KR101896129B1 - 인간 tnf-유사 리간드 1a(tl1a)에 대한 인간 항체 - Google Patents

인간 tnf-유사 리간드 1a(tl1a)에 대한 인간 항체 Download PDF

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Abstract

인간 TNF-유사 리간드 1A(hTL1A)에 특이적으로 결합하고 억제하는 온전한 인간 항체 또는 인간 항체의 항원-결합 절편이 제공된다. 상기 인간 항-hTL1 A 항체는 궤양성 대장염 및 크론 질환, 류마티스 관절염 등을 포함하는 염증성 장 질환과 같은 염증성 질환 또는 질병; 다발성 경화증, 당뇨병 등과 같은 자가면역 질환 또는 질병; 및 천식 및 알레르기성 폐 염증과 같은 알레르기성 반응과 같이 TL1A와 연관된 질환 또는 질병의 치료에 유용하다.

Description

인간 TNF-유사 리간드 1A(TL1A)에 대한 인간 항체{HUMAN ANTIBODIES TO HUMAN TNF-LIKE LIGAND 1A (TL1A)}
본 발명은 인간 TNF-유사 리간드 1A(hTL1A)에 특이적으로 결합하는 인간 항체 및 인간 항체의 항원-결합 절편 및 상기 항체를 이용한 치료 방법에 관한 것이다.
TL1A는 종양 괴사 인자 수퍼패밀리(tumor necrosis factor superfamily, TNFSF)의 타입 Ⅱ 세포막 단백질이고, TNFSF15로도 나타낸다. 이것은 내피 세포 및 단핵구(monocyte), 대식세포(macrophage), 림프구(lymphocyte), 고유판 단핵 세포(lamina propria mononuclear cell), 수지상 세포 및 혈장 세포를 포함하는 조혈성 계열(hematopoietic lineage)의 활성화 세포의 표면에 발현된다(Tan, K.B. et al., 1997, Gene 204:35-46; Prehn, J.L. et al., 2007, J Immunol 178:4033-4038). 또한, 이것은 신장, 폐, 전립선 및 감상샘에서 발현된다(Tan et al., 1997, supra). 내피 세포에서, TL1A의 발현은 IL-1α 및 TNFα에 의해 상향조절(upregulation)된다(Migone, T.S. et al., 2002, Immunity 16:479-492). 인간의 신선한 혈액 단핵구 및 단핵구-유래 수지상 세포에서, TL1A 발현은 FcγR-매개성 또는 톨-유사 수용체(Toll-like receptor, TLR) 신호전달에 의해 상향조절된다(Prehn et al., 2007, supra; Meylan, F. et al., 2008, Immunity 29:79-89). TL1A는 TNFα와 유사한 메커니즘을 통해 세포막으로부터 절단될 수 있고, 가용성 엑토도메인(ectodomain) 형태의 TL1A가 보고되어 있다(Migone et al., 2002, supra; Kim, S. et al., 2005, J Immunol Methods 298:1-8; Yang, C.R. et al., 2004, Cancer Res 64:1122-1129). 단백질 서열분석(sequencing)은 상기 형태의 TL1A가 Ala-71 및 Leu-72 잔기 사이에서 막-고정된 전구체가 절단된 후 자유롭게 됨을 확인하였다(Migone et al., 2002, supra). 잠재적으로 N-말단이 절단된 버전의 TL1A를 코딩하는 2 가지 변이체 cDNA가 확인되었다: VEGI-174(또는 TL1)(Zhai, Y. et al., 1999, FASEB J 13:181-189) 및 VEGI-192(Chew, L.J. et al., 2002, FASEB J 16:742-744). 상기 공개된 데이터는 TL1A 유전자의 생물학적으로 활성인 생성물이 온전한 길이(full-length)의 타입 Ⅱ 막투과(transmembrane) 단백질(1-251 잔기) 및 그의 단백질분해적으로(proteolytically) 절단된 엑토도메인(ectodomain)(72-251 잔기)임을 제시한다(Migone et al., 2002, supra; Jin et al., 2007, Biochem Biophys Res Commun 364:1-6). Gln-167이 Arg로 단일 아미노산 치환된 것을 함유하는 "Fhm"으로 나타내는 hTL1A의 변이체가 US6,521,422에 개시되어 있다.
TL1A는 그 동족 수용체(cognate receotpr)인 데쓰 수용체 3(Death Receptor 3, DR3; TNFRSF25로도 알려져 있음; 각각 서열번호 251 및 서열번호 252의 핵산 및 아미노산 서열)을 통해 신호를 매개하고, 그 결과 맥락(context)-의존적인 방식으로 세포 성장 및 전-염증성 사이토카인의 분비를 촉진하거나, 아폽토시스(apoptosis)를 촉진한다. TL1A는 내인성 가용성 유인(decoy) 수용체인 DcR3(TR6, NTR3 또는 TNFRSF21로도 알려짐; 각각 서열번호 253 및 서열번호 254의 핵산 및 아미노산 서열)에 의해 결합되는 3 개의 알려진 리간드(FasL 및 LIGHT 포함) 중 하나이다(Migone et al., 2002, supra; Yang C.R. et al., 2004, Cancer Res 64:1122-1129).
DR3은 대부분의 활성화된 T 림프구 및 NK 세포에서 발현되는 TNF 수용체-연관성 데쓰-도메인 수용체이다(Migone et al., 2002, supra; Screaton G.R. et al., 1997, Proc Natl Acad Sci (USA) 94:4615-4619). TL1A는 T 세포 상의 DR3에 맞물려서, IL-2에 대한 그 반응성을 향상시키고(Migone et al., 2002, supra), 준최적(suboptimal) 동시자극의 조건 하에 T 세포의 증식과 IFNγ 및 GM-CSF의 방출을 강화한다(Migone et al., 2002, supra; Meylan et al., 2008, supra). 또한, TL1A는 준최적 레벨의 IL-12/IL-18과의 상승작용으로 CD4+ T 세포에 의한 IFNγ 생성을 유도하는 것으로 나타났다(Papadakis, K.A. et al., 2004, J Immunol 172:7002-7007; Prehn, J.L. et al., 2004, Clin Immunol 112:66-77; Papadakis, K.A. et al., 2005, J Immunol 174:4985-4990; Cassatella, M.A. et al., 2007, J Immunol 178:7325-7333).
TL1A는 염증성 장 질환[예컨대, 궤양성 대장염(UC) 및 크론 질병(CD)], 류마티스 관절염, 다발성 경화증(MS), 동맥경화증 등을 포함하는 다양한 염증성 질환 및/또는 자가 면역 질환에서 연관되어 있다(하기 문헌 참조: Bayry, J., 2010, Nature Reviews/Rheumatology 6:67-68; Takedatsu, H. et al., 2008, Gastroenterology 135:552-567; Prehn et al., 2004, supra; Bamias, G. et al., 2008, Clin Immunol 129:249-255; Bull, M.J. et al., 2008, J Exp Med 205:2457-2464; Pappu, B.P. et al., 2008, J Exp Med 205:1049-1062; Bamias, G. et al., 2003, J Immunol 171:4868-4874; Kang, Y. et al., 2005, Cytokine 29:229-235). 대부분의 공개된 데이터는 TH1 및 TH17 이펙터(effector) 작용의 분화를 추진함에 있어서의 TL1A의 중심적인 역할과 일치하지만, 최근의 연구는 천식 모델에서 TH2 T 세포 반응의 발달에 있어서 TL1A/DR3 상호작용의 역할을 제안하고 있다(Fang, L. et al., 2008, J Exp Med 205:1037-1048). 따라서, 높은 친화도와 중성화 활성을 갖는 TL1A에 대한 온전한 인간 항체와 같은 TL1A 억제제를 단독으로 또는 현재 이용가능한 항-염증제, 면역억제제(예컨대, TNF-α 길항제(antagonist), 콜티손(cortisone) 또는 스테로이드 등) 및/또는 항-알레르기제와의 조합으로 사용하면 이들 질환 및 질병에 대한 효과적인 치료를 제공한다.
인간 TL1A의 핵산 및 아미노산 서열은 각각 서열번호 243 및 서열번호 244에 나타나 있고, Fhm의 경우에는 각각 서열번호 245 및 서열번호 246에 나타나 있다. TL1A에 대한 항체는, 예를 들면, US7,597,886, US7,820,798 및 US2009/0280116에 개시되어 있다.
제1 측면에서, 본 발명은 인간 TL1A(hTL1A)에 특이적으로 결합하고 그 활성을 중화시키는 온전한 인간 단일클론 항체(mAb) 및 그의 항원-결합 절편을 제공한다.
상기 항체는 온전한-길이(예를 들면, IgG1 또는 IgG4 항체)일 수 있거나, 또는 항원-결합 부위(예를 들면, Fab, F(ab')2 또는 scFv 절편) 만을 포함할 수 있으며, 기능성에 영향을 미치기 위하여, 예컨대 잔류 이펙터 기능을 제거하기 위하여 변형될 수 있다(Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164:1925-1933).
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 118, 134, 138, 154, 158, 174, 178, 194, 198, 214, 218 및 234로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(HCVR), 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 항체 또는 항체의 항원-결합 절편에 관한 것이다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 134, 174 및 234로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2, 18, 174 또는 234를 포함하는 HCVR을 포함한다.
한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 216, 226 및 236으로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역(LCVR), 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 항체의 항원-결합 부분은 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 136, 176 및 236으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 10, 26, 176 또는 236을 포함하는 LCVR을 포함한다.
추가 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/116, 118/126, 134/136, 138/146, 154/156, 158/166, 174/176, 178/186, 194/196, 198/206, 214/216, 218/226 및 234/236으로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCVR 및 LCVR(HCVR/LCVR) 서열 쌍을 포함한다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 및 234/236의 아미노산 서열 쌍으로부터 선택되는 HCVR 및 LCVR을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 174/176 또는 234/236을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍을 포함한다.
제2 측면에서, 본 발명은 서열번호 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 124, 144, 164, 184, 204 및 224로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3) 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열; 및 서열번호 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 132, 152, 172, 192, 212 및 232로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 CDR3(LCDR3) 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 항체 또는 항체의 항원-결합 절편에 관한 것이다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 72/80, 88/96, 104/112, 124/132, 144/152, 164/172, 184/192, 204/212 또는 224/232를 포함하는 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 72/80, 124/132, 164/172 또는 224/232를 포함하는 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 8/16, 24/32, 164/172 또는 224/232를 포함하는 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 120, 140, 160, 180, 200 및 220으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 CDR1(HCDR1) 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열; 서열번호 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 122, 142, 162, 182, 202 및 222로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 CDR2(HCDR2) 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열; 및/또는 서열번호 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 128, 148, 168, 188, 208 및 228로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 CDR1(LCDR1) 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열; 및/또는 서열번호 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 130, 150, 170, 190, 210 및 230으로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 CDR2(LCDR2) 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 추가로 포함하는 항체 또는 그의 절편에 관한 것이다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 4/6/8, 20/22/24, 36/38/40, 52/54/56, 68/70/72, 84/86/88, 100/102/104, 120/122/124, 140/142/144, 160/162/164, 180/182/184, 200/202/204 및 220/222/224로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR1/HCDR2/HCDR3의 조합; 및/또는 서열번호 12/14/16, 28/30/32, 44/46/48, 60/62/64, 76/78/80, 92/94/96, 108/110/112, 128/130/132, 148/150/152, 168/170/172, 188/190/192, 208/210/212 및 228/230/232로 이루어진 군으로부터 선택되는 LCDR1/LCDR2/LCDR3의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 84/86/88/92/94/96, 100/102/104/108/110/112, 120/122/124/128/130/132, 140/142/144/148/150/152, 160/162/164/168/170/172, 180/182/184/188/190/192, 200/202/204/208/210/212 및 220/222/224/228/230/232로 이루어진 군으로부터 선택되는 CDR 서열 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 120/122/124/128/130/132, 160/162/164/168/170/172 또는 220/222/224/228/230/232의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 160/162/164/168/170/172 또는 220/222/224/228/230/232의 CDR 서열 조합을 포함한다.
관련 구현예에서, 본 발명은 hTL1A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체의 항원-결합 절편을 포함하며, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/116, 118/126, 134/136, 138/146, 154/156, 158/166, 174/176, 178/186, 194/196, 198/206, 214/216, 218/226 및 234/236으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열 쌍 내에 포함되는 중쇄 및 경쇄 CDR 도메인을 포함한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 확인하는 방법 및 기술은 본 기술분야에 알려져 있으며, 본 명세서에 개시되어 있는 상기 특정된 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 확인하기 위해 적용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하기 위해 적용될 수 있는 종래의 정의는 캐뱃(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의 및 AbM 정의를 포함한다. 일반적인 용어로서, 상기 캐뱃 정의는 서열의 다양성에 기초하고, 상기 코티아 정의는 구조적 루프(loop) 영역의 위치에 기초하며, 상기 AbM 정의는 상기 캐뱃 및 코티아 접근법 사이의 절충안이다. 예컨대, Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); 및 Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989) 참조. 또한, 항체 내의 CDR 서열을 확인하기 위한 공개 데이터베이스가 이용가능하다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 및 234/236의 아미노산 서열 쌍으로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCVR 및 LCVR 쌍 내에 포함되는 CDR 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 174/176 또는 234/236의 HCVR 및 LCVR 서열 쌍 내에 포함되는 CDR 서열을 포함한다.
다른 관련 구현예에서, 본 발명은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 120/122/124/128/130/132, 160/162/164/168/170/172 또는 220/222/224/228/230/232의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편과 hTL1A에 대한 특이적인 결합을 위해 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 절편을 제공한다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 160/162/164/168/170/172 또는 220/222/224/228/230/232의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편과 hTL1A에 대한 특이적인 결합을 위해 경쟁한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 또는 234/236의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편과 hTL1A에 대한 특이적인 결합을 위해 경쟁한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 174/176 또는 234/236의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편과 hTL1A에 대한 특이적인 결합을 위해 경쟁한다.
다른 관련 구현예에서, 본 발명은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 120/122/124/128/130/132, 160/162/164/168/170/172 또는 220/222/224/228/230/232의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 절편에 의해 인식되는 hTL1A 상의 동일한 에피토프(epitope)에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 절편을 제공한다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 서열번호 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 160/162/164/168/170/172 또는 220/222/224/228/230/232의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 절편에 의해 인식되는 hTL1A 상의 동일한 에피토프에 결합한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 또는 234/236의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 절편에 의해 인식되는 hTL1A 상의 동일한 에피토프를 인식한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 서열번호 2/10, 18/26, 174/176 또는 234/236의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 절편에 의해 인식되는 hTL1A 상의 동일한 에피토프를 인식한다.
제3 측면에서, 본 발명은 전술한 항-TL1A 항체 또는 그의 절편을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다. 또한, 본 발명의 핵산을 운반하는 재조합 발현 벡터, 이러한 벡터가 그 내부에 도입된 단리된 숙주 세포, 예컨대 E. coli와 같은 세균 세포, CHO 세포와 같은 포유동물 세포뿐만 아니라, 상기 항체의 생산을 허용하는 조건 하에 상기 숙주 세포를 배양하고 생산된 항체를 회수함으로써 상기 항체를 생산하는 방법도 본 발명에 의해 포괄된다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 117, 133, 137, 153, 157, 173, 177, 193, 197, 213, 217 및 233으로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성(homology)을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 HCVR을 포함하는 항체 또는 그의 절편을 제공한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 1, 17, 33, 49, 65, 133, 173 및 233으로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열에 의해 코딩되는 HCVR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 1, 17, 173 또는 233의 핵산 서열에 의해 코딩되는 HCVR을 포함한다.
한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 115, 125, 135, 145, 155, 165, 175, 185, 195, 205, 215, 225 및 235로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 LCVR을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 9, 25, 41, 57, 73, 135, 175 및 235로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열에 의해 코딩되는 LCVR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 9, 25, 175 또는 235의 핵산 서열에 의해 코딩되는 LCVR을 포함한다.
추가 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 1/9, 17/25, 33/41, 49/57, 65/73, 81/89, 97/105, 113/115, 117/125, 133/135, 137/145, 153/155, 157/165, 173/175, 177/185, 193/195, 197/205, 213/215, 217/225 및 233/235로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열 쌍에 의해 코딩되는 HCVR 및 LCVR(HCVR/LCVR) 서열 쌍을 포함한다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 1/9, 17/25, 33/41, 49/57, 65/73, 133/135, 173/175 및 233/235로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열 쌍에 의해 코딩되는 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 1/9, 17/25, 173/175 또는 233/235의 핵산 서열 쌍에 의해 코딩되는 HCVR/LCVR 쌍을 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호 7, 23, 39, 55, 71, 87, 103, 123, 143, 163, 183, 203 및 223으로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 HCDR3 도메인; 및 서열번호 15, 31, 47, 63, 79, 95, 111, 131, 151, 171, 191, 211 및 231로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 LCDR3 도메인을 포함하는 항체 또는 항체의 항원-결합 절편에 관한 것이다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 7/15, 23/31, 39/47, 55/63, 71/79, 87/95, 103/111, 123/131, 143/151, 163/171, 183/191, 203/211 또는 223/231의 핵산 서열 쌍에 의해 코딩되는 HCDR3 및 LCDR3 서열 쌍을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 7/15, 23/31, 39/47, 55/63, 71/79, 123/131, 163/171 또는 223/231의 핵산 서열 쌍에 의해 코딩되는 HCDR3 및 LCDR3 서열 쌍을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 HCDR3/LCDR3 서열 쌍은 서열번호 7/15, 23/31, 163/171 또는 223/231의 핵산 서열 쌍에 의해 코딩된다.
추가 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 3, 19, 35, 51, 67, 83, 99, 119, 139, 159, 179, 199 및 219로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 HCDR1 도메인; 서열번호 5, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 121, 141, 161, 181, 201 및 221로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 HCDR2 도메인; 서열번호 11, 27, 43, 59, 75, 91, 107, 127, 147, 167, 187, 207 및 227로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 LCDR1 도메인; 및 서열번호 13, 29, 45, 61, 77, 93, 109, 129, 149, 169, 189, 209 및 229로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 코딩되는 LCDR2 도메인을 추가로 포함한다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 3/5/7, 19/21/23, 35/37/39, 51/53/55, 67/69/71, 83/85/87, 99/101/103, 119/121/123, 139/141/143, 159/161/163, 179/181/183, 199/201/203 또는 219/221/223에 의해 코딩되는 HCDR1/HCDR2/HCDR3의 조합; 및 서열번호 11/13/15, 27/29/31, 43/45/47, 59/61/63, 75/77/79, 91/93/95, 107/109/111, 127/129/131, 147/149/151, 167/169/171, 187/189/191, 207/209/211 또는 227/229/231에 의해 코딩되는 LCDR1/LCDR2/LCDR3의 조합을 포함한다. 한 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 서열번호 3/5/7/11/13/15, 19/21/23/27/29/31, 35/37/39/43/45/47, 51/53/55/59/61/63, 67/69/71/75/77/79, 83/85/87/91/93/95, 99/101/103/107/109/111, 119/121/123/127/129/131, 139/141/143/147/149/151, 159/161/163/167/169/171, 179/181/183/187/189/191, 199/201/203/207/209/211 및 219/221/223/227/229/231로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 서열 조합에 의해 코딩되는 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열번호 3/5/7/11/13/15, 19/21/23/27/29/31, 35/37/39/43/45/47, 51/53/55/59/61/63, 67/69/71/75/77/79, 119/121/123/127/129/131, 159/161/163/167/169/171 또는 219/221/223/227/229/231의 핵산 서열 조합에 의해 코딩되는 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열번호 3/5/7/11/13/15, 19/21/23/27/29/31, 159/161/163/167/169/171 또는 219/221/223/227/229/231의 핵산 서열 조합에 의해 코딩되는 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함한다.
