KR20140115229A - 생약재의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 세포 독성이 없으면서도 활성 산소 억제 및 멜라닌 생합성 억제 효과가 뛰어나 항산화 또는 미백용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

생약재의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 조성물 {Composition comprising oriental herbal extracts having antioxidant or whitening effect}
본 발명은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 각질층을 포함하는 표피와 진피, 그리고 결합조직으로 구성되어 있는데, 그 중 각질층은 표피 (epidermis)의 기저세포인 케라티노사이트(keratinocyte)의 분화과정을 통해 형성되는 죽은 세포층으로 구성되어 있고 인체를 외부환경의 영향으로부터 보호해주는 역할을 담당하고 있다. 이러한 피부에서의 노화의 원인에 대해서는 크게 두 가지로 연구되고 있는데, 하나는 "내적 노화"로서 연령의 증가에 따른 피부의 구성단위인 세포의 기능변화에 기인한 것이고, 다른 하나는 "외적 노화"로서 외부 환경 즉 자외선, 공해, 스트레스 등에 의한 것으로 나눌 수 있다.
피부의 세포는 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 인간의 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 끊임없이 일어나는 생화학 반응에서 발생하는 활성산소종에 의해 산화적 스트레스가 가해지게 되면, 세포 구성 성분들인 지질, 단백질, 탄수화물과 DNA 산화적 손상 및 효소활성을 변화시켜 피부암 등의 각종 질병을 일으키는 원인이 되며, 노화를 촉진시킨다. 아울러 외적 노화의 원인 중에서 가장 큰 부분을 차지하고 있는 것은 자외선에 의한 광노화로서 UV에 지속적인 노출을 통해 피부암 등의 급성 및 만성적인 피부의 상해가 유발된다.
피부 진피층 기질을 이루는 중요한 성분의 하나인 콜라겐의 생합성과 분해는 피부 노화 억제에 핵심이 되고 있는데, 상기 활성산소종은 피부 섬유아세포에서 MMPs(matrix metalloproteinases)의 발현을 촉진하며 또한, 자외선에 의한 콜라게나제의 합성을 촉진시킨다. 따라서, 활성 산소종과 자외선에 의한 피부 손상이나 노화를 감소 또는 방어하고 항산화 기능을 가진 조성물의 개발이 필요하다.
사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되는데, 유전적인 요인 외에도, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 피부 표피층에 있는 멜라노사이트에서 합성되는데, 멜라노사이트 내 소기관인 멜라노좀(melanosome)에서 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같은 멜라닌의 합성이 피부 내에서 과도하게 일어나면, 피부 톤을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 등을 발생시킨다. 따라서, 피부 내의 티로시나제 활성을 저해하여 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선시킬 수 있다.
이에 항산화 및 미백 효과를 가지는 기능성 화장품에 대한 연구 및 개발이 활발하게 진행되고 있으며, 특히 피부에 독성이나 자극을 주지 않기 위하여 한약재와 같은 천연 물질을 이용한 연구가 계속되고 있다.
한편, 백자인(Thujae orientalis)은 측백나무(Thuja orientalis L.)의 종자로 난원형, 긴 타원형이거나 또는 긴 원주형이고, 길이 3~5㎜, 지름 2~3㎜이다. 바깥 면은 엷은 황색~황백색이고, 오래된 것은 점차 색이 변하여 황갈색이 되며 기름이 스며 나온다. 종자의 바깥 면은 흔히 얇은 막질의 내종피로 싸여있고, 끝은 대개 뾰족하며, 원삼능형으로 진한 갈색의 점이 있다. 아래쪽은 둔한 원형으로 색이 엷다. 이 생약재의 횡단면을 현미경으로 살펴보면 백색~황백색이고 배유가 많으며 풍부한 지방질이 함유되어 있다(대한약전외 한약 규격집). 또한, 측백나무(Thuja orientalis L.) 개량종은 높이 25cm, 직경 1m 정도로 자라며 수피는 적갈색 또는 회갈색으로 세로방향으로 가늘고 길게 갈라지며 벗겨진다. 어린 가지는 녹색으로 납작하다. 잎은 비늘 모양으로 V자나 X자 모양으로 겹겹이 배열하며 폭이 2~2.5mm 로 뒷면에 작은 줄이 있다. 앞, 뒷면의 구별이 어렵다. 암수 한 그루로 전년지의 끝에 달리는 1개씩 달리는 수꽃은 길이 2~2.5mm 정도이고 갈색이다. 10개의 비늘조각으로 이루어져있다. 암꽃은 8개의 비늘조각으로 되어 있으며 뒤로 젖혀진다. 연한 자갈색이며 구형이다. 열매는 구과로 난형이며 울퉁불퉁하고 뿔이 달린 듯한 모양이다. 9~11월에 흰 가루가 덮인 듯한 초록색에서 갈색으로 익으며 6~8개의 열매 조각이 있다. 종자는 한 조각에 2~3개 정도 들어있는데 난형으로 흑갈색이다. 화백이나 편백과는 다르게 잎 앞, 뒷면의 구별이 어렵다. 백자인은 심신을 안정시키고 장을 윤활하게 하는 작용이 있어, 경계, 정충, 허한, 변비에 이용된다.
