KR101811207B1

KR101811207B1 - 굴피나무잎, 자작나무수피 또는 차가버섯 추출물을 유효성분으로 하는 폐질환 치료, 개선 또는 예방용 조성물

Info

Publication number: KR101811207B1
Application number: KR1020150182023A
Authority: KR
Inventors: 나천수
Original assignee: 농업회사법인 주식회사 생명의나무; 주식회사 큐어싸이언스
Priority date: 2015-12-18
Filing date: 2015-12-18
Publication date: 2017-12-21
Also published as: KR20170073293A

Abstract

본 발명은 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하는 폐질환 치료, 개선 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 담배연기 추출물에 의해서 발생하는 폐 상피세포의 염증 발생을 억제하는 활성을 나타내는, 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하여 폐질환 중에서도 흡연으로 인하여 유발된 폐질환 치료, 개선 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

Description

굴피나무잎, 자작나무수피 또는 차가버섯 추출물을 유효성분으로 하는 폐질환 치료, 개선 또는 예방용 조성물{Composition for treatment, improvement or prevention of pulmonary diseases comprising extract of platycarya strobilacea leaf, birch bark or inonotus obliquus as an effective component}

본 발명은 굴피나무잎, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하는 흡연으로 유발된 폐질환 치료 또는 예방용 약학 조성물, 또는 흡연으로 유발된 폐질환 개선 또는 예방용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

최근 흡연의 심각성이 심해지고 있으며, 직접 흡연 뿐 만 아니라 간접흡연 또한 그 피해가 증가되고 있다. 흡연으로 인한 니코틴의 흡수는 즉각적으로 치사에 도달하지는 않지만 직접 간접적으로 고통을 수반하는 많은 질환을 일으키므로 일상생활에 지장을 주며 일생동안 위험을 초래하고 있다. 특히 산모에 의한 흡연은 태아에게 여러 피해와 심각한 기형마저 초래한다.

흡연은 잘 알려져 있는 바와 같이 폐암을 비롯한 호흡기질환, 각종 위장질환, 동맥경화증을 비롯한 각종 순환계 질환, 노화 촉진 등에 중요한 요소로 작용하고 있다.

담배 연기 속에는 약 4,000여 종의 화학물질이 들어 있다. 그 중 타르는 적은 양으로도 동물이나 곤충을 죽일 수 있는 강력한 발암물질이다. 그 외, 연탄가스의 주성분이 되는 일산화탄소 등, 담배 연기의 기체성분 모두가 해로운 작용을 한다. 한 개비당 2㎎이 들어 있다는 니코틴은 흡연 7초 만에 뇌 속에 전달되어 심장, 혈관, 소화기계에 해로운 작용을 하고 3일 정도 지나야 체외로 완전히 배출된다. 니코틴의 90% 정도는 C-oxidation 에 의해 코티닌(cotinine)으로 대사되어 뇨에 의하여 체외로 배출된다. 니코틴은 흡연 뿐만 아니라 간접 흡연에 의해서도 증가한다. 니코틴이 체내에 흡수되면 담배 1개당 비타민C 25㎎을 소모하며 교감 신경을 흥분시켜 혈관을 수축시키므로 혈압이 올라가고 호흡수도 증가하게 되며, 지질대사의 변화, 혈소판응집, 과응고 등을 일으키며, 이것들이 심혈관계 질환의 발병에 기여할 수 있다. 또한 니코틴은 엘라스타제를 많이 나오게 하고 폐포구조를 파괴하여 폐기종의 발달에 기여한다. 따라서, 니코틴의 대사를 촉진하여 체내에서 신속히 제거되도록 하는 방법을 개발할 필요가 절실하다.

흡연은 또한, DNA의 손상을 일으켜 암 발생으로 나타날 위험이 높게 되어, 폐암, 구강암, 후두암, 식도암, 신장암, 방광암, 췌장암, 자궁경부암 등에도 중요한 원인이 된다. 또한, 흡연자는 비흡연자에 비해 혈청 지질 및 지단백 농도, 혈장 항산화 비타민 상태의 변화를 포함하여 여러 가지 질병발생의 위험률과 사망률이 높다.

특히, 인체의 장기 중에서 폐는 가장 직접적으로 흡연의 피해를 입는 기관이다. 담배 내의 독성물질은 직접 폐포에 작용하여 폐포벽의 신축성을 떨어뜨리므로써 만성 폐쇄성 폐질환을 유발하는데, 20∼30년간 담배를 지속적으로 피우는 사람은 조금만 움직여도 숨이 찬 폐기종에 걸리기 쉽다. 또한, 이러한 상태가 지속되면 최종적으로 폐암에 걸릴 수도 있다. 학계 보고에 의하면, 흡연자의 폐암사망률은 비흡연자에 비해 6∼9배 높다고 한다.