제4 측면에서, 본 발명은 hTL1A에 특이적으로 결합하고 HCDR3 및 LCDR3을 포함하는 단리된 항체 또는 항체의 항원-결합 절편에 관한 것으로서, 상기 HCDR3은 식 X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 - X10 - X11 - X12 - X13 - X14 - X15 - X16의 아미노산 서열(서열번호 239)을 포함하며, 상기 X1은 Thr 또는 Ala이고, X2는 Lys, Arg 또는 부재(absent)이며, X3은 Glu, Gly 또는 부재이고, X4는 Asp, Pro 또는 부재이며, X5는 Leu 또는 부재이고, X6은 Arg, Tyr, Glu 또는 부재이며, X7은 Gly, Asp, Ala 또는 부재이고, X8은 Asp, Ser 또는 Tyr이며, X9는 Tyr 또는 Trp이고, X10은 Tyr 또는 Asp이며, X11은 Tyr, Lys 또는 Ile이고, X12는 Gly, Tyr, Asn, 또는 Ser이며, X13은 Val, Gly 또는 Ser이고, X14는 Phe 또는 Met이며, X15는 Asp이고, 및 X16은 Tyr 또는 Val이며; 및 상기 LCDR3은 식 X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9의 아미노산 서열(서열번호 242)을 포함하며, 상기 X1은 Gln이고, X2는 Gln이며, X3은 Tyr, Leu 또는 Phe이고, X4는 His, Tyr 또는 Asn이며, X5는 Arg 또는 Ser이고, X6은 Ser, Thr 또는 Tyr이며, X7은 Trp 또는 Pro이고, X8은 Phe, Leu 또는 부재이며, 및 X9는 Thr이다.
추가 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 절편은 식 X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8의 아미노산 서열(서열번호 237)을 포함하는 HCDR1 서열(상기 X1은 Gly이고, X2는 Phe이며, X3은 Thr이고, X4는 Phe이며, X5는 Ser이고, X6은 Thr, Ser 또는 Asn이며, X7은 Tyr이고, 및 X8은 Gly, Trp, Val 또는 Ala임); 식 X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8의 아미노산 서열(서열번호 238)을 포함하는 HCDR2 서열(상기 X1은 Ile 또는 Val이고, X2는 Ser 또는 Lys이며, X3은 Gly 또는 Glu이고, X4는 Thr, Asp, Ser 또는 Arg이며, X5는 Gly이고, X6은 Arg, Ser 또는 Gly이며, X7은 Thr, Glu 또는 Ser이고, 및 X8은 Thr 또는 Lys임); 식 X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 - X10 - X11 - X12의 아미노산 서열(서열번호 240)을 포함하는 LCDR1 서열(상기 X1은 Gln이고, X2는 Thr, Ser, Ala 또는 Gly이며, X3은 Ile이고, X4는 Ser 또는 Leu이며, X5는 Tyr 또는 부재이고, X6은 Ser 또는 부재이며, X7은 Ser 또는 부재이고, Xs은 Asn 또는 부재이며, X9는 Asn 또는 부재이고, X10은 Lys 또는 부재이며, X11은 Ser, Asn 또는 Thr이고, 및 X12는 Trp 또는 Tyr임); 및 식 X1 - X2 - X3의 아미노산 서열(서열번호 241)을 포함하는 LCDR2 서열(상기 X1은 Ala, Trp 또는 Ser이고, X2는 Ala 또는 Thr이며, 및 X3은 Ser임)을 추가로 포함한다.
제5 측면에서, 본 발명은 VH, DH 및 JH 생식주(germline) 서열로부터 유래되는 뉴클레오티드 서열 세그먼트(segment)에 의해 코딩되는 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 VK 및 JK 생식주 서열로부터 유래되는 뉴클레오티드 서열 세그먼트에 의해 코딩되는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함하는 인간 항-TL1A 항체 또는 그의 항원-결합 절편에 관한 것이다. 어떤 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 절편은 (ⅰ) VH3-23, DH2-21, JH4, VK1-5 및 JK1; (ⅱ) VH3-7, DH1-7, JH6, VK4-1 및 JK3; (ⅲ) VH3-23, DH2-2, JH6, VK1-9 및 JK2; (ⅳ) VH3-23, DH6-6, JH4, VK1-9 및 JK4; (ⅴ) VH1-2, DH2-15, JH3, VK1-12 및 JK4; (ⅵ) VH4-34, DH3-9, JH4, VK3-20 및 JK4; (ⅶ) VH4-34, DH1-1, JH4, VK3-20 및 JK4; 및 (ⅷ) VH4-34, DH3-3, JH4, VK2-24 및 JK4로 이루어진 군으로부터 선택되는 생식주 유전자 조합으로부터 유래되는 뉴클레오티드 서열 세그먼트에 의해 코딩되는 HCVR 및 LCVR을 포함한다.
제6 측면에서, 본 발명은 표면 플라스몬(plasmon) 공명 분석(예를 들면, BIACORE™)에 의해 측정될 때 약 1 nM 이하의 평형 해리 상수(equilibrium dissociation constant, KD)를 갖고 hTL1A 또는 Fhm에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 절편에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 약 800 pM 이하; 약 700 pM 이하; 약 600 pM 이하; 약 500 pM 이하; 약 400 pM 이하; 약 300 pM 이하; 약 200 pM 이하; 약 150 pM 이하; 약 100 pM 이하; 약 90 pM 이하; 약 80 pM 이하; 약 50 pM 이하; 또는 30 pM 이하의 KD를 나타낸다.
제7 측면에서, 본 발명은, 예를 들면, 본 명세서에 개시된 것과 같은 ELISA, 표면 플라스몬 공명 분석 또는 Luminex® xMAP® 기술에 의해 측정될 때, 서열번호 244의 hTL1A 단백질에는 결합하지만 서열번호 246의 Fhm과 같은 그의 변이체와는 교차-반응하지 않는 항-hTL1A 항체 또는 그의 항원-결합 절편을 제공한다. Fhm은 hTL1A의 Gln에 대응하는 167 위치에서 Arg로의 단일 아미노산 치환을 포함한다(미국 특허 제6,621,422호 참조). 관련 구현예에서, 본 발명은 또한 hTL1A 단백질에 결합하고 Fhm과 교차-반응하는 항-hTL1A 항체 또는 그의 항원-결합 절편을 제공한다. 다른 관련 구현예에서, 본 발명은 마우스 TL1A(mTL1A: 서열번호 250, 서열번호 249의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩됨)와는 교차-반응하지 않지만 사이노몰거스(cynomolgus) 원숭이의 TL1A(Macaca fascicularis 또는 MfTL1A; 서열번호 248, 서열번호 247의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩됨) 또는 레수스(rhesus) 원숭이의 TL1A(Macaca mulatta; MfTL1A와 동일한 아미노산 서열)와는 교차-반응하는 항-hTL1A 항체 또는 그의 항원 결합 절편을 제공한다. 추가적인 관련 구현예에서, 본 발명은mTL1A 및 MfTL1A 모두와 교차-반응하는 항-hTL1A 항체 또는 그의 항원-결합 절편을 제공한다.
본 발명은 변형된 글리코실화 패턴을 갖는 항-hTL1A 항체를 포괄한다. 일부 애플리케이션(application)에서, 원하지 않는 글리코실화 부위를 제거하기 위한 변형, 또는 예컨대 항체 의존성 세포성 세포독성(antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC) 기능을 증가시키기 위해 푸코오스 모이어티(fucose moiety)를 제거하는 것이 유용할 수 있다(Shield et al. (2002) JBC 277:26733). 다른 애플리케이션에서, N-글리코실화 부위를 제거하면 치료용 항체에 대한 원하지 않는 면역 반응을 감소시키거나 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 또 다른 애플리케이션에서, 보체 의존성 세포독성(complement dependent cytotoxicity, CDC)을 변형시키기 위하여 갈락토실화의 변형이 수행될 수 있다.
제8 측면에서, 본 발명은 hTL1A에 특이적으로 결합하는 재조합 인간 항체 또는 그의 절편 및 약학적으로 하용가능한 담체(carrier)를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 한 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 절편과 제2 치료제의 조합인 조성물에 관한 것이다. 제2 치료제는 면역억제제, 항-염증제, 진통제, 항-알레르기제 등과 같은 하나 이상의 임의의 제제일 수 있으며, 이들 중 많은 수는 서로 중첩되는 치료 효과를 가질 수 있다. 본 발명의 항-hTL1A 항체와의 조합으로 사용될 수 있는 적합한 면역억제제는 글루코콜티코이드(glucocorticoid), 시클로스포린(cyclosporin), 메토트렉세이트(methotrexate), 인터페론 β(IFN-β), 타크롤리무스(tacrolimus), 시롤리무스(sirolimus), 아자티오프린(azathioprine), 메르캅토푸린(mercaptopurine), 오피오이드(opioid), 미코페놀레이트(muycophenolate), 인플릭시맙(infliximab), 에테르나셉트(eternacept), 아달리무맙(adalimumab) 등과 같은 TNF-결합 단백질, 다크티노마이신(dactinomycin), 안트라시클린(anthracycline), 미토마이신(mytomycin) C, 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 등과 같은 세포독성 항생제, 항-CD20 항체, 항-CD3 항체 등과 같은 면역 세포를 표적으로 하는 항체를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 항-hTL1A 항체와의 병행 치료에 적합한 항-염증제 및/또는 진통제는 콜티코스테로이드(corticosteroid), 아스피린, 이부프로펜(ibuprofen), 나프록센(naproxen), Cox-2 억제제 등과 같은 비-스테로이드성 항-염증성 약물(non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID), TNF-α 길항제, IL-1 길항제, IL-6 길항제, 아세트아미노펜(acetaminophen), 몰핀모방체(morphinomimetics) 등을 포함한다. 적합한 항-알레르기제는 항히스타민, 글루코콜티코이드, 에피네프린(아드레날린), 테오필린(theophylline), 크로몰린 나트륨(cromolyn sodium) 및 항-루코트리엔뿐만 아니라 항-콜린효능제(cholinergics), 충혈완화제(decongestant), 비만세포(mast cell) 안정화제 등을 포함한다.
제9 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항-hTL1A 항체 또는 상기 항체의 항원-결합 부위를 이용하여 hTL1A 활성을 억제하는 방법에 관한 것으로서, 상기 치료 방법은 본 발명의 항체 또는 항체의 항원-결합 절편 및 선택적으로 하나 이상의 전술한 추가적인 치료제를 포함하는 치료학적 유효량의 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 치료되는 질환 또는 질병은 TL1A 활성의 제거, 억제 또는 감소에 의해 향상, 경감, 억제 또는 방지되거나 항-hTL1A 항체 처리가 없는 경우와 비교하여 그 발생 빈도가 감소되는 임의의 질환 또는 증상이다. 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 질환 또는 질병의 예는 UC 및 CD를 포함하는 염증성 장 질환(IBD), RA, MS, 타입 1 및 타입 2 당뇨병, 건선, 건선성 관절염, 강직성 척수염, 아토피성 피부염 등과 같은 염증성 질환 및/또는 자가면역 질환; 천식, 알레르기성 폐 염증 등을 포함하는 알레르기 반응 또는 증상; 암, 동맥경화증, 감염, 신경퇴행성 질환, 이식 거부, 이식대숙주 질환(graft vs. host disease, GVHD), 심혈관 질병/질환 등을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
다른 구현예들은 후속하는 상세한 설명을 검토함으로써 명확해질 것이다.
본 발명을 상세하게 설명하기 전에, 본 발명은 개시된 특정 방법 및 실험 조건에 한정되는 것이 아님을 이해해야 하는데, 그 이유는 이러한 방법 및 조건들은 변할 수 있기 때문이다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 구현예를 설명하기 위한 목적일 뿐이고 제한할 의도는 아님을 이해해야 하는데, 그 이유는 본 발명의 범위는 부속하는 청구항에 의해서만 제한될 것이기 때문이다.
달라 정의하지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 보통 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 개시된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명을 실행하거나 테스트함에 있어서 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질들이 이제 개시된다. 본 명세서에서 언급된 모든 공개문헌들은 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
정의
본 명세서에 사용된 것과 같은 "인간 TNF-유사 리간드 1A" 또는 "hTL1A"란 용어는, 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 서열번호 243으로 나타낸 핵산 서열 및 서열번호 244의 아미노산 서열을 갖는 hTL1A 또는 생물학적으로 활성인 그의 절편뿐만 아니라, 서열번호 245로 나타낸 핵산 서열 및 서열번호 246의 아미노산 서열을 갖는 Fhm을 포함하는 hTL1A 변이체 또는 생물학적으로 활성인 그의 절편을 나타낸다.
본 명세서에 사용된 것과 같은 "항체"란 용어는 2 개의 중쇄(H) 및 2 개의 경쇄(L)가 이황화 결합에 의해 상호결합된 4 개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 면역글로불린 분자를 나타내기 위한 의도이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 중쇄 불변 영역(CH; CH1, CH2 및 CH3 도메인을 포함함)을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 경쇄 불변 영역(CL)을 포함한다. 상기 HCVR 및 LCVR은 뼈대 영역(framework region, FR)으로 명명된 보다 보존된 영역 사이에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된 고도가변성(hypervariability) 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 HCVR 및 LCVR은 하기 순서로 아미노-말단부터 카르복시-말단으로 배열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4.
또한, 하나 이상의 CDR 잔기를 치환하거나 하나 이상의 CDR을 생략하는 것이 가능하다. 결합을 위하여 1 개 또는 2 개의 CDR이 제공될 수 있는 항체가 과학 문헌에 개시되어 있다. 파들란 등은 공개된 결정 구조에 기초하여 항체와 그 항원 사이의 접촉 영역을 분석하였고, 단지 CDR 잔기의 약 1/5 내지 1/3 만이 실제로 상기 항원에 접촉한다고 결론지었다(Padlan et al., 1995, FASEB J. 9:133-139). 또한, 파들란은 1 개 또는 2 개의 CDR이 항원과 접촉하는 아미노산이 없는 많은 항체를 발견하였다(또한, Vajdos et al., 2002 J Mol Biol 320:415-428 참조).
항원과 접촉하지 않는 CDR 잔기는 초티아 CDR 밖에 있는 캐뱃 CDR의 영역으로부터 분자 모델링에 의해 및/또는 경험적으로 이전의 연구에 기초하여 확인될 수 있다(예를 들면, CDRH2 내의 H60-H65 잔기는 종종 필요하지 않음). 만일 CDR 또는 그의 잔기(들)가 생략되면, 통상 다른 인간 항체 서열 또는 이러한 서열의 콘센서스(consensus) 내의 대응하는 위치를 점유하는 아미노산으로 치환된다. 또한, CDR 내의 치환을 위한 위치 및 치환되는 아미노산은 경험적으로 선택될 수 있다. 경험적 치환은 보존적 또는 비-보존적 치환일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것과 같은 "인간 항체"란 용어는 인간 생식주 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하기 위한 의도이다. 본 발명의 인간 mAb는, 예를 들면, CDR 내에, 특히 CDR3 내에 인간 생식주 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예컨대, 시험관내 무작위 또는 위치-특이적 돌연변이 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입되는 돌연변이). 그러나, 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "인간 항체"란 용어는 다른 포유동물 종(예컨대, 마우스)의 생식주로부터 유래된 CDR 서열이 인간 FR 서열에 이식된 mAb를 포함하기 위한 의도는 아니다.
본 명세서에 개시된 온전한 인간 항-TL1A 항체는 대응하는 생식주 서열과 비교할 때 뼈대 및/또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 CDR 영역 내에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본 명세서에 개시된 아미노산 서열과, 예를 들면, 공개된 항체 서열 데이터베이스로부터 이용가능한 생식주 서열을 비교함으로써 즉시 확인할 수 있다. 본 발명은 본 명세서에 개시된 임의의 아미노산 서열로부터 유래되는 항체 및 그의 항원-결합 절편을 포함하며, 이때 하나 이상의 뼈대 및/또는 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산이 상기 항체가 유래되는 생식주 서열의 대응하는 잔기(들), 또는 다른 인간 생식주 서열의 대응하는 잔기(들), 또는 대응하는 생식주 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환으로 돌연변이된다(이러한 서열 변화는 본 명세서에서 집합적으로 "생식주 돌연변이"로 나타냄). 본 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자는 본 명세서에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 이용해 출발하여 하나 이상의 개별 생식주 복귀(back)-돌연변이 또는 그 조합을 포함하는 많은 항체 및 항원-결합 절편을 용이하게 생산할 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 VH 및/또는 VL 도메인 내의 뼈대 및/또는 CDR 잔기 모두가 상기 항체가 유래된 원래의 생식주 서열에서 발견되는 잔기로 복귀 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 어떤 잔기만이, 예컨대 FR1의 처음 8 개 아미노산 내 또는 FR4의 마지막 8 개 아미노산 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기만이, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기만이 원래의 생식주 서열로 복귀 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 뼈대 및/또는 CDR 잔기(들)는 상이한 생식주 서열(즉, 상기 항체가 원래 유래된 생식주 서열과 상이한 생식주 서열)의 대응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 아울러, 본 발명의 항체는 뼈대 및/또는 CDR 영역 내에 2 이상의 생식주 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있으며, 예컨대 어떤 개별 잔기는 특정 생식주 서열의 대응하는 잔기로 돌연변이되고, 원래의 생식주 서열과 상이한 어떤 다른 잔기는 유지되거나 상이한 생식주 서열의 대응하는 잔기로 돌연변이된다. 일단 입수되면, 하나 이상의 생식주 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 절편은 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화도, 개선된 또는 향상된 길항제성 또는 작용제성(agonistic) 생물학적 특성(경우에 따라), 감소된 면역원성 등과 같은 하나 이상의 바람직한 특성에 대해 용이하게 테스트될 수 있다. 상기 일반적인 방식으로 얻어진 항체 및 항원-결합 절편은 본 발명 내에 포괄된다.
또한, 본 발명은 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본 명세서에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열의 임의의 변이체를 포함하는 항-TL1A 항체를 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 본 명세서에 개시된 임의의 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열에 대해 예컨대, 10 개 이하, 8 개 이하, 6 개 이하, 4 개 이하, 2 또는 1 개의 보존적 아미노산 치환(들)을 갖는 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-TL1A 항체를 포함한다.
