KR101865683B1 - 털마삭줄을 포함하는 마삭줄속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 마삭줄속 식물 추출물 또는 이의 발효 추출물을 함유하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 개선용, 피부 진피치밀도 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 마삭줄속 식물 추출물은 백화등 추출물, 털마삭줄 추출물, 마삭줄 추출물, 민마삭줄 추출물, 무늬마삭줄 추출물, 긴마삭줄 추출물, 초석마삭줄 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출물이다.

Description

털마삭줄을 포함하는 마삭줄속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising extract of Trachelospermum species comprising Trachelospermum jasminoides as active ingredient}

본 발명은 주름 개선 및 탄력 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 백화등 추출물, 털마삭줄 추출물, 마삭줄 추출물, 민마삭줄 추출물, 무늬마삭줄 추출물, 긴마삭줄 추출물, 초석마삭줄 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 주름 개선 및 탄력 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다.

좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화에는 이러한 자유라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소 (Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다.

그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다.

이러한 여러 가지 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학 물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다.

한국공개특허 제2010-0092594호는 마삭줄 추출물, 부채붓꽃 추출물, 긴병꽃풀 추출물, 층꽃 추출물 및 풀솜대 추출물의 증류액을 포함하는 야생화 함유 나노유화 화장료 조성물에 관한 것이다. 한국등록특허 제10-1490683호는 마삭줄, 고련피, 희첨 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 협죽도과 식물인 마삭줄속 식물을 선정하고 이로부터 추출물을 제조하여 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성 효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 진피치밀도 개선효과, 피부 항노화 효과를 측정한 결과, 그 효능이 매우 우수하므로 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다.

본 발명의 목적은 백화등 추출물, 털마삭줄 추출물, 마삭줄 추출물, 민마삭줄 추출물, 무늬마삭줄 추출물, 긴마삭줄 추출물, 초석마삭줄 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출물을 함유하여 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성 효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 진피치밀도 개선효과, 피부 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

또한, 본 발명의 목적은 마삭줄속 식물 추출물의 효능을 극대화하기 위해 초임계, 초음파, 발효추출물을 제조하고 정제과정을 거쳐 효능 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명은 마삭줄속 식물 추출물 또는 이의 발효 추출물을 함유하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 개선용, 피부 진피치밀도 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 마삭줄속 식물 추출물은 백화등 추출물, 털마삭줄 추출물, 마삭줄 추출물, 민마삭줄 추출물, 무늬마삭줄 추출물, 긴마삭줄 추출물, 초석마삭줄 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출물이다.

바람직하게는, 상기 마삭줄속 식물 추출물은 털마삭줄 추출물이다.

바람직하게는, 상기 마삭줄속 식물 추출물은 백화등 추출물이다.

바람직하게는, 상기 발효 추출물은 마삭줄속 식물 추출물을 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)로 발효시킨 것이다.

바람직하게는, 상기 마삭줄속 식물 추출물 또는 이의 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0 중량% 함유되는 것이다.

본 발명에 따른 마삭줄속 식물 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과 (실험예 1), 콜라겐 생합성 효과(실험예 2), miR-378b 발현 억제효과(실험예 3), 피부 탄력 개선 효과(실험예 4), 피부 주름 개선 효과(실험예 5), 진피치밀도 개선효과(실험예 6)를 갖는다.

본 발명의 화장료 조성물 중 유효 성분으로 사용되는 마삭줄속 식물은 쌍떡잎식물 합판화군 용담목 협죽도과의 상록 활엽 덩굴성 나무로 백화등, 털마삭줄, 마삭줄, 민마삭줄, 무늬마삭줄, 긴마삭줄 및 초설마삭줄이 해당된다.

백화등은 영문표기 학명으로는 Trachelospermum asiaticum var. majus로 표기되고 있다. 해발고도 50~1,100m 산지의 고목(古木)이나 바위에 붙어 자란다. 길이 5m 내외로 벋으며, 줄기에서 뿌리가 나와 다른 물체에 잘 붙는다. 줄기는 적갈색이며 털이 있다. 잎은 마주나며 둥글고 가장자리가 밋밋하다. 표면은 짙은 녹색으로 광택이 있고 뒷면에 털이 있거나 없다. 꽃은 5~6월에 새로 자란 가지 끝에 취산꽃차례로 달린다. 꽃의 지름은 2~3cm이며 흰색에서 노란색으로 변한다.