가시오갈피(Aacanthopanax senticosus)는 산형화목 두릅나무과의 낙엽 관목으로, 높이 2∼3m이다. 전체에 가늘고 긴 가시가 빽빽하게 나고 회갈색이다. 특히 잎자루 밑부분에 많은 가시가 있다. 잎은 손바닥 모양으로 생긴 겹잎이 어긋나게 달리고, 작은 잎은 3∼5개로서 거꾸로 선 달걀 모양 또는 긴 타원형이다. 표면은 군데군데 털이 있고 뒷면은 어릴 때는 맥 위에 갈색털이 있으며 가장자리에 뾰족한 치아 모양의 톱니가 있다. 잎자루는 길이 3∼8㎝로서 가시가 많다. 꽃은 7월에 연한 자주색이 도는 황색으로 피며, 산형꽃차례는 가지 끝에 1개씩 달리거나 또는 밑부분에서 갈라진다. 꽃자루가 갈라지는 곳에 꿀샘이 있다. 암술대는 길이 1∼1.8㎝로서 완전히 합쳐지며, 암술머리는 아주 얕게 5갈래로 갈라진다. 열매는 둥글고 지름 8∼10㎜로서 9월에 검은색으로 익는다. 가시오갈피는 신경통, 관절염, 고혈압, 신경쇠약, 당뇨 및 강장제로 이용된다.
시호는 산형화목 미나리과의 여러해살이풀로 북시호, 묏미나리라고도 한다. 풀밭에서 자라며 높이 40∼70cm이다. 포기 전체에 털이 없으며 가늘고 긴 줄기 위에서 가지가 갈라진다. 뿌리줄기는 굵고 짧다. 잎은 어긋나고 줄 모양이거나 바소꼴이며 가장자리가 밋밋하고 맥은 평행하다. 뿌리에 달린 잎은 밑부분이 좁아져서 잎자루처럼 되고 길이 10∼30cm이다. 줄기에 달린 잎은 4∼10cm, 나비 5∼15mm이고 끝이 뾰족하다. 시호는 해열, 진통, 강장제, 호흡기, 소화기, 순환기 질환에 이용된다.
그러나 아직까지 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물의 항산화 및 미백 효과에 관해서는 보고된 바가 없다.
이에 본 발명자들은 항산화 및 미백 효과는 높고, 부작용이 적은 새로운 약물을 개발하기 위해 연구를 수행한 결과, 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물이 세포 독성이 없으면서도 활성 산소 억제 및 멜라닌 생합성 억제 효과가 뛰어남을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 세포 독성이 없으면서도 활성 산소 억제 및 멜라닌 생합성 억제 효과가 뛰어나 항산화 또는 미백용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 화장료 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.
본 발명에 따른 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다. 백자인, 가시오갈피 및 시호를 각각 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 백자인, 가시오갈피 및 시호는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 이때, 백자인은 측백나무(Thuja orientalis L.)의 개량종의 열매인 것이 바람직하며, 가시오갈피는 잎 및 줄기 부위를 이용하는 것이 바람직하다. 분쇄된 백자인 분말, 가시오갈피 분말 및 시호 분말을 혼합한 후, 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 한다. 상기 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매를 이용할 수 있으며, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올, 보다 바람직하게는 메탄올이다. 추출 시 실온에서 함침하거나 가온할 수 있다. 상기 추출액을 여과하고, 농축하여 최종 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 수득한다.
