타낸다. 실시형태들에서, 의료 시술은 다음의 혈관 중 하나 이상을 포함한다: 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥; 예를 들면, 총간동맥 및/또는 고유간동맥을 포함하는 간동맥; 예를 들면, 상장간 동맥 및/또는 하장간 동맥을 포함하는 장간 동맥; 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관; 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관.
용어 "진단용"은 병태, 질환 또는 장애를 확인하거나 평가하기 위해 수행되는 시술을 나타낸다. 진단용 시술은, 예를 들면, 카테터, 스텐트, 벌룬, 그래프트 중 임의의 하나 이상의 사용 및/또는 조영제 투여를 포함할 수 있다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 혈관 수술이다. 혈관 수술은 혈관 구조, 예를 들면, 심장 또는 혈관을 수반하는 수술을 나타낸다. 혈관 수술의 예는 심혈관 수술, 예를 들면, 관상 동맥 우회로 이식술; 또는 심폐 우회로가 없는 심장 동맥 이식술; 예를 들면, 대동맥 또는 승모 판막, 대동맥, 또는 승모판 판막절개술 또는 판막성형술을 포함하는 심장 판막 치환 또는 재건; 심장 이식; 협착 또는 역류의 상태를 개선시키기 위한 수술; 일시 또는 영구 심박조율기, 양심실 심박조율기를 포함한 심박조율기를 수반하는 수술; 발생기 변화, 리드 추출 또는 이식형 루프 리코더, 이식된 제세동기(implanted cardioverter/defibrillator) 장치, 또는 순환을 지지하기 위한 기계 장치, 예를 들면, 체외 펌프(extracorporeal pump) 또는 심실 보조 장치를 수반하는 수술; 경동맥 내막절제술; 혈전내막적출술; 대동맥 동맥류 및 박리 수술; 투석 접근 시술, 예를 들면, 동맥-정맥 누공; 심장 종양 또는 외상성 심장 손상을 수반하는 수술; 및 재건 수술 또는 임의의 다른 최근 공지된 또는 장래의 혈관 수술을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
혈관 수술은, 예를 들면, 선천성 심장 결함을 위한 교정 수술을 포함할 수 있다. 선천성 심장 결함을 위한 교정 수술은 기형 또는 결함의 수리, 예를 들면, 심방 또는 심실 중격 결손의 수리; 동맥관 개존증의 수리; 션트(shunt)의 수리; 대동맥 협착 수리; 전체 또는 부분 폐정맥 환류 이상의 수리; 대혈관 완전 전위 또는 심실내 수술의 정맥 치환 교정; 팔로 4징증(tetralogy of Fallot)의 수리를 위한 수술; 또는 선천성 심장 결함에 대한 임의의 다른 최근 공지된 또는 장래의 수술을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 카테터 사용을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "카테터"는 혈관에 삽입되는 관을 나타낸다. 카테터 사용을 수반하는 시술의 예는 혈관 스텐트 삽입술, 예를 들면, 관상 동맥, 경동맥 스텐트 삽입술, 두개내 스텐트 삽입술, 대동맥 또는 장골 동맥; 혈관성형술, 예를 들면, 벌룬 혈관성형술; 혈전절제술; 카테터-지시된 혈전용해술; 색전술, 화학치료요법 또는 열의 직접 또는 국소 투여; 심장 판막 치환 또는 재건; 또는 대동맥 또는 승모판 판막절개술 또는 판막성형술을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 한 실시형태에서, 의료 시술은 임의의 카테터 또는 스텐트의 사용이나, 혈관 박리 또는 클램핑을 수반하는 시술을 포함한다. 혈관 시술은 이물질(예를 들면, 백금 코일)을 적용한 혈관 프로빙, 예를 들면, 혈관내-코일 폐색, 혈관내-동맥류 폐색 또는 두개내 혈관 프로빙을 포함할 수 있다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 영상화를 포함한다. 영상화는 생체내 생물학적 및 세포적 프로세스를 가시화하기 위해 사용될 수 있으며, 병태, 질환 또는 장애의 스크리닝, 진단, 평가, 모니터링 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. 영상화는 카테터 사용을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 관상 동맥 맥관구조, 폐 맥관구조 또는 신체의 임의의 부분의 맥관구조, 또는 대동맥 조영상(aortogram)을 조사함을 포함하는, 진단상의 혈관조영술 또는 카테터-기반 혈관조영술을 포함한 관상 동맥 조영술과 같은 영상화 기술이 혈관계를 영상화할 수 있다.
한 실시형태에서, 의료 시술은 조영제, 방사성 동위원소 또는 염료의 투여를 포함한다. 영상화 장비 및 통상적으로 사용되는 조영제의 논의를 위해서는, 문헌[Pysz MA et al. 65 Clinical Radiology 500-516, 2010]를 참조하며; 조영제 및 각종 영상화 기술의 예는 아래에 제공되어 있다.
예를 들면, CT에서 사용되는 조영제는 바륨, 요오드, 크립톤 및 크세논을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 단일 광자-방출 컴퓨터 단층촬영술(single photon-emission computed tomography; SPECT-CT)에서 사용되는 조영제는 99 mTc, 123I, 111In, 177Lu를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 양전자 방출 단층촬영술(positron emission tomography; PET)에서 사용되는 통상의 조영제는 동위원소, 11C, 18F, 64Cu, 68Ga를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. MRI에서 사용되는 조영제는 가돌리늄(Gd3 +), 산화철 입자(SPIO, USPIO), 산화망간 및 19F를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 자기 공명 분광법(magnetic resonance spectroscopy; MRS)에서 사용되는 조영제는 콜린, 크레아틴, 락테이트, 지질, 폴리아민 및 N-아세틸-아스파르테이트를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 가스-충전 미소구체(예를 들면, 퍼플루오로부탄) 또는 지질-쉘이 있는 거품과 같은 마이크로버블 조영제(contrast microbubble)가 초음파 검사(ultrasound; US)에 사용될 수 있다. 형광 분자, 염료 및/또는 광 흡수 입자가 광학 영상화 기술에서 사용될 수 있다. 11C, 18F, 64Cu, 111In, 99 mTc, 90Y, 131I, 123I-/131 및 153Sm과 같은 방사성 추적자(radiotracer)가 종양학, 심혈관 또는 신경학 영상법에서 사용될 수 있다. 캅테신(capthesin) B- 또는 MMP2/9-활성화된 "스마트" 형광 프로브가 광학 단층촬영술에서 사용될 수 있다. NIRF 염료, 양자점(quantum dot), 및 표면 증강 라만 산란(surface enhanced Raman scattering; SERS) 특성을 갖는 나노입자를 포함하는 조영제가 라만 분광법에서 사용될 수 있다. 다른 영상화 기술은 2차원 ECHO, 스트레스 echo, 도플러 ECHO 및 경식도 ECHO를 포함하여, 마이크로버블과 같은 조영제를 사용하는 심장 초음파(ECHO)를 포함할 수 있다. 영상화 기술은 현미경법, 광음향 영상법, 또는 임의의 다른 최근 공지된 또는 장래의 분자 영상화 장비 및/또는 관련 조영제를 포함할 수 있다. 분자 영상법은 조직 또는 질환 특이적 마커에 결합하거나 표적화된 전달을 위해 치료제 후보물질에 부착되는 나노입자 및 마이크로비드(미소구체 및 미소입자 포함)의 투여를 포함할 수 있다.
FXII 억제제는 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 환자에게 투여될 수 있다. FXII 억제제는 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72 또는 96시간 또는 그 이상 내에 투여될 수 있다. FXII 억제제는 단일 용량으로 또는 다중 용량으로, 또는 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 12, 24 또는 48시간 또는 그 이상의 간격으로 반복해서 투여될 수 있다. FXII 억제제는 또한 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72 또는 96시간 또는 그 이상 동안 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 출혈의 위험을 증가시키지 않는 유리한 특성 때문에, FXII 억제제는 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 투여될 수 있다. 최적 투여 시간은 각각의 특정 시술에 대해 임상 시험으로 결정할 수 있다. 투여 시점은 또한 시술의 유형, 또는 환자의 이력, 근본 질환(들) 및/또는 다른 약제의 사용을 포함하는 개별 환자의 상태와 같은 인자에 의존할 수 있으며, 의료인(healthcare provider)에 의해 결정될 수 있다.
III . FXII 억제제
상기에 논의된 바와 같이, "FXII"는 인자 XII 및 활성화된 인자 XII(FXIIa) 중 어느 하나 또는 둘 다를 나타낸다. 따라서, "FXII 억제제"는 FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다의 억제제를 포함한다. 또한, 항-FXII 항체는 FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다에 결합하여 이를 억제하는 항체를 포함한다. 용어 "FXII 억제제"는 또한 반감기 연장 폴리펩타이드에 연결되어 있는 FXII의 억제제를 포함하는 것을 의미하고, 이것은 한 실시형태에서 링커를 포함한다.
한 실시형태에서, FXII/FXIla 억제제는 특이적 FXII/FXIla 억제제, 바람직하게는 특이적 FXIIa 억제제이다.
특이적 FXII/FXIla 억제제는 1:1의 몰 비로 사용되는 경우 FXII 및/또는 FXIIa 이외의 혈장 세린 프로테아제를 25% 이하로 억제하는 억제제를 나타낸다. 즉, 특이적 FXII/FXIla 억제제는, 각각의 혈장 세린 프로테아제 대 상기 억제제 1:1의 몰 비로 사용되는 경우, FXII 및/또는 FXIIa 이외의 혈장 세린 프로테아제를 25% 이하로 억제한다. 예를 들면, 특이적 FXII/FXIla mAb는 혈장 세린 프로테아제 FXIa를 단지 5%까지 억제(여기서, FXIa 대 상기 mAb의 몰 비는 1:1이다)하고, 반면 동일한 FXII/FXIla mAb는 FXIIa를 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 90%까지 억제한다.
본 발명의 한 실시형태에서, 하나의 다른 혈장 세린 프로테아제는, 각각의 혈장 세린 프로테아제 대 상기 억제제 1:1의 몰 비로 사용되는 경우, 50% 이상까지 억제된다.
본 발명의 다른 실시형태에서, 두 개의 다른 혈장 세린 프로테아제는, 각각의 혈장 세린 프로테아제 대 상기 억제제 1:1의 몰 비로 사용되는 경우, 50% 이상까지 억제된다.
또 다른 실시형태에서, FXII/FXIla 억제제는 인간화 모노클로날 항체, 바람직하게는 완전 인간화 모노클로날 항체를 포함한 사람 FXII/FXIla 억제제이다.
A. 인페스틴 -4
한 실시형태에서, 본 출원은 인페스틴 도메인 4, 인페스틴-4를 포함하는 FXII 억제제를 제공한다. 한 실시형태에서, FXII 억제제는 인페스틴-4의 변이체를 포함한다. 다른 실시형태에서, FXII 억제제는 인페스틴 도메인 4, 및 임의로 인페스틴 도메인 1, 2 및/또는 3을 포함하며; 이들 단백질들은 FXII의 강력한 억제제인 것으로 공지되어 있다(제WO 2008/098720호 참조; 또한 문헌[Campos ITN et al. 577 FEBS Lett. 512-516, 2004] 참조). 인페스틴-4의 야생형 폴리펩타이드 서열이 제공되어 있다(서열번호 1). 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "변이체"는 아미노산 돌연변이를 갖는 폴리펩타이드를 나타내고, 여기서, "돌연변이"는 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 치환, 결실 또는 부가로서 정의되며, 여기서, 이러한 변화는 FXII를 억제하는 폴리펩타이드의 기능적 능력을 변경하지 않는다. 용어 "변이체"는 야생형 또는 돌연변이된 인페스틴-4 서열의 단편을 포함한다. 이러한 변이체의 추가의 예는 아래에 제공되어 있다.