이에, 흡연에 의해 유발될 수 있는 폐질환을 치료, 개선 또는 예방용 조성물 개발에 대한 필요성이 지속적으로 높아지고 있다.

한국공개특허 제2014-0013792호 한국등록특허 제1433394호

본 발명은 상기와 같은 문제점을 감안하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 이용한 폐질환 개선 예방용 식품 조성물을 제공함에 있다.

본 발명의 다른 목적은 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 이용한 폐질환 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공함에 있다.

본 발명의 일 측면은 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하는 폐질환 개선 예방용 식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 다른 측면은 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하는 폐질환 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따르면, 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상은 폐질환 중에서도 특히 흡연에 의해 유발된 폐질환의 치료, 개선 또는 예방을 위한 약학 및 식품 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1a 내지 1c는 대식세포주에서 본 발명의 제조예에 따른 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 NO 생성 저해 효능을 나타낸 그래프이다.
도 2a 및 2b는 폐 상피세포주에서 본 발명의 제조예에 따른 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 IL-8의 분비량을 나타낸 그래프이다.

이하, 도면을 참조하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명의 일 측면은 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하는 염증성 폐질환 개선 또는 예방용 식품 조성물에 관한 것이다.

일 구현예에 따르면, 상기 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그 혼합용매의 추출물일 수 있다.

다른 구현예에 따르면, 상기 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상은 상기 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그 혼합용매의 추출물의 에틸아세테이트, 헥산 또는 톨루엔 분획물일 수 있다.

또 다른 구현예에 따르면, 상기 폐질환은 흡연으로 인해 유발된 폐질환일 수 있으며, 상기 흡연으로 인해 유발된 폐질환은 만성 폐쇄성 폐질환일 수 있으며, 상기 만성 폐쇄성 폐질환은 폐기종 또는 만성 기관지염일 수 있다.

상기 식품 조성물에서, 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명의 상기 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

음료를 제조하는 경우 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 마가목 열매 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 마가목 열매 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 일 측면은 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 하는 폐질환 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.

한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 본 발명의 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을, 폐질환 치료 또는 예방하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 폐질환 치료 또는 예방용 약학 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 굴피나무잎 추출물, 자작나무수피 추출물 및 차가버섯 추출물 중에서 선택된 1종 이상을 0.1 내지 50 중량%로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화 하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제 화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘(calcium carbonate), 슈크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여법이라면 어느 것이나 사용 가능하고, 전신 투여 또는 국소 투여가 가능하나, 전신 투여가 더 바람직하며, 정맥 내 투여가 가장 바람직하다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 0.03 g/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 8 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

실시예

이하에서 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 하며, 다만 이하에 실시예 등에 의해 본 발명의 범위와 내용이 축소되거나 제한되어 해석될 수 없다. 또한, 이하의 실시예를 포함한 본 발명의 개시 내용에 기초한다면, 구체적으로 실험 결과가 제시되지 않은 본 발명을 통상의 기술자가 용이하게 실시할 수 있음은 명백하다.

제조예 1: 에탄올 추출물 제조

굴피나무잎, 자작나무수피, 차가버섯, 옻나무목부, 천문동, 헛개나무어린가지, 마가목열매, 헛개나무잎 및 쥐똥나무열매 각 33.2kg을 에탄올을 사용하여 실온에서 3일간 추출하였으며, 추출액을 감압 농축하여 고형분 함량 266.668 중량%를 얻었다.

제조예 2: 열수추출물 제조

굴피나무잎, 자작나무수피, 차가버섯, 옻나무목부, 천문동, 헛개나무어린가지, 마가목열매, 헛개나무잎 및 쥐똥나무열매 각 33.2kg에 996kg의 물을 첨가한 다음 100℃에서 3시간 동안 열수 추출한 다음, 여액을 60mmHg로 감압농축하여 열수추출물을 얻었다.

제조예 3: 추출물의 에틸아세테이트 분획물 제조

상기 제조예 1에서 제조된 각 추출물 241.03g씩을 사용하여 에틸아세테이트를 사용하여 분획하고, 감압 농축하여 에틸아세테이트 분획물 30.653g씩을 얻었다.

