KR101889862B1 - 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법 - Google Patents

이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 버섯 균사체를 활용하여 천연 미네랄을 킬레이트화하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법에 관한 것으로써, 미네랄 분말이 함유된 배지에서 버섯 균사체를 배양하여 이온 유기태화 미네랄을 제조한다. 본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 버섯 균사체 등의 폐사 발생 없이 산업적 활용에 필요한 대량생산을 가능하게 한다.

Description

이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법{Preparation method for ionic organic mineral}
본 발명은 자연에서 획득한 광물을 산업적으로 활용하기 위해 대량으로 유기화하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법에 관한 것이다.
미네랄은 동물의 생명유지에 필수영양소에 해당한다. 미네랄은 동물의 전체 구성 중 약 4%를 차지하는 것에 불과하나, 동물의 생명유지와 정상적인 신체활동을 유지하기 위해 반드시 필요하다. 예를 들면, 미네랄은 동물의 골격구성, 체내 삼투압조절, 체액 산-염기 평형상태 유지, 효소 활성 등에 영향을 주는 것으로 보고되고 있다. 따라서, 미네랄이 결핍될 경우, 동물은 생리기능 이상 및 면역기능 저하 등을 초래하는 것으로 널리 인식되어 있다.
다만, 미네랄은 동물 체내에서 자연적으로 생성되지 않아, 동물이 외부 식물 또는 식품을 통해 섭취해야만 한다. 자연에서 획득된 천연 미네랄의 본래 형태는 동물의 체내에 거의 흡수되지 못한다. 동물 체내에 미네랄이 흡수되기 위해서는 미네랄을 유기분자로 킬레이트화하는 방법이 있는데, 본 출원인은 대한민국 등록특허공보 제10-1738475호에서 이 방법을 개시한 바 있다.
미네랄을 킬레이트화하면 동물의 소장에서 흡수가 용이한데, 킬레이트화는 금속 형태의 미네랄과 유기분자가 배위공유결합된 형태이다. 천연 광물을 킬레이트화하여 동물의 사료로 흡수율을 향상시키는 연구결과가 다수 보고되고 있다(백인기, 2000, 보조사료 산업발전을 위한 심포지움: 37~60).
이상에서 설명한 바와 같이, 화학적 방식에 의한 미네랄의 킬레이트화 방식은 산업적인 대량생산에 적합하나, 이 방식에 의해 생산된 유기태화 미네랄은 동물의 체내 흡수율이 약 40%정도에 그치므로 문제가 있다. 대한민국 등록특허공보 제10-1738475호에는 이러한 화학적 방식에 의한 유기태화 미네랄의 흡수율 한계를 기재하고 있다.
최근에는 이러한 문제점을 극복하기 위해, 식물의 대사과정을 활용하여 미네랄을 킬레이트화하는 방식이 개발되고 있고, 예를 들면, 대한민국 등록특허공보 제10-0893967호에는 버들송이버섯의 대사과정을 활용하여 미네랄을 킬레이트화하는 방식을 개시하고 있다.
그러나, 대한민국 등록특허공보 제10-0893967호는 버들송이버섯의 대사과정을 활용하여 킬레이트화함으로써 흡수율을 향상시킬 수는 있으나, 산업적인 대량생산이 불가능한 실정이다. 대량생산이 가능하기 위해서는 우선 식물의 배양 과정 중에 미네랄을 흡수하는 효율이 월등히 높은 식물 종자를 개발하여야 하고, 또한 해당 식물 종자의 생육기간이 짧아야 한다. 아울러, 해당 식물 종자를 개발하였다 하더라도, 해당 식물 종자가 과량의 미네랄을 흡수할 경우 오히려 미네랄의 독성에 의해 폐사하게 된다. 이러한 문제점들을 해결하는 새로운 방식의 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법이 절실히 필요한 실정이다.
대한민국 등록특허공보 제10-1738475호(천연 광물의 유기화를 통한 액체 비료 제조방법) 대한민국 등록특허공보 제10-0893967호(미네랄을 함유하는 버들송이버섯의 재배방법 및 그 부산물을 이용한 비료)
본 발명자들은 상기한 문제점을 해결하고자 다각적으로 연구를 수행한 결과,
생육기간이 짧고, 다량의 미네랄을 흡수하여 대사과정을 통해 미네랄을 킬레이트화하는 버섯 균사체를 활용함으로써, 산업적 규모의 대량생산이 가능한 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법을 밝혀냈다.
