KR101749330B1

KR101749330B1 - 목이버섯이 배양된 황칠나무의 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물

Info

Publication number: KR101749330B1
Application number: KR1020150188384A
Authority: KR
Inventors: 안규창
Original assignee: 안규창
Priority date: 2015-12-29
Filing date: 2015-12-29
Publication date: 2017-06-20

Abstract

본 발명은 목이버섯 종균이 배양된 황칠나무로부터 추출한 추출물을 유효성분으로 이용하여 단순 황칠나무 추출물만을 이용한 화장품 조성물보다 효능이 증진된 화장품 조성물을 제공하기 위한 것으로, 피부 미백 효과뿐만 아니라 피부 탄력 개선, 피부 주름 방지, 피부 재생 및 피부 보습 등에 있어서 효과를 증진시킨 것을 특징으로 한다.

Description

목이버섯이 배양된 황칠나무의 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물{Cosmetic composition comprising extract of dendropanax cultivated with tree ear as an active ingredient}

본 발명은 황칠나무로부터 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하여 피부 미백, 피부 주름 방지, 피부 탄력 개선, 피부 재생, 피부 보습 등에 있어서 매우 우수한 효과를 가지는 화장품 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화 (photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 프리 라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화할 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다.

좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다.

특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐 (collagen), 히아루론산 (hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸 (proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력 개선에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 프리 라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개 되어 발생하는 프리 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화에는 이러한 프리 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소 (Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력 개선이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다.

그러므로 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다.

이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다. 이러한 여러 가지 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학 물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응과 관심이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다.

이와 천연 재료를 이용한 화장품 원료 중에서 대한민국 등록특허 제10-1176529호는 황칠나무 추출물을 유효성분으로 하는 개시하고 있는데, 상기 황칠나무는 사용되는 황칠나무는 높이 15m에 달하고 어린 가지는 녹색이며 털이 없으며, 잎은 어긋나고 달걀모양 또는 타원형이다. 또한, 잎 가장자리가 밋밋하지만 어린 나무에서는 3~5개로 갈라지고 톱니가 있고, 꽃은 6월에 연한 황록색으로 피고 양성화이며 산형꽃차례에 달린다. 꽃줄기는 길이 3~5cm 이고 작은 꽃줄기는 길이 5~10mm이다. 꽃받침은 5개로 갈라지고 꽃잎과 수술은 5개씩이며 화반에 꿀샘이 있으며, 암술머리는 5개로 갈라지고 핵과는 타원형이며 10월에 흑색으로 성숙하고 암술대가 남아 있다.

그리고 나무껍질에 상처를 내면 노란 액체가 나오는데 이것을 황칠이라고 하며 황금색을 띠는 도료로 사용하였다. 한국 특산종으로 완도, 진도, 해남 등에서 전라남도의 남서해안에서 자른 것으로 보고되고 있다.

상기 대한민국 등록특허 제10-1176529호는 황칠나무의 추출물이 MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과 및 피부주름개선에 효과가 있음을 보여주고 있으나 황칠나무의 추출물만을 유효성분으로 하여서는 효과가 미비하여 상업적인 용도의 화장품을 제조하는데에는 어느 정도 한계가 있어 이에 관한 연구가 필요한 실정이다.

문헌 1: 대한민국 등록특허 제10-1176529호 문헌 2: 대한민국 등록특허 제10-1251040호 문헌 3: 대한민국 등록특허 제10-1402550호

따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 단순 황칠나무 추출물만을 이용한 화장품 조성물보다 피부 미백, 피부 탄력 개선, 피부 재생, 피부 보습 등에 있어서 효능이 증진되어 충분히 상업적으로 유용한 화장품을 제조할 수 있는 화장품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여,

본 발명은 채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무에 목이버섯 균을 배양한 후 상기 목이버섯이 배양된 황칠나무를 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물을 제공한다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 화장품 조성물에 있어서, 상기 채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무를 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 다음 목이버섯 균을 배양하는 것이 바람직하다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 화장품 조성물에 있어서, 상기 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 황칠나무는 쌀겨와 혼합하여 쌀겨 혼합물을 만들고 이 혼합물에 목이버섯 균을 배양하는 것이 바람직하다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 화장품 조성물에 있어서, 상기 채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무는 쌀겨와 혼합하여 쌀겨 혼합물을 만들고 이 혼합물에 목이버섯 균을 배양하는 것이 바람직하다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 화장품 조성물에 있어서, 상기 황칠나무는 쌀겨와 혼합하여 쌀겨 혼합물을 만들고 이 혼합물을 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 후 목이버섯 균을 배양하는 것이 바람직하다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 화장품 조성물에 있어서, 상기 추출물은 열수 추출물이며, 피부 미백, 피부 주름 방지, 피부 탄력 개선, 피부 재생 및 피부 보습에 유효하다.

