EA030397B1 - Человеческие антитела против человеческого tnf-подобного лиганда-1а (tl1a) - Google Patents

Человеческие антитела против человеческого tnf-подобного лиганда-1а (tl1a) Download PDF

Info

Publication number
EA030397B1
EA030397B1 EA201370105A EA201370105A EA030397B1 EA 030397 B1 EA030397 B1 EA 030397B1 EA 201370105 A EA201370105 A EA 201370105A EA 201370105 A EA201370105 A EA 201370105A EA 030397 B1 EA030397 B1 EA 030397B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
antigen
antibodies
binding fragment
amino acid
Prior art date
Application number
EA201370105A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201370105A1 (ru
Inventor
Брендан Дж. Классон
Димитрис Скокос
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалс, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалс, Инк.
Publication of EA201370105A1 publication Critical patent/EA201370105A1/ru
Publication of EA030397B1 publication Critical patent/EA030397B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение предусматривает выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают и нейтрализуют активность человеческого TNF-подобного лиганда 1А (hTL1A). Изобретение предусматривает также выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, способ получения антитела против hTL1A или его антигенсвязывающего фрагмента, а также фармацевтическую композицию. Человеческие антитела против hTL1A применяются при лечении болезней или расстройств, связанных с TL1A, таких как язвенный колит, болезнь Крона, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, диабет, астма и аллергическое воспаление лёгких.