한 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13(도 2에서 밑줄 그어진 서열 참조), 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이, 또는 6개의 보존된 시스테인 잔기(도 2에서 진하게 표시된 아미노산 참조) 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다. 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13은 트롬빈에 결합하는 관련 억제제 로드니우스 프롤릭수스(Rhodnius prolixus)(PDB: 1 TSO)에 대한 구조적 데이터의 분석 및 키모트립신에 결합하는 SPINK-1의 분석을 기초로 하여 FXII에 결합시키는데 중요할 수 있으며, 상기 분석 둘 다는 도 1에 도시된 바와 같이 N-말단 영역에서의 접촉 부위의 축적이라는 공통된 특징을 공유한다. 따라서, 한 실시형태에서, 인페스틴-4의 변이체는 야생형 인페스틴-4 서열의 아미노산 2 내지 13의 보존된 N-말단 영역, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 이들 보존된 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 돌연변이는 치환, 결실 또는 부가일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "상기 N-말단 아미노산 이외의"는 서열 VRNPCACFRNYV를 포함하는 아미노산, 즉, 야생형 인페스틴-4 서열로부터의 아미노산 2 내지 13의 인접 스트레치(contiguous stretch) 이외의 변이체의 폴리펩타이드 쇄를 따라 있는 임의의 아미노산을 나타낸다. 다른 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는 6개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하고, 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 갖는다. 한 실시형태에서, 6개의 보존된 시스테인 잔기는 야생형 인페스틴-4 서열의 6, 8, 16, 27, 31 및 48 위치에 있는 아미노산이다(도 2 참조). 한 실시형태에서, 변이체는 최종 보존된 시스테인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 시스테인 잔기의 정확한 위치, 및 서로에 대한 상대적 위치는 인페스틴-4 변이체에서의 삽입 또는 결실로 인해 야생형 인페스틴-4 서열의 6, 8, 16, 27, 31 및 48 위치로부터 변할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이들 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는 모두 6개의 시스테인을 포함하며, 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70%, 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성을 공유할 수 있다.
실시형태들에서, 인페스틴-4의 변이체는 FXII를 억제하는 것을 특징으로 한다. FXII를 억제하는 기능적 활성은, 예를 들면, FXII 효소 활성의 억제를 시험하는 직접 검정, 지연된 응고 시간, 즉, 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(activated partial thromboplastin time; aPTT), 또는 응고를 평가하는 생체내 방법을 포함하는 시험관내 및/또는 생체내 확인을 통해 평가할 수 있다. 인페스틴-4 변이체의 추가의 예는 SPINK-1 돌연변이체이며, 이것은 아래에 기재되어 있다.
B. SPINK -1 돌연변이체
한 실시형태는 사람에서 치료학적 사용을 위한 FXII 억제제를 포함한다. 인페스틴-4에 대해 높은 유사성을 갖는 사람 단백질이 사용될 수 있다. 예를 들면, 인페스틴-4에 대해 가장 높은 유사성을 갖는 사람 단백질은 췌장에서 발현되는 카잘-타입(Kazal-type) 세린 프로테아제 억제제인 SPINK-1이다(췌장 분비성 트립신 억제제, PSTI라고도 공지되어 있음). 카잘-타입 세린 프로테아제 억제제 계열은 세린 프로테아제 억제제의 수많은 계열 중 하나이다. 상이한 종으로부터의 다수의 단백질들이 기재되어 있다(Laskowski M and Kato I, 49 Ann. Rev. Biochem. 593-626, 1980). 인페스틴-4와 SPINK-1 간의 아미노산 서열 유사성이 도 2에 요약되어 있다.
인페스틴-4에 대한 SPINK-1 서열의 상동성을 증가시키기 위해, 야생형 SPINK-1 서열(서열번호 2)에 기초하여, 상이한 변이체를 생성할 수 있다. 어구 "인페스틴-4에 대한 증가된 상동성"은 SPINK-1 서열이 인페스틴-4 서열에 더 가깝게 되도록 SPINK-1에 대해 아미노산 돌연변이를 만드는 프로세스를 나타낸다.
한 실시형태에서, SPINK-1은 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13을 포함하도록 돌연변이된다; 폴리펩타이드 서열이 제공되어 있으며, K1로 나타낸다(서열번호 3). 상기한 바와 같이, 인페스틴-4 서열의 N-말단 부분이 FXII 억제 기능을 위해 중요한 것으로 생각된다.
따라서, 한 실시형태에서, 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는 또한 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13, 및 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 하나 이상 및 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 다른 실시형태에서, 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는 6개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하고, 야생형 SPINK-1 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 갖는다. 돌연변이는 치환, 결실 또는 부가일 수 있다. 상기에 정의된 바와 같이, 용어 "상기 N-말단 아미노산 이외의"는 서열 VRNPCACFRNYV로 이루어진 아미노산, 즉, 야생형 인페스틴-4 서열로부터의 아미노산 2 내지 13의 인접 스트레치 이외의 변이체의 폴리펩타이드 쇄를 따라 있는 임의의 아미노산을 나타낸다. 용어 "변이체"는 상기 돌연변이된 SPINK-1 서열의 단편을 포함한다. 한 실시형태에서, 6개의 보존된 시스테인 잔기는 야생형 SPINK-1 서열의 9, 16, 24, 35, 38 및 56 위치의 아미노산일 수 있다(도 2 참조). 한 실시형태에서, 변이체는 최종 보존된 시스테인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 시스테인의 정확한 위치, 및 서로에 대한 상대적 위치는 SPINK-1 변이체에서의 삽입 또는 결실로 인해, 야생형 SPINK-1 서열의 9, 16, 24, 35, 38 및 56 위치로부터 변할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이들 실시형태에서, SPINK-1 변이체는 모두 6개의 시스테인을 포함한다. 실시형태들에서, SPINK-1 변이체는 또한 FXII를 억제하는 것을 특징으로 한다.
이러한 SPINK-1 변이체의 예가 제공되어 있으며, K2 및 K3(각각 서열번호 4 및 5)으로 명명된다. SPINK-1 변이체 K2 및 K3에서, 인페스틴-4에 대한 상동성을 증가시키기 위해 N-말단 이외의 추가의 아미노산 치환이 이루어지며, 여기서, 변이체는 또한 FXII 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다. 제WO 2008/098720호를 참조한다. 도 3은 이들 변이체의 아미노산 서열 및 SPINK-1 야생형 서열에 대한 변화 정도를 보여준다. SPINK-1 변이체 K3의 경우에, 인페스틴-4에 대한 상동성을 증가시키기 위해 5회 아미노산 치환이 이루어졌다. 따라서, 실시형태들에서, SPINK-1 변이체는 야생형 SPINK-1 서열과 70%, 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성을 공유할 수 있다.
C. 기타 FXII 억제제
한 실시형태에서, FXII의 기타 억제제가 의료 시술을 받는 환자에게 투여된다. 상기에 논의된 바와 같이, 용어 FXII의 억제제는 FXII 및 FXIIa 둘 다의 억제제를 포함한다. 제WO2006/066878호에, FXII에 대한 항체의 사용 또는 FXII의 억제제의 사용이 제안되어 있다. 구체적으로, FXII에 대한 억제제로는 항트롬빈 III(AT III), 안지오텐신 전환 효소 억제제, C1 억제제, 아프로티닌, 알파-1 프로테아제 억제제, 안티파인([(S)-1-카복시-2-페닐에틸]-카바모일-L-Arg-L-Val-Arginal), Z-Pro-Pro알데하이드-디메틸 아세테이트, DX88(Dyax Inc., 300 Technology Square, Cambridge, MA 02139, USA; 인용 문헌: Williams A and Baird LG, 29 Transfus Apheresis Sci. 255-258, 2003), 류펩틴, 프롤릴 올리고펩티다제의 억제제, 예를 들면, Fmoc-Ala-Pyr-CN, 옥수수-트립신 억제제(CTI), 소 췌장 트립신 억제제의 돌연변이체, 에코틴, 각시가자미 항응고 단백질(yellowfin sole anticoagulant protein), 서양계 호박(Curcurbita maxima) 동형억제제를 포함한 서양계 호박(Cucurbita maxima) 트립신 억제제-V, 및 하마다린(Hamadarin)(문헌 참조: Isawa H et al. 277 J. Biol. Chem. 27651-27658, 2002), 및 Pro-Phe-Arg-클로르메틸-케톤(PCK)이 포함된다.
FXII 억제제는, 예를 들면, 항체, 또는 항체의 단편 또는 억제 활성을 보유하는 모방체, 예를 들면, 미국 특허 제6,613,890호 제4 내지 제8 컬럼에 기재된 바와 같은 아밀로이드 전구체 단백질의 쿠니츠(Kunitz) 프로테아제 억제제 도메인의 유사체일 수 있다. 기타의 적합한 억제제는 문헌[Isawa H et al. 277 J. Biol. Chem. 27651 -27658, 2002]에 기재된 바와 같은 하마다린일 수 있다. 적합한 옥수수 트립신 억제제 및 이의 제조 방법은 문헌[Chen Z et al. 65 Applied and Environmental Microbiology, 1320-1324, 1999, 및 Wen L et al. 18 Plant Mol. Biol. 813-814, 1992]에 기재되어 있다.
다른 실시형태에서, FXII 억제제는 FXII에 결합하여 FXII 활성화 및/또는 활성을 억제하는 항-FXII 항체일 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들면, 제WO 2006/066878호 및 문헌[Ravon et al., 1 Blood 4134-43, 1995]에 기재되어 있다. 상기에 논의된 바와 같이, "항-FXII 항체"는 FXII 및 FXIIa 중의 어느 하나 또는 둘 다에 결합하여 이를 억제하는 항체를 포함한다. 항-FXII 항체는 아래에 더욱 상세하게 기재된다.
D. 반감기 증진 폴리펩타이드에 연결된 FXII 억제제
본 출원의 다른 양상은 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)에 연결된 FXII 억제제를 제공한다. 한 실시형태에서, FXII 억제제는 소 단백질이다. 따라서, 다른 소 단백질에 대해 공개된 바와 같이 신속한 신장 청소율(renal clearance)을 기대할 수 있다(Werle M and Bernkop-Schnurch A, 30 Amino Acids 351-367, 2006). 폴리펩타이드성 화합물의 짧은 혈장 반감기를 해결하기 위한 한 방법은 이를 반복해서 또는 연속 주입을 통해 주사하는 것이다. 다른 접근법은 폴리펩타이드 자체의 고유 혈장 반감기를 증가시키는 것이다. 예를 들면, 한 실시형태에서, FXII 억제제는 반감기 연장 단백질에 연결된다.
"반감기 증진 폴리펩타이드"는 환자에서 또는 동물에서 생체내 FXII 억제제의 반감기를 증가시킨다. 예를 들면, 알부민과 면역글로불린 및 이들의 단편 또는 유도체가 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)로서 기재되어 있다. 밸런스 등(Ballance et al.)(제WO 2001/79271호)은 사람 혈청 알부민에 융합되는 경우, 생체내에서 기능적 반감기를 증가시키고 저장 수명을 연장시킬 것으로 예측되는 다수의 상이한 치료학적 폴리펩타이드의 융합 폴리펩타이드를 기재하고 있다.
용어 "알부민" 및 "혈청 알부민"은 사람 알부민(HA) 및 이의 변이체(이의 완전 성숙 형태가 제공된다(서열번호 6)) 뿐만 아니라 다른 종으로부터의 알부민 및 이의 변이체를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "알부민"은 알부민 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열, 또는 알부민의 하나 이상의 기능적 활성(예를 들면, 생물학적 활성)을 갖는 알부민 변이체를 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 알부민은 FXII 억제제의 치료학적 활성을 안정화시키거나 연장시킬 수 있다. 알부민은 척추동물, 특히 포유동물, 예를 들면, 사람, 원숭이, 암소, 양 또는 돼지로부터 유도될 수 있다. 비-포유동물 알부민은 암탉 및 연어로부터의 알부민을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 알부민-연결된 폴리펩타이드의 알부민 부분은 치료학적 폴리펩타이드 부분과는 다른 동물로부터 유래할 수 있다. 알부민 융합 단백질에 대해서는, 예를 들면, 제WO 2008/098720호를 참조한다.
한 실시형태에서, 알부민 변이체는 적어도 10, 20, 40개 또는 적어도 70개 아미노산 길이이거나, HA 서열(서열번호 6)로부터의 15, 20, 25, 30, 50개 이상의 인접 아미노산을 포함할 수 있거나, HA의 특정 도메인의 일부 또는 전부를 포함할 수 있다. 알부민 변이체는 아미노산 치환, 결실 또는 부가, 보존적 또는 비-보존적 치환을 포함할 수 있으며, 여기서, 이러한 변화는 반감기 증진 폴리펩타이드의 치료학적 활성을 부여하는 활성 부위 또는 활성 도메인을 실질적으로 변경하지 않는다. 이들 변이체는 70%, 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성을 공유할 수 있다.