본 발명은 목이버섯 균이 배양된 황칠나무의 추출물을 화장품 조성물의 유효성분으로 이용함으로써 단순 황칠나무 추출물만 이용하는 것보다 피부 미백, 탄력 개선, 재생 및 보습 등에 있어서 우수한 효과가 있다. 특히, 본 발명은 황칠나무를 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 후 목이버섯 균을 배양 처리한 것과 상기 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 후 이 혼합물에 목이버섯 균을 배양 처리한 것, 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 후 이 혼합물에 목이버섯 균을 배양 처리한 것 및 상기 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 혼합물을 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 후 목이버섯 균을 배양 처리함으로써 황칠나무의 독성제거 및 영양을 풍부하게 하여 더 효율적으로 목이버섯 균을 배양할 수 있도록 할 뿐만 아니라 피부건강에 효과적인 유효성분이 추가된 추출물을 제공함으로써 더욱 증진된 효과를 얻을 수 있다.

이하, 본 발명에 대하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 화장품 조성물은 채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무에 목이버섯 균을 배양한 후 상기 목이버섯이 배양된 황칠나무를 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서는 황칠나무 전체, 황칠나무의 일 부분 중 어느 하나 또는 일 부분들의 혼합물 중에서 특별한 제한 없이 이용가능하며, 또한 건조하거나 건조하지 않고 목이버섯의 배양이 가능하다.

또한, 목이버섯을 배양하기 위하여 채취한 황칠나무에 그대로 목이버섯 종균을 접종할 수도 있으며, 이를 분쇄하여 분쇄물에 접종을 할 수도 있으며, 또한 분쇄물을 펠릿 형태로 가공하여 접종할 수도 있다. 잎 또는 가는 가지 등을 이용하기 위해서는 펠릿 형태로 가공하여 접종하는 것이 유리할 수 있다.

그리고 목이버섯을 배양하기 위하여 특별하게 목이버섯 전용 배양액을 추가하거나 부가할 필요는 없으나 경우에 따라서는 배양액을 황칠나무에 부가하여 배양할 수도 있으며 이 또한 본원발명의 변형된 예이다.

상기 목이버섯은 목이버섯 속에 속하는 여러 식용버섯을 의미하는 것으로서, 원목에 종균을 접종하여 재배하고 있으며, 생산지에서는 생것으로 식용되나 일반적으로 건조품이 이용된다. 목이버섯은 식이섬유 및 비타민 D, 아미노산이 풍부할 뿐만 아니라 식물성 콜라겐 성분이 포함되어 있어 피부를 윤택하게 하고, 기미, 주근깨를 예방하는 등 피부미용에 효과적임이 알려져 있다.

본 발명에서 목이버섯은 배양은 본 발명이 속하는 기술 분야에 널리 알려져 있는 방법이라는 특별한 제한 없이 이용가능하며, 본 발명에서는 목이버섯의 자실체를 이용하는 것이 아니라 목이버섯의 균사체가 황칠나무의 조직과 조직 사이에 균일하게 퍼져서 황칠나무의 추출 효율을 높이기 위한 것과 목이버섯 균사체에서 추출되는 유효성분을 이용하기 위한 것이므로 목이버섯 배양은 자실체가 막 생기기 시작할 때 멈추는 것이 바람직하다.

그러나 목이버섯 자실체에서도 화장품 조성물로서 유효성분이 추출되기 때문에 목이버섯 자실체가 어느 정도 큰 상태에서 배양을 멈추고 목이버섯 자실체도 함께 추출하여도 무방하며, 이 또한 본 발명의 변형된 실시예이다.

또한, 본 발명에서의 추출은 본 발명이 속하는 기술 분야에 널리 알려진 방법으로서, 열수 추출, 에탄올 등의 유기 용매 추출 등 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 널리 알려진 추출방법이라면 특별한 제한 없이 이용가능하다.

