KR20220166493A

KR20220166493A - 레몬 추출물을 포함하는 항산화, 항염 및 치아 미백용 조성물과 이를 포함하는 구강용 조성물

Info

Publication number: KR20220166493A
Application number: KR1020210075304A
Authority: KR
Inventors: 정순정
Original assignee: 영산대학교산학협력단
Priority date: 2021-06-10
Filing date: 2021-06-10
Publication date: 2022-12-19
Also published as: KR102518501B1

Abstract

본 발명은 레몬 추출물을 포함하는 항산화, 항염 및 치아 미백용 조성물과 이를 포함하는 구강용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 항염용 조성물 레몬(Citrus limon) 추출물을 포함하는 것일 수 있다.

Description

레몬 추출물을 포함하는 항산화, 항염 및 치아 미백용 조성물과 이를 포함하는 구강용 조성물{ANTIOXIDANT, ANTI-INFLAMMATORY AND TOOTH WHITENING COMPOSITION CONTAINING LEMON EXTRACT AND ORAL COMPOSITION CONTAINING THE SAME}

본 발명은 레몬 추출물을 포함하는 항산화, 항염 및 치아 미백용 조성물과 이를 포함하는 구강용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 레몬 추출물을 포함하면서, 산화스트레스 및 산화질소 생성을 효과적으로 억제하고, 치아 미백활성을 나타낼 수 있도록 하는 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하여 기능성 제품으로 활용될 수 있는 구강용 조성물을 제공한다.

자유라디칼은 세포를 파괴하거나 피부 진피층의 결합조직을 절단하거나 교차 결합을 일으키므로 주름형성, 구강암, 피부 암, 세포 살상, 류마티스성 관절염, 아토피성 피부염, 여드름 등 여러 가지 문제를 발생시킨다.

자유라디칼이 생성되는 원인은 백혈구의 식작용, 미토콘드리아에서의 ATP 생산과정 중 전자 전달계, 미엘로퍼옥사이드(Myeloperoxide(MPO))의 작용, 자외선, 담배, 정상적인 대사 과정, 스트레스, 공해 물질, 세균으로 알려져 있다.

증가된 자유라디칼은 진피의 결합조직인 콜라겐(Collagen), 엘라스틴 (Elastin), 히아루론산(Hyaluronic acid)을 파괴하여 피부의 일정 부위 침하 현상(주름)을 일으키며, 또한, 세포막의 지질 부분을 산화시켜 세포의 파괴 현상이 발생되어 피부염, 여드름, 피부암의 질병을 유발하게 되는 것이다.

염증은 해로운 주위 환경, 즉 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하는 생리적인 반응이다. 이 염증 현상은 여러 종류의 다핵형 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하고, 이들 세포들은 염증성 세포 산물인 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인(cytokine)을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 한다. 엘라스타제(Elastase), 히알루리니다제(hyalurinidase) 및 리폭시게나아제(lipoxygenase)와 같은 효소들은 염증 시 생성되는 단백질 및 지질 분해 효소들로 잘 알려져 있다.

과다 염증은 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직의 손상을 입히고, 결합 조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라, 세포의 재생 및 증식에도 나쁜 영향을 미치게 되어 빠른 피부노화를 초래하게 되고, 피부에 국소적인 홍반과 부어오름이 나타나게 된다. 만일, 결합조직이 심각하게 손상되고 염증반응이 지속된다면 정상적인 조직구조와 기능을 회복시키는 일은 훨씬 어렵게 된다.

각종 스트레스원에 의한 피부 자극 및 염증을 감소시키고, 화장품 사용으로 인한 부작용을 줄이기 위해서는, 항염증, 항산화 및 피부자극 완화 효능이 있는 물질을 개발하는 것이 절실히 요구되며, 이와 함께 인체에 부작용이 적은 천연물의 유용성분을 효과적으로 추출할 수 있는 방법이 함께 필요하다.

한편, 치아변색은 많은 사람들로 하여금 이를 드러내놓고 환하게 웃을 수 없는 스트레스의 원인으로 작용되기도 한다.