한 실시형태에서, 알부민 변이체는 단편을 포함하며, 알부민의 하나 이상의 전체 도메인 또는 상기 도메인의 단편, 예를 들면, 도메인 1(서열번호 6의 아미노산 1 내지 194), 2(서열번호 6의 아미노산 195 내지 387), 3(서열번호 6의 아미노산 388 내지 585), 1 + 2(서열번호 6의 1 내지 387), 2 + 3(서열번호 6의 195 내지 585) 또는 1 + 3(서열번호 6의 아미노산 1 내지 194 + 서열번호 6의 아미노산 388 내지 585)으로 이루어지거나 대안적으로 이들을 포함할 수 있다. 각각의 도메인은 자체 2개의 상동성 서브도메인, 즉, 1 내지 105, 120 내지 194, 195 내지 291, 316 내지 387, 388 내지 491 및 512 내지 585와 잔기 Lys106 내지 Glu1 19, Glu292 내지 Val315 및 Glu492 내지 Ala511을 포함하는 가요성 서브도메인간 링커 영역(flexible inter-subdomain linker region)으로 구성된다.
다른 실시형태에서, 알파-페토프로테인(제WO 2005/024044호; Beattie and Dugaiczyk, 20 Gene 415-422, 1982), 아파민(Lichenstein et al. 269 J. Biol. Chem. 18149-18154, 1994), 및 비타민 D 결합 단백질(Cooke and David, 76 J. Clin. Invest. 2420-2424, 1985)을 포함하지만 이들에 제한되지 않는, 알부민과 구조적으로 또는 진화적으로 관련된 다른 단백질들이 HLEP로서 사용될 수 있다. 이들의 유전자는 사람, 마우스 및 래트에서 동일한 염색체 영역에 대한 구조적 및 기능적 유사성 맵핑을 갖는 다중 유전자 클러스터를 나타낸다. 알부민 계열 구성원의 구조적 유사성은 HLEP로서의 이들의 이용가능성을 시사한다. 예를 들면, 알파-페토프로테인은 생체내에서 부착된 치료학적 폴리펩타이드의 반감기를 연장시키는 것으로 청구되어 있다(제WO 2005/024044호). 치료학적 활성을 안정화시키거나 연장시킬 수 있는 이러한 단백질 또는 이의 변이체가 사용될 수 있으며, 이것은 척추동물, 특히 포유동물, 예를 들면, 사람, 원숭이, 암소, 양 또는 돼지, 또는 암탉 또는 연어를 포함하지만 이들에 제한되지 않는 비-포유동물로부터 유도될 수 있다. 제WO 2008/098720호를 참조한다. 이러한 변이체는 길이가 10개 이상인 아미노산일 수 있거나, 각각의 단백질 서열의 약 15, 20, 25, 30, 50개 이상의 인접 아미노산을 포함할 수 있거나, 각각의 단백질의 특정 도메인의 일부 또는 전부를 포함할 수 있다. 알부민 계열 구성원 융합 단백질은 자연 발생적인 다형성 변이체를 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 면역글로불린(Ig), 또는 이의 변이체가 HELP로서 사용될 수 있으며, 여기서, 변이체는 단편을 포함한다. 한 실시형태에서, Fc 도메인 또는 면역글로불린 불변 영역의 일부가 사용된다. 불변 영역은 IgM, IgG, IgD, IgA 또는 IgE 면역글로불린의 불변 영역일 수 있다. 치료학적 폴리펩타이드 부분은 절단가능할 수 있는 항체의 힌지 영역 또는 펩타이드성 링커를 통해 Ig에 연결된다. 몇몇 특허 및 특허 출원에, 생체내에서 치료학적 단백질의 반감기를 연장시키기 위한 면역글로불린 불변 영역으로의 치료학적 단백질의 융합이 기재되어 있다(제US 2004/0087778호, 제WO 2005/001025호, 제WO 2005/063808호, 제WO 2003/076567호, 제WO 2005/000892호, 제WO 2004/101740호, 제US 6,403,077호). 예를 들면, 사이토킨 IFN-β에 융합된 Fc는 증진된 IFN-β 생물학적 활성, 연장된 순환 반감기 및 보다 큰 용해도를 달성하였다(제WO 2006/000448호). 따라서, 다른 실시형태는 이러한 면역글로불린 서열, 예를 들면, 면역글로불린 및 이의 변이체의 Fc 단편을 HLEP로서 사용하는 것이다. FXII의 억제제는 HLEP로서의 Fc 도메인 또는 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부에 융합될 수 있고, 원핵 또는 진핵 숙주 세포, 예를 들면, 박테리아, 효모, 식물, 동물(곤충 포함) 또는 사람 세포주에서 또는 유전자전이 동물에서 재조합 분자로서 생성될 수 있다(제WO 2008/098720호). SPINK-K2-Fc 융합 단백질이 예시적으로 서열번호 7로 나타내어져 있다.
E. 링커
한 실시형태에서, 중재 펩타이드성 링커(intervening peptidic linker)가 치료학적 폴리펩타이드와 HLEP 사이에 도입될 수 있다. 한 실시형태에서, 특히 HLEP가 예를 들면, 입체 장애에 의해 치료학적 폴리펩타이드의 특이적 활성을 방해하는 경우에는, 절단가능한 링커가 도입된다. 특정 실시형태에서, 링커는 내인성, 외인성 또는 공통의 응고 경로의 응고 프로테아제와 같은 효소에 의해 절단된다. 내인성 경로의 응고 프로테아제는, 예를 들면, FXIIa, FXIa 또는 FIXa를 포함하는 접촉 활성화 경로에서의 프로테아제이다. 한 실시형태에서, 링커는 FXIIa에 의해 절단된다. 외인성 경로의 프로테아제는 조직 인자 경로의 프로테아제, 예를 들면, FVIIa를 포함한다. 공통 경로의 프로테아제는 피브리노겐에서 피브린으로의 전환에 관여하는 프로테아제, 예를 들면, FXa, FIIa 및 FXIIIa를 포함한다.
F. 치료학적 제형 및 투여
FXII 억제제 또는 이의 변이체는 80% 이상, 또는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 순도를 가질 수 있다. 한 실시형태에서, 변이체는 기타의 단백질 및 핵산과 같은 오염성 거대분자에 대해 순도 99.9% 이상의 약제학적으로 순수한 상태를 가질 수 있으며, 감염성 제제 및 발열성 제제를 함유하지 않는다.
정제된 FXII 억제제는, 환자에서 SBI를 치료하기 위한 약제학적 제제를 제공하기 위한 약제학적 부형제가 임의로 첨가될 수 있는 통상의 생리학적으로 상용성인 수성 완충 용액에 용해될 수 있다. 이러한 약제학적 담체 및 부형제뿐만 아니라 적합한 약제학적 제형이 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[Kibbe et al. Handbook of Pharmaceutical Excipients, (3rd ed., Pharmaceutical Press), 2000]을 참조한다. 약제학적 조성물은 동결건조되거나 안정한 가용성 형태로 제형화될 수 있다. 폴리펩타이드는 당업계에 공지된 다양한 과정에 의해 동결건조될 수 있다. 동결건조된 제형은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 희석제, 예를 들면, 멸균 주사용수 또는 멸균 생리 염수 용액의 첨가에 의해 사용 전에 재구성된다.
FXII 억제제의 제형은 약제학적으로 적합한 임의의 투여 수단에 의해서 환자에게 전달된다. 다양한 전달 시스템이 공지되어 있으며, 임의의 통상의 경로에 의해 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다. 조성물은 전신에, 예를 들면, 비경구적으로 투여될 수 있다. 여기서 사용되는 용어 "비경구적"은 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내 및 기관지내 주사, 점적주사, 분무 적용 및 주입 기술을 포함한다. 비경구 제형은 볼루스 형태로 또는 연속 주입으로서 정맥내로 또는 공지된 과정에 따라 피하로 투여할 수 있다. 비경구 사용을 위해 널리 공지되어 있는 바람직한 액체 담체는 멸균수, 염수, 수성 덱스트로즈, 당 용액, 에탄올, 글리콜 및 오일을 포함한다. 전신 사용을 위해, 치료학적 단백질은 정맥내관 또는 동맥관용으로 제형화될 수 있다. 제형은 주입에 의해 또는 볼루스 주사에 의해 연속적으로 투여될 수 있다. 몇몇 제형은 서방출 시스템을 포함한다. 한 실시형태에서, 제형은 패치로서 투여된다. 경구 투여용 정제 및 캡슐제는 통상의 부형제, 예를 들면, 결합제, 충전제, 윤활제 또는 습윤제 등을 함유할 수 있다. 경구 액체 제제는 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 에멀젼, 시럽제, 엘릭시르제 등의 형태일 수 있거나, 사용을 위해 물 또는 다른 적합한 비히클로 재구성하기 위한 건조 제품으로서 존재할 수 있다. 이러한 액체 제제는 통상의 첨가제, 예를 들면, 현탁제, 유화제, 비수성 비히클 및 방부제를 함유할 수 있다.
FXII 억제제의 용량은 다수의 인자, 예를 들면, 지표, 제형 또는 투여 방식에 의존할 수 있으며, 각각의 지표에 대해 전임상적 및 임상적 시험으로 결정될 수 있다. FXII 억제제의 용량을 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 환자에게 투여할 수 있다. 한 실시형태에서, FXII 억제제는 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72 또는 96시간 내에 투여할 수 있다. FXII 억제제는 단일 용량으로 또는 다중 용량으로, 의료 시술 전, 의료 시술 동안 및/또는 의료 시술 후에 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 12, 24 또는 48시간의 기간 동안 연속 주입으로서, 또는 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 12, 24 또는 48시간의 간격으로 반복해서 투여할 수 있다. 출혈의 위험을 증가시키지 않는 유리한 특성 때문에, 한 실시형태에서, FXII 억제제는 시술 동안에 투여된다. 약제학적 조성물은 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 투여될 수 있다. 이들 제제는 동시-제형화될 수 있거나, 별도의 제형으로서 동시에 또는 별도로, 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 통해 투여할 수 있다. 투여 스케쥴 또는 FXII 억제제의 용량은 또한 다른 의료 병태 또는 치료요법과 같은 인자에 따라 동일한 지표 또는 상이한 지표를 갖는 개별 환자 간에 다를 수 있다.
IV . SBI 의 동물 모델
본 출원의 한 양상은 하나 이상의 표적 기관에서 허혈성 손상을 초래할 수 있는 색전의 이질성 메커니즘 및 공급원을 모방하는 허혈의 동물 모델에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 동물 모델은, 하나 이상의 표적 기관에서 허혈성 손상을 초래할 수 있는 동물의 동맥계에서의 하나 이상의 색전의 방출을 포함하고, 여기서, 표적 기관은 뇌, 심장, 신장, 간 및/또는 위장관 조직(식도, 위, 소장 및/또는 대장(결장 및/또는 직장 포함)을 포함함)이고, 여기서, 추가로, 표적 기관이 뇌인 경우, 허혈성 손상은 임상적으로 무증상임을 특징으로 하고/하거나 색전은 비혈전용해성인, 시술을 포함한다. 한 실시형태에서, 표적 기관은 뇌이다. 한 실시형태에서, 동물을 임상적으로 무증상인 뇌에서의 허혈성 손상의 지표에 대해 평가한다. 특정 실시형태에서, 동물은 또한 표적 기관에서 허혈성 손상을 감소시킬 수 있는 치료제 후보물질의 능력에 대해 시험하기 위해 치료제 후보물질을 제공받는다. 용어 "임상적으로 무증상인"은 상기에 정의되어 있다. 이러한 실시형태에서, 뇌에서의 허혈성 손상이 "임상적으로 무증상"인지를 평가하기 위해 마우스를 임상적으로 평가하며, 즉, 동물을 뇌졸중과 관련된 급성, 명백한 행동 또는 운동 결손에 대해 평가한다. 뇌졸중의 지표는 이상운동증, 기면, 움켜쥠(grip), 사지 위약(limb weakness), 눈꺼풀 처짐, 보행 장애, 빙글빙글 돌기(circling) 및 구르기(rolling)를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 색전 투여 후 뇌졸중-유사 증상을 나타내지 않는 동물은 임상적으로 무증상인 뇌에서의 허혈성 손상을 가질 수 있다.