따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 산업적으로 대량생산이 가능한 이온 유기태화(킬레이트화) 미네랄을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명의 일 실시예에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 미네랄 분말이 함유된 배지에서 버섯 균사체를 배양한다. 바람직하게는 참바늘버섯 균사체를 사용할 수 있다.
배양과정에 버섯 균사체가 폐사하는 것을 방지하기 위해서, 버섯 균사체의 미네랄 노출양을 조절하는 것이 필요한데, 본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 (A) 배지 전체 부피 대비 1 내지 10% 부피비를 갖는 버섯 균사체를 배지에 접종하여 배양하는 제1 배양 단계, (B) 액체배지가 채워진 배양용기에 상기 (A) 단계에서 획득된 0.01 내지 0.02L 배양액 및 미네랄을 첨가하여 혼합물을 배양하되, 혼합물 중 미네랄의 최종 농도가 100 내지 500ppm이 함유되도록 미네랄을 첨가하여 혼합물을 배양하는 제2 배양 단계 및 (C) 액체배지가 채워진 액체탱크에 상기 (B) 단계에서 획득된 1L 내지 1.5L 배양액 및 미네랄을 첨가하여 배양하는 제3 배양 단계를 포함하되, 미네랄이 액체탱크에 채워진 후 혼합물 중 미네랄의 최종 농도가 500 내지 1000ppm이 함유되도록 미네랄을 첨가하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 (B) 단계는 (B-1) 액체배지가 채워진 배양용기에 상기 (A) 단계에서 획득된 배양액 및 미네랄을 투입하는 단계, (B-2) 배양용기를 20℃ 내지 28℃에서, 2,000 내지 5,000rpm으로 회전하는 균사기에서 균질화한 후, 100 내지 150rpm으로 회전하는 배양기에서 배양하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 (C) 제3 배양 단계는 (C-1) 상기 (B) 단계에서 획득된 배양액을 균질화하는 단계, (C-2) 상기 균질화된 배양액을 액체탱크에 투입하는 단계 및 (C-3) 상기 액체탱크의 내부 온도를 18℃ 내지 25℃로 유지하면서 배양액을 배양하는 단계를 포함할 수 있다.
추가적으로, 본 발명의 일 실시예에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 (D) 상기 (C) 단계에서 획득된 배양액을 저온 알코올 추출법, 고온 알코올 추출법을 포함하는 용매 추출법에 의해 추출하는 단계 및 (E) 상기 (D) 단계에서 획득된 추출물을 증류하여 농축하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 미네랄의 노출양을 조절하여 복수의 단계로 배양액을 미네랄에 노출시킴으로써, 버섯 균사체 등의 폐사 없이 산업적 활용에 필요한 대량생산을 가능하게 한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법을 수행하는 순서도이다.
후술하는 본 발명에 대한 상세한 설명은, 본 발명이 실시될 수 있는 특정 실시예로 기술되고 당업자가 본 발명을 실시할 수 있기에 충분하도록 상세히 설명된다. 본 발명의 다양한 실시예는 서로 다르지만 상호 배타적일 필요는 없음이 이해되어야 한다. 따라서, 후술하는 상세한 설명은 한정적인 의미로서 행하여지는 것이 아니며, 본 발명의 범위는 특허청구범위에 기재된 내용 및 그와 균등한 모든 범위를 포괄하는 것으로 받아들여져야 한다. 이하 본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법을 도면을 통해 상세히 설명하도록 한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법을 수행하는 순서도이다.
도 1을 참조하면, 본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 버섯 균사체가 배양 중에 과량의 미네랄에 의해 폐사되지 않으면서도 미네랄을 최대한 흡수할 수 있도록, 배양과정을 3단계(A, B, C 단계)로 나누어 수행한다.
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구체적으로 각 단계를 나누어 설명하면, 제1 배양단계(A)는 배지에 버섯 균사체를 접종하는 단계이다. 상기 버섯 균사체는 예를 들면 참바늘버섯(Mycoleptodonoides aitchisonii) 균사체, 차가버섯(Inonotus obliquus) 균사체, 표고버섯(Lentinus edoes) 균사체, 상황버섯(Phellinus linteus) 균사체, 운지버섯(Coriolus versicolor) 균사체를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.