달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 본 명세서에 사용된 것과 같은 "항체"(Ab)란 용어는 2 개의 면역글로불린 중쇄 및 2 개의 면역글로불린 경쇄를 포함하는 항체 분자(즉, "온전한 항체 분자")뿐만 아니라 그의 항원-결합 절편을 포괄하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에 사용된 것과 같은 항체의 "항원-결합 부위", 항체의 "항원-결합 절편" 등의 용어는 임의의 자연적으로 발생하는, 효소적으로 얻을 수 있는, 합성된, 또는 유전공학적으로 가공된, 항원과 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 절편은, 예컨대 온전한 항체 분자로부터 단백질분해성 소화 또는 항체 가변 및 (선택적으로) 불변 도메인을 코딩하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 재조합 유전공학 기술과 같은 임의의 적합한 표준 기술을 이용함으로써 유래될 수 있다. 이러한 DNA는 알려져 있거나, 및/또는 예컨대 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예컨대, 파지-디스플레이 항체 라이브러리를 포함함)로부터 즉시 이용가능하거나, 합성될 수 있다. 상기 DNA는 서열분석될 수 있고, 예를 들면, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 형상(configuration)으로 배열하기 위하여, 또는 코돈을 도입하고, 시스테인 잔기를 생성하고, 아미노산을 변형, 추가 또는 결실시키는 등을 위하여 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 이용함으로써 조작될 수 있다.
항원-결합 절편의 비제한적 예는 (ⅰ) Fab 절편; (ⅱ) F(ab')2 절편; (ⅲ) Fd 절편; (ⅳ) Fv 절편; (ⅴ) 단일-사슬 Fv(scFv) 분자; (ⅵ) dAb 절편; 및 (ⅶ) 항체의 고도가변 영역을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어지는 최소 인식 단위(예컨대, CDR3 펩티드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR)) 또는 제한된(constrained) FR3-CDR3-FR4 펩티드를 포함한다. 또한, 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-이식된 항체, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), 미니바디(minibody), 나노바디(nanobody)(예컨대, 1 가(monovalent) 나노바디, 2 가 나노바디 등), 작은 모듈성 면역약학물(small modular immunopharmaceuticals, SMIPs) 및 상어 가변 IgNAR 도메인과 같은 다른 가공된 분자가 본 명세서에 사용된 것과 같은 "항원-결합 절편"이란 표현 내에 포괄된다.
항체의 항원-결합 절편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 상기 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성일 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 뼈대 서열과 인접하거나 뼈대를 이루는(in frame) 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 연관된 VH 도메인을 갖는 항원-결합 절편에 있어서, 상기 VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 상대적으로 위치할 수 있다. 예를 들면, 상기 불변 영역은 다이머성(dimeric)이고, VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 다이머를 포함할 수 있다. 다른 한편으로, 항체의 항원-결합 절편은 모노머성 VH 또는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, 항체의 항원-결합 절편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유적으로 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 절편 내에 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적 형상은 (ⅰ) VH-CH1; (ⅱ) VH-CH2; (ⅲ) VH-CH3; (ⅳ) VH-CH1-CH2; (ⅴ) VH-CH1-CH2-CH3; (ⅵ) VH-CH2-CH3; (ⅶ) VH-CL; (ⅷ) VL-CH1; (ⅸ) VL-CH2; (ⅹ) VL-CH3; (ⅹⅰ) VL -CH1-CH2; (ⅹⅱ) VL-CH1-CH2-CH3; (ⅹⅲ) VL-CH2-CH3; 및 (ⅹⅳ) VL-CL을 포함한다. 상기에 나열된 임의의 예시적인 형상을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 형상에 있어서, 상기 가변 및 불변 도메인은 서로 직접 결합될 수 있거나, 또는 온전한 또는 부분적인 힌지(hinge) 또는 링커 영역에 의해 결합될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩티드 분자 내의 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 유연한 또는 반-유연한 결합을 형성하는 적어도 2 개(예컨대, 5, 10, 15, 20, 40, 60, 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 또한, 본 발명의 항체의 항원-결합 절편은 (예컨대, 이황화 결합(들)에 의해) 서로 및/또는 하나 이상의 모노머성 VH 또는 VL 도메인과 비-공유적으로 연결된 상기 나열된 임의의 가변 및 불변 도메인 형상의 호모-다이머 또는 헤테로-다이머(또는 다른 멀티머(multimer))를 포함할 수 있다.
온전한 항체 분자와 마찬가지로, 항원-결합 절편은 단일특이적(monospecific) 또는 다중특이적(multispecific)(예컨대, 양특이적)일 수 있다. 항체의 다중특이적 항원-결합 절편은 전형적으로 적어도 2 개의 상이한 가변 도메인을 포함하며, 각각의 가변 도메인은 별개의 항원 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 명세서에 개시된 상기 예시적인 양특이적 항체 포맷(format)을 포함하는 임의의 다중특이적 항체 포맷이 본 기술분야에 이용가능한 일상적인 기술을 이용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 절편의 맥락에서 사용하기 위해 적응될 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 절편은 세포독소(cytotoxin), 화학치료 약물, 면역억제제 또는 방사성동위원소와 같은 치료적 모이어티에 접합될 수 있다("면역접합체(immunoconjugate)").
"특이적으로 결합하는" 등의 용어는 항체 또는 그의 항원-결합 절편이 생리학적 조건 하에 상대적으로 안정한 항원과의 복합체를 형성하는 것을 의미한다. 특이적 결합은 약 3,000 mM 이하(즉, 낮은 KD는 강한 결합을 나타냄), 약 2,000 nM 이하, 약 1,000 nM 이하; 약 500 nM 이하; 약 300 nM 이하; 약 200 nM 이하; 약 100 nM 이하; 약 50 nM 이하; 약 1 nM 이하; 또는 약 0.5 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)에 의해 특정될 수 있다. 2 개의 분자가 특이적으로 결합하는지 여부를 결정하는 방법은 본 기술분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들면, 평형 투석, 표면 플라스몬 공명 등을 포함한다. 그러나, hTL1A에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는, 예를 들면, 사이노몰거스 원숭이 TL1A(서열번호 248), 및/또는 마우스 TL1A(서열번호 250), 및/또는 Fhm(서열번호 246)과 같은 TL1A 변이체와 같은 다른 종 유래의 TL1A 분자와 같은 다른 항원과 교차-반응성을 나타낼 수 있다. 그럼에도 불구하고, hTL1A 및 하나 이상의 추가적인 항원에 결합하는 다중-특이적 항체(예컨대, 양특이적 항체)도 또한 본 명세서에 사용된 것과 같이 hTL1A에 "특이적으로 결합하는" 항체로 고려된다.
"높은 친화도" 항체란 용어는 표면 플라스몬 공명, 예컨대 BIACORE™ 또는 용액-친화도 ELISA에 의해 측정될 때 약 1×10-9 M 이하, 약 0.5×10-9 M 이하, 약 0.25×10-9 M 이하, 약 1×10-10 M 이하, 또는 약 0.5×10-10 M 이하의 KD로서 표현되는 hTL1A에 대한 결합 친화도를 갖는 항체를 나타낸다.
본 명세서에 사용된 것과 같은 "KD"란 용어는 특정 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 나타내기 위한 의도이다.
"슬로우 오프 속도(slow off rate)", "Koff" 또는 "kd"란 용어는 표면 플라스몬 공명, 예컨대 BIACORE™에 의해 측정될 때 1×10-3 s-1 이하, 바람직하게는 1×10-4 s-1 이하의 속도 상수로 hTL1A로부터 해리되는 항체를 의미한다.
"고유한(intrinsic) 친화도 상수" 또는 "ka"는 표면 플라스몬 공명, 예컨대 BIACORE™에 의해 측정될 때 약 1×103 M-1s-1 이상의 속도 상수에서 hTL1A와 결합하는 항체를 의미한다.
본 명세서에 사용된 것과 같은 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 mAb가 실질적으로 없는 항체를 나타내기 위한 의도이다(예컨대, hTL1A에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 hTL1A 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 Ab가 실질적으로 없음). 그러나, hTL1A에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 사이노몰거스 원숭이 및 마우스와 같은 다른 종 유래의 TL1A 분자 및/또는 Fhm과 같은 hTL1A 변이체와 같은 다른 항원에 교차-반응성을 가질 수 있다.
본 명세서에 사용된 것과 같은 "중성화 항체"(또는 "TL1A 활성을 중성화시키는 항체")는 TL1A에 결합시 TL1A의 적어도 하나의 생물학적 활성을 억제하게 되는 항체를 나타내기 위한 의도이다. 이러한 TL1A의 생물학적 활성의 억제는 본 기술분야에 알려진 하나 이상의 몇 가지 표준 시험관내 또는 생체내 분석(또한 하기 실시예 참조)에 의해 하나 이상의 TL1A 생물학적 활성의 지표(indicator)를 측정함으로써 평가될 수 있다.
본 명세서에 사용된 것과 같은 "표면 플라스몬 공명"이란 용어는, 예를 들면, BIACORE™ 시스템(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)을 이용하여 바이오센서 매트릭스 내의 단백질 농도의 변경을 검출함으로써 실시간으로 생물특이적 상호작용의 분석을 허용하는 광학 현상을 나타낸다.
"에피토프"란 용어는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다. 에피토프는 구조적 또는 기능적으로 정의될 수 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 상기 구조적 에피토프의 서브셋(subset)이며, 상기 상호작용의 친화도에 직접적으로 기여하는 잔기들을 갖는다. 또한, 에피토프는 입체적(conformational), 즉 비-선형 아미노산으로 이루어질 수 있다. 어떤 구현예에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기, 또는 설포닐기와 같이 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹핑인 결정체를 포함할 수 있고, 어떤 구현예에서는 특정한 3 차원 구조 특성 및/또는 특정한 전하 특성을 가질 수 있다.
"실질적인 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"이란 용어는, 핵산 또는 그의 절편과 연관될 때, 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실을 이용하여 다른 핵산(또는 그 상보성 가닥)과 최적으로 배열될 때, 아래에 개시된 것과 같은 FASTA, BLAST 또는 GAP과 같은 서열 동일성의 임의의 잘-알려진 알고리즘에 의해 측정할 때, 상기 뉴클레오티드 염기의 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%에서 뉴클레오티드 서열 동일성이 있음을 나타낸다.
폴리펩티드에 적용될 때, "실질적인 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"이란 용어는 예컨대 디폴트 갭 중량(default gap weight)을 이용하여 GAP 또는 BESTFIT 프로그램에 의해 최적으로 배열될 때 2 개의 펩티드 서열이 적어도 90% 서열 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유함을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환에 의해 상이하다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예컨대, 전하 또는 소수성도)을 갖는 측쇄(R 기)를 갖는 다른 아미노산 잔기로 치환된 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 2 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 상이한 경우, 유사성의 백분율 또는 정도는 상기 치환의 보존적 본성을 바로잡기 위해 상향 조정될 수 있다. 이러한 조정을 하기 위한 수단은 본 기술분야의 기술자에게 잘 알려져 있다. 예컨대, 인용에 의해 본 명세서 내에 포함되는 Pearson (1994) Methods Molo. Biol. 24:307-331 참조. 유사한 화학적 특성을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 군의 예는 (1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 루이신 및 이소루이신; (2) 지방족-히그록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; (3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파테이트 및 글루타메이트, 및 (7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보전적 아미노산 치환 군은 발린-루이신-이소루이신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파테이트 및 아스파라긴-글루타민이다. 다른 한편으로, 보존적 교체는 인용에 의해 본 발명에 포함되는 곤넷 등의 문헌(Gonnet et al. (1992) Science 256:1443-45)에 개시되어 있는 PAM250 로그-우도(log-likelihood) 매트릭스에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다. "적당히(moderately) 보존적인" 교체는 PAM250 로그-우도 매트릭스에서 음이 아닌 값을 갖는 임의의 변화이다.
폴리펩티드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 이용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 다양한 치환, 결실 및 보존적 아미노산 치환을 포함하는 다른 변형에 할당된 유사성의 측정을 이용하여 유사한 서열을 일치시킨다. 예를 들면, GCG 소프트웨어는 디폴트 파라미터와 함께 사용되어 유기체의 상이한 종 유래의 상동성 폴리펩티드와 같은 매우 연관된 폴리펩티드 사이 또는 야생형 단백질 및 그의 뮤테인(mutein) 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 결정할 수 있는 GAP 및 BESTFIT과 같은 프로그램을 포함한다. 예컨대, GCG Version 6.1 참조. 또한, 폴리펩티드 서열은 디폴트 또는 권고된(recommended) 파라미터와 함께 FASTA를 이용하여 비교될 수 있다; GCG Version 6.1 내의 프로그램. FASTA(예컨대, FASTA2 및 FASTA3)는 문의(query) 및 검색 서열 사이에 가장 중첩되는 영역의 배열 및 서열 동일성 백분율을 제공한다(Pearson, 2000, supra). 본 발명의 서열과 상이한 유기체 유래의 많은 수의 서열을 포함하는 데이터베이스를 비교할 때의 다른 바람직한 알고리즘은 디폴트 파라미터를 이용한 컴퓨터 프로그램인 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다. 예컨대, 각각 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410 및 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-402 참조.
"치료학적 유효량"이란 구는 투여시 원하는 효과를 생성하는 양을 의미한다. 정확한 양은 치료의 목적, 치료되는 대상의 연령 및 크기, 투여 경로 등에 의존할 것이며, 알려진 기술을 이용하여 본 기술분야의 기술자에 의해 확인될 것이다(예를 들면, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding 참조).
인간 항체의 제조
유전자이식(transgenic) 마우스에서 인간 항체를 제조하는 방법은 본 기술분야에 알려져 있다. 임의의 이러한 알려진 방법이 본 발명의 맥락에서 사용되어 TL1A에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 만들 수 있다.
단일클론 항체를 생성하기 위한 VELOCIMMUNE™ 기술 또는 임의의 다른 알려진 방법을 이용함으로써, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 TL1A에 대한 높은 친화도의 키메라 항체가 먼저 단리된다. 아래 실험 섹션(section)에서와 같이, 항체는 친화도, 선택성, 에피토프 등을 포함하는 원하는 특성에 대해 특성분석 및 선택된다.
일반적으로, 본 발명의 항체는 매우 높은 친화도를 갖고 있으며, 고체 상에서 고정되거나 용액 상에서 항원에 대한 결합에 의해 측정될 때 전형적으로 약 10-12 M 내지 약 10-9 M의 KD를 갖고 있다. 상기 마우스 불변 영역은, 예를 들면, 야생형 IgG1(서열번호 255) 또는 IgG4(서열번호 256), 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4(예를 들면, 서열번호 257에서 나타낸 바와 같이 Ser-108이 Pro로 치환된 IgG4)와 같은 원하는 인간 불변 영역으로 교체되어 본 발명의 온전한 인간 항체를 생성한다. 선택된 불변 영역은 특정한 용도에 따라 다양할 수 있지만, 상기 항체의 높은 친화도 항원-결합 및 표적 특이성 특성은 상기 가변 영역 내에 존재한다.
에피토프 맵핑 및 관련 기술
특정한 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위하여, Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)에 개시되어 있는 것과 같은 일상적인 교차-차단 분석이 수행될 수 있다. 다른 방법은 알라닌 스캐닝 돌연변이체, 펩티드 블롯(Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-63)(인용에 의해 그 전체가 본 명세서에 구체적으로 포함됨), 또는 펩티드 절단 분석을 포함한다. 아울러, 에피토프 삭제(excision), 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법이 도입될 수 있다(Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496)(인용에 의해 그 전체가 본 명세서에 구체적으로 포함됨).
"에피토프"란 용어는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 나타낸다. B-세포 에피토프는 근접(contiguous) 아미노산 또는 단백질의 3 차원 접힘에 의해 병치된 비근접 아미노산 모두로부터 형성될 수 있다. 근접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 노출시에도 보유되지만, 3 차원 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리시 소실된다. 에피토프는 전형적으로 구별되는 공간적 구조(unique spatial conformation) 내에 적어도 3, 보다 흔하게는 적어도 5 또는 8-10 개의 아미노산을 포함한다.
항원 구조-기반의 항체 프로파일링(Antigen Structure-based Antibody Profiling, ASAP)으로도 알려져 있는 변형-보조된 프로파일링(Modification-Assisted Profiling, MAP)은 화학적으로 또는 효소적으로 변형된 항원 표면에 대한 각각의 항체의 결합 프로파일의 유사성에 따라 동일한 항원에 대한 많은 수의 mAb를 카테고리화하는 방법이다(US2004/0101920, 인용에 의해 그 전체가 본 명세서에 구체적으로 포함됨). 각각의 카테고리는 다른 카테고리에 의해 나타내는 에피토프와 뚜렷하게 상이하거나 부분적으로 중첩되는 구별되는 에피토프를 반영할 수 있다. 상기 기술은 유전자적으로 동일한 mAb의 신속한 필터링을 허용하여서, 특성분석이 유전자적으로 뚜렷한 mAb에 초점이 맞추어질 수 있다. 하이브리도마(hybridoma) 스크리닝에 적용시, MAP은 원하는 특성을 갖는 mAb를 생산하는 드문 하이브리도마 클론의 확인을 촉진할 수 있다. MAP은 본 발명의 항-TL1A mAb를 상이한 에피토프에 결합하는 mAb의 군으로 분류하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 특정한 예시적인 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 hTL1A 항체를 포함한다. 마찬가지로, 본 발명은 또한 본 명세서에 개시된 임의의 특정한 예시적인 항체와 hTL1A 또는 hTL1A 절편에 대한 결합을 위해 경쟁하는 항-hTL1A 항체를 포함한다.
본 기술분야에 알려진 일상적인 방법을 이용함으로써 항체가 참조군(reference) 항-hTL1A 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지, 또는 결합을 위해 경쟁하는지 여부를 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들면, 테스트 항체가 본 발명의 참조물 항-hTL1A 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 결정하기 위하여, 상기 참조물 항체를 포화 조건 하에 hTAL1A 단백질 또는 펩티드에 결합하도록 한다. 다음에, 테스트 항체가 hTL1A 분자에 결합하는 능력을 평가한다. 만일 참조물 항-hTL1A 항체로 포화 결합된 후 테스트 항체가 hTL1A에 결합할 수 있다면, 상기 테스트 항체는 상기 참조물 항-hTL1A 항체와 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 결론지을 수 있다. 반대로, 만일 참조물 항-hTL1A 항체로 포화 결합된 후 테스트 항체가 hTL1A 분자에 결합할 수 없다면, 상기 테스트 항체는 본 발명의 참조물 항-hTL1A 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
항체가 참조물 항-hTL1A 항체와의 결합을 위해 경쟁하는지 여부를 결정하기 위하여, 2 가지 방향으로 전술한 결합 방법론이 수행될 수 있다: 첫 번째 방향에서, 상기 참조물 항체는 포화 조건 하에 hTL1A 분자에 결합하도록 한 후, 상기 hTL1A 분자에 대한 테스트 항체의 결합을 평가한다. 두 번째 방향에서, 상기 테스트 항체는 포화 조건 하에 hTL1A 분자에 결합하도록 한 후, 상기 TL1A 분자에 대한 참조물 항체의 결합을 평가한다. 만일, 양쪽 방향에서, 첫 번째 (포화) 항체만이 TL1A 분자에 결합할 수 있다면, 상기 테스트 항체 및 참조물 항체는 hTL1A에 대한 결합을 위해 경쟁한다고 결론짓는다. 본 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인식되는 것과 같이, 참조물 항체와 결합을 위해 경쟁하는 항체는 필수적으로 상기 참조물 항체와 동일한 에피토프에 결합하지 않을 수도 있으며, 중첩하거나 인접한 에피토프에 결합함으로써 상기 참조물 항체의 결합을 입체구조적으로(sterically) 차단할 수 있다.