치아 변색은 외인성에 의한 변색과 내인성에 의한 변색으로 구분할 수 있다. 외인성의 원인으로는 치아 표면에 음식물 찌꺼기나 니코틴, 커피, 홍차 등이 치아의 상아질에 침착으로 인해 착색이 발생될 수 있다. 또한, 치면 상에 있는 치석이나 연성 침착물 속에 색소성분이 염색됨으로써 발생될 수 있고, 착색세균이나 치은의 출혈, 불소 과잉 섭취 및 약품에 의해서 발생될 수 있다. 내인성 원인으로는 치아 신경 손상으로 인한 변색 및 치과 보철 재료인 실버 아말감에 의한 변색, 테트라사이클린계 항생제 복용에 의한 변색 등이 있다.

상기와 같은 치아 변색의 치료 방법으로는 변색된 치아에 재킷 크라운을 씌워주는 방법과, 스케일링을 통한 얼룩제거가 있으나 상기와 같은 방법은 치료 비용이 비싸고, 치과를 방문해야 하는 번거로움이 있다.

다른 방법으로는 강모치솔이나 연마력이 강한 연마제를 이용하는 방법이 있다. 대표적인 연마재로는 불용성 메타인산소다, 무수인산일수소칼슘등을 사용하여 물리적으로 미백하는 방법이 있으나 상기와 같은 방법은 치아표면의 에나멜질 또는 치경부가 손상되어 외부자극이나 온도, 화학적 자극이 가해지는 경우 통증이 유발되는 민감성 치아가 될 가능성이 높으며, 얼룩의 효과적인 제거가 어려워 바람직하지 않다.

또 다른 방법으로는 미백제 등을 사용하는 것으로, 치아 표면에 착색된 오염을 제거하기 위하여 화학작용을 이용할 수 있는데, 가장 많이 사용되는 것은 과산화물이다. 그러나 상기 과산화물들은 치약성 원료와 상용성이 좋지 않으며, 특히 탄산수소나트륨과 같이 사용할 시에는 높은 미백효과를 나타내나 과산화물의 급속한 분해, 가스발생, 상분리 현상 등을 야기하여 이를 이용한 제품을 장기간 보관하기 힘들며, 실온에서 저장시 치약중의 과산화물 안정성이 떨어져 상품화에 어려움이 있다.

또한 잇몸의 변색은 치아와 다른 매커니즘에 기인하는데, 대표적으로는 흡연으로 인한 유해물질의 침착, 음식물에 포함된 색소에 의한 잇몸의 변색, 노화에 의한 혈행불량, 보철물에 의한 잇몸 변색이 여기에 해당한다.

이에 대한 해결방안으로는 레이저를 이용한 잇몸 표면에 대한 미백 시술을 진행하는 경우가 가장 일반적이다. 그러나 이러한 시술은 잇몸에 상당한 자극이 발생하며, 잇몸이 변색 이외에 건강한 상태가 유지되고 있어야 한기 때문에 시술을 받을 수 있는 대상자가 제한적이라는 문제가 있다. 또한 생활습과, 식습관 또는 노화 등을 원인으로 하는 잇몸 변색의 경우 위와 같은 시술 후에도 잇몸 변색이 다시 발생하는 문제가 있다. 따라서 잇몸이 변색 또는 착색되는 것을 예방하고 잇몸이 건강한 선홍색 또는 분홍색 본연의 색상이 유지될 수 있도록 하는 조성물에 대한 개발이 필요하다.

KR

10-2014-0115229

A

KR

10-2016-0090708

A

본 발명의 목적은 항산화 활성을 가지는 천연물 유래의 조성물을 제공하기 위한 것이다. 이를 통하여 세포독성 등의 문제없이 장기간 사용하면서 자유라디칼 생성을 억제하는 효과를 낼 수 있도록 하기 위한 것이다.

본 발명의 목적은 항염 활성을 가지는 천연물 유래의 조성물을 제공하기 위한 것이다. 이를 통하여 세포독성 등의 문제없이 장기간 사용하면서 산화질소 생성을 억제하는 효과를 낼 수 있도록 하기 위한 것이다.

본 발명의 목적은 치아 변색 방지 및 치아미백 활성을 가지는 천연물 유래의 조성물을 제공하기 위한 것이다. 이를 통하여 세포독성 등의 문제이 장기간 사용하면서, 잇몸출혈, 치아마모 등의 문제없이 치아의 미백활성을 높일 수 있도록 하기 위한 것이다.

본 발명의 목적은 잇몸이 변색 착색되지 않고 선홍색이 유지될 수 있도록 하는 천연물 유래의 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 것이고, 액상, 고상, 현탁액, 파우더, 젤상, 필름, 에어로졸, 페이스트 등의 제형으로 제공될 수 있는 구강조성물을 제공하기 위한 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 항염용 조성물은 본 발명의 일 실시예에 따른 레몬(Citrus limon) 추출물을 포함하는 것일 수 있다.