Description

Изобретение относится к человеческим антителам и антигенсвязывающим фрагментам человеческих антител, которые специфически связывают человеческий ΤΝΡ-подобный лиганд-1А (МЫА), и к терапевтическим способам применения этих антител.
Сведения о предшествующем уровне техники
ТЬ1А представляет собой клеточный мембранный белок типа II, относящийся к суперсемейству фактора некроза опухоли (ΤΝΡ8Ρ) и обозначается также как ΤΝΡ8Ρ 15.
Он экспрессирован на поверхности эндотелиальных клеток и активированных клеток кроветворных ростков, включая моноциты, макрофаги, лимфоциты, мононуклеарные клетки собственной пластинки слизистой оболочки, дендритные клетки и плазматические плетки (Тап К.В. е! а1., 1997, Оеие 204:35-46; РгеЬп 1.Б. е! а1., 2007, I. 1ттиио1. 178:4033-4038). Он также экспрессирован в почках, лёгких, простате и вилочковой железе (Тап е! а1., 1997, кирга). В эндотелиальных клетках экспрессия ТЬ1А повышающе регулируется 1Ь-1а и ΤΝΡα (М1допе Τ.8. е! а1., 2002, ЬптипЦу 16:479-492). В моноцитах свежей крови человека и в дендритных клетках, полученных из моноцитов, экспрессия 1ЫА повышающе регулируется РсуК-опосредованными или ΤοΠ-подобными рецепторными (ΤΡΚ.) сигнальными системами (РгеЬи е! а1.,
2007, кирга; Меу1аи Ρ. е! а1., 2008, 1ттипЬу 29:79-89). ΤΡ-1Λ может отщепляться от клеточной мембраны
по механизму, который подобен механизму отщепления ΤΝΡα; была описана растворимая эктодоменная форма (М1допе е! а1., 2002, кирга; йт 8. е! а1., 2005, 3. 1ттипо1. Ме!ЬоДк 298:1-8; Уапд С.К. е! а1., 2004, Сапсег Кек. 64:1122-1129). Секвенирование белка подтвердило, что эта форма 'ГЫА высвобождается после отщепления прикреплённого к мембране предшественника между остатками А1а-71 и Ьеи-72 (М1допе е! а1., 2002, кирга). Были идентифицированы две вариантные кДНК, которые потенциально кодируют Ν-концевые процессированные версии ΤΕ^: УЕО1-174 (или ΤΡ1) (ΖΜί Υ. е! а1., 1999, РА8ЕВ I. 13:181-189) и УЕО1-192 (СЬе\у Ь.1 е! а1., 2002, РА8ЕВ 3. 16:742-744). Опубликованные данные свидетельствуют, что биологически активные продукты генов представляют собой трансмембранный
белок полной длины типа II (остатки 1-251) и его протеолитически отщеплённый домен (остатки 72-251) (М1допе е! а1., 2002, кирга; Ьп е! а1., 2007, ВюсЬет ВюрЬук Кек. Соттип. 364:1-6). Вариант МЫА, обозначаемый как "РЬт", содержащий единственную аминокислотную замену О1п-167 аргинином, описан в патенте США №6521422. 1ЫА опосредует сигналы с помощью своего когнатного рецептора, рецептора смерти 3 (БК3; известного также как ΤΝΡΚ8Ρ25; последовательностей нуклеиновой кислоты и аминокислоты (8ЕО ГО ΝΟ: 251 и 252 соответственно), что приводит к ускорению выживаемости клеток и секреции противовоспалительных цитокинов или ускорению апоптоза в зависимости от контекста. является одним из трёх известных лигандов (в дополнение к РакЬ и ΜΟΗΤ), которые связаны эндогенным растворимым рецептором-ловушкой, БсР3 (известным также как ΤΚ6, ΝΤΚ3 или ΤΝΡΚ8Ρ21; последовательностями нуклеиновой кислоты и аминокислоты 8ЕО ГО ΝΟ: 253 и 254 соответственно) (Μίдопе е! а1., 2002, кирга; Υ;η^ С.К. е! а1., 2004, Сапсег Кек. 64:1122-1129).
БР3 представляет собой рецептор домена смерти - рецептор, связанный с ΤΝΡ, экспрессированный на большей части активированных Т-лимфоцитов и ΝΚ клеток (М1допе е! а1., 2002, кирга; 8сгеа!оп О.К. е! а1., 1997, Ргос. №!1. АсаД. 8с1. (И8А) 94:4615-4619). ЗЛА увлекает БК3 на поверхность Т-клеток, способствуя их отвечаемости на ГО-2 (М1допе е! а1., 2002, кирга), ускоряя пролиферацию Т-клеток и высвобождение ΣΡΝγ и ОМ-С8Р при условиях субоптимальной костимуляции (М1допе е! а1., 2002, кирга; Меу1ап е! а1., 2008, кирга). Было показано также, что РША синергизирует с субоптимальными уровнями ГО12/ГО-18 с индуцированием образования ΜΝγ СБ4+ Т-клеток (РараДаЬЗк К.А. е! а1., 2004, 3. Iттиηο1. 172:7002-7007; РгеЬп ^.^. е! а1., 2004, С1ш. Iттипο1. 112:66-77; РараДаЬЗк К.А. е! а1., 2005, 3. Iттипο1. 174:4985-4990; Сакка!е11а М.А. е! а1., 2007, 3. Iттипο1. 178:7325-7333). ΤΕ^ принимает участие в различных воспалительных заболеваниях и/или аутоиммунных заболеваниях, включая воспаление кишечника [например, язвенный колит (ИС) и болезнь Крона (СБ)], ревматоидный артрит, рассеянный склероз (М8), атеросклероз и т.п. (см. Ваугу 3.. 2010, ШЩге Ре\Зе\ук/РЬеита1о1оду 6:67-68; ΤакеДа!ки Η. е! а1.,
2008, Оак!гоеп!его1оду 135:552-567; РгеЬп е! а1., 2004, кирга; Ват1ак О. е! а1., 2008, СЬп. ^типоР 129:249255; Ви11 М.1 е! а1., 2008, I Ехр. МеД. 205:2457-2464; Рарри В.Р. е! а1., 2008, I Ехр. МеД. 205:1049-1062; Ват1ак О. е! а1., 2003, 3. Iттипο1. 171:4868-4874; Капд Υ. е! а1., 2005, Су!окЗпе 29:229-235). Хотя большинство опубликованных данных согласуются в отношении ключевой роли 1ЫА в выполнении эффекторной функции дифференциации ΤΗ1 и ΤΗ17, в последнем исследовании указано, что он играет роль во взаимодействии Τ^1А/^К3 в процессе развития ΤΗ2 Т-клеточных ответов в моделях астмы (Рапд Ь. е! а1., 2008, 3. Ехр. МеД. 205:1037-1048). Таким образом, применение ингибиторов ΤΡ^, таких как полные человеческие антитела против 1ЫА с высокой аффинностью и нейтрализирующей активностью, самих по себе или в комбинации с доступными в настоящее время противовоспалительными агентами, иммунодепрессантами (например, антагонистами ΤΝΡ-α, кортизоном или стероидами и т.п.) и/или противоаллергическими агентами обеспечивает эффективное лечение этих болезней и расстройств.
Последовательности нуклеиновой кислоты и аминокислоты человеческого РР1А представлены 8ЕО ГО ΝΟ8: 243 и 244 соответственно, и такие же последовательности РЬт представлены 8ЕО ГО ΝΟ: 245 и 246 соответственно. Антитела против ΤΕ^ описаны, например, в патентах США
- 1 030397
№ 7597886, 7820798 и в заявке США на патент № 2009/0280116.
Сущность изобретения
Согласно первому аспекту данное изобретение предусматривает человеческие (человеческого происхождения) моноклональные антитела (тАЬк) и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связывают и нейтрализуют активность человеческого ТЬ1А (ЫЫЛ).
Антитела могут быть полной длины (например, антитело 1§С1 или 1§С4) или могут содержать только антигенсвязывающую часть (например, фрагмент РаЬ, Р(аЬ')2 или 8сРу). Согласно одному варианту изобретение предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, содержащее(ий) три гипервариабельных участка тяжелой цепи (НСЭК.1, НСЭК.2 и НСЭК.3), содержащиеся в пределах последовательности вариабельной области тяжелой цепи (НСУК), причем НСУК имеет аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 18, и три гипервариабельных участка легкой цепи (ЬСГОКЕ ЬСОК2 и ЬСЭК.3) содержащиеся в пределах последовательности вариабельной области легкой цепи (ЬСУК), причем ЬСУК имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 26. В конкретном варианте, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 18 вариабельной области тяжёлой цепи (НСУК). В конкретном варианте антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 26 вариабельной области лёгкой цепи (ЬСУК).
Согласно другим вариантам антитело или его фрагмент, которые специфически связывают и нейтрализуют активность человеческого ТМР-подобного лиганда 1А (ЬТЫА), содержат аминокислотные последовательности 8ЕС ГО N0: 20, 8ЕЦ ГО N0: 22 и 8ЕЦ ГО N0: 24 трех гипервариабельных участков тяжелой цепи (НСЭК1, НСЭК2 и НСЭК3) соответственно и аминокислотные последовательности 8ЕС ГО N0: 28, 8ЕЦ ГО N0: 30 и 8ЕЦ ГО N0: 32 трех гипервариабельных участков легкой цепи (БСГОВЕ ЬСЭК.2 и ЬСЭК.3) соответственно. Согласно конкретным вариантам раскрываемые здесь антитела или их антигенсвязывающие фрагменты содержат пару последовательностей НСУК/ЬСУК 8ЕЦ ГО N0: 18/26. Согласно другим конкретным вариантам раскрываемые здесь антитела или их антигенсвязывающие фрагменты перекрёстно реагируют с ТЫЛ макаки-крабоеда (МПЫА). Согласно еще одним конкретным вариантам раскрываемые здесь антитела или их антигенсвязывающие фрагменты перекрёстно не реагируют с РЬт, имеющим аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 246.
Согласно еще одному аспекту данное изобретение предусматривает молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют антитела против ТЫЛ или их фрагменты, которые описаны выше. Экспрессионные векторы, включающие нуклеиновые кислоты по изобретению, также охвачены данным изобретением, как и способы получения антител путём выращивания клетки-хозяина, содержащей экспрессионный вектор, при условиях, обеспечивающих продуцирование антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
Согласно еще одному аспекту данное изобретение относится к фармацевтической композиции с ЬТША-ингибирующей активностью, содержащей раскрываемое здесь антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель. Согласно одному из вариантов данное изобретение относится к фармацевтической композиции, которая является комбинацией антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению и второго терапевтического агента. Второй терапевтический агент может быть одним или более любыми агентами, такими как иммунодепрессанты, противовоспалительные агенты, анальгезирующие агенты, противоаллергические агенты и т.п., многие из которых имеют терапевтические эффекты, перекрывающиеся друг с другом. Подходящие иммунодепрессанты, которые могут применяться с антителами против ЬТЫА по изобретению, включают, но без ограничения, глюкокортикоиды, циклоспорин, метотрексат, интерферон β (1^^-3), такролимус, сиролимус, азатиоприн, меркаптопурин, опиоиды, микофенолят, ТМР-связывающие белки, такие как инфликсимаб, этернасепт, адалимумаб и т.п., цитотоксичные антитела, такие как дактиномицин, антрациклины, митомицин С, блеомицин, митрамицин и т.п., антитела, нацеленные на иммунные клетки, такие как антитела против СГО20. антитела против СГО3 и т.п.
Подходящие противовоспалительные агенты и/или анальгетики для комбинированной терапии с антителами против ЬТЬ1А включают кортикостероиды, нестероидные противовоспалительные средства (ЫЗАГО), такие как аспирин, ибупрофен, напроксен, ингибиторы Сох-2 и т.п., антагонисты ТМР-а, антагонисты 1Ь-1, антагонисты 1Ь-6, ацетаминофен, морфиномиметики и т.п. Подходящие противоаллергические агенты включают антигистаминные средства, глюкокортикоиды, эпинефрин (адреналин), теофиллин, натриевую соль кромолина и антилейкотриены, а также антихолинергические противоотёчные средства, стабилизаторы тучных клеток и т.п.
Согласно еще одному аспекту данное изобретение относится к способам лечения болезни или расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества раскрываемой здесь фармацевтической композиции. Согласно другому аспекту данное изобретение относится к применению раскрываемого здесь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для изготовления лекарственного средства для лечения болезни или расстройства, которые предотвращаются, ослабляются или ингибируются путём ингибирования или уменьшения активности ТЬ1А. Бо- 2 030397
лезнь или расстройство, подвергающиеся лечению, представляют собой любую болезнь или расстройство, которое ослабляется, ингибируется или предотвращается путём ингибирования или уменьшения активности ТЬ1А. Примеры болезней или расстройств, которые лечатся способами по изобретению, включают, но без ограничения, воспалительные заболевания и/или аутоиммунные заболевания, такие как воспалительные заболевания кишечника (ΙΒΌ), включая ИС и СП. КА, Μδ, диабет типа 1 и типа 2, псориаз, псориазный артрит, анкилозирующий спондилит, атопический дерматит и т.п.; аллергические реакции или состояния, включая астму, аллергическое воспаление лёгких и т.п.; рак, атеросклероз, инфекции, нейродегенеративные болезни, отторжение трансплантата, заболевание "трансплантат против хозяина" (ОУНО), сердечно-сосудистые нарушения/заболевания и т.п. Другие варианты данного изобретения станут очевидными после ознакомления со следующим подробным описанием.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Согласно первому аспекту данное изобретение предусматривает полностью человеческие моноклональные антитела (тАЬз) и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связывают и нейтрализуют активность человеческого ТЬ1А (МЫА). Антитела могут быть полной длины (например, антитело Ι§01 или Ι§04) или могут содержать только антигенсвязывающую часть (например, фрагмент РаЬ, Р(аЬ')2 или 8сРу) и могут быть модифицированы для воздействия на функциональность, например, чтобы удалить остаточные эффекторные функции (Кеббу с1 а1., 2000, ί. 1ттипо1. 164:1925-1933). Согласно одному варианту изобретение предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, содержащий вариабельную область тяжёлой цепи (НСУК), имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 118, 134, 138, 154, 158, 174, 178, 194, 198, 214, 218 и 234 или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно другому варианту антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела содержит НСУК, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 2, 18, 34, 50, 66, 134, 174 и 234. Согласно ещё одному варианту антитело или его фрагмент содержит НСУК, включающий δΕΟ ΙΌ N0: 2, 18, 174 или 234.
Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержит также вариабельную область лёгкой цепи (ЬСУК), выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 216, 226 и 236 или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно другому варианту антитело или антигенсвязывающий фрагмент этого антитела содержит также вариабельную область лёгкой цепи (ЬСУК), выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 10, 26, 42, 58, 74, 136, 176 и 236. Согласно ещё одному варианту антитело или антигенсвязывающий фрагмент этого антитела содержит ЬСУК, включающую δΕΟ ΙΌ N0: 10, 26, 176 или 236.
Согласно другим вариантам антитело или его фрагмент содержит пару последовательностей НСУК и ЬСУК (НСУК/ЬСУК), выбранную из группы δΕΟ ΙΌ N0: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/116, 118/126, 134/136, 138/146, 154/156, 158/166, 174/176, 178/186, 194/196, 198/206, 214/216, 218/226 и 234/236. Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержит НСУК и ЬСУК, выбранные из пар аминокислотных последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 и 234/236. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержит пару НСУК/ЬСУК, содержащую δΕΟ ΙΌ N0: 2/10, 18/26, 174/176 или 234/236. Согласно второму аспекту данное изобретение предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, содержащие аминокислотную последовательность гипервариабельного участка 3 тяжёлой цепи (НСЭК3), выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 124, 144, 164, 184, 204 и 224, или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, и аминокислотную последовательность СЭК3 (ЬСПК3), выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 132, 152, 172, 192, 212 и 232, или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержит пару аминокислотных последовательностей НСПК3/ЬСПК3, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 72/80, 88/96, 104/112, 124/132, 144/152, 164/172, 184/192, 204/212 или 224/232. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержит пару аминокислотных последовательностей НСПК3/ЬСОК3, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 72/80, 124/132, 164/172 или 224/232.
Согласно ещё одному варианту данное изобретение предусматривает антитело или его фрагмент, содержащие также аминокислотную последовательность СЭК1 тяжёлой цепи (НСЭК1), выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 120, 140, 160, 180, 200 и 220, или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; аминокислотную последовательность СЭК2 тяжёлой цепи (НСОК2), выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 122, 142, 162, 182, 202 и 222, или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентично- 3 030397
сти по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; и/или аминокислотную последовательность СЭР1 лёгкой цепи (ТСОК1), выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 128, 148, 168, 188, 208 и 228, или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; и/или аминокислотную последовательность СОК2 лёгкой цепи (ЬСОК2), выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 130, 150, 170, 190, 210 и 230, или, по существу, подобную последовательность, имеющую степень идентичности по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержат комбинацию НСОК1/НСОК2/НСОК3, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 4/6/8, 20/22/24, 36/38/40, 52/54/56, 68/70/72, 84/86/88, 100/102/104, 120/122/124, 140/142/144, 160/162/164, 180/182/184, 200/202/204 и 220/222/224; и/или комбинацию ЕСОК1/ЕСОК2/ЕСОК3, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 12/14/16, 28/30/32, 44/46/48, 60/62/64, 76/78/80, 92/94/96, 108/110/112, 128/130/132, 148/150/152, 168/170/172, 188/190/192, 208/210/212 и 228/230/232.
Согласно другому варианту аминокислотные последовательности СОК тяжёлой и лёгкой цепей содержат комбинацию СОК, выбранных из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 84/86/88/92/94/96,
100/102/104/108/110/112, 120/122/124/128/130/132, 140/142/144/148/150/152, 160/162/164/168/170/172,
180/182/184/188/190/192, 200/202/204/208/210/212 и 220/222/224/228/230/232.
Согласно другому варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательности СОК тяжёлой и лёгкой цепи, выбранные из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 120/122/124/128/130/132,
160/162/164/168/170/172 или 220/222/224/228/230/232. Согласно ещё одному варианту аминокислотные последовательности СОК тяжёлой и лёгкой цепей содержат комбинацию последовательностей СОК 8ЕО ГО N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 160/162/164/168/170/172 или 220/222/224/228/230/232.
Согласно родственному варианту данное изобретение предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, которые специфически связывают МЫА, при этом антитело или его фрагмент содержат домены СОК тяжёлой и лёгкой цепи, содержащие в тяжёлой и лёгкой цепей пары последовательностей, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/116, 118/126, 134/136, 138/146, 154/156, 158/166, 174/176, 178/186, 194/196, 198/206, 214/216, 218/226 и 234/236. Способы и методики идентификации СОКк в аминокислотных последовательностях НСУК и ЬСУК известны из уровня техники и могут быть использованы для идентификации СОК в специфических аминокислотных последовательностях НСУК и/или ЬСУК, описанных в данной заявке. Общепринятые методы определения, которые могут быть применены для идентификации границ СОКк, включают метод Кэбота, метод Хотиа и метод ЛЬМ. В общем, метод Кэбота основан на вариабельности последовательностей, метод Хотиа основан на размещении структурных областей петли СОК и метод АЬМ является компромиссом между подходами Кэбота и Хотиа. См., например, КаЬа!, "8сциспес5 οί Рго1еш5 οί 1ттипо1одюа1 ЬИсгскГ" №Оопа1 1пкШи1е5 οί НсаЬЬ, ВсШскйа, Μά. (1991); Λ1-Ε;·ιζίΕ;πιί с! а1., ί. Мо1. Βίο1. 273:927-948 (1997); и МагЪп с! а1., Ргос. №ц1. Асаб. 8с1. И8А 86:9268-9272 (1989). Доступными являются также базы данных для идентификации последовательностей СОК в антителе. Согласно одному варианту антитело или его фрагмент содержат последовательности СОК, содержащиеся в паре НСУК и ЬСУК, выбранной из группы, состоящей из пар аминокислотных последовательностей 8ЕО ГО N0: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 и 234/236. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержат последовательности СОК, содержащиеся в паре НСУК и ЬСУК, выбранной из группы, состоящей из пар аминокислотных последовательностей 8ЕО ГО N0: 2/10, 18/26, 174/176 или 234/236.
Согласно другому родственному варианту данное изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые конкурируют за специфическое связывание с ЬТЫА с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, содержащими последовательности СОК тяжёлой и лёгкой цепей из 8 НО ГО N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64,
68/70/72/76/78/80, 120/122/124/128/130/132, 160/162/164/168/170/172 или 220/222/224/228/230/232.
Согласно одному варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурируют за специфическое связывание с МЫА с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, содержащими последовательности СОК тяжёлой и лёгкой цепей из 8ЕО ГО N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 160/162/164/168/170/172 или 220/222/224/228/230/232. Согласно другому варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурируют за специфическое связывание с МЫА с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, содержащим пару последовательностей НСУК/ЬСУК из 8Е0 ГО N0: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 или 234/236. Согласно ещё одному варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурируют за специфическое связывание с МЫА с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, содержащим пару последовательностей НСУК/ЬСУК из 8ЕО ГО N0: 2/10, 18/26, 174/176 или 234/236.
Согласно другому родственному варианту данное изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают тот же самый эпитоп ЬТЫА, который распознаётся
- 4 030397
антителом или его фрагментом, содержащим последовательности СГОК тяжёлой и лёгкой цепей из 8ЕС) ΙΌ N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 36/38/40/44/46/48, 52/54/56/60/62/64, 68/70/72/76/78/80, 120/122/124/128/130/132, 160/162/164/168/170/172 или 220/222/224/228/230/232. Согласно одному варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывают тот же самый эпитоп МЫЛ, который распознаётся антителом или его фрагментом, содержащим последовательности СОК тяжёлой и лёгкой цепей из δ ЕС ГО N0: 4/6/8/12/14/16, 20/22/24/28/30/32, 160/162/164/168/170/172 или
220/222/224/228/230/232. Согласно другому варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывают тот же самый эпитоп МЫЛ, который распознаётся антителом или его фрагментом, содержащим пару последовательностей НСУК/ЬСУК из 8Еф ГО N0: 8Еф ГО N0: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 134/136, 174/176 или 234/236. Согласно ещё одному варианту антитело или его антигенсвязывающий фрагмент распознают тот же самый эпитоп МЫЛ, который распознаётся антителом или его фрагментом, содержащим пару последовательностей НСУК/ЬСУК из 8Еф ГО N0: 2/10, 18/26, 174/176 или 234/236.
Согласно третьему аспекту данное изобретение предусматривает молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют антитела против ТЬ1Л или их фрагменты, которые описаны выше. Рекомбинантные экспрессионные векторы, включающие нуклеиновые кислоты по изобретению и выделенные хозяйские клетки, например бактериальные клетки, такие как Е.сой, или человеческие клетки, такие как СН0 клетки, в которые такие векторы были введены, также охвачены данным изобретением, как и способы получения антител путём культивирования хозяйских клеток при условиях, которые позволяют осуществить получение антител и выделение полученных антител.
Согласно одному из вариантов данное изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие НСУК, кодированную последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 117, 133, 137, 153, 157, 173, 177, 193, 197, 213, 217 и 233, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержат НСУК, кодированную последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 1, 17, 33, 49, 65, 133, 173 и 233. Согласно ещё одному варианту антитело или его фрагмент содержат НСУК, кодированную последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 1, 17, 173 или 233.
Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержат также ЬСУК, кодированную последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 115, 125, 135, 145, 155, 165, 175, 185, 195, 205, 215, 225 и 235, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержат также ЬСУК, кодированную последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 9, 25, 41, 57, 73, 135, 175 и 235. Согласно ещё одному варианту антитело или его фрагмент содержат также ЬСУК, кодированную последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 9, 25, 175 или 235. Согласно дальнейшим вариантам антитело или его фрагмент содержат пару последовательностей НСУК и ЬСУК (НСУК/ЬСУК), кодированную парой последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 1/9, 17/25, 33/41, 49/57, 65/73, 81/89, 97/105, 113/115, 117/125, 133/135, 137/145, 153/155, 157/165, 173/175, 177/185, 193/195, 197/205, 213/215, 217/225 и 233/235. Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержат пару последовательностей НСУК и ЬСУК (НСУК/ЬСУК), кодированную парой последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 1/9, 17/25, 33/41, 49/57, 65/73, 133/135, 173/175 и 233/235. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержат пару последовательностей НСУК и ЬСУК (НСУК/ЬСУК), кодированную парой последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 1/9, 17/25, 173/175 или 233/235.
Согласно одному из вариантов данное изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие домен НСОК3, кодированный нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 7, 23, 39, 55, 71, 87, 103, 123, 143, 163, 183, 203 и 223, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, и домен ЬСОК3, кодированный нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 15, 31, 47, 63, 79, 95, 111, 131, 151, 171, 191, 211 и 231, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержат пару последовательностей НСОК3 и ЬСОК3, кодированных парой последовательностей нуклеиновой кислоты из 8ЕС ГО N0: 7/15, 23/31, 39/47, 55/63, 71/79, 87/95, 103/111, 123/131, 143/151, 163/171, 183/191, 203/211 или 223/231. Согласно другому варианту антитело или его фрагмент содержат пару последовательностей НСОК3 и ЬСОК3, кодированных парой последовательностей нуклеиновой кислоты из 8Еф ГО N0: 7/15,
- 5 030397
23/31, 39/47, 55/63, 71/79, 123/131, 163/171 или 223/231. Согласно ещё одному варианту пара последовательностей НСОК3/ЬСОК3 кодирована парой последовательностей нуклеиновой кислоты из ЗЕС) ГО N0: 7/15, 23/31, 163/171 или 223/231.
Согласно ещё одному варианту антитело или его фрагмент содержат также домен НСОК1, кодированный последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из ЗЕф ГО N0: 3, 19, 35, 51, 67, 83, 99, 119, 139, 159, 179, 199 и 219, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; домен НСОК2, кодированный последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из ЗЕф ГО N0: 5, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 121, 141, 161, 181, 201 и 221, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; домен ЬСОК1, кодированный последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из ЗЕф ГО N0: 11, 27, 43, 59, 75, 91, 107, 127, 147, 167, 187, 207 и 227, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; и домен ЬСОК2, кодированный последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из ЗЕф ГО N0: 13, 29, 45, 61, 77, 93, 109, 129, 149, 169, 189, 209 и 229, или, по существу, идентичной последовательностью, имеющей степень гомологии по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержат комбинацию НСОК1/НСОК2/НСОК3, кодированных ЗЕф ГО N0: 3/5/7, 19/21/23, 35/37/39, 51/53/55, 67/69/71, 83/85/87, 99/101/103, 119/121/123, 139/141/143, 159/161/163, 179/181/183, 199/201/203 или 219/221/223; и комбинацию ЬСОК1/ЬСОК2/ЬСОК3, кодированных ЗЕС ГО N0: 11/13/15, 27/29/31, 43/45/47, 59/61/63, 75/77/79, 91/93/95, 107/109/111, 127/129/131, 147/149/151, 167/169/171, 187/189/191, 207/209/211 или 227/229/231. Согласно одному из вариантов антитело или его фрагмент содержат последовательности СОК тяжёлых и лёгких цепей, кодированные комбинацией последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из ЗЕ(') ГО N0: 3/5/7/11/13/15, 19/21/23/27/29/31, 35/37/39/43/45/47, 51/53/55/59/61/63, 67/69/71/75/77/79, 83/85/87/91/93/95, 99/101/103/107/109/111, 119/121/123/127/129/131, 139/141/143/147/149/151,
159/161/163/167/169/171, 179/181/183/187/189/191, 199/201/203/207/209/211 и 219/221/223/227/229/231. Согласно другому варианту антитело или его антигенсвязывающая часть содержат последовательности СОК тяжёлых и лёгких цепей, кодированные комбинацией последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из ЗЕф ГО N0: 3/5/7/11/13/15, 19/21/23/27/29/31, 35/37/39/43/45/47, 51/53/55/59/61/63, 67/69/71/75/77/79, 119/121/123/127/129/131, 159/161/163/167/169/171 или
219/221/223/227/229/231. Согласно ещё одному варианту антитело или его антигенсвязывающая часть содержат последовательности СОК тяжёлых и лёгких цепей, кодированные комбинацией последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, ЗЕф ГО N0: 3/5/7/11/13/15, 19/21/23/27/29/31, 159/161/163/167/169/171 ог 219/221/223/227/229/231.
Согласно четвёртому аспекту изобретение предусматривает выделенные антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, которые специфически связывают МЫЛ, содержащий НСОК3 и ЬСОК3, при этом НСОК3 содержит аминокислотную последовательность формулы Х1 - Х2 - Х3 - Х4 - Х5 - Х6 Х7 - Х8 - Х9 - Х10 - Х11 - Х12 -Х13 - Х14 - Х15 - Х16 (ЗЕС ГО N0: 239), причём Х1 обозначает ТЬг или А1а, Х2 обозначает Ьук, Агд или отсутствует, Х3 обозначает С1и, С1у или отсутствует, Х4 обозначает Акр, Рго или отсутствует, Х5 обозначает Ьеи или отсутствует, Х6 обозначает Агд, Туг, С1и или отсутствует, Х7 обозначает С1у, Акр, А1а или отсутствует, Х8 обозначает Акр, Зег или Туг, Х9 обозначает Туг или Туг, Х10 обозначает Туг или Акр, Х11 обозначает Туг, Ьук или 11е, Х12 обозначает С1у, Туг, Акп, или Зег, Х13 обозначает Уа1, С1у или Зег, Х14 обозначает РЬе или Ме1, Х15 обозначает Акр, и Х16 обозначает Туг или Уа1; и указанная ЬСОК3 содержит аминокислотную последовательность формулы Х1 - Х2 - Х3 - Х4 - Х5 - Х6 - Х7 - Х8 - Х9 (ЗЕС ГО N0: 242), где Х1 обозначает С1п, Х2 обозначает С1п, Х3 обозначает Туг, Ьеи или РЬе, Х4 обозначает Шк, Туг или Акп, Х5 обозначает Агд или Зег, Х6 обозначает Зег, ТЬг или Туг, Х7 обозначает Тгр или Рго, Х8 обозначает РЬе, Ьеи или отсутствует, апк Х9 обозначает ТЬг.
Согласно другому варианту антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела содержат также последовательность НСОК1, включающую аминокислотную последовательность формулы Х1 - Х2 - Х3 - Х4 - Х5 - Х6 - Х7 - Х8 (ЗЕС ГО N0: 237), где Х1 обозначает С1у, Х2 обозначает РЬе, Х3 обозначает ТЬг, Х4 обозначает РЬе, Х5 обозначает Зег, Х6 обозначает ТЬг, Зег или Акп, Х7 обозначает Туг, и Х8 обозначает С1у, Тгр, Уа1 или А1а; последовательность НСОК2, включающую аминокислотную последовательность формулы Х1 - Х2 - Х3 - Х4 - Х5 - Х6 - Х7 - Х8 (ЗЕф ГО N0: 238), где Х1 обозначает 11е или Уа1, Х2 обозначает Зег или Ьук, Х3 обозначает С1у или С1и, Х4 обозначает ТЬг, Акр, Зег или Агд, Х5 обозначает С1у, Х6 обозначает Агд, Зег или С1у, Х7 обозначает ТЬг, С1и или Зег, и Х8 обозначает ТЬг или Ьук; последовательность ЬСОК1, включающую аминокислотную последовательность формулы Х1 - Х2 - Х3 - Х4 - Х5 - Х6 -Х7 - Х8 - Х9 - Х10 - Х11 - Х12 (ЗЕС ГО N0: 240), где Х1 обозначает С1п, Х2 обозначает ТЬг, Зег, А1а или С1у, Х3 обозначает 11е, Х4 обозначает Зег или Ьеи, Х5 обозначает Туг или отсутствует, Х6 обозначает Зег или отсутствует, Х7 обозначает Зег или отсутствует, Х8 обозначает Акп
- 6 030397
или отсутствует, Х9 обозначает Άδη или отсутствует, Х10 обозначает Ьув или отсутствует, XI1 обозначает 8ег, Αδη или ТЪг, и Х12 обозначает Тгр или Туг; и последовательность ЬСОК2, содержащую аминокислотную последовательность формул Х1 - Х2 - Х3 (8ЕЦ ГО N0: 241), где Х1 обозначает А1а, Тгр или 8ег, X2 обозначает А1а или ТЪг, и Х3 обозначает 8ег.
Согласно пятому аспекту данное изобретение предусматривает человеческое антитело против ТЬ1А или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие вариабельную область тяжёлой цепи (НСУК), кодированную сегментами нуклеотидной последовательности, полученными из последовательностей УН, ΌΗ и ГН зародышевых линий, и вариабельную область лёгкой цепи (ЪСУК), кодированную сегментами нуклеотидной последовательности, полученными из последовательностей УК и ГК зародышевых линий. Согласно некоторым вариантам антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат НСУК и ЬСУК, кодированные сегментами нуклеотидной последовательности, полученными из комбинации генов зародышевой линии, выбранных из группы, состоящей из: (ί) УН3-23, ЭН2-21. ГН4, УК1-5 и ГК1; (ίί) УН3-7, ОН1-7, ГН6, УК4-1 и 1К3; (ίίί) УН3-23, ОН2-2, ГН6, УК1-9 и ,)К2; (ίν) УН3-23, ОН6-6, Ш4, УК1-9 и ГК4; (ν) УН1-2, ОН2-15, Ш3, УК1-12 и ,)К4; (νί) УН4-34, ОН3-9, Ш4, УК3-20 и ,)К4; (νΐΐ) УН434, ОН1-1, ГН4, УК3-20 и ,)К4; и (νΐΐΐ) УН4-34, ОН3-3, Ш4, УК2-24 и Ж4.
Согласно шестому аспекту данное изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают ЪТЬ1А или РЪт с константой диссоциации (КО), равной примерно 1 нМ или менее, измеренной методом поверхностного плазмонного резонанса (например, В1АС0КЕ™). Согласно некоторым вариантам антитело по изобретению характеризуется КО равной примерно 800 пМ или менее, примерно 700 пМ или менее; примерно 600 пМ или менее; примерно 500 пМ или менее; примерно 400 пМ или менее; примерно 300 пМ или менее; примерно 200 пМ или менее; примерно 150 пМ или менее; примерно 100 пМ или менее; примерно 90 пМ или менее; примерно 80 пМ или менее; примерно 50 пМ или менее; или 30 пМ или менее. Согласно седьмому аспекту данное изобретение предусматривает антитело против ЪТЬ1А или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с белком ЪТЬ1А в 8ЕЦ ГО N0: 244, но не дают перекрёстную реакцию с его вариантом, таким как РЪт в 8ЕЦ ГО N0: 246, как показывает методы ЕЬ18А, поверхностного плазмонного резонанса или Битшех® хМАР® ТесЪпо1оду, описанные в данном изобретении. РЪт содержит одну аминокислотную замену в положении 167, соответствующую Ο1η в ЪТЬ1А, аргинином (см., например, патент США № 6521422). Согласно родственным вариантам изобретение предусматривает также антитело против ЪТЬ1А или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают белок ЪТЬ1А и дают перекрёстную реакцию с РЪт. Согласно ещё одному родственному варианту изобретение предусматривает также антитело против ЪТЬ1А или его антигенсвязывающий фрагмент, которые не дают перекрёстной реакции с мышиным ТЬ1А (тТЬ1А: 8ЕЦ ГО N0: 250, кодированным нуклеотидной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 249), но даёт перекрёстную реакцию с ТЬ1А макаки-крабоеда (Масаса Евс/сиЕнА или МГТБ1А: 8ЕЦ ГО N0: 248, кодированная последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 247) или макаки-резус (Масаса ти1айа: такая же аминокислотная последовательность, что и в МГТЬ1А). Согласно другим вариантам данное изобретение предусматривает антитело против ЪТЬ1А или его антигенсвязывающий фрагмент, которые дают перекрёстную реакцию и с тТЬ1А, и с МГТЬ1А. Данное изобретение охватывает также антитела против ЪТЬ1А с модифицированным паттерном гликозилирования. В некоторых случаях модификация для удаления нежелательного гликозилирования может быть полезной или, например, для удаления фрагмента фукозы для повышения клеточной цитотоксичности (АОСС), зависимой от антитела (см. 81ие1б е1 а1. (2002) ГВС 277:26733). В других случаях удаление сайта ^гликозилирования может уменьшить нежелательные иммунные реакции против терапевтических антител или увеличить аффинность антител. Согласно другим вариантам может быть произведена модификация галактозилирования для модификации цитотоксичости, зависимой от комплемента (СОС). Согласно восьмому аспекту данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей рекомбинантное человеческое антитело или его фрагмент, которые специфически связывают ЪТЬ1А, и фармацевтически приемлемый носитель. Согласно одному из вариантов данное изобретение относится к фармацевтической композиции, которая является комбинацией антитела или его антигенсвязывающего фрагмена по изобретению и второго терапевтического агента. Второй терапевтический агент может быть одним или более любыми агентами, такими как иммунодепрессанты, противовоспалительные агенты, анальгезирующие агенты, противоаллергические агенты и т.п., многие из которых имеют терапевтические эффекты, перекрывающиеся друг с другом. Подходящие иммунодепрессанты, которые могут применяться с антителами против ЪТЬ1А по изобретению, включают, но без ограничения, глюкокортикоиды, циклоспорин, метотрексат, интерферон β (ТР^-Ц), такролимус, сиролимус, азатиоприн, меркаптопурин, опиоиды, микофенолят, ТИР-связывающие белки, такие как инфликсимаб, этернасепт, адалимумаб и т. п., цитотоксичные антитела, такие как дактиномицин, антрациклины, митомицин С, блеомицин, митрамицин и т.п., антитела, нацеленные на иммунные клетки, такие как антитела против 0020, антитела против 003 и т.п. Подходящие противовоспалительные агенты и/или анальгетики для комбинированной терапии с антителами против ЪТЬ1А, включают кортикостероиды, нестероидные противовоспалительные средства (Е8АГО), такие как аспирин, ибупрофен, напроксен, ингибиторы Сох-2 и т.п., антагонисты ТХР-α, антагонисты 1Ь-1, антагонисты 1Ь-6, аце- 7 030397
таминофен, морфиномиметики и т.п. Подходящие противоаллергические агенты включают антигистаминные средства, глюкокортикоиды, эпинефрин (адреналин), теофиллин, натриевую соль кромолина и антилейкотриены, а также антихолинергические противоотёчные средства, стабилизаторы тучных клеток и т. п.
Согласно девятому аспекту данное изобретение относится к способам ингибирования активности МЫЛ с помощью антитела против МЫЛ или антигенсвязывающей части антитела по изобретению, при этом терапевтические способы включают введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела по изобретению, возможно вместе с одним или более терапевтическими агентами, описанными выше. Болезнь или расстройство, подвергающиеся лечению, представляют собой любую болезнь или расстройство, которое ослабляется, улучшается, ингибируется или предотвращается путём удаления, ингибирования или уменьшения активности ТЫЛ. Примеры болезней или расстройств, которые лечатся способами по изобретению, включают, но без ограничения, воспалительные заболевания и/или аутоиммунные заболевания, такие как воспалительные заболевания кишечника (1ВБ), включая ИС и СБ, КА, Μδ, диабет типа 1 и типа 2, псориаз, псориазный артрит, анкилозирующий спондилит, атопический дерматит и т.п.; аллергические реакции или состояния, включая астму, аллергическое воспаление лёгких и т.п.; рак, атеросклероз, инфекции, нейродегенеративные болезни, отторжение трансплантата, заболевание "трансплантат против хозяина" (СУНБ). сердечно-сосудистые нарушения/заболевания и т.п.
Прежде чем данное изобретение будет описано более подробно, следует отметить, что это изобретение не ограничивается конкретными способами и описанными экспериментальными условиями, так как эти способы и условия могут меняться. Следует также иметь в виду, что терминология, используемая в данной заявке, предназначена для описания только конкретных вариантов и не ограничивает данное изобретение, поскольку объём данного изобретения определяется только прилагаемой формулой изобретения. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данной заявке, имеют то же значение, которое известно среднему специалисту в данной области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя в практике осуществления данного изобретения могут быть использованы любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в данной заявке, ниже будут описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, упомянутые в данной заявке, полностью включены в неё посредством отсылок.
Определения.
Термин "человеческий ΤΝΕ-подобный лиганд-1А" или "(МЬ1А)", применяемый в данном описании, относится к ИЫА, имеющему последовательность нуклеиновой кислоты, представленную δΕΟ 1Б N0: 243, и аминокислотную последовательность, представленную δΕΟ 1Б N0: 244, или к его биологически активному фрагменту, а также к вариантам МЫА, включая РЬш, имеющий последовательность нуклеиновой кислоты δΕΟ 1Б N0: 245 и аминокислотную последовательность
δΕΟ 1Б N0: 246, или к его биологически активному фрагменту, если не указано иное.
Термин "антитело", применяемый в данном описании, относится к молекулам иммуноглобулина, состоящим из четырёх полипептидных цепей, двух тяжёлых (Н) цепей и двух лёгких (Ь) цепей, связанных дисульфидными связями. Каждая тяжёлая цепь состоит из вариабельного участка тяжёлой цепи (НСУК) и константного участка тяжёлой цепи (СН; содержащего домены СН1, СН2 и СН3). Каждая лёгкая цепь состоит из вариабельного участка лёгкой цепи (ЬСУК) и константного участка тяжёлой цепи (Сь).
НСУК и ЬСУК подразделяются на участки гипервариабельности, которые называются гипервариабельными участками (СБК), перемежающимися участками, которые являются более консервативными и называются каркасными участками (РК). Каждая НСУК и ЬСУК состоит из трёх СБК и четырёх РК, расположенных в направлении от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: РК1, СБК1, РК2, СБК2, РК3, СБК3 и РК4.
Возможны также замена одного или более остатков СБК или исключение одного или более СБК. В научной литературе описаны антитела, в которых один или два СБК не принимают участия в связывании. Раб1ап с1 а1. (1995 ΡΑδΕΒ 1. 9:133-139) анализировали контактные участки между антителами и их антигенами на основании опубликованных данных о кристаллических структурах, и пришли к выводу, что только от одной пятой до одной трети остатков СБК действительно контактируют с антигеном. Раб1ап также обнаружил многие антитела, в которых один или два СБК не содержат аминокислот, контактирующих с антигеном (см. также Уа)бо5 с1 а1., 2002, 1. Μο1. ΒίοΙ. 320:415-428). Остатки СБК, не контактирующие с антигеном, могут быть идентифицированы на основе данных предыдущих исследований (например, остатки Н60-Н65 в СБКН2 часто не требуются), по данным Кэбота, касающимся СБК, находящимся вне СБК по Хотиа, путём молекулярного моделирования и/или эмпирическим путём. Если СБК или его остаток(ки) исключён(ы), он обычно заменён аминокислотой, занимающей соответствующее положение в другой последовательности человеческого антитела или в консенсусных последовательностях. Положения для замены в СБК и аминокислотах также могут быть определены эмпирически. Эмпирические замены могут быть консервативными или неконсервативными заменами.
Термин "человеческое антитело", применяемый в данном описании, включает антитела, имеющие вариабельные и константные участки, полученные из последовательностей иммуноглобулинов человече- 8 030397