털마삭줄은 영문표기 학명으로는 Trachelospermum jasminoides로 표기되고 있다. 털마삭줄은 잎은 마주나고 긴 타원형으로 잎의 길이는 4~8cm, 폭은 2~5cm이며 끝이 뾰족하다. 5~6월에 가지 끝에서 취산(聚) 꽃차례로 노란색을 띤 흰색 꽃이 핀다. 열매는 골돌과(果)로 길이는 10~15cm이다. 한국 남부 지방의 섬, 일본, 중국 등지에 분포한다.

마삭줄은 영문표기 학명으로는 Trachelospermum asiaticum var. intermedium Nakai로 표기되고 있다. 높이 5m이고 가지는 붉은 빛을 띤 갈색이고 털이 없다. 잎은 마주나며 길이 2~5cm, 너비 1~3cm로서 타원상 원모양, 달걀모양, 긴 타원모양이고 잎의 앞면은 진한 녹색이고 광택이 흐르며 가장자리가 밋밋하고 잎자루는 길이 5mm이다. 꽃은 5∼6월에 지름 2∼3cm의 흰색에서 노란색으로 변하며 취산회서로 달린다. 꽃받침은 5개로 갈라지고 꽃잎도 5개로 갈라지며 5개의 수술을 가지며 꽃밥 끝이 꽃통부의 입구까지 닿는다. 열매는 골돌과로 9월에 익으며 길이 12~22cm로 2개가 달린다.

민마삭줄은 영문표기가 학명으로는 Trachelospermum asiaticum var. asiatica로 표기되고 있으며 해발고도 50~1,100m의 산기슭이나 바위에서 자란다. 길이 5m 내외로 줄기에서 뿌리가 나와 다른 물체에 잘 붙는다. 줄기는 적갈색이며 털이 없다. 잎은 마주나며 길이 2~5cm로 타원형이다. 가장자리가 밋밋하며, 표면은 짙은 녹색으로 광택이 있고 뒷면에 털이 없다. 꽃은 5~6월에 새로 자란 가지 끝에 취산꽃차례로 달린다. 꽃의 지름은 2~3cm이고 흰색에서 노란색으로 변하며 향기가 좋다. 꽃받침과 화관(花冠)은 5개로 갈라진다. 수술은 5개, 암술은 1개이며 암술대가 꽃받침보다 2배 정도 길다. 잎과 줄기는 해열·강장·진통 등에 약재로 쓴다. 상록성의 잎과 꽃이 아름다워 정원석이나 고목에 올려 관상용으로 많이 키운다.

무늬마삭줄은 영문표기가 학명으로는 Trachelopermum asiaticum Variegatum으로 표기되고 있으며, 나무나 바위에 붙어 자라는 여러해살이 덩굴식물로 우리나라와 중국등지에 분포한다. 가을에 단풍이 들고 꽃은 잘 피지 않으나 흰색꽃이 피기도 한다.

긴마삭줄은 영문표기가 학명으로는 Trachelospermum asiaticum var. blanceolate로 표기되고 있으며, 경남과 전남에 자라며 잎은 마주나며 끝은 뾰족하다. 마삭줄의 잎보다 두 배 정도 된다. 덩굴식물로서 나무나 바위등에 잘 달라붙는다. 열매는 골돌로 2개씩 달리는데, 2개가 서로 예각(銳角)으로 벌어진다. 8월에 익는다.