본 발명의 조성물에서, 상기 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합비는 100 : 15~25 : 7~17 중량비인 것이 바람직하다. 상기 혼합 비율의 범위를 벗어나는 경우에는 백자인, 가시오갈피 및 시호 추출물을 단독으로 사용한 경우와 비교할 때 항산화 및 미백 효과 면에서 큰 차이가 없으며, 부작용의 우려가 있다.
본 발명에 따른 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 세포 독성이 없으면서도 활성 산소 억제 및 멜라닌 생합성 억제 효과가 뛰어나 항산화 또는 미백용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물과 함께 항산화 및 미백 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~30.0 중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있으며, 바람직하게는 0.005∼10.0 중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다. 그 함량이 0.001 중량% 미만일 경우에는 실질적인 항산화 또는 미백 효과를 기대하기 어려우며, 30 중량%를 초과할 경우에는 화장학적 효과 대비 제조 비용이 너무 상승하는 문제점이 발생할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화장료 조성물은 피부외용 연고, 로션, 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 영양세럼, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼, 오일젤 등의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명에서, 건강기능식품이란 질병의 예방 또는 개선, 생체방어, 면역, 병후의 회복, 노화 억제 등 생체조절기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다. 본 발명의 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 항산화 및 미백을 목적으로 건강기능식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 원료에 대하여 15 중량 % 이하, 바람직하게는 10 중량 % 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 실험예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 에탄올 추출물의 제조
백자인 100 g, 가시오갈피 15~25 g, 시호 7~17 g을 각각 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄하였다. 백자인은 개량종을 이용하였으며, 가시오갈피는 잎 및 줄기 부분을 이용하였다. 분쇄한 백자인, 가시오갈피 및 시호를 혼합한 후, 혼합 분말 10 g을 70% (v/v) 에탄올 (Merck사, 독일) 100 ㎖에 넣은 다음, 상온에서 48 시간 동안 교반하였다. 이때, 3 회 60 분씩 초음파 발생기(Branson사, 미국)를 이용하여 초음파 처리하였으며, 초음파 처리시 40℃ 이하를 유지하였다. 상기 혼합물을 5000 rpm에서 10 분간 원심분리한 후 상등액을 0.45 ㎛ 멤브레인 필터(Millex-HP, Millipore사, 미국)로 여과하였다. 상기 여과액을 동결건조기(일신사, 한국)로 동결건조하여 최종 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 에탄올 추출물 (320 mg)을 수득하였다.
실시예 2. 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 메탄올 추출물의 제조
용매로 70% 에탄올 대신 100% 메탄올 (Merck사, 독일)을 이용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 최종 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 메탄올 추출물을 수득하였다.
실험예 1. 세포 독성 측정
상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물의 세포 독성을 확인하기 위하여, MTT(thiazolyl blue tetrazolium bromide) 어세이를 수행하였다. 인간 섬유아세포인 Hs27 (American Type Culture Collection, 미국)을 10% FBS(fetal bovine serum, Gibco BRL사, 미국)가 포함된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco BRL사, 미국) 배지에서 배양하였다. 세포는 37℃, 5% CO2를 사용한 CO2 배양기(Sanyo사, 일본)에서 배양하였으며, 상기 세포를 96 웰 마이크로플레이트에 5×103세포/웰의 농도로 분주하였다. 이를 24시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 (0~400 ㎍/㎖)이 포함된 배지로 교체하였다. 이를 24시간 배양한 후, 각 웰에 5 ㎎/㎖ MTT 용액을 20 ㎕씩 넣은 후 3시간 더 배양하였다. 이 후, 배지를 제거하고, 각 웰에 DMSO (dimethyl sulfoxide)를 100 ㎕씩 넣고 마이크로플레이트 리더(microplate reader, infinite F200, Tecan사, 스위스)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 1에 의해 세포 생존율(%)을 계산하였다.
그 결과를 표 1에 나타내었다.