다양한 식물군 균사체 중, 버섯 균사체가 생육이 빠르고 미네랄의 흡수량과 대사량이 우수한데, 버섯 균사체 중에서 참바늘 버섯(Mycoleptodonoides aitchisonii) 균사체가 미네랄의 흡수량 및 대사량이 가장 우수하며 대량생산에 적합하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
참바늘버섯(Mycoleptodonoides aitchisonii)은 침버섯이라 불리고, 상큼한 과일향이 나는 식용 버섯의 일종이다. 자실체는 버섯 자루가 없고 유연한 육질이나 마르면 강인해지고, 균모는 부채꼴 형태이며 백색 또는 담황색을 띤다. 참바늘버섯은 여러 가지 약리적 효능과 함께 영양학적으로도 우수하여 인공재배에 대한 연구가 최근 활발히 이루어지고 있다. 참바늘버섯 균사체의 생장 형태를 살피면, 10일째에 균사가 4~5cm로 성장하여 비교적 생육이 빠르다.
제1 배양단계(A)에서는 소량의 버섯 균사체를 취하여 배지에 접종 및 배양하는 것으로써, 바람직하게는 미네랄을 배지에 첨가하지 않을 수 있다.
제1 배양단계(A)의 배지는 멸균된 고체 배지를 사용할 수 있고, 예를 들면 포테이토 덱스트로즈 한천배지(Potato Dextrose Agar, PDA 배지), 포테이토 덱스트로즈 브로스(Potato Dextrose Broth, PDB 배지), 말트배지, 당화배지를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 버섯 균사체의 생육을 향상시키기 위해서는 감자 70 ~ 90 중량%, 덱스트린 5~ 15중량%, 한천 5 ~ 15중량%를 함유하는 PDA 배지를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 배지는 버섯 균사체가 접종되기 이전에, 멸균이 이루어져야 한다. 배지의 멸균은 110℃ 내지 130℃의 온도에서 15 내지 30분간 멸균할 수 있다.
멸균된 배지에 버섯 균사체를 접종한 후, 22℃ ~ 27℃의 온도를 유지하는 배양기의 내부에서 10일간 배양할 수 있다. 버섯 균사체의 접종 양은 배지 전체 부피 대비 1 내지 10% 부피비로 접종할 수 있다.
제2 배양단계(B)는 대량의 미네랄에 버섯 균사체을 노출시키기 전, 소량의 미네랄에 버섯 균사체를 노출시켜 배양하는 사전 배양단계에 해당한다. 이러한 제2 배양단계(B)는 후술할 제3 배양단계(C)에서 버섯 균사체가 폐사되는 것을 현격히 줄일 수 있다.
제2 배양단계(B)는 배양용기에 상기 A단계에서 획득된 배양액 및 미네랄을 투입하는 단계(B-1), 회전하는 배양용기에서 배양액을 균질화한 후, 배양하는 단계(B-2)를 포함할 수 있다.
구체적으로, 액체배지가 채워진 배양용기에 미네랄 및 상기 (A) 단계에서 획득된 배양액 중 0.01 내지 0.02L의 배양액을 취하여 배양용기에 투입하여 혼합물을 형성한다(B-1). 이때, 미네랄의 상대적인 함량이 중요한데, 상기 투여된 배양액 0.01 내지 0.02L를 기준으로, 상기 혼합물 중 미네랄의 최종 농도가 100 내지 500ppm이 되도록 미네랄을 투여하는 것이 바람직하다. 미네랄의 최종 농도가 500ppm을 초과할 경우 버섯 균사체가 폐사하는 양이 현격히 증가하고, 100ppm 미만일 경우 버섯 균사체에 함유되는 미네랄의 농도가 낮아 대량생산에 적합하지 않거나, 제3 배양단계에서 버섯 균사체의 폐사가 발생할 수 있다.