상기 레몬 추출물은 레몬 과육 추출물을 포함하고, 상기 과육 추출물에 대하여 레몬 껍질 추출물 10 내지 50 중량부; 레몬 나무 추출물 1 내지 10 중량부를 포함하는 것일 수 있다.

상기 레몬 추출물은 물, 탄소수 1 내지 10의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 용매로 하여 추출된 것일 수 있다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 치아 미백용 조성물은 레몬 추출물을 포함하는 것일 수 있다.

상기 조성물은 레몬 추출물 100 중량부에 대하여 탄산수소나트륨(NaHCO₃) 30 내지 60 중량부를 포함하는 것일 수 있다.

상기 조성물은 로즈마리 추출물, 레몬밤 추출물, 페퍼민트 추출물, 세이지 추출물, 헬리오트로프 추출물, 딜 추출물, 마조람 추출물, 아니스 추출물, 오레가노 추출물, 월계수잎 추출물, 커민 추출물, 파슬리 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 잇몸 변색 예방용 조성물은 레몬 추출물을 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 구강용 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것일 수 있다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 항염용 조성물은 본 발명의 일 실시예에 따른 레몬(Citrus limon) 추출물을 포함하는 것일 수 있다.

상기 레몬 추출물을 유효성분으로 사용하는 경우 높은 항산화 활성을 통하여 자유라디칼을 억제하는 효과를 낼 수 있을 뿐만 아니라, 산화질소의 생성을 감소시켜 항염증 효과를 높일 수 있다. 특히 구강제품에 사용되는 경우 우수한 항산화 활성 및 항염 활성을 통하여 다양한 구강질환을 예방하는 효과를 달성할 수 있다.

상기 범위에 의하는 경우 레몬 과육 추출물에 비하여 상호 작용에 의한 상승효과로 우수한 항산화 및 항염활성을 달성할 수 있다.

상기 레몬 추출물은 물, 탄소수 1 내지 10의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 용매로 하여 추출된 것일 수 있다. 바람직하게 상기 용매는 물인 것일 수 있다. 물을 용매로 하는 경우 항산화 및 항염 활성을 가지는 유효성분을 수득하는데 유리할 수 있다.

상기 레몬 추출물을 사용하는 경우 우수한 항산화 활성 및 항염 활성과 함께 치아 변색을 방지하고, 치아 미백능을 높이는 효과를 달성할 수 있다.

치아의 변색은 흡연 및 음식물에 의한 색소 침해, 구강 위생 불량, 구강 세정제의 장기간 사용, 다량의 불소 노출, 항생제 등 약물 노출, 치수조직의 염증, 선천적 질환 등 외인성 요인과 내인성 요인이 그 원인으로 지목된다. 또한 이러한 치아변색을 치료하는 방법으로는 치아 본체를 보존하면서 치아의 색상 톤이 개선되도록 하는 방법으로 사용한다. 예를 들어, 과산화수소(H₂O₂) 및 표백제를 포함하는 화합물로 처리하고 열 등을 가하여 광분해를 유도하는 방법 등이 대표적으로 활용되고 있다. 그러나 과산화수소를 사용하는 경우 상아질 자체가 손상되거나 염증발생, 출혈 등 구강질환의 원인이 발생하는 문제가 있다.

그러나 상기 레몬 추출물을 사용하는 경우 상술한 과산화수소 등과 달리 구강질환등의 문제가 없으며, 치아 미백효과와 함께 항산화 및 항염활성을 통하여 구강질환을 효과적으로 예방할 수 있다.

상기 범위에 의하는 경우 각 추출물에 포함된 유효성분의 상호 작용에 따른 상승효과를 통하여 보다 우수한 치아 미백 효과를 달성할 수 있다.

탄산수소나트륨 그 자체는 치아 미백활성이 높지 않지만, 레몬 추출물과 상기 조성범위로 혼합되는 경우 상호 작용에 따른 상승효과로서 치아 미백활성이 높아질 수 있다.

한편, 탄산수소나트륨이 30 중량부 미만인 경우 탄산수소나트륨의 혼합에 따른 미백활성의 증진효과가 나타나지 않으며, 60 중량부를 초과하는 경우 상대적으로 치아 미백활성을 제공하는 레몬 추출물의 유효성분의 함량이 감소하여 전체로서 치아 미백활성이 저하되는 문제가 있다.

