KR101914738B1 - 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 함유하는 치매 예방 또는 개선용 조성물. - Google Patents

흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 함유하는 치매 예방 또는 개선용 조성물. Download PDF

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Abstract

본 발명은 치매 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 4 내지 6년근 백삼의 꽃봉오리 및 지근(枝根)을 40 내지 100 부피%의 베리 농축액을 함유하는 증류수에 침지시킨 후, 상기 침지된 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 회수하여 증숙하고 건조하는 증숙 및 건조 과정을 2 내지 5번 반복하여 제조된 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

Description

흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 함유하는 치매 예방 또는 개선용 조성물.{Composition for Preventing or Improving Dementia Comprising a Dried Flower Bud Powder and Root of Black Panax Ginseng}
본 발명은 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근(枝根)의 고형물을 함유하는 치매 예방 및 개선용 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 흑삼꽃봉오리 및 흑삼뿌리의 고형물, 당귀, 작약, 황기, 숙지황, 천궁, 마카, 실크아미노산, 포스파티딜세린, 도인, 홍화 및 감초가 혼합된 생약을 추출한 조성물을 함유하는 치매 예방 또는 개선용 약학 조성물에 관한 것이다.
치매는 우리나라 65세 이상의 노령인구 약 8.2~10.8%에서 나타날 정도로 흔하며, 인구의 급속한 고령화와 함께 심각한 사회문제로 대두되고 있는 대표적인 노년기 질환으로 후천적으로 지적능력을 상실하고 인지장애, 행동 및 성격의 점진적 황폐화라는 임상증상을 나타내는 퇴행성질환이다. 특히, 알츠하이머(Alzheimer's disease)는 가장 많이 발생하는 치매의 한 형태로 대뇌 피질(cortex)이나 해마(hippocampus)에 생기는 뇌위축과 노인반(senile plaque), 신경섬유다발(neurofibrillary tangles), 신경세포의 과립공포변성(granulovacuolar degeneration), 히라노체(Hirano body) 등의 조직학적 특징이 나타난다. 베타 아밀로이드(β-amyloid)는 노인반의 주요 구성성분으로 알츠하이머가 발생하는 중요한 원인으로 추정되고, 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 발생시켜 산화적 스트레스(oxidative stress)로 인한 신경세포사멸을 유발하는 것으로 알려져 있다. 치매가 40-65세 사이에 발병하는 경우는 조기발병(early-onset) 또는 가족형 알츠하이머(familial AD), 65세 이상에서 발병되는 경우는 만기발병(late-onset) 또는 산발성 알츠하이머(sporadic AD)로 분류된다. 노화로 인한 신경퇴행성으로 발병하여 진행과정이 느린 경우를 노인성 치매(senile dementia)라고 한다.
치매의 대표적인 치료방법으로는 신경전달물질인 아세틸콜린(acetylcholine)의 감소에 근거한 인지기능 개선을 위한 콜린에스터레이즈 억제제(cholinesterase inhibitor)와 N-메틸-디-아스파테이트 수용체 길항제(NMDA, N-methyl- D-aspartate receptor antagonist) 등의 약물요법이 있고, 행동 심리증상 치료를 위한 항우울제, 진정제 등의 향정신성 약물요법과 심리, 인지, 행동, 작업, 재활치료의 비약물요법이 활용되고 있다.
아세틸콜린에스터레이즈는 체내 부교감 신경의 활성을 매개하는 신경전달물질(neurotransmitters) 중의 하나인 아세틸콜린(acetylcholine)을 콜린과 아세테이트로 가수분해하는 효소로서, 소포체 막에서 형성된 후, 세포막으로 이동하여 그 기능을 수행한다. 상기 아세틸콜린에스터레이즈는 콜린 신경과 그 주위, 특히 근신경 접합부에 가장 많이 분포되어 있고, 혈장, 간 및 다른 조직에서도 발견되는 중요한 효소이다.
일반적으로 아세틸콜린은 신경 세포의 축색 말단 막에서 시냅틱 크레프트(synaptic cleft)라고 불리는 틈으로 분비되어 시냅스 후 뉴우런 세포막의 수용체에 결합함으로써 활동 전위를 전달시키는 물질이다. 이 물질은 작용 부위에서 신경의 흥분을 전달한 후, 아세틸콜린에스터레이즈에 의해 콜린과 아세테이트로 분해된 후 세포 내로 흡수되어 재사용되는 것으로 알려져 있다.
현재까지의 활발한 연구 결과, 많은 신체적, 정신적 질환들이 아세틸콜린의 합성과 분해 기작과 관련하여 발생하며, 비정상적인 아세틸콜린의 농도 감소와 깊은 관련이 있음이 밝혀졌다. 치매 환자의 뇌에는 전뇌 기저에 있는 마이네르트핵(basal nucleus of Meynert) 신경 세포가 대부분 사멸하여 이 신경 세포가 지배하는 시냅스와 대뇌 피질과의 연결이 퇴화되어 있고, 이들 신경 세포의 사멸로 인해 기억에 중요한 역할을 하는 신경전달물질인 아세틸콜린의 생산량이 현저하게 감소되어 있는 것으로 보고되어 있다.
뇌에서의 아세틸콜린 농도를 높게 유지시키면 환자의 기억력이 크게 회복된다는 연구 결과에 따라, 현재 임상분야에서는 치매 치료제로서 아세틸콜린의 분해를 가역적으로 억제하여 아세틸콜린의 농도를 일정 수준으로 유지시키는 항-콜린에스터레이즈의 사용이 선호되고 있다. 따라서 현재 알츠하이머병의 치료제로는 타크린(tacrine)이나 아리셉트(ARICEPT)와 같은 아세틸콜린 분해효소 저해제가 주로 사용되고 있다. 이들의 경우 어느 정도 약효는 인정되고 있으나, 장기간 고용량 투여시, 근육통, 위장 장애로 인한 메스꺼움, 구토, 설사 및 식욕 부진과 함께, 간 독성 등의 부작용이 커서 치료를 중단해야 하는 경우가 자주 발생하는 등의 문제점이 지적되고 있다.