미네랄이라 함은 인체에 필요한 무기질로써, 예를 들면 칼슘(Ca), 마그네슘(Mg), 인(P), 나트륨(Na), 칼륨(K), 셀레늄(Se), 구리(Cu), 바륨(Ba), 철(Fe), 아연(Zn), 게르마늄(Ge) 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
그 후, 상기 혼합물을 균질화 및 배양한다(B-2). 예를 들면, 균질화는 20℃ 내지 28℃에서 2,000 내지 5,000rpm으로 회전하는 균질기에서 수행될 수 있는데, 균질기의 회전수가 5,000rpm을 초과할 경우 버섯 균사체가 일부 폐사할 수 있고, 2,000rpm의 미만일 경우 버섯 균사체의 증식이 효과적으로 일어나지 않는다. 이어서, 균질화된 배양용기를 100 내지 150rpm으로 회전하는 배양기(쉐이킹 인큐베이터)에서 배양한다. 균질화 및 배양단계는 무균 및 멸균 공간에서 수행되는 것이 바람직하다. 제2 배양단계(B)의 액체배지는 말트배지 및 당화배지를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 액체배지는 멸균처리된 것을 사용하여야 한다.
이상에서 설명한 제2 배양단계는 복수의 배양용기를 사용하여 동시에 또는 이시(異時)에 반복 수행함으로써 제3 배양 단계에 필요한 배양액을 제조할 수 있다.
제3 배양단계(C)는 대량생산을 위해 대용량 액체탱크에서 수행될 수 있다. 제3 배양단계는 (B) 단계에서 획득된 배양액의 균질화를 재수행(C-1)한 뒤, 균질화된 배양액을 미네랄 및 액체배지가 채워진 액체탱크에 투입하는 단계(C-2) 및 액체탱크의 배양액을 배양하는 단계(C-3)를 포함할 수 있다.
구체적으로, (B) 단계에서 획득된 1L 내지 1.5L 배양액을 무균 공간에서 균질화한다(C-1). 본 단계의 균질화 방법은 앞서 설명한 (B-2) 단계와 동일한 조건으로 수행될 수 있다.
균질화된 배양액을 액체탱크에 투입하는데(C-2), 이때 액체탱크에는 액체배지가 채워지고 미네랄이 투여될 수 있다. 따라서, 액체탱크의 내부에는 배양액, 미네랄 및 액체배지가 혼합된 혼합물이 형성된다. 이때, 대량생산을 위해 미네랄의 상대적인 함량이 중요한데, 상기 투여된 배양액 1L 내지 1.5L를 기준으로, 상기 혼합물 중 미네랄의 최종 농도가 500 내지 1000ppm이 함유되도록 미네랄을 첨가하는 것이 바람직하다. 미네랄의 최종 농도가 1000ppm을 초과할 경우 버섯 균사체가 폐사하는 양이 현격히 증가하고, 500ppm 이하일 경우 버섯 균사체에 함유되는 미네랄의 농도가 낮아 대량생산에 적합하지 않다.
제3 배양단계(C)의 액체배지는 예를 들면 대두박배지나 당화배지를 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 제3 배양단계(C)의 액체배지는 멸균된 것을 사용해야 하는데, 액체탱크의 부피가 최소 60L를 넘어 통상의 오토클레이브를 사용해서는 멸균이 불가능하다. 따라서, 별도 밀폐된 고압살균용기에 액체 배지를 채우고, 고압살균용기를 110℃ 내지 130℃에서 1.0 ~ 1.4kg/cm2의 압력으로 70 내지 100 분간 멸균한 액체배지를 상기 (C) 단계에 사용할 수 있다.
그 후, 액체탱크의 내부 온도를 18℃ 내지 25℃로 유지하여, 배양액을 배양한다. 이상에서 설명한 바와 같이, (A) 내지 (C) 단계를 거쳐 100L를 초과하는 배양액을 획득할 수 있다. (C) 단계는 (B) 단계와 마찬가지로 복수의 액체탱크를 사용하여 동시에 또는 이시(異時) 반복 수행될 수 있다.
상기 (A) 내지 (C) 단계에서 배지에 첨가되는 미네랄은 자연에서 획득된 광물 분말을 포함하며, 이들의 광물 분말은 아연, 마그네슘, 철, 칼슘, 나트륨, 셀레늄, 칼륨, 인, 구리, 불소, 바나듐 및 이들의 2종 이상의 혼합물을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 이온 유기태화 미네랄을 획득하기 위해, (C) 단계에서 획득된 배양액을 추출하는 단계(D), 추출물을 농축하는 단계(E)를 더 포함할 수 있다.
추출 단계(D)는 (C) 단계를 통해 배양이 완료된 균사체를 추출 탱크에 놓고 저온 알코올 추출법, 고온 알코올 추출법을 포함하는 용매 추출법에 의해 추출을 수행할 수 있다.
농축 단계(E)는 (D) 단계에서 추출된 추출물에 존재하는 알코올을 증류하여 농도에 맞게 농축하는 과정이다. 농축된 최종 결과물을 건조하면 이온 유기태화 미네랄을 획득할 수 있다.
< 실시예 1>
- 제1 배양 단계
감자 200g, 덱스트린 20g, 한천 20g이 함유된 PDA배지를 1L 증류수가 채워진 용기에 넣고 저어준다. 배지 멸균을 위해 용기를 오토클리브에서 121℃, 1.2kg/cm2의 압력으로 20분간 멸균하였다. 멸균이 완료된 용기를 크린벤치 내부에서 50℃까지 냉각한 후, 지름 90mm의 페트리디쉬에 분주하였다. 분주를 완료한 날로부터 3일 후, 참바늘버섯균 균사체를 접종하고 파라핀 필름지로 페트리디쉬를 밀봉하였다. 이어서, 페트리디쉬를 25℃의 인큐베이터에서 10일간 배양하여 0.05L의 배양액을 획득하였다.
- 제2 배양 단계
0.5L 플라스크 4개를 준비하여, 각각의 플라스크를 아래와 같이 처리하였다.
멸균된 액체 당화 배지, 미네랄 및 제1 배양 단계에서 획득된 배양액을 각각의 플라스크에 채워 혼합물을 형성하되, 배양액은 0.0125L, 미네랄은 250ppm을 투입하였다. 플라스크를 25℃에서 배양하되 3000rpm으로 회전하는 호모게나이저를 사용하여 균질화한 후, 125rpm으로 회전하는 쉐이킹 인큐베이터에서 배양하여 각각의 플라스크에 0.3L의 배양액을 획득하였다(4개 플라스크에서 배양된 배양액을 합하면 1.2L의 배양액을 획득함).
- 제3 배양단계
액체 당화 배지를 121, 1.2kg/cm2 압력을 유지하는 밀폐 살균용기에서 90분간 멸균하였다. 멸균된 액체 당화 배지를 150L 액체탱크에 투입하고, 제2 배양단계에서 획득된 배양액 1.2L를 배지에 접종하였고, 미네랄은 750ppm을 투입하였다.
액체탱크의 내부 온도를 25℃로 유지하여 배양을 수행하였고, 최종 130L의 배양액을 획득하였다.
- 추출 및 농축 단계
배양된 130L의 배양액을 추출탱크에서 알코올 추출법을 통해 추출물을 획득한 후, 이를 증류를 통해 농축 및 건조를 통해 65kg의 이온 유기태화 미네랄을 획득하였다. 획득된 이온 유기태화 미네랄의 미네랄 검출 농도는 1,400ppm으로 확인되었다.
< 비교예 1>
제2 배양단계에서 미네랄의 함량을 550ppm을 투여한 것을 제외하고는 실시예와 동일한 방법으로 수행하였으나, 참바늘버섯 균사체가 폐사하였다.
< 비교예 2>
제2 배양단계에서 미네랄의 함량을 90ppm을 투여한 것을 제외하고는 실시예와 동일한 방법으로 수행하였으나, 참바늘버섯 균사체가 폐사하였다.
< 비교예 3>
제3 배양단계에서 미네랄의 함량을 1100ppm을 투여한 것을 제외하고는 실시예와 동일한 방법으로 수행하였으나, 참바늘버섯 균사체가 폐사하였다.
< 비교예 4>
제3 배양단계에서 미네랄의 함량을 450ppm을 투여한 것을 제외하고는 실시예와 동일한 방법으로 수행하였다. 그 결과 최종 41.5kg의 이온 유기태화 미네랄을 획득하였다. 획득된 이온 유기태화 미네랄의 미네랄 검출 농도는 1,010ppm으로 확인되었다.
실시예와 비교예에 따른 제조방법의 차이는 아래 [표 1]과 같다.
구분 실시예 비교예1 비교예2 비교예3 비교예4
제2배양단계
미네랄 함량
(ppm)
250
550
90
250
250
제3배양단계
미네랄 함량
(ppm)
750
-
750
1100
450
이온 유기태화 미네랄의
수득량
65kg		 0
(폐사)		 0
(폐사)		 0
(폐사)		 41.5kg
실시예에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 대량생산을 위한 제3 배양단계 이전에 제2 배양단계에서 배양액을 250ppm의 미네랄에 노출시킴으로써 제3 배양단계에서 폐사율을 현저히 줄일 수 있었고, 제3 배양단계에서는 750ppm에 노출시킴으로써 폐사 발생 없이 65kg의 이온 유기태화 미네랄을 획득할 수 있었다.