ских зародышевых клеток. Человеческие шАЬк по изобретению могут включать остатки аминокислот, не кодированные последовательностями иммуноглобулинов человеческих зародышевых клеток (например, мутации, включённые за счёт случайного или сайт-специфического мутагенеза ίη νίίτο или путём соматической мутации ίη νίνο), например в СОК и, в особенности, в СЭКЗ. Однако термин "человеческое антитело", применяемый в данном описании, не включает шАЬк, в которых последовательности СОК, полученных из зародышевой линии других млекопитающих (например, мыши) были привиты на последовательности человеческих РК. Полностью человеческие антитела против ТЫЛ, описанные в данном изобретении, могут содержать одну или более аминокислотных замен, инсерций и/или делеций на каркасном участке и/или СОК участках вариабельных доменов тяжёлой и лёгкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевых линий. Такие мутации могут быть легко определены путём сравнения аминокислотных последовательностей, описанных в данной заявке, с последовательностями зародышевых линий, доступными, например, из общедоступных баз данных о последовательностях антител. Данное изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые получены из любой аминокислотной последовательности, описанной в данной заявке, причём одна или более аминокислот в одном или более каркасных участках и /или в СОК мутированы в соответствующие остатки последовательности зародышевой линии, из которой получено антитело или в соответствующий остаток(ки) последовательности другой зародышевой линии человеческого происхождения, или в консервативные аминокислотные замены соответствующего остатка(ов) человеческой зародышевой линии (такие изменения в последовательностях называются в данном описании "мутациями зародышевой линии"). Средний специалист в данной области, имея в своём распоряжении последовательности вариабельных участков, описанные в данном изобретении, может легко получить многочисленные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или более одну или более отдельных обратных мутаций в зародышевой линии или их комбинации. Согласно некоторым вариантам данного изобретения все остатки каркасных участков и/или СОК в доменах Ун и/или Уъ мутированы обратно в остатки, обнаруженные в исходной последовательности зародышевой линии, из которой получено антитело. Согласно другим вариантам только некоторые остатки мутированы обратно в последовательность зародышевой линии, например, только мутировавшие остатки, обнаруженные в первых восьми аминокислотах РК1 или в последних восьми аминокислотах РК4, или только мутировавшие остатки, обнаруженные в СОК1, СОК2 или СОКЗ. Согласно другим вариантам один или более остатков каркасного участка и/или остатка(ов) СОК мутированы в соответствующие остаток или остатки другой последовательности зародышевой линии (т. е. последовательность зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой было первоначально получено антитело). Кроме того, антитела согласно данному изобретению могут содержать любую комбинацию двух или более мутаций в каркасном участке и/или в участках СОК, например, когда некоторые отдельные остатки мутированы в соответствующие остатки конкретной последовательности зародышевой линии, в то время как некоторые другие остатки, которые отличаются от последовательности зародышевой линии, сохраняются или мутированы в соответствующий остаток другой зародышевой линии. После получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или более мутаций зародышевой линии, могут быть легко протестированы на одно или более желательных свойств, таких как повышенная специфичность связывания, повышенная аффинность, улучшенные антагонистические или агонистические биологические свойства (если это такой случай), пониженная иммуногенность и т.д. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные, в общем, таким способом, охвачены данным изобретением.
Изобретение относится также к антителам против ТЬ1А, содержащим варианты любой из аминокислотных последовательностей НСУК, ЬСУК и/или СОК, описанных в данной заявке и имеющих одну или более консервативных замен. Например, данное изобретение включает антитела против ТЬ1А, имеющие аминокислотные последовательности НСУК, ЬСУК и/или СОК, например с 10 или менее, с 8 или менее, с 6 или менее, с 4 или менее, 2 или 1 консервативными аминокислотными заменами относительно любой из аминокислотных последовательностей НСУК, ЬСУК и/или СОК, описанных в данной заявке.
Если специально не указано иное, термин "антитело" (АЬ), применяемый в данном описании, следует понимать как охватывающий молекулы антител, содержащих две тяжёлых цепи иммуноглобулина и две лёгкие цепи иммуноглобулина (т.е. "молекулы полных антител"), а также их антигенсвязывающие фрагменты.
Термины "антигенсвязывающая часть" антитела, "антигенсвязывающий фрагмент" антитела и т.п., применяемые в данной области, включают любой полипептид или гликопротеин природного происхождения, получаемый ферментативным способом, синтетический или полученный генетически, которые специфически связывают антиген с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из молекул полного антитела с применением любых подходящих стандартных методов, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантная генная инженерия, включающие манипулирование и экспрессию вариабельных и (возможно) константных участков антитела, кодируемого ДНК. Такая ДНК известна и/или доступна, например, в коммерческих источниках, в библиотеках ДНК (включая, например, библиотеки антител с фаговым дисплеем) или же они могут быть синтезированы. ДНК может быть секвенирована и может управляться химическим способом или с при- 9 030397
менением методов молекулярной биологии, например, для получения вариабельных или константных доменов подходящей конфигурации или для введения кодонов, создания цистеиновых остатков, модификации, добавления или делеции аминокислот и т.д.
Неограничивающие примеры антигенсодержащих фрагментов включают: (ί) фрагменты РаЬ; (ίί) фрагменты Р(аЬ')2; (ίίί) фрагменты Ρά; (ίν) фрагменты Ρν; (ν) одноцепочечные молекулы Ρν (κοΡν); (νί) фрагменты ЙЛЬ и (νίί) минимальные единицы распознавания, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельный участок антитела (например, выделенный гипервариабельный участок (СОР), такой как пептид СОР3) или ограниченный пептид РР3-СОР3-РР4. Другие генноинженерные молекулы, такие как домен-специфические антитела, антитела с одним доменом, антитела с делецированными доменами, химерные антитела, СГОР-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, минитела, нанотела (например, моновалентные нанотела, бивалентные нанотела и т.д.), малые модулярные иммунофармацевтические средства на основе модульного белка модульного размера (8ΜΙΡ) и вариабельные домены ΙβΝΛΡ акул, также охвачены термином "антигенсвязывающий фрагмент", используемым в данной заявке. Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно содержит по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или любой состав аминокислоты и обычно содержит по меньшей мере один СОК, который расположен рядом или внутри рамки одной или более последовательностей каркасного участка в антигенсвязывающих фрагментах, имеющих домен Ун, связанный с доменом Уь. Оба домена Ун и Уъ могут быть расположены любым образом относительно друг друга. Например, вариабельный участок может быть димерным и содержать димеры УнУн,
Ун- Уь или Уь-Уь. Или же антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерные домены Ун или Уъ.
Согласно некоторым вариантам антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный с по меньшей мере одним константным доменом. Неограничивающие примеры конфигураций вариабельных и константных доменов, которые могут быть обнаружены в антигенсвязывающем фрагменте антитела по изобретению включают (Й Ун-Сн1; (Ц) Ун-Сн2; (ΐϋ) Ун-Сн3; (ίν) Ун-Сн1-Сн2; (ν) Ун-Сн1-Сн2-Сн3; (νΌ Ун-Сн2-Сн3; (νίί) Ун-Сь; (νίίί) Уь-Сн1; (ίχ) Уь-Сн2; (χ) У -С..3; (χί) Уъ-Сн1-Сн2; (χίί) Уъ-Сн1-Сн2-Сн3;
(χίίί) Уъ-Сн2-Сн3 и (χίν) Уь-Сь. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любую из конфигураций, указанных выше, вариабельные и константные домены могут быть или непосредственно связаны друг с другом, или могут быть связаны полным или частичным шарниром или линкером. Шарнирный участок может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, что приводит к образованию гибкой или полугибкой связи между соседними вариабельными и/или константными доменами в одной молекуле полипептида. Более того, антигенсвязывающий фрагмент антитела по изобретению может состоять из гомодимера или гетеродимера (или другого мультимера) любых конфигураций вариабельных и константных доменов, перечисленных выше, в нековалентной связи друг с другом и/или с одним или более мономерными доменами Ун или Уъ (например, с помощью дисульфидных связей).
Как и в случае молекул полного антитела, антигенсвязывающие фрагменты могут быть моноспецифическими или мультиспецифическими (например, биспецифическими). Мультиспецифический фрагмент антител обычно содержит по меньшей мере два различных вариабельных домена, причём каждый вариабельный домен способен к специфическому связыванию с отдельным антигеном или с различным эпитопом того же самого антигена. Любой формат мультиспецифического антитела, включая форматы биспецифического антитела, описанные в данном изобретении, может быть адаптирован для использования в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела по изобретению, с помощью обычных методов, известных из уровня техники.
Согласно некоторым вариантам антитело или фрагменты антитела по изобретению могут соединяться с терапевтическим веществом (иммуноконъюгат), таким как цитотоксин, химиотерапевтическое лекарство, иммунодепрессант или радиоизотоп. Термин "специфически связывается" и похожие термины означают, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который является довольно стабильным при физиологических условиях. Специфическое связывание может быть охарактеризовано равновесной константой диссоциации (Кс), равной примерно 3000 нМ или менее (т.е. меньшая величина К.) означает более сильное связывание), примерно 2000 нМ или менее, примерно 1000 нМ или менее; примерно 500 нМ или менее; примерно 300 нМ или менее; примерно 200 нМ или менее; примерно 100 нМ или менее; примерно 50 нМ или менее; примерно 1 нМ или менее; или примерно 0.5 нМ или менее. Способы определения наличия специфического связывания двух молекул хорошо известны из уровня техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с ЬТЬ1А, может проявлять кросс-реактивность с другими антигенами, такими как молекулы ТЬ1А из других видов, например, ТЬ1А макаки-крабоеда (§ЕЦ ГО ΝΟ: 248), и /или ТЬ1А мыши (8ЕЦ ГО ΝΟ: 250), и/или вариант ТЬ1А, такой как РЬт (8ЕЦ ГО ΝΟ: 246). Более того, мультиспецифические антитела (например, биспецифические), которые связываются с ТЬ1А и одним или более дополнительными антигенами, тем не менее счи- 10 030397
таются антителами, которые "специфически связываются" с МЬ1А.
Термин "высокая аффинность" антитела относится к таким антителам, которые имеют сродство к связыванию с ИГ1А, выраженное как Кс, равная примерно 1х10"9 М или менее, примерно 0.5х10"9 М или менее, примерно 0.25х10-9 М или менее, примерно 1х10-10 М или менее, или примерно 0.5х10-10 М или менее, по данным метода поверхностного плазмонного резонанса, например, В1АСОКЕ™ или метода определения аффинности в растворе ЕЫ8А.
Термин "Кс", используемый в данной заявке, относится к равновесной константе диссоциации при взаимодействии конкретного антитела с антигеном.
Термин "медленная скорость диссоциации", "Кой11 или "к,|" относится к антителу, которое диссоциирует из ИГ1А с константой скорости, равной 1х10-3 с-1 или менее, предпочтительно 1х10-4 с-1 или менее, как показывают данные метода поверхностного плазмонного резонанса, например В1АСОКЕ™.
Термин "константа внутренней аффинности" или "ка" относится к антителу, которое связывается с ИГ1А с константой скорости, равной примерно 1х103 М-1 с-1 или более, определённой методом поверхностного плазмонного резонанса, например В1АСОКЕ™.
Термин "выделенное антитело", применяемый в данном описании, относится к антителу, которое практически не содержит других тАЬз, имеющих другие величины антигенной специфичности (например, к выделенному антителу, которое специфически связывает ЬТЬ1А, практически не содержит АЬ, которые специфически связывают антигены, отличающиеся от МЫА). Однако выделенное антитело, которое специфически связывает МЫА, может иметь кросс-реактивность с другими антигенами, такими как молекулы ТЬ1А от других видов, таких как макака-крабоед и мышь, и/или варианты МЫ А, такие как РЬт.
Термин "нейтрализирующее антитело", применяемый в данном описании (или "антитело, которое нейтрализует активность ТЬ1А"), относится к антителу, связывание которого с ТЬ1А приводит к ингибированию по меньшей мере одного вида биологической активности ТЬ1А. Это ингибирование биологической активности ТЬ1А можно оценить путём измерения одного или более индикаторов биологической активности ТЬ1А по одному или более стандартов при проведении анализов ίη νίίτο или ίη νίνο а88ау8, известных из уровня техники (см. также примеры, приведённые ниже).
Термин "поверхностный плазмонный резонанс", применяемый в данном описании, относится к оптическому явлению, которое позволяет анализ биоспецифических взаимодействий в режиме реального времени путём детектирования изменений концентраций белка в биосенсорной матрице, например, с использованием системы В1АСОКЕ™ (РЬагтааа Вюзепзог АВ, Ирр8а1а, 8\уебеп апб Ркса1а\уау. Ν.Τ).
Термин "эпитоп" относится к участку антигена, который связан антигеном. Эпитопы могут быть определены как структурные или функциональные. Функциональные эпитопы обычно представляют собой набор структурных эпитопов и содержат такие остатки, которые вносят свой вклад в аффинность взаимодействия. Эпитопы могут быть также конформационными, т.е. состоящими из нелинейных аминокислот. Согласно некоторым вариантам эпитопы могут включать детерминанты, которые представляют собой химически активные группы молекул, таких как аминокислоты, боковые цепи сахаров, фосфорильные группы или сульфонильные группы и в некоторых случаях могут иметь специфические трёхразмерные структурные характеристики и/или специфические заряды.
Термины "существенная идентичность" или "по существу, идентичная", когда они относятся к нуклеиновой кислоте или её фрагменту, показывают в случае оптимального выравнивания с соответствующими нуклеотидными инсерциями или делециями с другой нуклеиновой кислотой (или её комплементарной нитью), что имеет место степень идентичности нуклеотидных последовательностей равная по меньшей мере примерно 90% и, более предпочтительно, по меньшей мере примерно 95, 96, 97, 98 или 99% нуклеотидных оснований, как измерено при помощи хорошо известного алгоритма идентичности последовательностей, такого как РА8ТА, ВЬА8Т или ОАР, описанных ниже. В случае полипептидов термины "существенное подобие" или "по существу подобные" означают, что две полипептидных последовательности, когда они оптимально выравнены, например, при помощи программ ОАР или ВЕ8ТР1Т с применением весов гэпов по умолчанию идентичны по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95, 98 или 99%. Предпочтительно, когда положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными заменами аминокислот.
Термин "консервативная замена аминокислот" относится к такой замене, в которой остаток аминокислоты заменён другим остатком аминокислоты, имеющим боковую цепь (группу К) с похожими химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В общем, консервативная замена аминокислоты не изменяет значительно функциональные свойства белка. В случаях, когда две или более аминокислотных последовательности отличаются друг от друга консервативными заменами, процент или степень подобия могут регулироваться в сторону повышения для корректирования консервативной природы замены. Средства для такого регулирования хорошо известны специалистам в данной области. См., например, публикацию Реагзоп (1994) МеШобз Мо1. Вю1. 24: 307-331, которая включена в данное описание посредством отсылки. Примеры групп аминокислот, которые содержат боковые цепи с подобными химическими свойствами, включают 1) алифатические боковые цепи: глицина, аланина, валина, лейцина
- 11 030397
и изолейцина; 2) алифатические гидроксилсодержащие боковые цепи: серина и треонина, 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагина и глутамина, 4) ароматические боковые цепи: фенилаланина, тирозина и триптофана; 5) основные боковые цепи: лизина, аргинина и гистидина; 6) кислые боковые цепи: аспартата и глутамата и 7) серосодержашие боковые цепи: цистеина и метионина. Предпочтительными консервативными заменами являются: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. Или же консервативная замена является любым изменением, имеющим положительную величину в логарифмической матрице подобия РАМ250, которая описана в публикации Соппе! е! а1. (1992), Зс1епсе 256:1443 45, включённой в данное описание посредством отсылки. "Умеренная консервативная замена" представляет собой любое изменение, имеющее неотрицательное значение в логарифмической матрице правдоподобия РАМ250.
Подобие последовательностей для полипептидов обычно измеряется с помощью программы анализа последовательностей. Программа анализа белков подбирает подобные последовательности, используя меры подобия для различных замен, делеций и других модификаций, включая консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение ССС содержит программы, такие как САР и ВЕЗТИТ, которые могут быть использованы с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близко родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды различных видов или организмов или между белком дикого типа и его мутеином. См., например, Версию 6.1 ССС. Полипептидные последовательности можно также сравнивать, используя программу РАЗТА с параметрами по умолчанию или с рекомендованными параметрами, программу ССС, версию 6.1. РАЗТА (например, РАЗТА2 и РАЗТА3) обеспечивает выравнивания и степень идентичности участков с лучшим перекрытием между поисковыми запросами и последовательностями поиска (Реагкоп, 2000, кирга). Другой предпочтительный алгоритм при сравнении последовательности по изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей из различных организмов, является компьютерная программа ВЬАЗТ, особенно ВЬАЗТР или ТВЬАЗТЫ, использующая параметры по умолчанию. См. источники А1!ксйи1 е! а1., 1990, 1. Мо1. Βίο1. 215: 403, 410,1997, Ыис1ею Атйк Кек. 25:3389 402, каждый из которых включён в данное описание посредством отсылки.
Под выражением "терапевтически эффективное количество" подразумевают количество, которое приводит к появлению желательного эффекта, для получения которого оно вводится. Точное количество зависит от цели лечения, возраста и роста субъекта, который подвергается лечению, способа введения и т.п. и определяется специалистом в данной области с помощью известных методик (см., например, Ь1оуй (1999) Тйе Аг!, Зтепсе апй Тесйпо1оду о£ Рйагтасеийса1 Сотроипйшд).
Получение человеческих антител.
Способы получения человеческих антител с использованием трансгенной мыши известны из уровня техники. Любой такой известный способ может быть использован в контексте данного изобретения для получения человеческих антител, которые специфически связываются с ТЬ1А.
Применяя технологию УЕЬОСГММиМЕ™ или любой другой известный способ получения моноклональных антител, вначале выделяют химерные антитела с высокой аффинностью, имеющие вариабельный участок человеческого происхождения и константный участок мыши. Как описано ниже в экспериментальной части, антитела характеризуются и отбираются по желаемым характеристикам, включая аффинность, селективность, эпитоп и т. п.
В целом, антитела по настоящему изобретению обладают очень высокой аффинностью, обычно имеют величину Кс от примерно 10-12 М до примерно 10-9 М, измеренную путём связывания с антигеном, или иммобилизованном в твёрдой фазе, или в растворе. Константные участки мыши заменяют желательными константными участками человеческого происхождения, например, 1дС1 дикого типа (ЗЕО ГО N0: 255) или 1§С4 (ЗЕО ГО N0: 256), или модифицированными 1дС1 или 1§С4 (например, 1§С4 с Зег-108 замещённым Рго, как показано в ЗЕО ГО N0: 257), для получения полностью человеческих антител по изобретению. Хотя выбранный константный участок может отличаться в зависимости от применения, антигенсвязывающие с высоким сродством свойства и целевые характеристики специфичности антител свойственны вариабельному участку.
Картирование эпитопов и родственные методы.
Для скрининга антител, которые связываются с конкретным эпитопом, можно осуществить эпитопперекрёстный конкурентный анализ, такой как описанный в публикации АпйЬоФек, Наг1о\у апй Ьапе (Со1й Зрппд НагЬог Ргекк, Со1й Зрппд Натй., ΝΥ).
Другие способы включают сканирующий аланином мутагенез, блот-анализ пептидов (Кетеке, 2004, Ме!йойк Мо1. Вю1. 248:443-63) (этот источник включён в данное описание посредством отсылки) или метод анализа расщепления пептидов. Кроме того, могут быть применены такие способы, как вырезание эпитопов, экстракция эпитопов и химическая модификация антигенов (Тотег, 2000, Рто1еш Зтепсе 9: 487-496) (этот источник полностью включён в данное описание посредством отсылки).
Термин "эпитоп" относится к сайту на антигене, на который дают ответ В- и Т-клетки. В-клеточные эпитопы могут образоваться как из заменимых аминокислот, так и из незаменимых аминокислот, помещённых рядом путём складывания белка в третичную структуру. Эпитопы, полученные из заменимых
- 12 030397
аминокислот, обычно остаются при действии денатурирующих растворителей, в то время как эпитопы, образовавшиеся при складывании в третичную структуру, обычно теряются при действии денатурирующих растворителей. Эпитоп обычно включает по меньшей мере 3 и чаще по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации.
Определение профиля с помощью модификации (МАР), известное также как определение профиля антител на основе структуры антигена (А8АР), представляет собой способ, который классифицирует большое число тАЬз, направленных против одного и того же антигена согласно подобию профилей связывания каждого антитела с химически или ферментативно модифицированными поверхностями антигена (заявка на патент США №2004/0101920, которая полностью включена в данное описание посредством отсылки). Каждая категория может отражать уникальный эпитоп, или полностью отличающийся, или частично перекрывающийся с эпитопом, представленным в другой категории. Этот способ позволяет осуществить быстрое фильтрование генетически идентичных тАЬз, таким образом, что характеризация может быть сфокусирована на генетически отличающихся тАЬз. При применении МАР для скрининга гибридом этот способ может облегчить идентификацию редких клонов гибридом, которые продуцируют тАЬз, имеющие желаемые характеристики. МАР можно применять для сортинга антител тАЬз против ТЫА на группы тАЬз, связывающие различные эпитопы.
Данное изобретение включает антитела против МЫЛ, которые связываются с тем же самым эпитопом, как и любое из конкретных антител, описанных в данной заявке. Точно так же данное изобретение включает антитела против МЫА, которые конкурируют за связывание с МЫА или с фрагментом ЬТЫА с любым из конкретных антител, описанных в данной заявке.
Можно легко определить, связывается ли антитело с тем же самым эпитопом, что и референсное антитело против МЫА или конкурирует с ним, используя обычные методы, известные из уровня техники. Например, для определения, связывается ли испытуемое антитело с тем же самым эпитопом, что и референсное антитело против ЬТЫА по изобретению дают референсному антителу связаться с белком или пептидом ЬТЫА в условиях насыщения. Далее, оценивается способность испытуемого антитела связываться с молекулой ЬТЫА. Если испытуемое антитело способно связываться с МЫА после насыщения связывания с референсным антителом против ЬТЫА, можно сделать вывод, что испытуемое антитело связывается с другим эпитопом, по сравнению с референсным антителом против ЬТЫА. С другой стороны, если испытуемое антитело не способно связываться с МЫ А после насыщения связывания с референсным антителом против ЬТЫА, можно сделать вывод, что испытуемое антитело может связываться с тем же самым эпитиопом, что референсное антитело против МЫА по изобретению.
Чтобы определить, конкурирует ли антитело за связывание с референсным антителом против ЬТЫА, осуществляют вышеописанную методику связывания в двух направлениях. По первому варианту дают референсному антителу связаться с молекулой МЫ А при условиях насыщения с последующей оценкой связывания испытуемого антитела с молекулой МЫА. По второму варианту дают испытуемому антителу связаться с молекулой МЫА при условиях насыщения с последующей оценкой связывания референсного антитела с молекулой МЫА. Если при осуществлении обоих вариантов только первое (насыщающее) антитело способно связываться с молекулой ТЫА, делают вывод, что испытуемое антитело и референсное антитело конкурируют за связывание с МЫА. Специалисту в данной области очевидно, что антитело, которое конкурирует с референсным антителом за связывание, необязательно может связываться с тем же эпитопом, что и референсное антитело, но может стерически блокировать связывание референсного антитела при связывании с перекрывающимся или соседним эпитопом (антигенной детерминантой).
Два антитела связываются с тем же самым или перекрывающимся эпитопом, если каждый конкурентно ингибирует (блокирует) связывание другого антитела с антигеном. Т.е. 1-, 5-, 10-, 20- или 100кратный избыток одного антитела ингибирует связывание другого антитела по меньшей мере на 50%, но предпочтительно на 75, 90 или даже на 99%, по данным конкурентно-связывающего анализа (см.. например, 1ипдЬапз е! а1., Сапсег Рез. 1990:50:1495-1502).
Альтернативно, два антитела имеют один и тот же эпитоп, если, по существу, все аминокислотные мутации в антигене, которые снижают или исключают связывание одного антитела, уменьшают или исключают связывание другого антитела. Два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы, если некоторые аминокислотные мутации, которые снижают или исключают связывание одного антитела, уменьшают или исключают связывание другого антитела.
Затем может быть проведено обычное рутинное экспериментирование (например, мутацию пептидов и анализ связывания) для выяснения, является ли наблюдаемое отсутствие связывания испытуемого антитела обусловленными связыванием с тем же эпитопом, что и у референсного антитела, или стерическое блокирование (или другое явление) ответственны за наблюдаемое отсутствие связывания. Такие эксперименты можно проводить, применяя ЕЬ18А, Р1А, поверхностный плазмонный резонанс, проточную цитометрию или другой количественный метод анализа связывания антитела, известный из уровня техники.
- 13 030397
Иммуноконъюгаты.
Данное изобретение относится также к человеческому моноклональному антителу против ТЫЛ, сопряжённому с терапевтическим веществом ("иммуноконъюгату"), таким как цитотоксин, химиотерапевтический агент, иммунодепрессант или радиоизотоп. Цитотоксины включают любой агент, который является вредным для клеток. Примеры подходящих цитотоксичных агентов и химиотерапевтических агентов, образующих иммуноконъюгаты, известны из уровня техники, см., например, заявку \νϋ 05/103081, которая включена в данное описание посредством отсылки.
Биспецифические антитела.
Антитела по данному изобретению могут быть моноспецифическими, биспецифическими (бифункциональными) или мультиспецифическими. Мультиспецифические тАМ могут быть специфичными к различным эпитопам одного целевого полипептида или могут содержать антигенсвязывающие домены, специфичные к более чем одному целевому полипептиду. См., например, Ти11 е! а1., 1991, 1. 1ттипо1. 147:60-69. Человеческие тАЬк могут быть связаны или соэкспрессированы с другой функциональной молекулой, например, молекулой другого пептида или белка. Например, антитело или его фрагмент могут быть функционально связаны (например, путём химического сочетания, генетического слияния, нековалентного соединения или другим образом) с одной или более другими молекулами, таким как другое антитело или фрагмент антитела, с образованием биспецифического или мультиспецифического антитела со вторым видом специфичности связывания. Примером формата биспецифического антитела, который может быть использован в контексте данного изобретения, является применение первого Сн3 домена иммуноглобулина (1д) и второго Сн3 домена 1д, причём первый и второй Сн3 домены отличаются друг от друга по меньшей мере одной аминокислотой, и различие в по меньшей мере одной аминокислоте снижает связывание биспецифического антитела с белком А по сравнению с биспецифическим антителом, у которого нет такого различия. Согласно одному из вариантов первый Сц3 домен 1§ связывает белок А, второй С ρ домен 1§ содержит мутацию, которая приводит к уменьшению связывания с белком А, например, модификацию Н95К (по системе 1МСТ нумерации экзонов, Н435К. по системе ЕЙ). Второй Сн3 может также содержать модификацию Υ96Ρ (по системе 1МСТ; Υ436Ρ -по системе ЕЙ). Другие модификации, которые могут быть во втором домене Сн3, включают Б16Е, Ь18М, N448, Κ52Ν, У57М и У821 (по системе 1МСТ; Б356Е, Ь358М, N3848, Κ392Ν, У397М и У4221 по системе ЕЙ) в случае антител 1§С1; N448, Κ52Ν и У821 (по системе 1МСТ; N3848, Κ392Ν и У4221 по системе ЕЙ) в случае антител 1§О2; и Р15К, N448, Κ52Κ У57М, Κ69Κ, Ы9С и У821 (по системе 1МСТ; Р355К, N3848, Κ392Κ У397М, Κ.409Κ, Е419Ц и У4221 по системе ЕЙ) в случае антител 1§О4. Варианты формата биспецифического антитела, описанные выше, входят в объём данного изобретения.
Биоэквиваленты.
Антитела и фрагменты антител против МЫ А согласно данному изобретению содержат белки, имеющие аминокислотные последовательности, которые отличаются от последовательностей описанных тАЬ, но сохраняют способность связывать человеческие ТЬ1А. Такой вариант тАЬ и фрагментов антител по данному изобретению содержит одно или более добавлений, одну или более делеций или замен аминокислот по сравнению с родительской последовательностью, но проявляют биологическую активность, которая, по существу, эквивалентна биологической активности описанных тАЬк. Точно так же последовательности ДНК, кодирующей тАЬ ЬТЫА согласно данному изобретению охватывают последовательности, которые содержат одно или более или более добавлений, одну или более делеций или замен в нуклеотидах по сравнению с описанной последовательностью, но кодируют антитело или фрагмент против ИГ1А, который, по существу, является биоэквивалентом антитела или фрагмента антитела против МЫ А согласно данному изобретению. Примеры таких вариантов аминокислотных последовательностей и последовательностей ДНК обсуждены выше.
Два антигенсвязывающих белка или антитела считаются биоэквивалентными, если, например, они являются фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, чьи скорость и степень абсорбции не отличаются значительно при введении в одной и той же мольной дозе при похожих условиях эксперимента с применением однократных или многократных доз. Некоторые антитела считаются эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, если они эквивалентны по степени их абсорбции, но не по скорости их абсорбции, но всё же могут считаться биоэквивалентами потому, что такая разница в скоростях абсорбции является намеренной и отражена в мечении и несущественна при достижении эффективных концентраций лекарства в организме, например, при постоянном использовании, и считается незначительной с медицинской точки зрения для изученного конкретного лекарства. Согласно одному из вариантов два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентами, если нет клинически значимой разницы в их безопасности, чистоте и активности.
Согласно одному из вариантов два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентами, если пациент один или два раза переходит с референсного продукта на биологический продукт без ожидаемого увеличения риска появления неблагоприятных эффектов, включая клинически значимое изменение в иммуногенности или уменьшение эффективности по сравнению с постоянной терапией без такого перехода.
- 14 030397
Согласно одному из вариантов два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентами, если они оба действуют по одному и тому же механизму или механизмам действия при условии или условиях применения, если такие механизмы известны.
Биоэквивалентность может быть продемонстрирована ίη νίνο и ίη νίίτο. Определение биоэквивалентности включает, например, (а) ίη νίνο тест на людях или других млекопитающих, когда концентрация антитела или его метаболитов измеряется в крови, плазме, сыворотке или в другой биологической жидкости в зависимости от времени; (б) ίη νίίτο тест, который был скоррелирован с данными ίη νίνο биодоступности человека; (в) ίη νίνο тест на людях или других млекопитающих, когда соответствующее мгновенное действие антитела (или его мишени) измеряется как функция времени; и (г) хорошо контролируемое клиническое испытание, которое позволяет определить безопасность, эффективность или биодоступность или биоэквивалентность антитела.
Биоэквивалентные варианты антител против МЫЛ согласно данному изобретению могут быть сконструированы, например, путём осуществления различных замен остатков или последовательностей или делеций концевых или внутренних остатков или последовательностей, не являющихся необходимыми для проявления биологичемской активности. Например, цистеиновые остатки, не являющиеся необходимыми для проявления биологической активности, могут быть удалены или заменены другими аминокислотами для предотвращения образования ненужных или неправильных внутримолекулярных дисульфидных мостиков после ренатурации.
Терапевтическое введение и составы.
Данное изобретение предусматривает терапевтические композиции, содержащие антитела против МЫЛ или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению, и терапевтические способы, использующие их. Введение терапевтических композиций в соответствии с данным изобретением осуществляется с подходящими носителями, эксципиентами и другими агентами, которые вводятся в составы для обеспечения улучшенных передачи, доставки, переносимости и т.п. Многие составы могут быть найдены в справочнике, который известен всем фармацевтам, а именно, ΒαηίηβΙοη'κ РЬагтасеи11са1 δοίοηοοκ. Маек РиЬПкЬшд Сю трапу, ΕακΙοη, РА. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, гели, воски, масла, липиды, липиды (катионные или анионные), содержащие везикулы (такие как ΕΙΡΟΡΕΟΠΝ™), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсии масло-в-воде и вода-в-масле, эмульсии в карбоваксе (в полиэтиленгликоле различных молекулярных весов), полутвёрдые гели и полутвёрдые смеси, содержащие карбовакс, см. также Ρο\\ό11 с1 а1., "ί.’οιηροη<ίίιιιη οί схарюШк ίοτ рагсШсга1 ΓοπηιιΕιΙίοηκ" ΡΌΑ, 199%, ί. Рйагт. §с1. ТесЬюк 52:238-311.
Доза зависит от возраста и роста субъекта, который подвергается лечению, вида болезни, цели лечения, условий, способа введения и т.п. Когда антитело по изобретению применяется для лечения состояний и болезней у взрослого пациента, которые непосредственно или косвенно связаны с ТЬ1А, включая воспалительные болезни/расстройства, аутоиммунные болезни/расстройства, аллергические реакции и т.п., лучше вводить антитело по изобретению внутривенно или подкожно с однократной дозой равной примерно от 0,01 до примерно 20 мг/кг веса, более предпочтительно от примерно 0,02 до примерно 7, примерно от 0,03 до примерно 5 или примерно от 0,05 до примерно 3 мг/кг веса. Частота и продолжительность лечения могут быть отрегулированы в зависимости от степени серьёзности заболевания. Согласно некоторым вариантам антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению могут вводиться с начальной дозой равной по меньшей мере от примерно 0,1 мг до примерно 800 г, от примерно 1 до примерно 500 мг, от примерно 5 до примерно 300 мг или от примерно 10 до примерно 200 мг, от примерно 100 или примерно 50 мг. Согласно некоторым вариантам за начальной дозой может вводиться вторая или множество последующих доз антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, которые могут быть примерно такими же или меньшими чем начальная доза, при этом последующие дозы вводятся с интервалом по меньшей мере от 1 до 3 дней, по меньшей мере равным 1 нед, по меньшей мере 2 нед, по меньшей мере 3 нед, по меньшей мере 4 нед, по меньшей мере 5 нед, по меньшей мере 6 нед, по меньшей мере 7 нед, по меньшей мере 8 нед, по меньшей мере 9 нед, по меньшей мере 10 нед, по меньшей мере 12 нед или по меньшей мере 14 нед.
Известны различные системы для доставки, и они могут быть использованы для введения фармацевтической композиции по изобретению, например применяются инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные к экспрессии мутантных вирусов, рецепторно-опосредованный эндоцитоз (см., например, Аи с1 а1., 1987, ί. ΒίοΙ. СЬет. 262:4429-4432). Методы введения включают, но не ограничиваются, интрадермальное введение, внутримышечное, интраперитонеальное, внутривенное, подкожное, интраназальное, эпидуральное и оральное введение. Композицию можно вводить любым подходящим способом, например путём инфузии или инъекции болюса, путём абсорбции через эпителиальные или кожно-слизистые оболочки (например, оральную слизистую оболочку, ректальную и кишечную слизистую оболочку и т.д.) и её можно вводить вместе с другими биологически активными агентами. Введение может быть системным или локальным.
Фармацевтическую композицию можно доставлять в везикуле, в частности в липосомных везикулах (см. Ьаидег, 1990, §с1еисе 249:1527-1533; Тгеа1 еί а1., 1989, ίη ^^рο5οте5 ίη 1Ье ТЬегару οί Ιη^Ιίοιικ Эткеаке амб Сатеет, Ецре/ Βе^е5ίе^и амб Ртб1ег (ебк.), Ьткк, №\ν ΥοιΈ р. 353-365; ^οреζ-Βе^е5ίе^и, там же
- 15 030397
рр. 317-327; см. там же).
В некоторых случаях фармацевтическая композиция может быть доставлена при помощи системы с пролонгированным высвобождением. Согласно одному из вариантов может быть использован насос (см. Ьапдег, кирга; 8ейоп, 1987, СКС Сгй. КеГ. Вютеб. Епд. 14:201). Согласно другому варианту могут быть применяться полимерные материалы, см. Мебюа1 Аррйсайопк оГ Сопйойеб Ке1еаке, Ьапдег апб Айе (ебк.), СКС Ргек., Воса РаЮп. Ыопба (1974). Согласно ещё одному варианту система с пролонгированным высвобождением может быть помещена вблизи мишени для композиции, тогда требуется только часть системной дозы (см., например, Сообкоп, ш Меб1са1 Аррйсайопк оГ Соп1го11еб Ке1еаке, кирга, уо1. 2, р. 115-138, 1984).
Препараты для инъекций могут включать лекарственные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и т.д. Эти препараты для инъекций могут быть приготовлены способами, которые широко известны. Например, препараты для инъекций могут быть приготовлены, например, путём растворения, суспендирования или эмульгирования антитела или его соли, описанных выше, в стерильной водной среде или в масляной среде, обычно применяемых при инъекциях. В качестве водной среды для инъекций применяют, например, физиологический раствор, изотоничный раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные агенты, например, которые могут быть использованы в комбинации с соответствующим солюбилизирующим агентом, таким как спирт (например, этанол), полиспирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, НСО-50 (аддукт полиоксиэтилена (50 мол) и гидрированного касторового масла)] и т.д. В качестве масляной среды применяют, например, кунжутное масло, соевое масло и т. д., которые можно применять в комбинации с солюбилизирующим агентом, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т.д. Полученный таким образом препарат для инъекций предпочтительно помещать в подходящие ампулы. Фармацевтическая композиция по изобретению может быть доставлена подкожно или внутривенно при помощи стандартной иглы и шприца. Кроме того, для подкожной доставки можно применять шприц-ручку для доставки фармацевтической композиции по изобретению. Такая шприц-ручка может быть многоразовой и одноразовой. Многоразовая шприц-ручка для доставки обычно включает многоразовый картридж, который содержит фармацевтическую композицию. Когда всё количество фармацевтической композиции в картридже введено и картридж становится пустым, его легко вынуть и вставить новый картридж, который содержит фармацевтическую композицию. После этого шприц-ручку можно снова использовать. В одноразовой шприц-ручке нет многоразового картриджа. Чаще одноразовая шприц-ручка уже заполнена предварительно фармацевтической композицией, содержащейся в резервуаре в устройстве. Как только резервуар опорожняется, это устройство выбрасывается.
Многочисленные ручки и шприцы для самоинъекции многократного использования применяются для подкожной доставки фармацевтической композиции по данному изобретению. Примеры включают, но без ограничения, АиТОРЕХ™ (0\уеп МитГогб, 1пс., Аообк1оск, ИК), О18ЕТК0№С™ реп (Ойейошс Мебюа1 8ук1етк, ВигдйбогГ, 8мШ7ег1апб), НИМЛЬ0С ΜΙΧ 75/25™ реп, НИМЛЬ0С™ реп, ΙΙΙΛ1ΆΙ.ΙΧ 70/30™ реп (Ей ЬШу апб Со., 1пб1апаройк, IX), Й0У0РЕХ™ I, II и III (№уо йогбЫс Сорепйадеп, Оептагк), N0У0РЕN Ш№0К™ (№уо йогбЫс Сорепйадеп, Оептагк), ΒΌ™ реп (Вес1оп Оюкшкоп, Ргапкйп Ьакек, N1), 0РТIРЕN™, 0РТIРЕN РК0™, 0РТIРЕN 8ТЛКЬЕТ™ и 0РТКиК1 ™ (8апой-ауепйк, РгаикТий, Сегтапу), это только немногие примеры. Примеры одноразовых шприц-ручек для подкожной доставки фармацевтической композиции по данному изобретению включают, но, конечно, без ограничения, 80Ь08ТЛК™ реп (8апой-ауепйк), 1йе ΡΡΡ.ΧΡΡΝ™ Щоуо УжИкк) и КАЖРЕХ™ (Ей ЬШу).
Фармацевтические композиции для орального и парентерального введения, описанные выше, преимущественно готовятся в виде лекарственных форм, в которых стандартная доза предназначена для доставки дозы активных ингредиентов. Такие лекарственные формы со стандартными дозами включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, препараты для инъекций (ампулы), суппозитории и т. д. Количество содержащегося антитела по изобретению обычно составляет от примерно 0.1 до примерно 800 мг на стандартную дозу лекарственной формы, особенно в случае препарата для инъекции, антитело по изобретению содержится в количестве от примерно 1 до примерно 500 мг, от примерно 5 до 300 мг, от примерно 8 до 200 мг и от примерно 10 до примерно 100 мг для других лекарственных форм.
Методы комбинированной терапии.