한편, 아세틸콜린의 수치 감소에 따라 발생하는 여러 질환을 효과적으로 예방하거나 치료하기 위하여, 콜린 등의 아세틸콜린 전구체를 투여하여 아세틸콜린의 합성을 촉진시키는 대체 방안이 제시되기도 하였다. 그러나 이들 물질은 뇌혈관 관문을 통과하지 못하고 효력이 단시간에 끝나는 단점을 갖는다. 그러므로 현재는 상기한 바와 같이 간 장애, 복통이나 설사 등의 위장 장애, 근육통이 유발되는 등의 부작용이 따름에도 불구하고, 타크린과 같은 아세틸콜린에스터레이즈 저해제를 사용하여 아세틸콜린의 가수분해 작용을 억제하는 약물 요법이 주로 이용되고 있다.
부티릴콜린에스터레이즈(butyrylcholinesterase)는 아세틸콜린에스터레이즈와 그 기능 및 유전자 형태가 유사한 단백질로서, 부티릴콜린(butyrylcholine)을 가수분해하면서도, 아세틸콜린도 가수분해할 수 있어, 치매의 병태생리학 및 증상학에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다(Greig NH, Lahiri DK, Sambamurti K, Int. Psychogeriatr. 2002, 14, 77-91).
뇌 속의 부티릴콜린에스터레이즈의 양은 나이에 따라 증가하는데 반하여, 아세틸콜린에스터레이즈의 양은 반대 경향을 나타낸다. 따라서, 부티릴콜린에스터레이즈의 촉매 활성은 노화되는 뇌에서 아세틸콜린의 가수분해에 있어서 더욱 두드러진 역할을 할 것이며, 이는 부티릴콜린에스터레이즈의 저해가 나이든 사람들에서 콜린성 신경전달에 보다 큰 영향을 미칠 것이라고 사료된다.
본 출원인은 흑삼을 포함하는 생약 조성물을 통하여 치매 예방 또는 치료 및 인지기능 개선 조성물을 개발한 바 있다(대한민국 등록특허공보 10-1167628호). 상기 선행기술에서는도인,홍화, 흑삼, 당귀, 작약, 황기, 숙지황, 천궁 마카,실크아미노산,포스파티딜세린,및 감초를 혼합하여 추출한 생약조성물을 이용하여 치매치료의 효과를 확인한 결과, 인지능력을 저해하는 콜린에스터레이즈(cholinesterase)인 아세틸콜린에스터레이즈(cetylcholinesterase), 부티릴콜린에스터레이즈(butyrylcholinesterase)의 억제활성이 높고, 상기 생약 조성물을 섭취한 마우스의 수동회피실험(passive avoidance test)에서의 공간인지능력이 우수하다는 결과로부터 흑삼을 포함하는 생약 조성물이 치매 예방 또는 치료 및 인지기능 개선 조성물로서 유효함을 입증하였다.
한편, 치매의 예방 또는 치료를 비롯한 기억력 향상을 위한 조성물에 관한 선행기술로는 대한민국 공개특허공보 10-2006-0023885호, 대한민국 공개특허공보 10-2004-0023197호, 대한민국 등록특허공보 10-916303호, 일본 공개특허공보 특개1994-56684호, 일본 공개특허공보 특개2001-39887호, 대한민국 공개특허공보 제2011-0005144호 등이 있으며, 또한, 인삼, 백출, 백복령, 감초, 당귀, 천궁, 숙지황, 백작약, 원지 및 석창포를 함유하는 팔물총명탕(八物聰明湯)이 허혈에 의한 기억과 학습능력 손실을 억제한다는 보고(윤영주, 2006, 경희대학교 동서의학대학원 석사학위논문)가 있다.
본 발명자는 상기 대한민국 등록특허공보 10-1167628호에 개시된 조성물의 개선을 위하여 연구하던 중 흑삼의 특정 부위를 선택하여 이로부터 얻은 생약 추출물을 적용할 때 치매 예방 또는 치료용 및 인지기능 개선에 대한 더 나은 효과를 나타낸다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.
대한민국 등록특허공보 10-1167628호 대한민국 공개특허공보 10-2006-0023885호 대한민국 공개특허공보 10-2004-0023197호 대한민국 등록특허공보 10-916303호 일본 공개특허공보 특개1994-56684호 일본 공개특허공보 특개2001-39887호 대한민국 공개특허공보 제2011-0005144호
윤영주, 2006, 경희대학교 동서의학대학원 석사학위논문
본 발명은 상기와 같은 종래기술을 감안하여 안출된 것으로, 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 포함하여 치매 예방 또는 개선 및 인지기능 개선용 조성물을 제조하는 데에 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 치매 예방 또는 개선용 조성물은 4 내지 6년근 백삼의 꽃봉오리 및 지근(枝根)을 40 내지 100 부피%의 베리 농축액을 함유하는 증류수에 침지시킨 후, 상기 침지된 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 회수하여 증숙하고 건조하는 증숙 및 건조 과정을 2 내지 5번 반복하여 제조된 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
이때, 상기 조성물은 흑삼꽃봉오리, 흑삼뿌리, 당귀, 작약, 황기, 숙지황, 천궁, 마카, 실크아미노산, 포스파티딜세린, 도인, 홍화 및 감초를 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 상기 베리는 복분자, 오디, 아로니아, 블루베리, 아사이베리, 하스카프 중 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물은 흑삼 꽃봉오리와 흑삼 지근을 2:1 내지 4:1의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 생약 조성물은 흑삼꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 포함하는 생약 조성물로서, 아세틸콜린에스터레이즈(cetylcholinesterase), 부티릴콜린에스터레이즈(butyrylcholinesterase)의 억제활성이 높고, 상기 조성물을 섭취한 마우스의 공간인지능력이 우수한 것으로 확인되는 등 치매 예방 또는 개선의 효과를 나타낸다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
본 발명에 따른 치매 예방 또는 치료용 조성물은 4 내지 6년근 백삼의 꽃봉오리 및 지근(枝根)을 40 내지 100 부피%의 베리 농축액을 함유하는 증류수에 침지시킨 후, 상기 침지된 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 회수하여 증숙하고 건조하는 증숙 및 건조 과정을 2 내지 5번 반복하여 제조된 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
더욱 상세하게는 4~6년근 백삼의 꽃봉오리 및 지근(枝根)을 40~100 부피% 베리 농축액을 함유하는 증류수에 0~20℃에서 12~48시간 동안 침지시킨 후, 상기 침지된 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 회수하고 이를 110~130℃에서 10~60분간 증숙하고 50~80℃에서 12~48시간 건조하는 증숙 및 건조 과정을 2~5번 반복하여 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 제조하여 이를 유효성분으로 함유하게 된다. 상기 조성물은 치매 예방 또는 치료용 약학 조성물로 사용할 수도 있고, 치매 예방 또는 개선용 식품 조성물로도 사용할 수 있다.