[수학식 1]
세포생존율(%) = A/B × 100
(A : 시료를 처리한 세포 반응물의 흡광도, B : 시료를 처리하지 않은 세포 반응물의 흡광도.)
시료
(㎍/㎖)
0 5 10 25 50 100 200 400
실시예 1 100.0±6.1 105.1±1.1 110.2±0.9 109.3±1.0 108.1±2.9 112.4±5.0 109.5±1.3 71.9±1.0
실시예 2 100.0±6.1 101.4±2.1 103.2±4.6 101.9±4.0 100.9±7.9 99.3±4.5 97.0±2.5 53.9±7.2
상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 모두 인간 섬유아세포에 대한 독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
실험예 2. 항산화 효능 측정
2-1. 자유라디칼 소거 효과 (DPPH법)
상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물의 자유라디칼 소거 효과를 측정하기 위하여, 공지된 방법(Mensor LL, Menezes FS, Leita GG, Reis AS, dos Santos TC, Coube CS, Leitao SG, Screening of Brazilian plant extracts for antioxidant activity by the use of DPPH free radical method. Phytother. Res., 15(2), pp.127-130, 2001)을 약간 변형하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저, 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 (0~400 ㎍/㎖)의 농도별 시료 용액과 0.3 mM DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, Aldrich사, 미국) 용액을 메탄올을 이용해 제조하였다. 상기 시료 용액 750 ㎕와 0.3 mM DPPH 용액 300 ㎕을 혼합한 후 실온에서 30 분간 차광하여 방치하고, 분광광도계 (UV-1800, Shimadzu사, 일본)를 이용해 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 2에 의해 자유라디칼 소거능(%)을 계산하였다. 대조군으로 L-아스코르빈산(L-ascorbic acid, Sigma사, 미국)과 베타-카로틴(ß-carotene, Sigma사, 미국)을 사용하였다.
그 결과를 표 2에 나타내었다.
[수학식 2]
자유라디칼 소거능(%) = [1-(A/B)] × 100
(A : 각 시료의 흡광도, B : 대조군(시료 무첨가)의 흡광도.)
시료
(㎍/㎖)
10 25 50 100 200 400
실시예 1 2.4±1.2 10.1±2.3 20.2±2.9 46.0±2.8 82.1±2.1 94.1±0.6
실시예 2 6.6±0.7 11.2±2.8 25.3±4.2 48.0±5.2 81.1±2.9 94.5±0.6
L-아스코르빈산 95.4±0.9 95.6±1.1 95.7±0.9 95.4±1.0 95.8±0.6 96.0±0.4
베타-카로틴 10.3±4.6 21.7±4.8 30.5±4.6 46.4±10.0 59.9±10.4 86.5±8.9
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물은 베타-카로틴과 비슷한 수준의 우수한 자유라디칼 소거능을 가지고 있음을 확인하였다.
2-2. 활성산소 소거 효과 (NBT법)
상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물의 활성산소 소거 효과를 측정하기 위하여, 공지된 방법(Aruoma OI, Murcia A, Butler J, Halliwell B, Evaluation of the antioxidant and prooxidant actions of gallic acid and its derivatives. J. Agri. Food Chem., 41(11), pp.1880-1885, 1993)에 따라 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저, 0.1 M 인산완충액(pH 7.8) 690㎕, 10 mM 잔틴 (xanthine, Sigma사, 미국) 용액 100 ㎕ 및 5mM NBT(nitroblue tetrazolium, Sigma사, 미국)용액 100㎕에 측정 농도의 100배로 조제된 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 10 ㎕를 혼합하였다. 여기에 0.3 units/㎖ 잔틴 산화효소 (xanthine oxidase, Sigma사, 미국) 용액을 100 ㎕씩 넣고, 상온에서 10분간 방치한 후, 분광광도계 (UV-1800, Shimadzu사, 일본)를 이용해 560 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 잔틴 산화효소 대신 인산완충액을 처리하여 각각에 대한 색 보정값을 얻었다. 하기 수학식 3에 의해 활성산소 소거능(%)을 계산하였다. 대조군으로 L-아스코르빈산(L-ascorbic acid, Sigma사, 미국)과 베타-카로틴(ß-carotene, Sigma사, 미국)을 사용하였다.