동물 모델은 또한 뇌에서의 허혈성 손상의 지표에 대한 동물의 평가를 포함한다. 한 실시형태에서, 평가는 영상화를 포함한다. 허혈성 손상의 "지표"는 뇌의 영상을 평가함으로써 당업계의 숙련가에게 자명해질 수 있다. 예를 들면, 조직 손상을 초래하는 허혈성 손상은 뇌 영상에서 조직 외관의 물리적 변화에 의해 또는 뇌 부위에 또는 주위에서의 염증, 응혈 또는 부종의 증거에 의해 자명해질 수 있다. 예를 들면, 분자의 확산이 손상 조직과 그 주변에서 다르기 때문에 확산-강조 MRI(DWI)가 허혈성 손상을 가시화하는데 사용될 수 있다.
동물 모델은 비치료학적 모델인 것으로 간주되며, 즉, 이것은 색전의 임상적 영향을 평가하기 위한 연구 도구이다. 이러한 모델에서, 색전은 허혈을 초래할 목적으로 동물에서 의도적으로 방출되며, 다른 조치가 취해지지 않는다면 이러한 색전은 허혈성 손상을 일으킨다. 즉, 동물의 건강 및 행복은 시술에 의해 개선되지 않으며, 따라서, 이것은 치료학적이라고 간주할 수 없으며, 유리한 외과적 시술이라고 간주할 수도 없다. 동물은 평가 과정 동안 또는 평가 말기에 희생된다. 그럼에도 불구하고, 한 실시형태에서, 동물 모델은 허혈을 치료하기 위한 치료제 후보물질을 평가하는데 유용할 수 있다. 이들 실시형태에서, 치료제 후보물질이 동물 모델에서 치료학적 결과를 가질 수 있지만, 이것은 치료제 후보물질이고 동물 모델이 아니며, 이것은 치료학적인 것으로 간주된다.
A. 동물
동물 모델은 추가로, 동물이 마우스, 래트, 토끼, 고양이, 개, 돼지 또는 원숭이를 포함하지만 이에 제한되지 않는 포유동물일 수 있음을 특징으로 한다. 예를 들면, 동물은 마우스 또는 래트일 수 있다. 동물은 수컷 또는 암컷일 수 있으며, 어떠한 연령이라도 가능하다. 사용될 수 있는 뮤린 스트레인의 예로는 BALB/c, C57/BL6, C57/CL10J, CBA/J, DBA/J, FVB/J, C3H/HeJ, A/J, AKR/J, 129S1/SvlmJ, 129X1/SvJ, NOD, SJL, TALLYJO/JngJ, MRL, NZW, 서브스트레인 및 하이브리드 스트레인을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 사용될 수 있는 래트 스트레인의 예로는 CD, 위스터(Wistar), 피셔(Fisher), 스프라그 돌리(Sprague Dawley), BBDP, 롱-에반스(Long-Evans), 주커(Zucker), 무모 래트(Hairless rat), 및 서브스트레인 및 하이브리드 스트레인이 포함되지만, 이들에 제한되지 않는다.
한 실시형태에서, 동물 모델의 동물은 변형된, 예를 들면, 유전자 변형 동물 또는 다른 방식으로, 예를 들면, 시술 또는 물질의 투여에 의해 변경된 동물이다. 유전자 변형 동물은 녹 아웃 또는 녹 인(knocked out or knocked in) 유전자(들), 또는 조건부로 녹 아웃 또는 녹 인된 유전자(들)를 가질 수 있다. 동물은 이들이 다른 질환에 대한 모델로서 사용됨을 특징으로 할 수 있다. 예를 들면, 동물은 유전적 배경으로 인해 또는 질환 또는 변경된 병태(예를 들면, 자가면역 질환, 예를 들면, NOD 마우스에서, 또는 MOG-유도된 EAE에서)을 유도하는 제제 또는 시술을 받음으로 인해 다른 질환에 걸리기 쉬울 수 있다. 이러한 변형된 상태 또는 질환 배경에서 SBI를 연구하기 위해 동물 모델을 사용하는 것은 중요할 수 있다.
B. 색전
한 실시형태에서, 의료 시술 동안 도입될 수 있는 하나 이상의 색전을 모방하기 위해 비혈전용해성 색전이 동물에게 투여된다. 본원에서 사용되는 용어 "비혈전용해성"은 혈전용해성 약물로 용해되지 않는 색전을 나타낸다(즉, 색전은 혈액으로 이루어지지 않는다). 이들 실시형태에서, 시술은 혈전이 아닌 색전을 방출한다. 비혈전용해성 색전의 예로는 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤 및/또는 잔해가 포함되지만, 이들에 제한되지 않고, 이들 색전은 혈전용해성 약물로 용해될 수 없기 때문이다.
한 실시형태에서, 색전은 초음파와 같은 영상화 기술에서 사용되는 조영제를 모방하는 마이크로버블의 용액이다. 따라서, 뇌에서의 모세혈관 및 소동맥은 국소 분포라기보다는 확산 분포로 폐색될 수 있다.
한 실시형태에서, 마이크로비드는 비-용해성(non-lysable) 색전을 모방하기 위해 사용되며, 투여하더라도 명백한 뇌졸중-유사 증상을 초래하지 않는다는 것을 특징으로 한다. 용어 "마이크로비드"는 미소구체 및 기타의 미소입자(예를 들면, 형태가 균일하게 구형이 아닌 미소입자)를 포함한다. 한 실시형태에서, 마이크로비드는 비혈전용해성 색전을 모방하는데 사용된다. 마이크로비드의 크기는, 예를 들면, 20 내지 200㎛, 25 내지 1OO㎛ 또는 30 내지 50㎛로부터의 임의의 크기일 수 있다. 투여되는 마이크로비드의 양은 500 내지 600, 500 내지 700, 500 내지 800, 500 내지 900, 500 내지 1000 및 500 내지 2000개의 마이크로비드로부터의 임의의 양을 포함하여, 500, 또는 1000, 또는 2000개의 마이크로비드일 수 있다. 마이크로비드의 수는 동물의 크기, 마이크로비드의 타입 및 크기, 및 기타의 실험 인자에 따라 다를 수 있다. 마이크로비드는 폴리스티렌, 폴리에틸렌 또는 기타의 중합체, 라텍스, 유리, 세라믹, 금속, 양자점(quantum dot) 또는 상자성체를 포함하지만 이들에 제한되지 않는 천연 또는 합성 물질로 이루어질 수 있다. 한 실시형태에서, 마이크로비드는 형광성이며, 이것은 색전성 물질의 추적(tracking)을 가능하게 할 수 있다. 형광 염료로는 쿠마린, 플루오레세인, 로다민 또는 피코에리트린, 또는 이의 접합체가 포함되지만, 이들에 제한되지 않는다. 마이크로비드를 내부적으로 염색하거나, 형광 염료에 접합시킬 수 있다. 투여를 위해 마이크로비드를 사용하는 한가지 이점은 이들이 쉽게 표준화된다는 것이며, 여기서, 마이크로비드의 크기 및 양은 정량할 수 있고, 투여되는 양을 다수의 동물에 걸쳐 일정하게 유지할 수 있다.
다른 실시형태에서, 색전을 동물에게 투여하고, 여기서, 색전은 응고 혈액을 포함한다. 응고 혈액은 조직 균질화 또는 초음파처리(sonication)와 같은 기술을 사용하여 작은 단편으로 축소시킬 수 있다. 응고 혈액의 공급원은 투여 받는 동일 동물의 혈액으로부터 또는 동일한 스트레인 또는 종의 동물로부터 또는 투여 받는 동물 이외의 다른 스트레인 또는 종의 동물로부터 유래할 수 있다. 응고는 CaCl2, 트롬빈 또는 사람 트롬빈과 같은 공지된 응고 시약을 사용하여 유도할 수 있다. 한 실시형태에서, 응고 혈액은, 예를 들면, 조영제 또는 혈액 저류제(blood pool agent), 예를 들면, 근적외선 혈액 저류제를 사용함으로써 형광으로 이루어진다.
다른 실시형태에서, 색전은 카테터를 사용하여 동물의 동맥계에서 방출된다. 다른 실시형태에서, 색전은 클램핑 및/또는 수술을 포함하는 시술로 인해 동물의 동맥계에서 방출된다.
C. 시술
한 실시형태에서, 하나 이상의 색전이 동물의 동맥계로 주사된다. 색전은 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관을 포함한 임의의 동맥으로 주사될 수 있다.
한 실시형태에서, 색전은 경동맥으로 주사된다. 한 실시형태에서, 동맥은 클램핑된다. 특정 실시형태에서, 일시적 결찰(temporary ligation)이 동맥 주위, 예를 들면, 경동맥 주위에 묶인다. 한 실시형태에서, 색전은 심장내 주사를 통해 투여될 수 있지만, 이러한 방법은 몇몇의 단점을 갖는다. 이러한 실시형태에서, 색전은 동물 전신에 걸쳐 분포되므로, 얼마나 많은 색전이 뇌에 머물러 있는지 불명확하기 때문에 표준화를 더욱 어려워진다. 또한, 시술의 사망률이 높고, 주사가 성공적이었는지가 분명하지 않을 수 있다. 특정 상황에서, 표적 기관, 예를 들면, 심장, 신장, 간, 및/또는 식도, 위, 소장 및/또는 대장(결장 및/또는 직장 포함)을 포함하는 위장관 기관에 대한 허혈을 평가하는데 심장내 주사가 유용할 수 있다.
한 실시형태에서, 튜브 또는 카테터가 색전을 투여하는데 사용된다. 카테터는 동맥 카테터일 수 있다. 카테터는 폴리에틸렌, 폴리우레탄, 또는 기타의 중합체 또는 물질로 이루어질 수 있다. 카테터는 주사 부위 및 동물 크기에 적절한 크기일 수 있다. 카테터는 색전을 주사하는데 도움이 되도록 변형될 수 있으며, 예를 들면, 카테터는 작은 실험실용 동물에서 사용하기에 적합한 보다 가늘고 보다 얇고 보다 끝이 뾰족한 카테터를 수동으로 달성하도록 관을 신장시킴으로써 변형할 수 있다. 한 실시형태에서, 주사 바늘이 사용되며, 여기서, 당업계의 숙련가는 색전을 동물의 동맥계에 기술적으로 주사할 수 있다.
D. 평가
실시형태들에서, 동물 모델은 평가 단계를 포함한다. 평가는 생체내 또는 생체외 기술, 예를 들면, 영상법 및/또는 조직학을 포함할 수 있다. 영상화 기술은 방사선학 또는 핵 의학, 예를 들면, SPECT-CT 및/또는 FMT-CT를 포함하는 CT; 확산-강조 MRI(DWI) 또는 fMRI를 포함하는 MRI; PET; 광학 영상법, 예를 들면, 형광 반사 영상법; 초음파, 현미경법, 형광투시법, 자기방사법 및/또는 인광 영상법을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 조직학 및/또는 염색 기술, 예를 들면, TTC 염색, 면역조직화학법 및/또는 조직화학법이 수행될 수 있다.
한 실시형태에서, 동물 모델은 색전의 방출로 인해 발생할 수 있는 생리학적 프로세스, 예를 들면, 염증, 혈액 응혈 또는 보체 활성화를 평가하기 위해 분자 영상화 기술과 함께 사용될 수 있다. 예를 들면, 중요한 생리학적 프로세스에 관여하는 분자를 영상화 장비에 적절한 조영제, 방사성 동위원소 또는 염료로 표지화할 수 있다. 다양한 영상화 장비에 사용되는 염료 및 조영제가 상기에 기재되어 있으며, 당업계의 숙련가에게 널리 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[Pysz MA et al. 65 Clinical Radiology 500-516, 2010]을 참조한다.
E. 치료제 후보물질
다른 실시형태에서, 동물 모델은 SBI를 치료하기 위한 치료제 후보물질의 평가에 유용할 수 있다. 어구 "치료제 후보물질을 뇌에서 허혈성 손상을 감소시키는 이들의 능력에 대해 시험한다"에서 사용되는 용어 "감소시키는 능력"은, 치료제 후보물질을 시험하는 목적이 이것이 허혈성 손상을 감소시킬 수 있는지, 즉, 치료제 후보물질이 SBI를 제한하거나 치료할 수 있는지를 평가하기 위한 것인 경우에 시험되는 임의의 치료제 후보물질로서 이해되는 것을 의미한다. 따라서, 치료학적 시험 후보물질을 SBI의 동물 모델에 투여할 수 있으며, 뇌에서 허혈성 손상을 감소시키는 이의 능력을 평가한다. 평가는, 치료제 후보물질이 뇌에서 허혈성 손상 또는 허혈성 손상과 관련된 상태를 감소시키거나, 증가시키거나, 또는 이의 양에 있어서의 변화를 초래하지 않는지를 밝힐 수 있다.