제조예 4: 추출물의 헥산 분획물 제조

상기 제조예 1에서 제조된 각 추출물 241.03g씩을 사용하여 에틸아세테이트를 사용하여 분획하고, 감압 농축하여 에틸아세테이트 분획물 51.663g씩을 얻었다.

하기 표 1은 상기 제조예 1 및 제조예 2에서 제조된 각 추출물을 나타낸 것이다.

또한, 하기 표 2는 상기 제조예 1에서 제조된 에탄올 추출물의 각 분획물을 나타낸 것이다.

	추출용매	추출대상 물질	구분
제조예1	에탄올	굴피나무잎	PS_E
		자작나무수피	BB_E
		차가버섯	IO_E
		옻나무목부	RV_E
		천문동	AC_E
		헛개나무어린가지	OR_E
		마가목열매	SC_E
		헛개나무잎	RA_E
		쥐똥나무열매	LI_E
제조예2	물	굴피나무잎	PS_W
		자작나무수피	BB_W
		차가버섯	IO_E
		옻나무목부	RV_W
		천문동	AC_W
		헛개나무어린가지	OR_W
		마가목열매	SC_W
		헛개과병	RA_W
		쥐똥나무열매	LI_W

	분획물	대상 물질	구분
제조예3	에틸아세테이트 분획물	굴피나무잎 에탄올 추출물	PS_EE
		자작나무수피 에탄올 추출물	BB_EE
		차가버섯 에탄올 추출물	IO_EE
		옻나무목부 에탄올 추출물	RV_EE
		천문동 에탄올 추출물	AC_EE
		헛개나무어린가지 에탄올 추출물	OR_EE
		마가목열매 에탄올 추출물	SC_EE
		헛개나무잎 에탄올 추출물	RA_EE
		쥐똥나무열매 에탄올 추출물	LI_EE

참고 시약

DMEM 배양액, 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 페니실린(penicillin) 및 스트렙토마이신(streptomycin)은 라이프 테크놀로지사(Life Technologies Inc., Grand Island, NY)에서 구입하였다. 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT), 디메틸 술폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO), 설파닐아미드(sulfanilamide), 아프로티닌(aprotinin), 류펩틴(leupeptin), 페닐메틸술포닐플로라이드(phenylmethylsulfonylfluride), 디티오트레이톨(dithiothreitol, DTT) 및 E.coli 리포폴리사카라이드(lipopolysaccaride, LPS)는 시그마 케미칼사(Sigma Chemical Co., MO, U.S.A)에서 구입하였으며, COX-2, iNOS, NFkBp65 및 퍼옥시다제 접합성 이차 항체(peroxidase conjugated secondary antibody)는 산타 크루즈바이오테크놀로지사(Snata Cruz Biotechnology, CA, U.S.A)에서 구입하였다. PGE2 및 TNF-a 측정 키트는 R&D 시스템tm사(R&D systems, MN, U.S.A)에서 구입하였으며, COX-2 효소 저해제인 NS-398은 칼바이오켐사(Calbiochem, CA, U.S.A)에서 구입하였다. RNA 추출키트(RNA extraction kit)는 인트론 바이오테크놀로지사(Intron Biotechnology, Seoul, Korea)에서 구입하였고, iNOS, COX-2, TNF-a 및 β-액틴 올리고누클레오티드 프라이머(actin oligonucleotide primer)는 바이오니어(Bioneer, Seoul, Korea)에서 구입하였다.

실험예 1: 대식세포에 대한 항염 활성 측정

상기 표 2에 기재된 바와 같이 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 이용하여, 염증 유발 인자에 대한 억제 효과를 알아보기 위하여, NO생성량을 측정하였다.

1-1. 세포배양

쥐의 대식세포주(Murine macrophage cell line)인 RAW 264.7 세포를 10 % FBS, 100 ㎍/㎖ 페니실린 및 100 단위/㎖ 스트렙토마이신이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 항온기에서 배양하였다.

1-2. MTT법에 의한 세포독성 시험

세포배양 접시에 세포가 충분히 자란 경우 스크래퍼(scrapper)로 분리한 뒤 96 웰 플레이트에 5×10⁵/웰로 세포를 분주하고 하루 동안 배양한 후 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 각각 25, 50, 100 ㎍/㎖ 농도로 배지에 희석하여 첨가하였다.

24시간이 지난 후 MTT시약을 넣고 4시간 동안 배양한 후 상등액을 제거하고 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 DMSO 100 ㎕를 첨가하여 녹였다. 30분 후 540nm에서 흡광도를 측정한 결과, 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물에서 모두 세포독성이 나타나지 않았다.

1-3. NO 생성량 측정

염증유도물질인 LPS(Lipopolysaccharide)에 의해 활성화된 Raw 264.7 세포의 배양액 중에 생성된 NO₂ ^-의 양을 측정하기 위해 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 각각 농도별로 처리하여 NO 생성 저해능을 조사하였다. 구체적으로, RAW 264.7 세포를 2×10⁵/㎖의 농도로 24웰 플레이트에 각각 분주한 후, 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물 시료용액을 각각 25, 50, 100 ㎍/㎖ 농도로 10㎕ 씩 가한 다음, 30분후 1㎍/㎖ LPS를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 즉 세포배양 상등액 100㎕ 및 그리스 시약(5%(v/v) 인산 용액 중에 1%(w/v) 설파닐아미드 및 0.1%(w/v) 나프틸에틸렌디아민(naphtylethylenediamine)-HCl) 100㎕를 혼합하여 96 웰 플레이트에서 10분 동안 반응시킨 후, 550nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 1a, 1b, 1c는 각각 상기 시료용액의 농도가 25, 50, 100 ㎍/㎖ 일 경우의 아질산염 생성량을 측정한 것이다.

도 1a, 1b, 1c를 참조하면, 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 모두 유의성 있는 NO 생성 저해 효과를 나타내었으며, 특히, 농도 의존적으로 NO 생성을 저해하는 것을 알 수 있었다.

이들의 IC₅₀는 IC_{50,PS_EE}= 89.08 ㎍/㎖, IC_{50,BB_EE}= 89.08 ㎍/㎖, IC_{50,RV_EE}= 89.08 ㎍/㎖, IC_{50,AC_EE}= 89.08 ㎍/㎖, IC_{50,OR_EE}= 89.08 ㎍/㎖, IC_{50,SC_EE}= 89.08 ㎍/㎖, IC_{50,RA_EE}= 89.08 ㎍/㎖ 및 IC_{50,LI_EE}= 89.08 ㎍/㎖으로 계산되었으며, LPS를 처리하지 않은 음성 대조군(NC)에서는 소량의 NO₂ ^-가 (2.85ㅁ0.07 ㎍/㎖) 생성되었다.

제조예 5: 담배연기추출물(CSE in 배지) 제조

50ml의 RPMI 1640을 삼각플라스크(250ml)에 담아 배양액을 준비한 후, 담배 3개피(ESSE: 타르 1.0mg, 니코틴 0.1mg)를 진공펌프를 통해 태워 담배연기가 상기 배양액을 통과하게 하여, CSE(in 배지)를 제조하였다.

상기 CSE(in 배지)는 300nm에서 측정한 결과, O.D 0.83인 것으로 확인되었으며, 상기 CSE(in 배지)를 100% 용액으로 규정하고 희석하여 사용하였다.

실험예 2: 담배연기추출물과 니코틴에 의한 폐 상피세포 염증유발 실험

인간의 폐 상피세포주(human alveolar epithlial cell line)인 A549를 48-웰 플레이트에 2.5×10⁵/웰로 세포를 분주하고, RPMI1640 및 10% FBS이 함유된 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 항온기에서 배양하였다.

다음 날, 제조예 5에서 제조된 담배연기추출물, 예컨대, CSE(in 배지) 및 니코틴, 예컨대 Nicotine(sigma N5511)을 각각 규정된 농도로 상기 세포에 희석하였다.

4, 6, 24시간 뒤, 상층액은 수득하여 15분 동안 3000rpm으로 원심분리하여 -20℃에서 보관한 후, ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 분석법으로 IL-8 생성량을 측정한 후, 표 3에 나타내었다.