본 발명에서 흑삼의 원료인 인삼(人蔘, ginseng, Panax ginseng)은 쌍떡잎식물 산형화목 두릅나무과의 여러해살이풀로 깊은 산의 숲속에서 자라며 약용식물로 재배한다. 인삼의 뿌리는 그 형태가 사람 형상이므로 인삼이라 한다. 뿌리의 형태는 나이에 따라 차이가 있고 수확은 4~6년근 때에 한다. 수확된 상태 그대로의 인삼을 수삼이라고 하며 수삼을 건조한 것을 백삼이라고 한다. 수삼을 증숙하여 붉은색을 띄는 것을 홍삼(red ginseng)이라 하며 상기 홍삼을 수회에 걸쳐 증숙 및 건조하게 되면 검은색을 띄는 흑삼(black ginseng)이 된다. 이러한 홍삼 및 흑삼은 증숙 및 건조 과정을 통해 약리 성분이 변화되어 수삼과 비교하여 건강에 유익한 활성성분이 증진되는 것으로 알려져 있다. 홍삼과 흑삼의 주요 생리활성 성분은 사포닌 속에 함유되어 있는 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, Rg1, Rg2, Rg3, Ro 등으로 알려져 있다. 흑삼은 신개발 제품으로서 최근에 개발되었기 때문에 정식 식품으로 등재되어 있지는 않으나, 진세노사이드가 함유되어 있어 파우치나 농축액으로 가공되어 홍삼가공식품류로 분류될 수 있다. 흑삼이 면역력 증강, 항암 및 성기능 개선 등에서 효과가 있음은 이미 소비자들의 경험을 통해 확인되고 있으며, 진세노사이드 Rg3 성분도 항암효과를 비롯한 다양한 건강개선기능이 있음이 밝혀져 있다.
상기 흑삼은 4~6년근 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 베리 용액에 0~20℃에서 12~48시간 동안 침지시킨 후, 상기 침지된 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 상기 베리 용액에서 회수하고, 이를 110~130℃에서 10~60분간 증숙하고 50~80℃에서 12~48시간 건조하는 과정을 2~5번 반복하여 제조할 수 있다.
본 발명에서는 백삼의 꽃봉오리 및 지근만을 선택하여 이로부터 흑삼의 꽃봉오리 및 지근을 얻는 점, 흑삼의 꽃봉오리 및 지근을 제조하는 과정에서 베리 농축액을 함유하는 증류수에 침지시키는 점을 기술적 특징으로 한다.
특히, 흑삼 꽃봉오리와 흑삼 지근을 2:1 내지 4:1의 중량비로 포함할 때 치매 예방 및 개선의 효과가 뛰어난 것으로 나타났는데, 이는 실험 결과에 근거한 것으로써 치매와 관련된 유효성분을 상기 꽃봉오리와 지근을 특정 함량으로 배합할 때 충분히 도출할 수 있기 때문으로 생각된다.
본 발명에서 사용되는 베리는 복분자, 오디, 아로니아, 블루베리, 아사이베리, 하스카프 중 어느 하나일 수 있다. 상기 베리는 강한 항산화 효과를 나타내며, 혈액 순환의 효능이 있는 과실로서, 아사이베리를 예로 들면, 필수지방산인 오메가 3, 오메가 6(리놀산)과 오메가 9(올레인산)가 다량 함유되어 있으며, 콜레스테롤 레벨을 조절하는데 도움을 주고, 비타민과 미네랄 등 각종 식물성 영양분이 고루 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.
따라서 상기 흑삼의 제조과정에서 상기 베리 농축액을 함유한 증류수에 침지하는 과정을 통해 베리에 포함된 필수지방산, 안토시아닌 등의 유효성분이 포함되게 되므로 치매 예방, 개선, 치료에 향상된 효과를 부여하는 것으로 보인다.
상기 베리 농축액은 추출물의 고체 성분의 농도를 높인 물질로서, 추출물을 감압농축한 농축물 또는 추출물의 건조물 형태일 수 있으며, 구체적으로는, 베리 추출물을 열풍건조, 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조, 상온건조 또는 동결건조하여 추출용매가 제거된 농축된 액상의 농축물 또는 고형상의 농축물일 수 있다.
예를 들어, 상기 아사이베리 농축물은 아사이베리 100 중량부에 대하여 1500 내지 2500 중량부의 물을 첨가하여 80 내지 95 ℃, 구체적으로 80 내지 90 ℃에서 10 내지 15 시간, 구체적으로 10 내지 14시간 동안 추출한 후 고형분 18 내지 22 중량%가 되도록 감압농축한 것일 수 있다.
베리 농축액을 함유한 증류수를 제조할 때, 상기 용액은 베리 농축액을 40 내지 100 부피%로 함유하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 치매 예방 또는 개선용 조성물은 당귀, 작약, 황기, 도인, 홍화, 숙지황, 천궁, 마카, 실크아미노산, 포스파티딜세린 및 감초를 추가적으로 포함할 수 있다.