바람직하게 상기 조성물은 레몬 추출물을 포함하고, 상기 레몬 추출물 100 중량부에 대하여 오레가노 추출물 3 내지 10 중량부; 파슬리 추출물 1 내지 5 중량부 및 세이지 추출물 1 내지 5 중량부를 포함하는 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 각 추출물에 함유된 유효성분의 상호 작용에 따른 상승효과로 항산화 및 항염 활성이 우수해지고, 혈류개선, 치아에 대한 우수한 세정 및 미백활성을 달성할 수 있다.

더 바람직하게 상기 조성물은 레몬 추출물을 포함하고, 상기 레몬 추출물 100 중량부에 대하여 오레가노 추출물 3 내지 10 중량부; 파슬리 추출물 1 내지 5 중량부; 세이지 추출물 1 내지 5 중량부; 생강 추출물 5 내지 10 중량부; 파인애플 추출물 5 내지 10 중량부; 숙주나물 추출물 1 내지 5 중량부를 포함하는 것일 수 있다.

상기 범위에 의하는 경우 항산화 및 항염활성이 증진될 뿐만 아니라, 치아 변색이 예방되는 효과가 높아질 수 있다. 특히 상호 작용에 따른 상승효과를 통하여 보다 적은 함량으로 우수한 효과를 낼 수 있으므로, 세포독성 등의 문제 없이 장기간 사용할 수 있다. 따라서 이를 통하여 치아 또는 잇몸 손상 없이 장기간 사용하면서 구강질환을 예방하거나, 치아 변색을 효과적으로 예방할 수 있다.

상기 레몬 추출물에 의하는 경우 항산화 활성, 항염활성으로 구강질환을 예방하며, 혈류 개선을 통하여 치주질환을 예방 또는 개선할 수 있다. 이를 통하여 치주질환 등으로 유발된 잇몸 변색을 예방할 수 있다.

본 발명에서 말하는 구강 조성은 치약, 구강 스프레이, 구강 세정제, 구강용 연고, 구강 청정제, 가글링 제품, 껌, 및 패치 등으로 제공될 수 있으며, 액상, 고상, 현탁액, 파우더, 젤상, 필름, 에어로졸 등의 제형으로 제공될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 그 제형에 따라 프로필렌글리콜, 글리세린, 폴리에틸렌글리콜, 광물성 오일, 및 식물성 오일로 이루어진 군

으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게 식물성 오일을 더 포함하는 것일 수 있다.

상기 식물성 오일은 올리브유, 대두유, 카놀라유, 포도씨유, 피마자유, 면실유, 옥수수기름, 참기름, 및 땅콩기름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게 올리브유, 대두유, 피마자유, 또는 이들의 혼합물일 수 있으며, 더욱 바람직하게 대두유가 이용될 수 있다.

또한 추가적으로 환원제 또는 점증제를 사용할 수 있으며, 이는 선택된 제형에 따라 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 선택하여 적용할 수 있는 범위를 모두 포함한다. 예를 들면, 환원제는 식품 첨가물로 사용가능한 환원제라면 제한없이 사용할 수 있으며, 바람직하게 메타중아황산칼륨(Potassium Metabisulfite), 무수아황산(Sulfur Dioxide), 아황산나트륨(Sodium sulfite), 아황산수소나트륨(Sodium bisulfite), 차아황산나트륨(Sodium hydrosulfite), 메타중아황산나트륨(Sodiummetabisulfite) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 것일 수 있다.

상기 점증제는 소듐 실리케이트 (Sodium Silicates), 칼슘 실리케이트 등의 실리카염, 실리카겔 등과 같은 합성 실리카 및 fumed silica와 같은 pyrogenic silica 로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 실리카 화합물; 및 하이드록시에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 및 메틸셀룰로오스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 셀룰로오스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게 구강에 사용이 가능하고, 오일 성분의 점증이 가능한 Evonik 사의 Fumed silica(Aerosil^®200)을 사용할 수 있다.

본 발명은 항산화 활성을 가지는 천연물 유래의 조성물을 제공한다. 이를 통하여 세포독성 등의 문제없이 장기간 사용하면서 자유라디칼 생성을 억제하는 효과를 낼 수 있다.

본 발명은 항염 활성을 가지는 천연물 유래의 조성물을 제공한다. 이를 통하여 세포독성 등의 문제없이 장기간 사용하면서 산화질소 생성을 억제하는 효과를 낼 수 있다.