그 결과를 표 3에 나타내었다.
[수학식 3]
활성산소 소거능(%) = [1-(A/B)] × 100
(A : 각 시료의 흡광도, B : 대조군(시료 무첨가)의 흡광도.)
시료
(㎍/㎖)
10 25 50 100 200 400
실시예 1 7.5±2.1 14.5±1.6 14.7±1.4 21.7±0.3 29.5±2.4 35.6±3.4
실시예 2 17.4±0.8 19.3±1.6 28.5±2.5 47.0±2.4 58.5±3.5 86.7±4.9
L-아스코르빈산 6.5±1.8 14.1±1.2 22.0±1.3 58.1±0.3 90.4±2.1 97.0±0.6
베타-카로틴 3.8±1.5 7.1±0.4 13.7±2.6 16.4±4.0 29.2±5.1 43.0±5.5
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물이 우수한 활성 산소 소거능을 가지고 있음을 확인하였으며, 특히, 실시예 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 메탄올 추출물이 더욱 우수한 활성 산소 소거능을 가지고 있었다.
상기 실험 결과를 통하여, 본 발명의 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물이 매우 우수한 자유라디칼 및 활성산소 소거 효능을 가지고 있어, 항산화 조성물로 이용될 수 있음을 확인하였다.
실험예 3. 미백 효능 측정
상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물의 미백 효능을 측정하기 위하여, 공지된 방법(Choi YM, Jun H, Dawson K, Rodriguez RL, Roh MR, Jun J, Choi CH, Shim JH, Lee C, et al., Effects of the isoflavone puerarin and its glycosides on melanogenesis in B16 melanocytes. Eur. Food Res. Technol., 231(1), pp.75-83, 2010)에 따라 마우스 멜라닌 형성세포(melanocyte)를 이용하여 멜라닌 생합성 억제 효과를 확인하였다. 마우스 멜라닌형성세포인 B16-F10 (American Type Culture Collection, 미국)을 10% FBS가 포함된 DMEM 배지에서 배양하였다. 세포는 37℃, 5% CO2 를 사용한 CO2 배양기(Sanyo사, 일본)에서 배양하였으며, 상기 세포를 6 웰 마이크로플레이트에 2×105세포/웰의 농도로 분주하였다. 이를 24 시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 (0~100 ㎍/㎖)이 포함된 배지로 교체하였다. 이때 배지에 10 nM 멜라닌세포 자극호르몬(melanocyte-stimulating hormone, Sigma사, 미국)을 함께 처리하였다. 이를 48시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고 세포를 PBS로 2번 세척하였다. 이 후 각 웰에 용해 완충액(20mM Tris, 0.1% Triton X-100, pH7.6)을 0.5 ㎖씩 넣고, 4℃에서 1시간 동안 방치한 후, 이를 12,000×g, 4℃에서 5분간 원심분리하였다. 생성된 펠렛에 1N NaOH 용액을 200㎕씩 넣고 60℃에서 1시간동안 방치하여 펠렛을 녹였다. 이를 마이크로플레이트 리더(microplate reader, infinite F200, Tecan사, 스위스)를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 생성된 멜라닌의 양은 합성 멜라닌(Sigma사, 미국)을 이용한 표준곡선으로부터 계산하였으며, 세포액에 포함된 총 단백질의 양으로 보정하였다. 총 단백질의 정량은 Bradford 시약(Protein assay dye reagent, Bio-Rad사, 미국)을 사용하여 수행하였다. 대조군으로 코직산(kojic acid, Sigma사, 미국) 을 사용하였다.
그 결과를 표 4에 나타내었다.
시료
(㎍/㎖)
0 5 10 25 50 100
실시예 1 0.071±0.009 0.077±0.009 0.070±0.008 0.076±0.008 0.070±0.009 0.060±0.007*
실시예 2 0.071±0.009 0.073±0.008 0.061±0.008 0.052±0.009* 0.043±0.008** 0.038±0.005**
코직산 0.071±0.009 0.072±0.008 0.066±0.007 0.064±0.007 0.061±0.007* 0.051±0.005**
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1 및 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물이 멜라닌 생합성 억제 효과를 가지고 있음을 확인하였으며, 특히 상기 실시예 2에서 수득한 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 메탄올 추출물은 코직산 보다 더욱 강한 멜라닌 생합성 억제 효과를 나타내었다.