당귀(當歸)는 만주, 일본과 우리나라 남부, 중부, 북부의 산계곡 습기가 있는 토양에서 자생하며 약용식물로 재배하고 있으며, 참당귀(Angelica gigas Nakai), 왜당귀(Angelica acutiloba (S. et Z.) Kitagawa) 및 중국당귀(Angelica sinensis (OLIV.) DIELS)가 알려져 있다. 당귀는 본초학적으로 성미는 따뜻하고 독이 없으며, 맛은 달고 맵다. 보혈, 구어혈, 조경, 진정 작용이 있고, 신체허약, 관절통, 두통, 현훈, 복통, 월경불순, 변비, 타박상 등에 사용한다. 당귀의 물 추출물은 혈압 강하, 이뇨, 대뇌 진정, 연수 흥분, 진정 진경 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 당귀의 에탄올 추출물은 자궁의 운동을 활발하게 하고, 뿌리의 정유 수용액은 관절염에 대한 진통 및 소염 작용 등 약리효과가 있다. 또한 당귀는 단백질 합성과 자궁조직의 신생을 돕고, 포도당의 흡수를 촉진하는 등 물질대사를 활성화시키며, 골수를 재생시켜 조혈작용에 도움을 준다.
작약(芍藥, Paeoniae lactiflora var. trichocarpa BUNGE.)은 미나리아재비목, 미나리아재비과, 목단 속(paeonia)의 여러해살이풀로, 뿌리는 약용으로 식물 전체는 식용으로 사용한다. 산지는 중국, 일본, 한국 등으로 각지에서 재배된다. 채집시기는 8 내지 10월이고 맛은 쓰고 약성은 평범하며 독이 없다. 종래 알려진 작약의 약효성분은 패오니플로린으로 확인되고 있다. 위, 장의 평활근 및 자궁평활근에 대해 수축억제효과, 관동맥 확장 효과 및 혈관질환에 대해 죽상경화증 방지, 혈압강하 및 혈류 개선의 효과가 있다.
황기(黃琦, Astragalus membranaceus)는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이풀로서, 한국, 일본, 만주, 중국 북동부, 시베리아 동부 등지에 분포한다. 흔히 약초로서 재배하며 한방에서는 가을에 채취하여 노두(蘆頭)와 잔뿌리를 제거하고 햇빛에 말린 것을 한약재의 황기라 하며, 강장, 지한(止汗), 이뇨(利尿), 소종(消腫) 등의 효능이 있어 신체허약, 피로권태, 기혈허탈(氣血虛脫), 탈항(脫肛), 식은땀, 말초신경 등에 처방한다.
도인(桃仁, Persicae semen)은 성숙한 종자를 건조하여 한약재로 사용하는데, 활혈거어(活血祛瘀), 윤장통변(潤腸通便)의 효능이 있어 경폐(經閉), 통경(痛經), 징하비괴(塊), 질박손상(跌撲損傷), 장조변비(腸燥便秘) 등 대부분의 어혈조체(瘀血阻滯)로 인한 증상에 응용할 수 있다. 또한, 다른 한약재들과 어울려 어혈로 인한 뇌혈류장애를 개선하는 역할을 한다.
홍화(紅花, Carthamus tinctorius L.)는 꽃을 건조하여 한약재로 사용하는데, 활혈통경(活血通經)하고 거어지통(祛瘀止痛)시키는 효능이 있어 각종 어혈조체(瘀血阻滯)로 인한 병증에 적용하며, 내과, 부인과, 외과의 활혈방(活血方) 중에 상용하는 약물이 된다. 본 발명에서는 다른 한약재들과 어울려 어혈로 인한 뇌혈류장애를 개선하는 역할을 한다. 상기 홍화는 경엽(莖葉), 체두(頭)를 제거하고 생용(生用)하는 것이 바람직하다.
지황(地黃, Rehmannia glutinosa)은 쌍떡잎식물 통화식물목 현삼과의 여러해살이풀로서, 중국이 원산지이고 약용식물로 재배한다. 한방에서는 뿌리의 생것을 생지황, 건조시킨 것을 건지황, 쪄서 말린 것을 숙지황이라고 한다. 숙지황은 보혈제로 쓰이고 생리불순, 허약 체질 ,어린이의 발육 부진, 치매, 조루증, 발기부전에 사용한다. 숙지황 중 특히 술에 담갔다가 쪄서 말리기를 9번 되풀이하여 만든 것은 구지황이라 하여 그 약효를 으뜸으로 친다.
천궁(Cnidii Rhizoma)은 토천궁(Ligusticum chuanxiong Hort.) 또는 일천궁(Cnidium officinale Makino)의 뿌리줄기를 이용하는 약용자원식물로서 산형과(Umbelliferae)에 속하는 다년생 초본이다. 주요 성분으로는 니딜라이드(cnidilide), 리구스틸라이드(ligustilide), 부틸이데네프탈리드(butylidenephthalide), 센큐노라이드(senkyunolide) 등의 정유성분(Chem. Pharm. Bull. 1984, 32, 3770-3773; Korean J. Phamacogn. 1990, 21, 69-73), 페루릭산(ferulic acid), 클로제닉산(chlorogenic acid) 등의 페놀성 물질(Yakugaku zasshi 1989, 109, 402-406) 등이 알려져 있다. 천궁은 진경작용, 진정작용, 혈압강하작용, 혈관확장작용, 항균작용, 항진균작용(Korean Society Tabacco Sci. 1994, 16, 20-25) 등의 약리작용이 알려져 있으며, 한방에서는 두통, 불임, 월경불순, 강장, 냉증, 빈혈 등의 질환에 사용하고 있다(생약학연구회 현대 생약학, 1994, Pp. 338-340, 학창사).
마카(Lepidium meyenii Walpers)는 십자화과(Brassicaceae)에 속하는 식물로서 주로 페루의 안데스 산맥 해발 4,000m 이상의 고지대에서 재배되는 다년생 식물로 감자와 비슷한 형태인 뿌리부분이 안데스 산맥 주변 토착인들에게 주요한 식량자원으로 이용되고 있다.