초설마삭줄은 영문표기 학명으로는 Trachelospermum asiaticum 'Hatuyukikazura' 로 표기되고 있다. 초설마삭줄은 햇볕이 잘 드는 곳에서 길러야 아름다운 잎색을 유지하며 고유의 무늬를 즐기실 수가 있으며 5~6월에는 꽃이 피는데 자스민향과 유사한 향기를 갖는 향이 좋은 꽃을 피운다. 초설마삭줄은 상록성의 덩굴식물로 지표면을 기거나 바위암벽 또는 나무에 뿌리를 붙이고 자라올라가며 성장한다. 새잎은 핑크색이지만 자라면서 크림색의 무늬가 있는 녹색이 된다. 향기로운 꽃은 늦봄부터 여름에 걸쳐 2cm정도 크기에 작은 꽃들이 하얀색에서 노란색으로 변하고 시들어간다.

본 발명에 있어서, 마삭줄속 식물 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라서, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법을 이용하여 추출한다.

본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다. 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 마삭줄속 식물 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

본 발명에 따른 마삭줄속 식물 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함하는데, 마삭줄속 식물 추출물의 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 마삭줄속 식물 추출물을 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액에 마삭줄속 식물 추출물을 1 ~ 30 중량% 첨가하고 유산균을 10,000 ~ 10,000,000 cfu/mL의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 24 내지 72시간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 마삭줄속 식물 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유될 수 있고, 더욱 바람직하게는 상기 마삭줄속 식물 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유될 수 있다. 상기 추출물의 함량이　0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 마삭줄속 식물 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부 노화 방지용이다. 구체적으로는, 피부 노화 방지는 우수한 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성 효과, miR-378b 발현 억제효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 진피치밀도 개선효과를 통해 이루어질 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.　이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

제조예 1: 백화등 추출물 제조

세절하여 음건한 백화등 100g을 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 17.4g의 백화등 추출물을 얻었다.

제조예 2: 털마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 털마삭줄 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 18.8g의 털마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 3: 마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 마삭줄 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 17.5g의 마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 4: 민마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 민마삭줄 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 18.1g의 민마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 5: 무늬마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 무늬마삭줄 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 17.1g의 무늬마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 6: 긴마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 긴마삭줄 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 19.3g의 긴마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 7:초설마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 초설마삭줄 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 18.4g의 초설마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 8: 백화등 발효추출물 제조

제조예 8은 백화등 추출물의 발효추출물로서 제조예 1을 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 1의 백화등 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 백화등 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 15.3g의 백화등 발효추출물을 얻었다.

제조예 9: 털마삭줄 발효추출물 제조

제조예 9은 털마삭줄 추출물의 발효추출물로서 제조예 2를 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 2의 털마삭줄 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 털마삭줄 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 16.3g의 털마삭줄 발효추출물을 얻었다.

　　　

제조예 10: 마삭줄 발효추출물 제조

제조예 10은 마삭줄 추출물의 발효추출물로서 제조예 3을 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 3의 마삭줄 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 마삭줄 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 16.7g의 마삭줄 발효추출물을 얻었다.

제조예 11: 민마삭줄 발효추출물 제조

제조예 11은 민마삭줄 추출물의 발효추출물로서 제조예 4을 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 4의 민마삭줄 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 민마삭줄 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 17.6g의 민마삭줄 발효추출물을 얻었다.

제조예 12: 무늬마삭줄 발효추출물 제조

제조예 12는 무늬마삭줄 추출물의 발효추출물로서 제조예 5을 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 5의 무늬마삭줄 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 무늬마삭줄 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 15.8g의 무늬마삭줄 발효추출물을 얻었다.

제조예 13: 긴마삭줄 발효추출물 제조

제조예 13은 긴마삭줄 추출물의 발효추출물로서 제조예 6을 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 5의 긴마삭줄 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 긴마삭줄 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 14.6g의 긴마삭줄 발효추출물을 얻었다.

제조예 14: 초설마삭줄 발효추출물 제조

제조예 14은 초설마삭줄 추출물의 발효추출물로서 제조예 7를 유산균 발효하여 제조하였다. 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 제조예 9의 초설마삭줄 추출물을 1 ~ 30 중량%, 바람직하게는 10 중량% 첨가하여 제조하였다. 상기 Lactobacillus MRS 배지에 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 1,000,000 cfu/ml로 접종 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 초설마삭줄 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결하여 18.3g의 초설마삭줄 발효추출물을 얻었다.