한 실시형태에서, 치료제 후보물질은 시술 전, 시술 동안 및/또는 시술 후에 동물에게 투여한다. 평가는 시험 전반에 걸쳐 1회 또는 다수회 수행될 수 있다. 예를 들면, 생체내 영상화는 시술 또는 치료제 후보물질의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 수행할 수 있다. 대조군은 치료제 후보물질을 제공받지 않은 동물을 포함할 수 있거나, 시술 또는 치료제 후보물질의 투여 전 및 투여 후에 동물을 영상화함을 포함할 수 있다.
동물 모델의 한 실시형태에서, 치료제 후보물질은 시술 전, 시술 동안 및/또는 시술 후 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72 또는 96시간 또는 그 이상 내에 투여될 수 있다. 치료제 후보물질은 단일 용량 또는 다중 용량으로, 또는 시술 전, 시술 동안 및/또는 시술 후 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 12, 24 또는 48시간 또는 그 이상의 간격으로 반복해서 투여될 수 있다. 한 실시형태에서, 치료제 후보물질은 FXII 억제제이다. 출혈의 위험을 증가시키지 않는 유리한 특성 때문에, FXII 억제제가 시술 동안 및/또는 시술 전 및/또는 시술 후에 투여될 수 있다. 치료제 후보물질의 용량은 치료제 후보물질의 특성들, 예를 들면, 반감기 또는 독성에 의존할 수 있거나, 사용되는 동물의 타입 또는 크기, 또는 사용되는 동물의 상태에 의존할 수 있으며, 경험적으로 결정하는 것이 필요할 수 있다. 예를 들면, 한 실시형태에서, FXII 억제제의 용량은 1mg/kg, 50mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg, 500mg/kg, 1000mg/kg 또는 1 내지 1000mg/kg, 또는 50 내지 500mg/kg, 또는 100 내지 200mg/kg이다. 치료제 후보물질의 용량은 치료제 후보물질을 동물에게 투여하는데 사용되는 임의의 방법을 통해서 동물에게 투여될 수 있다. 한 실시형태에서, 치료제 후보물질은 전신 투여된다. 한 실시형태에서, 치료제 후보물질은 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 투여된다.
한 실시형태에서, 치료제 후보물질은 항체이다. 항체는 전장 Ig, Fab, F(ab)2, Fv, scFv의 형태, 또는 다른 형태 또는 이들의 변이체일 수 있다. 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있다. 항체는 이소형(isotype)이 IgM, IgD, IgA, IgG 또는 IgE, 또는 이들의 변이체임을 특징으로 할 수 있다. 항체는 사람, 마우스, 래트, 토끼, 염소, 햄스터 또는 원숭이를 포함하지만 이들에 제한되지 않는 포유동물 종 유래일 수 있다. 항체는 인간화되거나 CDR-그래프팅될 수 있다. 항체는 면역원성, 반감기를 변경하거나 치료 항체와 관련된 다른 유리한 특성을 부여하도록 돌연변이되거나 변형될 수 있다. 한 실시형태에서, 항체는 SBI의 병리생리학에 관여하는 분자를 억제한다. 한 실시형태에서, 항체는 항-FXII 항체이다. 이러한 실시형태에서, 항체는 FXII(여기서, "FXII"은 FXII 및 FXIIa을 포함한다)의 중쇄 또는 경쇄 상의 에피토프, 예를 들면, 중화 에피토프에 결합할 수 있다. 항체는 FXII에 결합하기 위한 높은 친화도 및/또는 높은 결합활성을 가질 수 있다. 항체는 하나 이상의 항원을 인식할 수 있는 특성을 가질 수 있다. 항체는 폴리펩타이드, 핵산 또는 소분자에 접합될 수 있다.
다른 실시형태에서, 치료제는 단백질, 펩타이드, 핵산 또는 소분자이다. 용어 "소분자"는 저분자량 화합물을 나타낸다. 소분자는, 예를 들면, 1000dalton 미만일 수 있으므로, 세포 막을 가로질러 확산될 수 있다. 소분자는 응고 경로의 분자, 즉, FXII, 또는 SBI의 병리생리학에 관여하는 분자에 높은 친화도로 결합함을 특징으로 할 수 있다. 바람직한 소분자는 GI 관으로부터 재흡수될 수 있는 것이다.
실시형태들이 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 실시예는 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 다른 실시형태들은 명세서의 검토 및 기재된 실시형태의 실행으로부터 당업계의 숙련가들에게 자명해질 것이다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참조문헌, 특허 및 공개 특허 출원의 내용은 본원에 참조로 인용된다.
실시예
실시예 1 : 인페스틴 -4 및 rHA - 인페스틴 -4의 제조
인페스틴-4 상보적 DNA 서열을 합성하고, 이의 5 위치에서 링커(Gly-Gly-Ser)3에 대해 암호화 서열로 확장시키고, pIRESpuro3(제조원; BD Biosciences, Heidelberg, Germany)의 BamH1 및 NotI 부위에 삽입하였다. 알부민 상보적 DNA를 정방향 프라이머(forward primer) 5-GCGGCTAGCATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCC-3(서열번호 8) 및 역방향 프라이머(reverse primer) 5-GCGGGATCCTCCTAAGCCTAAGGCAGCTTGACTTG-3(서열번호 9)를 이용한 PCR에 의해 증폭시켰다. 앰플리콘(amplicon)을 NheI 및 BamH1로 소화시키고, 인페스틴-4 벡터의 NheI/BamH1 부위에 삽입하였다. 알부민-링커 인페스틴-4(rHA-인페스틴-4)로 이루어진 융합 단백질을 발현할 수 있는 얻어진 벡터를 에세리키아 콜라이(Escherichia coli) TOP10(제조원: Invitrogen, Karlsruhe, Germany)에서 성장시키고, 표준 프로토콜(제조원: Qiagen, Hilden, Germany)을 사용하여 정제하였다. HEK-293 세포를 Lipofectamine 2000 시약(제조원: Invitrogen)으로 형질감염시키고, 4㎍/mL 퓨로마이신의 존재하에 혈청-비함유 배지(Invitrogen 293 Express)에서 성장시켰다. 형질감염된 세포군을 발효기에서 성장시켰다. 생산된 융합 단백질을 정제하기 위해 상청액을 회수하였다. rHA-인페스틴-4를 면역 친화성 크로마토그래피로 정제하였다. 발효 상청액을 평형화된 항-알부민 컬럼에 적용하였다. 생성물을 글리신 완충액(pH 2.5)으로 용출시켰다. 제WO 2008/098720호; 문헌[Hagedorn I et al. 117 Circulation 1153-1160, 2010]을 참조한다.
(His)6-태그된 인페스틴-4 작제물을 생성하였고, 이것은 rHA-인페스틴-4 작제물과 비교하는 경우 보다 짧은 반감기를 갖는 것으로 밝혀졌다. 제WO 2008/098720호; 문헌[Hagedorn I et al. 117 Circulation 1153-1160, 2010]을 참조한다. (His)6-태그된 인페스틴-4를 POROS MC 20 상에서 구리 금속 킬레이트 크로마토그래피로 정제하였다. 발효 상청액을 인산염-염화나트륨 완충액(pH 7.7)으로 평형화된 황산구리-부하된 컬럼 상에 적용하였다. 이어서, (His)6-태그된 인페스틴-4를 이미다졸 구배에서 용출시켰다.
실시예 2: SBI 의 동물 모델
본 출원은 SBI를 초래하는 이질성 메커니즘을 반영하는 현실적인 동물 모델을 제공한다. 동물 모델의 한 실시형태에서, 허혈성 손상은, 예를 들면, 혈관 시술 및 수술로부터 초래될 수 있는 공기 또는 지방과 같은 비혈전용해성 색전을 모방하는 마이크로비드에 의해 유도될 수 있다. 동물 모델의 다른 실시형태에서, 허혈성 손상은 응고 케스케이드에 있어서의 교란 또는 혈관 벽 손상으로부터 초래될 수 있는 응고 혈액에 의해 유도될 수 있다.
모든 실험은 찰스 리버 래보러토리즈 인코포레이티드(Charles River Laboratories, Inc.)(Wilmington, MA)로부터 입수한 성체 Balb/c 마우스(25 내지 30g; n = 24)에서 수행하였다. 임상시험 심사 위원회(Institutional Review Board)에서 모든 동물 실험을 승인하였다. 동물을 모든 시술 동안 및 시술 후에 생리학적으로 모니터링하였다. 마우스를 2L/분의 보충 산소의 흡입에 의해 2% 이소플루란(isoflurane)을 갖는 이소플루란 챔버에서 마취시키고, 이소플루란 하에 두면서 반듯이 누운 자세로 온열 패드로 옮겼다. 아래에 기재된 절차를 사용하여, 총경동맥을 일시적으로 폐색시켜 관류를 손상시키지 않으면서 색전이 뇌의 동맥계로 이동하도록 하면서, 마이크로비드 또는 생체외 형성된 응고 혈액을 한쪽만이 역행하도록(one-sided retrogradely) 외경동맥을 통해 내경동맥으로 주사하였다.
A. 절차
동물을 마취시킨 후, 목을 면도하고, 완전한 털 제거를 위해 Nair를 적용하였다. 이어서, 목에 이소프로필 알콜을 면봉으로 바르고, 멸균 거즈를 덮었다. 목을 수직 절개(vertical incision)하고, 노출된 이하선을 옆으로 이동시켰다. 총경동맥, 내경동맥 및 외경동맥을 확인하고, 분리하였다. 모든 동맥 결찰을 위해 10-0 Ethicon 나일론 봉합사(제조원: Johnson & Johnson, Brussels, Belgium)를 사용하였다. 두 개의 10-0 봉합사를 외경동맥 주위에, 하나는 내경동맥 주위에 하나는 총경동맥 주위에 묶었다. 외경동맥 주위의 두 개의 봉합사를 묶은 다음 그 사이의 동맥을 절단하였다. 이 시점에서, 본 절차의 이 부분이 뇌 손상을 전혀 일으키지 않았다는 것을 확실히 하기 위해, 외경동맥 결찰만을 받은 대조군의 마우스는 어떠한 추가의 중재도 받지 않았다. 이어서, 일시적 결찰을 총경동맥 및 내경동맥 주위에 묶었다. 변형된 Intramedic 폴리에틸렌 PE10 카테터(I.D. 0.28mm, I.D. 0.61mm, 제조원: Becton Dickinson and Company, Sparks, MD)를 외경동맥의 근위 개방 말단에 삽입하고, 그 위치에서 봉합하였다. 카테터는 약간 더 좁은 내강과 직경을 달성하도록 서서히 견인하고 관을 수동으로 신장시킴으로써 변형된 표준 PE10 카테터였다. 이어서, 내경동맥에 대한 결찰을 풀어서 내경동맥에서 뇌에 공급되는 동맥계로만 흐르도록 하였다. 카테터로의 동맥혈의 플래시백을 관찰한 다음 제조된 마이크로비드 또는 응고 혈액을 주사하였다(도 4).
형광 마이크로비드에 대해, 대략 500개의 마이크로비드의 경동맥내 주사가 재현성있는, 임상적으로 무증상인 미소-병변을 초래하는 것으로 측정되었다. 대략 500개의 Fluoresbrite™ Plain YG 45 미소구체(제조원: Polysciences, Inc., Warrington, PA, 42.58±0.8㎛ 직경, 여기 최대값 = 441nm, 방출 최대값 = 486nm)가 부하된 시린지를 카테터에 부착하여 주사하였다(도 4 A+D).
형광 응고 혈액에 대해, 500㎕의 신선한 이종 마우스 혈액을 심장 천자를 통해 기증자 마우스로부터 채취하고, 초기 항응고를 위한 나트륨 시트레이트 용액(최종 농도 0.32%)에 즉시 가하였다. 20μmol CaCl2를 혈장에 가한 다음 10 단위의 고활성 사람 트롬빈을 가하여 응고를 유도하였다(제품명: Calbiochem®, 제조원: EMD Chemicals, Inc., Darmstadt, Germany, MW 37,000, 100 units/mL, 특이 활성 2800 NIH units/단백질 mg). 혈액을 실온에서 1시간 동안 응고되도록 한 후, 4℃에서 72시간 동안 항온처리를 위해 근적외선 혈액 저류제인 Genhance 680TM(제조원: VisEn Medical, Bedford, MA) 2nmol을 가하였다. 이것은 형광 영상법을 통한 이후의 생체외 검출을 위한 응고 혈액의 형광 염색을 가능하게 한다. 이러한 시간은 응고 혈액의 수축 및 안정화를 가능하게 한다. 사용할 준비가 된 경우, 응고 혈액을 제거하여 생리식염수로 세척하였다. 250㎕의 생리식염수를 응고 혈액에 가한 다음 조직 균질화기를 사용하여 응고 혈액을 작은 입자로 축소시켰다(도 4 B). 이어서, 이러한 형광 미세색전 용액 10㎕를 시린지로 뽑아서 주사하였다.