즉, 본 발명에서는 목이버섯 종균이 배양된 황칠나무의 추출물을 유효성분으로 이용해 단순 황칠나무 추출물만을 이용한 화장품 조성물보다 피부 미백, 피부 탄력 개선, 피부 주름 방지, 피부 재생 및 보습 등에 있어서 효과를 증진시킬 수 있는 방법을 제공하는 것을 특징으로 한다.

상술한 바와 같은 본 발명에서 목이버섯의 배양을 더욱 효율적으로 하여 추출물의 효과를 배가시키기 위하여, 황칠나무를 전처리하여 목이버섯이 배양되기 좋은 조건으로 만들 수 있는데, 이 전처리 장법은 상기 채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무를 거핵 대추(씨를 제거한 대추) 및 생강 달인 물에 침지 시켜 독성을 제거한 다음 이를 상술한 바와 같은 방법으로 목이버섯을 배양하여 추출하는 것이다.

다른 실시예로서, 본 발명은 상기 채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무에 쌀겨를 혼합하여 영양이 풍부한 혼합물을 이용하여 목이버섯을 배양하여 균사체 배양을 더욱 효과적으로 할 수 있으며, 이와 더불어 쌀겨 성분이 더 포함된 추출물을 얻을 수 있어 효과를 배가시킬 수 있다. 상기 쌀겨는 일반적으로 비타민 B1, B6, E 및 무기질이 풍부하여 피부건강에 효과적이며, 특히 세라미아드계열의 성분을 함유하고 있어 피부 보습에 유용하다.

변형 실시예로서 상기한 바와 같은 거핵 대추(씨를 제거한 대추) 및 생강 달인 물에 침지 시킨 황칠나무에 쌀겨를 혼합하여 이 혼합물에 목이 버섯을 배양하는 변형 실시예와 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 다음 이 혼합물을 거핵 대추(씨를 제거한 대추) 및 생강 달인 물에 침지 시켜 목이버섯 배양에 이용하는 변형 실시예를 들 수 있으며, 이와 같은 기술적 의미가 동일하면서 서로 다른 형태로 조합되는 예는 모두 본 발명에 포함될 수 있다.

그리고 거핵 대추(씨를 제거한 대추) 및 생강 달인 물에 제조할 때 물과 혼합되는 대추 및 생강의 양, 달이는 시간 등은 반복적인 시험에 의해 결정될 수 있는 것으로서 본 발명에서는 특별한 제한은 없다.

이어서 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다. 실시예의 구체적인 예시는 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 이에 한정되는 것이 아니고, 특허청구범위와 발명의 상세한 설명의 범위 안에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하며, 이 또한 본 발명의 범위에 속하는 것은 당연하다.

< 실시예 >

1. 실시예 1

전라남도 강진에 소재하는 농장에서 재배한 황칠나무(줄기, 잎, 가지, 뿌리 및 이들의 혼합)를 분쇄하여 분쇄물을 만든 다음 이 분쇄물 10kg을 압축하여 원통 모양의 펠릿 10개를 제조한 후 펠릿 하나 당 5개의 구멍을 뚫고, 이 구멍에 시중에서 구입한 목이버섯 종균을 10cc 접종하여 배양하였다.

목이버섯 자실체가 펠릿 밖으로 나와 보일 때쯤 배양을 중지하고 목이버섯 균사체가 퍼져있는 황칠나무 펠릿을 분쇄하여 100℃의 끓는 물 50리터에 넣고 물의 양이 1/2로 줄 때까지 계속 가열하여 황칠나무 열수 추출물을 획득하였다.

2. 비교예 1

목이버섯 종균을 배양하지 않고 황칠나무를 바로 열수 추출하여 추출물을 얻었다. 열수 추출 과정 등은 상기 실시예 1과 동일하다.

3. 실시예 2

상기 실시예 1에서 황칠나무 분쇄물 10kg를 거핵 대추 5kg와 생강 5kg를 넣고 20시간 동안 달인 물 30리터에 10시간 침지 시킨 다음에 이를 압축하여 원통 모양의 펠릿을 제조한 것을 제외하고는 동일한 방법으로 황칠나무 열수 추출물을 얻었다.

4. 실시예 3

상기 실시예 1에서 황칠나무 분쇄물 10kg에 쌀겨 분쇄물 2kg을 넣고 원통형 펠릿을 제조한 것을 제외하고는 동일한 방법으로 황칠나무 열수 추출액을 얻었다.