각각 서로 항원에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제(차단)한다면, 2 개의 항체는 동일한 또는 중첩하는 에피토프에 결합한다. 즉, 경쟁적 결합 분석으로 측정할 때 1, 5, 10, 20 또는 100 배 과량의 한 항체는 다른 항체의 결합을 적어도 50%, 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99% 억제한다(예컨대, Junghans et al., Cancer Res. 1990:50:1495-1502 참조). 다른 한편으로, 필수적으로 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 항원 내의 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거한다면 2 개의 항체는 동일한 에피토프를 갖는다. 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 아미노산 돌연변이의 일부가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거한다면 2 개의 항체는 중첩하는 에피토프를 갖는다.
이후, 추가적인 일상적인 실험(예컨대, 펩티드 돌연변이 및 결합 분석)을 수행하여 상기 테스트 항체의 결합 부재 관찰이 실제로 상기 참조물 항체와 동일한 에피토프에 결합하기 때문인지, 또는 입체구조적 차단(또는 다른 현상)이 결합 부재 관찰의 원인인지 여부를 확인할 수 있다. 이러한 부류의 실험은 ELISA, RIA, 표면 플라스몬 공명, 유세포 분석(flow cytometry) 또는 본 기술분야에서 이용가능한 임의의 다른 정량적 또는 정성적 항체-결합 분석을 이용하여 수행될 수 있다.
면역접합체
본 발명은 세포독소, 화학치료 약물, 면역억제제 또는 방사성동위원소와 같은 치료적 모이어티에 접합된 인간 항-TL1A 단일클론 항체("면역접합체")를 포괄한다. 세포독소 제제는 세포에 해로운 임의의 제제를 포함한다. 면역접합체를 형성하기 위한 적합한 세포독소 제제 및 화학치료 제제의 예는 본 기술분야에 알려져 있으며, 예를 들면 인용에 의해 본 명세서에 구체적으로 포함되는 WO 05/103081 참조.
양특이성
본 발명의 항체는 단일특이적, 양특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 다중특이적 mAb는 한 표적 폴리펩티드의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나, 하나 이상의 표적 펩티드에 대해 특이적인 항원-결합 도메인을 포함할 수 있다. 예컨대, Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69 참조. 상기 인간 항-hTL1A mAb는, 예컨대 다른 펩티드 또는 단백질과 같은 다른 작용 분자에 결합되거나 동시-발현될 수 있다. 예를 들면, 항체 또는 그의 절편은 다른 항체 또는 항체 절편과 같은 하나 이상의 분자 개체(entity)에 (예컨대, 화학적 커플링, 유전자적 융합, 비공유 결합 등에 의해) 기능적으로 연결되어 두 번째 결합 특이성을 갖는 양특이적 또는 다중특이적 항체를 생산할 수 있다.
본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 양특이적 항체 포맷은 제1 면역글로불린(Ig) CH3 도메인 및 제2 Ig CH3 도메인을 사용하는 것을 포함하며, 상기 제1 및 제2 Ig CH3 도메인은 서로 적어도 한 아미노산에 의해 차이나고, 적어도 한 아미노산 차이는 상기 아미노산 차이가 없는 양특이적 항체와 비교할 때 단백질 A에 대한 양특이적 항체의 결합을 감소시킨다. 한 구현예에서, 상기 제1 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고, 상기 제2 Ig CH3 도메인은 H95R 변형(IMGT 엑손 넘버링에 의함; EU 넘버링에 의해서는 H435R)과 같이 단백질 A 결합을 감소 또는 없앤다. 상기 제2 CH3은 Y96F 변형(IMGT에 의함; EU에 의해서는 Y436F)을 추가로 포함할 수 있다. 상기 제2 CH3 내에서 발견될 수 있는 추가적인 변형은 IgG1 항체의 경우에는 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M 및 V82I(IMGT에 의함; EU에 의해서는 D356E, L358M, N384S, K392N, V397N 및 V422I); IgG2 항체의 경우에는 N44S, K52N 및 V82I(IMGT; EU에 의해서는 N384S, K392N 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우에는 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q 및 V82I(IMGT에 의함; EU에 의해서는 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q 및 V422I)를 포함한다. 전술한 양특이적 항체 포맷에 대한 변형은 본 발명의 범위 내에 고려된다.
생물동등성( bioequivalent )
본 발명의 항-hTL1A 항체 및 항체 절편은 상기 개시된 mAb의 아미노산 서열과 다르지만 인간 TL1A에 결합하는 능력을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 단백질을 포괄한다. 이러한 변이체 mAb 및 항체 절편은 양친 서열과 비교할 때 아미노산의 하나 이상의 부가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 상기 개시된 mAb의 경우와 본질적으로 동등한 생물학적 활성을 나타낸다. 마찬가지로, 본 발명의 hTL1A mAb를 코딩하는 DNA 서열은 상기 개시된 서열과 비교할 때 뉴클레오티드의 하나 이상의 추가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 본 발명의 항-hTL1A 항체 또는 항체 절편과 본질적으로 생물동등한 항-hTL1A 항체 또는 항체 절편을 코딩하는 서열을 포괄한다. 이러한 변이체 아미노산 및 DNA 서열의 예는 상기에 논의되어 있다.
2 개의 항원-결합 단백질 또는 항체는, 예를 들면, 유사한 실험 조건 하에 단일 용량(dose) 또는 다중 용량으로 동일한 몰 농도로 투여될 때 그 흡수 속도 및 정도가 현저한 차이를 나타내지 않는 약학적 동등물이거나 약학적 대안물(alternative)이라면 생물동등하다고 간주된다. 어떤 항체는 그 흡수 정도에서 동등하지만 그 흡수 속도에 있어서는 동등하지 않으면 동등물 또는 약학적 대안물로 간주될 것이지만, 흡수 속도에서의 이러한 차이가 의도적인 것이고, 표지(labeling)시에 반영되어 있으며, 예컨대 만성적인 사용시에 효과적인 체내 약물 농도를 달성하는데 필수적이지 않고, 연구되는 특정 약물 생성물에 대해 의학적으로 유의미하지 않다면 생물동등하다고 간주될 수 있다.
한 구현예에서, 2 개의 항원-결합 단백질은 이러한 전환없이 계속적으로 치료한 것과 비교할 때 환자가 참조 생성물(reference product)과 생물학적 생성물 사이를 면역원성에서의 임상적으로 현저한 변화 또는 감소된 효과를 포함하는 부작용 위험의 증가가 예상되지 않으면서 1 회 이상 전환될 수 있다면 생물동등하다.
한 구현예에서, 2 개의 항원-결합 단백질은 이들 모두 이러한 메커니즘이 알려져 있는 정도까지 사용 증상 또는 증상들에 대해 공통되는 메커니즘 또는 메커니즘들에 의해 작용한다면 생물동등하다.
생물동등성은 생체내 및 시험관내 방법에 의해 설명될 수 있다. 생물동등성 측정은, 예컨대 (a) 항체 또는 그 대사물의 농도가 시간의 함수로서 혈액, 혈장, 혈청 또는 다른 생물학적 유체에서 측정되는 인간 및 다른 포유동물에서의 생체내 테스트; (b) 인간 생체내 생물이용성(bioavailability) 데이터와 연관되고 합리적으로 예측되는 시험관내 테스트; (c) 항체(또는 그 표적)의 적절한 급성 약물학적 효과가 시간의 함수로서 측정되는 인간 또는 다른 포유동물에서의 생체내 테스트; 및 (d) 항체의 안전성, 효능 또는 생물이용성 또는 생물동등성을 확립하는 잘-통제된 임상 시험을 포함한다.
본 발명의 항-hTL1A 항체의 생물동등성 변이체는, 예를 들면, 생물학적 활성에 필요하지 않은 잔기 또는 서열에 다양한 치환을 만들거나 말단 또는 내부의 잔기 또는 서열을 결실시킴으로써 구축될 수 있다. 예를 들면, 생물학적 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기는 결실되거나 다른 아미노산으로 교체되어 복원(renaturation)시 불필요하거나 부정확한 분자내 이황화 가교(disulfide bridge)가 형성되는 것을 방지할 수 있다.
치료학적 투여 및 제형
본 발명은 본 발명의 항-hTL1A 항체 또는 항원-결합 절편을 포함하는 치료학적 조성물 및 이를 이용한 치료학적 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 치료학적 조성물의 투여는 적합한 담체, 부형제(excipient) 및 개선된 전달, 운반, 내성 등을 제공하기 위해 제형 내로 포함되는 다른 제제들과 함께 투여될 것이다. 다수의 적합한 제형이 모든 약학적 화학자들에게 알려진 처방서(formulary)에서 발견될 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. 상기 제형들은, 예를 들면, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, (양이온성 또는 음이온성) 지질 함유 소낭(vesicle)(예컨대, LIPOFECTIN™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀전(emulsion), 에멀전 카르보왁스(carbowax)(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔, 카르보왁스를 함유하는 반고체 혼합물을 포함한다. 또한, Powell et al. "Compendium of Excipients for parenteral formualtions" PDA, 1998, J Pharm Sci Technol 52:238-311 참조.
상기 용량은 투여되는 대상의 연령 및 크기, 표적 질환, 치료 목적, 증상, 투여 경로 등에 따라 변할 수 있다. 본 발명의 항체가 성인 환자에서 염증성 질환/질병, 자가면역 질환/질병, 알레르기 반응 등을 포함하는 TL1A와 직간접적으로 연관되는 다양한 증상 및 질환의 치료에 사용될 때, 본 발명의 항체를 약 0.01 내지 약 20 ㎎/㎏ 체중, 보다 바람직하게는 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3 ㎎/㎏ 체중의 단일 용량으로 정맥내 또는 피하 투여하는 것이 이점이 있다. 증상의 심각성에 따라, 치료의 빈도 및 기간이 조정될 수 있다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 절편은 적어도 약 0.1 ㎎ 내지 약 800 ㎎, 약 1 내지 약 500 ㎎, 약 5 내지 약 300 ㎎, 또는 약 10 내지 약 200 ㎎, 약 100 ㎎ 까지, 또는 약 50 ㎎ 까지의 초기 용량으로 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 초기 용량 후 상기 초기 용량의 경우와 대략 동일하거나 더 낮을 수 있는 양으로 제2 및 복수의 그 다음 용량의 항체 또는 그의 항원-결합 절편의 투여가 뒤따를 수 있으며, 상기 그 다음 용량은 적어도 1 일 내지 3 일; 적어도 1 주; 적어도 2 주; 적어도 3 주; 적어도 4 주; 적어도 5 주; 적어도 6 주; 적어도 7 주; 적어도 8 주; 적어도 9 주; 적어도 10 주; 적어도 12 주; 또는 적어도 14주에 의해 분리된다.
예컨대, 리포좀(liposome) 내에서의 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, 상기 돌연변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개성 엔도사이토시스(endocytosis)와 같은 다양한 운반 시스템이 알려져 있으며, 본 발명의 약학적 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다(예컨대, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 참조). 도입 방법은 진피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외(epidural) 및 경구 경로를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면, 수액(infusion) 또는 볼루스(bolus) 주사, 상피 또는 점막피부 내벽(lining)(예컨대, 경구 점막, 직장 및 내장 점막 등)에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신성 또는 국소성일 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 소낭, 특히 리포좀 내에 운반될 수 있다(Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., 1989, in Liposmes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365; Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327 참조; 일반적으로는 전술한 문헌들 참조).
어떤 상황에서, 상기 약학적 조성물은 조절된 방출 시스템 내에 운반될 수 있다. 한 구현예에서, 펌프가 사용될 수 있다(Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crrit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 참조). 다른 구현예에서, 폴리머성 물질이 사용될 수 있다; Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1994) 참조. 또 다른 구현예에서, 조절된 방출 시스템은 상기 조성물의 표적 근방에 위치하여서 전신성 용량의 일부만 필요로 할 수 있다(예컨대, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138, 1984 참조).
상기 주사가능한 제조물(preparation)은 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 수액(drip infusion)용 제형을 포함할 수 있다. 상기 주사가능한 제조물은 공중에 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 주사가능한 제조물은 예컨대 주사용으로 편리하게 사용되는 멸균 수성 매질(medium) 또는 오일성 매질 내에 전술한 항체 또는 그의 염을 용해, 현탁 또는 에멀전화함으로써 제조될 수 있다. 상기 주사용 수성 매질로서, 예를 들면, 알코올(예컨대, 에탄올), 폴리알코올(예컨대, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예컨대, 폴리솔베이트 80, HCO-50 (수소화 피마자유의 폴리옥시에틸렌 (50 ㏖) 부가물(adduct))] 등과 같은 적절한 가용화 제제와 함께 조합으로 사용될 수 있는 생리학적 식염수, 글루코오스 및 다른 보조 제제 등을 함유하는 등장 용액이 있다. 상기 오일성 매질로서, 예컨대 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 가용화 제제와 조합으로 사용될 수 있는 참기름 등이 도입된다. 따라서, 상기 제조된 주사물은 바람직하게는 적절한 앰풀 내에 충진된다. 본 발명의 약학적 조성물은 표준 바늘 및 주사기를 이용하여 피하 또는 정맥내로 운반될 수 있다. 또한, 피하 운반과 관련하여, 본 발명의 약학적 조성물을 운반함에 있어서 펜 운반 장치가 즉시 적용될 수 있다. 이러한 펜 운반 장치는 재사용가능하거나 1 회용일 수 있다. 재사용가능한 펜 운반 장치는 일반적으로 약학적 조성물을 함유하는 교체가능한 카트리지를 이용한다. 상기 카트리지 내의 모든 약학적 조성물이 투여되고 카트리지가 비게 되면, 상기 빈 카트리지는 즉시 버려지고 상기 약학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 교체될 수 있다. 이후, 상기 펜 운반 장치는 재사용될 수 있다. 상기 1 회용 펜 운반 장치에는 교체가능한 카트리지가 없다. 대신, 상기 1회용 펜 운반 장치는 상기 장치 내의 저장소 내에 수용된 약학적 조성물로 미리 충진되어 있다. 상기 저장소에 상기 약학적 조성물이 비게 되면, 전체 장치가 버려진다.
다수의 재사용가능한 펜 및 자가주사기(autoinjector) 운반 장치가 본 발명의 약학적 조성물의 피하 운반에 적용된다. 예로는, 몇 가지만 말하자면, AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ Ⅰ, Ⅱ 및 Ⅲ(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ 펜(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ 및 OPTICLIK™(sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)을 포함하지만 분명히 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물의 피하 운반에 적용되는 1 회용 펜 운반 장치의 예는 SOLOSTAR™ 펜(sanofi-aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk) 및 KWIKPEN™(Eli Lilly)을 포함하지만 분명히 이에 한정되는 것은 아니다.
유리하게는, 전술한 경구 또는 비경구 용도용 약학적 조성물은 활성 성분의 용량을 맞추기에 적합한 단일 용량 내의 제형으로 제조된다. 이러한 단일 용량 내의 제형은, 예를 들면, 정제, 알약, 캡슐, 주사물(앰풀), 좌약 등을 포함한다. 전술한 항체의 포함되는 양은 일반적으로 단일 용량 내에 약 0.1 내지 약 800 ㎎ 제형이다; 특히 주사의 형태인 경우 전술한 항체는 약 1 내지 약 500 ㎎, 약 5 내지 300 ㎎, 약 8 내지 200 ㎎ 이고, 다른 제형의 경우 약 10 내지 약 100 ㎎으로 포함된다.
병행 요법
본 발명은 추가로 본 발명의 hTL1A mAb 또는 그의 절편을 하나 이상의 추가적인 치료제와의 조합으로 투여함으로써 hTL1A와 직간접적으로 연관되는 질환 또는 질병을 치료하기 위한 치료 방법을 제공한다. 상기 추가적인 치료제는 면역억제제, 항-염증제, 진통제, 항-알레르기제 등을 포함하는 본 발명의 항체 또는 그의 절편과 유리하게 조합되는 하나 이상의 임의의 제제일 수 있다. 적합한 면역억제제는 글루코콜티코이드, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 인터페론 β(INF-β), 타크롤리무스, 시롤리무스, 아자티오프린, 메르캅토푸린, 오피오이드, 마이코페놀레이트, 인플릭시맙, 에테르나셉트, 아달리무맙 등과 같은 TNF-결합 단백질, 다크티노마이신, 안트라사이클린, 미토마이신 C, 블레오마이신, 미트라마이신 등과 같은 세포독성 항생제, 항-CD20 항체, 항-CD3 항체 등과 같은 항체 표적화 면역 세포를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 항-hTL1A 항체와 병행 치료하기에 적합한 항-염증제 및/또는 진통제는 콜티코스테로이드, 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, Cox-2 억제제 등과 같은 비-스테로이드성 항-염증성 약물(NSAID), TNF-α 길항제(예컨대, Centocor Inc.의 인플릭시맙(Infliximab) 또는 REMICADE®; Centocor Inc.의 골리무맙(golimumab); Amgen/Wyeth의 에타너셉트(etanercept) 또는 ENBREL®; Abbott Laboratories의 아달리무맙(adalimumab) 또는 HUMIRA® 등), IL-1 길항제(예를 들면, Regeneron Pharmaceuticals, Inc.의 ARCALYST®와 같은 IL-1-결합 융합 단백질, 미국 특허 제6,927,044호 참조; Amgen의 KINERET® 등), IL-6 길항제(예컨대, 미국 특허 제7,582,298호에 개시되어 있는 것과 같은 항-IL-6 수용체 항체 및 Roche의 ACTEMRA®), 아세트아미노펜, 몰핀모방체 등을 포함한다. 알레르기 매개체의 작용을 차단할 수 있거나 세포의 활성화 및 탈과립 공정을 방지하기 위한 적합한 항-알레르기제는 항히스타민제, 글루코콜티코이드, 에피네프린(아드레날린), 테오필린, 크로몰린 나트륨 및 몬텔루카스트(montelukast)(Merck의 SINGULAIR®) 또는 자피를루카스트(zafirlukast)(AstraZeneca의 ACCOLATE®)와 같은 항-루코트리엔뿐만 아니라 항-콜린효능제, 충혈완화제, 비만세포 안정화제 및 호산구 주화성(eosinophil chemotaxis)을 손상시킬 수 있는 다른 화합물들을 포함한다.
본 발명의 hTL1A mAb 또는 그의 절편 및 상기 추가적인 치료제(들)는 함께 또는 별도로 동시-투여될 수 있다. 별도의 제형이 사용되는 경우, 본 발명의 항체 또는 그의 절편 및 상기 추가적인 제제는 동시에, 또는 시차를 두어서, 즉 적절한 순서로 연속하여 투여될 수 있다.