마이크로비드 또는 응고 혈액의 주사 후, 카테터를 제거하고, 카테터를 제자리에 고정시켰던 봉합사를 끌어당겨 외경동맥을 차단하였다. 이어서, 내경동맥과 총경동맥의 결찰사를 재개방하여 뇌로의 혈류를 복구시키고, 이하선을 재배치하고, 피부를 7-0 나일론 봉합사로 봉합하였다. 동물을 케이지로 되돌려 보내어 회복되도록 하였다.
마취로부터 회복된 후, 마우스를 명백한 행동 및 운동 결손에 대해 평가하였다. 각각의 동물을 이상운동증, 기면, 움켜쥠, 사지 위약, 눈꺼풀 처짐, 보행 장애, 빙글빙글 돌기 및 구르기에 대해 관찰하였다. 상기 증상 중의 어느 하나의 관찰 결과를 뇌졸중의 지표로 간주하는 반면, 상기 증상의 결여는 어떠한 명백한 뇌졸중도 발생하지 않았음을 나타내며, 이는 SBI의 가능성과 일관된다. 뇌졸중 증상이 존재하지 않는다면, 마우스를 SBI의 추가의 평가에 사용하였다. 그렇지 않다면 마우스를 SBI의 추가의 평가로부터 배제하여 희생시켰다.
B. 처리군
SBI 모델의 최적화 후, 4개의 코호트(cohort)를 연구하였다(n = 그룹당 5 내지 7마리): 응고 혈액 또는 마이크로비드에 의해 SBI가 유도된 마우스(비처리 대조군), 및 마우스를 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 200mg/kg의 용량으로 rHA-인페스틴-4로 처리한 2개의 추가의 그룹. 마우스는 SBI 유도 직후 1차 주사를 제공받았다. FXIII 활성의 단일 광자-방출 컴퓨터 단층촬영술-컴퓨터 단층촬영술(Single Photon Emission Computed Tomography-Computed Tomography; SPECT-CT) 영상화를 SBI 3시간 후에 수행하였다. MRI에 의해 SBI 3일 후에 영상화된 코호트에게는 손상 후 3일째까지(당일 포함) 매일 주사를 제공하였다. 트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC) 염색을 SBI 3일 후에 평가하였다.
C. MRI
염증을 MRI로 평가하였다(미엘로퍼옥시다제(MPO)-Gd, 3일째). MRI는 RARE T1 스캔이 있는 Bruker 4.7T 스캐너(TR: 1500ms, TE:8.48ms, Avg:8, 매트릭스: 192 x 192 x 22, 복셀 크기: 0.133mm x 0.13mm x 0.5mm), 동일한 기하학을 갖는 RARE T2(TR:5622.893, TE: 20ms, Avg:4), 및 6개의 확산 방향을 갖는 EPI 확산 강조 서열을 사용하는 확산 강조 영상(DWI)(TR:4800ms, TE: 32ms, 매트릭스: 128 x 128 x 22, 복셀 크기: 0.195mm x 0.195mm x 0.5mm)을 사용하여 수행하였다.
마우스를 10% DMSO로 희석된 미엘로퍼옥시다제-가돌리늄 조영제 0.3mmol/kg의 정맥내 투여 전 및 투여 후 15분마다 90분까지 스캐닝하였다. 이어서, 마우스를 희생시키고, 관류시키고, 뇌를 수거하고, SBI가 발생했는지를 검증하기 위한 OV-100 현미경(제조원: Olympus)에서의 형광 영상법을 위해 슬라이스하였다.
데이터 분석을 위해, Amira 소프트웨어(제조원: Visage Imaging, San Diego, CA)를 사용하였다. 주사 후 90분간의 T1 스캔의 각각의 영상 슬라이스에 대해 관심 영역(Region of interest; ROI)을 확인하였다. MPO 양성 영역의 자동 세그멘테이션(automated segmentation) 이전에 개별적으로 뇌실을 제외시키며, 이러한 세그멘테이션은 면허가 있는 방사선 의사가 검증하였다. MPO 양성 복셀은 평균 정상 뇌 배경 신호의 1.25배의 신호 강도에 의해 자동으로 확인되었다. 신호 진폭 값을 마우스의 몸체 외면의 ROI로부터의 노이즈의 표준 편차로 나누어 MPO 양성 복셀의 대조도 대 잡음 비(contrast to noise ratio; CNR)를 계산하였다. T2 영상은 3D 시각화를 위해 유사한 방식으로 세그멘테이팅하였다.
D. SPECT - CT
SPECT-CT(FXIII-lnd, 3시간)에 의해 응고를 평가하였다. 마우스의 그룹은 인듐-111로 표지된 FXIII-기질 펩타이드를 대략 1mCi 주사하기 1시간 전에 SBI 유도 및 치료를 받았다(실제 주사량은 731 내지 1273μCi이었다). 주사한지 2시간 후, SPECT-CT를 Gamma Medica-Ideas X-SPECT 소 동물 영상화 시스템을 사용하여 수행하였다. CT 스캔은 256회 프로젝션(projection)에 걸쳐 고체상 CMOS 검출기가 구비된 cone beam(50kVp, 500mA) x선 관을 사용하여 수행하였다. 이러한 프로젝션은 변형된 feldkamp 재구성 알고리즘을 사용하여 재구성하였다. SPECT 스캔은 90s/프로젝션으로 64회 프로젝션(각 카메라로부터 32회 프로젝션)을 통해 1mm 중간 에너지 핀홀 시준기를 갖는 이중 감마 카메라를 사용하였다. SPECT 영상은 OSEM(ordered subsets expectation maximization algorithm)을 사용하여 재구성하고, 분자 정보의 정확한 해부학적 동시국재화(colocalisation)를 위해 CT 영상에 융합시켰다.
동물을 채취한 혈액 샘플로 SPECT-CT 영상화한 직후 희생시켰다. 동물을 염수 20ml로 관류시켰다. 근육 샘플을 채취하고; 뇌를 절개하고, 혈액 샘플과 함께, Wallac Wizard 1480 감마 웰 계수기에서 계수하였다. 이어서, 뇌를 2mm 절편으로 슬라이스하고, Olympus Biosystems OV-100 형광 스캐너에서 영상화하였다. 뇌 슬라이스를 양측에서 영상화하였다. 그 후, 슬라이스를 자기방사법을 위해 밤새 인광 영상 플레이트(phosphorimager plate) 상에 두었다. 플레이트를 Molecular Dynamics Typhoon 인광 영상 플레이트 판독기 상에서 판독하였다.
SPECT-CT 데이터 분석을 위해, 뇌와 근육을 Amira 소프트웨어를 사용하여 CT 영상으로부터 수동으로 세그멘팅하여 뇌 대 근육의 표적 대 배경 비(target to background ratio; TBR)를 계산하였다. 데이터를 각 동물의 뇌의 질량 및 주사량에 대해 정규화하였다. 자기방사법, 감마 계수 및 SPECT 데이터를 감쇠 보정하였다. SPECT-CT 데이터의 3D 시각화는 Osirix 소프트웨어(제조원: Pixmeo, Geneva, Switzerland)를 사용하여 재구성하였다.
E. 생체외 평가
MRI 및 SPECT-CT 영상화 후, 연구를 완료하고, 동물을 희생시켜 뇌를 제거하였다.
마우스가 SPECT-CT 서브그룹의 일부라면, 뇌를 우선 섬광 계수(scintillation counting)에 의해 전체 방사선 활성에 대해 측정하였다. 이어서, 신선한 뇌를 마우스 뇌 슬라이서(제조원: Zivic Instruments, Pittsburgh, PA)를 사용하여 2mm 두께의 관상면 절편(coronal section)으로 되도록 절단하였다. 이어서, 모든 뇌를 즉시 평면 반사 형광 영상화 시스템과 고성능 현미경의 하이브리드인 OV-100™ 소 동물 영상화 시스템(제조원: Olympus, Center Valley, PA)으로 즉시 영상화하였다. 뇌 절편을 마이크로비드의 경우에는 명시야 및 GFP 형광 채널(여기 400nm, 방출 508nm)을 사용하고 형광 응고 혈액의 경우에는 근적외선 채널(방출 680nm)을 사용하여 16배 이하의 배율로 영상화하였다. 선택된 해상도, 파장 및 배율에 따라, 영상 획득 시간은 영상에 대한 프레임당 5ms 내지 60초에 이른다. 백색 광 영상을 또한 디지털 카메라로 획득하여, 손상에 의해 야기되는 잠재적인 출혈을 평가하였다. 그후, SPECT-CT 연구에서 마우스에 대해, 뇌 슬라이스를 밤새 인광 영상기 상에 두었다.
마우스가 MRI 서브그룹의 일부인 경우, 뇌 슬라이스를 37℃에서 30분 동안 PBS 용액 중의 1% TTC에 두었다. 이어서, 뇌 절편을 PBS로 3회, 각각 1분 동안 세척하였다. 이어서, 뇌를 디지털 카메라(Olympus FE-280)를 사용하여 영상화하여 TTC 염색을 평가하였다. 생존가능한 뇌 조직은 TTC에 의해 적색으로 염색된 반면 경색 영역은 염색되지 않았다. 면역조직화학법(IHC)에 사용된 마우스의 경우, 중심 뇌 슬라이스는 TTC로 염색하는 반면 인접 슬라이스는 IHC를 위해 매봉하였다.
추가의 조직학적 분석을 위해, 뇌 조직의 인접 슬라이스를 O.C.T. 화합물(Sakura Finetek, Torrance, CA)에 매봉하고, 일련의 5㎛ 동결 절편을 절단하였다. 아비딘-비오틴 퍼옥시다제 방법을 IHC에 사용하고, 조직 절편을 FXIII 항체: C-20(제조원: Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA)에 이어 비오티닐화 항-염소 IgG 이차 항체(제조원: Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA)와 항온처리하였다. 반응을 3-아미노-9-에틸카바졸(AEC) 기질(제조원: DakoCytomation, Carpinteria, CA)로 가시화시키고, 모든 절편을 Harris 헤마톡실린 용액으로 대비염색하였다. 슬라이드를 400 배율로 자동으로 디지털화시키고, 영상을 Nanozoomer HT1.0(제조원: Hamamatsu, Japan)을 사용하여 캡쳐하였다.
결과는 평균 + SEM으로 표현된다. 2개 그룹 간의 통계학적 비교치를 스튜던트 t-검정(Student's t-test)에 의해 평가하고, 다중 비교를 위해 ANOVA에 의해 보정하였다. p < 0.05의 값은 통계학적 유의성을 나타내는 것으로 간주하였다. p 값이 적혀있는 경우 실시예 전반에 걸쳐 동일한 통계학적 분석을 사용하였다.
모델 둘 다는 임상적으로 무증상인 뇌 허혈(도 5)을 야기할 수 있는 소혈관에서의 뇌 혈관 폐색(도 4 D+E)을 일으켰다.
모델 둘 다는, TTC 염색법에 의해 평가되는 바와 같이, 전체 뇌의 < 5%를 차지하는 작은 경색들(도 5)을 일으켰다. 마이크로비드 방법은 응고 혈액 모델에 비해 약간 더 많은 조직 손상을 일으켰다. 병변은 주로 주사 면에서 관찰되었다.
실시예 3: rHA - 인페스틴 -4로의 SBI 의 처리
rHA-인페스틴-4로 처리한 후, SBI 모델 둘 다에서의 마우스는 상당히 더 적은 미소경색과 TTC 염색에 의해 검출되는 경색의 >50% 감소를 경험하였다. 마이크로비드 모델(54% 감소, 도 5 A)에 비해 응고 혈액 모델(66% 감소, 도 5 B)에서 경색 부위가 약간 더 감소하였다. 마이크로비드 모델은 응고 경로에 직접적으로 영향을 미치지 않는 물질로부터의 색전을 모방하지만; rHA-인페스틴-4 또한 이러한 모델에서 경색 부위를 감소시켰다.