4h		NC	CSE
		NC	50 ng/ml	500 ng/ml	1 /ml	10 /ml	50 /ml	100 /ml	200 /ml	500 /ml	1000 /ml
	hIL-8 (pg/ml)	50.25	63.043	66.849	65.716	52.319	29.961	24.643	19.196	8.392	1.868
	hIL-8 (pg/ml)	55.135	55.028	64.96	59.441	48.7	26.59	23.664	18.879	7.881	1.916
	Average	52.6925	59.0355	65.9045	62.5785	50.5095	28.2755	24.1535	19.0375	8.1365	1.892
		NC	Nicotine
		NC	0.1 ng/ml	0.5 ng/ml	1 ng/ml	10 ng/ml	100 ng/ml	1 /ml	10 /ml	20 /ml	50 /ml
	hIL-8 (pg/ml)	50.25	68.49	72.276	66.342	69.306	62.96	62.426	49.912	43.072	28.754
	hIL-8 (pg/ml)	55.135	67.508	78.212	60.067	65.613	66.314	61.198	53.877	44.67	28.867
	Average	52.6925	67.999	75.244	63.2045	67.4595	64.637	61.812	51.9845	43.871	28.8105
6h		NC	CSE
		NC	50 ng/ml	500 ng/ml	1 /ml	10 /ml	50 /ml	100 /ml	200 /ml	500 /ml	1000 /ml
	hIL-8 (pg/ml)	70.374	96.876	96.756	87.08	66.596	39.547	33.444	25.081	7.235	2.126
	hIL-8 (pg/ml)	78.003	92.697	96.493	74.912	62.04	39.689	31.083	24.549	6.356	2.173
	Average	74.1885	94.7865	96.6245	80.999	64.318	39.618	32.2635	24.815	6.7955	2.1495
		NC	Nicotine
		NC	0.1 ng/ml	0.5 ng/ml	1 ng/ml	10 ng/ml	100 ng/ml	1 /ml	10 /ml	20 /ml	50 /ml
	hIL-8 (pg/ml)	70.374	56.123	93.072	96.974	105.356	111.716	102.304	84.394	78.64	55.544
	hIL-8 (pg/ml)	78.003	85.227	118.439	104.728	101.473	105.516	97.985	87.654	81.157	55.65
	Average	74.1885	70.675	105.7555	100.851	103.4145	108.616	100.1445	86.024	79.8985	55.597
24h		NC	CSE
		NC	50 ng/ml	500 ng/ml	1 /ml	10 /ml	50 /ml	100 /ml	200 /ml	500 /ml	1000 /ml
	hIL-8 (pg/ml)	362.35	299.658	519.041	564.947	428.06	169.695	79.599	38.311	4.692	1.556
	hIL-8 (pg/ml)	376.14	368.664	472.725	509.862	446.46	167.256	80.673	37.633	5.046	2.031
	Average	369.245	334.161	495.883	537.4045	437.26	168.4755	80.136	37.972	4.869	1.7935
		NC	Nicotine
		NC	0.1 ng/ml	0.5 ng/ml	1 ng/ml	10 ng/ml	100 ng/ml	1 /ml	10 /ml	20 /ml	50 /ml
	hIL-8 (pg/ml)	362.35	358.597	338.004	359.299	376.963	374.17	402.222	402.549	456.963	403.409
	hIL-8 (pg/ml)	376.14	289.245	317.733	339.373	361.664	370.377	399.862	414.693	430.922	401.569
	Average	369.245	323.921	327.8685	349.336	369.3135	372.2735	401.042	408.621	443.9425	402.489

그 결과, 표 3에 나타난 바와 같이, CSE(in 배지)에 의해 유도된 IL-8의 분비양은 24시간 후 CSE(in 배지) 농도가 500~1000ng/ml의 경우, NC에 비해 IL-8의 분비량이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

이에, 하기 실험예 3에서는 폐 상피세포의 염증유발 수준이 높은 1000ng/ml의 CSE(in 배지)를 이용하여, 제조예 3의 각 추출물의 폐 상피세포의 항염 효과를 확인하는 실험을 실시하도록 한다.

실험예 3: 담배연기추출물을 이용한 추출물의 항염 활성 측정실험

1-1. 세포배양

1-2. IL-8 분비량 측정

세포배양 다음 날, CSE 1㎍/㎖ 및 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 하기 표 4에 기재된 바와 같이 규정된 농도, 예컨대, 50, 100, 500㎍/㎖로 각각 희석하였다.

24시간 후, 상층액은 수득하여 15분 동안 3000rpm으로 원심분리하여, -20℃에서 보관한 후, ELISA 분석법으로 IL-8 분비량을 측정한 후, 표 4에 나타내었고, 특히, 제조예 3에서 제조된 각 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 농도가 각각 50 및 100 ㎍/㎖ 인 경우를 각각 도 4a 및 4b에 나타내었다.

구분	농도 (/)	hIL-8 (1pg/)		AVERAGE	SE
구분	농도 (/)	#1	#2	AVERAGE	SE
NC		258.315	276.904	267.610	13.144
CSE	1	443.137	441.446	442.292	1.196
굴피나무잎	50	11.997	12.225	12.111	0.161
	100	1.474	1.474	1.474	0.000
	500	0	0	0.000	0.000
자작나무수피	50	35.448	36.77	36.109	0.935
	100	5.34	5.656	5.498	0.223
	500	0	0	0.000	0.000
차가버섯	50	25.325	26.32	24.123	0.735
	100	5.34	4.456	4.435	0.145
	500	0	0	0.000	0.000
천문동	50	339.662	353.161	346.412	9.545
	100	103.84	108.181	106.011	3.070
	500	477.849	505.092	491.471	19.264
헛개나무어린가지	50	195.75	214.343	205.047	13.147
	100	121.134	133.004	127.069	8.393
	500	16.565	18.629	17.597	1.459
마가목열매	50	249.986	239.298	244.642	7.558
	100	95.198	197.837	196.518	1.866
	500	58.811	48.607	53.709	7.215
헛개나무잎	50	410.866	418.384	414.625	5.316
	100	544.306	535.614	539.960	6.146
	500	624.569	633.876	629.223	6.581
쥐똥나무열매	50	476.534	481.765	479.150	3.699
	100	437.446	403.329	420.388	24.124
	500	329.778	321.048	325.413	6.173

IL-8 분비량 측정실험 결과, 표 4, 도 2a 및 도 2b에 나타난 바와 같이, 굴피나무잎(PS_EE), 자작나무수피(BB_EE) 및 차가버섯(IO_EE)에서 폐염증 억제효능이 나타난 반면, 옻나무목부, 천문동, 헛개나무어린가지, 마가목열매, 헛개나무잎 및 쥐똥나무열매에서는 폐염증 억제효능이 나타나지 않는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2의 실험 결과로부터, 굴피나무잎, 자작나무수피, 차가버섯, 천문동, 헛개나무어린가지, 마가목열매, 헛개나무잎 및 쥐똥나무열매의 추출물은 모두 대식세포에 대하여 염증억제 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다.

그러나, 실험예 4의 실험 결과로부터, 옻나무목부, 천문동, 헛개나무어린가지, 마가목열매, 헛개나무잎 및 쥐똥나무열매의 추출물은 폐 상피세포에서 염증억제 효과를 나타내지 않는 것을 알 수 있는 바, 굴피나무잎, 자작나무수피 또는 차가버섯의 추출물을 이용하여 흡연으로 인행 유도된 폐질환과 관련된 다양한 식품 및 약학 조성물을 개발할 수 있는 가능성을 확인할 수 있었다.

<제제예 1> 약학적 제제의 제조

1-1. 산제의 제조

제조예 3의 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 또는 차가버섯 추출물의 에틸아세테이트 분획물 500 ㎎

유당 100 ㎎

탈크 10 ㎎

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

1-2. 정제의 제조

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

1-3. 캅셀제의 제조

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

1-4. 주사제의 제조

주사용 멸균 증류수 적량

pH 조절제 적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

1-5. 액제의 제조

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액체를 제조한다.

<제제예2> 건강기능식품(분말형)의 제조

제조예 3의 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 또는 차가버섯 추출물의 에틸아세테이트 분획물 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎎

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<제제예 3> 건강기능식품(음료형)의 제조

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

<제제예 4> 건강기능식품(츄잉검)의 제조

껌베이스 20 %

설탕 76.36~76.76 %

제조예 3의 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 또는 차가버섯 추출물의 에틸아세테이트 분획물 0.24~0.64 %

후르츠향 1 %

물 2 %

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.

<제제예 5> 건강기능식품(밀가루 식품)의 제조

제조예 3의 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 또는 차가버섯 추출물의 에틸아세테이트 분획물 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

<제제예 6> 건강기능식품(유제품)의 제조

제조예 3의 굴피나무 추출물, 자작나무수피 추출물 또는 차가버섯 추출물의 에틸아세테이트 분획물 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

Claims

자작나무수피 탄소수 1 내지 4의 알코올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 하고, 흡연으로 인해 유발된 폐질환 개선 예방용 식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 에탄올인 것을 특징으로 하는 폐질환 개선 예방용 식품 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서,
상기 흡연으로 인해 유발된 폐질환은 폐기종 및 만성 기관지염 중에서 선택되는 만성 폐쇄성 폐질환인 것을 특징으로 하는 폐질환 개선 예방용 식품 조성물.
자작나무수피 탄소수 1 내지 4의 알코올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 하고, 흡연으로 인해 유발된 폐질환 치료 또는 예방용 약학 조성물.