Данное изобретение предусматривает также терапевтические способы лечения болезней или расстройств, которые непосредственно или косвенно связаны с йТЬ1Л, путём введения тАй йТЬ1А или его фрагмента по изобретению в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами. Дополнительные терапевтические агенты могут быть одним или более агентами, которые предпочтительно соединены с антителом или его фрагментом по изобретению, включая иммунодепрессанты, противовоспалительные агенты, анальгетики, противоаллергены и т. п. Подходящие иммунодепрессанты включают, но без ограничения, глюкокортикоиды, циклоспорин, метотрексат, интерферон β (ΕΡΉ-β), такролимус, сиролимус, азатиоприн, меркаптопурин, опиоиды, микофенолят, ТЛЬ-связывающие белки, такие как инфликсимаб, этернасепт, адалимумаб и т.п., цитотоксичные антибиотики, такие как дактино- 16 030397
мицин, антрациклины, митомицин С, блеомицин, митрамицин и т.п., антитела, нацеленные на иммунные клетки, такие как антитела против СО20, антитела против СО и т.п. Подходящие противовоспалительные агенты и/или анальгетики для проведения комбинированной терапии вместе с антителами против ЬТЫА включают кортикостероиды, нестероидные противовоспалительные средства (МАЮ:), такие как аспирин, ибупрофен, напроксен, ингибиторы Сох-2 и т.п., ТЫР-α антагонисты (например, инфликсимаб или КЕМ1САОЕ®, СеШосог 1пс.; голимумаб, СеШосог 1пс.; этанерсепт или ЕМВКЕЬ®, АтдепЛУуеШ; адалимумаб или НИМ1КА®, АЬЬой ЬаЬога1опе8 и т.п.), 1Ь-1-антагонисты (например, 1Ь-1-свяхзывающие белки слияния, например, АКСАЬУЗТ®, Кедепегоп Рйагтасеийсак, 1пс., см. патент США № 6927044; ΚΙМЕКЕТ®, Атдеп и т.п.), 1Ь-6-антагонисты (например, антитела против рецептора 1Ь-6, такие как описанные в патенте США № 7582298, и АСТЕМКА®, Косйе), ацетаминофен, морфиномиметики и т.п.
Подходящие противоаллергены, которые могут блокировать действие аллергенных медиаторов или предотвращать активацию клеток и процессы дегранулирования, включают антигистаминные средства, глюкокортикоиды, эпинефрин (адреналин), теофиллин, натриевую соль кромолина и антилейкотриены, такие как монтелукаст (§1ЫСиЕА1К® Ьу Мегск) или зафирлукаст (АССОЬАТЕ® Ьу АМпШепеса). а также антихолинергические агенты, противозастойные средства, стабилизаторы тучных клеток и другие соединения, которые могут ослаблять хемотаксис эозинофилов.
Антитело тАЬ ЬТЬ1А или его фрагмент по данному изобретению и дополнительные терапевтические агенты могут вводиться вместе или раздельно. Когда применяются отдельные лекарственные формы, антитело или его фрагмент по изобретению могут вводиться одновременно или по отдельности в разное время, т.е. последовательно в соответствующем порядке.
Примеры
Следующие ниже примеры приведены для ознакомления специалистов в данной области с полным описанием того, как осуществлять и применять способы и композиции по изобретению и не ограничивают объём того, что изобретатели считают своим изобретением. При этом изобретатели пытались обеспечить точность указанных количеств, но следует учитывать возможные ошибки и отклонения. Если иное не указано, молекулярный вес указан как средний молекулярный вес, температура приведена в градусах Цельсия и давление является атмосферным или близким к нему.
Пример 1. Получение антител человеческого происхождения против человеческого ТЬ1А.
Мыши линии УЕЕОЫММиЖ™ были иммунизированы человеческим ТЬ1А и затем проводили мониторинг иммунного ответа на антитело методом антигенспецифического иммуноанализа, используя сыворотку, полученную от этих мышей. В-клетки, экспрессирующие антитело против ЬТЬ1А, собирали из селезёнки иммунизированных мышей, которые имели повышенные титры антитела против МЫ А, осуществляли их слияние с клетками миеломы мыши с образованием гибридом. Затем гибридомы подвергали скринингу и выбирали их для идентификации клеточных линий, экспрессирующих антитела, специфичные к МЬ1А, используя способы анализа, описанные ниже. Эти анализы позволили идентифицировать несколько клеточных линий, которые продуцировали химерные антитела против ЙТЬ1А, обозначаемые Н2М168Ш, Н2М1704Ы, Н2М1804Ы, Н2М1805Ы, Н2М1817Ы и 112X11818% Эти антитела позже превращали в изотип ЫдО4 путём замены соответствующих константных участков мыши аминокислотной последовательностью ЫдО4 (8ЕЦ ΙΟ N0: 257), которая содержит мутацию 8108Р в шарнирной области, они обозначается как Н4Н168Ш, Н4Н1704М, 114111804% 114111805% Н4Н1817М и Н4Н1818М, соответственно.
Человеческие антитела, специфические к ТЬ1А, были также выделены непосредственно из антигениммунизированных В-клеток без слияния с клетками миеломы, как описано в патенте США № 7582298, который включён в данное описание посредством отсылки. Вариабельные области тяжёлой и лёгкой цепей были клонированы с получением полностью человеческих антител против МЫ А, обозначаемых Н4Н1719Р, Н4Н1725Р, Н4Н1738Р, Н4Н1742Р, Н4Н1745Р, Н4Н1750Р и Н4Н1752Р. Были получены стабильные рекомбинантные экспрессирующие антитела линии СНО-клеток.
Пример 2. Анализ использования генов вариабельного участка.
Для анализа структуры полученных антител были клонированы и секвенированы вариабельные области антител, кодируемых нуклеиновой кислотой. По последовательности нуклеиновой кислоты и предполагаемой аминокислотной последовательности антител было определено использование генов для каждой вариабельной области тяжёлой цепи (НСУК) и вариабельной области лёгкой цепи (ЬСУК). В табл. 1 показано использование генов при получении выбранных антител по изобретению.
- 17 030397
Таблица 1
Антитело НСУК ЬСУК
Ун ϋΗ «Гн Ук «Гк
Н2М1704 3-7 1-7 6 4-1 3
Н2М1681 3-23 2-21 4 1-5 1
Н2М1817 4-34 3-9 4 3-20 4
Н2М1804 4-34 1-1 4 3-20 4
Н2М1818 3-11 4-17 6 4-1 1
Н2М1805 4-34 3-3 4 2-24 4
Н4Н1719 3-9 3-3 6 2-28 2
Н4Н1725 1-2 2-15 3 1-12 4
Н4Н1738 3-15 4-4 6 2-28 2
Н4Н1742 3-23 2-2 6 1-9 2
Н4Н1745 3-23 6-6 4 1-9 4
Н4Н1750 3-30 4-17 6 1-17 1
Н4Н1752 3-23 1-7 4 1-5 1
В табл. 2 приведены пары аминокислотных последовательностей вариабельных областей тяжёлой и лёгкой цепей в выбранных антителах против НТЕ1А и соответствующие идентификаторы антител. Буквы N и Р относятся к антителам, содержащим тяжёлые и лёгкие цепи с идентичными последовательностями СЭК, но с вариациями последовательностей в участках за пределами последовательностей СЭК (т.е. в каркасных областях). Таким образом, N и Р варианты конкретного антитела имеют идентичные последовательности СЭК в их вариабельных областях тяжёлых и лёгких цепей, но содержат модификации в каркасных областях.
Таблица 2
Название НСУК/ЬСУК Название НСУК/ЬСУК
шЛЬ 8ЕЦ П) N08 шЛЬ (Н2М- 8ЕО ГО N08
(Н2М- или Н4Н-) или Н4Н-)
1704Ν 2/10 1738Ν 138/146
1681Ν 18/26 1738Р 154/156
1804Ν 34/42 1745Ν 158/166
1805Ν 50/58 1745Р 174/176
1817Ν 66/74 1750Ν 178/186
1818Ν 82/90 1750Р 194/196
1719Ν 98/106 1752Ν 198/206
1719Р 114/116 1752Р 214/216
1725Ν 118/126 1742Ν 218/226
1725Р 134/136 1742Р 234/236
Пример 3. Определение аффинности ТБ1А.
Аффинность (константы связывания антител) и кинетические константы определяли методом поверхностного плазмонного резонанса при температурах 25 и 37°С, как указано в табл. 3-5, при связывании человеческих моноклональных антител против ТБ1А со следующими вариантами ТБ1А: человеческое (й) (экспрессированное в СН0, остатки 72-251 последовательности δΕΟ ГО N0: 244, с Ы-концевой меткой Н186), макаки-крабоеда (Μί) (экспрессированное в Б.сой, остатки 72-251 последовательности δΕ^ ГО N0: 248, с И-концевым Ме! или без него), макаки-крабоеда (экспрессировано в СН0, остатки 72251 последовательности δΕΟ ГО N0: 248, с К-концевой меткой Н156), мышиное (т) (экспрссировано в Б.сой, остатки 76-252 последовательности δΕΟ ГО N0: 250, с ^концевым Ме! или без него), мышиное (экспрессировано в СН0, остатки 76-252 последовательности δΕΟ ГО N0: 250, с ^концевой меткой Н186) и крысиное (экспрессировано в СН0; остатки 76-252 последовательности δΕΟ ГО N0: 258, с
- 18 030397
Шконцевой меткой Шк6). Константы связывания определяли также для РЬт варианта ЬТЫА (экспрессировано в Е.соН, остатки 72-251 последовательности ЗЕф ГО N0: 246, содержащей замену О167К. с Шконцевым Ме! или без него). Измерения проводили на приборе Т100 В1АС0КЕ™.
Антитела, экспрессированные либо с Рс областью мышиного иммуноглобулина (обозначенной префиксом Н2М), либо с Рс областью человеческого 1дС4(З108Р) (обозначенной префиксом "Н4Н"), улавливались на поверхности сенсора с антителами против Рс, и растворимые белки ТЬ1А по меньшей мере в трёх различных концентрациях от 1,25 до 100 нМ разбрызгивали по поверхности сенсора. Кинетические константы скорости ассоциации (ка) и диссоциации (кк) определяли, корректируя данные в соответствии с моделью связывания 1:1 с использованием программы аппроксимации кривых В1Аеуа1иайоп 4.1 (В1Асоге ЬКе Заепсек). Молярные концентрации ТЫА/РЬт, применявшиеся для аппроксимации данных, предполагали мономерное состояние ТЬ1А в растворе.
Равновесные константы диссоциации (Кс) и периоды полужизни (ί1/2) рассчитывали, исходя из кинетических констант скоростей как
К (М) = ка/ка и ί1/2 (мин) = |1п2/(60хк,|)|.
ИВ - в условиях тестирования связывание не наблюдается; NТ - в данном эксперименте не проверялся; * - подобранные значения кк ниже 1х10-6 (1/с) ниже предела обнаружения в этих экспериментальных условиях; поэтому значения были приняты кк равные 1х10-6 (1/с) с целью аппроксимации Кк и ί1/2; ** - равновесные константы диссоциации для антител определяли в стационарных условиях.
Как показано в табл. 3 и 4, антитела связывались с высокой аффинностью с
СН0-экспрессируемыми формами как человеческих, так и обезьяньих ТЬ1А белков при 25°С (13 и 12 с К[.)<1 нМ соответственно) и при 37°С (13 и 12 антител с Кс<1 нМ соответственно). Антитело Н4Н1750Р связывалось значительно слабее с обезьяньим ТЬ1А белком по сравнению с человеческим ТЬ1А белком. Антитело Н4Н1704N связывалось с СН0-экспрессированным шТЬ1А с Кс<2 нМ как при 25°С, так и при 37°С. Антитело Н4Н1818N связывало СН0-экспрессированный шТЬ1А при 25°С (Кс~7 нМ), но не при 37°С. Пять антител, Н4Н168Ш, Н4Н1738Р, Н4Н1750Р, Н4Н1752Р и Н4Н1805Ы, не связывались с СН0экспрессированным крысиным ТЬ1А ни при 25°С, ни при 37°С; другие восемь антител связывались с крысиным ТЬ1А при обеих температурах с Кс в интервале от ~0.6 до ~16 пМ.
Как показано в табл. 5, три антитела (Н2М168Ш, Н4Н1752Р и Н2М1805Щ не обнаружили связывания с экспрессированным в Е.соН вариантом РЬт [ЬТЬ1 А(Щ167К)| при условиях теста. Три антитела (Н2М1704N, Н4Н1725Р и Н2М1818Щ демонстрировали слабое связывание (Кс в пределах от ~0 до ~170 нМ) с мышиным ТЬ1А, экспрессированным в Е.соН в условиях стабильного состояния, в то время как все другие испытанные антитела не связывались с белком мышиного ТЬ1А в испытанных условиях.
- 19 030397
Таблица 3
тАЬ ТЫА, жспрессированные в СНО при 25 0 С
ЬТЫ А Ко (пМ) ЬТЫ А Ϊ1/2 (мин) ЧП'1,1 А Ко (пМ) мггы А Ϊ1/2 (мин) тТЫ А Ко (пМ) тТЫ А Ϊ1/2 (мин) гТЫ А Ко (пМ) гТЫ А Ϊ1/2 (мин)
Н4Н1681 N 263 36 404 25 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1704 N 39.2 453 59.9 276 194 46 404 25
Н4Н1719Р 481 44 417 45 ΝΒ ΝΒ 364 38
Н4Н1725Р 63.6 185 346 64 ΝΒ ΝΒ 317 26
Н4Н1738Р 608 64 361 93 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1742Р 60.4 755 115 577 ΝΒ ΝΒ 78 144
Н4Н1745Р 164 172 115 231 ΝΒ ΝΒ 2.7 (пМ) 4
Н4Н1750Р 15.8* 11550* 8.6 (пМ) 21 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1752Р 156 197 213 139 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1804 N 291 51 264 49 ΝΒ ΝΒ 321 43
Н4Н1805 N 365 73 342 74 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1817 N 321 103 356 92 ΝΒ ΝΒ 2.5 (пМ) 25
Н4Н1818 N 124 120 119 122 7.1 (пМ) 12 88 92
- 20 030397
Таблица 4
шЛЬ ТЫА, экспрессированные в СНО при 37 0 С
ЬТЫ А Ко (нМ) ЬТЫ А <1/2 (мин) ΜΠΊ.Ι А Ко (пМ) мггы А Ц/2 (мин) шТЫ А Ко (пМ) шТЫ А Ц/2 (мин) гТЫ А Ко (пМ) гТЫ А Ц/2 (мин)
Η4Η168Ν 254 31 226 32 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Η4Η170Ν 1.00* 11550* 0.93* 11550* 1.3 (пМ) 27 46 133
Н4Н1719 Р 7.61 1912 2.01 5784 ΝΒ ΝΒ 78 86
Н4Н1725 Р 23.9 758 17.7 888 ΝΒ ΝΒ 411 15
Н4Н1738 Р 571 51 465 60 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1742 Р 4.37* 11550* 4.45* 11550* ΝΒ ΝΒ 653 27
Н4Н1745 Р 177 129 173 124 ΝΒ ΝΒ 16.5 (пМ) 11
Н4Н1750 Р 13.8* 11550* 17.1 (пМ) 11 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1752 Р 225 96 223 91 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Η4Η180Ν 45.8 286 78 167 ΝΒ ΝΒ 127 88
Η4Η180Ν 299 80 352 68 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Η4Η181Ν 27.8 1098 25.6 1150 ΝΒ ΝΒ 1.6 (пМ) 26
Η4Η181Ν 0.925* 11550* 0.804* 11550* ΝΒ ΝΒ 0.61* 11550 *
Таблица 5
тАЬ РЬт/ТЫА, экспрессированные в клетках Е. соН
25 “С 37°С 25 “С 37°С 25°С
РЬт Ко (пМ) РЬт Ц/2 (мин) РЬт Ко (пМ) РЬт Ц/2 (мин) МГГЫА Ко (пМ) МГГЫА Ц/2 (мин) МГГЫА К η (пМ) МГГЫА Ц/2 (мин) тТЫА Ко (пМ)**
Η2Μ1681Ν ΝΒ ΝΒ ΝΤ ΝΤ 546 54 1.5 (пМ) 14 ΝΒ
Η2Μ1704Ν 282 52 ΝΤ ΝΤ 285 57 751 16 127 (пМ)
Н4Н1719Р 109 96 174 42 242 79 289 40 ΝΒ
Н4Н1725Р 28.9 447 43.6 194 63.7 292 62.2 174 62 (пМ)
Н4Н1738Р 1020 19 3100 4 1360 18 4.2 (пМ) 4 ΝΒ
Н4Н1742Р 437 129 696 45 593 97 945 35 ΝΒ
Н4Н1745Р 115 226 207 71 141 221 281 74 ΝΒ
Н4Н1750Р 204 623 244 335 52.7 (пМ) 4 456 (пМ) 1 ΝΒ
Н4Н1752Р ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ 274 122 1320 29 ΝΒ
Η2Μ1804Ν 192 108 ΝΤ ΝΤ 176 172 218 118 ΝΒ
Η2Μ1805Ν ΝΒ ΝΒ ΝΤ ΝΤ 345 67 439 36 ΝΒ
Η2Μ1817Ν 451 57 ΝΤ ΝΤ 1250 37 1.0 (пМ) 30 ΝΒ
Η2Μ1818Ν 1080 17 ΝΤ ΝΤ 1840 10 4.1 (пМ) 3 171 (пМ)
- 21 030397
Пример 4. Ингибирование ТЫА антителами против ЬТЫ А.
Были получены линии клеток НЕК293 (СКК01573, АТСС) для осуществления стабильной экспрессии человеческого ИК3 (полной длины; 8ЕЦ ГО N0 : 252) или мышиного ИК3 (полной длины; 8Е0 ГО N0: 259) вместе с репортёром люциферазы [ЛРкВ чувствительный элемент (5х)-люциферазы1КЕ8-0РР]. ИРкВ-активация ТЬ1А была описана ранее (М1допс с! а1., 2002, 1ттипЪу 16:479-492). Для тестирования связанного с мембраной ТЬ1А и вариантов ТЬ1А получали линии клеток НЕК293, которые стабильно экспрессируют человеческий ТЬ1А полной длины (8ЕЦ ГО N0: 244), человеческий ТЬ1А полной длины с О1п-167, заменённым Агд [РЬт; ТЬ1А(Ц167К); 8ЕЦ ГО N0: 246], ТЬ1А полной длины от макаки-крабоеда, Масаса ГаксюЫапк (МГТЫА; 8ЕЦ ГО N0: 248), мышиный ТЬ1А полной длины (8ЕЦ ГО N0: 250) и крысиный ТЬ1А полной длины (8ЕЦ ГО N0: 258). Стабильные клеточные линии выделяли и выдерживали в 10% фетальной бычьей сыворотке (РВ8; 1гушс 8с1спЬйс), дополненной модифицированной по способу Дульбекко средой Игла (ИМЕМ; 1гушс 8с1спЬйс), незаменимыми аминокислотами (ИЕАА; 1гу1пс 8с1спЬйс), пенициллином/стрептомицином (1пуйгодсп) и 0418 (1пуЬгодсп).
Для проведения биоанализа клетки человеческого или мышиного репортёра ИК3 высевали в 96-луночный планшет с концентрацией 1х104 кл/лунку в среде с низким содержанием сыворотки, т.е. 0,1% РВ8 и 0РТ1МЕМ® (1пуйгодсп), и инкубировали при температуре 37°С в присутствии 5% С02 в течение ночи. На следующий день растворимый ТЬ1А или РЬт (кТЫА или кРЬт) последовательно разводили в отношении 1:3 и добавляли к клеткам с концентрациями в пределах от 0,002 до 100 нМ (плюс контрольное буферное вещество, не содержащее ТЬ1А). Для осуществления ингибирования антитела последовательно разводили в отношении 1:3 и добавляли к клеткам в концентрациях в пределах от 0,002 до 100 нМ (плюс контрольное буферное вещество, не содержащее антитела) в присутствии постоянных концентраций ТЬ1А или РЬт: 800 пМ МЫА (экспрессирован в СН0-клетках; остатки 72-251 в последовательности 8Е0 ГО N0: 244, с ^концевой меткой Н1к6), 100 пМ ИЫА (экспрессирован в Е.соЬ; остатки 72-251 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 244, с ^концевым Мс! или без него), 500 пМ РЬт (экспрессирован в СН0-клетках; остатки 72-251 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 246), 400 пМ МГТЫА (экспрессия в СН0-клетках; остатки 72-251 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 248,) с ^концевой меткой Н156), 400 пМ МГТЫА (экспрессия в Е.соЬ; остатки 72-251 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 248,), с ^концевым Мс! или без него), 50 пМ мышиного ТЫА (экспрессия в СН0-клетках; остатки 76-252 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 250, с ^концевой меткой Н1к6), 20 пМ мышиного ТЫА (экспрессия в Е.соЬ; остатки 76-252 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 250, с ^концевым Мс! или без него) и 50 пМ крысиного ТЫА (экспрессия в СН0-клетках; остатки 76-252 в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 258, с ^концевой меткой Н|к6). Активность люциферазы была обнаружена после инкубации в течение 5,5 ч при 37°С в присутствии 5% С02. Результаты показаны в табл. 6. Контрольное тАЬ1: положительный контроль (антитело против ЬТЫА с вариабельными доменами тяжёлой и лёгкой цепи, содержащими аминокислотные последовательности, соответствующие 8ЕЦ ГО N08: 21 и 27 в заявке США на патент №2009/0280116); контрольное тАЬ2: отрицательный контроль (иррелевантное антитело); ИВ - при описанных условиях связывания нет; NТ - испытание не проводилось; * - ингибирование в исходном состоянии при самой высокой концентрации равной 100 нМ не происходило.
- 22 030397
Таблица 6
«ТЫА или «РЬт ЬТЫА (СНО) ЬТЫА (Е. соН) РЬт (СНО) ΜΙΤ1.1Λ (СНО) ΜΙΤ1.1Λ (Е. соН) тТЫА (СНО) тТЫА (Е. соН) гТЫА (СНО)
ЕС50 (нМ) 0.63 0.12 0.32 0.86 2.02 0.08 0.01 0.06
ТЬ1А или РЬт
константного 800 100 500 400 400 50 20 50
уч.(пМ)
Η4Η1681Ν 0.17 0.02 ΝΒ 0.03 0.02 ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Η4Η1704Ν 0.13 0.06 0.17 0.01 0.03 ΝΒ ΝΒ 0.40
Η4Η1804Ν 0.07 0.03 0.10 0.03 0.02 ΝΒ ΝΒ 3.64
Η4Η1805Ν 0.10 0.04 185.50* 0.03 0.02 ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Η4Η1817Ν 0.11 0.04 0.12 0.04 0.02 ΝΒ ΝΒ 23.87
Η4Η1818Ν 0.37 0.29 0.62 0.13 0.06 ΝΒ ΝΒ 1.10
Н4Н1719Р 0.06 0.02 0.08 0.01 0.02 ΝΤ ΝΒ ΝΤ
Н4Н1725Р 0.05 0.02 0.07 0.01 0.02 ΝΒ ΝΒ 63.43
Н4Н1738Р 0.39 0.16 0.33 0.39 0.07 ΝΤ ΝΒ ΝΤ
1С50 Н4Н1742Р 0.31 0.19 0.53 0.26 0.07 ΝΒ ΝΒ 6.12
[нМ] Н4Н1745Р 0.09 0.06 0.15 0.05 0.03 ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Н4Н1750Р 0.90 2.17 3.10 154.70 32.47* ΝΤ ΝΒ ΝΤ
Н4Н1752Р 0.36 0.21 ΝΒ 0.12 0.05 ΝΤ ΝΒ ΝΤ
Контр. шАЫ ΝΒ 0.74 ΝΒ ΝΒ 3.25 ΝΤ ΝΒ ΝΤ
Контр.1 шАЬ2 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΤ ΝΒ
Как видно из табл. 6, тринадцать антител против ТБ1А ингибировали стимуляцию растворимым человеческим ТБ1А (экспрессия в СН0-клетках и в Е.соН человеческого рецептора 1Ж3, экспрессированного в клетках НЕК293, как было определено с применением люциферазного репортёра для активации №кВ. Контрольное положительное антитело (контрольное тАЬ1) ингибировало НТБ1А, экспрессированный в Е.соН и не ингибировало НТЕ1А, экспрессированный в СН0-клетках. Десять антител также ингибировали стимуляцию клеток, экспрессирующих НБК3, РНт (НТБ1А сН ^167Κ). Н4Н168Ш, Н4Н1805N и Н4Н1752Р неполностью ингибировали РНт при самой высокой концентрации равной 100 нМ. Все тринадцать антител также блокировали М1ТБ1А (табл. 6). Мышиный ТБ1А (полученный как из клеток СН0, так и из Е.соН) стимулировал активацию №кВ в клетках репортёра НОК3; однако ни одно из 13 антител против человеческого ТБ1А не ингибировало мышиный ТБ1А, экспрессированный в Е.соН (табл. 6). Затем тестировали девять отобранных антител, эти антитела не блокировали мышиный ТБ1А, экспрессированный в СН0-клетках (табл. 6).
Для определения способности ТБ1А, экспрессированного в клетках, стимулировать активацию сигнального пути в системе репортёра Н1Ж3 проводили биотесты, как описано выше для растворимого ТБ1А со следующими изменениями.
Прилипающие клетки НЕК293/ТБ1А разъединяли, используя, раствор для диссоциации клеток, свободный от ферментов (СНетюоп) и добавляли к прилипающим клеткам репортёра Н1Ж3 после последовательного разведения клеток ТБ1А в отношении 1:2, начиная от концентрации 2х105 клеток до 195 клеток (плюс контрольный образец без клеток). Для осуществления ингибирования антителами 1 х104 клеток добавляли вместе с последовательно разведёнными антителами от 100 до 0,002 нМ (плюс контрольный образец без клеток). Результаты показаны в табл. 7. Контрольные тАЬ1 и тАЬ2: как описано 5.5 ч выше. ЯВ - при описанных условиях связывания нет; ЫТ - испытание не проводилось; * - ингибирование в исходном состоянии при самой высокой концентрации равной 100 нМ не происходило.
- 23 030397
Таблица 7
Связанный с клетками ТЫА или РЬт НЕК293 / ЬТЫА НЕК293 / РЬт НЕК293 / ΜΠΊ.1 А НЕК293 / тТЫА НЕК293 / гТЫА
ЕС50 (клетки) 23474 47921 8465 12366 9773
ТЫА/РЬт константного. участка 10,000 (# клеток)
1С50 [нМ] Η4Η1681Ν 0.66 ΝΒ 3.07 ΝΤ ΝΤ
Η4Η1704Ν 1.11 1.58 3.76 ΝΒ ΝΤ
Η4Η1804Ν 0.56 1.23 2.23 ΝΒ 3.99
Η4Η1805Ν 0.82 54.10* 1.93 ΝΒ ΝΒ
Η4Η1817Ν 1.11 0.62 5.04 ΝΒ 94.96*
Η4Η1818Ν 1.54 1.42 4.29 ΝΤ ΝΤ
Н4Н1719Р 0.82 0.84 3.00 ΝΤ ΝΤ
Н4Н1725Р 0.66 0.94 2.82 ΝΒ 190.30*
Н4Н1738Р 7.47 7.75 20.25 ΝΤ ΝΤ
Н4Н1742Р 6.55 8.39 18.45 ΝΒ ΝΤ
Н4Н1745Р 0.76 2.12 4.28 ΝΤ ΝΤ
Н4Н1750Р 12.82 29.52* 107.40* ΝΤ ΝΤ
Н4Н1752Р 1.99 138.10* 11.67 ΝΤ ΝΤ
Соп1го1 тАЫ ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΤ
Соп1го1 тАЬ2 ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ ΝΒ
Как показано в табл. 7, все тринадцать антител блокировали стимуляцию НЭК3-экспрессирующих клеток при помощи НТЫА, экспрессированного на поверхности клеток. В случае РНт, связанного с клетками, все антитела характеризовались значительным ингибированием, кроме Η4Η1681Ν, Η4Η1805Ν, Н4Н1750Р и Η4Η1752Γ, которые не ингибировали полностью при самой высокой из испытанных концентрации, равной 100 нМ. В случае МГГЫА, связанного с клетками, все антитела характеризовались ингибированием, кроме Η4Η1750, которое не ингибирует полностью при самой высокой из испытанных концентраций, равной 100 нМ. Шесть антител Η4Η1704Ν, Η4Η1804Ν, Η4Η1805Ν, Η4Η1817Ν, ШШ725Р и ШШ742Р были протестированы на наличие блокировки стимуляции клеток тГ)К3 связанным с поверхностью клеток тТБ1А; и ни одно антитело не показало ингибирования. Репортёрные клетки, экспрессирующие мышиный ЭК3, также могут быть стимулированы гТЫА-экспрессирующими клетками 293, причем величина ЕС50 составила 9773 клеток (табл. 7). При проведении анализа гТБ1А/тПК3 были протестированы четыре антитела: три антитела Η4Η1804Ν, Η4Η1817Ν, ШШ725Р блокировали, в то время как Η4Η1805Ν не блокировал стимуляцию тЛК3-клеток связанным с поверхностью клеток гТБ1А (табл. 7). Контрольное тАЬ1 блокировало стимуляцию НБК3-клеток экспрессированным в Е.соН растворимый НТИА и МЕГША, но не блокировало экспрессированные в СΗО формы НТПА и М1ТЬ1А в условиях теста (табл. 6). Контрольное тАЬ1 также не ингибировало стимуляцию НЭК3-экспрессирующих клеток экс премированными на поверхности клеток ТЫА и РНт при всех условиях теста (табл. 7).
Пример 5. Блокировка связывания ТЫА с 1ЛЖ3 и Г)сК3 антителами против ТБ1А.
Способность антител блокировать связывание ТБ1А с его когнатными рецепторами, рецепторами 1Ж3 и Г)сК3, была измерена при помощи сэндвич-анализа ЕБ15А конкурентного типа. Точно также было определено блокирование связывания варианта РНт человеческого ТБ1А (человеческий ТБ1А 9167К) и белка ТБ1А макаки-крабоеда (Масаса ГазсюШапз) (МПЫА) с рецепторами ГЖ3 и Г)сК3 человеческого происхождения. Постоянные количества биотинилированных ТБ1А или РНт человеческого происхождения (экспрессия обоих в СΗО-клетках с меткой 6-Ηΐδ) или биотинилированного МйТЫА (экспрессия в С1 Ю-клетках) титровали по отдельности различными количествами антител. Проводили инкубацию комплексов антитело-белок в растворе (1 ч, 25°С) и затем переносили их в микротитрационные планшеты, содержащие покрытие из человеческого 1Ж3 (НЭК3) или человеческого Г)сК3 (НБсК3), экспрессированных в форме белков слияния Рс 1дО1. Через час выдержки при 25°С лунки промывали и детектировали связанный человеческий или обезьяний ТБ1А с помощью стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена (11КР). Лунки обрабатывали раствором ТМВ для осуществления колориметрической реакции и останавливали реакцию водным раствором серной кислоты перед измерением абсорбции при длине волны 450 нм на планшете-ридере Регкш-Е1тег УШог Х5.
- 24 030397
Сигмовидная кривая доза-ответ согласовывалась с данными, полученными при помощи пакета РгЕт™. Рассчитанная величина 1С50, определённая как концентрация антитела, требуемая для блокировки 50% связывания ТЬ1А с ЪЭК3 или ЮсК3, была использована как индикатор блокирующей активности. И полностью человеческое антитело против тΑЬδ ЪТЬ1А и антитела для сравнения, а именно, контрольное тАЫ (антитело против ЪТЬ1А с вариабельными доменами тяжёлой и лёгкой цепей, имеющими аминокислотные последовательности, соответствующие 81Х) ГО N08: 21 и 27, соответственно, по заявке США на патент №2009/0280116) и контрольное тАЬ3 (антитело против ЪТЕ1А с вариабельными доменами тяжёлой и лёгкой цепей, имеющими аминокислотные последовательности, соответствующие 8Е^ ГО N08: 57 и 48, соответственно по заявке США на патент №2009/0280116) изучались а данном опыте. Результаты приведены в табл. 8. ЯВ: при условиях испытания связывания не было; N1: не испытывали. Концентрации биотинилированных растворимых лигандов: (1) 150 пМ; (2) 500 пМ; (3) 10 пМ; и (4) 50 пМ.
Как показано в табл. 8, большая часть полностью человеческих тА% демонстрирует эффективное блокирование Т1.1АЪГ)К3 и ТЕ1А/ЪБсК3, несколько из них характеризовались величинами 1С50 менее 50 пМ. Два антитела, Н4Н1752Р и Н4Н1805Н блокировали в значительной степени связывание и человеческого, и обезьянего ТЕ1А с обеими ЮК3 и ЪЭсК3, но не блокировали связывание РЪт или с ЪБК, или с ЪЭсК3, что свидетельствовало о том, что связанный эпитоп для этих двух антител может включать область около сайта мутации РЪт (ЪТЪ1А с ^167Κ). Кристаллическая структура ЪТЪ1А показала, что остаток ^167 появляется в петле с поверхностью, подвергающейся воздействию (/Кап е! а1., 2009, В^осЪет^δί^у 48: 7636-7645).
Таблица 8
тАЪГО ЬОКЗ ЬТЫА (СНО)1 1С5о (пМ) ЬОКЗ Мин (СНО)1 1С5о (пМ) Ы)КЗ МГТЫА (СНО)2 1С5о (пМ) ОсКЗ ЬТЫА (СНО)3 1С5о (пМ) ОсКЗ Мин (СНО)3 1С5о (пМ) ОсКЗ МГТЫА (СНО)4 1С5о (пМ)
Η4Η1681Ν 60 >10000 141 17 90 93
Η2Μ1681Ν 37 >10000 61 13 234 149
Η4Η1704Ν 30 44 42 77 170 110
Η2Μ1704Ν ΝΤ ΝΤ ΝΤ ΝΤ ΝΤ ΝΤ
Н4Н1719Р 22 23 46 44 45 61
Н4Н1725Р 15 18 16 68 85 145
Н4Н1738Р 69 152 117 122 150 68
Н4Н1742Р 64 214 240 181 231 127
Н4Н1745Р 18 44 50 58 85 118
Н4Н1750Р 341 589 5209 656 626 ΝΒ
Н4Н1752Р 104 ΝΒ 110 31 ΝΒ 56
Η4Η1804Ν 40 69 71 175 >10000 34
Η2Μ1804Ν 46 102 81 120 >10000 9
Η4Η1805Ν 14 ΝΒ 26 33 436 313
Η2Μ1805Ν 6 ΝΒ 13 12 2241 1138
Η4Η1817Ν 114 235 101 270 ΝΤ 322
Η2Μ1817Ν 154 249 137 890 666 776
Η4Η1818Ν 119 202 123 232 ΝΤ 1102
Η2Μ1818Ν 154 317 239 396 ΝΒ 55
Контр. тАЫ >10000 ΝΒ 5300 >1000 ΝΤ 21000
Контр. тАЬЗ >10000 ΝΒ 17000 8600 ΝΤ ΝΤ
Пример 6. Конкурентное связывание с клеточной поверхностью антител против ТЪ1А и растворимого ЪТЪ1А.
Эмбриональные почечные клетки 293, стабильно трансфицированные таким образом, чтобы сверхэкспрессировать на клеточной поверхности ЪТЪ1А, сначала окрашивали в ходе проточной цитометрии восьмью антителами против ЪТЪ1А в четырёх концентрациях (1, 0,1, 0,01 и 0,003 мкг/мл). Связанные человеческие антитела обнаруживали, используя меченое аллофикоцианином козье антитело Р(аЬ')2, специфическое к человеческому Рсу [или анти-ЪРсу-АРС Р(аЬ')2, 1аскяоп IттиηоΚеδеа^сЪ, # 109-136-170]. Затем самая низкая концентрация антител, обеспечивающая значительный уровень окрашивания, применялась в процессе конкурентного связывания. Отрицательный контрольный изотип антитела (человеческого 1дО4) использовали в концентрации 1 мкг/мл для определения фонового сигнала. При проведении конкурентного анализа образцы восьми антител с минимальными концентрациями, определёнными, как описано выше, сначала обрабатывали растворимым ЪТЕ1А, экспрессированным в СН0-клетках, при
- 25 030397
концентрациях в пределах от 0,03 до 10 мкг/мл. После предварительной инкубации на льду в течение 30 мин смесь антитело/йТЫЛ добавляли к клеткам 293/НЕК-йТЫА, которые были выделены путём центрифугирования в 96-луночном коническом планшете. После инкубации в течение ещё 10 мин клетки промывали. Затем добавляли вторичный реагент, анти-йΡсγ-ЛРС Р(аЬ')2, во все лунки с разведением в 200 раз с целью обнаружения связанных антител. Образцы инкубировали на льду в течение 15 мин в отсутствие света и затем промывали. Клетки процессировали в цитометре ΒΏ™ ЬЗКИ Р1о^ Су!оте!ег (ВО Вюкыепсек) с целью обнаружения антител против ИИА, связанных с клеточной поверхностью, анализировали полученные данные при помощи программы Р1о\у.1о (версия 8.8.6; Тгее З!аг 1пс.). Результаты показаны в табл. 9. Максимальный сигнал: связывание антитела против йТЫА в отсутствие растворимого йТЫА; минимальный сигнал: сигнал, записанный, когда 1 мкг/мл контрольного изотипа антитела был добавлен вместо антител против йТЫА. ΝΟ не испытывался.
Таблица 9
Средняя интенсивность флуоресценции при связывании антител против НТ1ЛА (Н4Н) с ЙТЫА на клеточной поверхности
Растворимый ЬТЫА (мкг/мл) 1704Ν 1725Р 1742Р 1804Ν 1805Ν 1817Ν 1681Ν 1745Р
0.1 мкг/мл 0.1 мкг/мл 1 мкг/мл 0.1 мкг/мл 0.1 мкг/мл 1 мкг/мл 1 мкг/мл 1 мкг/мл
10 ΝΤ ΝΤ ΝΤ ΝΤ ΝΤ ΝΤ 16.9 15
3 22.6 34.9 19.9 28.9 23.6 25.2 28.5 19.5
1 26 29.2 32.7 33.7 25.1 29.1 80.9 26.9
0.3 31.5 40.7 44.7 33.5 36.8 23.6 236 115
0.1 132 84.5 79.4 51.1 60.2 97.2 327 93.1
0.03 163 207 126 126 156 85.3 318 80
Максимальн. сигнал 116 211 126 127 158 по 320 87.2
Минимальн. сигнал! 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 17.9 17.9
Как видно из табл. 9, сигналы, продуцируемые восемью испытанными антителами, могут быть конкурентно понижены до исходного уровня при добавлении избытка растворимого йТЬ 1А, что демонстрирует специфичность связывания антител с клеточной поверхностью йТЫА.
Пример 7. Блокирование стимуляции СО4+Т-клеток, зависимой от йТЫА, антителами против ТЫА.
Для определения способности антител против йТЫА блокировать зависимую от йТЫА стимуляцию человеческих С 1)4' Т-клеток, проводили ΐπ νίΐΐΌ анализ, в котором определяли йТЫА/антиСО3/анти-СО28-стимулированное высвобождение ΙΡΝ-гамма (ΙΡΝ-γ) в присутствии или в отсутствие антител. Человеческие СО4' Т-клетки были выделены из свежих лейкоцитарных плёнок, приготовленных из образцов крови, полученной в \е\х \’огк В1оой Сеп!ег. Клетки, отобранные от одного донора, хранили отдельно от клеток других доноров для каждого теста. С 1)4' Т-клетки добавляли в лунки 96-луночного планшета в количестве 5х105 клеток на лунку. Затем в каждую лунку добавляли растворимый йТЫА (остатки 72-251 NР005109.2 с Ν-концевой гексагистидиновой меткой, экпрессия в СНОклетках) до конечной концентрации равной 1 мкг/мл (16 нМ, если предположить наличие йТЫАобразующих тримеров в растворе) в среде КРМ1 + 10% РВЗ, Ь-глутамин и пенициллин/стрептомицин. В каждую лунку добавляли также антитела против йТЬ1 А или изотип контрольного антитела до конечной концентрации равной 1 или 3 мкг/мл (6,7 или 20 нМ, соответственно). Образцы инкубировали в течение 15 мин при температуре 4°С в темноте с последующим добавлением антител анти-йСО3 (ВО Рйагттдеп, са! # 555336) и анти-йСО28 (ВО Рйагттдеи, са! # 555725) в каждую лунку до конечной концентрации равной 1 мкг/мл. Образцы инкубировали в течение 24 ч при температуре 37°С, отделяли надосадочные жидкости и методом иммуноферментного анализа ЕЫЗА определяли уровни ΙΡΝ-γ. Блокирующее действие (среднее значение показателя из двух лунок для каждого условия) каждого антитела на каждый образец челочеческого СО4+ Т-клетки определяли как величину уменьшения максимального сигнала делённую на величину максимального ответа, т.е.
% блокировки = [(Мах - 1пЫЬ)/(Мах- Мт)]х100,
где "Мах", "1пЫЬ" и "Мт" обозначают концентрации ΙΡΝ-γ, измеренные для СО4+ человеческих Т-клеток, обработанных следующим образом: "Мах" - обработка [йТЫА + анти-йСО3 + анти-йСО28 + изотип контрольный тАЬ]; "Мт: " - обработка [анти-йСО3 + анти-йСО28 + контрольный изотип тАЬ]; "1пЫЬ" - обработка [йТЫА + анти-йСО3 + анти-йСО28 + анти-йТЫА испытуемого тАЬ]. Антитела, для
- 26 030397
которых степень блокировки ΙΡΝ-γ превосходила исходное значение "Μίπ", считаются как дающие 100% блокировку. Отношение (Μαχ'Μίη) представляет собой отношение величины концентрации ΙΡΝ-γ, полученной для человеческих СЭ4+ Т-клеток, обработанных при Μαχ и Μίπ условиях, описанных выше.
Как показано в табл. 10, антитела н4н1725Р, н4Ш805Н Η4Η1817N и Η4Η1804N блокировали в значительной степени стимулированное НТЬ1А высвобождение ΙΡΝ-γ при обеих концентрациях равных 1 и 3 мкг/мл, почти полная блокировка (>80%) наблюдалась для большинства доноров при более высокой концентрации антител. Результаты блокирования секреции ΙΡΝ-γ тринадцатью различными антителами к НТЬ1А против СЭ4+ Т-клеток от 10 различных человеческих доноров проведены ниже в табл. 11. δϋ - стандартное отклонение.
Таблица 10
Донор # % блокирования образования ΙΡΝ-γ в человеческих Т-клетках
для 10 доноров Б5 Р6 Б7 Б8 Б9 Б10
Ш ϋ2 ϋ3 Б4
тАЬ ГО Отношение (Мах/Μΐη) 5 4 10 10 4 3 4 3 8 2
Н4Н1725Р тАЬ 90 100 70 85 45 80 60 85 50 95
Η4Η1805Ν 1 мкг/мл 100 100 90 100 100 100 100 100 90 100
Η4Η1817Ν (6.7 нМ) 100 100 90 90 100 45 55 100 55 80
Η4Η1804Ν 95 100 80 90 100 50 10 100 50 0
Н4Н1725Р тАЬ 95 100 95 100 90 80 90 100 90 100
Η4Η1805Ν 3 мкг/мл 100 100 95 100 80 100 100 100 70 100
Η4Η1817Ν (20 нМ) 100 100 100 100 100 100 100 100 95 85
Η4Η1804Ν 100 100 95 100 100 100 100 100 100 80
Таблица 11
шАЬ ГО Средняя величина блокировки, %, (δϋ) 0.1 мкг/мл тАЬ Средняя величина блокировки, %, (δϋ) 1 мкг/мл тАЬ Средняя величина блокировки,%, (80) 3 мкг/мл тАЬ
Η4Η1681Ν 20% (24) 45% (30) 95% (7)
Η4Η1704Ν 22% (29) 53% (27) 98% (5)
Н4Н1719Р 10% (22) 37% (23) 78% (30)
Н4Н1725Р 13% (14) 80% (20) 94% (7)
Н4Н1738Р 25% (30) 41% (35) 81% (18)
Н4Н1742Р 10% (22) 58% (33) 83% (16)
Н4Н1745Р 22% (27) 36% (36) 91% (7)
Н4Н1750Р 11% (14) 42% (35) 89% (15)
Н4Н1752Р 18% (25) 52% (35) 71% (30)
Η4Η1804Ν 26% (30) 68% (38) 98% (6)
Η4Η1805Ν 21% (28) 98% (4) 94% (10)
Η4Η1817Ν 25% (33) 81% (22) 98% (5)
Η4Η1818Ν 25% (33) 42% (33) 71% (35)
Контольный изотип 16% (21) 26% (33) 28% (27)
Уровень ΙΡΝ-γ был также измерен для шести различных концентраций антител (в пределах от 0,03 до 10 мкг/мл) для каждого из шести различных антител, добавленных к СЭ4+ Т-клеткам от двенадцати людей-доноров. Кривые, соответствующие полученным данным, позволили определить концентрацию антител, при которой было достигнуто полумаксимальное ингибирование для каждого антитела и для каждого образца клеток донора. Средние концентрации (±δϋ) для достижения полумаксимального ингибирования приведены в табл. 12.
- 27 030397
Таблица 12
Донор # шАЬ 1С5о(нМ)
Η4Η1725Ρ Η4Η1742Ρ Η4Η1805Ν Η4Η1817Ν Η4Η1804Ν Η4Η1704Ν
ϋΐ 3.4 24 2.4 6.6 6.8 -
ϋ2 3.2 4.6 5.5 3.1 8.6 -
ϋ3 5.4 10 3.4 4.7 8.6 -
ϋ4 4.7 13 2.5 2.4 7.7 -
ϋ5 7.0 12 2.9 8.5 6.7 17
ϋ6 5.4 10 3.4 4.7 8.6 11
ϋ7 13 31 8.0 7.0 12 12
ϋ8 12 27 5.1 7.0 11 19
ϋ9 6.4 56 5.9 9.5 8.1 7.5
ϋ10 4.1 12 2.8 7.3 12 10
ϋΐΐ 6.1 27 3.0 7.3 7.6 11
ϋ12 6.4 14 3.1 9.4 7.5 8.0
Среднее (±80) 6.4 (3.1) 20 (14) 4.0 (1.7) 6.5 (2.3) 8.8 (1.9) 12 (4.1)
Четыре антитела, Н4Н1725Р, Η4Η1804Ν, Η4Η1805Ν, Η4Η1817Ν, характеризовались средней полумаксимальной концентрацией ингибирования, которая была меньше 10 нМ (примерно в пределах 4-9 нМ).
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> РЕГЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛС, ИНК.
<120> ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ΤΝΕ-ПОДОБНОГО ЛИГАНДА-1А (ТЬ1А)
<130> 6400А-МО
<140> То Ье аззядпеб
<141> 2011-11-08
<150> 61/411,276
<151> 2010-11-08
<150> 61/478,309
<151> 2011-04-22
<160> 259
<170> ЕазРЗЕО £ог ОпсКоз Уегз1оп 4.0
<210> 1
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 1
даддРдсадс РддРддадРс Рдддддаддс РРддРссадс сРддддддРс ссРдадасРс 60
РссРдРдсад РсРсРддаРР сассРРРадР адРРаРРдда РдадсРдддР ссдссаддсР 120
ссадддаадд ддсРддааРд ддРддссаас аРаааддаад аРддаадРда дааааасРаР 180
дРддасРсРд Рдаадддссд аРРсасссРс Рссадсдаса асдссаадаа сРсасРдРаР 240
сРдсаааРда асадссРдад адссдаддас асддсРдРРР аРРасРдРдс дадададдас 300
- 28 030397
бабдасбссб асбасаадба сддбабддас дбббддддсс аадддассдс ддбсабсдбс бссбса
<210> 2
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 2
О1и Уа1 О1п Беи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Беи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Бег Беи Агд Беи Бег Суз А1а Уа1 Бег О1у РИе ТИг РИе Бег Бег Туг
20 25 30
Тгр Меб Бег Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Буз О1у Беи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Азп 11е Буз О1и Азр О1у Бег О1и Буз Азп Туг Уа1 Азр Бег Уа1
50 55 60
Буз О1у Агд РИе ТИг Беи Бег Бег Азр Азп А1а Буз Азп Бег Беи Туг
65 70 75 80
Беи О1п Меб Азп Бег Беи Агд А1а О1и Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1и Азр Туг Азр Бег Туг Туг Буз Туг О1у Меб Азр Уа1 Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТИг А1а Уа1 11е Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 3
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 3
ддаббсассб ббадбадбба ббдд
<210> 4
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 4
О1у РИе ТИг РИе Бег Бег Туг Тгр 1 5
360
366
24
<210> 5
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 5
- 29 030397
аЬаааддаад аЬддаадЬда дааа 24
<210> 6
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 6
11е Ьуз О1и Азр О1у Бег О1и Ьуз 1 5
<210> 7
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 7
дсдадададд асЬаЬдасЬс сЬасЬасаад ЬасддЬаЬдд асдЬЬ 45
<210> 8
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 8
А1а Агд О1и Азр Туг Азр Бег Туг Туг Ьуз Туг О1у МеЬ Азр Уа1 1 5 10 15
<210> 9
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 9
дасаЬсдЬда ЬдасссадЬс ЬссадасЬсс сЬддсЬдЬдЬ сЬсЬдддсда дадддссасс 60
аЬсаасЬдса адЬссадсса дадЬаЬЬЬЬа ЬасадсЬсса асааЬаадаа сЬасЬЬадсЬ 120
ЬддЬаЬсадс адааассадд асадссЬссЬ аадсЬдсЬса ЬЬЬасЬдддс аЬсЬасссдд 180
дааЬссдддд ЬсссЬдассд аЬЬсадЬддс адсдддЬсЬд даасадаЬЬЬ сасЬсЬсасс 240
аЬсадсадсс ЬдсаддсЬда адаЬдЬдЬса дЬЬЬаЬЬасЬ дЬсаасааЬа ЬЬаЬадЬасЬ 300
ссаЬЬсасЬЬ ЬсддсссЬдд дассааадЬд даЬаЬсааа 339
<210> 10
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 30 030397
<400> 10
Азр 1 11е Уа1 МеЬ ТЬг О1п 5 Бег Рго Азр Бег 10 Ьеи А1а Уа1 Бег Ьеи 15 О1у
О1и Агд А1а ТЬг 11е Азп Суз Ьуз Бег Бег О1п Бег 11е Ьеи Туг Бег
20 25 30
Бег Азп Азп Ьуз Азп Туг Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п
35 40 45
Рго Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг Тгр А1а Бег ТЬг Агд О1и Бег О1у Уа1
50 55 60
Рго Азр Агд РЬе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг
65 70 75 80
11е Бег Бег Ьеи О1п А1а О1и Азр Уа1 Бег Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п
85 90 95
Туг Туг Бег ТЬг Рго РЬе ТЬг РЬе О1у Рго О1у ТЬг Ьуз Уа1 Азр 11е
100 105 110
Ьуз
<210> 11
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 11
сададЬаЬЬЬ ЬаЬасадсЬс саасааЬаад аасЬас
<210> 12
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 12
О1п Бег 11е Ьеи Туг Бег Бег Азп Азп Ьуз Азп Туг 1 5 10
36
<210> 13
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 13
ЬдддсаЬсЬ
<400> 14
9
<210> 14
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 31 030397
Тгр А1а Зег 1
<210> 15
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 15
саасаа+а++ а+ад+ас+сс а++сас+ 27
<210> 16
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
последовательность
<400> 16
О1п О1п Туг Туг Зег ТЬг Рго РЬе ТЬг 1 5
<210> 17
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 17
дадд+дсаас +а++ддад+с +дддддаддс ++дд+дсадс с+дддаад+с сс++адас+с 60
+сс+д+дсад +с+с+дда++ сасс+++ад+ асс+а+ддса +даа++ддд+ ссдссаддс+ 120
ссадддаадд ддс+ддад+д дд+с+саад+ а++ад+дд+а с+дд+сд+ас саса+асса+ 180
дсадас+ссд +дсадддссд д++сассд+с +ссададаса а++ссаадаа са++с+а+а+ 240
++асада+да асад+с+дсд адссдасдас асддссд+а+ а+++с+д+ас дааададсдд 300
ддада++ас+ ас+асдддд+ ++++дас+ас +ддддссадд даассс+дд+ сассд+с+сс 360
+са 363
<210> 18
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 18
О1и Уа1 О1п Ьеи Ьеи О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у Ьуз
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Туг
20 25 30
О1у Ме+ Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег Зег 11е Зег О1у ТЬг О1у Агд ТЬг ТЬг Туг Ηΐ3 А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп 11е Ьеи Туг
- 32 030397
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Зег Ьеи Агд А1а Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
ТЬг Ьуз О1и Агд О1у Азр Туг Туг Туг О1у Уа1 РЬе Азр Туг Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 19
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 19
ддаЕЕсассЕ ЕЕадЕассЕа Еддс
<210> <211> <212> <213> 20 8 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 20
О1у РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Туг О1у
1 5
<210> 21
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 21
аЕЕадЕддЕа сЕддЕсдЕас саса
24
24
<210> <211> <212> <213> 22 8 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 22
11е Зег О1у ТЬг О1у Агд ТЬг ТЬг
1 5
<210> 23
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 33 030397
<223> Искусственная
<400> 23
асдааададс ддддадаЕЕа сЕасЕасддд дЕЕЕЕЕдасЕ ас 42
<210> 24
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 24
ТЬг Ьуз О1и Агд О1у Азр Туг Туг Туг О1у Уа1 РЬе Азр Туг 1 5 10
<210> 25
<211> 318
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 25
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссЕЕссасс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсс дддссадЕса дасЕаЕЕадЕ ЕссЕддЕЕдд ссЕддЕаЕса дсадасасса 120
дадааадссс сЕаадсЕссЕ даЕсЕаЕдсд дсдЕсЕааЕЕ ЕасааадЕдд адЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс Едддасадаа ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕасадссЕ 240
даЕдаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдссадсад ЕаЕсаЕсдЕЕ сЕЕддасдЕЕ сддссааддд 300
ассааддЕдд аааЕсаса 318
<210> 26
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 26
Азр 1 11е О1п МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег ТЬг 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п ТЬг 11е Бег Бег Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п ТЬг Рго О1и Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег Азп Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг О1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
Азр Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Нтз Агд Бег Тгр ТЬг
85 90 95
РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е ТЬг
100 105
<210> 27
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 34 030397
18
<220>
<223> Искусственная
<400> 27
садасбабба дббссбдд
<210> 28
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 28
О1п ТЪг 11е Бег Бег Тгр 1 5
<210> 29
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 29
дсддсдбсб
<210> 30
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 30
А1а А1а Бег
1
<210> 31
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 31
садсадбабс абсдббсббд дасд
<210> 32
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- З5 24
030397
<400> 32
О1п О1п Туг Ηΐ3 Агд Зег Тгр ТЬг 1 5
<210> 33
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 33
саддТдсадс ТасассадТд дддсдсадда сТдТТдаадс сТТсддадас ссТдТсссТс 60
ассТдсдсТд ТсТсТддТдТ дТссТТсадТ даТТаТсасТ дддссТддаТ ссдссадТсс 120
ссадддаадд ддсТддадТд даТТддддаТ аТсааТсаТс дТддааддас саасТасаас 180
ссдТсссТса ададТсдадТ сассаТаТса сТТдасасдТ ссдддаассс дТТсТсссТд 240
аадсТдассТ сТдТдассдс сдсддасасд дсТдТТТаТТ асТдТдсдад адаТТТТссс 300
аасТдддТТТ ТТдасТссТд дддссаддда аТссТадТса ссдТсТссТс а 351
<210> 34
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 34
Οίη Уа1 Ο1η Ьеи Ηΐ3 Ο1η Тгр О1у А1а О1у Ьеи Ьеи Ьуз Рго Зег О1и
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Уа1 Зег О1у Уа1 Зег РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Ηΐ3 Тгр А1а Тгр 11е Агд Ο1η Зег Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Азр 11е Азп Ηΐ3 Агд О1у Агд ТЬг Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи Ьуз
50 55 60
Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Ьеи Азр ТЬг Зег О1у Азп Рго РЬе Зег Ьеи
65 70 75 80
Ьуз Ьеи ТЬг Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а
85 90 95
Агд Азр РЬе Рго Азп Тгр Уа1 РЬе Азр Зег Тгр О1у О1п О1у 11е Ьеи
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 35
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 35
ддТдТдТссТ ТсадТдаТТа Тсас 24
<210> 36
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
- 36 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 36
О1у Уа1 Зег РИе Зег Азр Туг НФз 1 5
<210> <211> <212> <213> 37 21 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 37
аЛсааЛсаЛс дЛддааддас с 21
<210> <211> <212> <213> 38 7 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 38
11е Азп Нтз Агд О1у Агд ТИг
1 5
<210> <211> <212> <213> 39 33 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 39
дсдададаЛЛ ЛЛсссаасЛд ддЛЛЛЛЛдас Лсс 33
<210> <211> <212> <213> 40 11 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 40
А1а Агд Азр РИе Рго Азп Тгр Уа1 РИе Азр Зег 1 5 10
<210> <211> <212> <213> 41 324 ДНК Искусственная последовательность
<220>
- 37 030397
<223> Искусственная
<400> 41
даааЬЬдЬаЬ ЬдЬсдсадЬс Ьссаддсасс сЬдЬсЬЬЬдЬ сЬссадддда аададссасс 60
сЬсЬссЬдса дддссадЬса дадЬдЬЬадс адсадсЬЬсЬ ЬадссЬддЬа ссаасааЬаЬ 120
ссЬддссадд сЬсссаддсЬ ссЬсаЬсЬаЬ ддЬдсаЬсса даадддссас ЬддсаЬссса 180
дасаддЬЬсс дЬддсадЬдд дЬсЬдддаса дасЬЬсасЬс ЬсассаЬсад садасЬддад 240
ссЬдаадаЬЬ ЬЬдсадЬдЬа ЬЬасЬдЬсаа сааЬаЬддЬа дЬЬсассдсЬ сассЬЬсддс 300
ддадддасса аддЬддадаа сааа 324
<210> 42
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 42
О1и 11е Уа1 Ьеи Бег О1п Бег Рго О1у ТЬг Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у
1 5 10 15
О1и Агд А1а ТЬг Ьеи Бег Суз Агд А1а Бег О1п Бег Уа1 Бег Бег Бег
20 25 30
РЬе Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Туг Рго О1у О1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг О1у А1а Бег Агд Агд А1а ТЬг О1у 11е Рго Азр Агд РЬе Агд
50 55 60
О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Агд Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п Туг О1у Бег Бег Рго
85 90 95
Ьеи ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и Азп Ьуз
100 105
<210> 43
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 43
сададЬдЬЬа дсадсадсЬЬ с 21
<210> 44
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 44
О1п Бег Уа1 Бег Бег Бег РЬе 1 5
<210> 45
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 38 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 45
ддбдсабсс 9
<210> 46
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 46
О1у А1а Бег
1
<210> 47
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 47
саасаабабд дбадббсасс дсбсасс 27
<210> 48
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 48
О1п О1п Туг О1у Бег Бег Рго Ьеи ТЪг 1 5
<210> 49
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 49
саддбдсадс басадсадбд дддсдсадда сбдббдаадс сббсддадас ссбдбсссбс 60
ассбдсдсбд бсбабддбдд дбссббсасб ддбббсбасб ддадсбддаб ссдссадссс 120
сссдддаадд ддсбддадбд даббддддаа абсаабсабс дбддааасас саасбасааб 180
ссдбсссбса ададбсдадб сассабдбса дбадасасдб ссаадаасса дббсбсссбд 240
аасабдабсб сбдбдассдс сдсддасасд дсбабдбабб бсбдбдсдад бссбббббас 300
дабббббдда дбддббссда сбасбддддс садддаассс бддбсассдб сбссбса 357
<210> 50
<211> 119
<212> БЕЛОК
- З9 030397
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 50
О1п 1 Уа1 О1п Ьей О1п О1п Тгр 5 О1у А1а О1у 10 Ьей Ьей Ьуз Рго Бег 15 О1и
ТИг Ьей Бег Ьей ТИг Суз А1а Уа1 Туг О1у О1у Бег РИе ТИг О1у РИе
20 25 30
Туг Тгр Бег Тгр 11е Агд О1п Рго Рго О1у Ьуз О1у Ьей О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у О1и 11е Азп Нчз Агд О1у Азп ТИг Азп Туг Азп Рго Бег Ьей Ьуз
50 55 60
Бег Агд Уа1 ТИг Меб Бег Уа1 Азр ТИг Бег Ьуз Азп О1п РИе Бег Ьей
65 70 75 80
Азп Меб 11е Бег Уа1 ТИг А1а А1а Азр ТИг А1а Меб Туг РИе Суз А1а
85 90 95
Бег Рго РИе Туг Азр РИе Тгр Бег О1у Бег Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТИг Ьей Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115
<210> 51
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 51
ддбдддбссб бсасбддббб сбас 24
<210> 52
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 52
О1у О1у Бег РИе ТИг О1у РИе Туг 1 5
<210> 53
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 53
абсаабсабс дбддааасас с 21
<210> 54
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
- 40 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 54
11е Азп Ηΐ3 Агд О1у Азп ТЬг 1 5
<210> 55
<211> 39
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 55
дсдадЛссЛЛ ЛЛЛасдаЛЛЛ ЛЛддадЛддЛ ЛссдасЛас 39
<210> 56
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 56
А1а Бег Рго РЬе Туг Азр РЬе Тгр Бег О1у Бег Азр Туг 1 5 10
<210> 57
<211> 336
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 57
дасаЛЛаЛдЛ Лдасссадас ЛссасЛсасс ЛсассЛдЛса сссЛЛдддса дссддссЛсс 60
аЛсЛссЛдса адЛсЛадЛса аадссЛсдЛа сасадЛдаЛд дааасассЛа сЛЛдадЛЛдд 120
сЛЛсадсада ддссаддсса дссЛссаада сЛссЛаЛЛЛЛ аЛаадаЛЛЛс ЛаассддЛЛс 180
ЛсЛддадЛсс садасадаЛЛ садЛддсадЛ ддддсаддда садаЛЛЛсас асЛдааааЛс 240
адсадддЛдд аадсЛдадда ЛдЛсддддЛЛ ЛаЛЛасЛдса ЛдсаадсЛас асааЛЛЛссЛ 300
сЛсасЛЛЛсд дсддадддас сааддЛадад аЛсааа 336
<210> 58
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 58
Азр 1 11е МеЛ Беи ТЬг 5 О1п ТЬг Рго Ьеи ТЬг 10 Бег Рго Уа1 ТЬг Ьеи О1у 15
О1п Рго А1а Бег 11е Бег Суз Ьуз Бег Бег О1п Бег Ьеи Уа1 ΗΪ8 Бег
20 25 30
Азр О1у Азп ТЬг Туг Беи Бег Тгр Ьеи О1п О1п Агд Рго С1у О1п Рго
- 41 030397
35 40 45
Рго Агд Ьеи Ьеи РЬе Туг Ьуз 11е Зег Азп Агд РЬе Зег О1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у А1а О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд Уа1 О1и А1а О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз МеЕ О1п А1а
85 90 95
ТЬг О1п РЬе Рго Ьеи ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 59
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 59
сааадссЕсд ЕасасадЕда Еддааасасс Еас
<210> 60
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 60
О1п Зег Ьеи Уа1 Нбз Зег Азр О1у Азп ТЬг Туг 1 5 10
33
<210> 61
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 61
аадаЕЕЕсЕ
<210> 62
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 62
Ьуз 11е Зег 1
<210> 63
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 42 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 63
аЕдсаадсЕа сасааЕЕЕсс ЕсЕсасЕ 27
<210> 64
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 64
МеЕ О1п А1а ТЬг О1п РЬе Рго Ьеи ТЬг 1 5
<210> 65
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 65
саддЕдсаас ЕасаасадЕд дддсдсадда сЕдЕЕдаадс ссЕсддадас ссЕдЕсссЕс 60
ассЕдсдсЕд ЕсЕсЕддЕдд дЕссЕЕсадЕ даЕЕасЕЕсЕ ддассЕддаЕ ссдссадссс 120
сссдддаадд ддсЕддадЕд даЕЕддддаа аЕсадЕсаЕа дЕддаадаас саасЕасаас 180
ссдЕсссЕса ададЕсдадЕ сассаЕаЕса дЕЕдасасдЕ ссаЕдадсса дЕЕсЕсссЕд 240
аадаЕдассЕ сЕдЕдассдс сдсддасЕсд дсЕдЕаЕаЕЕ асЕдЕдсдад адаЕЕаЕссс 300
аасЕдддЕЕЕ ЕЕдасЕасЕд дддссаддда асссЕддЕса ссдЕсЕссЕс а 351
<210> 66
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 66
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи О1п О1п Тгр 5 О1у А1а О1у 10 Ьеи Ьеи Ьуз Рго Бег 15 О1и
ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Суз А1а Уа1 Бег О1у О1у Бег РЬе Бег Азр Туг
20 25 30
РЬе Тгр ТЬг Тгр 11е Агд О1п Рго Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у О1и 11е Бег НДз Бег О1у Агд ТЬг Азп Туг Азп Рго Бег Ьеи Ьуз
50 55 60
Бег Агд Уа1 ТЬг 11е Бег Уа1 Азр ТЬг Бег МеЕ Бег О1п РЬе Бег Ьеи
65 70 75 80
Ьуз МеЕ ТЬг Бег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр Бег А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а
85 90 95
Агд Азр Туг Рго Азп Тгр Уа1 РЬе Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг Ьеи
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115
- 43 030397
24
<210> 67
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 67
ддбдддбссб бсадбдабба сббс
<210> 68
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 68
О1у О1у Бег РЪе Бег Азр Туг РЪе 1 5
<210> 69
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 69
абсадбсаба дбддаадаас с
<210> 70
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 70
11е Бег Ηΐ3 Бег О1у Агд ТЪг 1 5
21
<210> 71
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 71
дсдададабб абсссаасбд ддбббббдас бас
<210> 72
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
33
- 44 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 72
А1а Агд Азр Туг Рго Азп Тгр Уа1 РИе Азр Туг 1 5 10
<210> 73
<211> 324
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 73
даааТТдадТ ТдасдсадТс Тссаддсасс сТдТсТТТдТ сТссадддда аддадссасс 60
сТсТссТдса дддссадТса дадТдТТТТс аасадсТасТ ТадсдТддТа ссадсадааа 120
ссТддссадд сТсссаддсТ ссТсаТсТаТ ддТдсаТсса ддадддссас ТддсаТсссТ 180
дасаддТТса дТддсадТдд дТсТдддаса дасТТсасТс ТсассаТсад садасТддад 240
ссТддадаТТ ТТдсадТаТа ТТТсТдТсад садТаТддТа асТсассдсТ сасТТТсддс 300
ддадддасса аддТддадаТ сааа 324
<210> 74
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 74
О1и 11е О1и Ьеи ТИг О1п Зег Рго О1у ТИг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у
1 5 10 15
О1и О1у А1а ТИг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег О1п Зег Уа1 РИе Азп Зег
20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг О1у А1а Зег Агд Агд А1а ТИг О1у 11е Рго Азр Агд РИе Зег
50 55 60
О1у Зег О1у Зег О1у ТИг Азр РИе ТИг Ьеи ТИг 11е Зег Агд Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1у Азр РИе А1а Уа1 Туг РИе Суз О1п О1п Туг О1у Азп Зег Рго
85 90 95
Ьеи ТИг РИе О1у О1у О1у ТИг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 75
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 75
сададТдТТТ ТсаасадсТа с 21
<210> 76
<211> 7
- 45 030397
<212> <213> БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 76
Οίη Зег Уа1 РЬе Азп Зег Туг
1 5
<210> <211> <212> <213> 77 9 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 77
ддЬдсаЬсс 9
<210> <211> <212> <213> 78 3 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 78 О1у А1а Зег
1
<210> <211> <212> <213> 79 27 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 79
садсадЬаЬд дЬаасЬсасс дсТсасТ 27
<210> <211> <212> <213> 80 9 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная
<400> 80
Ο1η Ο1η Туг О1у Азп Зег Рго Ьеи ТЬг
1 5
<210> <211> <212> <213> 81 366 ДНК Искусственная последовательность
- 46 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 81
сддЁЁдсадс ЬддЬддадЬс Ёдддддаддс ЬЬддЬсаадс сЬддадддЬс ссЬдааасЬс 60
ЬссЬдЬдсад ссЬсЬддаЬЬ сассаЁсадЁ дасЬасЬаса ЬдадсЬддаЬ ссдссаддсЁ 120
ссадддаадд ддсЬддадЬд ддЬЬЬсдЬас аЬЬддЬддЬа дЬддЬадЬас саЬаЬаЬЬас 180
дсадасЬсЬд Ёдаадддссд аЬЬсассаЬс Ёссадддаса асдссаадаа сЬсасЬдЬаЬ 240
сЬдсаааЬда асадссЁдад адссдаддас асддссдЁаЁ аЬЬасЬдЬдс дадададдас 300
дсЬдасЬссЬ асЬасЬасЬа сддЬаЬддас дЬсЬддддсс аадддассас ддЬсассдЬс 360
ЁссЁса 366
<210> 82
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 82
Агд Ьеи О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго О1у О1у
1 5 10 15
Бег Ьеи Ьуз Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РИе ТИг 11е Бег Азр Туг
20 25 30
Туг МеЁ Бег Тгр 11е Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Бег Туг 11е О1у О1у Бег О1у Бег ТИг 11е Туг Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РИе ТИг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЁ Азп Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1и Азр А1а Азр Бег Туг Туг Туг Туг О1у МеЁ Азр Уа1 Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТИг ТИг Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 83
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 83
ддаЁЁсасса ЬсадЬдасЬа сЁас 24
<210> 84
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 84
О1у РИе ТИг 11е Бег Азр Туг Туг 1 5
- 47 030397
24
<210> 85
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 85
аббддбддба дбддбадбас саба
<210> 86
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 86
11е О1у О1у Бег О1у Бег ТЪг 11е 1 5
<210> 87
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 87
дсдадададд асдсбдасбс сбасбасбас басддбабдд асдбс
<210> 88
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 88
А1а Агд О1и Азр А1а Азр Бег Туг Туг Туг Туг О1у Меб Азр Уа1 1 5 10 15
<210> 89
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 89
дабаббдбда бдасссадбс бссадасбсс сбддсбдбдб сбсбдддсда дадддссасс абсаасбдса адбссадсса дадбдбббба басадсбсса асаабаадаа ссасббабсб бддбабсадс адааассадд асадссбссб аадсбдсбса бббасбдддс абсбасссдд даабссдддд бсссбдассд аббсадбддс адсдддбсбд ддасадаббб сасбсбсасс абсадсадсс бдсаддсбда адабдбддса дбббаббасб дбсаасааба ббабадбасб
45
60
120
180
240
300
- 48 030397
ссРсддасдР Рсддссаадд дассааддРд даааРсааа
<210> 90
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 90
Азр 1 11е Уа1 МеР ТЪг 5 О1п Зег Рго Азр Зег 10 Ьеи А1а Уа1 Зег Ьеи 15 О1у
О1и Агд А1а ТЪг 11е Азп Суз Буз Зег Зег О1п Зег Уа1 Беи Туг Зег
20 25 30
Зег Азп Азп Буз Азп Няз Беи Зег Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п
35 40 45
Рго Рго Буз Беи Ьеи 11е Туг Тгр А1а Зег ТЪг Агд О1и Зег О1у Уа1
50 55 60
Рго Азр Агд РЪе Зег О1у Зег С1у Зег С1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг
65 70 75 80
11е Зег Зег Ьеи О1п А1а О1и Азр Уа1 А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п
85 90 95
Туг Туг Зег ТЪг Рго Агд ТЪг РЪе С1у О1п С1у ТЪг Буз Уа1 О1и 11е
100 105 110
Ьуз
<210> 91
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 91
сададРдРРР РаРасадсРс саасааРаад аассас
<210> 92
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
339
36
<220>
<223> Искусственная
<400> 92 О1п Зег Уа1 Беи Туг Зег Зег Азп Азп Буз Азп Няз
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 93 9 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Искусственная <400> 93 РдддсаРсР
9
- 49 030397
<210> 94
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 94
Тгр А1а Зег 1
<210> 95
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 95
саасаа+а++ а+ад+ас+сс +сддасд 27
<210> 96
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 96
О1п О1п Туг Туг Зег ТЬг Рго Агд ТЬг 1 5
<210> 97
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 97
даад+дсаас +дд+ддад+с +дддддаддс ++дд+асадс с+ддсадд+с сс+дадас+с 60
+сс+д+д+ад сс+с+дда++ сасс+++саа да++а+дсса +дсас+ддд+ ссддсаадс+ 120
ссаддааадд дсс+ддад+д дд+с+садд+ а++аа++дда ++ад+да+да са+дддс+а+ 180
дсддас+с+д +да+дддссд а++сасса+с +ссададаса асдссаадаа с+ссс+д+а+ 240
с+дсааа+дд асад+с+дад адс+даддас асддсс++д+ а++ас+д+дс аааада+аад 300
дда++асда+ ++++ддас+а +д++а+ддас д+с+ддддсс аадддассас дд+сассд+с 360
+сс+са 366
<210> 98
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 50 030397
<400> 98
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у Агд
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз Уа1 А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе О1п Азр Туг
20 25 30
А1а МеЕ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Бег О1у 11е Азп Тгр 11е Бег Азр Азр МеЕ О1у Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
МеЕ О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азр Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Ьуз О1у Ьеи Агд РЬе Ьеи Азр Туг Уа1 МеЕ Азр Уа1 Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 99
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 99
ддаЕЕсассЕ ЕЕсаадаЕЕа Едсс
<210> 100
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 100
О1у РЬе ТЬг РЬе О1п Азр Туг А1а 1 5
24
<210> 101
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 101
аЕЕааЕЕдда ЕЕадЕдаЕда саЕд
<210> 102
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 102
24
- 51 030397
11е Азп Тгр 11е Зег Азр Азр МеЕ 1 5
<210> 103
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 103
дсаааадаЕа адддаЕЕасд аЕЕЕЕЕддас ЕаЕдЕЕаЕдд асдЕс 45
<210> 104
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 104
А1а Ьуз Азр Ьуз О1у Ьеи Агд РЬе Ьеи Азр Туг Уа1 МеЕ Азр Уа1 1 5 10 15
<210> 105
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 105
дасаЕссадЕ ЕдасссадЕс ЕссЕсЕсЕсс сЕдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс 60
аЕсЕссЕдса ддЕсЕасЕса дадссЕссЕд саЕаддааЕд дссасаасЕа ЕЕЕдсаЕЕдд 120
ЕассЕасаЕа адссадддса дЕсЕссасаа сЕссЕдаЕЕс аЕсЕдддЕЕс ЕааЕсдддсс 180
ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас асЕдааааЕс 240
адсададЕдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕс ЕаЕЕасЕдса ЕдсаадсЕсЕ асадасЕссд 300
ЕасасЕЕЕЕд дссаддддас сааддЕддад аЕсааасда 339
<210> 106
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 106
Азр 1 11е Ο1η Ьеи ТЬг 5 Ο1η Зег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег ТЬг Ο1η Зег Ьеи Ьеи Н1з Агд
20 25 30
Азп О1у Н1з Азп Туг Ьеи Н1з Тгр Туг Ьеи Н1з Ьуз Рго О1у Ο1η Зег
35 40 45
Рго Ο1η Ьеи Ьеи 11е Н1з Ьеи О1у Зег Азп Агд А1а Зег О1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
- 52 030397
Зег Агд Уа1
О1и А1а
85
О1и Азр Уа1 О1у Уа1 90
Туг Туг Суз Ме+ О1п А1а 95
Ьеи О1п ТЬг Рго Туг ТЬг РЬе О1у О1п О1у 100 105
Агд
ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз 110
<210> 107
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 107
сададсс+сс +дса+аддаа +ддссасаас +а+
<210> 108
<211> 11
<212> БЕЛОК
33
последовательность
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 108
О1п Зег Ьеи Ьеи Нтз
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 109
с+ддд++с+
<210> 110
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 110
Ьеи О1у Зег 1
<210> 111
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
Агд Азп О1у Н1з Азп 10
последовательность
последовательность
последовательность
Туг
- 53 030397
<400> 111
абдсаадсбс басадасбсс дбасасб 27
<210> 112
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 112
Меб О1п А1а Ьеи О1п ТЪг Рго Туг ТЪг 1 5
<210> 113
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 113
даддбдсадс бддбддадбс бдддддаддс ббддбасадс сбддсаддбс ссбдадасбс 60
бссбдбдбад ссбсбддабб сассбббсаа даббабдсса бдсасбдддб ссддсаадсб 120
ссаддааадд дссбддадбд ддбсбсаддб аббааббдда ббадбдабда сабдддсбаб 180
дсддасбсбд бдабдддссд аббсассабс бссададаса асдссаадаа сбсссбдбаб 240
сбдсааабдд асадбсбдад адсбдаддас асддссббдб аббасбдбдс аааадабаад 300
ддаббасдаб ббббддасба бдббабддас дбсбддддсс аадддассас ддбсассдбс 360
бсс 363
<210> 114
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 114
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у Агд
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз Уа1 А1а Бег О1у РЪе ТЪг РЪе О1п Азр Туг
20 25 30
А1а Меб Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Бег О1у 11е Азп Тгр 11е Бег Азр Азр Меб О1у Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
Меб О1у Агд РЪе ТЪг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п Меб Азр Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЪг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Ьуз О1у Ьеи Агд РЪе Ьеи Азр Туг Уа1 Меб Азр Уа1 Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 Бег
115 120
<210> 115 <211> 336
- 54 030397
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 115
дасаТсдТда ТдасссадТс ТссТсТсТсс сТдсссдТса ссссТддада дссддссТсс 60
аТсТссТдса ддТсТасТса дадссТссТд саТаддааТд дссасаасТа ТТТдсаТТдд 120
ТассТасаТа адссадддса дТсТссасаа сТссТдаТТс аТсТдддТТс ТааТсдддсс 180
ТссддддТсс сТдасаддТТ садТддсадТ ддаТсаддса садаТТТТас асТдааааТс 240
адсададТдд аддсТдадда ТдТТддддТс ТаТТасТдса ТдсаадсТсТ асадасТссд 300
ТасасТТТТд дссаддддас саадсТддад аТсааа 336
<210> 116
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 116
Азр 1 11е Уа1 МеТ ТЬг 5 О1п Зег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег ТЬг О1п Зег Ьеи Ьеи Щз Агд
20 25 30
Азп О1у Щз Азп Туг Ьеи Щз Тгр Туг Ьеи Щз Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Щз Ьеи О1у Зег Азп Агд А1а Зег О1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд Уа1 О1и А1а О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз МеТ О1п А1а
85 90 95
Ьеи О1п ТЬг Рго Туг ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 117
<211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 117
саддТдсадс ТддТддадТс ТддддсТдад дТдаадаадс сТддддссТс адТдааддТс 60
ТссТдсаадд сТТсТддаТа сассТТсасс ддсТасТаТа ТдсасТдддТ дсдасаддсс 120
ссТддасаад ддсТТдадТд даТдддаТдд аТсааассТа ааадТддТдд сасааасТаТ 180
дТасадаадТ ТТсадддсад ддТсассаТд ассадддаса сдТссаТсаа сасадссТас 240
аТддаасТаа асааТсТдаа аТсТдасдас асддссдТТТ аТТасТдТдс дасТддаддд 300
адТсаадаТд сТТсТдаТТТ сТддддссаа дддасааТдд ТсассдТсТс ТТса 354
<210> 118
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 55 030397
<400> 118
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг О1у Туг
20 25 30
Туг МеЕ Нбз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЕ
35 40 45
О1у Тгр 11е Ьуз Рго Ьуз Зег О1у О1у ТЬг Азп Туг Уа1 О1п Ьуз РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЕ ТЬг Агд Азр ТЬг Зег 11е Азп ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Азп Азп Ьеи Ьуз Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а ТЬг Обу О1у Зег О1п Азр А1а Зег Азр РЬе Тгр О1у О1п О1у ТЬг
100 105 110
МеЕ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 119
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 119
ддаЕасассЕ ЕсассддсЕа сЕаЕ
<210> 120
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 120
О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг О1у Туг Туг 1 5
24
<210> 121
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 121
аЕсааассЕа ааадЕддЕдд саса
<210> 122
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 122
24
- 56 030397
11е Ьуз Рго Ьуз Бег О1у О1у ТЬг 1 5
<210> 123
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 123
дсдасЬддад ддадЬсаада ЬдсЬЬсЬдаЬ ЬЬс 33
<210> 124
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 124
А1а ТЬг О1у О1у Бег О1п Азр А1а Бег Азр РЬе
1 5 10
<210> 125
<211> 324
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 125
дасаЬссадЬ ЬдасссадЬс ЬссаЬсЬЬсс дЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддадд сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдЬс дддсдадЬса ддаЬаЬЬадс аЬсЬддЬЬад ссЬддЬаЬса асадааасса 120
дддааадссс сЬаассЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ дсаЬссадЬЬ ЬасааадЬдд ддЬсссаЬса 180
аддЬЬсадсд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ссЬдсадссЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа ЬЬдЬсаасад дсЬдасадЬЬ ЬсссдсЬсас ЬЬЬсддсддЬ 300
дддассаадс ЬддадаЬсаа асда 324
<210> 126
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 126
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг О1п 5 Бег Рго Бег Бег 10 Уа1 Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
О1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п Азр 11е Бег 11е Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Азп Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
- 57 030397
О1и Азр РИе А1а ТИг Туг Туг Суз О1п О1п А1а Азр Бег РИе Рго Ьей
85 90 95
ТИг РИе О1у О1у О1у ТИг Ьуз Ьей О1и 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 127
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 127
саддабабба дсабсбдд
<210> 128
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 128
О1п Азр 11е Бег 11е
1 5
<210> 129
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 129
дсбдсабсс
<210> 130
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 130
А1а А1а Бег
1
<210> 131
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 131
последовательность
последовательность
Тгр
последовательность
последовательность
последовательность
18
- 58 030397
саасаддсЛд асадЛЛЛссс дсЛсасЛ
27
<210> 132
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 132
О1п О1п А1а Азр Бег РЬе Рго Ьеи ТЬг 1 5
<210> 133
<211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 133
саддЛдсадс ЛддЛдсадЛс ЛддддсЛдад дЛдаадаадс сЛддддссЛс адЛдааддЛс 60
ЛссЛдсаадд сЛЛсЛддаЛа сассЛЛсасс ддсЛасЛаЛа ЛдсасЛдддЛ дсдасаддсс 120
ссЛддасаад ддсЛЛдадЛд даЛдддаЛдд аЛсааассЛа ааадЛддЛдд сасааасЛаЛ 180
дЛасадаадЛ ЛЛсадддсад ддЛсассаЛд ассадддаса сдЛссаЛсаа сасадссЛас 240
аЛддаасЛаа асааЛсЛдаа аЛсЛдасдас асддссдЛЛЛ аЛЛасЛдЛдс дасЛддаддд 300
адЛсаадаЛд сЛЛсЛдаЛЛЛ сЛддддссаа дддасааЛдд ЛсассдЛсЛс ЛЛса 354
<210> 134
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 134
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг О1у Туг
20 25 30
Туг МеЛ ΗΪ8 Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЛ
35 40 45
О1у Тгр 11е Ьуз Рго Ьуз Бег О1у О1у ТЬг Азп Туг Уа1 О1п Ьуз РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЛ ТЬг Агд Азр ТЬг Бег 11е Азп ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЛ О1и Ьеи Азп Азп Ьеи Ьуз Бег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а ТЬг О1у О1у Бег О1п Азр А1а Бег Азр РЬе Тгр О1у О1п О1у ТЬг
100 105 110
МеЛ Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115
<210> 135
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 59 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 135
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕсЕЕсс дЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддадд сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдЕс дддсдадЕса ддаЕаЕЕадс аЕсЕддЕЕад ссЕддЕаЕса асадааасса 120
дддааадссс сЕаассЕссЕ даЕсЕаЕдсЕ дсаЕссадЕЕ ЕасааадЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕасЕа ЕЕдЕсаасад дсЕдасадЕЕ ЕсссдсЕсас ЕЕЕсддсддЕ 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа а 321
<210> 136
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 136
Азр 1 11е О1п МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег Бег Уа1 10 Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
О1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п Азр 11е Бег 11е Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Азп Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п А1а Азр Бег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 137
<211> 378
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 137
саддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддадсс ЕЕддЕааадс сЕддддддЕс ссЕЕадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ЕсЕсЕддаЕЕ сасЕЕЕсаЕЕ ааЕдасЕдда ЕдаасЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссадддаадд ддсЕддааЕд ддЕЕддссдЕ аЕЕаааадса саасЕдаЕдд Едддасааса 180
дасдасдсЕд сасссдЕдаа аддсадаЕЕс ассаЕсЕсаа дадаЕдасЕс аааааасасд 240
сЕаЕаЕсЕдс аааЕдааЕад ссЕдаааасс даддасасад ссдЕдЕаЕЕа сЕдЕассада 300
даЕаддаасс дасададааа ЕЕасЕЕсЕаЕ дасддЕаЕдд асдЕсЕдддд ссаадддасс 360
асддЕсассд ЕсЕссЕса 378
<210> 138
<211> 126
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 138
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у А1а Ьеи Уа1 Ьуз Рго О1у О1у
- 60 030397
1 5 10 15
Бег Беи Агд Беи Бег Суз А1а Уа1 Бег О1у РЪе ТЪг РЪе 11е Азп Азр
20 25 30
Тгр МеЕ Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Буз О1у Беи О1и Тгр Уа1
35 40 45
О1у Агд 11е Буз Бег ТЪг ТЪг Азр О1у О1у ТЪг ТЪг Азр Азр А1а А1а
50 55 60
Рго Уа1 Буз О1у Агд РЪе ТЪг 11е Бег Агд Азр Азр Бег Буз Азп ТЪг
65 70 75 80
Беи Туг Беи О1п МеЕ Азп Бег Беи Буз ТЪг О1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг
85 90 95
Туг Суз ТЪг Агд Азр Агд Азп Агд О1п Агд Азп Туг РЪе Туг Азр О1у
100 105 110
МеЕ Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 139
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 139
ддаЕЕсасЕЕ ЕсаЕЕааЕда сЕдд 24
<210> 140
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 140
О1у РЪе ТЪг РЪе 11е Азп Азр Тгр 1 5
<210> 141
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 141
аЕЕаааадса саасЕдаЕдд Едддасааса 30
<210> 142
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 142
11е Буз Бег ТЪг ТЪг Азр О1у О1у ТЪг ТЪг
1 5 10
- 61 030397
<210> 143
<211> 51
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 143
ассададаБа ддаассдаса дадаааББас ББсБаБдасд дБаБддасдБ с 51
<210> 144
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 144
ТЬг Агд Азр Агд Азп Агд О1п Агд Азп Туг РЬе Туг Азр О1у МеБ Азр 1 5 10 15
Уа1
<210> 145
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 145
дасаБссадБ БдасссадБс БссадБсБсс сБдсссдБса ссссБддада дссддссБсс 60
аБсБссБдса ддБсБадБса даддсБссБд саБааБааБд дааасаасБа БББддаББдд 120
БассБдсада адссадддса дБсБссасаа сБссБдаБсБ аБББдддсБс БааБсдддсс 180
БссддддБсс сБдасаддББ садБддсадБ ддаБсаддса садаБББсас асБдааадБс 240
адБададБдд аддсБдадда БдББддддББ БаББасБдса БдсаадсБсБ асааасБссд 300
БасасББББд дссаддддас саадсБддад аБсааасда 339
<210> 146
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 146
Азр 1 11е О1п Беи ТЬг 5 О1п Бег Рго Уа1 Бег 10 Беи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 С1у
О1и Рго А1а Бег 11е Бег Суз Агд Бег Бег О1п Агд Беи Беи Няз Азп
20 25 30
Азп О1у Азп Азп Туг Беи Азр Тгр Туг Беи О1п Буз Рго С1у О1п Бег
35 40 45
Рго О1п Беи Беи 11е Туг Беи О1у Бег Азп Агд А1а Бег С1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Беи Буз Уа1
65 70 75 80
- 62 030397
Зег Агд Уа1
О1и А1а
85
О1и Азр Уа1 О1у Уа1 90
Туг Туг Суз Ме+ О1п А1а 95
Ьеи О1п ТЬг Рго Туг ТЬг РЬе О1у О1п О1у 100 105
Агд
ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз 110
<210> 147
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 147
сададдс+сс +дса+аа+аа +ддааасаас +а+
<210> 148
<211> 11
<212> БЕЛОК
33
последовательность
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 148
О1п Агд Ьеи Ьеи Нтз
1 5
<210> 149
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 149
++дддс+с+
<210> 150
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 150
Ьеи О1у Зег 1
<210> 151
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
Азп Азп О1у Азп Азп 10
последовательность
последовательность
последовательность
Туг
- 63 030397
<400> 151
аТдсаадсТс ТасааасТсс дТасасТ 27
<210> 152
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 152
МеТ О1п А1а Ьеи О1п ТИг Рго Туг ТИг 1 5
<210> 153
<211> 375
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 153
даддТдсадс ТддТддадТс Тдддддадсс ТТддТааадс сТддддддТс ссТТадасТс 60
ТссТдТдсад ТсТсТддаТТ сасТТТсаТТ ааТдасТдда ТдаасТдддТ ссдссаддсТ 120
ссадддаадд ддсТддааТд ддТТддссдТ аТТаааадса саасТдаТдд Тдддасааса 180
дасдасдсТд сасссдТдаа аддсадаТТс ассаТсТсаа дадаТдасТс аааааасасд 240
сТаТаТсТдс аааТдааТад ссТдаааасс даддасасад ссдТдТаТТа сТдТассада 300
даТаддаасс дасададааа ТТасТТсТаТ дасддТаТдд асдТсТдддд ссаадддасс 360
асддТсассд ТсТсс 375
<210> 154
<211> 125
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 154
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у О1у А1а Ьеи Уа1 Ьуз Рго О1у О1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Зег О1у РИе ТИг РИе 11е Азп Азр
20 25 30
Тгр МеТ Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
О1у Агд 11е Ьуз Зег ТИг ТИг Азр О1у О1у ТИг ТИг Азр Азр А1а А1а
50 55 60
Рго Уа1 Ьуз О1у Агд РИе ТИг 11е Зег Агд Азр Азр Зег Ьуз Азп ТИг
65 70 75 80
Ьеи Туг Ьеи О1п МеТ Азп Зег Ьеи Ьуз ТИг О1и Азр ТИг А1а Уа1 Туг
85 90 95
Туг Суз ТИг Агд Азр Агд Азп Агд О1п Агд Азп Туг РИе Туг Азр О1у
100 105 110
МеТ Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТИг ТИг Уа1 ТИг Уа1 Зег
115 120 125
<210> 155 <211> 336
- 64 030397
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 155
дасабсдбда бдасссадбс бссадбсбсс сбдсссдбса ссссбддада дссддссбсс 60
абсбссбдса ддбсбадбса даддсбссбд сабаабаабд дааасаасба бббддаббдд 120
бассбдсада адссадддса дбсбссасаа сбссбдабсб абббдддсбс баабсдддсс 180
бссддддбсс сбдасаддбб садбддсадб ддабсаддса садабббсас асбдааадбс 240
адбададбдд аддсбдадда бдббддддбб баббасбдса бдсаадсбсб асааасбссд 300
басасббббд дссаддддас саадсбддад абсааа 336
<210> 156
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 156
Азр 1 11е Уа1 Меб ТИг 5 О1п Бег Рго Уа1 Бег 10 Ьей Рго Уа1 ТИг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Бег 11е Бег Суз Агд Бег Бег О1п Агд Ьей Ьей Нчз Азп
20 25 30
Азп О1у Азп Азп Туг Ьей Азр Тгр Туг Ьей О1п Ьуз Рго О1у О1п Бег
35 40 45
Рго О1п Ьей Ьей 11е Туг Ьей О1у Бег Азп Агд А1а Бег О1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РИе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТИг Азр РИе ТИг Ьей Ьуз Уа1
65 70 75 80
Бег Агд Уа1 О1и А1а О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз Меб О1п А1а
85 90 95
Ьей О1п ТИг Рго Туг ТИг РИе О1у О1п О1у ТИг Ьуз Ьей О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 157
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 157
даддбдсадс бддбддадбс бдддддаддс ббддбасадс сбддддддбс ссбдадасбс 60
бссбдбдсад ссбсбддабб сассбббадс адббабдсса бдассбдддб ссдссаддсб 120
ссадддаадд ддсббдадбд ддбсбсаддб дбаадбддаа даддбддбад басабасбас 180
дсадасбссд бдаадддссд дббсассабс бссададаса аббссаадаа сасдсбдбаб 240
сббсааабда асадссбдад адссдаддас асддссдбдб аббасбдбдс дбаббдддаб 300
абсадсбсдб ббдасбасбд дддссаддда асссбддбса сбдбсбссбс а 351
<210> 158
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 65 030397
<400> 158
О1и Уа1 Ο1η Ьеи Уа1 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 Ο1η Рго О1у О1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
А1а МеЕ ТЬг Тгр Уа1 Агд Ο1η А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег О1у Уа1 Зег О1у Агд О1у О1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи Ο1η МеЕ Азп Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Туг Тгр Азр 11е Зег Зег РЬе Азр Туг Тгр О1у Ο1η О1у ТЬг Ьеи
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 159
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 159
ддаЕЕсассЕ ЕЕадсадЕЕа Едсс
<210> 160
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 160
О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг А1а 1 5
24
<210> 161
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 161
дЕаадЕддаа даддЕддЕад Еаса
<210> 162
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 162
24
- 66 030397
ναΐ Бег О1у Агд О1у О1у Бег ТЬг 1 5
<210> 163
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 163
дсдЕаЕЕддд аЕаЕсадсЕс дЕЕЕдасЕас 30
<210> 164
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 164
А1а Туг Тгр Азр 11е Бег Бег РЬе Азр Туг 1 5 10
<210> 165
<211> 324
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 165
дасаЕссадЕ ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕЕс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсЕ дддссадЕса дддсаЕЕадс асЕЕаЕЕЕад ссЕддЕаЕса дсааааасса 120
дддаааассс сЕааасЕссЕ даЕсЕаЕдсЕ дсаЕссасЕЕ ЕдсааадЕдд адЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса сааЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдЕсаасад ЕЕЕааЕадЕЕ асссдсЕсас ЕЕЕсддсдда 300
дддассаадс ЕддадаЕсаа асда 324
<210> 166
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 166
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег РЬе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Тгр А1а Бег О1п О1у 11е Бег ТЬг Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз ТЬг Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег ТЬг Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
- 67 030397
О1и Азр РЪе А1а ТЪг 85 Туг Туг Суз О1п О1п РЪе Азп Зег Туг Рго Ьеи
90 95
ТЪг РЪе О1у О1у О1у ТЪг Ьуз Беи О1и 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 167
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 167
садддсаРРа дсасРРаР
<210> 168
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 168
О1п О1у 11е Зег ТЪг
1 5
<210> 169
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 169
дсРдсаРсс
<210> 170
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 170
А1а А1а Зег
1
<210> 171
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 171
последовательность
последовательность
Туг
последовательность
последовательность
последовательность
18
- 68 030397
саасадЕЕЕа аЕадЕЕассс дсЕсасЕ
27
<210> 172
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 172
О1п О1п РЬе Азп Зег Туг Рго Ьеи ТЬг 1 5
<210> 173
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 173
даддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс ЕЕддЕасадс сЕддддддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕадс адЕЕаЕдсса ЕдассЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссадддаадд ддсЕЕдадЕд ддЕсЕсаддЕ дЕаадЕддаа даддЕддЕад ЕасаЕасЕас 180
дсадасЕссд Едаадддссд дЕЕсассаЕс Ессададаса аЕЕссаадаа сасдсЕдЕаЕ 240
сЕЕсаааЕда асадссЕдад адссдаддас асддссдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс дЕаЕЕдддаЕ 300
аЕсадсЕсдЕ ЕЕдасЕасЕд дддссаддда асссЕддЕса сЕдЕсЕссЕс а 351
<210> 174
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 174
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
А1а МеЕ ТЬг Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег О1у Уа1 Зег О1у Агд О1у О1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Туг Тгр Азр 11е Зег Зег РЬе Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг Ьеи
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 175
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 69 030397
<220>
<223> Искусственная
<400> 175
дасаЕссадЕ ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕЕс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсЕ дддссадЕса дддсаЕЕадс асЕЕаЕЕЕад ссЕддЕаЕса дсааааасса 120
дддаааассс сЕааасЕссЕ даЕсЕаЕдсЕ дсаЕссасЕЕ ЕдсааадЕдд адЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса сааЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдЕсаасад ЕЕЕааЕадЕЕ асссдсЕсас ЕЕЕсддсдда 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа а 321
<210> 176
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 176
Азр 1 11е Ο1η Ьеи ТЬг 5 Ο1η Бег Рго Бег РЬе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Тгр А1а Бег Ο1η О1у 11е Бег ТЬг Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг Ο1η Ο1η Ьуз Рго О1у Ьуз ТЬг Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег ТЬг Ьеи Ο1η Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи Ο1η Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ο1η Ο1η РЬе Азп Бег Туг Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 177
<211> 369
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 177
даддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс дЕддЕссадс сЕдддадаЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдЕдд ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕсадЕ аасЕаЕддса ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссаддсаадд ддсЕддааЕд ддЕддсадЕЕ аЕаЕсаЕаЕд аЕддаааЕаа ЕдаЕЕЕдЕаЕ 180
ЕсадасЕссд Едаадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса аЕдссаадаа сдсдсЕдЕсЕ 240
сЕдсаааЕда ссадссЕдад адсЕдаддас асддсЕдЕсЕ аЕЕасЕдЕдс дададаЕадЕ 300
асдаЕдасЕс ссЕасЕасЕа ссасддЕаЕа дасдЕсЕддд дссаадддас сасддЕсасс 360
дЕсЕссЕса 369
<210> 178
<211> 123
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 178
О1и Уа1 Ο1η Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Уа1 Уа1 Ο1η Рго О1у Агд
- 70 030397
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз Уа1 А1а Бег О1у РЪе ТЪг РЪе Бег Азп Туг
20 25 30
О1у МеБ Няз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Бег Туг Азр О1у Азп Азп Азр Ьеи Туг Бег Азр Бег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЪе ТЪг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп А1а Ьеи Бег
65 70 75 80
Ьеи О1п МеБ ТЪг Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Бег ТЪг МеБ ТЪг Рго Туг Туг Туг Нтз О1у 11е Азр Уа1
100 105 110
Тгр О1у О1п О1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 179
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 179
ддаББсассБ БсадБаасБа Бддс
<210> 180
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 180
О1у РЪе ТЪг РЪе Бег Азп Туг О1у 1 5
<210> 181
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 181
аБаБсаБаБд аБддаааБаа БдаБ
<210> 182
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 182
11е Бег Туг Азр О1у Азп Азп Азр 1 5
24
24
- 71 030397
<210> 183
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 183
дсдададаЕа дЕасдаЕдас ЕсссЕасЕас ЕассасддЕа ЕадасдЕс 48
<210> 184
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 184
А1а Агд Азр Бег ТЬг МеЕ ТЬг Рго Туг Туг Туг Н1з О1у 11е Азр Уа1 1 5 10 15
<210> 185
<211> 324
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 185
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕсс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсс дддсаадЕса ддасаЕЕада ааЕдаЕЕЕад дсЕддЕаЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаадсдссЕ даЕсЕаЕдсЕ дсаЕссадЕЕ ЕдсааадЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс Едддасадас ЕЕсасЕсЕса сааЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдЕсЕасад саЕааЕадЕЕ асссЕссдас дЕЕсддссаа 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа асда 324
<210> 186
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 186
Азр 1 11е О1п МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег Бег 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п Азр 11е Агд Азп Азр
20 25 30
Ьеи О1у Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Агд Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Нтз Азп Бег Туг Рго Рго
85 90 95
- 72 030397
ТЪг РЪе О1у О1п О1у ТЪг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз Агд 100 105
<210> 187
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 187
саддасабба дааабдаб 18
<210> 188
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 188
О1п Азр 11е Агд Азп Азр 1 5
<210> 189
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 189
дсбдсабсс 9
<210> 190
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 190
А1а А1а Бег
1
<210> 191
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 191
сбасадсаба абадббассс бссдасд 27
- 7З 030397
<210> 192
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 192
Ьеи О1п Щз Азп Зег Туг Рго Рго ТЬг 1 5
<210> 193
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 193
саддТдсадс ТддТддадТс Тдддддаддс дТддТссадс сТдддадаТс ссТдадасТс 60
ТссТдТдТдд ссТсТддаТТ сассТТсадТ аасТаТддса ТдсасТдддТ ссдссаддсТ 120
ссаддсаадд ддсТддааТд ддТддсадТТ аТаТсаТаТд аТддаааТаа ТдаТТТдТаТ 180
ТсадасТссд Тдаадддссд аТТсассаТс Тссададаса аТдссаадаа сдсдсТдТсТ 240
сТдсаааТда ссадссТдад адсТдаддас асддсТдТсТ аТТасТдТдс дададаТадТ 300
асдаТдасТс ссТасТасТа ссасддТаТа дасдТсТддд дссаадддас сасддТсасс 360
дТсТсс 366
<210> 194
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 194
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у О1у О1у Уа1 Уа1 О1п Рго О1у Агд
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Азп Туг
20 25 30
О1у МеТ ΗίΈ Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Зег Туг Азр О1у Азп Азп Азр Ьеи Туг Зег Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп А1а Ьеи Зег
65 70 75 80
Ьеи О1п МеТ ТЬг Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Зег ТЬг МеТ ТЬг Рго Туг Туг Туг Щз О1у 11е Азр Уа1
100 105 110
Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег
115 120
<210> 195
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 74 030397
<223> Искусственная
<400> 195
даса+ссада +дасссад+с +сса+сс+сс с+д+с+дса+ с+д+аддада садад+сасс 60
а+сас++дсс дддсаад+са ддаса++ада аа+да+++ад дс+дд+а+са дсадааасса 120
дддааадссс с+аадсдсс+ да+с+а+дс+ дса+ссад++ +дсааад+дд дд+ссса+са 180
адд++садсд дсад+дда+с +дддасадас ++сас+с+са саа+садсад сс+дсадсс+ 240
даада++++д саас++а++а с+д+с+асад са+аа+ад++ ассс+ссдас д++сддссаа 300
дддассаадд +ддада+саа а 321
<210> 196
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 196
Азр 1 11е О1п Ме+ ТЬг 5 О1п Зег Рго Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег О1п Азр 11е Агд Азп Азр
20 25 30
Ьеи О1у Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Агд Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи О1п Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Н1з Азп Зег Туг Рго Рго
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 197
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 197
дадд+дсадс +дд+ддад+с +дддддаддс ++дд+дсадс с+дддддд+с сс+дадас+с 60
+сс+д++сад сс+с+дда++ сасс+++ад+ ааа+а+д+са +дасс+ддд+ ссдссаддс+ 120
ссадддаадд дас+ддад+д дд+с+садс+ а++дд+сс+а с+дд+сд+ас сасддаа+ас 180
дсадас+ссд +дсадддссд с++сасса+с +ссададаса а++сса+даа сасдд+++++ 240
с++сас++да асад+с+дас адссдаддас асддссдаа+ а++а++д+дс даада+д+++ 300
дас+ддаа++ асдасд+д+а с+++дас+сс +ддддссадд даассс+дд+ сас+д+с+сс 360
+са 363
<210> 198
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 198
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
- 75 030397
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег Суз Бег А1а Бег 25 О1у РИе ТИг РИе Бег 30 Ьуз Туг
Уа1 МеЁ ТИг Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Бег А1а 11е О1у Рго ТИг О1у Агд ТИг ТИг О1и Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РИе ТИг 11е Бег Агд Азр Азп Бег МеЁ Азп ТИг Уа1 РИе
65 70 75 80
Ьеи Нтз Ьеи Азп Бег Ьеи ТИг А1а О1и Азр ТИг А1а О1и Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз МеЁ РИе Азр Тгр Азп Туг Азр Уа1 Туг РИе Азр Бег Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТИг Ьеи Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 199
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 199
ддаЬЬсассЬ ЬЬадЬаааЬа ЁдЁс
<210> 200
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 200
О1у РИе ТИг РИе Бег Ьуз Туг Уа1 1 5
<210> 201
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 201
аЬЬддЬссЬа сЬддЬсдЬас сасд
<210> 202
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 202
11е О1у Рго ТИг О1у Агд ТИг ТИг 1 5
24
24
- 76 030397
<210> 203
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 203
дсдаадаЕдЕ ЕЕдасЕддаа ЕЕасдасдЕд ЕасЕЕЕдасЕ сс 42
<210> 204
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 204
А1а Ьуз МеЕ РИе Азр Тгр Азп Туг Азр Уа1 Туг РИе Азр Зег 1 5 10
<210> 205
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 205
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕсссЕссаЕс ЕЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсс ддассадЕса дадЕаЕЕадЕ ааЕЕддЕЕдд ссЕддЕаЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаассЕссЕ даЕсЕаЕаад дсдЕсЕадЕЕ ЕадааадЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс Едддасадаа ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даЕдаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдЕсаасад ЕаЕЕаЕадаЕ аЕЕддасдЕЕ сддссааддд 300
ассааддЕдд адаЕсааасд а 321
<210> 206
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 206
Азр 1 11е О1п МеЕ ТИг 5 О1п Зег Рго Зег 11е 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТИг 11е ТИг Суз Агд ТИг Зег О1п Зег 11е Зег Азп Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Азп Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Ьуз А1а Зег Зег Ьеи О1и Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РИе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТИг О1и РИе ТИг Ьеи ТИг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
Азр Азр РИе А1а ТИг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Туг Агд Туг Тгр ТИг
85 90 95
РИе О1у О1п О1у ТИг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз Агд
- 77 030397
100
105
<210> 207
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 207
сададЛаЛЛа дЛааЛЛдд
<210> 208
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 208
О1п Бег 11е Бег Азп
1 5
последовательность
последовательность
Тгр
18
<210> 209
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 209
ааддсдЛсЛ
<210> 210
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 210
Ьуз А1а Бег
1
последовательность
последовательность
<210> 211
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
последовательность
<400> 211
саасадЛаЛЛ аЛадаЛаЛЛд дасд
<210> 212
24
- 78 030397
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 212
О1п О1п Туг Туг Агд Туг Тгр ТЪг 1 5
<210> 213
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 213
даддбдсадс бддбддадбс бдддддаддс ббддбдсадс сбддддддбс ссбдадасбс 60
бссбдббсад ссбсбддабб сассбббадб ааабабдбса бдассбдддб ссдссаддсб 120
ссадддаадд дасбддадбд ддбсбсадсб аббддбссба сбддбсдбас сасддаабас 180
дсадасбссд бдсадддссд сббсассабс бссададаса аббссабдаа сасддббббб 240
сббсасббда асадбсбдас адссдаддас асддссдааб аббаббдбдс даадабдббб 300
дасбддаабб асдасдбдба сбббдасбсс бддддссадд даасссбддб сассдбсбсс 360
бса 363
<210> 214
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 214
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз Бег А1а Бег О1у РЪе ТЪг РЪе Бег Ьуз Туг
20 25 30
Уа1 Меб ТЪг Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Бег А1а 11е О1у Рго ТЪг О1у Агд ТЪг ТЪг О1и Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РЪе ТЪг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Меб Азп ТЪг Уа1 РЪе
65 70 75 80
Ьеи Н1з Ьеи Азп Бег Ьеи ТЪг А1а О1и Азр ТЪг А1а О1и Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Меб РЪе Азр Тгр Азп Туг Азр Уа1 Туг РЪе Азр Бег Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 215
<211> 318
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 79 030397
<400> 215
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕсссЕссаЕс ЕЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсс ддассадЕса дадЕаЕЕадЕ ааЕЕддЕЕдд ссЕддЕаЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаассЕссЕ даЕсЕаЕаад дсдЕсЕадЕЕ ЕадааадЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс Едддасадаа ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даЕдаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдЕсаасад ЕаЕЕаЕадаЕ аЕЕддасдЕЕ сддссааддд 300
ассааддЕдд адаЕсааа 318
<210> 216
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 216
Азр 1 11е О1п МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег 11е 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд ТЬг Бег О1п Бег 11е Бег Азп Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Азп Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Ьуз А1а Бег Бег Ьеи О1и Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг О1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
Азр Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Туг Агд Туг Тгр ТЬг
85 90 95
РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 217
<211> 369
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 217
саддЕЕсадс ЕддЕдсадЕс Едддддаддс ЕЕддЕасадс сЕддддддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕадЕ ааЕЕаЕдЕса ЕдаасЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссадддаадд ддсЕддадЕд ддЕсЕсадЕЕ аЕаадЕддЕа дЕддсддЕад сасасасЕас 180
дсадасЕссд Едаадддссд дЕЕсассаЕс Ессададаса аЕЕссааада сдсдсЕдЕаЕ 240
сЕасаааЕда асадссЕдад адссдаддас асддссдЕЕЕ аЕЕасЕдЕдс даааддсссд 300
сЕддаддсЕЕ асЕасЕасЕа саасддЕаЕд дасдЕсЕддд дссаадддас сасддЕсасс 360
дЕсЕссЕса 369
<210> 218
<211> 123
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 218
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Бег Азп Туг
- 80 030397
20 25 30
Уа1 МеР Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Беи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег Уа1 11е Зег О1у Зег О1у О1у Зег ТЪг Н1з Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Буз Азр А1а Ьеи Туг
65 70 75 80
Беи О1п МеР Азп Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Буз О1у Рго Беи О1и А1а Туг Туг Туг Туг Азп О1у МеР Азр Уа1
100 105 110
Тгр О1у О1п О1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 219
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 219
ддаРРсассР РРадРааРРа РдРс
<210> 220
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 220
О1у РЪе ТЪг РЪе Зег Азп Туг Уа1 1 5
<210> 221
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 221
аРаадРддРа дРддсддРад саса
<210> 222
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 222
11е Зег О1у Зег О1у О1у Зег ТЪг 1 5
24
24
- 81 030397
<210> 223
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 223
дсдаааддсс сдсЕддаддс ЕЕасЕасЕас ЕасаасддЕа ЕддасдЕс 48
<210> 224
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 224
А1а Ьуз О1у Рго Ьеи О1и А1а Туг Туг Туг Туг Азп О1у МеЕ Азр Уа1 1 5 10 15
<210> 225
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 225
дссаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕЕс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдсЕ дддссадЕса ддссаЕЕадс адЕЕаЕЕЕад ссЕддЕаЕса дсасааасса 120
дддададссс сЕаадсЕссЕ даЕсЕаЕЕсЕ асаЕссасЕЕ ЕдсааадЕдд адЕсссаЕса 180
аддЕЕсадсд дсадЕддаЕс Едддасадаа ЕЕсасЕсЕса сааЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдЕсаасад сЕЕааЕадЕЕ ассссассЕЕ сддссааддд 300
ассаадсЕдд адаЕсааасд а 321
<210> 226
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 226
А1а 1 11е О1п МеЕ ТЪг 5 О1п Бег Рго Бег РЪе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг Суз Тгр А1а Бег О1п А1а 11е Бег Бег Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п Н1з Ьуз Рго О1у Агд А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Бег ТЪг Бег ТЪг Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЪе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЪг О1и РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЪе А1а ТЪг Туг Туг Суз О1п О1п Ьеи Азп Бег Туг Рго ТЪг
85 90 95
РЪе О1у О1п О1у ТЪг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз Агд
100 105
- 82 030397
<210> 227
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 227
саддссаЬЬа дсадЬЬаЬ
<210> 228
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 228
О1п А1а 11е Бег Бег
1 5
<210> 229
<211> 9
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 229
ЬсЬасаЬсс
<210> 230
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
<400> 230
Бег ТЬг Бег 1
<210> 231
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственная
последовательность
Туг
последовательность
последовательность
последовательность
18
<400> 231
саасадсЬЬа аЬадЬЬассс сасс
<210> 232 <211> 8
24
- 83 030397
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 232
О1п О1п Ьеи Азп Бег Туг Рго ТЬг 1 5
<210> 233
<211> 369
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 233
даддБдсадс БддБддадБс Бдддддаддс ББддБасадс сБддддддБс ссБдадасБс 60
БссБдБдсад ссБсБддаББ сассБББадБ ааББаБдБса БдаасБдддБ ссдссаддсБ 120
ссадддаадд ддсБддадБд ддБсБсадББ аБаадБддБа дБддсддБад сасасасБас 180
дсадасБссд Бдаадддссд дББсассаБс Бссададаса аББссааада сдсдсБдБаБ 240
сБасаааБда асадссБдад адссдаддас асддссдБББ аББасБдБдс даааддсссд 300
сБддаддсББ асБасБасБа саасддБаБд дасдБсБддд дссаадддас сасддБсасс 360
дБсБссБса 369
<210> 234
<211> 123
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 234
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Бег Азп Туг
20 25 30
Уа1 МеБ Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Бег Уа1 11е Бег О1у Бег О1у О1у Бег ТЬг Н1з Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азр А1а Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеБ Азп Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз О1у Рго Ьеи О1и А1а Туг Туг Туг Туг Азп О1у МеБ Азр Уа1
100 105 110
Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 235
<211> 318
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
- 84 030397
<400> 235
дасаЛссадЛ ЛдасссадЛс ЛссаЛссЛЛс сЛдЛсЛдсаЛ сЛдЛаддада сададЛсасс 60
аЛсасЛЛдсЛ дддссадЛса ддссаЛЛадс адЛЛаЛЛЛад ссЛддЛаЛса дсасааасса 120
дддададссс сЛаадсЛссЛ даЛсЛаЛЛсЛ асаЛссасЛЛ ЛдсааадЛдд адЛсссаЛса 180
аддЛЛсадсд дсадЛддаЛс Лдддасадаа ЛЛсасЛсЛса сааЛсадсад ссЛдсадссЛ 240
даадаЛЛЛЛд саасЛЛаЛЛа сЛдЛсаасад сЛЛааЛадЛЛ ассссассЛЛ сддссааддд 300
ассаадсЛдд адаЛсааа 318
<210> 236
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 236
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег РЬе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Тгр А1а Бег О1п А1а 11е Бег Бег Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п ΗΪ8 Ьуз Рго О1у Агд А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Бег ТЬг Бег ТЬг Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг О1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Ьеи Азп Бег Туг Рго ТЬг
85 90 95
РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 237
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<220>
<221> УАЫАЫТ
<222> (1)...(1)
<223> Хаа = О1у
<220>
<221> УАЫАЫТ
<222> (2)...(2)
<223> Хаа = РЬе
<220>
<221> УАЫАЫТ
<222> (3)...(3)
<223> Хаа = ТЬг
<220>
<221> УАЫАЫТ
<222> (4)...(4)
<223> Хаа = РЬе
<220>
- 85 030397
<221> УАК1АЫТ <222> (5)...(5) <223> Хаа = Зег
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (6)...(6)
<223> Хаа = ТЬг, Зег, ог Азп
<220>
<221> УАК1АЫТ <222> (7)...(7) <223> Хаа = Туг
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (8)...(8)
<223> Хаа = О1у, Тгр, Уа1, ог А1а
<400> 237
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5
<210> 238
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (1)...(1)
<223> Хаа = 11е ог Уа1
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (2)...(2)
<223> Хаа = Зег ог Ьуз
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (3)...(3)
<223> Хаа = О1у ог О1и
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (4)...(4)
<223> Хаа = ТЬг, Азр, Зег, ог Агд
<220>
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (5)...(5)
<223> Хаа = О1у
- 86 030397
<221> УАК1АЫТ
<222> (6)...(6)
<223> Хаа = Агд, Бег, ог О1у
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (7)...(7)
<223> Хаа = ТИг, О1и, ог Бег
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (8)...(8)
<223> Хаа = ТИг ог Ьуз
<400> 238
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5
<210> 239
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусстве
<220>
<223> Искусстве
<220>
<221> УАКТАЫТ
<222> (1)... (1)
<223> Хаа = ТИг
<220>
<221> УАКТАЫТ
<222> (2)... • (2)
<223> Хаа = Ьуз
<220>
<221> УАКТАЫТ
<222> (3)... • (3)
<223> Хаа = О1и
<220>
<221> УАКТАЫТ
<222> (4)... • (4)
<223> Хаа = Азр
Агд ог аЬзепб
О1у ог аЬзепб
Рго ог аЬзепб
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (5)...(5)
<223> Хаа = Ьей ог аЬзепб
<220>
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (6)...(6)
<223> Хаа = Агд, Туг, О1и ог аЬзепб
- 87 030397
<221> УАКЬАЫТ
<222> (7)...(7)
<223> Хаа = О1у, Азр, А1а ог аЬзепЬ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (8)...(8)
<223> Хаа = Азр, Бег ог Туг
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (9)...(9)
<223> Хаа = Туг ог Тгр
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (10)...(10)
<223> Хаа = Туг ог Азр
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (11)...(11)
<223> Хаа =Туг, Ьуз ог 11е
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (12)...(12)
<223> Хаа = О1у, Туг, Азп, ог Бег
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (13)...(13)
<223> Хаа =Уа1, О1у ог Бег
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (14)...(14)
<223> Хаа = РЬе ог МеЬ
<220>
<221> УАКЬАЫТ <222> (15)...(15) <223> Хаа = Азр
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (16)...(16)
<223> Хаа = Туг ог Уа1
<400> 239
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа
1 5 10 15
- 88 030397
<210> 240
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (1)...(1)
<223> Хаа = О1п
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (2)...(2)
<223> Хаа = ТИг, Зег, А1а ог О1у
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (3)...(3)
<223> Хаа = 11е
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (4)...(4)
<223> Хаа = Зег ог Ьеи
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (5)...(5)
<223> Хаа = Туг ог аЬзепТ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (6)...(6)
<223> Хаа = Зег ог аЬзепТ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (7)...(7)
<223> Хаа = Зег ог аЬзепТ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (8)...(8)
<223> Хаа = Азп ог аЬзепТ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (9)...(9)
<223> Хаа = Азп ог аЬзепТ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (10)...(10)
<223> Хаа = Ьуз ог аЬзепТ
- 89 030397
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (11)...(11)
<223> Хаа = Зег, Азп ог ТЬг
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (12).. .(12)
<223> Хаа = Тгр ог Туг
<400> 240
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа
1 5 10
<210> 241
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (1)...(1)
<223> Хаа = А1а, Тгр ог Зег
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (2)...(2)
<223> Хаа = А1а ог ТЬг
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (3)...(3)
<223> Хаа = Зег
<400> 241
Хаа Хаа Хаа 1
<210> 242
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (1)...(1)
<223> Хаа =О1п
<220>
<221> УАКбАЫТ
<222> (2)...(2)
<223> Хаа = О1п
- 90 030397
<220> <221> УАКТАЫТ
<222> (3). ..(3)
<223> Хаа = Туг, Ьеи ог РЬе
<220> <221> УАКТАЫТ
<222> (4). ..(4)
<223> Хаа = Няз, Туг ог Азп
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (5)...(5)
<223> Хаа = Агд ог Бег
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (6)...(6)
<223> Хаа = Бег, ТЬг ог Туг
<220>
<221> УАК1АЫТ <222> (7)...(7)
<223> Хаа =Тгр ог Рго
<220>
<221> УАК1АЫТ
<222> (8)...(8)
<223> Хаа = РЬе, Ьеи ог аЬзепЕ
<220>
<221> УАКЬАЫТ
<222> (9)...(9)
<223> Хаа = ТЬг
<400> 242
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5
<210> 243
<211> 756
<212> ДНК
<213> Ното заряепз
<400> 243
аЕддссдадд аЕсЕдддасЕ дадсЕЕЕддд дааасадсса дЕдЕддаааЕ дсЕдссадад 60
сасддсадсЕ дсаддсссаа ддссаддадс адсадсдсас дсЕдддсЕсЕ сассЕдсЕдс 120
сЕддЕдЕЕдс ЕссссЕЕссЕ ЕдсаддасЕс ассасаЕасс ЕдсЕЕдЕсад ссадсЕссдд 180
дсссадддад аддссЕдЕдЕ дсадЕЕссад дсЕсЕаааад дасаддадЕЕ ЕдсассЕЕса 240
саЕсадсаад ЕЕЕаЕдсасс ЕсЕЕададса дасддадаЕа адссаадддс асассЕдаса 300
дЕЕдЕдадас ааасЕсссас асадсасЕЕЕ аааааЕсадЕ ЕсссадсЕсЕ дсасЕдддаа 360
саЕдаасЕад дссЕддссЕЕ сассаадаас сдааЕдаасЕ аЕассаасаа аЕЕссЕдсЕд 420
аЕсссададЕ сдддадасЕа сЕЕсаЕЕЕас ЕсссаддЕса саЕЕссдЕдд даЕдассЕсЕ 480
дадЕдсадЕд аааЕсадаса адсаддссда ссааасаадс садасЕссаЕ сасЕдЕддЕс 540
аЕсассаадд Еаасадасад сЕасссЕдад ссаасссадс ЕссЕсаЕддд дассаадЕсЕ 600
дЕаЕдсдаад ЕаддЕадсаа сЕддЕЕссад сссаЕсЕасс ЕсддадссаЕ дЕЕсЕссЕЕд 660
- 91 030397
саадаадддд асаадсЕааЕ ддЕдаасдЕс адЕдасаЕсЕ сЕЕЕддЕдда ЕЕасасаааа 720 даадаЕаааа ссЕЕсЕЕЕдд адссЕЕсЕЕа сЕаЕад 756
<210> 244
<211> 251
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<400> 244
МеЕ 1 А1а О1и Азр Ьеи 5 О1у Ьеи Бег РЬе О1у О1и 10 ТЬг А1а Бег Уа1 15 О1и
МеЕ Ьеи Рго О1и Н1з О1у Бег Суз Агд Рго Ьуз А1а Агд Бег Бег Бег
20 25 30
А1а Агд Тгр А1а Ьеи ТЬг Суз Суз Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи Рго РЬе Ьеи А1а
35 40 45
О1у Ьеи ТЬг ТЬг Туг Ьеи Ьеи Уа1 Бег О1п Ьеи Агд А1а О1п О1у О1и
50 55 60
А1а Суз Уа1 О1п РЬе О1п А1а Ьеи Ьуз О1у О1п О1и РЬе А1а Рго Бег
65 70 75 80
Н1з О1п О1п Уа1 Туг А1а Рго Ьеи Агд А1а Азр О1у Азр Ьуз Рго Агд
85 90 95
А1а Н1з Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 Агд О1п ТЬг Рго ТЬг О1п Н1з РЬе Ьуз Азп
100 105 110
О1п РЬе Рго А1а Ьеи Н1з Тгр О1и Н1з О1и Ьеи О1у Ьеи А1а РЬе ТЬг
115 120 125
Ьуз Азп Агд МеЕ Азп Туг ТЬг Азп Ьуз РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго О1и Бег
130 135 140
О1у Азр Туг РЬе 11е Туг Бег О1п Уа1 ТЬг РЬе Агд О1у МеЕ ТЬг Бег
145 150 155 160
О1и Суз Бег О1и 11е Агд О1п А1а О1у Агд Рго Азп Ьуз Рго Азр Бег
165 170 175
11е ТЬг Уа1 Уа1 11е ТЬг Ьуз Уа1 ТЬг Азр Бег Туг Рго О1и Рго ТЬг
180 185 190
О1п Ьеи Ьеи МеЕ О1у ТЬг Ьуз Бег Уа1 Суз О1и Уа1 О1у Бег Азп Тгр
195 200 205
РЬе О1п Рго 11е Туг Ьеи О1у А1а МеЕ РЬе Бег Ьеи О1п О1и О1у Азр
210 215 220
Ьуз Ьеи МеЕ Уа1 Азп Уа1 Бег Азр 11е Бег Ьеи Уа1 Азр Туг ТЬг Ьуз
225 230 235 240
О1и Азр Ьуз ТЬг РЬе РЬе О1у А1а РЬе Ьеи Ьеи
245 250
<210> 245
<211> 756
<212> ДНК
<213> Ното зар1епз
<400> 245
аЕддссдадд аЕсЕдддасЕ дадсЕЕЕддд дааасадсса дЕдЕддаааЕ дсЕдссадад 60
сасддсадсЕ дсаддсссаа ддссаддадс адсадсдсас дсЕдддсЕсЕ сассЕдсЕдс 120
сЕддЕдЕЕдс ЕссссЕЕссЕ ЕдсаддасЕс ассасаЕасс ЕдсЕЕдЕсад ссадсЕссдд 180
дсссадддад аддссЕдЕдЕ дсадЕЕссад дсЕсЕаааад дасаддадЕЕ ЕдсассЕЕса 240
саЕсадсаад ЕЕЕаЕдсасс ЕсЕЕададса дасддадаЕа адссаадддс асассЕдаса 300
дЕЕдЕдадас ааасЕсссас асадсасЕЕЕ аааааЕсадЕ ЕсссадсЕсЕ дсасЕдддаа 360
саЕдаасЕад дссЕддссЕЕ сассаадаас сдааЕдаасЕ аЕассаасаа аЕЕссЕдсЕд 420
аЕсссададЕ сдддадасЕа сЕЕсаЕЕЕас ЕсссаддЕса саЕЕссдЕдд даЕдассЕсЕ 480
дадЕдсадЕд аааЕсадасд адсаддссда ссааасаадс садасЕссаЕ сасЕдЕддЕс 540
аЕсассаадд Еаасадасад сЕасссЕдад ссаасссадс ЕссЕсаЕддд дассаадЕсЕ 600
дЕаЕдсдаад ЕаддЕадсаа сЕддЕЕссад сссаЕсЕасс ЕсддадссаЕ дЕЕсЕссЕЕд 660
саадаадддд асаадсЕааЕ ддЕдаасдЕс адЕдасаЕсЕ сЕЕЕддЕдда ЕЕасасаааа 720
даадаЕаааа ссЕЕсЕЕЕдд адссЕЕсЕЕа сЕаЕад 756
- 92 030397
<210> 246
<211> 251
<212> БЕЛОК <213> Ηото зартепз
<400> 246
МеТ 1 А1а О1и Азр Ьеи 5 О1у Ьеи Зег РЬе О1у 10 О1и ТЬг А1а Зег Уа1 15 О1и
МеТ Ьеи Рго О1и Щз О1у Зег Суз Агд Рго Ьуз А1а Агд Зег Зег Зег
20 25 30
А1а Агд Тгр А1а Ьеи ТЬг Суз Суз Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи Рго РЬе Ьеи А1а
35 40 45
О1у Ьеи ТЬг ТЬг Туг Ьеи Ьеи Уа1 Зег О1п Ьеи Агд А1а О1п О1у О1и
50 55 60
А1а Суз Уа1 О1п РЬе О1п А1а Ьеи Ьуз О1у О1п О1и РЬе А1а Рго Зег
65 70 75 80
Щз О1п О1п Уа1 Туг А1а Рго Ьеи Агд А1а Азр О1у Азр Ьуз Рго Агд
85 90 95
А1а Щз Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 Агд О1п ТЬг Рго ТЬг О1п Щз РЬе Ьуз Азп
100 105 110
О1п РЬе Рго А1а Ьеи Щз Тгр О1и Щз О1и Ьеи О1у Ьеи А1а РЬе ТЬг
115 120 125
Ьуз Азп Агд МеТ Азп Туг ТЬг Азп Ьуз РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго О1и Зег
130 135 140
О1у Азр Туг РЬе 11е Туг Зег О1п Уа1 ТЬг РЬе Агд О1у МеТ ТЬг Зег
145 150 155 160
О1и Суз Зег О1и 11е Агд Агд А1а О1у Агд Рго Азп Ьуз Рго Азр Зег
165 170 175
11е ТЬг Уа1 Уа1 11е ТЬг Ьуз Уа1 ТЬг Азр Зег Туг Рго О1и Рго ТЬг
180 185 190
О1п Ьеи Ьеи МеТ О1у ТЬг Ьуз Зег Уа1 Суз О1и Уа1 О1у Зег Азп Тгр
195 200 205
РЬе О1п Рго 11е Туг Ьеи О1у А1а МеТ РЬе Зег Ьеи О1п О1и О1у Азр
210 215 220
Ьуз Ьеи МеТ Уа1 Азп Уа1 Зег Азр 11е Зег Ьеи Уа1 Азр Туг ТЬг Ьуз
225 230 235 240
О1и Азр Ьуз ТЬг РЬе РЬе О1у А1а РЬе Ьеи Ьеи
245 250
<210> 247
<211> 756
<212> ДНК
<213> Масаса Ьазс1си1аг1з
<400> 247
аТддссдадд аТсТдддасТ дадсТТТддд дадасадсса дТдТддаааТ дсТдссадад 60
сасддсадсТ дсаддсссаа ддссаддадс адсадсдсаТ дсТдддсТсТ сассТдсТдс 120
сТддТдТТдс ТссссТТссТ ТдсадддсТс ассассТасс ТдсТТдТсад ссадсТссдд 180
дсссааддад аддссТдТдТ дсадсТссад даТсТаааад дасаддадТТ ТдсассТТса 240
саТсадсаад ТТТаТдсасс ТсТТададса даТддадаТа адссаадддс асассТдаса 300
дТТдТдадас ааасТсссас асадсасТТа аааааТсадТ ТсссадсТсТ дсасТдддаа 360
саТдаасТад дссТддссТТ сассаадаас сдааТдаасТ асассаасаа аТТссТдсТд 420
аТсссададТ сдддадасТа сТТсдТТТас ТсссаддТса саТТссдТдд даТдассТсТ 480
дадТдсадТд аааТсадаса адсаддссда ссааасаадс садасТссаТ сасТдТддТс 540
аТсассаадд Таасадасад сТасссТдад ссаасссадс ТссТсаТддд дассаадТсТ 600
дТдТдТдаад ТаддсадТаа сТддТТссад сссаТсТасс ТсддадссаТ дТТсТссТТд 660
саадаадддд асаадсТсаТ ддТдаасдТс адТдасаТсТ сТТТддТдда ТТасасаааа 720
даадаТаааа ссТТсТТТдд адссТТсТТа сТаТад 756
<210> 248
<211> 251
<212> БЕЛОК
- 93 030397
<213> Масаса ЁазстсиТагтз
<400> 248
МеЁ 1 А1а О1и Азр Ьеи 5 О1у Ьеи Бег РИе О1у О1и 10 ТИг А1а Бег Уа1 15 О1и
МеЁ Ьеи Рго О1и Н1з О1у Бег Суз Агд Рго Ьуз А1а Агд Бег Бег Бег
20 25 30
А1а Суз Тгр А1а Ьеи ТИг Суз Суз Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи Рго РИе Ьеи А1а
35 40 45
О1у Ьеи ТИг ТИг Туг Ьеи Ьеи Уа1 Бег О1п Ьеи Агд А1а О1п О1у О1и
50 55 60
А1а Суз Уа1 О1п Ьеи О1п Азр Ьеи Ьуз О1у О1п О1и РИе А1а Рго Бег
65 70 75 80
Н1з О1п О1п Уа1 Туг А1а Рго Ьеи Агд А1а Азр О1у Азр Ьуз Рго Агд
85 90 95
А1а Н1з Ьеи ТИг Уа1 Уа1 Агд О1п ТИг Рго ТИг О1п Н1з Ьеи Ьуз Азп
100 105 110
О1п РИе Рго А1а Ьеи Н1з Тгр О1и Н1з О1и Ьеи О1у Ьеи А1а РИе ТИг
115 120 125
Ьуз Азп Агд МеЁ Азп Туг ТИг Азп Ьуз РИе Ьеи Ьеи 11е Рго О1и Бег
130 135 140
О1у Азр Туг РИе Уа1 Туг Бег О1п Уа1 ТИг РИе Агд О1у МеЁ ТИг Бег
145 150 155 160
О1и Суз Бег О1и 11е Агд О1п А1а О1у Агд Рго Азп Ьуз Рго Азр Бег
165 170 175
11е ТИг Уа1 Уа1 11е ТИг Ьуз Уа1 ТИг Азр Бег Туг Рго О1и Рго ТИг
180 185 190
О1п Ьеи Ьеи МеЁ О1у ТИг Ьуз Бег Уа1 Суз О1и Уа1 О1у Бег Азп Тгр
195 200 205
РИе О1п Рго 11е Туг Ьеи О1у А1а МеЁ РИе Бег Ьеи О1п О1и О1у Азр
210 215 220
Ьуз Ьеи МеЁ Уа1 Азп Уа1 Бег Азр 11е Бег Ьеи Уа1 Азр Туг ТИг Ьуз
225 230 235 240
О1и Азр Ьуз ТИг РИе РИе О1у А1а РИе Ьеи Ьеи
245 250
<210> 249
<211> 759
<212> ДНК
<213> Миз тизси1из
<400> 249
аЁддсададд адсЁддддЁЁ дддсЁЁсдда дааддадЁсс садЁддаадЁ дсЁдссддаа 60
ддсЁдЁадас асаддссада ддссадддсс дддсЁадсЁд ссаддадсаа адссЁдссЁд 120
дсЁсЁсассЁ дсЁдссЁдЁЁ дЁсаЁЁЁссс аЁссЁсдсад дасЁЁадсас ссЁссЁааЁд 180
дсЁддссадс ЁссдддЁссс сддаааадас ЁдЁаЁдсЁЁс дддссаЁаас адаададада 240
ЁсЁдадссЁЁ сассасадса адЁЁЁасЁса ссЁсссадад дсаадссдад адсасассЁд 300
асааЁЁаада аасааасссс адсассасаЁ сЁдаааааЁс адсЁсЁсЁдс ЁсЁасасЁдд 360
даасаЁдасс ЁадддаЁддс сЁЁсассаад аасдддаЁда адЁасаЁсаа саааЁсссЁд 420
дЁдаЁсссад адЁсаддада сЁаЁЁЁсаЁс ЁасЁсссада ЁсасаЁЁссд адддассаса 480
ЁсЁдЁдЁдЁд дЁдасаЁсад Ёсдддддада сдассаааса адссадасЁс саЁсассаЁд 540
дЁЁаЁсасса аддЁадсада садсЁасссЁ дадссЁдссс дссЁасЁаас адддЁссаад 600
ЁсЁдЁдЁдЁд аааЁаадсаа саасЁддЁЁс садЁсссЁсЁ ассЁЁддддс сасдЁЁсЁсс 660
ЁЁддаадаад дадасадасЁ ааЁддЁааас дЁсадЁдаса ЁсЁссЁЁддЁ ддаЁЁасаса 720
ааадаадаЁа ааасЁЁЁсЁЁ ЁддадсЁЁЁс ЁЁдсЁаЁаа 759
<210> 250
<211> 252
<212> БЕЛОК
<213> Миз тизси1из
<400> 250
- 94 030397
МеБ А1а О1и О1и Ьеи О1у Ьеи О1у РЪе О1у О1и О1у Уа1 Рго Уа1 О1и
1 5 10 15
Уа1 Ьеи Рго О1и О1у Суз Агд Н1з Агд Рго О1и А1а Агд А1а О1у Ьеи
20 25 30
А1а А1а Агд Бег Ьуз А1а Суз Ьеи А1а Ьеи ТЪг Суз Суз Ьеи Ьеи Бег
35 40 45
РЪе Рго 11е Ьеи А1а О1у Ьеи Бег ТЪг Ьеи Ьеи МеБ А1а О1у О1п Ьеи
50 55 60
Агд Уа1 Рго О1у Ьуз Азр Суз МеБ Ьеи Агд А1а 11е ТЪг О1и О1и Агд
65 70 75 80
Бег О1и Рго Бег Рго О1п О1п Уа1 Туг Бег Рго Рго Агд О1у Ьуз Рго
85 90 95
Агд А1а Н1з Ьеи ТЪг 11е Ьуз Ьуз О1п ТЪг Рго А1а Рго Н1з Ьеи Ьуз
100 105 110
Азп О1п Ьеи Бег А1а Ьеи Н1з Тгр О1и Н1з Азр Ьеи О1у МеБ А1а РЪе
115 120 125
ТЪг Ьуз Азп О1у МеБ Ьуз Туг 11е Азп Ьуз Бег Ьеи Уа1 11е Рго О1и
130 135 140
Бег О1у Азр Туг РЪе 11е Туг Бег О1п 11е ТЪг РЪе Агд О1у ТЪг ТЪг
145 150 155 160
Бег Уа1 Суз О1у Азр 11е Бег Агд О1у Агд Агд Рго Азп Ьуз Рго Азр
165 170 175
Бег 11е ТЪг МеБ Уа1 11е ТЪг Ьуз Уа1 А1а Азр Бег Туг Рго О1и Рго
180 185 190
А1а Агд Ьеи Ьеи ТЪг О1у Бег Ьуз Бег Уа1 Суз О1и 11е Бег Азп Азп
195 200 205
Тгр РЪе О1п Бег Ьеи Туг Ьеи О1у А1а ТЪг РЪе Бег Ьеи О1и О1и О1у
210 215 220
Азр Агд Ьеи МеБ Уа1 Азп Уа1 Бег Азр 11е Бег Ьеи Уа1 Азр Туг ТЪг
225 230 235 240
Ьуз О1и Азр Ьуз ТЪг РЪе РЪе О1у А1а РЪе Ьеи Ьеи
245 250
<210> 251
<211> 1254
<212> ДНК
<213> Ното зар1епз
<400> 251
аБддадсадс ддссдсдддд сБдсдсддсд дБддсддсдд сдсБссБссБ ддБдсБдсБд 60
ддддсссддд сссадддсдд сасБсдБадс сссаддБдБд асБдБдссдд БдасББссас 120
аадаадаББд дБсБдББББд ББдсададдс Бдсссадсдд ддсасБассБ дааддссссБ 180
Бдсасддадс ссБдсддсаа сБссассБдс сББдБдБдБс сссаадасас сББсББддсс 240
Бдддадаасс ассаБааББс БдааБдБдсс сдсБдссадд ссБдБдаБда дсаддссБсс 300
саддБддсдс БддадаасБд ББсадсадБд дссдасассс дсБдБддсБд Баадссаддс 360
БддБББдБдд адБдссаддБ садссааБдБ дБсадсадББ сасссББсБа сБдссаасса 420
БдссБадасБ дсддддсссБ дсассдссас асасддсБас БсБдББсссд сададаБасБ 480
дасБдБддда ссБдссБдсс БддсББсБаБ даасаБддсд аБддсБдсдБ дБссБдсссс 540
асдадсассс БддддадсБд Бссададсдс БдБдссдсБд БсБдБддсБд даддсадаБд 600
ББсБдддБсс аддБдсБссБ ддсБддссББ дБддБссссс БссБдсББдд ддссасссБд 660
ассБасасаБ ассдссасБд сБддссБсас аадссссБдд ББасБдсада БдаадсБддд 720
аБддаддсБс Бдассссасс ассддссасс саБсБдБсас ссББддасад сдсссасасс 780
сББсБадсас сБссБдасад садБдадаад аБсБдсассд БссадББддБ дддБаасадс 840
БддассссБд дсБассссда дасссаддад дсдсБсБдсс сдсаддБдас аБддБссБдд 900
дассадББдс ссадсададс БсББддсссс дсБдсБдсдс ссасасБсБс дссададБсс 960
ссадссддсБ сдссадссаБ даБдсБдсад ссдддсссдс адсБсБасда сдБдаБддас 1020
дсддБсссад сдсддсдсБд дааддадББс дБдсдсасдс БддддсБдсд сдаддсадад 1080
аБсдаадссд БддаддБдда даБсддссдс ББссдадасс адсадБасда даБдсБсаад 1140
сдсБддсдсс адсадсадсс сдсдддссБс ддадссдБББ асдсддсссБ ддадсдсаБд 1200
дддсБддасд дсБдсдБдда адасББдсдс адссдссБдс адсдсддссс дБда 1254
<210> 252
- 95 030397
<211> 417
<212> БЕЛОК <213> Ното зартепз
<400> 252
Ме+ О1и О1п Агд Рго Агд О1у Суз А1а А1а Уа1 А1а А1а А1а Ьеи Ьеи
1 5 10 15
Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи О1у А1а Агд А1а О1п О1у О1у ТЬг Агд Зег Рго Агд
20 25 30
Суз Азр Суз А1а О1у Азр РЬе Н1з Ьуз Ьуз 11е О1у Ьеи РЬе Суз Суз
35 40 45
Агд О1у Суз Рго А1а О1у Н1з Туг Ьеи Ьуз А1а Рго Суз ТЬг О1и Рго
50 55 60
Суз О1у Азп Зег ТЬг Суз Ьеи Уа1 Суз Рго О1п Азр ТЬг РЬе Ьеи А1а
65 70 75 80
Тгр О1и Азп Н1з Н1з Азп Зег О1и Суз А1а Агд Суз О1п А1а Суз Азр
85 90 95
О1и О1п А1а Зег О1п Уа1 А1а Ьеи О1и Азп Суз Зег А1а Уа1 А1а Азр
100 105 110
ТЬг Агд Суз О1у Суз Ьуз Рго О1у Тгр РЬе Уа1 О1и Суз О1п Уа1 Зег
115 120 125
О1п Суз Уа1 Зег Зег Зег Рго РЬе Туг Суз О1п Рго Суз Ьеи Азр Суз
130 135 140
О1у А1а Ьеи Н1з Агд Н1з ТЬг Агд Ьеи Ьеи Суз Зег Агд Агд Азр ТЬг
145 150 155 160
Азр Суз О1у ТЬг Суз Ьеи Рго О1у РЬе Туг О1и Н1з О1у Азр О1у Суз
165 170 175
Уа1 Зег Суз Рго ТЬг Зег ТЬг Ьеи О1у Зег Суз Рго О1и Агд Суз А1а
180 185 190
А1а Уа1 Суз О1у Тгр Агд О1п Ме+ РЬе Тгр Уа1 О1п Уа1 Ьеи Ьеи А1а
195 200 205
О1у Ьеи Уа1 Уа1 Рго Ьеи Ьеи Ьеи О1у А1а ТЬг Ьеи ТЬг Туг ТЬг Туг
210 215 220
Агд Н1з Суз Тгр Рго Н1з Ьуз Рго Ьеи Уа1 ТЬг А1а Азр О1и А1а О1у
225 230 235 240
Ме+ О1и А1а Ьеи ТЬг Рго Рго Рго А1а ТЬг Н1з Ьеи Зег Рго Ьеи Азр
245 250 255
Зег А1а Н1з ТЬг Ьеи Ьеи А1а Рго Рго Азр Зег Зег О1и Ьуз 11е Суз
260 265 270
ТЬг Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1у Азп Зег Тгр ТЬг Рго О1у Туг Рго О1и ТЬг
275 280 285
О1п О1и А1а Ьеи Суз Рго О1п Уа1 ТЬг Тгр Зег Тгр Азр О1п Ьеи Рго
290 295 300
Зег Агд А1а Ьеи О1у Рго А1а А1а А1а Рго ТЬг Ьеи Зег Рго О1и Зег
305 310 315 320
Рго А1а О1у Зег Рго А1а Ме+ Ме+ Ьеи О1п Рго О1у Рго О1п Ьеи Туг
325 330 335
Азр Уа1 Ме+ Азр А1а Уа1 Рго А1а Агд Агд Тгр Ьуз О1и РЬе Уа1 Агд
340 345 350
ТЬг Ьеи О1у Ьеи Агд О1и А1а О1и 11е О1и А1а Уа1 О1и Уа1 О1и 11е
355 360 365
О1у Агд РЬе Агд Азр О1п О1п Туг О1и Ме+ Ьеи Ьуз Агд Тгр Агд О1п
370 375 380
О1п О1п Рго А1а О1у Ьеи О1у А1а Уа1 Туг А1а А1а Ьеи О1и Агд Ме+
385 390 395 400
О1у Ьеи Азр О1у Суз Уа1 О1и Азр Ьеи Агд Зег Агд Ьеи О1п Агд О1у
405 410 415
Рго
<210> 253
<211> 900
- 96 030397
<212> ДНК
<213> Ното зар1епз
<400> 253
аРдадддсдс Рддаддддсс аддссРдРсд сРдсРдРдсс РддРдРРддс дсРдссРдсс 60
сРдсРдссдд РдссддсРдР асдсддадРд дсадааасас ссассРассс сРддсдддас 120
дсададасад дддадсддсР ддРдРдсдсс садРдссссс саддсассРР РдРдсадсдд 180
ссдРдссдсс дадасадссс сасдасдРдР ддсссдРдРс сассдсдсса сРасасдсад 240
РРсРддаасР ассРддадсд сРдссдсРас РдсаасдРсс РсРдсдддда дсдРдаддад 300
даддсасддд сРРдссасдс сасссасаас сдРдссРдсс дсРдссдсас сддсРРсРРс 360
дсдсасдсРд дРРРсРдсРР ддадсасдса РсдРдРссас сРддРдссдд сдРдаРРдсс 420
ссдддсассс ссадссадаа сасдсадРдс садссдРдсс ссссаддсас сРРсРсадсс 480
адсадсРсса дсРсададса дРдссадссс сассдсаасР дсасддсссР дддссРддсс 540
сРсааРдРдс саддсРсРРс сРсссаРдас асссРдРдса ссадсРдсас РддсРРсссс 600
сРсадсасса дддРассадд адсРдаддад РдРдадсдРд ссдРсаРсда сРРРдРддсР 660
РРссаддаса РсРссаРсаа даддсРдсад сддсРдсРдс аддсссРсда ддссссддад 720
ддсРддддРс сдасассаад ддсдддссдс дсддссРРдс адсРдаадсР дсдРсддсдд 780
сРсасддадс РссРдддддс дсаддасддд дсдсРдсРдд РдсддсРдсР дсаддсдсРд 840
сдсдРддсса ддаРдсссдд дсРддадсдд адсдРссдРд адсдсРРссР сссРдРдсас 900
<210> 254
<211> 300
<212> БЕЛОК <213> Ното заргепз
<400> 254
МеР Агд А1а Беи О1и О1у Рго О1у Беи Зег Беи Ьеи Суз Беи Уа1 Ьеи
1 5 10 15
А1а Ьеи Рго А1а Ьеи Беи Рго Уа1 Рго А1а Уа1 Агд О1у Уа1 А1а О1и
20 25 30
ТЪг Рго ТЪг Туг Рго Тгр Агд Азр А1а О1и ТЪг О1у О1и Агд Ьеи Уа1
35 40 45
Суз А1а О1п Суз Рго Рго О1у ТЪг РЪе Уа1 О1п Агд Рго Суз Агд Агд
50 55 60
Азр Зег Рго ТЪг ТЪг Суз О1у Рго Суз Рго Рго Агд Н1з Туг ТЪг О1п
65 70 75 80
РЪе Тгр Азп Туг Беи О1и Агд Суз Агд Туг Суз Азп Уа1 Ьеи Суз О1у
85 90 95
О1и Агд О1и О1и О1и А1а Агд А1а Суз Н1з А1а ТЪг Н1з Азп Агд А1а
100 105 110
Суз Агд Суз Агд ТЪг О1у РЪе РЪе А1а Н1з А1а О1у РЪе Суз Беи О1и
115 120 125
Н1з А1а Зег Суз Рго Рго О1у А1а О1у Уа1 11е А1а Рго О1у ТЪг Рго
130 135 140
Зег О1п Азп ТЪг О1п Суз О1п Рго Суз Рго Рго О1у ТЪг РЪе Зег А1а
145 150 155 160
Зег Зег Зег Зег Зег О1и О1п Суз О1п Рго Н1з Агд Азп Суз ТЪг А1а
165 170 175
Ьеи О1у Ьеи А1а Беи Азп Уа1 Рго О1у Зег Зег Зег Н1з Азр ТЪг Ьеи
180 185 190
Суз ТЪг Зег Суз ТЪг О1у РЪе Рго Ьеи Зег ТЪг Агд Уа1 Рго О1у А1а
195 200 205
О1и О1и Суз О1и Агд А1а Уа1 11е Азр РЪе Уа1 А1а РЪе О1п Азр 11е
210 215 220
Зег 11е Буз Агд Ьеи О1п Агд Ьеи Ьеи О1п А1а Ьеи О1и А1а Рго О1и
225 230 235 240
О1у Тгр О1у Рго ТЪг Рго Агд А1а О1у Агд А1а А1а Беи О1п Беи Буз
245 250 255
Беи Агд Агд Агд Ьеи ТЪг О1и Ьеи Беи О1у А1а О1п Азр О1у А1а Беи
260 265 270
Беи Уа1 Агд Ьеи Беи О1п А1а Беи Агд Уа1 А1а Агд МеР Рго О1у Ьеи
275 280 285
- 97 030397
О1и Агд Бег Уа1 Агд О1и Агд РЪе Ьеи Рго Уа1 Н1з 290 295 300
<210> 255
<211> 330
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 255
А1а 1 Бег ТЪг Ьуз О1у 5 Рго Бег Уа1 РЪе Рго 10 Ьеи А1а Рго Бег Бег 15 Ьуз
Бег ТЪг Бег О1у О1у ТЪг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЪе Рго О1и Рго Уа1 ТЪг Уа1 Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЪг Бег
35 40 45
О1у Уа1 Н1з ТЪг РЪе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег
50 55 60
Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЪг Уа1 Рго Бег Бег Бег Ьеи О1у ТЪг О1п ТЪг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Н1з Ьуз Рго Бег Азп ТЪг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Ьуз Уа1 О1и Рго Ьуз Бег Суз Азр Ьуз ТЪг Н1з ТЪг Суз Рго Рго Суз
100 105 110
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Бег Уа1 РЪе Ьеи РЪе Рго Рго
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЪг Ьеи МеЕ 11е Бег Агд ТЪг Рго О1и Уа1 ТЪг Суз
130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЪе Азп Тгр
145 150 155 160
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЪг Ьуз Рго Агд О1и
165 170 175
О1и О1п Туг Азп Бег ТЪг Туг Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи
180 185 190
Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЪг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у
210 215 220
О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЪг Ьеи Рго Рго Бег Агд Азр О1и
225 230 235 240
Ьеи ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЪг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЪе Туг
245 250 255
Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЪе РЪе
275 280 285
Ьеи Туг Бег Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп
290 295 300
Уа1 РЪе Бег Суз Бег Уа1 МеЕ Н1з О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЪг
305 310 315 320
О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
325 330
<210> 256
<211> 327
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 98 030397
<223> Искусственная
<400> 256
А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд
1 5 10 15
Зег ТЬг Зег О1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Нбз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг Ьуз ТЬг
65 70 75 80
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Нбз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Агд Уа1 О1и Зег Ьуз Туг О1у Рго Рго Суз Рго Зег Суз Рго А1а Рго
100 105 110
О1и РЬе Ьеи О1у О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз
115 120 125
Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1
130 135 140
Азр Уа1 Зег О1п О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр
145 150 155 160
О1у Уа1 О1и Уа1 Нбз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе
165 170 175
Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нбз О1п Азр
180 185 190
Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи
195 200 205
Рго Зег Зег 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд
210 215 220
О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег О1п О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз
225 230 235 240
Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр
245 250 255
11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз
260 265 270
ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег
275 280 285
Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1и О1у Азп Уа1 РЬе Зег
290 295 300
Суз Зег Уа1 МеЕ Нбз О1и А1а Ьеи Нбз Азп Нбз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег
305 310 315 320
Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи О1у Ьуз
325
<210> 257
<211> 327
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Искусственная
<400> 257
А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд
1 5 10 15
Зег ТЬг Зег О1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Нбз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
- 99 030397
50 55 60
Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Бег Бег Бег Ьеи О1у ТЬг Ьуз ТЬг
65 70 75 80
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр НЬз Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Агд Уа1 О1и Бег Ьуз Туг О1у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго
100 105 110
О1и РЬе Ьеи О1у О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз
115 120 125
Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1
130 135 140
Азр Уа1 Бег О1п О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр
145 150 155 160
О1у Уа1 О1и Уа1 НЬз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе
165 170 175
Азп Бег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз О1п Азр
180 185 190
Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи
195 200 205
Рго Бег Бег 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд
210 215 220
О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег О1п О1и О1и МеЬ ТЬг Ьуз
225 230 235 240
Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Бег Азр
245 250 255
11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз
260 265 270
ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег
275 280 285
Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1и О1у Азп Уа1 РЬе Бег
290 295 300
Суз Бег Уа1 МеЬ НЬз О1и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг О1п Ьуз Бег
305 310 315 320
Ьеи Бег Ьеи Бег Ьеи О1у Ьуз
325
<210> 258
<211> 252
<212> БЕЛОК
<213> КаЬЬиз погуедЬсиз
<400> 258
МеЬ 1 А1а О1и О1и Ьеи 5 О1у Ьеи О1у РЬе О1у О1и А1а Уа1 10 Рго Уа1 15 О1и
МеЬ Ьеи Рго О1и О1у Суз Агд НЬз Агд Агд О1и А1а Агд ТЬг О1у Ьеи
20 25 30
А1а А1а Агд Бег Ьуз А1а Суз Ьеи А1а Ьеи ТЬг Суз Суз Ьеи Ьеи Бег
35 40 45
РЬе Рго 11е Ьеи А1а О1у Ьеи Бег ТЬг Ьеи Ьеи МеЬ ТЬг О1у О1п Ьеи
50 55 60
Агд 11е Рго О1у Ьуз Азр Суз МеЬ РЬе Рго ТЬг Уа1 ТЬг О1и О1и Агд
65 70 75 80
Бег А1а Рго Бег А1а О1п Рго Уа1 Туг ТЬг Рго Бег Агд Азр Ьуз Рго
85 90 95
Ьуз А1а НЬз Ьеи ТЬг 11е МеЬ Агд О1п ТЬг Рго Уа1 Рго НЬз Ьеи Ьуз
100 105 110
Азп О1и Ьеи А1а А1а Ьеи НЬз Тгр О1и Азп Азп Ьеи О1у МеЬ А1а РЬе
115 120 125
ТЬг Ьуз Азп Агд МеЬ Азп Туг ТЬг Азп Ьуз РЬе Ьеи Уа1 11е Рго О1и
130 135 140
Бег О1у Азр Туг РЬе 11е Туг Бег О1п 11е ТЬг РЬе Агд О1у ТЬг ТЬг
145 150 155 160
- 100
030397
Бег О1и Суз О1у Азр 165 11е Бег Агд Уа1 Агд 170 Агд Рго Буз Буз Рго 175 Азр
Бег 11е ТЪг Уа1 Уа1 11е ТЪг Буз Уа1 А1а Азр Бег Туг Рго О1и Рго
180 185 190
А1а Н1з Беи Беи ТЪг О1у ТЪг Буз Бег Уа1 Суз О1и 11е Бег Бег Азп
195 200 205
Тгр РЪе О1п Рго 11е Туг Беи О1у А1а Меб РЪе Бег Беи О1и О1и О1у
210 215 220
Азр Агд Беи Меб Уа1 Азп Уа1 Бег Азр 11е Бег Беи Уа1 Азр Туг ТЪг
225 230 235 240
Буз О1и Азр Буз ТЪг РЪе РЪе О1у А1а РЪе Беи 11е
245 250
<210> 259
<211> 411
<212> БЕЛОК <213> Миз тизси1из
<400> 259
Меб О1и А1а Агд Беи Беи Агд О1у Суз Уа1 Уа1 О1и Рго Беи РЪе Беи
1 5 10 15
Рго Беи Беи Беи Беи Беи Беи Беи Беи Беи О1у О1у О1п О1у О1п О1у
20 25 30
О1у Меб Бег О1у Агд Суз Азр Суз А1а Бег О1и Бег О1п Буз Агд Туг
35 40 45
О1у Рго РЪе Суз Суз Агд О1у Суз Рго Буз О1у Н1з Туг Меб Буз А1а
50 55 60
Рго Суз А1а О1и Рго Суз О1у Азп Бег ТЪг Суз Беи Рго Суз Рго Бег
65 70 75 80
Азр ТЪг РЪе Беи ТЪг Агд Азр Азп Н1з РЪе Буз ТЪг Азр Суз ТЪг Агд
85 90 95
Суз О1п Уа1 Суз Азр О1и О1и А1а Беи О1п Уа1 ТЪг Беи О1и Азп Суз
100 105 110
Бег А1а Буз Бег Азр ТЪг Н1з Суз О1у Суз О1п Бег О1у Тгр Суз Уа1
115 120 125
Азр Суз Бег ТЪг О1и Рго Суз О1у Буз Бег Бег Рго РЪе Бег Суз Уа1
130 135 140
Рго Суз О1у А1а ТЪг ТЪг Рго Уа1 Н1з О1и А1а Рго ТЪг Рго Агд Рго
145 150 155 160
Суз Беи Рго О1у РЪе Туг 11е Агд О1у Азп Азр Суз ТЪг Бег Суз Рго
165 170 175
ТЪг О1у РЪе Бег Бег Уа1 Суз Рго Буз А1а Суз ТЪг А1а Уа1 Суз О1у
180 185 190
Тгр Буз О1п Меб РЪе Тгр Уа1 О1п Уа1 Беи Беи О1у Уа1 А1а РЪе Беи
195 200 205
РЪе О1у А1а 11е Беи 11е Суз А1а Туг Суз Агд Тгр О1п Рго Суз Буз
210 215 220
А1а Уа1 Уа1 ТЪг А1а Азр ТЪг А1а О1у ТЪг О1и ТЪг Беи А1а Бег Рго
225 230 235 240
О1п ТЪг А1а Н1з Беи Бег А1а Бег Азр Бег А1а Н1з ТЪг Беи Беи А1а
245 250 255
Рго Рго Бег Бег ТЪг О1у Буз 11е Суз ТЪг ТЪг Уа1 О1п Беи Уа1 О1у
260 265 270
Азп Азп Тгр ТЪг Рго О1у Беи Бег О1п ТЪг О1п О1и Уа1 Уа1 Суз О1у
275 280 285
О1п А1а Бег О1п Рго Тгр Азр О1п Беи Рго Азп Агд ТЪг Беи О1у ТЪг
290 295 300
Рго Беи А1а Бег Рго Беи Бег Рго А1а Рго Рго А1а О1у Бег Рго А1а
305 310 315 320
А1а Уа1 Беи О1п Рго О1у Рго О1п Беи Туг Азр Уа1 Меб Азр А1а Уа1
325 330 335
Рго А1а Агд Агд Тгр Буз О1и РЪе Уа1 Агд ТЪг Беи О1у Беи Агд О1и
- 101
030397
340 345 350
А1а О1и 11е О1и А1а Уа1 О1и Уа1 О1и 11е Суз Агд РИе Агд Азр О1п
355 360 365
О1п Туг О1и МеЕ Ьеи Ьуз Агд Тгр Агд О1п О1п О1п Рго А1а О1у Ьеи
370 375 380
О1у А1а 11е Туг А1а А1а Ьеи О1и Агд МеЕ О1у Ьеи О1и О1у Суз А1а
385 390 395 400
О1и Азр Ьеи Агд Зег Агд Ьеи О1п Агд О1у Рго
405 410

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Выделенное антитело человеческого происхождения или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают и нейтрализуют активность человеческого ТИР-подобного лиганда 1А (ЬТЬ1А), содержащее(ий) три гипервариабельных участка тяжелой цепи (ΗС^К1, Ηί'.ΌΚ2 и ΗС^К3), содержащиеся в пределах последовательности вариабельной области тяжелой цепи (ΗСVК), причем Ηί','νΚ имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 18, и три гипервариабельных участка легкой цепи (ЬСГОКЬ ЬСИК2 и ЬСИКЗ), содержащиеся в пределах последовательности вариабельной области легкой цепи (ΕΕ'νΚ), причем ЬСУК имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО Ш: 26.
  2. 2. Выделенное антитело человеческого происхождения или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают и нейтрализуют активность человеческого ΊΝΕ-подобного лиганда 1А (ЬТЬ1А), содержащее(ий)
    аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО NО: 20, 8ЕЦ ГО NО: 22 и 8ЕЦ ГО NО: 24 трех гипервариабельных участков тяжелой цепи (ΗΟΉΚΕ ΗΟΌΚ2 и ΗС^К3) соответственно,
    аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО NО: 28, 8ЕЦ ГО NО: 30 и 8ЕЦ ГО NО: 32 трех гипервариабельных участков легкой цепи (ЬСИКЗ, ЬСИК2 и ЬСИК3) соответственно.
  3. 3. Выделенное антитело человеческого происхождения или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащие аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 18 вариабельной области тяжёлой цепи (ΗΟνΚ).
  4. 4. Выделенное антитело человеческого происхождения или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащие аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 26 вариабельной области лёгкой цепи (ЪСУК).
  5. 5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, содержащие пару последовательностей ΗСVК/^СVК 8ЕЦ ГО NО: 18/26.
  6. 6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5, которые перекрёстно реагируют с ТЬ1А макаки-крабоеда (МЛЫА).
  7. 7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, которые перекрёстно не реагируют с РНт, имеющим аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 246.
  8. 8. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7.
  9. 9. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.8.
  10. 10. Способ получения антитела против ЬТЫА или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий выращивание клетки-хозяина, содержащей экспрессионный вектор по п.9, при условиях, обеспечивающих продуцирование антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
  11. 11. Фармацевтическая композиция с ЬТЫА-ингибирующей активностью, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и фармацевтически приемлемый носитель.
  12. 12. Фармацевтическая композиция по п.11, содержащая один или более дополнительных терапевтических агентов, выбранных из иммунодепрессанта, противовоспалительного агента, анальгетика и противоаллергического агента.
  13. 13. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 для изготовления лекарственного средства для лечения болезни или расстройства, которые предотвращаются, ослабляются или ингибируются путём ингибирования или уменьшения активности ТЬ1А.
  14. 14. Применение по п.13, где указанная болезнь или расстройство выбраны из группы, состоящей из язвенного колита, болезни Крона, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, диабета, астмы и аллергического воспаления лёгких.
  15. 15. Способ лечения болезни или расстройства, которые предотвращаются, ослабляются или ингибируются путём ингибирования или уменьшения активности ТЬ1А, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.12.
    - 102 030397
  16. 16. Способ по п.15, в котором указанная болезнь или расстройство выбраны из группы, состоящей из язвенного колита, болезни Крона, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, диабета, астмы и аллергического воспаления лёгких.
EA201370105A 2010-11-08 2011-11-08 Человеческие антитела против человеческого tnf-подобного лиганда-1а (tl1a) EA030397B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41127610P 2010-11-08 2010-11-08
US201161478309P 2011-04-22 2011-04-22
PCT/US2011/059675 WO2012064682A1 (en) 2010-11-08 2011-11-08 Human antibodies to human tnf-like ligand 1a (tl1a)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201370105A1 EA201370105A1 (ru) 2013-12-30
EA030397B1 true EA030397B1 (ru) 2018-07-31