미세출혈의 비교적 빈번한 증거가 SBI 모델 둘 다에서, 마이크로비드 모델에서는 마우스의 6/8(75%), 혈전색전 모델에서는 마우스의 5/9(56%)로 발견되었다(도 6). 그러나, rHA-인페스틴-4 투여 후, 어느 모델에서도 증가된 빈도의 미세출혈은 나타나지 않았다. 사실상, 응고 혈액 모델에서는 가능하게는 미세출혈 속도가 감소하였다(단지 1/8의 동물만이 미세출혈을 나타냄, 도 6, 우측 하단).
흥미롭게도, 뇌졸중에 관한 선행 연구들(Kleinschnitz C et al., J Exp Med., 203:513-518, 2006; Hagedorn I et al. Circulation, 121:1510-1517, 2010)과 유사하게, SBI에서 출혈 빈도의 증가 또한 관찰되지 않았으며, rHA-인페스틴-4 처리 후 응고 혈액 모델에서는 출혈 속도가 보다 낮았다. 이러한 낮은 속도는 확증하고 더욱 연구할 필요가 있는데, 이것은 rHA-인페스틴-4가 응고 혈액에 의해 야기되는 혈관 손상을 감소시킬 수 있음을 의미한다. 또한, 이것은 원치않는 부작용의 유리한 프로파일을 가리키기 때문에 임상적 관련성을 갖는데, 그 이유는 일반적인 항응고 요법은 통상적으로 증가된 출혈 위험을 지니기 때문이다. 본 출원인의 최근 연구에서는 이러한 경우가 아니다.
실시예 4: rHA - 인페스틴 -4는 SBI 에서 FXIII 활성을 감소시킨다
응고 캐스케이드에 대한 rHA-인페스틴-4의 효과를 평가하기 위해, FXIII의 활성을 평가하였으며, 이것은 FXII로부터 하류에 있고 이에 의해 영향을 받으며 피브린 응혈(fibrin clot)의 가교결합을 초래한다. 생체내 SPECT-CT 영상화를 SBI 유도 후 급성 단계 동안 FXIII 특이적 프로브 FXIII-lnd(Tung CH et al. 4 Chembiochem. 897-899, 2003; Nahrendorf M et al. 113 Circulation 1196-1202, 2006)를 사용하여 수행하였다. 응고 혈액(도 7) 및 마이크로비드(도 8) 모델 둘 다에서 rHA-인페스틴-4 투여 후 FXIII 활성의 양이 상당히 감소하였다. 이것은 생체외 뇌 표본에 대한 자기방사법 실험에 의해 확증되었다(도 7 및 8, 중간 패널). 전반적인 FXIII 활성 감소 정도는 3D 융합 영상에서 잘 시각화된다(도 7 및 8, 좌측 패널). 경색 감소 정도와 유사하게, 마이크로비드 모델에 비해 응고 혈액 모델에서 FXIII 활성의 감소가 보다 현저하였다. 생체내 영상화 결과는 FXIII에 대한 면역조직화학염색법(immunohistochemical staining)으로 확인하였다(도 9).
마이크로비드 모델이 rHA-인페스틴-4 투여에 의해 감소되는 인자 XIII/응고 활성을 증가시킴을 주지하는 것은 흥미롭다. 이것은 마이크로비드 색전화가 피브린 응혈 형성을 야기하고, 영향을 받은 혈관의 추가의 손상 및 폐색을 야기할 수 있는 조직 손상으로 인한 이차 응혈(secondary clotting)를 유도한다는 것을 시사한다. 사실상, 본 발명자는, 조직병리학에서, 비처리 대조군 마우스의 손상된 뇌 부위에서 FXIII 함량이 증가한다는 것을 밝혀내었다(도 9). 흥미롭게도, 마이크로비드 모델은 응고 혈액 모델에 비해 보다 많은 손상 및 출혈 부위를 초래하였다. 마이크로비드 모델은 병리학적 효과를 악화시키는 다소 영구적 모델인 반면 주사된 응고 혈액은 덜 심각한 결과를 야기하는 (부분) 혈전용해를 받을 수 있는 것으로 추측할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 두 가지 모델 모두에서 관찰되는 이러한 이차 응혈 형성은 rHA-인페스틴-4에 의해 상당히 감소되어, 사용된 색전물로부터의 손상을 제한할 수 있다.
실시예 5: rHA - 인페스틴 -4는 SBI 후 뇌에서 미엘로퍼옥시다제 활성을 변경하지 않는다
미엘로퍼옥시다제(MPO)는 염증 동안 다수의 전염증성 골수 세포, 예를 들면, 호중구, Ly6Chi 단핵구, 및 활성화 대식세포 및 미세아교세포의 하위세트에 의해 분비되는 가장 풍부한 효소이며, 이에 따라, 염증 반응의 적합한 영상화 바이오마커이다. MPO 활성을 평가하기 위해, 생체내 MRI를 MPO 활성에 매우 특이적이고 민감한 프로브 MPO-Gd(Chen JW et al. 240 Radiology 473-481, 2006; Querol M et al. 4 Org Biomol Chem. 1887-1895, 2006)를 사용하여 SBI후 3일째에 수행하였다(Rodriguez E et al. 132 J. Am. Chem. Soc. 168-177, 2010; Ronald JA et al. 120 Circulation 592-599, 2009; Chen JW et al. 131 Brain 1123-1133, 2008; Breckwoldt MO et al. 105 PNAS 18584-18589, 2008; Nahrendorf M et al. 117 Circulation 1153-1160, 2008).
두 가지 모델 모두에서 T2-강조 영상법에 의해 보고된 바와 같이 경색 부위에 비해 보다 확산성인 MPO 활성이 보다 큰 용적에 영향을 미쳤다(도 10 및 11, 좌측 패널, 청색(T2 고신호감도 초점) 병변에 비해 오렌지색(MPO+ 부위) 병변이 더 많음을 주지한다, 우측 상부 패널, T2 정규화된 MPO+ 부위는 유니티(unity)보다 큼을 보여준다). 마이크로비드 모델은 응고 혈액 모델과 비교하여 보다 큰 MPO 활성(CNR, 비드: 36 ± 1, 응혈: 23 ± 2, p<0.05) 및 보다 큰 병변(뇌에서의 T2+ 복셀의 수, 비드: 3162 ± 1435, 응혈: 548 ± 207; p = 0.05)을 유도하였다.
rHA-인페스틴-4 투여 후, SBI 모델 둘 다에서 MPO+ 병변의 정규화된 면적 및 MPO+ 병변 모두의 평균 CNR에 있어서 상당한 변화는 없었으며, 이는 rHA-인페스틴-4가 MPO 활성 및 이에 따른 골수 세포 활성에 영향을 미치지 않음을 입증한다. 따라서, FXII의 기능으로부터 추정되는 가능한 소염 효과에도 불구하고, rHA-인페스틴-4는 SBI 유도 후 3일째에 병변당 MPO 활성의 양을 변화시키지 않았다. 3일째는, 이 시점이 뇌졸중 모델에서 최대 MPO 활성 시점인 것으로 밝혀졌기 때문에, MPO 활성 및 염증을 평가하기 위해 선택되었다(Breckwoldt MO et al. 105 PNAS 18584-18589, 2008). 따라서, 3일째에 MPO 활성에 반영되지 않은 염증 캐스케이드의 다른 부분이 rHA-인페스틴-4에 의해 영향을 받을 수 있다(Breckwoldt MO et al. 105 PNAS 18584-18589, 2008). 뇌 허혈에 관여하는 염증 세포의 대부분은 골수 세포이며, 따라서, 다른 인자가 rHA-인페스틴-4에 의해 영향을 받는다 하더라도, 효과는 작을 수 있다.
FXII 억제제 rHA-인페스틴-4는, 환자에서 또는 동물에서 출혈의 위험을 증가시키지 않으면서, SBI를 야기하는 다양한 유형의 색전과 관련된 허혈성 손상을 치료하는데 사용될 수 있다. 또한, 상기 동물 모델 및 영상화 방법은 SBI의 병리생리학의 기초를 이루는 메커니즘을 연구하고 치료제 후보물질을 평가 및 모니터링하기 위한 도구로서 유용할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> CSL BEHRING GMBH THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION <120> FACTOR XII INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF SILENT BRAIN ISCHEMIA AND ISCHEMIA OF OTHER ORGANS <130> 2011_M001_A178 <150> EP 11157555.1 <151> 2011-03-09 <150> US 61/457,360 <151> 2011-03-09 <150> US 61/496,746 <151> 2011-06-14 <160> 9 <170> KopatentIn 1.7 <210> 1 <211> 48 <212> PRT <213> Trioma infestans <400> 1 Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn Tyr Val Pro Val Cys 1 5 10 15 Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Gly Asn Pro Cys Met Leu Asn Cys Ala 20 25 30 Ala Gln Thr Lys Val Pro Gly Leu Lys Leu Val His Glu Gly Arg Cys 35 40 45 <210> 2 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Ala Lys Cys Tyr Asn Glu Leu Asn Gly Cys 1 5 10 15 Thr Lys Ile Tyr Asp Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Pro 20 25 30 Asn Glu Cys Val Leu Cys Phe Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile 35 40 45 Leu Ile Gln Lys Ser Gly Pro Cys 50 55 <210> 3 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Mutated human SPINK-1 <400> 3 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Pro Asn Glu Cys 20 25 30 Val Leu Cys Phe Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile Gln 35 40 45 Lys Ser Gly Pro Cys 50 <210> 4 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Mutated human SPINK-1 <400> 4 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Gly Asn Glu Cys 20 25 30 Met Leu Cys Ala Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile Gln 35 40 45 Lys Glu Gly Pro Cys 50 <210> 5 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Mutated human SPINK-1 <400> 5 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Gly Asn Glu Cys 20 25 30 Met Leu Asn Cys Ala Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile 35 40 45 Gln Lys Glu Gly Pro Cys 50 <210> 6 <211> 585 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu 1 5 10 15 Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln 20 25 30 Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu 35 40 45 Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys 50 55 60 Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu 65 70 75 80 Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro 85 90 95 Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu 100 105 110 Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His 115 120 125 Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 130 135 140 Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg 145 150 155 160 Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala 165 170 175 Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser 180 185 190 Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu 195 200 205 Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro 210 215 220 Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys 225 230 235 240 Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp 245 250 255 Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser 260 265 270 Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His 275 280 285 Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser 290 295 300 Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala 305 310 315 320 Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg 325 330 335 Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr 340 345 350 Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu 355 360 365 Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro 370 375 380 Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu 385 390 395 400 Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro 405 410 415 Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys 420 425 430 Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys 435 440 445 Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His 450 455 460 Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser 465 470 475 480 Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr 485 490 495 Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp 500 505 510 Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala 515 520 525 Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu 530 535 540 Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys 545 550 555 560 Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val 565 570 575 Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 580 585 <210> 7 <211> 294 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fusion Protein <400> 7 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Gly Asn Glu Cys 20 25 30 Met Leu Cys Ala Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile Gln 35 40 45 Lys Glu Gly Pro Cys Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Pro 50 55 60 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 65 70 75 80 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 85 90 95 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 100 105 110 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 115 120 125 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 130 135 140 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 145 150 155 160 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 165 170 175 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 180 185 190 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 195 200 205 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 210 215 220 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 225 230 235 240 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 245 250 255 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 260 265 270 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 275 280 285 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 290 <210> 8 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 8 gcggctagca tgaagtgggt aacctttatt tccc 34 <210> 9 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 9 gcgggatcct cctaagccta aggcagcttg acttg 35

Claims (17)

  1. 인자 XII(FXII)의 억제제를 포함하는, 의료 절차(medical procedure)를 받는 환자에서 허혈의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    상기 의료 절차가
    (a) 심장,
    (b) 대동맥, 대동맥궁, 경동맥, 관상 동맥, 완두 동맥, 추골기저동맥 순환, 두개내 동맥, 신동맥, 간동맥, 장간 동맥 및/또는 두개골에서 심장으로의 동맥계의 혈관으로부터 선택된 하나 이상의 혈관,
    (c) 환자가 알려진 중격 결손을 갖는 경우의 정맥 혈관
    중 하나 이상과의 접촉을 포함하고;
    상기 의료 절차가 하나 이상의 표적 기관에서 상기 허혈을 초래할 수 있는 신체의 상기 혈관들 중 하나 이상에서 미세색전의 방출을 포함하고,
    상기 표적 기관이
    (a) 뇌로서, 여기서 환자가
    (i) 무증상 뇌 허혈(silent brain ischemia) 또는
    (ii) 비혈전용해성 물질에 의해 유발되는 뇌졸중을 갖고 있거나, 갖고 있었거나, 갖을 위험이 있고,
    상기 조성물이 의료 절차 전, 의료 절차 동안 및/또는 의료 절차 후에 투여되며, 여기서 상기 FXII 억제제가
    (i) 야생형 인페스틴-4 폴리펩타이드 서열(서열번호 1) 또는 이의 변이체로서, 여기서, 상기 변이체가
    (a) 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2 내지 13, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 및/또는
    (b) 야생형 인페스틴-4 서열로부터의 6개의 보존된 시스테인 잔기 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성
    을 포함하고; 또는
    (ii) 항-FXII 항체로서, 여기서, 상기 항체가 FXII에 결합하여 이의 활성 및/또는 활성화를 억제하는 항-FXII 항체
    를 포함하는, 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 미세색전이 거품, 오일, 지방, 콜레스테롤, 응고 혈액 및/또는 잔해로 이루어지는, 약제학적 조성물.