5. 실시예 4

상기 실시예 2에서 거핵 대추와 생강 달인 물에 침지 시킨 다음에 펠릿을 제조하기 전에 쌀겨 분쇄물 2kg을 첨가하여 펠릿을 제조한 것을 제외하고는 동일한 방법으로 황칠나무 열수 추출액을 제조하였다.

6. 실시예 5

상기 실시예 2에서 황칠나무 분쇄물 10kg와 쌀겨 분쇄물 2kg을 균일하게 혼합한 후에 거핵 대추와 생강 달인 물에 침지 시킨 것을 제외하고는 동일한 방법으로 황칠나무 열수 추출액을 제조하였다.

< 시험예 >

시험예 1. 세포독성평가

melanoma cell line인 B16F10 cell을 한국 세포주 은행 (Korean Cell Line Bank)으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic (Gibco, USA)과 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Grand Island, USA)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였으며, 4일에 한 번씩 계대 배양을 실시하였다.

시료가 세포의 성장에 미치는 영향을 측정하기 위하여 MTT 분석을 수행하였다. 대사가 왕성한 살아있는 세포는, 세포 내 mitochondria의 탈수소 효소작용에 의하여 수용성의 노란색인 3-(4,5-dimethylthiaxo-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide 를 환원시켜 자주색을 띠는 비수용성 formazan을 형성한다.

B16F10 cell를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 2.0 × 10⁴cells/mL로 96 well plate에 넣고 18시간 배양 후 실시예 및 비교예의 추출물로 처리하고 24시간 배양하였다.

이후 MTT 용액 50㎕를 첨가하여 4시간 동안 반응시켰다. 배양 배지를 완전히 제거하고 dimethylsulfoxide를 200㎕를 가하여 침전물을 완전히 용해한 후, microplate reader를 사용하여 540nm 흡광도를 측정하였다. 각 시료 군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포생장률을 평가하여 그 결과를 표 1에 나타냈다.

시료	Cell viability (%)
-	100
실시예 1 추출물	99.9 ± 0.07
실시예 2 추출물	99.4 ± 0.08
실시예 3 추출물	99.5 ± 0.05
실시예 4 추출물	99.1 ± 0.03
실시예 5 추출물	99.0 ± 0.02
비교예 1 추출물	99.9 ± 0.05

상기 표 1에서 보는 바와 같이 실시예 및 비교예의 모든 추출물은 세포 생존율이 우수하여 세포독성을 보이지 않는 것을 확인할 수 있었다.

2. B16F10 cell에서의 Tyrosinase 저해 활성 측정

B16F10 cell를 배양하여 24 well plate에 각 well 당 세포를 2.0 × 10⁴ cell/well가 되도록 분주하고 실시예 및 비교예의 추출물로 처리하여 48시간 배양한다. 이후 각 well을 PBS로 2회 세척한 다음 1% triton-x100 용액을 넣어 용해하고 e-tube에 옮겨 넣고, 얼음에 옮겨 3회 정도 냉동, 해동을 반복하여 4℃, 15,000 rpm/15분 원심 분리한 상등액을 tyrosinase 활성 측정용액으로 사용하였다.

96 well plate에 이 효소 액을 40㎕ 넣고 기질인 L-DOPA 100㎕, PBS 60㎕를 첨가하여 37℃에서 1시간 반응한 뒤 475nm에서 흡광도를 측정하였다. tyrosinase의 활성도는 대조군의 흡광도에 대한 백분율로 계산하여 그 결과를 표 2로 나타냈다.

시료	Tyrosinase activity (%)
α-MSH(-)	-
α-MSH(+, 100 nM)	100
α-MSH(+) + Arbutin (100 μM)	82.3 ± 0.04
α-MSH(+) + 실시예 1 추출물	77.7 ± 0.07
α-MSH(+) + 실시예 2 추출물	72.4 ± 0.04
α-MSH(+) + 실시예 3 추출물	65.5 ± 0.02
α-MSH(+) + 실시예 4 추출물	62.1 ± 0.01
α-MSH(+) + 실시예 5 추출물	49.4 ± 0.06
α-MSH(+) + 비교예 1 추출물	82.5 ± 0.05

상기 표 2에서 알 수 있듯이, tyrosinase 저해 활성을 측정한 결과 실시예 및 비교예의 추출물은 알부틴(Arbutin)보다 우수한 효과를 보였으며, 또한 비교예 1이 추출물보다 실시예 1 내지 5의 추출물에서 효과가 우수하여 본 발명에 따른 추출물을 사용하는 경우 피부 내 멜라닌 중합체 생합성을 효과적으로 저해할 수 있으며, 특히 실시예 5에서 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다.