본 발명은 치아 변색 방지 및 치아미백 활성을 가지는 천연물 유래의 조성물을 제공한다. 이를 통하여 세포독성 등의 문제없이 장기간 사용하면서, 잇몸출혈, 치아 마모 등의 문제없이 치아의 미백활성을 높일 수 있게 한다.

본 발명은 잇몸이 변색 또는 착색되지 않고 선홍색이 유지될 수 있도록 하는 천연물 유래의 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 구강조성물은 상기 조성물을 포함하며 액상, 고상, 현탁액, 파우더, 젤상, 필름, 에어로졸, 페이스트 등의 제형으로 제공될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 세포독성 평가에 관한 것이다.
도 2은 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 항산화 활성의 평가에 관한 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 항염 활성 평가에 관한 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 항염 활성 평가에 관한 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 치아미백 활성 평가에 관한 것이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

[제조예: 조성물의 제조]

1. 레몬 추출물의 제조

레몬을 세척하고, 일정한 크기로 세절한 뒤 열수로 추출하였다. 추출된 여액을 여과 및 농축한 뒤 동결건조하여 레몬 추출물(CLE)를 제조하였다.

2. 혼합 추출물 1의 제조

상기 레몬 추출물과 동일한 방법으로, 레몬 껍질; 레몬 과육; 레몬 나무; 레몬 잎; 레몬 종자를 각각 추출하여 레몬 과육 추출물(LE1); 레몬 껍질 추출물(LE2); 레몬 나무 추출물(LE3); 레몬 잎 추출물(LE4) 및 레몬 종자 추출물(LE5)을 제조하였다. 또한 각 추출물을 일정한 비율로 혼합하여 하기의 [표 1]와 같은 혼합 추출물 1를 제조하였다.

	LM1	LM2	LM3	LM4	LM5	LM6	LM7
LE1	100	100	100	100	100	100	100
LE2	-	-	1	10	30	50	100
LE3	-	-	0.1	1	5	10	20
LE4	100	-	-	-	-	-	-
LE5	-	100	-	-	-	-	-

(단위: 중량부)

3. 혼합 추출물 2의 제조

상기 레몬 추출물과 동일한 방법으로, 오레가노 추출물(AE); 파슬리 추출물(BE); 세이지 추출물(CE); 생강 추출물(DE); 파인애플 추출물(EE) 및 숙주나무 추출물(FE)을 제조하였다. 또한 각 추출물을 일정한 비율로 혼합하여 하기의 [표 2]와 같은 혼합 추출물 2를 제조하였다.

	M1	M2	M3	M4	M5	M6	M7	M8	M9	M10
CLE	100	100	100	100	100	100	100	100	100	100
AE	1	3	5	10	20	5	5	5	5	5
BE	0.1	1	3	5	10	3	3	3	3	3
CE	0.1	1	3	5	10	3	3	3	3	3
DE	-	-	-	-	-	1	5	7	10	20
EE	-	-	-	-	-	1	5	7	10	20
FE	-	-	-	-	-	0.1	1	3	5	10

(단위: 중량부)

[실험예 1: CLE에 대한 활성평가]

1. 세포생존력 평가

CLE에 대한 세포독성을 평가하기 위하여 RAW 264.7 대식세포에 CLE를 농도별로 처리면서 MTT 방법을 이용하여 세포의 생존율을 측정하였다. AW264.7 대식세포를 96 well 기준으로 RAW 264.7 대식세포 1 ×103 cells/㎖로 seeding 하고, 안정화하였고, 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 540 nm에 흡광도를 측정하였다.

그 결과를 하기의 [도 1]에 나타내었다.

하기의 [도 1]을 참조하면, CLE 처리하는 경우 전 농도에 걸쳐 세포독성의 문제가 없다는 점을 확인할 수 있다.

2. 항산화 활성 평가

CLE의 항산화 효과를 확인하기 위하여 CLE를 농도별로 처리하고, 24시간 뒤 H₂O₂를 처리하여, 과산화수소에 대한 저항활성을 평가하였다. RAW 264.7 대식세포를 사용하였으며, 평가방법으로 MTT 방법을 이용하였으며, 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 540 nm에 흡광도를 측정하였다.

그 결과를 하기의 [도 2]에 나타내었다.

하기의 [도 2]를 참조하면, CLE를 처리한 한 경우 H₂O₂에 대한 우수한 저항활성 및 세포보호능을 나타내는 점을 확인할 수 있다. 이를 통하여 CLE를 사용하는 경우 우수한 항산화 활성을 나타내며 H₂O₂에 소거능이 뛰어나다는 점을 확인할 수 있다. 따라서 CLE에 의하는 경우 과산화수소 사용으로 발생할 수 있는 상술한 범위의 구강질환 기타 부작용을 예방할 수 있다는 점을 알 수 있다.

3. 항염 활성 평가

RAW264.7 대식세포는 300 μg CLE 및 150 μg NaHCO₃(ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MS, USA)로 1시간 동안 처리한 후 24시간 동안 500 μM H₂O₂를 처리하였다. 그리스 시약(Griess reagent, Sigma-Aldrich Chemical Co.)을 사용하여 배양 상등액에서 NO의 생산을 분석하였다. 이 분석을 위해, 상등액을 수집하고 어둠 속에서 실온에서 10분 동안 같은 부피의 그리스 시약과 혼합하였다. 마이크로 플레이트 판독기로, 540nm에서 흡광도를 분석하였다. 또한 단백질 추출 및 웨스턴 블롯(WESTERN BLOT) 분석을 진행하였다.

그 결과를 하기의 [도 3] 및 [도 4]에 나타내었다.

하기의 [도 3] 및 [도 4]를 참조하면, CLE에 의하는 경우 우수한 항염활성 및 H₂O₂에 따른 저항활성으로 세포보호활성이 높아지는 점을 알 수 있다. 따라서 상기 CLE에 의하는 경우 다양한 치주질환 또는 구강질환을 예방하는 효과를 나타낼 수 있다.

4. 치아미백활성 평가

우식, 골절 및 균열이 없는 소의 이빨을 선별하고, 이를 4×4mm의 일정한 크기가 되도록 가공하였다. 선별된 소의 이빨을 커피로 염색한 뒤 CLE, 표백제를 처리하면서 그 색상의 변화를 평가하였다.

처리 전후의 색상의 변화는 3회를 반복하여 측정하였고, 하기의 [식 1]의 CIE 비색법(Lee KH, Kim S: Utilization of resin infiltration for prolonging of tooth whitening effects. J Korean Acd Pediatr Dent 44:1-9, 2017. https://doi.org/10.5933/JKAPD.2017.44.1.1) 따라 그 변색 정도를 평가하였다.

[식 1]

(L* is the contrast, a* is the red-green color, b* is the yellow-blue color)

객관적인 평가를 위하여 15% H₂O₂를 처리한 결과를 지수 100으로 고정하고, 상기 15% H₂O₂의 결과와 치아미백활성 정도를 비교 평가하였다.

그 결과를 하기의 [도 5]에 나타내었다.

하기의 [도 5]에 따른 치아 미백활성에 대한 평가결과를 참조하면, 35% CLE의 경우 15% H₂O₂를 처리한 경우 보다 더 우수한 미백활성이 나타나는 점을 확인할 수 있으며, 특히 CLE가 NaHCO₃와 혼합 사용되는 경우 미백활성이 크게 높아지는 점을 알 수 있다.

따라서 상기 CLE 또는 CLE 및 NaHCO₃와 혼합조성에 의하는 경우 H₂O₂를 대체할 수준의 미백활성을 가지는 치아 미백조성물을 제공할 수 있다는 점을 확인할 수 있다. 특히 CLE 또는 CLE 및 NaHCO₃와 혼합조성에 의하는 경우 H₂O₂와 달리 상술한 구강질환 등의 문제를 일으키지 않으므로, 안정적으로 장기간 사용하면서 치아 미백활성을 높일 수 있는 장점이 있다.

[실험예 2: 혼합조성 1에 대한 활성평가]

1. 항산화 활성 평가

상기 CLE에 대한 평가와 동일한 방법으로, H₂O₂에 대한 저항활성을 통하여 항산화 활성을 평가하였다. 또한 객관적인 평가를 위하여 CLE 300 μg/ml의 결과를 지수 5로 고정하고, 이와 비교 평가하여 하기의 [표 3]에 나타내었다. 상기 지수는 1 내지 10으로 평가하였으며, 그 숫자가 높을수록 효과가 우수한 것이다.

CLE	LM1	LM2	LM3	LM4	LM5	LM6	LM7
5	2.7	2.4	4.8	6.2	6.4	6.1	3.9

(단위: 지수)

상기 [표 3]을 참조하면, LM4 내지 LM6에 의하는 경우 CLE를 사용하는 경우에 비하여 높은 항산화 활성이 나타나는 점을 확인할 수 있다. 따라서 인위적으로 조절된 일정한 혼합범위에서 항산화 활성이 보다 증진되는 사실을 확인할 수 있다.

2. 항염 활성 평가

상기 CLE에 대한 평가와 동일한 방법으로, NO 발현정도를 평가하여 항염활성을 평가하였다. 또한 객관적인 평가를 위하여 CLE 300 μg/ml의 결과를 지수 5로 고정하고, 이와 비교 평가하여 하기의 [표 4]에 나타내었다. 상기 지수는 1 내지 10으로 평가하였으며, 그 숫자가 높을수록 효과가 우수한 것이다.

CLE	LM1	LM2	LM3	LM4	LM5	LM6	LM7
5	3.3	3.1	5	6.2	6.4	5.9	4.7

(단위: 지수)

상기 [표 4]을 참조하면, 역시 LM4 내지 LM6에 의하는 경우 CLE에 비하여 항염 활성이 증가하는 것을 확인할 수 있다. 따라서 인위적으로 조절된 혼합범위로서 LM4 내지 LM6에 의하는 경우 보다 우수한 항염 활성을 가지는 조성물이 제공될 수 있다.

3. 치아미백 활성 평가

상기 CLE에 대한 평가와 동일한 방법으로, 치아 미백활성을 평가하였다. 또한 객관적인 평가를 위하여 35% CLE의 결과를 지수 5로 고정하고 이와 비교 평가하여 하기의 [표 5]에 나타내었다. 상기 지수는 1 내지 10으로 평가하였으며, 그 숫자가 높을수록 효과가 우수한 것이다.

CLE	LM1	LM2	LM3	LM4	LM5	LM6	LM7
5	2.6	2.2	4.8	6.5	6.9	6.1	4.4

(단위: 지수)

상기 [표 5]를 참조하는 경우 CLE에 의하는 경우에 비하여 LM4 내지 LM6와 같이 인위적으로 그 함량을 조절하는 경우 상승효과가 나타나는 점을 확인할 수 있다. 따라서 상기 LM4 내지 LM6에 의하는 경우 보다 적은 함량으로 장기간 사용하면서 보다 우수한 치아미백 활성이 나타나도록 할 수 있다.

결국, LM4 내지 LM6와 같이 인위적으로 조절된 부위의 일정한 함량으로 혼합된 경우 각 추출물에 포함된 유효성분의 상호작용으로 상승효과가 나타나는 점을 알 수 있다. 따라서 상기 범위에 따라 제형화를 진행하는데 있어 지속적으로 사용하면서, 항산화, 항염 활성과 함께 치아 미백활성을 가지는 조성물로 제공하는데 보다 유리할 수 있다.

[실험예 3: 혼합조성 2에 대한 활성평가]

1. 항산화 활성 평가

혼합조성물에 대한 상승활성을 평가하기 위하여 상기 CLE에 대한 평가와 동일한 방법으로, M1 내지 M10의 H₂O₂에 대한 저항활성을 통하여 항산화 활성을 평가하였다. 또한 객관적인 평가를 위하여 CLE 300 μg/ml의 결과를 지수 5로 고정하고, 이와 비교 평가하여 하기의 [표 6]에 나타내었다. 상기 지수는 1 내지 10으로 평가하였으며, 그 숫자가 높을수록 효과가 우수한 것이다.

CLE	M1	M2	M3	M4	M5	M6	M7	M8	M9	M10
5	4.6	7.8	7.7	7.5	5.2	7.5	8.7	8.4	8.6	7.2

(단위: 지수)

상기 [표 6]을 참조하면, CLE에 대하여 M2 내지 M4와 같이 범위로 혼합되는 경우 상승활성이 나타나는 점을 알 수 있다. 특히 M3를 기반으로 추가혼합이 이루어진 제형에 있어서, M7 내지 M9에 의하는 경우 추가적인 상승활성을 관찰할 수 있다.

2. 항염 활성 평가

혼합조성물에 대한 상승활성을 평가하기 위하여 상기 CLE에 대한 평가와 동일한 방법으로, NO 발현정도를 평가하여 항염활성을 평가하였다. 또한 객관적인 평가를 위하여 CLE 300 μg/ml의 결과를 지수 5로 고정하고, 이와 비교 평가하여 하기의 [표 7]에 나타내었다. 상기 지수는 1 내지 10으로 평가하였으며, 그 숫자가 높을수록 효과가 우수한 것이다.