  3. 삭제
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 의료 절차가 상기 혈관들 중 적어도 하나 이상의 내면과의 접촉을 포함하는, 약제학적 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 의료 절차가 상기 혈관들 중 적어도 하나 이상의 클램핑(clamping)을 포함하는, 약제학적 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 의료 절차가 카테터, 스텐트, 벌룬, 그래프트 및/또는 조영제 투여 중 어느 하나 이상을 포함하는 혈관 시술인, 약제학적 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 의료 절차가, 혈관 수술이고/이거나 진단용인 혈관 시술인, 약제학적 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 의료 절차가 관상 동맥 조영술, 경동맥 스텐트 삽입술, 경피적 관상 동맥 중재술, 경동맥 내막절제술, 심혈관 수술 또는 협착 신동맥의 확장인, 약제학적 조성물.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 FXII 억제제가 반감기 증진 폴리펩타이드에 연결되고, 여기서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드는 임의로 알부민, 아파민, 알파-페토프로테인 또는 비타민 D 결합 단백질, 사람 알부민 또는 이의 변이체, 면역글로불린 또는 이의 변이체, 또는 IgG의 Fc인, 약제학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드가 링커를 통해 FXII 억제제에 연결되는, 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 링커가
    (i) 절단가능하고;
    (ii) 내인성, 외인성 또는 공통의 응고 경로의 응고 프로테아제에 의해 절단가능하고;
    (iii) FXIIa에 의해 절단가능한, 약제학적 조성물.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
KR1020137026671A 2011-03-09 2012-03-09 무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈 치료용 인자 ｘｉｉ 억제제 KR101954053B1 (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161457360P 2011-03-09 2011-03-09
EP11157555.1 2011-03-09
EP11157555A EP2497489A1 (en) 2011-03-09 2011-03-09 Factor XII inhibitors for the treatment of silent brain ischemia and ischemia of other organs
US61/457,360 2011-03-09
US201161496746P 2011-06-14 2011-06-14
US61/496,746 2011-06-14
PCT/EP2012/054142 WO2012120124A1 (en) 2011-03-09 2012-03-09 Factor xii inhibitors for the treatment of silent brain ischemia and ischemia of other organs

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140026399A KR20140026399A (ko) 2014-03-05
KR101954053B1 true KR101954053B1 (ko) 2019-03-06

Family

ID=44511726

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137026671A KR101954053B1 (ko) 2011-03-09 2012-03-09 무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈 치료용 인자 ｘｉｉ 억제제

Country Status (12)

Country Link
US (1) US9624307B2 (ko)
EP (2) EP2497489A1 (ko)
JP (1) JP6113668B2 (ko)
KR (1) KR101954053B1 (ko)
CN (1) CN103582492A (ko)
AU (1) AU2012224510B2 (ko)
CA (1) CA2829128C (ko)
DK (1) DK2683396T3 (ko)
ES (1) ES2607063T3 (ko)
HK (1) HK1193569A1 (ko)
PL (1) PL2683396T3 (ko)
WO (1) WO2012120124A1 (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL2683397T3 (pl) 2011-03-09 2018-01-31 Csl Behring Gmbh Inhibitory czynnika XII do podawania w zabiegach medycznych obejmujących kontakt z powierzchniami sztucznymi
EP2964255B1 (en) * 2013-03-08 2020-11-04 CSL Behring GmbH Treatment and prevention of remote ischemia-reperfusion injury
CN105339010A (zh) * 2013-06-28 2016-02-17 德国杰特贝林生物制品有限公司 使用因子xii抑制剂和c1-抑制剂的联合疗法
CN106456778A (zh) * 2014-06-18 2017-02-22 德国杰特贝林生物制品有限公司 在神经创伤性病患中使用因子xii抑制剂进行治疗
AU2017305856A1 (en) 2016-08-05 2019-03-21 Csl Behring Gmbh Pharmaceutical formulations of C1 esterase inhibitor
BR112020011240A2 (pt) * 2017-12-15 2020-11-24 Csl Limited uso de um inibidor de fxiia no tratamento de fibrose renal e/ou doença renal crônica
EP3810270A1 (en) 2018-06-19 2021-04-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-factor xii/xiia antibodies and uses thereof
WO2020210491A1 (en) * 2019-04-10 2020-10-15 Pantheryx, Inc. Methods and compositions for reducing gut ischemia/reperfusion-induced injury
AU2020404988A1 (en) * 2019-12-17 2022-05-26 The General Hospital Corporation Highly efficient myeloperoxidase activatable imaging agents
CN111543384B (zh) * 2020-06-04 2022-11-25 宁波市医疗中心李惠利医院 一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法
WO2021253662A1 (zh) * 2020-06-16 2021-12-23 宁波康善生物科技有限公司 抗fxii纳米抗体或其抗原结合片段及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006066878A1 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 Csl Behring Gmbh Prevention of thrombus formation and/or stabilization
WO2008098720A1 (en) * 2007-02-12 2008-08-21 Csl Behring Gmbh Therapeutic application of kazal-type serine protease inhibitors

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4383219A (en) * 1980-08-19 1983-05-10 Indiana University Foundation Nuclear magnetic resonance spatial mapping
JPH11501506A (ja) 1994-12-12 1999-02-09 ベス イスラエル デアコネス メディカル センター キメラ型サイトカインおよびその利用
ZA963619B (en) 1995-05-08 1996-11-22 Scios Inc Protease inhibitor peptides
WO1997007731A2 (en) * 1995-08-18 1997-03-06 Brigham And Women's Hospital, Inc. Line scan diffusion imaging
GB9800817D0 (en) * 1998-01-16 1998-03-11 Bio Discovery Ltd Serine protease inhibitors
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
JP2003530838A (ja) 2000-04-12 2003-10-21 ヒューマン ゲノム サイエンシズ インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
US7202211B2 (en) * 2002-02-21 2007-04-10 Astellas Pharma Inc. Methods of preventing or treating brain ischemia or brain injury
EP1572936A2 (en) 2002-03-05 2005-09-14 Eli Lilly And Company Heterologous g-csf fusion proteins
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP3552627A1 (en) 2003-05-06 2019-10-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia
ES2830499T3 (es) * 2003-05-16 2021-06-03 Pharming Intellectual Property B V Inhibidor de C1 con una semivida corta para un tratamiento transitorio
AU2004251145C1 (en) 2003-06-12 2011-04-14 Eli Lilly And Company GLP-1 analog fusion proteins
US20050059660A1 (en) * 2003-08-01 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Novel combination
CA2537273A1 (en) 2003-09-05 2005-03-17 Gtc Biotherapeutics, Inc. Method for the production of fusion proteins in transgenic mammal milk
BRPI0417916A (pt) 2003-12-31 2007-04-10 Merck Patent Gmbh proteìna de fusão de fc-eritropoietina com farmacocinética melhorada
US7670595B2 (en) 2004-06-28 2010-03-02 Merck Patent Gmbh Fc-interferon-beta fusion proteins
WO2007073186A2 (en) * 2005-12-21 2007-06-28 Pharming Intellectual Property Bv Use of c1 inhibitor for the prevention of ischemia-reperfusion injury
CA2647770A1 (en) * 2006-03-31 2007-10-11 Adenobio N.V. Compositions, methods, and kits using adenosine and inosine in combination for diagnosis and treatment
PE20081834A1 (es) * 2006-12-31 2009-01-16 Boehringer Ingelheim Int Proceso para la sintesis de derivados de acido 3-amino-tetrahidrofuran-3-carboxilico y uso de los mismos como medicamentos
ES2566963T3 (es) * 2007-11-21 2016-04-18 Oregon Health & Science University Anticuerpos monoclonales anti-factor XI y métodos de uso de los mismos
WO2010049423A1 (en) * 2008-10-27 2010-05-06 Life Sciences Research Partners Vzw Effects of nitric oxide inhalation on long-term myocardial reperfusion injury

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006066878A1 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 Csl Behring Gmbh Prevention of thrombus formation and/or stabilization
WO2008098720A1 (en) * 2007-02-12 2008-08-21 Csl Behring Gmbh Therapeutic application of kazal-type serine protease inhibitors

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Circulation. 2010 제121권 제1510-1517면.
Neuroscience Research. 2009 제65권 제71-78면*
The Lancet 1999 제354권 제1594-1597면*

Also Published As

Publication number Publication date
US20140072572A1 (en) 2014-03-13
DK2683396T3 (en) 2017-01-09
KR20140026399A (ko) 2014-03-05
EP2683396A1 (en) 2014-01-15
ES2607063T3 (es) 2017-03-29
CA2829128C (en) 2020-08-18
AU2012224510A1 (en) 2013-05-02
JP2014514270A (ja) 2014-06-19
HK1193569A1 (zh) 2014-09-26
EP2497489A1 (en) 2012-09-12
CA2829128A1 (en) 2012-09-13
WO2012120124A1 (en) 2012-09-13
CN103582492A (zh) 2014-02-12
EP2683396B1 (en) 2016-09-14
JP6113668B2 (ja) 2017-04-12
PL2683396T3 (pl) 2017-03-31
US9624307B2 (en) 2017-04-18
AU2012224510B2 (en) 2016-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101954053B1 (ko) 무증상 뇌 허혈 및 다른 기관의 허혈 치료용 인자 ｘｉｉ 억제제
Wagner et al. Rapid disruption of an astrocyte interaction with the extracellular matrix mediated by integrin α6β4 during focal cerebral ischemia/reperfusion
US6528481B1 (en) NG2/HM proteoglycan-binding peptides that home to angiogenic vasculature and related methods
US20210298611A1 (en) Detection of high-risk unstable atherosclerotic plaque
KR100870233B1 (ko) 동맥경화 진단, 예방 및 치료용 펩타이드 및 이의 용도
Parbhakar et al. Depletion of pulmonary intravascular macrophages partially inhibits lipopolysaccharide-induced lung inflammation in horses
JP6018585B2 (ja) 心血管イメージングに関連する材料および方法
JP2005511017A (ja) ホーミングペプチド
US8227412B2 (en) Bioactive parstatin peptides and methods of use
EP3299382B1 (en) Oligopeptide having proinflammatory cytokine secretion-inhibiting activity
US7408028B2 (en) Peptides, antibodies thereto, and their use in treatment of central nervous system, damage
Zhuang et al. Molecular imaging of factor XIII activity for the early detection of mouse coronary microvascular disease
JP2020536065A (ja) 興奮性神経毒性に関連した損傷の治療用ペプチド組成物
WO2018042182A1 (en) Compositions and uses thereof
CN108210915A (zh) 改善心脏病变的药物及其用途
JP2019509731A (ja) 神経損傷を治療するペプチドベースの方法
US20190134231A1 (en) Methods and compositions for detecting aneurysms
Dickhout et al. Molecular detection of venous thrombosis in murine models using SPECT/CT
McLean Antibody-mediated Positron Emission Tomography Imaging of Brain Amyloid-beta Pathology
Peters Targeting atherosclerosis: nanoparticle delivery for diagnosis and treatment
Norris et al. Intradermal Injection of Bone Marrow Mesenchymal Stromal Cells Corrects Recessive Dystrophic Epidermolysis Bullosa in a Xenograft Model
US20100129289A1 (en) Compositions and methods for the detection of vulnerable plaque
Febbraio et al. CD36 mediates albumin transcytosis by dermal but not lung 3 microvascular endothelial cells–role in fatty acid delivery 4
EP2606363A1 (en) In vivo imaging of calcified lesions

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant