KR101711397B1

KR101711397B1 - 가시여뀌 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품

Info

Publication number: KR101711397B1
Application number: KR1020140160717A
Authority: KR
Inventors: 김진희; 방옥선; 박종식; 김노수; 이준; 이유진; 이진무; 김기모
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2014-11-18
Filing date: 2014-11-18
Publication date: 2017-03-02
Anticipated expiration: 2034-11-18
Also published as: KR20160059177A

Abstract

본 발명은 가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물을 유효성분으로 함유하는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명의 가시여뀌 추출물은 각기 다른 기전을 가지는 다양한 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진하지 않으면서, 동시에 항암제에 의해 유도되는 골수 독성 및 조혈 독성을 효과적으로 완화하므로, 상기 가시여뀌 추출물은 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

가시여뀌 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품{Pharmaceutical compositions and health functional foods comprising Persicaria fauriei extracts for preventing or treating anticancer agent-induced of hematopoietic toxicity}

본 발명은 가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.

암은 우리나라뿐만 아니라 미국, 일본 등에서도 사망원인 1-2 위를 다투고 있으며 특히 대형병원 사망률의 과반수이상을 차지하고 있다(생명과학동향, 생명공학 연구소, 3: 55, 1995; 鶴尾降, 西條長壙, 암 화학적 요법, 서광서림, 351, 1991).

이러한 암의 치료에는 일반적으로 외과적 수술, 방사선 요법, 화학 요법이 가장 많이 활용되고 있다. 그 중 화학적 요법으로서의 항암제 개발은 생명과학관련 기술개발연구의 가장 핵심을 차지하고 있으며, 다양한 종류의 암세포를 이용한 시도가 많았지만, 현재까지 진정한 의미의 치료제로서의 항암제는 없는 상태이고 단지 보조치료제 내지는 단기간의 생명연장을 돕는 정도의 약제밖에는 개발되지 못한 상태이다. 또한, 방사선 요법과 화학 요법은 그 독성 및 부작용으로 인한 환자의 삶의 질 저하 문제가 심각한 상황이며, 이는 현재의 치료법이 정상세포와 암세포를 선택적으로 명확히 구분하여 치료하지 못하기 때문이다. 방사선 요법 또는 화학적 요법은 암세포에만 선택적으로 작용하는 것이 아니라 정상 세포, 특히 세포 분열이 활발한 골수조직, 위장점막조직 등에 손상을 입히기 때문에, 가장 빈도가 높은 부작용으로 골수조혈장애, 위장장애, 탈모증 등의 부작용을 수반한다.

최근에는 화학요법과 방사선 요법의 부작용을 감소시키고 암치료율을 높이기 위한 방법으로 한약에 대한 관심이 증대되어 동서의학의 결합에 의한 치료법이 활발하게 연구되고 있다. 이에 따라, 감초 추출물이 항암제인 독소루비신(doxorubicin)에 의해 유도되는 심혈관계 독성(cardiotoxicity)을 완화시키는 효과(Choi HJ, et al. Exp Biol Med(2008) 233: 1554-1560) 및 한약재 혼합 추출물인 가미홍화탕의 플루오로우라실(Fluorouracil)에 의한 조혈독성을 억제하는 효과 및 안전성에 관한 연구(GA Moon, et al. Kor. J. Pharmacogn.(2004) 35(2): 122-127)가 보고된 바 있다.

이뿐 아니라, 대한민국 등록특허 10-0697212 호에서는 황기 및 당귀의 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 하는, 항암제 투여에 의해 유발되는 부작용 치료용 조혈 촉진제에 관하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-1398076 호에서는 계란 또는 대두에서 분리된 포스파티딜콜린을 유효성분으로 포함하는 항암제의 독성 감소용 조성물에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 등록특허 10-0501039 호에서는 시스플라틴(cisplatin) 항암제의 신장 독성, 조혈면역 독성, 소화기 독성을 억제하는 잎새버섯(Grifola frondasa)의 추출물을 개시하고 있다.

그러나, 다양한 기전을 가지는 항암제로 인해 유발되는 조혈 독성에 대해, 동시에 억제 효과를 나타내는 생약 및 치료제에 관련하여는 아직까지 보고된 바 없으므로, 이러한 약물 후보물질을 탐색하여 항암 치료의 부작용 개선을 위한 조성물로 사용하기 위한 연구가 계속 요구되고 있다.

가시여뀌(Persicaria fauriei)는 여뀌속(persicaria)에 속하는 식물의 종류로서, 한국의 산지 나무그늘에서 자라는 1년생 초본이다. 여뀌속의 식물들은 뿌리를 포함한 모든 부분을 약재로 쓸 수 있으며, 지혈, 소종의 효능이 있어, 이질, 설사, 장출혈, 각기, 월경과다, 월경이 멈추지 않는 증세, 타박상 등의 치료에 사용되는 것으로 알려져 있으나, 가시여뀌에 관한 약리 활성은 아직까지 보고된 바가 없다.

이에, 본 발명자들은 약용 식물로부터 항암제에 의해 유도된 조혈 독성에 대한 치료제를 개발하기 위해 노력한 결과, 가시여뀌(Persicaria fauriei)의 알코올 추출물이 파클리탁셀(Paclitaxel), 이리노테칸(Irinotecan), 독소루비신(Doxorubicin) 등 다양한 기전을 가진 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성에 대해 공통적으로 완화 효과를 나타낼 뿐 아니라, 항암제가 가지는 본래의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진시키지 않으므로, 상기 가시여뀌의 알코올 추출물을 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

대한민국 등록특허 10-0697212 호 대한민국 등록특허 10-1398076 호 대한민국 등록특허 10-0501039 호

Choi HJ, et al. Exp Biol Med(2008) 233: 1554-1560 GA Moon, et al. Kor. J. Pharmacogn.(2004) 35(2): 122-127 Mai et al. Advanced Pharmaceutical Bulletin, 2012, 2(1), 107-114

본 발명의 목적은, 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진시키지 않으면서, 동시에 항암제에 의해 유도되는 골수 독성 및 조혈 독성을 완화시킬 수 있는, 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적으로 달성하기 위해, 본 발명은 가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물을 유효성분으로 함유하는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가시여뀌 추출물을 유효성분으로 함유하는 조혈 독성의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물은 각기 다른 기전을 가지는 다양한 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진하지 않으면서, 동시에 항암제에 의해 유도되는 골수 독성 및 조혈 독성을 효과적으로 완화하므로, 상기 가시여뀌 추출물은 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 다양한 항암제를 처리한 배지에서 조혈모 세포의 세포 생존 정도를 확인한 도이다.
도 2는 다양한 농도의 가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물이 골수세포 증식에 나타내는 효과를 확인한 도이다.
도 3은 가시여뀌 추출물을 처리하여 배양된 조혈모 세포의 집락군(colony)를 나타낸다.
도 4는 가시여뀌 추출물이 항암제에 의한 골수 세포의 성장 저해를 완화시키는 효과를 나타내는지 확인한 도이다.
도 5는 가시여뀌 추출물이 암세포에 처리한 항암제의 항암활성에 미치는 영향을 확인한 도이다.

이하, 본 발명의 용어를 정의한다.

본 발명에서 사용된 용어 “조혈 독성”은 조혈 기능 장애, 특히 조혈 장애 또는 적혈구 또는 면역계 세포, 예컨대 백혈구의 기능 장애를 초래하는, 조혈 시스템의 기관 또는 세포의 손상 또는 장애에 대한 것이다. 바람직하게는, 골수에서의 조혈 또는 면역계의 기능이 조혈 독성에 의해 영향을 받는다. 따라서, 상기 조혈 독성은 일반적으로 골수 독성, 빈혈 및 호중구 감소증을 포함하는 것이 바람직하며, 구체적으로 화학적 화합물 또는 약물의 투여에 의해 유도되거나 그러한 투여의 결과인 것이 보다 바람직하다. 본 발명에 있어서, 상기 화학적 화합물 또는 약물은 항암제인 것이 바람직하다.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.

본 발명은, 가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물을 유효성분으로 함유하는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₂의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것이 바람직하며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 바람직하다.

상기 가시여뀌 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

1) 가시여뀌에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하는 단계.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 가시여뀌는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 가시여뀌는 가시여뀌의 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 또는 꽃을 포함하는 가시여뀌 전초의 모든 부분일 수 있다.

상기 방법에 있어서, 가시여뀌 추출물의 추출 방법으로는 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류냉각 추출 및 초음파추출 등 당업계의 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 건조된 가시여뀌 분량의 2 내지 20 배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20 내지 50℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 100 시간인 것이 바람직하며, 구체적으로 24 내지 96 시간이 더욱 바람직하고, 보다 구체적으로 72 시간이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 조혈 독성은 항암제에 의해 유도되는 것이 바람직하고, 상기 항암제는 항종양 항생제(antitumor antibiotics), 위상이성질화효소 억제제(topoisomerase inhibitor), 또는 택산(taxane)계 약물을 포함하나 이에 한정되지 않으며 임상, 약학, 생의학적으로 사용 가능한 모든 항암제를 포함한다.

상기 항종양 항생제는 액티노마이신 D(actinomycin D), 블레오마이신 설페이트(bleomycin sulfate), 다우노마이신(daunomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 아이다루비신(idarubicin), 미토마이신(mitomycin), 미토마이신-C(mitomycin-C) 및 미트라마이신(mitramycin)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것이 바람직하며, 구체적으로 독소루비신 인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 위상이성질화효소 억제제는 이리노테칸(irinotecan), 캠프토테신(camptothecin), 노보비오신(novobiocin), 에피루비신(epirubicin), 닥티노마이신(dactinomycin), 암사크린(amsacrine), 테니포시드(teniposide) 및 에토포시드(etoposide)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것이 바람직하며, 구체적으로 이리노테칸인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 택산계 약물은 파클리탁셀(paclitaxel) 또는 도세탁셀(docetaxel) 중 어느 하나 또는 둘 다인 것인 것이 바람직하며, 구체적으로 파클리탁셀인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 현재 사용되고 있는 다양한 항암제가 나타내는 조혈독성을 확인한 결과, 다양한 기전을 가진 항암제에서 공통적으로 조혈 독성을 나타내는 것을 확인하였다(도 1 참조).

또한, 본 발명자들은 가시여뀌 메탄올 추출물을 제조하여 골수세포 증식에 나타내는 효과를 확인한 결과, 가시여뀌 메탄올 추출물을 처리하였을 때 조혈모 세포의 증가 경향 및 집락군(colony)의 크기가 커진 것을 확인하였다(도 2 및 도 3 참조).

또한, 본 발명자들은 가시여뀌 추출물이 항암제에 의한 골수 세포의 성장 저해를 완화시키는 효과를 나타내는지 확인한 결과, 골수 독성을 유발하는 농도의 항암제를 처리한 경우에서 가시여뀌 메탄올 추출물에 의해 조혈모 세포의 집락군이 유의적으로 증가하는 것을 확인하였으며(도 4 참조), 이에 반해 가시여뀌 메탄올 추출물은 항암제를 처리한 암세포주에 대하여 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진하지 않는 것을 확인하였다(도 5 참조).

따라서, 본 발명의 가시여뀌 추출물은 각기 다른 기전을 가지는 다양한 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진하지 않으면서, 동시에 항암제에 의해 유도되는 골수 독성 및 조혈 독성을 효과적으로 완화하므로, 상기 가시여뀌 추출물은 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제 또는 좌제 등이 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여시 피부외용 또는 복강내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 피부외용으로 사용한다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 가시여뀌 추출물의 양을 기준으로 0.01 내지 1000 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 500 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 300 ㎎/㎏이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 화학 치료를 사용하는 방법으로서 항암제와 함께 병용하여 사용하는 것이 바람직하나, 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

상기 추출물은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것이 바람직하다.

상기 조혈 독성은 항암제에 의해 유도되는 것이 바람직하고, 상기 항암제는 항종양 항생제, 위상이성질화효소 억제제 또는 택산계 약물을 포함하나 이에 한정되지 않으며 임상, 약학, 생의학적으로 사용 가능한 모든 항암제를 포함한다.

본 발명의 가시여뀌 추출물은 각기 다른 기전을 가지는 다양한 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진하지 않으면서, 동시에 항암제에 의해 유도되는 골수 독성 및 조혈 독성을 효과적으로 완화하므로, 상기 가시여뀌 추출물은 항암제 유도 조혈 독성의 예방 및 개선용 건강기능식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, “건강기능식품”이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분 (기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품으로 식품 의약품 안전처장이 정한 것을 의미하나, 이에 한정되지 않으며 통상적인 의미의 건강식품을 모두 포함하는 의미로 사용한다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 상기 건강기능식품은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조, 가공될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 법률에 따라 어떤 형태로든지 제조, 가공될 수 있다.

본 발명의 가시여뀌 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 가시여뀌 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 가시여뀌 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 가시여뀌 추출물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 가시여뀌 ( Persicaria fauriei ) 추출물의 제조

<1-1> 가시여뀌 메탄올 추출물의 제조

본 발명의 실험예를 수행하기 위하여, 가시여뀌의 열수 추출물을 제조하였다.

구체적으로, 가시여뀌를 건조하여 분쇄한 후, 열수로 추출하고 감압농축하여 가시여뀌 메탄올 추출물을 수득하였다.

<1-2> 가시여뀌 메탄올 추출물의 제조

가시여뀌를 건조하여 분쇄한 후, 99.9% 메탄올로 추출하고 감압농축하여 가시여뀌 메탄올 추출물을 수득하였다.

< 실험예 1> 다양한 항암제의 조혈모 세포에 대한 세포독성의 확인

현재 사용되고 있는 다양한 항암제가 나타내는 조혈독성을 확인하기 위하여, 항암제를 처리한 배지에서 조혈모 세포의 세포 생존 정도를 확인하였다.

구체적으로, 마우스의 대퇴골(femur)로부터 골수 세포(myelocyte)를 분리하였다. 그런 다음, 쥐 유래의 재조합 줄기 세포 인자(recombinant murine stem cell factor, rm stem cell factor), rm IL-3, 인간 유래의 재조합 IL-6(recombinant human IL-6, rh IL-6) 및 rh 에리스로포이에틴(rh Erythropoietin)을 포함하는 메도컬트 GF M3434(methocult GF M3434) 배지에 하기 [표 1]에 나타난 바와 같은 항암제를 각각 첨가하고, 상기 분리한 골수 세포를 7 일간 배양하면서 조혈모 세포의 성장을 유도하였다. 7 일 후, 성장한 조혈모 세포를 수득하고, 콜로니 형성 유닛 분석(Colony Formin Unit assay, CFU assay)를 수행하여 항암제가 조혈모 세포의 성장 및 분화에 미치는 영향을 관찰하였다.

조혈모 세포에 대한 세포독성의 확인하기 위한 항암제 및 이의 농도

항암제(농도)
파클리탁셀(nM)	이리노테칸(μM)	독소루비신(μM)
0.0	0.0	0.0
1.0	1.0	0.1
3.0	5.0	0.5
10.0	10.0	1.0
50.0	50.0	5.0
100.0	100.0	10.0

그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 파클리탁셀(Paclitaxel), 이리노테칸(Irinotecan), 독소루비신(Doxorubicin) 등 다양한 기전을 가진 항암제에서 공통적으로 조혈 독성을 나타내는 것을 확인하였다(도 1).

< 실험예 2> 가시여뀌 메탄올 추출물의 골수세포 증식 촉진 효과의 확인

가시여뀌 메탄올 추출물이 골수세포 증식에 나타내는 효과를 확인하기 위하여, 가시여뀌 메탄올 추출물을 처리한 배지에서 골수세포를 배양하고 이를 관찰하였다.