상기 마카는 추위, 강풍, 가뭄 등 어려운 자연 환경에서 자라기 때문에 생명력이 매우 강하고, 탄수화물, 단백질, 지질, 비타민, 무기질, 섬유소 등이 함유되어 있어 영양가가 높고 알칼로이드, 스테로이드, 탄닌, 사포닌 등의 다양한 생리기능성 물질이 존재하는 것으로 밝혀지고 있다.
페루에서는 마카를 전통적인 약용식물로 간주하여 뿌리를 건조시켜 만든 분말, 캡슐, 환(丸)등의 형태로 가공 유통하고 있으며 종자의 보존 및 해외 범람을 금지하여 1차 가공하여 분말화한 것만 해외로 수출하고 있다. 마카는 미국에서 식이보충음식(DSHEA, 1994)으로 등록되어 있으며, 포리지(porridge, 우유 또는 물에 오트밀을 넣어서 먹는 죽), 잼, 푸딩과 같은 형태로 섭취하고 있다.
일본에서는 마카에 대한 기능성을 인정받아 건강식품 시장에서 꾸준한 성장세를 기록하여 2007년 기준으로 마카 제품 시장의 규모가 60~70억엔 정도로 추정되고 있다. 우리나라에서 마카는 식품의약품안전청에서 부원료로 지정한 수입허가 품목으로 기능성 식품으로 지정되어 있지는 않다.
특히, 대한민국 등록특허공보 10-1143516호에서는 마카가 기억력 증진의 효과를 나타내는 것으로 알려져 있으므로, 이러한 성분을 포함함으로써 치매의 예방이나 개선에 효과를 나타낼 수 있다.
실크 아미노산은 단백질 중합체로써 구성물질, 구조, 성분이 곤충의 종류에 따라 완전히 다르며, 가장 보편적으로 특성화된 실크로는 누에(Bombyx mori)와 거미 (Nephila clavipes 및 Araneus diadematus)로부터 유래된 것이 있다(Altman et al., 2003). Silk는 세리신(sericin)과 피브로인(fibroin) 두 가지 폴리펩타이드로 이루어져 있으며, 그 화학적 조성이 순수 천연 아미노산(amino acids)임이 밝혀짐에 따라 그 조성 아미노산의 생리활성에 따른 다양한 효능이 제시되고 있다.
특히, 대한민국 등록특허공보 10-1048657호에서는 실크 아미노산이 뇌질환 예방 및 개선에 효과가 있는 것으로 알려져 있으므로, 이러한 성분을 포함함으로써 치매의 예방이나 개선에 효과를 나타낼 수 있다.
포스파티딜세린(phosphatidylserine)은 대한민국 등록특허공보 10-1249667호, 10-1249633호에서 포스파티딜세린이 착체된 징코를 이용하여 치매와 관련한 효과를 나타내는 등 치매의 예방, 개선, 치료를 위한 조성물의 성분으로 사용되고 있다.
감초(甘草, Glycyrrhizae Radix)는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이풀이며, 특이한 냄새가 나며 단 맛이 나는 것이 특징이다. 감초는 모든 약의 독성을 조화시켜서 약효가 잘 나타나게 하며 장부의 한열과 사기를 다스리고 모든 혈맥의 소통을 잘 시키며 근육과 뼈를 튼튼히 한다. 약리작용은 해독작용, 간염, 두드러기, 피부염, 습진 등에 효과가 있다. 진해, 거담, 근육이완, 이뇨작용, 항염작용이 있으며 소화성궤양을 억제한다. 감초의 겉껍질은 적갈색이나 암갈색을 띠며 세로로 주름이 있고 때때로 피목, 싹눈 및 비늘잎이 붙어 있다. 껍질 벗긴 감초는 바깥 면이 엷은 황색이고 섬유성이다.
상기 당귀, 작약, 황기, 도인, 홍화, 숙지황, 천궁, 마카, 실크아미노산, 포스파티딜세린 및 감초를 추가적으로 포함하기 위하여, 상기 당귀, 작약, 황기, 도인, 홍화, 숙지황, 천궁, 마카, 및 감초를 각각 건조하여 잘게 세절하고, 상기 세절된 당귀 70~130 중량부, 작약 70~130 중량부, 황기 70~130 중량부, 도인 70~130 중량부, 홍화 70~130 중량부, 숙지황 70~130 중량부, 천궁 20~60 중량부, 및 감초 5~30 중량부와 마카 분말 70~130 중량부, 실크아미노산 분말 70~130 중량부, 포스파티딜세린 70~130 중량부와 세절된 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 혼합물 100 중량부를 혼합하여 생약 혼합물을 제조한 후, 상기 생약 혼합물에, 상기 생약 혼합물 중량의 2~20배의 추출용매를 넣고 20~90℃에서 1~10시간 동안 추출하고, 상기 추출물의 고형분을 제거한 추출원액을 이용하여 생약 추출물을 제조할 수 있다.
또한, 상기 추출원액은 여과 및 농축할 수 있으며, 분무건조, 동결건조 또는 열풍건조를 이용하여 분말화할 수 있다.
본 발명에서 추출에 사용되는 추출용매는 그 선택에 있어서 특별히 한정되지는 않으며, 추출용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 이소프로필알코올, n-부탄올 등의 저급 알코올, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등의 다가 알코올, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 벤젠, n-헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매 등을 예로 들 수 있고, 이들 중에서 하나 또는 두 종류 이상의 용매를 혼합하여 추출에 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 함유하는 생약 추출물을 포함하는 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 흑삼을 함유하는 생약 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 60, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 함유하는 생약 추출물의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01 내지 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.1 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 함유하는 생약 추출물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 함유하는 생약 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 치매 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공할 수도 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 상기 건강기능식품으로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림을 포함한 낙농제품, 스프, 이온음료 등을 포함한 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제를 포함한 영양 공급용 제품 등이 포함될 수 있다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명한다.
<흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 제조>
4년근 백삼 꽃봉오리 0.7kg, 백삼 지근 0.3kg을 아사이베리 용액(아사이베리 농축액 100 중량부 및 증류수 200 중량부의 용액) 2kg에 4℃에서 24시간 동안 침지시켜 120℃에서 30분간 증숙한 후 65℃에서 24시간 동안 건조하는 과정을 3번 반복하여 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 제조하였다(제조예 1).
또한, 백삼 꽃봉오리 0.8kg, 백삼 지근 0.2kg을 원료로 사용한 것 외에 실시예 1과 동일한 방법으로 흑삼을 제조하였다(제조예 2).
또한, 백삼 꽃봉오리 및 백삼 지근을 포도주스에 침지한 것 외에 실시예 1과 동일한 방법으로 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 제조하였다(제조예 3).
또한, 백삼 꽃봉오리 및 백삼 지근을 침지하는 과정을 생략한 것 외에 실시예 1과 동일한 방법으로 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 제조하였다(제조예 4).
또한, 백삼 꽃봉오리 및 백삼 지근을 물에 침지한 것 외에 실시예 1과 동일한 방법으로 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 제조하였다(제조예 5).
또한, 백삼 전체를 원료로 사용한 것 외에 실시예 1과 동일한 방법으로 흑삼을 제조하였다(제조예 6).
또한, 백삼 꽃봉오리 0.5kg, 백삼 지근 0.5kg을 원료로 사용한 것 외에 실시예 1과 동일한 방법으로 흑삼을 제조하였다(제조예 7).
<흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 포함하는 조성물의 제조>
제조예 1 내지 7에서 제조한 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근과 당귀, 작약, 황기, 도인, 홍화, 숙지황, 천궁 및 감초를 세절하고 이를 마카 분말, 실크아미노산 분말, 포스파티딜세린을 표 1과 같은 비율로 혼합한 뒤 증류수 30ℓ를 가하고 90℃에서 5시간 동안 2회 추출한 후 여과지로 여과한 추출물을 감압 농축하고 동결건조하였다. 표 1에서 단위는 중량부이며, 흑삼 원료 100 중량부를 기준으로 하였다.
흑삼 당귀 작약 황기 도인 홍화 숙지황 천궁 감초 마카 실크 세린
실시예1 제조예1 90 90 90 90 90 90 40 20 90 90 90
실시예2 제조예1 130 95 80 90 90 80 30 15 130 95 80
실시예3 제조예2 100 70 100 100 100 100 30 10 100 70 100
비교예1 제조예1 90 90 90 90 90 90 50 30 - - 90
비교예2 제조예3 90 90 90 90 90 90 40 20 90 90 90
비교예3 제조예4 90 90 90 90 90 90 40 20 90 90 90
비교예4 제조예5 90 90 90 90 90 90 40 20 90 90 90
비교예5 제조예6 90 90 90 90 90 90 40 20 90 90 90
비교예6 제조예7 90 90 90 90 90 90 40 20 90 90 90
<콜린에스터레이즈 억제활성>
콜린에스터레이즈의 억제효과는 Ellman의 방법(Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr, Feather-Stone RM. Biochem Pharmacol 1961, 7, 88-95)을 변형하여 아세틸콜린에스터레이즈와 부티릴콜린에스터레이즈의 기질인 아세틸콜린과 부티릴콜린을 사용하여 분석하였다.
이를 위해, 0.1M 인산나트륨버퍼(sodium phosphate buffer, pH 8.0) 380㎕, 2mM DTNB(5,5’-dithiobis[[0059] 2-nitrobenzoic acid]) 40㎕, 460㎕의 아세틸콜린에스터레이즈 또는 부티릴콜린에스터레이즈 용액(각각 0.22U/㎖)을 넣고, 실온에서 10분간 방치한 후 각 효소의 기질인 3.75mM BTCC(butyrylthiocholine chloride)와 3.75mM ATCI(acetylthiocholine iodide)를 각각 10㎕씩 넣고, 410nm에서 2분간 흡광도 변화를 측정하였다. 콜린에스터레이즈 억제활성은 아래 계산식을 이용해 확인하였고 이에 대한 결과는 표 2에 나타내었다.
[(A0-A1)/A0] × 100 (%)
A0 : 대조군 흡광도 변화, A1 : 시료첨가시 흡광도 변화
억제율(%)
아세틸콜린에스터레이즈(4㎎/㎖) 부티릴콜린에스터레이즈(4㎎/㎖)
실시예1 94.4 98.5
실시예2 93.5 95.3
실시예3 92.8 97.3
비교예1 85.8 93.2
비교예2 83.4 92.9
비교예3 34.2 36.6
비교예4 30.6 35.2
비교예5 82.7 90.2
비교예6 82.6 91.5
표 2의 결과를 살펴보면, 실시예 1 내지 3의 조성물이 비교예 1 내지 6의 조성물보다 아세틸콜린에스터레이즈와 부티릴콜린에스터레이즈의 억제활성이 높은 것으로 나타났다. 특히, 포도주스에 침지하여 제조한 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 포함하는 조성물(비교예 2), 흑삼 전체를 포함하는 조성물(비교예 5)에 있어서는 실시예 1 내지 3에 비해 다소 낮은 아세틸콜린에스터레이즈와 부티릴콜린에스터레이즈의 억제활성을 나타내었으며, 마카 및 실크펩타이드를 제외한 한약재를 포함하는 조성물(비교예 1)에 있어서도 실시예 1 내지 3에 비해 다소 낮은 아세틸콜린에스터레이즈와 부티릴콜린에스터레이즈의 억제활성을 나타내는 것으로 나타났다.
또한, 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 1:1의 중량비로 혼합한 조성물(비교예 6)를 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 7:3, 4:1로 한 실시예 1-3에 비해 다소 낮은 수치를 나타내어 본 발명의 조성물의 성분과 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율이 중요한 요인이 되는 점을 시사했다.