그러나, 비교예 1의 경우는 배양액이 제2 배양 단계에서 과량의 미네랄에 노출됨으로써 전량 폐사하였고, 비교예 2의 경우는 제3 배양단계에서 실시예 1과 동일한 양의 미네랄에 노출되었음에도 불구하고 제2 배양단계에서 노출된 미네량이 미미하여 배양액이 폐사하였으며, 비교예 3의 경우 제3 배양단계에서 과량의 미네랄에 노출되어 전량 폐사하였고, 비교예 4의 경우 제3 배양단계에서 450ppm의 미네랄에 노출시킨 결과 이온 유기태화 미네랄의 수득량이 실시예에 비해 현저히 떨어지는 것을 확인할 수 있었다.
본 발명에 따라 제조된 이온 유기태화 미네랄은 비료, 사료, 식품 첨가제, 건강기능식품, 의약품 등에 활용할 수 있다.
이와 같이, 본 발명에 따른 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은 단계를 나누어 배양액을 미네랄에 노출시킴으로써, 배양액의 폐사 없이 산업적 활용에 필요한 대량생산을 가능하게 한다.
이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능함은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.

Claims (10)

  1. 삭제
  2. (A) 배지 전체 부피 대비 1 내지 10% 부피비를 갖는 버섯 균사체를 배지에 접종하여 배양하는 제1 배양 단계;
    (B) 액체배지가 채워진 배양용기에 상기 (A) 단계에서 획득된 0.01 내지 0.02L 배양액 및 미네랄을 첨가하여 혼합물을 배양하되, 혼합물 중 미네랄의 최종 농도가 100 내지 500ppm이 함유되도록 미네랄을 첨가하여 혼합물을 배양하는 제2 배양 단계; 및
    (C) 액체배지가 채워진 액체탱크에 상기 (B) 단계에서 획득된 1L 내지 1.5L 배양액 및 미네랄을 첨가하여 배양하는 제3 배양 단계를 포함하되, 미네랄이 액체탱크에 채워진 후 혼합물 중 미네랄의 최종 농도가 500 내지 1000ppm이 함유되도록 미네랄을 첨가하는 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 (B) 제2 배양 단계는
    (B-1) 액체배지가 채워진 배양용기에 상기 (A) 단계에서 획득된 배양액 및 미네랄을 투입하는 단계; 및
    (B-2) 배양용기를 20℃ 내지 28℃에서, 2,000 내지 5,000rpm으로 회전하는 균사기에서 균질화한 후, 100 내지 150rpm으로 회전하는 배양기에서 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 (C) 제3 배양 단계는
    (C-1) 상기 (B) 단계에서 획득된 배양액을 균질화하는 단계;
    (C-2) 상기 균질화된 배양액을 액체탱크에 투입하는 단계; 및
    (C-3) 상기 액체탱크의 내부 온도를 18℃ 내지 25℃로 유지하면서 배양액을 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  5. 제2항에 있어서,
    상기 (C) 배양 단계를 통해 획득되는 최종 배양액은 100L를 초과하는 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 (A) 단계의 배지는 감자 70 ~ 90 중량%, 덱스트린 5~ 15중량%, 한천 5 ~ 15중량%를 함유하는 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지를 포함하고, 상기 PDA 배지는 110℃ 내지 130℃에서 15 내지 30분간 멸균된 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  7. 제2항에 있어서,
    상기 (C)단계의 액체배지는 110℃ 내지 130℃에서 1.0 ~ 1.4kg/cm2의 압력으로 70 내지 100 분간 멸균된 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  8. 제2항에 있어서,
    상기 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법은
    (D) 상기 (C) 단계에서 획득된 배양액을 저온 알코올 추출법, 고온 알코올 추출법을 포함하는 용매 추출법에 의해 추출하는 단계; 및
    (E) 상기 (D) 단계에서 획득된 추출물을 증류하여 농축하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
  9. 삭제
  10. 제2항에 있어서,
    상기 버섯 균사체는 참바늘버섯(Mycoleptodonoides aitchisonii) 균사체인 것을 특징으로 하는 이온 유기태화 미네랄을 제조하는 방법.
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