CLE	M1	M2	M3	M4	M5	M6	M7	M8	M9	M10
5	4.9	7.3	7.5	7.1	5.1	7.1	8.7	8.4	8.7	6.8

(단위: 지수)

상기 [표 7]을 참조하면, M2 내지 M4의 조성범위에서 NO에 대한 저감효과가 높아지는 점을 통하여 상기 범위에서 각 추출물에 포함된 유효성분의 상호 작용으로 상승효과가 나타난다는 사실을 확인할 수 있다. 또한 M7 내지 M9의 조성범위에 있어서 추가적인 상승활성이 관찰되었다.

이를 통하여 상기 M2 내지 M4 범위 또는 M7 내지 M9의 조성범위 범위에 의하는 경우 보다 적은 함량으로 우수한 활성을 나타내도록 할 수 있다. 따라서 적은 양의 사용을 통하여 우수한 효과를 유지하면서도 장기간 사용에 따른 부작용의 문제가 없도록 할 수 있다.

3. 치아미백 활성 평가

혼합조성물에 대한 상승활성을 평가하기 위하여 상기 CLE에 대한 평가와 동일한 방법으로, 치아 미백활성을 평가하였다. 또한 객관적인 평가를 위하여 35% CLE의 결과를 지수 5로 고정하고 이와 비교 평가하여 하기의 [표 8]에 나타내었다. 상기 지수는 1 내지 10으로 평가하였으며, 그 숫자가 높을수록 효과가 우수한 것이다.

CLE	M1	M2	M3	M4	M5	M6	M7	M8	M9	M10
5	5.1	7.4	7.7	7.2	5.2	7.4	9.1	9.3	8.7	7.1

(단위: 지수)

상기 [표 8]을 참조하면, M2 내지 M4의 조성범위에서 치아 미백 활성이 보다 높아지는 사실을 확인할 수 있다. 또한 M7 내지 M9의 조성범위에 있어서 추가적인 상승활성이 관찰되었다.

특히, 상기 혼합조성에 대하여 상승효과와 더불어 탄산수소나트륨가 일정한 조성 범위로 혼합되는 경우 치아 미백활성이 보다 향상될 수 있을 것으로 예측된다.

따라서 상기 혼합제형에 의하는 경우 치추질환 또는 구강질환을 예방 또는 개선하면서도 치아 미백에 따른 부작용이 없는 조성물 또는 구강용 조성물을 제공할 수 있다.

특히 상기 조성물에 의하는 경우 과산화수소에 의하지 않고 높은 수준의 치아미백 효과를 달성할 수 있어 과산화수소를 대체할 수 있고, 종래 과산화수소 사용에 따른 부작용의 문제를 해소할 수 있다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

Claims

레몬(Citrus limon) 추출물을 포함하는
항산화 및 항염용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 레몬 추출물은
레몬 과육 추출물을 포함하고, 상기 과육 추출물에 대하여
레몬 껍질 추출물 10 내지 50 중량부;
레몬 나무 추출물 1 내지 10 중량부를 포함하는 것인
항산화 및 항염용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 레몬 추출물은
물, 탄소수 1 내지 10의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 용매로 하여 추출된 것인
항산화 및 항염용 조성물.
레몬 추출물을 포함하는
치아 미백용 조성물.
제 4항에 있어서,
상기 레몬 추출물은
레몬 과육 추출물을 포함하고, 상기 과육 추출물에 대하여
레몬 껍질 추출물 10 내지 50 중량부;
레몬 나무 추출물 1 내지 10 중량부를 포함하는 것인
치아 미백용 조성물.
제 4항에 있어서,
레몬 추출물 100 중량부에 대하여
탄산수소나트륨(NaHCO₃) 30 내지 60 중량부를 포함하는 것인
치아 미백용 조성물.
제 4항에 있어서,
로즈마리 추출물, 레몬밤 추출물, 페퍼민트 추출물, 세이지 추출물, 헬리오트로프 추출물, 딜 추출물, 마조람 추출물, 아니스 추출물, 오레가노 추출물, 월계수잎 추출물, 커민 추출물, 파슬리 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함하는
치아 미백용 조성물.
레몬 추출물을 포함하는
잇몸 변색 예방용 조성물.
제 1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
구강용 조성물.