<Y형 미로 실험>
Y형 미로 실험은 본 발명의 조성물이 공간인지력에 미치는 영향을 확인하기 위해 실시하였다. 실시예 및 비교예의 조성물을 16주간 급여한 후 마지막 날 스코폴라민을 1.0mg/kg의 농도로 각각 복강투여 하였다. 검은 아크릴판으로 규격에 맞추어 제작한 Y자 모양의 미로에서 3개의 각지를 각각 A, B, C로 정한 후 한쪽 가지에 마우스를 놓고 8분간 자유롭게 움직이게 한 후 마우스가 들어간 가지를 기록하였다. 꼬리까지 완전히 들어갔을 경우에 계속하였으며 한번 들어갔던 가지에 다시 들어간 경우에도 기록하였다. 세 개의 다른 가지에 차례로 들어간 경우 1점씩 부여 하였고 연속으로 들어가지 않으면 점수를 부여하지 않았다. 교차 행동력(spontaneous alteration)은 아래 식과 같이 측정된 점수를 총 교차한 횟수에서 2를 뺀 수로 나누어 확률로 환산한 값으로 나타내었다.
변경(교차) 행동력(%)=(A, B, C 연속교차 횟수/총교차횟수-2) × 100
변경행동력(%)
실시예1 51.7
실시예2 53.6
실시예3 52.4
비교예1 43.9
비교예2 42.2
비교예3 38.9
비교예4 37.7
비교예5 40.5
비교예6 45.3
표 3의 결과를 살펴보면, 전체적으로 실시예의 인지능력향상 정도가 비교예에 비해 높은 것으로 나타났다.
특히, 포도주스에 침지하여 제조한 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 포함하는 조성물(비교예 2), 흑삼 전체를 포함하는 조성물(비교예 5)에 있어서는 실시예 1 내지 3에 비해 낮은 인지능력향상 정도를 나타내었으며, 마카 및 실크펩타이드를 제외한 한약재를 포함하는 조성물(비교예 1)에 있어서도 실시예 1 내지 3에 비해 낮은 인지능력향상 정도를 나타내었다.
또한, 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 1:1의 중량비로 혼합한 조성물(비교예 6)를 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 7:3, 4:1로 한 실시예 1-3에 비해 낮은 인지능력향상 정도를 나타내었다. 이러한 결과는 본 발명의 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 특정한 비율로 혼합할 때 더 나은 효과를 얻을 수 있음을 시사하는 것이다.
<수동회피 실험>
수동회피 실험(passive avoidance test)은 길로틴 문을 중심으로 밝은 방과 어두운 방으로 구획이 나누어진 장치를(Jungdo Bio & Plant Co. Ltd, Seoul, Korea) 이용하여 실시하였다. 각각의 구획은 20×20×20cm로, 전기가 통할 수 있는 그리드(grid) 막대로 구성되었다.
수동회피 실험을 실시하기 60분 전에 8주령(20-25g)의 ICR 마우스에 타크린(THA, 10 mg/kg)과 실시예 1 내지 비교예 6의 생약추출물 300mg/kg을 경구투여하였고, 투여 30분 후에 기억력 손상을 유발하기 위하여 스코폴라민(scopolamine, SCOP, 2㎎/㎏)을 복강투여하였다. 30분 후, 상기 마우스들을 조명을 비춘 밝은 쪽 방에 놓고 10초간 탐색시킨 후 길로틴문 (guillotin door)을 열어 어두운 방으로 들어갈 수 있게 하였다(Gemini Avoidance System, San Diego, USA). 이때 길로틴문이 열린 후 60초 이내에 어두운 방으로 들어가지 않는 마우스는 실험에서 제외시켰다. 길로틴문이 열린 후 마우스가 어두운 방으로 들어갈 때까지의 시간을 측정하여 이를 학습 시험(acquisition trial)이라고 정의하였고, 상기 학습 시험의 머무름 시간(latency time)을 측정하였다.
또한, 마우스가 어두운 쪽으로 들어가면 길로틴문을 닫고, 0.5mA의 전기 자극을 3초 동안 그리드 바닥을 통해 흐르게 하여 마우스가 이를 기억하도록 하였다. 전기충격이 가해진 24시간 후, 마우스를 밝은 방에서 10초간 탐색하게 한 후 길로틴문을 열고 어두운 방으로 마우스의 4개의 발이 다 들어가는데 걸리는 시간을 측정하였다(지연시간, retention trial). 그 결과는 표 4와 같다.
학습시간의 머무름 시간 지연시간의 머무름 시간
무처리군 25 255
스코폴라민 13 21
타크린 + 스코폴라민 20 83
실시예1 + 스코폴라민 27 252
실시예2 + 스코폴라민 25 247
실시예3 + 스코폴라민 26 250
비교예1 + 스코폴라민 21 221
비교예2 + 스코폴라민 21 247
비교예3 + 스코폴라민 16 138
비교예4 + 스코폴라민 17 145
비교예5 + 스코폴라민 20 223
비교예6 + 스코폴라민 19 214
표 4에서는 밝은 방에서 머무르는 시간은 300초까지 측정하였으며, 어두운 방으로 가는데 걸리는 시간이 길수록 수동회피의 학습과 기억이 좋음을 나타낸다.
그 결과를 살펴보면, 스코폴라민 투여군의 학습시간 및 지연시간에 대한 머무름 시간(latency time)이 무처리군에 비해 감소하는 것을 확인할 수 있는데, 본 발명의 실시예의 생약 추출물의 경구투여에 의하여 학습시간 및 지연시간에 대한 머무름 시간이 증가하였고, 타크린을 투여한 군보다 높은 개선 효과가 있음을 확인할 수 있으며, 이와 같은 현상은 본 발명의 실시예의 생약추출물의 섭취로 인해 타크린이나 비교예의 생약추출물에 비해서 마우스의 기억력 손상정도가 현저하게 줄어들었기 때문으로 생각된다.
다만, 포도주스에 침지하여 제조한 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 포함하는 조성물(비교예 2), 흑삼 전체를 포함하는 조성물(비교예 5)에 있어서는 실시예 1 내지 3에 비해 다소 낮은 학습시간의 머무름 시간을 나타내었으며, 마카 및 실크펩타이드를 제외한 한약재를 포함하는 조성물(비교예 1)에 있어서도 실시예 1 내지 3에 비해 다소 낮은 지연시간의 머무름 시간을 나타내었다.