실험예 1. MMP -1 생성 억제 효과

본 실험예 1은 제조예 1 내지 14 에서 수득한 마삭줄속 식물 추출물 또는 발효추출물의 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과를 측정한 것이다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1내지 14의 마삭줄속 식물 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 마삭줄속 식물 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 1에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.

처리 농도(중량%)	MMP-1 생성 억제율(%)
	0.50%	1%	2%
제조예1	43.72	67.67	78.12
제조예2	41.05	66.15	80.51
제조예3	42.13	67.10	81.45
제조예4	40.51	66.85	82.33
제조예5	42.57	66.15	80.64
제조예6	43.46	66.34	80.54
제조예7	40.19	65.11	79.45
제조예8	45.73	69.10	85.76
제조예9	42.47	68.54	84.10
제조예10	43.54	69.01	83.54
제조예11	45.98	70.15	84.16
제조예12	43.15	67.75	85.47
제조예13	44.91	68.54	83.15
제조예14	42.56	69.23	86.19
TGF-β 200nM	76.8

상기 표 1의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 마삭줄속 식물 추출물 및 발효 추출물은 농도 의존적으로 MMP-1 생성을 억제하는 것을 알 수 있다.

　　 실험예 2. 콜라겐 합성 증진 효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다.　 상기 제조예 1 내지 14에 의해 제조된 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.　 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다.　콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

처리 농도(중량%)	콜라겐 생합성율(%)
	0.50%	1%	2%
제조예 1	85.5	102.8	153.4
제조예 2	83.4	97.8	153.4
제조예 3	84.1	100.1	153.4
제조예4	84.2	102.6	153.4
제조예5	84.5	103.9	153.4
제조예6	85.1	100.4	153.4
제조예7	84.9	101.8	153.4
제조예8	95.8	125.1	175.5
제조예9	96.0	131.7	172.1
제조예10	97.5	128.4	170.4
제조예11	98.4	130.6	174.0
제조예12	98.5	127.8	169.5
제조예13	100.3	129.0	170.8
제조예14	98.1	129.1	172.5
TGF-β (200nM)	168.7

표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 제조예 1 내지 14에 의해 제조된 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물의 콜라겐 생합성율이 농도의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 3. miR -378b 발현 억제효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다.　 상기 제조예 1 내지 14에 의해 제조된 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 제조된 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양한 뒤 PBS로 워싱하였다. miRNA prep kit(Qiagen, 독일)으로 total miRNA를 추출한 후 UV 흡광도를 통해 miRNA의 양을 표준화하고 COL1A1의 발현을 조절하는 SIRT6의 발현을 억제하는 miRNA인 miR-378b의 발현량을 qRT-PCR을 이용하여 상대 정량하였다. 위 유전자의 발현량은 SnoRD6를 통해 보정해주었다. 그 결과를 표 3에 나타냈다.

miRNA 명	시료	miRNA 발현률(%)
		0.01%	0.05%	0.10%
miR-378b	제조예1	87.1	52.4	31.2
	제조예2	85.4	55.4	35.7
	제조예3	83.1	53.7	34.7
	제조예4	85.6	55.4	33.0
	제조예5	83.4	56.7	33.1
	제조예6	84.8	56.1	32.5
	제조예7	84.7	56.0	35.8
	제조예8	73.5	43.1	24.8
	제조예9	74.3	45.6	28.1
	제조예10	75.1	43.2	25.4
	제조예11	73.2	42.8	26.1
	제조예12	74.1	44.5	27.5
	제조예13	73.8	43.9	25.4
	제조예14	73.6	43.4	23.1
	무첨가	100	100	100

표 3에 따르면, 본 발명의 제조예 1 내지 14에 의해 제조된 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물의 miR-378b 발현률이 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

제형예 1 : 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조

백화등 추출물, 털마삭줄 추출물, 마삭줄 추출물, 민마삭줄 추출물, 무늬마삭줄 추출물, 긴마삭줄 추출물, 초석마삭줄 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물 및 이의 발효 추출물을 각각 포함하는 화장료로서 제형예 1 내지 14를 제조하였다. 효능의 비교를 위해 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 마삭줄 속 식물추출물 및 발효추출물 대신에 주름개선 소재로 아데노신을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)를 하기 표 4 및 표5에 나타내었다.