Family

ID=45002143

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201370105A EA030397B1 (ru) 2010-11-08 2011-11-08 Человеческие антитела против человеческого tnf-подобного лиганда-1а (tl1a)

Country Status (21)

Country Link
US (3) US8642741B2 (ru)
EP (1) EP2638069B1 (ru)
JP (2) JP6076911B2 (ru)
KR (1) KR101896129B1 (ru)
CN (1) CN103261228B (ru)
AR (1) AR083785A1 (ru)
AU (1) AU2011326097B2 (ru)
BR (1) BR112013011245A2 (ru)
CA (1) CA2816799C (ru)
CL (1) CL2013001279A1 (ru)
EA (1) EA030397B1 (ru)
IL (1) IL226172A (ru)
JO (1) JO3375B1 (ru)
MX (1) MX355580B (ru)
MY (1) MY185006A (ru)
NZ (2) NZ610294A (ru)
SG (2) SG10201504265RA (ru)
TW (1) TWI606118B (ru)
UY (1) UY33715A (ru)
WO (1) WO2012064682A1 (ru)
ZA (1) ZA201304114B (ru)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010062960A2 (en) 2008-11-26 2010-06-03 Cedars-Sinai Medical Center METHODS OF DETERMINING RESPONSIVENESS TO ANTI-TNFα THERAPY IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE
DK3028564T5 (da) 2009-07-08 2024-04-29 Kymab Ltd Dyremodeller og terapeutiske molekyler
US20120204278A1 (en) 2009-07-08 2012-08-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US8766034B2 (en) 2010-09-22 2014-07-01 Cedars-Sinai Medical Center TL1A model of inflammation fibrosis and autoimmunity
JO3375B1 (ar) * 2010-11-08 2019-03-13 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للجين a1 الشبيه بعامل النخر الورمي (tl1a)
DK2757875T3 (en) 2011-09-19 2018-01-08 Kymab Ltd MANIPULATION OF IMMUNOGLOBULIN GENE DIVERSITY AND MULTI-ANTIBODY THERAPEUTICS
CA2850549C (en) * 2011-09-30 2023-03-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd. Antibodies against tl1a and uses thereof
US9253965B2 (en) 2012-03-28 2016-02-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
GB2502127A (en) 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
US10251377B2 (en) 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
EP2920211A1 (en) 2012-11-13 2015-09-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-prokineticin receptor (prokr) antibodies and uses thereof
AP2015008605A0 (en) * 2013-01-02 2015-07-31 Glenmark Pharmaceuticals Sa Antibodies that bind to tl1a and their uses
US9788534B2 (en) 2013-03-18 2017-10-17 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
EP3639841B1 (en) 2013-03-27 2023-09-06 Cedars-Sinai Medical Center Treating fibrosis by inhibiting tl1a
US9783593B2 (en) 2013-05-02 2017-10-10 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
US11707056B2 (en) 2013-05-02 2023-07-25 Kymab Limited Animals, repertoires and methods
US10208125B2 (en) * 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
EP4105236A1 (en) * 2013-07-19 2022-12-21 Cedars-Sinai Medical Center Anti-tl1a (tnfsf15) antibody for treatment of inflammatory bowel disease
EP3794941A1 (en) 2013-10-01 2021-03-24 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
PE20161092A1 (es) 2013-11-13 2016-10-28 Pfizer Anticuerpos especificos para el ligando 1a tipo factor de necrosis tumoral y composiciones y uso de ellos
US10160805B2 (en) 2014-07-11 2018-12-25 New York University Methods of treating inflammatory bowel disease by administering tumor necrosis factor-like ligand 1A or an agonistic death-domain receptor 3 antibody
WO2016077720A1 (en) * 2014-11-14 2016-05-19 Protein One, Llc Binding agents and uses thereof
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
WO2017077715A1 (en) * 2015-11-02 2017-05-11 La Jolla Institute For Allergy & Immunology Method and medicament for treating airway and/or lung diseases
CR20180365A (es) * 2015-12-16 2018-09-28 Amgen Inc PROTEÍNAS DE UNIÓN AL ANTÍGENO BISPECÍFICO DE ANTI-TL1A/ANTI-TNF-a Y SUS USOS
WO2017161342A1 (en) * 2016-03-17 2017-09-21 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing inflammatory bowel disease through rnaset2
KR102417687B1 (ko) * 2016-05-09 2022-07-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tl1a 항체 및 그의 용도
MY191324A (en) 2016-10-26 2022-06-15 Cedars Sinai Medical Center Neutralizing anti-tl1a monoclonal antibodies
MX2019015304A (es) * 2017-06-21 2020-02-17 Cephalon Inc Amortiguador de lavado para cromatografia de intercambio cationico.
WO2019209995A2 (en) 2018-04-25 2019-10-31 Precision Ibd, Inc. Optimized anti-tl1a antibodies
RU2689522C1 (ru) * 2018-09-11 2019-05-28 Общество с ограниченной ответственностью "Пальмира Биофарма" Нуклеотидная последовательность, кодирующая слитый белок, состоящий из растворимого внеклеточного домена человеческого tnfr1 и константной части тяжёлой цепи человеческого igg4
CA3121162A1 (en) * 2018-11-29 2020-06-04 Cedars-Sinai Medical Center Rnaset2 compositions and methods of treatment therewith
BR112022007720A2 (pt) 2019-10-24 2022-08-23 Prometheus Biosciences Inc Anticorpos humanizados para ligante 1a tnf-like (tl1a) e seus usos
CA3180632A1 (en) * 2020-06-03 2021-12-09 Cedars-Sinai Medical Center Methods and systems for measuring post-operative disease recurrence
AU2022221712A1 (en) * 2021-02-18 2023-09-21 Cedars-Sinai Medical Center Anti-tl1a antibody compositions and methods of treatment in the lung
IL305312A (en) * 2021-02-18 2023-10-01 Prometheus Biosciences Inc Compositions comprising human antibodies to TNF-like ligand 1A (TL1A) and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040248324A1 (en) * 1999-08-04 2004-12-09 Hailing Hsu Fhm a novel member of the TNF ligand supergene family: materials and methods for interaction modulators
WO2009064854A2 (en) * 2007-11-13 2009-05-22 Cogenesys, Inc Humanized antibodies against tl1a

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7820798B2 (en) 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US6927044B2 (en) 1998-09-25 2005-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-1 receptor based cytokine traps
US7378091B2 (en) * 2001-12-03 2008-05-27 Amgen Fremont Inc. Antibodies against carbonic anhydrase IX (CA IX) tumor antigen
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
EP1667730B1 (en) * 2003-08-20 2013-06-26 University of Miami Compositions and methods for treating inflammatory lung disease
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US20090317388A1 (en) * 2005-05-25 2009-12-24 Linda Burkly Tl1a in treatment of disease
WO2007027751A2 (en) * 2005-08-30 2007-03-08 University Of Miami Immunomodulating tumor necrosis factor receptor 25 (tnfr25) agonists, antagonists and immunotoxins
CN102585002A (zh) 2006-06-02 2012-07-18 瑞泽恩制药公司 人il-6受体的高亲和力抗体
JP2010534469A (ja) * 2007-07-25 2010-11-11 アストラゼネカ アクチボラグ Ｋｄｒ指向性標的化結合物質およびその使用
JO3375B1 (ar) * 2010-11-08 2019-03-13 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للجين a1 الشبيه بعامل النخر الورمي (tl1a)

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040248324A1 (en) * 1999-08-04 2004-12-09 Hailing Hsu Fhm a novel member of the TNF ligand supergene family: materials and methods for interaction modulators
WO2009064854A2 (en) * 2007-11-13 2009-05-22 Cogenesys, Inc Humanized antibodies against tl1a

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HIDETOSHI TAKEDATSU, KATHRIN S. MICHELSEN, BO WEI, CAROL J. LANDERS, LISA S. THOMAS, DEEPTI DHALL, JONATHAN BRAUN, STEPHAN R. TARG: "TL1A (TNFSF15) regulates the development of chronic colitis by modulating both T-helper 1 and T-helper 17 activation.", GASTROENTEROLOGY, W.B. SAUNDERS CO., US, vol. 135, no. 2, 1 August 2008 (2008-08-01), US, pages 552 - 567, XP002668871, ISSN: 0016-5085, DOI: 10.1053/j.gastro.2008.04.037 *
MELANIE JANE BULL, ANWEN SI�N WILLIAMS, ZARABETH MECKLENBURGH, CLAUDIA JANE CALDER, JASON PETER TWOHIG, CAROLE ELFORD, BRONWEN ALI: "The death receptor 3 - TNF-like protein 1A pathway drives adverse bone pathology in inflammatory arthritis.", THE JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE, ROCKEFELLER UNIVERSITY PRESS, US, vol. 205, no. 11, 27 October 2008 (2008-10-27), US, pages 2457 - 2464, XP002668872, ISSN: 0022-1007, DOI: 10.1084/JEM.20072378 *

Also Published As

Publication number Publication date
TW201233796A (en) 2012-08-16
US20140120109A1 (en) 2014-05-01
CN103261228A (zh) 2013-08-21
CA2816799C (en) 2021-02-16
CN103261228B (zh) 2016-02-10
SG190176A1 (en) 2013-06-28
US9556277B2 (en) 2017-01-31
JP6076911B2 (ja) 2017-02-08
IL226172A (en) 2016-08-31
CA2816799A1 (en) 2012-05-18
AU2011326097A1 (en) 2013-05-09
MX2013005141A (es) 2013-07-03
IL226172A0 (en) 2013-07-31
EP2638069B1 (en) 2018-01-03
WO2012064682A1 (en) 2012-05-18
AU2011326097B2 (en) 2015-08-20
NZ706986A (en) 2016-04-29
US20120114654A1 (en) 2012-05-10
BR112013011245A2 (pt) 2020-08-04
CL2013001279A1 (es) 2014-03-07
US8642741B2 (en) 2014-02-04
KR101896129B1 (ko) 2018-09-07
NZ610294A (en) 2015-06-26
JP2016220693A (ja) 2016-12-28
JO3375B1 (ar) 2019-03-13
SG10201504265RA (en) 2015-06-29
ZA201304114B (en) 2014-02-26
EA201370105A1 (ru) 2013-12-30
KR20130132842A (ko) 2013-12-05
AR083785A1 (es) 2013-03-20
MX355580B (es) 2018-04-06
EP2638069A1 (en) 2013-09-18
TWI606118B (zh) 2017-11-21
MY185006A (en) 2021-04-30
JP2014500014A (ja) 2014-01-09
US20170096491A1 (en) 2017-04-06
UY33715A (es) 2012-05-31
JP6272970B2 (ja) 2018-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA030397B1 (ru) Человеческие антитела против человеческого tnf-подобного лиганда-1а (tl1a)
KR102536014B1 (ko) Pd-1 효능제 항체 및 그의 용도
RU2732042C2 (ru) Анти-pvrig антитела и способы применения
US20200299388A1 (en) EGFR x CD28 MULTISPECIFIC ANTIBODIES
US8414890B2 (en) Human antibodies to human RANKL, encoding nucleic acids and methods of treatment
EP2528945B1 (en) Methods of treating diabetes with dll4 antagonists
EA030852B1 (ru) Полипептиды антител, которые вызывают антагонизм cd40l
EA028879B1 (ru) АНТИТЕЛА К ErbB3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
US11987640B2 (en) Anti-mesothelin antigen-binding molecules and uses thereof
AU2018256392A1 (en) Anti-PD-L1 antibody and use thereof
US20220119514A1 (en) Methods for altering body composition by administering a gdf8 inhibitor and an activin a inhibitor
US11066474B2 (en) Anti-TrkB monoclonal antibodies and methods of use
US12037401B2 (en) Anti-TrkB monoclonal antibodies and methods of use