하기 실시예는 본 기술분야의 보통의 기술자에게 본 발명의 방법과 조성물을 제조 및 사용하는 방법을 완전한 개시 및 설명으로 제공하기 위한 것으로서, 본 발명자들이 그 발명이라고 간주하는 것의 범위를 한정할 의도는 아니다. 사용되는 수치와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력을 하였지만, 일부 실험적인 오차나 편차가 있을 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨이며, 압력은 대기압 또는 그 근처이다.
실시예 1: 인간 TL1A에 대한 인간 항체의 생성
VELOCIMMUNE™ 마우스를 인간 TL1A로 면역화시켰고, 항체 면역 반응을 상기 마우스로부터 얻은 혈청을 이용한 항원-특이적 면역분석에 의해 모니터하였다. 상승된 항-hTL1A 항체 역가를 갖는 것으로 나타난 면역화된 마우스의 비장으로부터 항-hTL1A 항체를 발현하는 B 세포를 수확하였고, 마우스 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 형성하였다. 후술하는 바와 같은 분석을 이용해 hTL1A-특이적 항체를 발현하는 세포주를 확인하기 위하여 상기 하이브리도마를 스크리닝 및 선별하였다. 상기 분석으로 키메라 항-hTL1A 항체를 생산하는 몇 가지 세포주를 확인하였고, H2M1681N, H2M1704N, H2M1804N, H2M1805N, H2M1817N 및 H2M1818N으로 나타내었다. 이후 상기 항체의 해당 마우스 불변 영역을 힌지 영역에 S108P 돌연변이를 포함하는 서열번호 257의 아미노산 서열의 hIgG4로 교체함으로써 hIgG4 이소타입(isotype)으로 변환시켰고, 각각 H4H1681N, H4H1704N, H4H1804N, H4H1805N, H4H1817N 및 H4H1818N으로 나타내었다.
또한, 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제7,582,298호에 개시된 것과 같이 골수종 세포에 융합하지 않고 항원-면역화된 B 세포로부터 직접 인간 TL1A-특이적 항체를 단리하였다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 클로닝하여 온전한 인간 항-hTL1A 항체를 생성하였고, H4H1719P, H4H1725P, H4H1738P, H4H1742P, H4H1745P, H4H1750P 및 H4H1752P로 나타내었다. 안정한 재조합 항체를 발현하는 CHO 세포주를 확립하였다.
실시예 2. 다양한 유전자 이용성 분석
생성된 항체의 구조를 분석하기 위하여, 상기 항체의 가변 영역을 코딩하는 핵산을 클로닝 및 서열분석하였다. 상기 항체의 핵산 서열 및 예측되는 아미노산 서열로부터, 각각의 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 경쇄 가변 영역(LCVR)에 대한 유전자 이용성을 확인하였다. 표 1은 본 발명에 따라 선별된 항체에 대한 유전자 이용성을 보여준다.
항체 HCVR LCVR
V H D H J H V K J K
H2M1704 3-7 1-7 6 4-1 3
H2M1681 3-23 2-21 4 1-5 1
H2M1817 4-34 3-9 4 3-20 4
H2M1804 4-34 1-1 4 3-20 4
H2M1818 3-11 4-17 6 4-1 1
H2M1805 4-34 3-3 4 2-24 4
H4H1719 3-9 3-3 6 2-28 2
H4H1725 1-2 2-15 3 1-12 4
H4H1738 3-15 4-4 6 2-28 2
H4H1742 3-23 2-2 6 1-9 2
H4H1745 3-23 6-6 4 1-9 4
H4H1750 3-30 4-17 6 1-17 1
H4H1752 3-23 1-7 4 1-5 1
표 2는 선택된 항-hTL1A 항체 및 그 대응하는 항체 식별자(identifier)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 쌍을 보여준다. N 및 P로 나타낸 것은 동일한 CDR 서열을 갖지만 상기 CDR 서열 밖에 속하는 영역(즉, 뼈대 영역)에서 서열 변이를 갖는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체를 나타낸다. 따라서, 특정 항체의 N 및 P 변이체는 그 중쇄 및 경쇄 가변 영역 내에 동일한 CDR 서열을 갖지만 그 뼈대 영역 내에 변형을 포함한다.
mAb 명칭
(H2M- 또는 H4H-) 		HCVR/LCVR
서열번호 		mAb 명칭
(H2M- 또는 H4H-) 		HCVR/LCVR
서열번호
1704N 2/10 1738N 138/146
1681N 18/26 1738P 154/156
1804N 34/42 1745N 158/166
1805N 50/58 1745P 174/176
1817N 66/74 1750N 178/186
1818N 82/90 1750P 194/196
1719N 98/106 1752N 198/206
1719P 114/116 1752P 214/216
1725N 118/126 1742N 218/226
1725P 134/136 1742P 234/236
실시예 3. TL1A 결합 친화도 결정
다음의 TL1A 종 변이체에 결합하는 인간 단일클론 항-TL1A 항체에 대하여 표 3 내지 표 5에 나타낸 것과 같이 25℃ 및 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 결합 친화도 및 운동 상수(kinetic constant)를 결정하였다: 인간(h)(CHO-발현됨, 서열번호 244의 72-251 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐), 사이노몰거스 원숭이(Mf)(E. coli-발현됨, 서열번호 248의 72-251 잔기, N-말단 Met를 갖거나 갖지 않음), 사이노몰거스 원숭이(CHO-발현됨, 서열번호 248의 72-251 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐), 마우스(m)(E. coli-발현됨, 서열번호 250의 76-252 잔기, N-말단 Met를 갖거나 갖지 않음), 마우스(CHO-발현됨, 서열번호 250의 76-252 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐), 및 래트(CHO 세포-발현됨, 서열번호 258의 76-252 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐). 또한, hTL1A 변이체인 Fhm(E. coli-발현됨, Q167R 치환을 포함하는 서열번호 246의 72-251 잔기, N-말단 Met를 갖거나 갖지 않음)에 대한 결합 상수를 결정하였다. 측정은 T100 BIACORE™ 기구에서 수행하였다. 마우스 Fc 또는 인간 IgG4(S108P) Fc와 함께 발현된 항체(각각 접두사 "H2M" 및 "H4H"로 나타냄)를 항-Fc 센서 표면에 포획하였고, 1.25 nM 내지 100 nM 범위의 적어도 3 가지 상이한 농도의 가용성 TL1A 단백질을 상기 센서 표면에 주사하였다. 상기 데이터를 BIAevalution 4.1 커브 맞춤(curve fitting) 소프트웨어(BIAcore Life Sciences)를 이용한 1:1 결합 모델에 맞춤으로써 운동성 결합(ka) 및 해리(kd) 속도 상수를 결정하였다. 상기 데이터 맞춤에서 사용된 TL1A/Fhm의 몰 농도로 용액 내 TL1A에 대한 모노머성 상태를 추정하였다. 상기 운동 속도 상수로부터 결합 해리 평형 상수(KD) 및 해리성 반감기(t1 /2)를 다음과 같이 계산하였다: KD(M) = kd/ka 및 t1 /2(분) = [ln2/(60*kd)]. NB: 테스트된 조건 하에 결합이 없음; NT: 본 실험에서 테스트되지 않음; *: 1×10-6 (1/s) 이하의 맞춰진 kd 값은 상기 실험 조건 하에 검출 한계보다 느리다; 따라서, kd 값은 Kd 및 t1 /2의 근사값을 내기 위한 목적으로 1×10-6 (1/s)로 세팅하였다; **: 정상 상태 조건 하에 항체에 대한 평형 해리 상수를 결정하였다.
표 3 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 항체는 25℃(각각 13 및 12 가지 항체가 KD < 1 nM을 나타냄) 및 37℃(각각 13 및 12 가지 항체가 KD < 1 nM을 나타냄)에서 인간 및 원숭이 TL1A 단백질 모두 CHO-발현된 형태에 높은 친화도로 결합하였다. H4H1750P는 인간 TL1A 단백질과 비교하여 원숭이에 현저하게 약하게 결합하였다. H4H1704N은 25℃ 및 37℃ 모두에서 KD < 2 nM로 CHO-발현된 mTL1A에 결합하였다. H4H1818N은 25℃에서는 CHO-발현된 mTL1A에 결합하였지만(KD ∼7 nM), 37℃에서는 그렇지 않았다. H4H1681N, H4H1738P, H4H1750P, H4H1752P 및 H4H1805N의 5 가지 항체는 25℃ 또는 37℃에서 CHO-발현된 래트 TL1A에 결합하지 않았다; 나머지 8 가지 항체는 ∼0.6 pM 내지 ∼16 nM 범위의 KD로 양쪽 온도에서 래트 TL1A에 결합하였다.
표 5에 나타낸 바와 같이, 3 가지 항체(H2M1681N, H4H1752P 및 H2M1805N)는 테스트된 조건 하에 E. coli-발현된 Fhm 변이체[hTL1A(Q167R)]에 대한 결합을 나타내지 않았다. 3 가지 항체(H2M1704N, H4H1725P 및 H2M1818N)는 정상 상태 조건 하에 평가될 때 E. coli에서 발현된 마우스 TL1A에 대해 약한 결합(∼60 nM 내지 ∼170 nM 범위의 KD)을 나타내었지만, 테스트된 다른 모든 항체는 테스트된 조건 하에 마우스 TL1A 단백질에 결합하지 않았다.
mAb 25℃에서 CHO -발현된 TL1A
hTL1A
K D
( pM ) 		hTL1A
t 1 /2
(분) 		MfTL1A
K D
( pM ) 		MfTL1A
t 1 /2
(분) 		mTL1A
K D
( pM ) 		mTL1A
t 1 /2
(분) 		rTL1A
K D
( pM ) 		rTL1A
t 1 /2
(분)
H4H1681N 263 36 404 25 NB NB NB NB
H4H1704N 39.2 453 59.9 276 194 46 404 25
H4H1719P 481 44 417 45 NB NB 364 38
H4H1725P 63.6 185 346 64 NB NB 317 26
H4H1738P 608 64 361 93 NB NB NB NB
H4H1742P 60.4 755 115 577 NB NB 78 144
H4H1745P 164 172 115 231 NB NB 2.7(nM) 4
H4H1750P 15.8* 11550* 8.6(nM) 21 NB NB NB NB
H4H1752P 156 197 213 139 NB NB NB NB
H4H1804N 291 51 264 49 NB NB 321 43
H4H1805N 365 73 342 74 NB NB NB NB
H4H1817N 321 103 356 92 NB NB 2.5(nM) 25
H4H1818N 124 120 119 122 7.1(nM) 12 88 92
mAb 37℃에서 CHO -발현된 TL1A
hTL1A
K D
( pM ) 		hTL1A
t 1 /2
(분) 		MfTL1A
K D
( pM ) 		MfTL1A
t 1 /2
(분) 		mTL1A
K D
( pM ) 		mTL1A
t 1 /2
(분) 		rTL1A
K D
( pM ) 		rTL1A
t 1 /2
(분)
H4H1681N 254 31 226 32 NB NB NB NB
H4H1704N 1.00* 11550* 0.93* 11550* 1.3(nM) 27 46 133
H4H1719P 7.61 1912 2.01 5784 NB NB 78 86
H4H1725P 23.9 758 17.7 888 NB NB 411 15
H4H1738P 571 51 465 60 NB NB NB NB
H4H1742P 4.37* 11550* 4.45* 11550* NB NB 653 27
H4H1745P 177 129 173 124 NB NB 16.5(nM) 11
H4H1750P 13.8* 11550* 17.1(nM) 11 NB NB NB NB
H4H1752P 225 96 223 91 NB NB NB NB
H4H1804N 45.8 286 78 167 NB NB 127 88
H4H1805N 299 80 352 68 NB NB NB NB
H4H1817N 27.8 1098 25.6 1150 NB NB 1.6(nM) 26
H4H1818N 0.925* 11550* 0.804* 11550* NB NB 0.61* 11550*
mAb E. coli -발현된 Fhm / TL1A
25℃ 37℃ 25℃ 37℃ 25℃
Fhm
K D
( pM ) 		Fhm
t 1 /2
(분) 		Fhm
K D
( pM ) 		Fhm
t 1 /2
(분) 		MfTL1A
K D
( pM ) 		MfTL1A
t 1 /2
(분) 		MfTL1A
K D
( pM ) 		MfTL1A
t 1 /2
(분) 		mTL1A
K D
( pM )**
H2M1681N NB NB NT NT 546 54 1.5
(nM)		 14 NB
H2M1704N 282 52 NT NT 285 57 751 16 127
(nM)
H4H1719P 109 96 174 42 242 79 289 40 NB
H4H1725P 28.9 447 43.6 194 63.7 292 62.2 174 62
(nM)
H4H1738P 1020 19 3100 4 1360 18 4.2
(nM)		 4 NB
H4H1742P 437 129 696 45 593 97 945 35 NB
H4H1745P 115 226 207 71 141 221 281 74 NB
H4H1750P 204 623 244 335 52.7
(nM)		 4 456
(nM)		 1 NB
H4H1752P NB NB NB NB 274 122 1320 29 NB
H2M1804N 192 108 NT NT 176 172 218 118 NB
H2M1805N NB NB NT NT 345 67 439 36 NB
H2M1817N 451 57 NT NT 1250 37 1.0 (nM) 30 NB
H2M1818N 1080 17 NT NT 1840 10 4.1
(nM)		 3 171
(nM)
실시예 4. 항- hTL1A 항체에 의한 TL1A 의 억제
루시퍼라아제 리포터(luciferase reporter)[NFκB 반응 인자(5x)-루시퍼라아제-IRES-GFP]와 함께 인간 DR3(온전한 길이: 서열번호 252) 또는 마우스 DR3(온전한 길이; 서열번호 259)을 안정하게 발현하기 위하여 HEK293 세포주(CRK01573, ATCC)를 생성하였다. TL1A에 의한 NFκB 활성화는 종래 알려져 있다(Migone et al., 2002, Immunity 16:479-492). 막에 결합된 형태의 TL1A 및 TL1A 변이체를 테스트하기 위하여, 온전한 길이의 인간 TL1A(서열번호 244), Arg로 치환된 Gln-167을 갖는 온전한 길이의 인간 TL1A[Fhm; TL1A(Q167R); 서열번호 246], 사이노몰거스 원숭이 Macaca fascicularis 유래의 온전한 길이의 TL1A(MfTL1A; 서열번호 248), 온전한 길이의 마우스 TL1A(서열번호 250) 및 온전한 길이의 래트 TL1A(서열번호 258)를 안정하게 발현하는 HEK293 세포주를 생성하였다. 상기 안정한 세포주를 10% 소 태아 혈청(FBS; Irvine Scientific), 둘베코 변형 이글 배지(DMEM, Irvine Scientific), 비-필수 아미노산(NEAA; Irvine Scientific), 페니실린/스트렙토마이신(Invitrogen) 및 G418(Invitrogen) 내에서 단리 및 유지하였다.
바이오분석(bioassay)을 위하여, 인간 또는 마우스 DR3 리포터 세포를 저혈청 배지, 즉 0.1% FBS 및 OPTIMEM®(Invitrogen) 내에서 1×104 세포/웰로 96-웰 분석 플레이트에 접종하였고, 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음날, 가용성 TL1A 또는 Fhm(sTL1A 또는 sFhm)을 1:3으로 순차 희석하였고, 0.002 nM 내지 100 nM 범위의 농도로 (TL1A를 함유하지 않는 버퍼 대조군도 포함) 세포에 첨가하였다. 억제를 위하여, 항체를 1:3으로 순차 희석하였고, 일정한 농도의 TL1A 또는 Fhm의 존재 하에 0.002 nM 내지 100 nM 범위의 농도로 (TL1A를 함유하지 않는 버퍼 대조군도 포함) 세포에 첨가하였다: 800 pM hTL1A(CHO 세포-발현됨; 서열번호 244의 72-251 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐), 100 pM hTL1A(E. coli-발현됨; 서열번호 244의 72-251 잔기, N-말단 Met를 갖거나 갖지 않음), 500 pM Fhm(CHO 세포-발현됨; 서열번호 246의 72-251 잔기), 400 pM MfTL1A(CHO 세포-발현됨; 서열번호 248의 72-251 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐), 400 pM MfTL1A(E. coli-발현됨; 서열번호 248의 72-251 잔기, N-말단 Met을 갖거나 갖지 않음), 50 pM 마우스 TL1A(CHO 세포-발현됨; 서열번호 250의 76-252 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐), 20 pM 마우스 TL1A(E. coli-발현됨; 서열번호 250의 76-252 잔기, N-말단 Met를 갖거나 갖지 않음) 및 50 pM 래트 TL1A(CHO 세포-발현됨; 서열번호 258의 76-252 잔기, N-말단 His6-태그를 가짐). 37℃, 5% CO2에서 5.5 시간 인큐베이션한 후 루시퍼라아제 활성을 검출하였다. 그 결과는 표 6에 나타나 있다. 대조군 mAb1: 양성 대조군(US2009/0280116의 서열번호 21 및 서열번호 27에 해당하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 항-hTL1A 항체); 대조군 mAb2: 음성 대조군(무관한 항체); NB: 테스트된 조건 하에 결합이 없음; NT: 본 분석에서 테스트되지 않음; *: 100 nM의 가장 높은 항체 농도에서의 억제가 기준선(baseline)이 아님.
sTL1A 또는 sFhm hTL1A
( CHO ) 		hTL1A
( E. Coli ) 		Fhm
( CHO ) 		MfTL1A
( CHO ) 		MfTL1A
( E. Coli ) 		mTL1A
( CHO ) 		mTL1A
( E. Coli ) 		rTL1A
( CHO )
EC50 ( nM ) 0.63 0.12 0.32 0.86 2.02 0.08 0.01 0.06
일정한 TL1A 또는 Fhm ( pM ) 800 100 500 400 400 50 20 50
IC50
[nM]		 H4H1681N 0.17 0.02 NB 0.03 0.02 NB NB NB
H4H1704N 0.13 0.06 0.17 0.01 0.03 NB NB 0.40
H4H1804N 0.07 0.03 0.10 0.03 0.02 NB NB 3.64
H4H1805N 0.10 0.04 185.50* 0.03 0.02 NB NB NB
H4H1817N 0.11 0.04 0.12 0.04 0.02 NB NB 23.87
H4H1818N 0.37 0.29 0.62 0.13 0.06 NB NB 1.10
H4H1719P 0.06 0.02 0.08 0.01 0.02 NT NB NT
H4H1725P 0.05 0.02 0.07 0.01 0.02 NB NB 63.43
H4H1738P 0.39 0.16 0.33 0.39 0.07 NT NB NT
H4H1742P 0.31 0.19 0.53 0.26 0.07 NB NB 6.12
H4H1745P 0.09 0.06 0.15 0.05 0.03 NB NB NB
H4H1750P 0.90 2.17 3.10 154.70 32.47* NT NB NT
H4H1752P 0.36 0.21 NB 0.12 0.05 NT NB NT
대조군
mAb1 		NB 0.74 NB NB 3.25 NT NB NT
대조군
mAb2 		NB NB NB NB NB NB NT NB
표 6에 나타낸 바와 같이, NFκB 활성화에 대해 루시퍼라아제 리포터를 이용하여 결정될 때, 13 가지 항-TL1A 항체는 HEK293 세포에 발현되는 인간 DR3 수용체의 가용성 인간 TL1A(CHO 및 E. coli-발현됨) 자극을 억제하는 것으로 나타났다. 양성 대조군 항체(대조군 mAb1)는 E. coli-발현된 hTL1A를 억제하였지만, CHO-발현된 hTL1A는 억제하지 않았다. 또한, 10 가지 항체는 Fhm(Q167R을 갖는 hTL1A)에 의한 hDR3-발현 세포의 자극을 억제하였다. H4H1681N, H4H1805N 및 H4H1752P는 100 nM의 가장 높은 항체 농도에서 Fhm을 완전히 억제하지 않았다. 또한, 13 가지 항체 모두 MfTL1A를 차단하였다(표 6). 마우스 TL1A(CHO 및 E. coli에서 생성된 것 모두)는 hDR3 리포터 세포에서 NFκB 활성화를 자극하였다. 그러나, 상기 분석에서 13 가지 항-인간 TL1A 항체 중 어느 것도 E. coli-발현된 마우스 TL1A를 억제하지 않았다(표 6). 9 가지 선별된 항체를 추가로 테스트하였으며, 상기 분석에서 CHO-발현된 마우스 TL1A의 차단을 보이지 않았다(표 6).
세포에 발현된 TL1A가 hDR3 리포터 시스템에서 신호전달을 자극하는 능력을 테스트하기 위하여, 가용성 TL1A에 대해 전술한 바와 같은 바이오분석을 다음과 같이 변화시켜 수행하였다: 효소-부재 해리 용액(Enzyme-Free Dissociation Solution, Chemicon)를 이용하여 부착성 HEK293/TL1A 세포를 해리시켰고, 2×105 세포로부터 출발하여 195 세포까지 1:2로 TL1A 세포를 순차 희석한 후 부착성 hDR3 리포터 세포에 첨가하였다(세포가 없는 대조군도 포함). 항체에 의한 억제를 위하여, 1×104 세포를 100 nM 내지 0.002 nM까지 순차 희석된 항체와 함께 첨가하였다(항체가 없는 대조군도 포함). 그 결과는 표 7에 나타나 있다. 대조군 mAb1 및 mAb2: 상기 분석과 동일함. NB: 테스트된 조건 하에 결합이 없음; NT: 본 분석에서 테스트되지 않음; *: 100 nM의 가장 높은 항체 농도에서의 억제가 기준선이 아님.
세포에 결합된 TL1A 또는 Fhm HEK293 /
hTL1A 		HEK293 /
Fhm 		HEK293 /
MfTL1A 		HEK293 /
mTL1A 		HEK293 /
rTL1A
EC50 (세포) 23474 47921 8465 12366 9773
일정한 TL1A / Fhm 10,000 (세포의 수)
IC50
[ nM ] 		H4H1681N 0.66 NB 3.07 NT NT
H4H1704N 1.11 1.58 3.76 NB NT
H4H1804N 0.56 1.23 2.23 NB 3.99
H4H1805N 0.82 54.10* 1.93 NB NB
H4H1817N 1.11 0.62 5.04 NB 94.96*
H4H1818N 1.54 1.42 4.29 NT NT
H4H1719P 0.82 0.84 3.00 NT NT
H4H1725P 0.66 0.94 2.82 NB 190.30*
H4H1738P 7.47 7.75 20.25 NT NT
H4H1742P 6.55 8.39 18.45 NB NT
H4H1745P 0.76 2.12 4.28 NT NT
H4H1750P 12.82 29.52* 107.40* NT NT
H4H1752P 1.99 138.10* 11.67 NT NT
대조군 mAb1 NB NB NB NB NT
대조군 mAb2 NB NB NB NB NB
표 7에 나타낸 바와 같이, 13 가지 항체 모두 세포에 발현된 hTL1A에 의해 hDR3을 발현하는 세포의 자극을 차단하였다. 세포에 결합된 Fhm의 경우, 테스트된 가장 높은 항체 농도인 100 nM에서 완전하게 억제하지 않은 H4H1681N, H4H1805N, H4H1750P 및 H4H1752P를 제외한 모든 항체는 현저하게 억제하였다. H4H1704N, H4H1804N, H4H1805N, H4H1817N, H4H1725P 및 H4H1742P의 6 가지 항체를 mDR3 세포의 세포 표면 mTL1A 자극을 차단하는지에 대해 테스트하였다; 어느 것도 억제를 보이지 않았다. 또한, 마우스 DR3을 발현하는 리포터 세포는 rTL1A를 발현하는 293 세포에 의해 자극될 수 있었으며, 관찰된 EC50은 9773 세포였다(표 7). 상기 rTL1A/mDR3 분석에서 4 가지 항체를 테스트하였다: H4H1804N, H4H1817N 및 H4H1725P의 3 가지 항체는 세포-표면 rTL1A에 의한 mDR3 세포의 자극을 차단하였지만, H4H1805N은 이를 차단하지 않았다(표 7). 대조군 mAb1은 hDR3 세포의 E. coli-발현된 가용성 hTL1A 및 MfTL1A 자극을 차단하였지만, 모든 테스트된 조건 하에 CHO-발현된 형태의 hTL1A 및 MfTL1A를 차단하는데 실패하였다(표 6). 또한, 대조군 mAb1은 모든 테스트된 조건 하에 임의의 세포-표면 발현된 TL1A 및 Fhm에 의한 hDR3-발현 세포의 자극을 억제하지 않았다(표 7).
실시예 5. 항- TL1A 항체에 의한 hDR3 및 DcR3 에 대한 TL1A 의 차단
항체가 인간 TL1A가 그 동족 수용체인 DR3 및 DcR3 수용체에 결합하는 것을 차단하는 능력을 경쟁 샌드위치 ELISA를 이용하여 측정하였다. 또한, 인간 DR3 또는 DcR3 수용체에 대한 인간 TL1A 변이체 Fhm(인간 TL1A Q167R) 및 사이노몰거스 원숭이(Macaca fascicularis) TL1A(MfTL1A) 단백질의 결합 차단을 동일한 방식으로 측정하였다. 일정한 양의 바이오틴화 인간 TL1A 또는 Fhm(모두 CHO 세포에서 6-His 태그와 함께 발현됨) 또는 바이오틴화 MfTL1A(CHO 세포에서 발현됨)를 다양한 양의 항체를 이용하여 별도로 적정하였다. 상기 항체-단백질 복합체를 용액 내에 인큐베이션한 후(1 시간, 25℃), 인간 IgG1 Fc 융합 단백질로서 발현된 인간 DR3(hDR3) 또는 인간 DcR3(hDcR3)으로 코팅된 미세적정 플레이트로 전달하였다. 25℃에서 1 시간 후 상기 웰을 세척하였고, 결합된 인간 또는 원숭이 TL1A를 고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)와 접합된 스트렙트아비딘으로 검출하였다. 웰을 TMB 용액으로 현상하여 발색 반응을 생성하였고, Perkin-Elmer Victor X5 플레이트 판독기로 450 ㎚에서 흡광도를 판독하기 전에 수성 황산으로 퀀치(quench)하였다. Prism™ 데이터 분석 패키지를 이용하여 S자 모양의(sigmoidal) 용량-반응 커브를 상기 데이터에 맞추었다. hDR3 또는 hDcR3에 대한 TL1A 결합을 50% 차단하기 위해 요구되는 항체의 농도로서 정의되는 계산된 IC50 값을 차단 효능의 지시자로 사용하였다. 온전한 인간 항-hTL1A mAb 및 경쟁 항체, 즉 대조군 mAb1(각각 US2009/0280116의 서열번호 21 및 서열번호 27에 해당하는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 항-hTL1A 항체) 및 대조군 mAb3(각각 US2009/0280116의 서열번호 57 및 서열번호 48에 해당하는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 항-hTL1A 항체) 모두 본 연구에 포함시켰다. 그 결과는 표 8에 나타나 있다. NB: 테스트된 조건 하에 결합이 없음; NT: 테스트되지 않음. 바이오틴화 가용성 리간드의 농도: (1) 150 pM; (2) 500 pM; (3) 10 pM; 및 (4) 50 pM.
표 8에 나타낸 바와 같이, 대부분의 온전한 인간 mAb는 TL1A/hDR3 및 TL1A/hDcR3 결합 상호작용을 효과적으로 차단하였고, 몇 가지는 50 pM 이하의 IC50 값을 보였다. H4H1752P 및 H4H1805N의 2 가지 항체는 hDR2 및 hDcR3에 모두에 대한 인간 및 원숭이 TL1A의 결합을 강하게 차단하였지만, hDR3 또는 hDcR3에 대한 Fhm의 결합을 차단하는 것은 실패하였는데, 이는 상기 2 가지 항체에 대한 결합 에피토프가 Fhm 돌연변이 부위(Q167R을 갖는 hTL1A) 근처의 영역을 포함할 수 있음을 제시한다. hTL1A의 결정 구조는 Q167 잔기가 표면-노출된 루프 내에 있음을 보여준다(Zhan et al., 2009, Biochemistry 48:7636-7645).
mAb ID hDR3
hTL1A ( CHO ) 1
IC 50 ( pM ) 		hDR3
Fhm ( CHO ) 1
IC 50 ( pM ) 		hDR3
MfTL1A ( CHO ) 2
IC 50 ( pM ) 		DcR3
hTL1A ( CHO ) 3
IC 50 ( pM ) 		DcR3
Fhm ( CHO ) 3
IC 50 ( pM ) 		DcR3
MfTL1A ( CHO ) 4
IC 50 ( pM )
H4H1681N 60 >10000 141 17 90 93
H2M1681N 37 >10000 61 13 234 149
H4H1704N 30 44 42 77 170 110
H2M1704N NT NT NT NT NT NT
H4H1719P 22 23 46 44 45 61
H4H1725P 15 18 16 68 85 145
H4H1738P 69 152 117 122 150 68
H4H1742P 64 214 240 181 231 127
H4H1745P 18 44 50 58 85 118
H4H1750P 341 589 5209 656 626 NB
H4H1752P 104 NB 110 31 NB 56
H4H1804N 40 69 71 175 >10000 34
H2M1804N 46 102 81 120 >10000 9
H4H1805N 14 NB 26 33 436 313
H2M1805N 6 NB 13 12 2241 1138
H4H1817N 114 235 101 270 NT 322
H2M1817N 154 249 137 890 666 776
H4H1818N 119 202 123 232 NT 1102
H2M1818N 154 317 239 396 NB 55
대조군
mAb1		 >10000 NB 5300 >1000 NT 21000
대조군
mAb3		 >10000 NB 17000 8600 NT NT
실시예 6. TL1A 항체와 가용성 hTL1A 의 세포 표면 결합 경쟁
먼저, 세포-표면 hTL1A를 과발현하기 위하여 안정적으로 형질전환된 인간 배아성 신장 293 세포를 유세포 분석 실험에서 4 가지 농도(1, 0.1, 0.01 및 0.003 ㎍/㎖)에서 8 가지 항-hTL1A 항체를 이용하여 염색하였다. 결합된 인간 항체를 인간 Fcγ[또는 항-hFcγ-APC F(ab')2, Jackson ImmunoResearch, # 109-136-170]에 특이적인 알로피코시아닌-표지된 염소 F(ab')2를 이용하여 검출하였다. 이후, 현저한 염색 레벨을 제공하는 가장 낮은 항체 농도를 경쟁 결합 실험에 사용하였다. 음성 이소타입 대조군 항체(인간 IgG4)를 1 ㎍/㎖로 사용하여 배경 신호를 정의하였다. 경쟁 실험을 위하여, 먼저 8 가지 항체 샘플을 상기에서 확인된 최소 농도에서 CHO 세포로부터 발현된 가용성 hTL1A로 0.03 ㎍/㎖ 내지 10 ㎍/㎖ 범위의 농도로 처리하였다. 얼음에서 30 분 동안 프리-인큐베이션한 후, 상기 항체/hTL1A 혼합물을 96-웰 원뿔형(conical) 플레이트에서 원심분리하여 단리된 293/HEK-hTL1A 세포에 첨가하였다. 얼음에서 추가로 10분 동안 인큐베이션한 후, 상기 세포를 세척하였다. 2 차 시약인 항-hFcγ-APC F(ab')2를 200 배 희석해 모든 웰에 첨가하여 결합된 항체를 검출하였다. 샘플을 빛을 차단하고 얼음 위에서 15 분 동안 인큐베이션 한 후 세척하였다. 세포를 BD™ LSR Ⅱ 유세포 분석기(BD Biosciences)로 처리하여 세포 표면에 결합된 항-hTL1A 항체를 검출하였고, FlowJo 소프트웨어(version 8.8.6; Tree Star Inc.)를 이용하여 데이터를 분석하였다. 그 결과는 표 9에 나타나 있다. 최대 신호: 가용성 hTL1A 부재시의 항-hTL1A 항체 결합; 최소 신호: 1 ㎍/㎖의 이소타입 대조군 항체가 항-hTL1A 항체 대신에 첨가될 때 기록된 신호. NT: 테스트되지 않음.
세포-표면 hTL1A 에 대한 항- hTL1A 항체( H4H ) 결합에서의 평균 형광 강도
가용성
hTL1A
(㎍/㎖)		 1704N 1725P 1742P 1804N 1805N 1817N 1681N 1745P
0.1㎍/㎖ 0.1㎍/㎖ 1 ㎍/㎖ 0.1㎍/㎖ 0.1㎍/㎖ 1 ㎍/㎖ 1 ㎍/㎖ 1 ㎍/㎖
10 NT NT NT NT NT NT 16.9 15
3 22.6 34.9 19.9 28.9 23.6 25.2 28.5 19.5
1 26 29.2 32.7 33.7 25.1 29.1 80.9 26.9
0.3 31.5 40.7 44.7 33.5 36.8 23.6 236 115
0.1 132 84.5 79.4 51.1 60.2 97.2 327 93.1
0.03 163 207 126 126 156 85.3 318 80
최대
신호		 116 211 126 127 158 110 320 87.2
최소
신호		 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 17.9 17.9
표 9에 나타낸 바와 같이, 8 가지 테스트된 항체로부터의 신호는 과량의 가용성 hTL1A를 첨가함으로써 경쟁하여 기준선 레벨까지 떨어질 수 있으며, 이는 상기 항체가 세포-표면 hTL1A에 특이적으로 결합함을 나타낸다.
실시예 7: 항- TL1A 항체에 의한 hTL1A -의존성 CD4 + T-세포 자극의 차단
항-hTL1A 항체가 인간 CD4+ T-세포의 hTL1A-의존성 자극을 차단하는 능력을 결정하기 위하여, IFN-감마(IFN-γ)의 hTL1A/항-CD3/항-CD28-자극된 방출이 항체의 존재 또는 부재시 측정되는 시험관내 분석을 개발하였다. 뉴욕 혈액 센터로부터 입수한 인간 혈액 샘플로부터 준비된 신선한 버피 코트(buffy coat)로부터 인간 CD4+ T-세포를 단리하였다. 각각의 분석에 있어서 단일 공여자 유래의 세포를 다른 공여자 세포로부터 격리하여 유지하였다. 상기 CD4+ T-세포를 웰 당 3.5×105 세포로 96-웰 플레이트의 웰에 첨가하였다. 이후, 각각의 웰에 10% FBS, L-글루타민 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI에서 1 ㎍/㎖의 최종 농도(16 nM, hTL1A가 용액 내에서 트리머를 형성하는 것으로 추정함)로 가용성 hTL1A(N-말단 6-히스티딘 태그를 갖는 NP_005109.2의 72-251 잔기, CHO 세포에서 발현됨)를 첨가하였다. 또한, 각각의 웰에 항-hTL1A 항체 또는 이소타입 대조군 항체를 1.0 ㎍/㎖ 또는 3.0 ㎍/㎖(각각 6.7 nM 또는 20 nM)의 최종 농도로 첨가하였다. 상기 샘플을 어두운 곳에서 4℃에서 15분 동안 인큐베이션한 후, 1.0 ㎍/㎖의 최종 농도로 각각의 웰에 항-hCD3(BD Pharmingen, cat # 555336) 및 항-hCD28(BD Pharmingen, cat # 555725)을 첨가하였다. 샘플을 37℃에서 24 시간 동안 배양하였고, 상등액을 수확하였으며, ELISA에 의해 IFN-γ 레벨을 결정하였다. 각각의 인간 CD4+ T-세포 공여자 샘플에 대한 각각의 항체의 차단 효과(각 조건에 대해 2 개의 개별적 웰의 평균)를 최대 신호를 최대 반응 윈도우로 나눈 것의 감소로, 즉 % 차단 = [(Max - Inhib)/(Max - Min)] × 100으로 나타내었다: 상기에서, "Max", "Inhib" 및 "Min"은 다음과 같이 처리된 CD4+ 인간 T-세포에 대해 측정된 IFN-γ의 농도이다: "Max" - [hTL1A + 항-hCD3 + 항-hCD28 + 이소타입 대조군 mAb]로 처리됨; "Min" - [항-hCD3 + 항-hCD28 + 이소타입 대조군 mAB]로 처리됨; 및 "Inhib" - [hTL1A + 항-hCD3 + 항-hCD28 + 항-hTL1A 테스트 mAB]로 처리됨. IFN-γ 차단이 상기 "Min" 기준선 레벨을 뛰어넘는 항체를 100% 차단으로 나타낸다. 비(Max/Min)는 상기 정의한 것과 같은 최대 및 최소 조건 하에 처리된 인간 CD4+ T-세포로부터 생산된 IFN-γ 농도의 비이다.
표 10에 나타낸 바와 같이, 항체 H4H1725P, H4H1805N, H4H1817N 및 H4H1804N은 1 ㎍/㎖ 및 3 ㎍/㎖ 농도 모두에서 hTL1A-자극된 IFN-γ 방출을 현저하게 차단하였고, 더 높은 항체 농도에서는 대부분의 공여자의 경우에 거의 완전한 차단(> 80%)이 관찰되었다. 10 명의 상이한 인간 공여자 유래의 CD4+ T-세포에 대한 13 가지 상이한 항-hTL1A 항체에 의한 IFN-γ 방출의 차단 결과는 표 11에 추가로 요약되어 있다. SD: 표준 편차.
mAb ID 10 명의 공여자 유래의 T-세포에서의 IFN -γ 생산의 차단 %
공여자 번호 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9 D10
비( Max / Min ) 5 4 10 10 4 3 4 3 8 2
H4H1725P mAb
1 ㎍/㎖
(6.7 nM ) 		90 100 70 85 45 80 60 85 50 95
H4H1805N 100 100 90 100 100 100 100 100 90 100
H4H1817N 100 100 90 90 100 45 55 100 55 80
H4H1804N 95 100 80 90 100 50 10 100 50 0
H4H1725P mAb
3 ㎍/㎖
(20 nM ) 		95 100 95 100 90 80 90 100 90 100
H4H1805N 100 100 95 100 80 100 100 100 70 100
H4H1817N 100 100 100 100 100 100 100 100 95 85
H4H1804N 100 100 95 100 100 100 100 100 100 80
mAb ID 평균 % 차단
( SD )
0.1 ㎍/㎖ mAb 		평균 % 차단
( SD )
1 ㎍/㎖ mAb 		평균 % 차단
( SD )
3 ㎍/㎖ mAb
H4H1681N 20% (24) 45% (30) 95% (7)
H4H1704N 22% (29) 53% (27) 98% (5)
H4H1719P 10% (22) 37% (23) 78% (30)
H4H1725P 13% (14) 80% (20) 94% (7)
H4H1738P 25% (30) 41% (35) 81% (18)
H4H1742P 10% (22) 58% (33) 83% (16)
H4H1745P 22% (27) 36% (36) 91% (7)
H4H1750P 11% (14) 42% (35) 89% (15)
H4H1752P 18% (25) 52% (35) 71% (30)
H4H1804N 26% (30) 68% (38) 98% (6)
H4H1805N 21% (28) 98% (4) 94% (10)
H4H1817N 25% (33) 81% (22) 98% (5)
H4H1818N 25% (33) 42% (33) 71% (35)
이소타입 대조군 16% (21) 26% (33) 28% (27)
또한, 12 명의 인간 공여자 유래의 CD4+ T-세포에 첨가된 각각의 6 가지 상이한 항체에 대하여 6 가지 상이한 항체 농도(0.03 ㎍/㎖ 내지 10 ㎍/㎖의 범위)에서 IFN-γ 레벨을 측정하였다. 상기 데이터에 대한 커브 맞춤을 하여 각각의 공여자 세포 샘플에 대해 각각의 항체에 대한 절반-최대 억제(half-maximal inhibition)가 달성되는 항체 농도를 추정하였다. 절반-최대 억제를 달성하기 위한 평균(±SD) 농도는 표 12에 제공되어 있다.
공여자
번호 		mAb IC 50 ( nM )
H4H1725P H4H1742P H4H1805N H4H1817N H4H1804N H4H1704N
D1 3.4 24 2.4 6.6 6.8 _
D2 3.2 4.6 5.5 3.1 8.6 _
D3 5.4 10 3.4 4.7 8.6 _
D4 4.7 13 2.5 2.4 7.7 _
D5 7.0 12 2.9 8.5 6.7 17
D6 5.4 10 3.4 4.7 8.6 11
D7 13 31 8.0 7.0 12 12
D8 12 27 5.1 7.0 11 19
D9 6.4 56 5.9 9.5 8.1 7.5
D10 4.1 12 2.8 7.3 12 10
D11 6.1 27 3.0 7.3 7.6 11
D12 6.4 14 3.1 9.4 7.5 8.0
평균
(± SD ) 		6.4
(3.1)		 20
(14)		 4.0
(1.7)		 6.5
(2.3)		 8.8
(1.9)		 12
(4.1)
H4H1725P, H4H1804N, H4H1805N 및 H4H1817N의 4 가지 항체는 10 nM 이하(대략 4-9 nM 범위)의 평균 절반-최대 억제 농도를 나타내었다.
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. <120> HUMAN ANTIBODIES TO HUMAN TNF-LIKE LIGAND 1A (TL1A) <130> 2013-fpa-5949 <150> 61/411,276 <151> 2010-11-08 <150> 61/478,309 <151> 2011-04-22 <160> 259 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggatt cacctttagt agttattgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggaatg ggtggccaac ataaaggaag atggaagtga gaaaaactat 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccctc tccagcgaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgttt attactgtgc gagagaggac 300 tatgactcct actacaagta cggtatggac gtttggggcc aagggaccgc ggtcatcgtc 360 tcctca 366 <210> 2 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Glu Asp Gly Ser Glu Lys Asn Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Ser Tyr Tyr Lys Tyr Gly Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Ala Val Ile Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 ggattcacct ttagtagtta ttgg 24 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp 1 5 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 ataaaggaag atggaagtga gaaa 24 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Ile Lys Glu Asp Gly Ser Glu Lys 1 5 <210> 7 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 gcgagagagg actatgactc ctactacaag tacggtatgg acgtt 45 <210> 8 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cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgactc aaaaaacacg 240 ctatatctgc aaatgaatag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaga 300 gataggaacc gacagagaaa ttacttctat gacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360 acggtcaccg tctcc 375 <210> 154 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 154 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ile Asn Asp 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Thr Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Asp Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Asn Arg Gln Arg Asn Tyr Phe Tyr Asp Gly 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 <210> 155 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 155 gacatcgtga tgacccagtc 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caacttatta ctgtcaacag tattatagat attggacgtt cggccaaggg 300 accaaggtgg agatcaaacg a 321 <210> 206 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 206 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Tyr Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 207 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 207 cagagtatta gtaattgg 18 <210> 208 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 208 Gln Ser Ile Ser Asn Trp 1 5 <210> 209 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 209 aaggcgtct 9 <210> 210 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Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ala Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 237 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa = Gly <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = Phe <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> Xaa = Thr <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> Xaa = Phe <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> Xaa = Ser <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> Xaa = Thr, Ser, or Asn <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> Xaa = Tyr <220> <221> VARIANT <222> (8) <223> Xaa = Gly, Trp, Val, or Ala <400> 237 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 238 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa = Ile or Val <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = Ser or Lys <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> Xaa = Gly or Glu <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> Xaa = Thr, Asp, Ser, or Arg <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> Xaa = Gly <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> Xaa = Arg, Ser, or Gly <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> Xaa = Thr, Glu, or Ser <220> <221> VARIANT <222> (8) <223> Xaa = Thr or Lys <400> 238 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 239 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa = Thr or Ala <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = Lys, Arg or absent <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> Xaa = Glu, Gly or absent <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> Xaa = Asp, Pro or absent <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> Xaa = Leu or absent <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> Xaa = Arg, Tyr, Glu or absent <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> Xaa = Gly, Asp, Ala or absent <220> <221> VARIANT <222> (8) <223> Xaa = Asp, Ser or Tyr <220> <221> VARIANT <222> (9) <223> Xaa = Tyr or Trp <220> <221> VARIANT <222> (10) <223> Xaa = Tyr or Asp <220> <221> VARIANT <222> (11) <223> Xaa =Tyr, Lys or Ile <220> <221> VARIANT <222> (12) <223> Xaa = Gly, Tyr, Asn, or Ser <220> <221> VARIANT <222> (13) <223> Xaa =Val, Gly or Ser <220> <221> VARIANT <222> (14) <223> Xaa = Phe or Met <220> <221> VARIANT <222> (15) <223> Xaa = Asp <220> <221> VARIANT <222> (16) <223> Xaa = Tyr or Val <400> 239 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 240 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa = Gln <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = Thr, Ser, Ala or Gly <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> Xaa = Ile <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> Xaa = Ser or Leu <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> Xaa = Tyr or absent <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> Xaa = Ser or absent <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> Xaa = Ser or absent <220> <221> VARIANT <222> (8) <223> Xaa = Asn or absent <220> <221> VARIANT <222> (9) <223> Xaa = Asn or absent <220> <221> VARIANT <222> (10) <223> Xaa = Lys or absent <220> <221> VARIANT <222> (11) <223> Xaa = Ser, Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> (12) <223> Xaa = Trp or Tyr <400> 240 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 241 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa = Ala, Trp or Ser <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = Ala or Thr <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> Xaa = Ser <400> 241 Xaa Xaa Xaa 1 <210> 242 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa =Gln <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = Gln <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> Xaa = Tyr, Leu or Phe <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> Xaa = His, Tyr or Asn <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> Xaa = Arg or Ser <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> Xaa = Ser, Thr or Tyr <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> Xaa =Trp or Pro <220> <221> VARIANT <222> (8) <223> Xaa = Phe, Leu or absent <220> <221> VARIANT <222> (9) <223> Xaa = Thr <400> 242 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 243 <211> 756 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 243 atggccgagg atctgggact gagctttggg gaaacagcca gtgtggaaat gctgccagag 60 cacggcagct gcaggcccaa ggccaggagc agcagcgcac gctgggctct cacctgctgc 120 ctggtgttgc tccccttcct tgcaggactc accacatacc tgcttgtcag ccagctccgg 180 gcccagggag aggcctgtgt gcagttccag gctctaaaag gacaggagtt tgcaccttca 240 catcagcaag tttatgcacc tcttagagca gacggagata agccaagggc acacctgaca 300 gttgtgagac aaactcccac acagcacttt aaaaatcagt tcccagctct gcactgggaa 360 catgaactag gcctggcctt caccaagaac cgaatgaact ataccaacaa attcctgctg 420 atcccagagt cgggagacta cttcatttac tcccaggtca cattccgtgg gatgacctct 480 gagtgcagtg aaatcagaca agcaggccga ccaaacaagc cagactccat cactgtggtc 540 atcaccaagg taacagacag ctaccctgag ccaacccagc tcctcatggg gaccaagtct 600 gtatgcgaag taggtagcaa ctggttccag cccatctacc tcggagccat gttctccttg 660 caagaagggg acaagctaat ggtgaacgtc agtgacatct ctttggtgga ttacacaaaa 720 gaagataaaa ccttctttgg agccttctta ctatag 756 <210> 244 <211> 251 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 244 Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu 1 5 10 15 Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala 35 40 45 Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu 50 55 60 Ala Cys Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser 65 70 75 80 His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg 85 90 95 Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn 100 105 110 Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr 115 120 125 Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser 130 135 140 Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser 145 150 155 160 Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser 165 170 175 Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr 180 185 190 Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp 195 200 205 Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp 210 215 220 Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 245 250 <210> 245 <211> 756 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 245 atggccgagg atctgggact gagctttggg gaaacagcca gtgtggaaat gctgccagag 60 cacggcagct gcaggcccaa ggccaggagc agcagcgcac gctgggctct cacctgctgc 120 ctggtgttgc tccccttcct tgcaggactc accacatacc tgcttgtcag ccagctccgg 180 gcccagggag aggcctgtgt gcagttccag gctctaaaag gacaggagtt tgcaccttca 240 catcagcaag tttatgcacc tcttagagca gacggagata agccaagggc acacctgaca 300 gttgtgagac aaactcccac acagcacttt aaaaatcagt tcccagctct gcactgggaa 360 catgaactag gcctggcctt caccaagaac cgaatgaact ataccaacaa attcctgctg 420 atcccagagt cgggagacta cttcatttac tcccaggtca cattccgtgg gatgacctct 480 gagtgcagtg aaatcagacg agcaggccga ccaaacaagc cagactccat cactgtggtc 540 atcaccaagg taacagacag ctaccctgag ccaacccagc tcctcatggg gaccaagtct 600 gtatgcgaag taggtagcaa ctggttccag cccatctacc tcggagccat gttctccttg 660 caagaagggg acaagctaat ggtgaacgtc agtgacatct ctttggtgga ttacacaaaa 720 gaagataaaa ccttctttgg agccttctta ctatag 756 <210> 246 <211> 251 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 246 Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu 1 5 10 15 Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala 35 40 45 Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu 50 55 60 Ala Cys Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser 65 70 75 80 His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg 85 90 95 Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn 100 105 110 Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr 115 120 125 Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser 130 135 140 Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser 145 150 155 160 Glu Cys Ser Glu Ile Arg Arg Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser 165 170 175 Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr 180 185 190 Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp 195 200 205 Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp 210 215 220 Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 245 250 <210> 247 <211> 756 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <400> 247 atggccgagg atctgggact gagctttggg gagacagcca gtgtggaaat gctgccagag 60 cacggcagct gcaggcccaa ggccaggagc agcagcgcat gctgggctct cacctgctgc 120 ctggtgttgc tccccttcct tgcagggctc accacctacc tgcttgtcag ccagctccgg 180 gcccaaggag aggcctgtgt gcagctccag gatctaaaag gacaggagtt tgcaccttca 240 catcagcaag tttatgcacc tcttagagca gatggagata agccaagggc acacctgaca 300 gttgtgagac aaactcccac acagcactta aaaaatcagt tcccagctct gcactgggaa 360 catgaactag gcctggcctt caccaagaac cgaatgaact acaccaacaa attcctgctg 420 atcccagagt cgggagacta cttcgtttac tcccaggtca cattccgtgg gatgacctct 480 gagtgcagtg aaatcagaca agcaggccga ccaaacaagc cagactccat cactgtggtc 540 atcaccaagg taacagacag ctaccctgag ccaacccagc tcctcatggg gaccaagtct 600 gtgtgtgaag taggcagtaa ctggttccag cccatctacc tcggagccat gttctccttg 660 caagaagggg acaagctcat ggtgaacgtc agtgacatct ctttggtgga ttacacaaaa 720 gaagataaaa ccttctttgg agccttctta ctatag 756 <210> 248 <211> 251 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 248 Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu 1 5 10 15 Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Cys Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala 35 40 45 Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu 50 55 60 Ala Cys Val Gln Leu Gln Asp Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser 65 70 75 80 His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg 85 90 95 Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Leu Lys Asn 100 105 110 Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr 115 120 125 Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser 130 135 140 Gly Asp Tyr Phe Val Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser 145 150 155 160 Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser 165 170 175 Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr 180 185 190 Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp 195 200 205 Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp 210 215 220 Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 245 250 <210> 249 <211> 759 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 249 atggcagagg agctggggtt gggcttcgga gaaggagtcc cagtggaagt gctgccggaa 60 ggctgtagac acaggccaga ggccagggcc gggctagctg ccaggagcaa agcctgcctg 120 gctctcacct gctgcctgtt gtcatttccc atcctcgcag gacttagcac cctcctaatg 180 gctggccagc tccgggtccc cggaaaagac tgtatgcttc gggccataac agaagagaga 240 tctgagcctt caccacagca agtttactca cctcccagag gcaagccgag agcacacctg 300 acaattaaga aacaaacccc agcaccacat ctgaaaaatc agctctctgc tctacactgg 360 gaacatgacc tagggatggc cttcaccaag aacgggatga agtacatcaa caaatccctg 420 gtgatcccag agtcaggaga ctatttcatc tactcccaga tcacattccg agggaccaca 480 tctgtgtgtg gtgacatcag tcgggggaga cgaccaaaca agccagactc catcaccatg 540 gttatcacca aggtagcaga cagctaccct gagcctgccc gcctactaac agggtccaag 600 tctgtgtgtg aaataagcaa caactggttc cagtccctct accttggggc cacgttctcc 660 ttggaagaag gagacagact aatggtaaac gtcagtgaca tctccttggt ggattacaca 720 aaagaagata aaactttctt tggagctttc ttgctataa 759 <210> 250 <211> 252 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 250 Met Ala Glu Glu Leu Gly Leu Gly Phe Gly Glu Gly Val Pro Val Glu 1 5 10 15 Val Leu Pro Glu Gly Cys Arg His Arg Pro Glu Ala Arg Ala Gly Leu 20 25 30 Ala Ala Arg Ser Lys Ala Cys Leu Ala Leu Thr Cys Cys Leu Leu Ser 35 40 45 Phe Pro Ile Leu Ala Gly Leu Ser Thr Leu Leu Met Ala Gly Gln Leu 50 55 60 Arg Val Pro Gly Lys Asp Cys Met Leu Arg Ala Ile Thr Glu Glu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Pro Ser Pro Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro Arg Gly Lys Pro 85 90 95 Arg Ala His Leu Thr Ile Lys Lys Gln Thr Pro Ala Pro His Leu Lys 100 105 110 Asn Gln Leu Ser Ala Leu His Trp Glu His Asp Leu Gly Met Ala Phe 115 120 125 Thr Lys Asn Gly Met Lys Tyr Ile Asn Lys Ser Leu Val Ile Pro Glu 130 135 140 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Ile Thr Phe Arg Gly Thr Thr 145 150 155 160 Ser Val Cys Gly Asp Ile Ser Arg Gly Arg Arg Pro Asn Lys Pro Asp 165 170 175 Ser Ile Thr Met Val Ile Thr Lys Val Ala Asp Ser Tyr Pro Glu Pro 180 185 190 Ala Arg Leu Leu Thr Gly Ser Lys Ser Val Cys Glu Ile Ser Asn Asn 195 200 205 Trp Phe Gln Ser Leu Tyr Leu Gly Ala Thr Phe Ser Leu Glu Glu Gly 210 215 220 Asp Arg Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 245 250 <210> 251 <211> 1254 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 251 atggagcagc ggccgcgggg ctgcgcggcg gtggcggcgg cgctcctcct ggtgctgctg 60 ggggcccggg cccagggcgg cactcgtagc cccaggtgtg actgtgccgg tgacttccac 120 aagaagattg gtctgttttg ttgcagaggc tgcccagcgg ggcactacct gaaggcccct 180 tgcacggagc cctgcggcaa ctccacctgc cttgtgtgtc cccaagacac cttcttggcc 240 tgggagaacc accataattc tgaatgtgcc cgctgccagg cctgtgatga gcaggcctcc 300 caggtggcgc tggagaactg ttcagcagtg gccgacaccc gctgtggctg taagccaggc 360 tggtttgtgg agtgccaggt cagccaatgt gtcagcagtt cacccttcta ctgccaacca 420 tgcctagact gcggggccct gcaccgccac acacggctac tctgttcccg cagagatact 480 gactgtggga cctgcctgcc tggcttctat gaacatggcg atggctgcgt gtcctgcccc 540 acgagcaccc tggggagctg tccagagcgc tgtgccgctg tctgtggctg gaggcagatg 600 ttctgggtcc aggtgctcct ggctggcctt gtggtccccc tcctgcttgg ggccaccctg 660 acctacacat accgccactg ctggcctcac aagcccctgg ttactgcaga tgaagctggg 720 atggaggctc tgaccccacc accggccacc catctgtcac ccttggacag cgcccacacc 780 cttctagcac ctcctgacag cagtgagaag atctgcaccg tccagttggt gggtaacagc 840 tggacccctg gctaccccga gacccaggag gcgctctgcc cgcaggtgac atggtcctgg 900 gaccagttgc ccagcagagc tcttggcccc gctgctgcgc ccacactctc gccagagtcc 960 ccagccggct cgccagccat gatgctgcag ccgggcccgc agctctacga cgtgatggac 1020 gcggtcccag cgcggcgctg gaaggagttc gtgcgcacgc tggggctgcg cgaggcagag 1080 atcgaagccg tggaggtgga gatcggccgc ttccgagacc agcagtacga gatgctcaag 1140 cgctggcgcc agcagcagcc cgcgggcctc ggagccgttt acgcggccct ggagcgcatg 1200 gggctggacg gctgcgtgga agacttgcgc agccgcctgc agcgcggccc gtga 1254 <210> 252 <211> 417 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 252 Met Glu Gln Arg Pro Arg Gly Cys Ala Ala Val Ala Ala Ala Leu Leu 1 5 10 15 Leu Val Leu Leu Gly Ala Arg Ala Gln Gly Gly Thr Arg Ser Pro Arg 20 25 30 Cys Asp Cys Ala Gly Asp Phe His Lys Lys Ile Gly Leu Phe Cys Cys 35 40 45 Arg Gly Cys Pro Ala Gly His Tyr Leu Lys Ala Pro Cys Thr Glu Pro 50 55 60 Cys Gly Asn Ser Thr Cys Leu Val Cys Pro Gln Asp Thr Phe Leu Ala 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285 Gln Glu Ala Leu Cys Pro Gln Val Thr Trp Ser Trp Asp Gln Leu Pro 290 295 300 Ser Arg Ala Leu Gly Pro Ala Ala Ala Pro Thr Leu Ser Pro Glu Ser 305 310 315 320 Pro Ala Gly Ser Pro Ala Met Met Leu Gln Pro Gly Pro Gln Leu Tyr 325 330 335 Asp Val Met Asp Ala Val Pro Ala Arg Arg Trp Lys Glu Phe Val Arg 340 345 350 Thr Leu Gly Leu Arg Glu Ala Glu Ile Glu Ala Val Glu Val Glu Ile 355 360 365 Gly Arg Phe Arg Asp Gln Gln Tyr Glu Met Leu Lys Arg Trp Arg Gln 370 375 380 Gln Gln Pro Ala Gly Leu Gly Ala Val Tyr Ala Ala Leu Glu Arg Met 385 390 395 400 Gly Leu Asp Gly Cys Val Glu Asp Leu Arg Ser Arg Leu Gln Arg Gly 405 410 415 Pro <210> 253 <211> 900 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 253 atgagggcgc tggaggggcc aggcctgtcg ctgctgtgcc tggtgttggc gctgcctgcc 60 ctgctgccgg tgccggctgt acgcggagtg gcagaaacac ccacctaccc ctggcgggac 120 gcagagacag gggagcggct ggtgtgcgcc cagtgccccc caggcacctt tgtgcagcgg 180 ccgtgccgcc gagacagccc cacgacgtgt ggcccgtgtc caccgcgcca ctacacgcag 240 ttctggaact acctggagcg ctgccgctac tgcaacgtcc tctgcgggga gcgtgaggag 300 gaggcacggg cttgccacgc cacccacaac cgtgcctgcc gctgccgcac cggcttcttc 360 gcgcacgctg gtttctgctt ggagcacgca tcgtgtccac ctggtgccgg cgtgattgcc 420 ccgggcaccc ccagccagaa cacgcagtgc cagccgtgcc ccccaggcac cttctcagcc 480 agcagctcca gctcagagca gtgccagccc caccgcaact gcacggccct gggcctggcc 540 ctcaatgtgc caggctcttc ctcccatgac accctgtgca ccagctgcac tggcttcccc 600 ctcagcacca gggtaccagg agctgaggag tgtgagcgtg ccgtcatcga ctttgtggct 660 ttccaggaca tctccatcaa gaggctgcag cggctgctgc aggccctcga ggccccggag 720 ggctggggtc cgacaccaag ggcgggccgc gcggccttgc agctgaagct gcgtcggcgg 780 ctcacggagc tcctgggggc gcaggacggg gcgctgctgg tgcggctgct gcaggcgctg 840 cgcgtggcca ggatgcccgg gctggagcgg agcgtccgtg agcgcttcct ccctgtgcac 900 900 <210> 254 <211> 300 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 254 Met Arg Ala Leu Glu Gly Pro Gly Leu Ser Leu Leu Cys Leu Val Leu 1 5 10 15 Ala Leu Pro Ala Leu Leu Pro Val Pro Ala Val Arg Gly Val Ala Glu 20 25 30 Thr Pro Thr Tyr Pro Trp Arg Asp Ala Glu Thr Gly Glu Arg Leu Val 35 40 45 Cys Ala Gln Cys Pro Pro Gly Thr Phe Val Gln Arg Pro Cys Arg Arg 50 55 60 Asp Ser Pro Thr Thr Cys Gly Pro Cys Pro Pro Arg His Tyr Thr Gln 65 70 75 80 Phe Trp Asn Tyr Leu Glu Arg Cys Arg Tyr Cys Asn Val Leu Cys Gly 85 90 95 Glu Arg Glu Glu Glu Ala Arg Ala Cys His Ala Thr His Asn Arg Ala 100 105 110 Cys Arg Cys Arg Thr Gly Phe Phe Ala His Ala Gly Phe Cys Leu Glu 115 120 125 His Ala Ser Cys Pro Pro Gly Ala Gly Val Ile Ala Pro Gly Thr Pro 130 135 140 Ser Gln Asn Thr Gln Cys Gln Pro Cys Pro Pro Gly Thr Phe Ser Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Ser Ser Glu Gln Cys Gln Pro His Arg Asn Cys Thr Ala 165 170 175 Leu Gly Leu Ala Leu Asn Val Pro Gly Ser Ser Ser His Asp Thr Leu 180 185 190 Cys Thr Ser Cys Thr Gly Phe Pro Leu Ser Thr Arg Val Pro Gly Ala 195 200 205 Glu Glu Cys Glu Arg Ala Val Ile Asp Phe Val Ala Phe Gln Asp Ile 210 215 220 Ser Ile Lys Arg Leu Gln Arg Leu Leu Gln Ala Leu Glu Ala Pro Glu 225 230 235 240 Gly Trp Gly Pro Thr Pro Arg Ala Gly Arg Ala Ala Leu Gln Leu Lys 245 250 255 Leu Arg Arg Arg Leu Thr Glu Leu Leu Gly Ala Gln Asp Gly Ala Leu 260 265 270 Leu Val Arg Leu Leu Gln Ala Leu Arg Val Ala Arg Met Pro Gly Leu 275 280 285 Glu Arg Ser Val Arg Glu Arg Phe Leu Pro Val His 290 295 300 <210> 255 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 255 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 256 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 256 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 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Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 257 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 257 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp 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Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 258 <211> 252 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 258 Met Ala Glu Glu Leu Gly Leu Gly Phe Gly Glu Ala Val Pro Val Glu 1 5 10 15 Met Leu Pro Glu Gly Cys Arg His Arg Arg Glu Ala Arg Thr Gly Leu 20 25 30 Ala Ala Arg Ser Lys Ala Cys Leu Ala Leu Thr Cys Cys Leu Leu Ser 35 40 45 Phe Pro Ile Leu Ala Gly Leu Ser Thr Leu Leu Met Thr Gly Gln Leu 50 55 60 Arg Ile Pro Gly Lys Asp Cys Met Phe Pro Thr Val Thr Glu Glu Arg 65 70 75 80 Ser Ala Pro Ser Ala Gln Pro Val Tyr Thr Pro Ser Arg Asp Lys Pro 85 90 95 Lys Ala His Leu Thr Ile Met Arg Gln Thr Pro Val Pro His Leu Lys 100 105 110 Asn Glu Leu Ala Ala Leu His Trp Glu Asn Asn Leu Gly Met Ala Phe 115 120 125 Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu 130 135 140 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Ile Thr Phe Arg Gly Thr Thr 145 150 155 160 Ser Glu Cys Gly Asp Ile Ser Arg Val Arg Arg Pro Lys Lys Pro Asp 165 170 175 Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Ala Asp Ser Tyr Pro Glu Pro 180 185 190 Ala His Leu Leu Thr Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Ile Ser Ser Asn 195 200 205 Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Glu Glu Gly 210 215 220 Asp Arg Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Ile 245 250 <210> 259 <211> 411 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 259 Met Glu Ala Arg Leu Leu Arg Gly Cys Val Val Glu Pro Leu Phe Leu 1 5 10 15 Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Gly Gln Gly Gln Gly 20 25 30 Gly Met Ser Gly Arg Cys Asp Cys Ala Ser Glu Ser Gln Lys Arg Tyr 35 40 45 Gly Pro Phe Cys Cys Arg Gly Cys Pro Lys Gly His Tyr Met Lys Ala 50 55 60 Pro Cys Ala Glu Pro Cys Gly Asn Ser Thr Cys Leu Pro Cys Pro Ser 65 70 75 80 Asp Thr Phe Leu Thr Arg Asp Asn His Phe Lys Thr Asp Cys Thr Arg 85 90 95 Cys Gln Val Cys Asp Glu Glu Ala Leu Gln Val Thr Leu Glu Asn Cys 100 105 110 Ser Ala Lys Ser Asp Thr His Cys Gly Cys Gln Ser Gly Trp Cys Val 115 120 125 Asp Cys Ser Thr Glu Pro Cys Gly Lys Ser Ser Pro Phe Ser Cys Val 130 135 140 Pro Cys Gly Ala Thr Thr Pro Val His Glu Ala Pro Thr Pro Arg Pro 145 150 155 160 Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Ile Arg Gly Asn Asp Cys Thr Ser Cys Pro 165 170 175 Thr Gly Phe Ser Ser Val Cys Pro Lys Ala Cys Thr Ala Val Cys Gly 180 185 190 Trp Lys Gln Met Phe Trp Val Gln Val Leu Leu Gly Val Ala Phe Leu 195 200 205 Phe Gly Ala Ile Leu Ile Cys Ala Tyr Cys Arg Trp Gln Pro Cys Lys 210 215 220 Ala Val Val Thr Ala Asp Thr Ala Gly Thr Glu Thr Leu Ala Ser Pro 225 230 235 240 Gln Thr Ala His Leu Ser Ala Ser Asp Ser Ala His Thr Leu Leu Ala 245 250 255 Pro Pro Ser Ser Thr Gly Lys Ile Cys Thr Thr Val Gln Leu Val Gly 260 265 270 Asn Asn Trp Thr Pro Gly Leu Ser Gln Thr Gln Glu Val Val Cys Gly 275 280 285 Gln Ala Ser Gln Pro Trp Asp Gln Leu Pro Asn Arg Thr Leu Gly Thr 290 295 300 Pro Leu Ala Ser Pro Leu Ser Pro Ala Pro Pro Ala Gly Ser Pro Ala 305 310 315 320 Ala Val Leu Gln Pro Gly Pro Gln Leu Tyr Asp Val Met Asp Ala Val 325 330 335 Pro Ala Arg Arg Trp Lys Glu Phe Val Arg Thr Leu Gly Leu Arg Glu 340 345 350 Ala Glu Ile Glu Ala Val Glu Val Glu Ile Cys Arg Phe Arg Asp Gln 355 360 365 Gln Tyr Glu Met Leu Lys Arg Trp Arg Gln Gln Gln Pro Ala Gly Leu 370 375 380 Gly Ala Ile Tyr Ala Ala Leu Glu Arg Met Gly Leu Glu Gly Cys Ala 385 390 395 400 Glu Asp Leu Arg Ser Arg Leu Gln Arg Gly Pro 405 410

Claims (20)

  1. 인간 TNF-유사 리간드 1A(hTL1A)에 특이적으로 결합하고 그 활성을 중화시키며, 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/116, 118/126, 134/136, 138/146, 154/156, 158/166, 174/176, 178/186, 194/196, 198/206, 214/216, 218/226 및 234/236으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(HCVR)/경쇄 가변 영역(LCVR) 서열 쌍을 포함하는, 단리된 인간 항체 또는 그의 항원-결합 절편.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 그의 항원 결합 절편은 700 pM 이하, 300 pM 이하, 80 pM 이하, 또는 50 pM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 서열번호 244의 아미노산 서열을 갖는 hTL1A에 결합하는 항체 또는 항원-결합 절편.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 청구항 1에 있어서,
    서열번호 2/10, 18/26, 174/176 또는 234/236의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편.
  7. 청구항 1의 항체 또는 항원-결합 절편의 HCVR/LCVR 서열 쌍 내에 포함되는 HCDR1 내지 HCDR3 및 LCDR1 내지 LCDR3 서열을 모두 포함하는, hTL1A에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 항체 또는 그의 항원-결합 절편.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 항원-결합 절편은 사이노몰거스 원숭이 TL1A(MfTL1A)와 교차-반응하는 항체 또는 항원-결합 절편.
  11. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 절편은 서열번호 246의 아미노산 서열을 갖는 Fhm과 교차-반응하는 항체 또는 항원-결합 절편.
  12. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 절편은 서열번호 246의 아미노산 서열을 갖는 Fhm과 교차-반응하지 않는 항체 또는 항원-결합 절편.
  13. 청구항 1, 청구항 2, 청구항 6, 청구항 7 및 청구항 10 내지 청구항 12 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 절편을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  14. 청구항 13의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
  15. 청구항 14의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 항체 또는 그의 절편의 생산을 허용하는 조건 하에 성장시키는 단계; 및 생산된 항체 또는 그의 절편을 회수하는 단계를 포함하는 항-hTL1A 항체 또는 그의 항원-결합 절편의 생산 방법.
  16. 청구항 1, 청구항 2, 청구항 6, 청구항 7 및 청구항 10 내지 청구항 12 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 절편 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 궤양성 대장염, 크론 질병, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 천식 및 알레르기성 폐 염증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환 또는 질병의 치료용 약학적 조성물.
  17. 청구항 16에 있어서,
    면역억제제, 항-염증제, 진통제 및 항-알레르기제로부터 선택되는 하나 이상의 추가적인 치료제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
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Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110229471A1 (en) 2008-11-26 2011-09-22 Cedars-Sinai Medical Center Methods of determining responsiveness to anti-tnf alpha therapy in inflammatory bowel disease
US20120204278A1 (en) 2009-07-08 2012-08-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
DK3622813T3 (da) 2009-07-08 2021-05-03 Kymab Ltd Dyremodeller og terapeutiske molekyler
US8766034B2 (en) 2010-09-22 2014-07-01 Cedars-Sinai Medical Center TL1A model of inflammation fibrosis and autoimmunity
JO3375B1 (ar) 2010-11-08 2019-03-13 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للجين a1 الشبيه بعامل النخر الورمي (tl1a)
ES2612935T3 (es) 2011-09-19 2017-05-19 Kymab Limited Anticuerpos, dominios variables y cadenas adaptados para su uso en seres humanos
EP2760889A4 (en) 2011-09-30 2015-04-15 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd ANTIBODIES AGAINST TL1A AND USES THEREOF
US9253965B2 (en) 2012-03-28 2016-02-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US10251377B2 (en) 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
GB2502127A (en) 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
WO2014078306A1 (en) * 2012-11-13 2014-05-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-prokineticin receptor (prokr) antibodies and uses thereof
EA201591153A1 (ru) * 2013-01-02 2016-01-29 Гленмарк Фармасьютикалс С.А. Антитела, связывающиеся с tl1a, и их применение
US9788534B2 (en) 2013-03-18 2017-10-17 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
BR112015024752A2 (pt) 2013-03-27 2017-07-18 Cedars Sinai Medical Center mitigação e reversão da fibrose e inflamação através da inibição da função de tl1a e vias de sinalização relacionadas
US9783593B2 (en) 2013-05-02 2017-10-10 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
US11707056B2 (en) 2013-05-02 2023-07-25 Kymab Limited Animals, repertoires and methods
US10208125B2 (en) * 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
EP4105236A1 (en) * 2013-07-19 2022-12-21 Cedars-Sinai Medical Center Anti-tl1a (tnfsf15) antibody for treatment of inflammatory bowel disease
CA2925723A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
IL245001B2 (en) * 2013-11-13 2023-05-01 Pfizer Antibodies specific to cancer necrosis factor-like ligand 1a and preparations and their uses
US10160805B2 (en) 2014-07-11 2018-12-25 New York University Methods of treating inflammatory bowel disease by administering tumor necrosis factor-like ligand 1A or an agonistic death-domain receptor 3 antibody
WO2016077720A1 (en) * 2014-11-14 2016-05-19 Protein One, Llc Binding agents and uses thereof
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
US20180319889A1 (en) * 2015-11-02 2018-11-08 La Jolla Institute For Allergy & Immunology Method and medicament for treating airway and/or lung diseases
CR20180365A (es) * 2015-12-16 2018-09-28 Amgen Inc PROTEÍNAS DE UNIÓN AL ANTÍGENO BISPECÍFICO DE ANTI-TL1A/ANTI-TNF-a Y SUS USOS
KR102464372B1 (ko) * 2016-03-17 2022-11-04 세다르스-신나이 메디칼 센터 Rnaset2를 통한 염증성 장 질환의 진단 방법
KR102417687B1 (ko) * 2016-05-09 2022-07-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tl1a 항체 및 그의 용도
CN110121509B (zh) 2016-10-26 2024-05-07 西达-赛奈医疗中心 中和抗tl1a单克隆抗体
KR102618831B1 (ko) * 2017-06-21 2023-12-28 세파론 엘엘씨 양이온 교환 크로마토그래피 세척 완충액
KR20210005169A (ko) 2018-04-25 2021-01-13 프로메테우스 바이오사이언시즈, 인크. 최적화된 항tl1a 항체
RU2689522C1 (ru) * 2018-09-11 2019-05-28 Общество с ограниченной ответственностью "Пальмира Биофарма" Нуклеотидная последовательность, кодирующая слитый белок, состоящий из растворимого внеклеточного домена человеческого tnfr1 и константной части тяжёлой цепи человеческого igg4
WO2020112890A1 (en) * 2018-11-29 2020-06-04 Cedars-Sinai Medical Center Rnaset2 compositions and methods of treatment therewith
MX2022004942A (es) 2019-10-24 2022-07-27 Prometheus Biosciences Inc Anticuerpos humanizados contra el ligando 1a de tipo tnf (tl1a) y usos de los mismos.
CA3207818A1 (en) * 2021-02-18 2022-08-25 Allison LUO Anti-tl1a antibody compositions and methods of treatment in the lung
BR112023016672A2 (pt) * 2021-02-18 2023-11-21 Cedars Sinai Medical Center Composições compreendendo anticorpos humanizados contra ligante 1a semelhante a tnf (tl1a) e seus usos

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090280116A1 (en) * 2007-11-13 2009-11-12 Cogenesys, Inc. Humanized antibodies against tl1a

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7820798B2 (en) 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US6927044B2 (en) 1998-09-25 2005-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-1 receptor based cytokine traps
AU783682B2 (en) * 1999-08-04 2005-11-24 Amgen, Inc. Fhm, a novel member of the TNF ligand supergene family
JP2005538682A (ja) * 2001-12-03 2005-12-22 アブジェニックス・インコーポレーテッド カルボキシックアンヒドラーゼｉｘ（ｃａｉｘ）腫瘍抗原に対する抗体
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
EP1667730B1 (en) * 2003-08-20 2013-06-26 University of Miami Compositions and methods for treating inflammatory lung disease
US7850962B2 (en) 2004-04-20 2010-12-14 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD20
WO2006127900A2 (en) * 2005-05-25 2006-11-30 Biogen Idec Ma Inc. Tl1a in the treatment of disease
EP1919954B1 (en) * 2005-08-30 2016-10-19 University of Miami Immunomodulating tumor necrosis factor receptor 25 (tnfr25) agonists, antagonists and immunotoxins
MY159787A (en) 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
JP2010534469A (ja) * 2007-07-25 2010-11-11 アストラゼネカ アクチボラグ Ｋｄｒ指向性標的化結合物質およびその使用
JO3375B1 (ar) 2010-11-08 2019-03-13 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للجين a1 الشبيه بعامل النخر الورمي (tl1a)

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090280116A1 (en) * 2007-11-13 2009-11-12 Cogenesys, Inc. Humanized antibodies against tl1a

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Gastroenterology. Vol. 135, No. 2, pp. 552-567 (2008)

Also Published As

Publication number Publication date
UY33715A (es) 2012-05-31
IL226172A0 (en) 2013-07-31
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CA2816799A1 (en) 2012-05-18
ZA201304114B (en) 2014-02-26
JO3375B1 (ar) 2019-03-13
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WO2012064682A1 (en) 2012-05-18
TW201233796A (en) 2012-08-16
US8642741B2 (en) 2014-02-04
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