3. melanin 생 합성량 측정

DMEM 배지로 배양된 B16F10 세포를 24 well plate에 2.0 X 10⁴ cell/well가 되게 분주하고 24시간 배양한다. 이후 α-MSH (200 nM)와 실시예와 비교예의 추출물들을 첨가한 후 48시간 후에 인산완충액(pH 7.4)으로 세척하였다. 그 다음 melanin에 1N NaOH를 가하여 80℃에서 1시간 반응시킨 후 분광광도계 405nm에서 흡광도를 측정하였다. melanin 생합성 저해는 시료 용액의 첨가구와 무 첨가구의 흡광도에 대한 백분율로 하여,

시료	Melanin contents (%)
α-MSH(-)	-
α-MSH(+, 100 nM)	100
α-MSH(+) + Arbutin (100 μM)	59.1 ± 0.04
α-MSH(+) + 실시예 1 추출물	52.4 ± 0.07
α-MSH(+) + 실시예 2 추출물	45.2 ± 0.04
α-MSH(+) + 실시예 3 추출물	43.5 ± 0.02
α-MSH(+) + 실시예 4 추출물	44.1 ± 0.01
α-MSH(+) + 실시예 5 추출물	35.4 ± 0.06
α-MSH(+) + 비교예 1 추출물	60.3 ± 0.05

상기 표 3에서 알 수 있듯이, 멜라닌 함량을 측정한 결과 멜라닌 합성 억제에 있어서 실시예 및 비교예의 추출물은 알부틴(Arbutin)과 유사하거나 우수한 효과를 보였으며, 또한 비교예 1의 추출물보다 실시예 1 내지 5의 추출물에서 효과가 우수하여 본 발명에 따른 추출물을 사용하는 경우 멜라닌 생합성을 효과적으로 저해할 수 있으며, 특히 실시예 5에서 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다.

4. 엘라스타제 저해효과

엘라스타제는 돼지 췌장으로부터 추출된 것으로 시그마(Sigma)사의 것을 사용하였다. 췌장 엘라스타제에 의한 합성 펩티드 기질(Sigma)의 가수분해에 근거한 시험법으로 광파장 410nm에서의 단위 시간당의 4-니트로아닐린(4-nitroanilide)의 방출량의 증가를 엘라스타제의 촉매 활성치로 하였다. 각 추출물 40㎕씩 취하고 여기에 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 proporcine pancreas elastase (2.5 U/㎖)용액 40㎕를 가한 후 기질로 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide (0.5 ㎎/㎖)을 80㎕ 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시켰다.

기질로부터 생성되는 4-니트로아닐린의 생성량은 410nm에서 흡광도를 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 엘라스타제 저해 정도를 계산하였다.

[수학식 1]

엘라스타제 저해율(%)= 1-(시료 첨가군의 흡광도/시료 무첨가군의 흡광도) x 100

추출물	엘라스타제 저해율(%)
실시예 1 추출물	43.9
실시예 2 추출물	55.8
실시예 3 추출물	59.8
실시예 4 추출물	64.8
실시예 5 추출물	67.7
비교예 1 추출물	31.2

상기 표 4로부터 알 수 있는 바와 같이, 목이버섯 균사체 배양 등의 아무런 처리가 없는 비교예 1의 추출물에 비하여 본 발명에 따른 실시예 1 내지 5의 추출물에서 엘라스타제 활성을 저해시키는 효과가 향상되는 것을 알 수 있었으며, 특히 황칠나무와 쌀겨를 모두 거핵대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 실시예 5의 추출물에서 가장 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다.

5. 피부 보습 및 탄력 개선 효과

상기 실시예와 비교예의 추출물을 함유하는 크림 화장품을 사용하여 피부 보습 및 탄력 개선 효과에 대한 임상시험을 실시하였다. 임상시험에 사용된 크림은 하기의 표 5와 같은 조성으로 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
배합성분	제형 1	제형 2	제형 3	제형 4	제형 5	비교 제형
실시예 1 추출물	1.00	-	-	-	-	-
실시예 2 추출물	-	1.00	-	-	-	-
실시예 3 추출물	-	-	1.00	-	-	-
실시예 4 추출물	-	-	-	1.00	-	-
실시예 5 추출물	-	-	-	-	1.00	-
비교예 1 추출물	-	-	-	-	-	1.00
스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0
밀납	4.0	4.0	4.0	4.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5	1.5	1.5	1.5
유동파라핀	0.5	0.5	0.5	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0	5.0	5.0	5.0
글리세린	3.0	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1	0.1	0.1	0.1
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2	0.2
방부제, 향, 색소	적량	적량	적량	적량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량