상기 실험 결과를 통하여, 본 발명의 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물이 매우 우수한 멜라닌 생합성 억제 효능을 가지고 있어, 미백용 조성물로 이용될 수 있음을 확인하였다.
이하 본 발명에 따른 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 화장료 조성물의 제조
1-1. 화장수의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 0.1 중량%, 글리세린 5.0 중량%, 디프로필렌글리콜 3.0 중량%, 히알루론산 0.5 중량%, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.1 중량%, 폴리에틸렌 올레일에테르 0.1 중량%, 에탄올 5.0 중량%, 방부제 0.15 중량%, 적량의 향료와 색소 및 잔량의 정제수를 혼합하여 화장수를 제조하였다.
1-2. 에센스의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 7.0 중량%, 세토스테아릴알코올 1.0 중량%, 자기유화형 모노스테아린산 1.0 중량%, 밀납 0.5 중량%, 스쿠알란 5.0 중량%, 이소세틸옥타노에이트 3.0 중량%, 디메틸실록산 0.3 중량%, 모노스테아린산소르비탄 0.5 중량%, 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 8.0 중량%, 글리세린 4.0 중량%, 프로필렌글리콜 0.2 중량%, 카르복시폴리머 0.22 중량%, 트리에탄올아민 0.25 중량%, 적량의 방부제, 향료 및 색소와 잔량의 정제수를 혼합하여 에센스를 제조하였다.
1-3. 로션의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 5.0 중량%, 세토스테아릴알코올 0.8 중량%, 자기유화형 모노스테아린산 1.0 중량%, 밀납 0.5 중량%, 스테아린산 0.5 중량%, 유동파라핀 7.0 중량%, 스쿠알란 5.0 중량%, 마카데미아오일 3.0 중량%, 이소세틸옥타노에이트 2.0 중량%, 디메틸실록산 0.3 중량%, 모노스테아린산소르비탄 0.5 중량%, 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 1.2 중량%, 글리세린 4.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 베타인 4.0 중량%, 카르복시폴리모 0.12 중량%, 트리에탄올아민 0.15 중량%, 방부제 0.25 중량%, 적량의 향료와 색소 및 잔량의 정제수를 혼합하여 로션을 제조하였다.
1-4. 크림의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 7.0 중량%, 세토스테아릴알코올 3.0 중량%, 자기유화형 모노스테아린산 0.5 중량%, 친유형 모노스테아린산 1.5 중량%, 밀납 0.5중량%, 유동파라핀 8.0 중량%, 스쿠알란 7.0 중량%, 이소세틸옥타노에이트 4.0 중량%, 정제 호호바유 4.0 중량%, 디메틸실록산 0.3 중량%, 모노스테아린산소르비탄 1.0 중량%, 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 1.2 중량%, 글리세린 6.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 베타인 4.0 중량%, 잔탄검 0.06 중량%, 트리에탄올아민 0.10중량%, 방부제 0.25 중량%, 적량의 향료와 색소 및 잔량의 정제수를 혼합하여 크림을 제조하였다.
1-5. 젤의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 1.0 중량%, 글리세린 4.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 에탄올 10 중량%, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.1 중량%, 카르복시폴리머 0.30 중량%, 트리에탄올아민 0.30 중량%, 적량의 방부제, 향료 및 색소와 잔량의 정제수를 혼합하여 젤을 제조하였다.
제제예 2. 식품 조성물의 제조
2-1. 건강식품의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2-2. 건강음료의 제조
백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (8)

  1. 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 백자인 분말, 가시오갈피 분말 및 시호 분말의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 백자인, 가시오갈피 및 시호는 100 : 15~25 : 7~17 중량비로 배합되는 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~30.0 중량%의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부외용 연고, 로션, 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 영양세럼, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼 및 오일젤로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 제형인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.
  7. 백자인, 가시오갈피 및 시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 미백용 식품 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 백자인, 가시오갈피 및 시호는 100 : 15~25 : 7~17 중량비로 배합되는 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 미백용 식품 조성물.
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