구분	성분	제형예1	제형예2	제형예3	제형예４	제형예５	제형예６	제형예７	제형예８	제형예９
A	제조예１	2	-	-	-	-	-	-	-	-
	제조예２	-	2	-	-	-	-	-	-	-
	제조예３	-	-	2	-	-	-	-	-	-
	제조예４	-	-	-	2	-	-	-	-	-
	제조예５	-	-	-	－	2	-	-	-	-
	제조예６	-	-	-	-	-	2	－	-	-
	제조예７	-	-	-	-	-	－	2	-	-
	제조예８	-	-	-	-	-	－	－	2	－
	제조예９	-	-	-	-	-	-	-	-	2
	글리세린	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	1,3-부틸렌글리콜	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	아데노신	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
	세토스테아릴알코올	2	2	2	2	2	2	2	2	2
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
B	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알란	5	5	5	5	5	5	5	5	5
	유동파라핀	3	3	3	3	3	3	3	3	3
	트리옥타노인	5	5	5	5	5	5	5	5	5
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3	3	3	3	3	3	3	3	3
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

구분	성분	제형예 10	제형예 11	제형예 12	제형예 13	제형예 14	비교제형예1	비교제형예2
A	제조예 10	2	-	-	-	-	-	-
	제조예 11	-	2	-	-	-	-	-
	제조예 12	-	-	2	-	-	-	-
	제조예 13	-	-	-	2	-	-	-
	제조예 14	-	-	-	－	2	-	-
	글리세린	-	-	-	-	-	5	-
	1,3부틸렌글리콜	-	-	-	-	-	5	-
	아데노신	-	-	-	-	-	-	3
	니아신아마이드	-	-	-	-	-	-	-
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
	세토스테아릴알코올	2	2	2	2	2	2	2
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
B	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알란	5	5	5	5	5	5	5
	유동파라핀	3	3	3	3	3	3	3
	트리옥타노인	5	5	5	5	5	5	5
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3	3	3	3	3	3	3
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

실험예 4: 피부 탄력 개선 효과 측정

본 실험예 4는 제조예 1 내지 14에서 수득한 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출을 포함하는 제형예 1 내지14와 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출 대신에 보습제를 넣은 비교제형예 1에 따른 화장료 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 알아보기 위하여, 30~40대의 탄력이 감소한 여성 150명을 대상으로 측정하였다.　 10명씩 15개 그룹으로 나눈 뒤, 1 내지 14 그룹에는 제형예 1 내지 14를, 15그룹에는 비교제형예 1을 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 12주간 도포하게 한 후, 8주 후 피부 탄력을 측정하였다. 얼굴 부위의 탄력을 cutometer SEM575 (MPA 580, Courage+Khazaka GmbH, Germany)를 이용하여 측정하였으며, 피부 탄력을 나타내는 R2(biological elasticity)를 도포 전과 도포 후를 측정한 뒤 개선도(%)로 평가하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타내었으며, 결과는 각 군에 대한 개선도의 평균치이다.

실험제품	피부 탄력 개선도(%)
제형예 1	29.1
제형예 2	28.9
제형예 3	28.5
제형예 4	28.3
제형예 5	28.4
제형예 6	28.8
제형예 7	29.5
제형예 8	31.5
제형예 9	31.4
제형예 10	32.1
제형예 11	31.8
제형예 12	31.4
제형예 13	31.2
제형예 14	31.5
비교제형예 1	6.3

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출이 함유된 제형예 1 내지14는 비교제형예에 비하여 피부 탄력이 매우 향상됨을 알 수 있었다.