피부탄력 개선성에 대한 영향을 실험하기 위해 피검자 20명의 왼쪽 눈 가장자리에 하루 두 번 적용하였다. 처리하지 않은 오른쪽 눈 가장자리는 대조군으로 사용하였다. 추출물 함유 화장품으로 처리하기 전과 처리하고 난 14일 후 피부 표면의 피부 탄력 개선성을 피부수분측정기 CM 820과 피부탄력 개선측정기 SEM 474에 의해 측정하였다. 피부수분측정기 CM 820에 의한 피부 보습 측정은 대조군에 비해 증가한 보습력 값을 %로 나타내었으며, 피검자 20명의 평균값을 결과에 나타내었다. 피부탄력 개선측정기 SEM 474에 의한 피부 탄력 개선도 측정은 주름의 깊이를 측정하는 것으로서, 값이 적을수록 탄력 개선성이 좋은 것이다. 탄력 개선도 값은 대조군에 비해 감소한 값을 %로 나타내었으며, 피검자 20명의 평균값을 결과에 나타내었다.

제형예	피부보습효과(%)	피부탄력 개선도효과(%)
제형 1	34	42
제형 2	39	48
제형 3	48	54
제형 4	55	58
제형 5	61	63
비교 제형	12	18

상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 목이버섯 균사체 배양 등의 아무런 처리가 없는 비교예 1의 추출물에 비하여 본 발명에 따른 실시예 1 내지 5의 추출물에서 피부 보습 효과, 피부 탄력 개선도 효과가 향상되는 것을 알 수 있었으며, 특히 황칠나무와 쌀겨를 모두 거핵대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 실시예 5의 추출물에서 가장 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다.

6. 상처 치유 효과

연고제 베이스에 실시예와 비교예 추출물을 각각 전체 중량 대비 5중량%을 함유시켜 연고 1(실시예 1 추출물), 연고 2(실시예 2 추출물), 연고 3(실시예 3 추출물, 연고 4(실시예 4 추출물), 연고 5(실시예 5 추출물) 및 비교 연고 1(비교예 1 추출물)을 제조하였다.

상처 치유 효과를 측정하기 위하여 생쥐를 이용한 동물실험을 수행하였다.

생쥐 배의 피부를 포비돈 및 알코올 소독액으로 처리한 후, 15번 수술용 칼로 피부에 상처를 만든 후 이어서 각각 연고들을 상처에 도포한 후에 거즈를 이용하여 도포 부위를 덮어 보호하였다. 이와 같은 도포는 1일 2회 실시하였다.

각각의 연고가 도포된 6마리의 생쥐에 대하여 새롭게 도포할 때마다 육안 관찰을 시행하였다. 육안 관찰에서 비교 연고 1에서는 상처가 벌어지고 치유가 지연되고 감염이 관찰되었으나, 본 발명에 따른 연고 1, 2, 3, 4 및 5의 경우에는 상처가 벌어지지 않고 점차적인 치유 양상을 관찰할 수 있었다.

Claims

채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무를 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 다음 목이버섯 균을 배양한 후 상기 목이버섯이 배양된 황칠나무를 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 후 이 혼합물에 목이버섯 균을 배양하는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
제 1항 또는 2항에 있어서,
상기 추출물은 열수 추출물이며, 피부 미백, 피부 주름 방지, 피부 탄력 개선, 피부 재생 및 피부 보습에 유효한 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
채취한 뿌리, 잎, 줄기 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 후 이 혼합물에 목이버섯 균을 배양후 상기 목이버섯이 배양된 상기 황칠나무 및 쌀겨 혼합물을 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
제 4항에 있어서,
상기 황칠나무에 쌀겨를 혼합한 혼합물을 거핵 대추 및 생강 달인 물에 침지 시킨 후 목이버섯 균을 배양하는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
제 4항 또는 5항에 있어서, 상기 추출물은 열수 추출물이며, 피부 미백, 피부 주름 방지, 피부 탄력 개선, 피부 재생 및 피부 보습에 유효한 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.