또한, 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 1:1의 중량비로 혼합한 조성물(비교예 6)를 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 7:3, 4:1로 한 실시예 1-3에 비해 머무름 시간이 다소 낮게 나타났다. 이러한 결과는 본 발명의 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 특정한 비율로 혼합할 때 더 나은 효과를 얻을 수 있음을 시사하는 것이다.
<흑삼을 함유한 생약추출물의 DPPH 라디컬 소거능 확인>
자유라디컬 소거능 활성은 Blois의 방법(Blois MS. Nature 1958, 181, 1199-1202)에 따라 측정하였다. 0.4mM DPPH 용액 0.8㎖에, 상기 실시예 및 비교예의 생약추출물을 10㎎/㎖의 농도로 증류수에 녹인 액상 0.2㎖을 넣고, 10분간 방치한 후 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디컬 소거능은 아래 식에 따라 계산하였고, 그 결과는 표 5에 나타난 바와 같다.
DPPH scavenging activity (%)=[(A0A1)/A0]×100
A0 : 대조군의 흡광도, A1 : 시료의 흡광도
조성물 4㎎/㎖의 DPPH 소거 활성(%)
실시예1 81.2
실시예2 80.4
실시예3 82.1
비교예1 77.2
비교예2 73.2
비교예3 14.2
비교예4 15.8
비교예5 76.8
비교예6 75.4
표 5의 결과를 확인하면, 본 발명의 실시예의 조성물이 비교예의 조성물보다 DPPH 라디컬 소거능이 높게 나타나는 것을 알 수 있다.
특히, 포도주스에 침지하여 제조한 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 포함하는 조성물(비교예 2), 흑삼 전체를 포함하는 조성물(비교예 5)에 있어서는 실시예 1 내지 3에 비해 다소 낮은 라디컬 소거능을 나타내었으며, 마카 및 실크펩타이드를 제외한 한약재를 포함하는 조성물(비교예 1)에 있어서도 실시예 1 내지 3에 비해 다소 낮은 라디컬 소거능을 나타내는 경향을 확인하였다.
또한, 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 1:1의 중량비로 혼합한 조성물(비교예 6)를 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 비율을 7:3, 4:1로 한 실시예 1-3에 비해 머무름 시간이 다소 낮게 나타났다. 이러한 결과는 본 발명의 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 특정한 비율로 혼합할 때 더 나은 효과를 얻을 수 있음을 시사하는 것이다.
또한, 총페놀함량과 DPPH 라디컬 소거능 결과를 통해 본 발명의 생약 추출물의 항산화활성이 높음을 확인할 수 있으며, 이로 인해, 본 발명의 생약 추출물의 신경세포 사멸 억제효과가 뛰어날 것으로 예상되었다.
<급성독성실험>
본 발명의 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 함유한 생약추출물을 단기간에 과량을 섭취하였을 시 급성적(24시간 이내)으로 동물체내에 미치는 독성을 조사하고, 치사율을 결정하기 위하여 본 실험을 수행하였다. 일반적인 마우스인 ICR 마우스 계통 20마리를 대조군은 10마리, 실험군은 10마리씩 배정하였다. 대조군에는 아무것도 투여하지 않았으며, 실험군은 각 제조예에 따라 제조한 흑삼을 함유한 생약추출물을 2.0g/㎏(일반적인 동물실험에서 사용되는 양의 50배 정도)의 농도로 경구 투여하였다. 투여 24시간 후에 각각의 치사율을 조사한 결과, 대조군과 2.0g/㎏ 농도의 생약추출물을 투여한 실험군은 모두 생존하였다.
<장기 및 조직 독성 실험>
C57BL/6J 생쥐를 대상으로 동물의 각 장기(조직)에 미치는 영향을 조사하기 위하여 실시예 2-1에서 제조한 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근을 함유한 생약추출물을 투여한 실험군과 용매만을 투여한 대조군의 동물들로부터 8주 후 혈액을 채취하여 GPT(glutamate-pyruvate transferase) 및 BUN(Blood Urea Nitrogen)의 혈액 내 농도를 Select E(Vital Scientific NV, Netherland) 기기를 이용하여 측정하였다. 그 결과, 간독성과 관계있는 것으로 알려진 GPT와 신장독성과 관계있는 것으로 알려진 BUN의 경우, 대조군과 비교하여 실험군은 별다른 차이를 보이지 않았다.
또한, 각 동물로부터 간과 신장을 절취하여 통상적인 조직절편 제작과정을 거쳐 광학현미경으로 조직학적 관찰을 시행하였으며 특이한 이상이 관찰되지 않았다.
본 발명은 상술한 바와 같이 바람직한 실시예를 들어 설명하였으나, 상기 실시예에 한정되지 아니하며 본 발명의 정신을 벗어나지 않는 범위 내에서 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 변형과 변경이 가능하다. 그러한 변형예 및 변경예는 본 발명과 첨부된 특허청구범위의 범위 내에 속하는 것으로 보아야 한다.

Claims (4)

  1. 4 내지 6년근 백삼의 꽃봉오리 및 지근(枝根)을 40 내지 100 부피%의 베리 농축액을 함유하는 증류수에 침지시킨 후, 상기 침지된 백삼의 꽃봉오리 및 지근을 회수하여 증숙하고 건조하는 증숙 및 건조 과정을 2 내지 5번 반복하여 제조된 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물, 당귀, 작약, 황기, 숙지황, 천궁, 마카, 실크아미노산, 포스파티딜세린, 도인, 홍화 및 감초를 함유하는 것을 특징으로 하는 치매 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  2. 삭제
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 베리는 복분자, 오디, 아로니아, 블루베리, 아사이베리, 하스카프 중 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 치매 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물은 흑삼 꽃봉오리와 흑삼 지근을 2:1 내지 4:1의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 치매 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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