실험예 5: 피부 주름 개선효과

본 발명의 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료의 피부 주름 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

160명의 여성(30세 - 50세)을 대상으로 실험군을 각각 10명씩 16개 그룹으로 나눈 뒤, 1 내지 14 그룹에는 제형예 1 내지 14을, 15 그룹에는 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 1)을, 16 그룹에는 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물을 아데노신 3 중량%로 대체한 제형(비교 제형예 2)를 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 12주간 도포하게 한 후, 8주 후 피부 탄력을 측정하였으며 그 결과를 표 7에 기재하였다.

마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물을 포함하는 화장료 조성물의 주름 개선 효과 (육안 평가 및 기기평가)

	주름 개선 효과			유효율(%)
	우수	약간	없음
제형예 1	13	4	3	85
제형예 2	11	5	4	80
제형예 3	13	3	4	80
제형예 4	11	4	5	75
제형예 5	14	2	4	80
제형예 6	11	5	4	80
제형예 7	13	3	4	80
제형예 8	16	2	2	90
제형예 9	16	3	1	95
제형예 10	15	2	3	85
제형예 11	14	4	2	90
제형예 12	14	4	2	90
제형예 13	15	3	2	90
제형예 14	14	3	3	85
비교제형예 1(보습제)	3	3	14	30
비교제형예 2(아데노신)	12	5	3	85

상기 표 7의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물을 함유한 제형예 1 내지 14의 화장료 조성물은 보습제를 함유하는 비교제형예 1에 비하여 약 3.0배 높은 주름개선 효과를 보여주었다.

또한, 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물 대신 주름 개선 효과가 있는 것으로 알려진 아데노신을 함유하는 비교 제형예 2의 화장료와 유사한 결과가 나타나, 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물이 우수한 주름 개선 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

실험예 6: 진피치밀도 개선 효과 측정

본 발명의 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료의 진피치밀도 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

160명의 여성(30세 - 50세)을 대상으로 실험군을 각각 10명씩 16개 그룹으로 나눈 뒤, 1 내지 14 그룹에는 제형예 1 내지 14을, 15그룹에는 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 1)을, 16그룹에는 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물을 아데노신 3 중량%로 대체한 제형(비교제형예 2)를 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 4주간 도포하게 한 후, 사용하여 4주 후의 진피치밀도 개선 효과를 SkinScanner DUBcutis (tpm (terbana pro medicum), Luneburg, Germany)를 이용한 기기평가를 통해 확인하였다.　진피치밀도 증가율은 하기의 수학식 3에 따라 계산하였으며 진피치밀도 개선 효과 결과는 하기의 표 8에 나타내었다.

실험제품	진피치밀도 증가율(%)
제형예 1	23.8
제형예 2	22.8
제형예 3	23.5
제형예 4	23.1
제형예 5	23.4
제형예 6	22.8
제형예 7	22.9
제형예 8	25.4
제형예 9	25.3
제형예 10	25.1
제형예 11	24.9
제형예 12	24.8
제형예 13	25.3
제형예 14	25.8
비교제형예 1	3.5
비교제형예 2	22.7

상기 표 8에 나타난 바와 같이, 마삭줄속 식물 추출물 및 발효추출물이 함유된 제형예 1 내지 14는 비교제형예에 비하여 피부 진피치밀도가 매우 개선됨을 알 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

1. 마삭줄속 식물 추출물을 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)로 발효시킨 발효 추출물을 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.
2. 마삭줄속 식물 추출물을 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)로 발효시킨 발효 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
3. 마삭줄속 식물 추출물을 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)로 발효시킨 발효 추출물을 함유하는 피부 진피치밀도 개선용 화장료 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 마삭줄속 식물 추출물은 백화등 추출물, 털마삭줄 추출물, 마삭줄 추출물, 민마삭줄 추출물, 무늬마삭줄 추출물, 긴마삭줄 추출물, 초석마삭줄 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출물인 것인, 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 마삭줄속 식물 추출물은 털마삭줄 추출물인 것인, 화장료 조성물.
6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 마삭줄속 식물 추출물은 백화등 추출물인 것인, 화장료 조성물.
7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0 중량% 함유되는 것인, 화장료 조성물.
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