구체적으로, 마우스의 대퇴골로부터 골수 세포를 분리하였다. 그런 다음, rm stem cell factor, rm IL-3, rh IL-6 및 rh 에리스로포이에틴을 포함하는 메도컬트 GF M3434 배지에, 상기 <실시예 1>에서 제조한 가시여뀌 메탄올 추출물을 25, 50 또는 100 ㎍/㎖의 농도로 각각 첨가하고, 상기 분리한 골수 세포를 7 일간 배양하면서 조혈모 세포의 성장을 유도하였다. 7 일 후, 성장한 조혈모 세포를 수득하여, CFU 분석을 수행하여 조혈모세포의 성장을 확인하였다. 음성 대조군으로는, 가시여뀌 메탄올 추출물 대신 0.5% DMSO가 포함된 PBS를 용매(vehicle)로서 처리하고 상기와 동일한 방법을 수행하였다.

그 결과, 도 2 및 도 3에서 나타난 바와 같이, 마우스의 골수 세포에 다양한 농도의 가시여뀌 메탄올 추출물을 처리하였을 때, 생성된 집락군(colony)의 수에는 큰 차이를 나타내지 않았으나(도 2), 생성된 CFU의 크기가 처리 농도에 비례하여 증가하는 것을 관찰하였다(도 3).

< 실험예 3> 항암제로 인해 유도된 골수독성에 대한 가시여뀌 메탄올 추출물의 완화 효과 확인

가시여뀌 추출물이 항암제에 의한 골수 세포의 성장 저해를 완화시키는 효과를 나타내는지 확인하기 위해, 마우스의 골수세포에 골수 독성을 유발하는 정도의 농도의 항암제와 함께 다양한 농도의 가시여뀌 메탄올 추출물을 처리하였다.

구체적으로, 상기 <실험예 2>와 동일한 구성을 포함하는 GF M3434 배지에 50 nM의 파클리탁셀, 10 μM의 이리노테칸 또는 100 nM의 독소루비신을 가한 후, 마우스의 대퇴골로부터 분리한 골수 세포를 7 일 동안 배양하면서 조혈모 세포의 성장을 유도하고, CFU 분석을 수행하여 조혈모 세포의 성장을 확인하였다. 음성 대조군으로는, 항암제를 포함하지 않은 배지에 가시여뀌 메탄올 추출물 대신 0.5% DMSO가 포함된 PBS를 용매(vehicle)로서 처리하고 상기와 동일한 방법을 수행하였다.

그 결과, 도 4에서 나타난 바와 같이 가시여뀌 추출물을 처리하여 조혈모세포의 성장을 유도하였을 때, 생성된 조혈모 세포의 집락군(colony)의 수가 통계적으로 유의하게 회복되는 현상을 나타내는 것을 통해, 항암제의 작용 기전과는 상관없이 가시여뀌 추출물이 골수 독성 완화 효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 4).

< 실험예 4> 가시여뀌 메탄올 추출물의 항암제 유효성에 미치는 영향 확인

가시여뀌 메탄올 추출물이 항암제의 골수 독성을 완화하는 효과를 나타낸다고 하더라고, 항암제 투여 과정에서 항암제의 효능을 약화시키거나 암세포의 성장을 촉진시켜서는 안되기 때문에, 가시여뀌 메탄올 추출물이 항암제의 항암활성에 미치는 영향을 확인하였다.

구체적으로, 인간 유래의 폐암 세포주인 A549을 미국세포주은행(American Type Culture Collection, ATCC; 고유번호: CLL-185)로부터 구입하여, 96-웰 플레이트에 5×10³개의 암세포를 100 ㎕의 적당한 배양 배지와 함께 분주한 후, 24 시간 동안 5% CO₂ 의 가습 배양기(humidified incubator)에서 배양하였다. 배양 후, 5, 10, 25, 50 또는 100 ㎍/㎖의 가시여뀌 추출물을 상기 배양 배지에 첨가하고, 항암제로서 50 nM의 파클리탁셀, 100 nM의 파클리탁셀, 10 μM의 이리노테칸, 50 μM의 이리노테칸, 500 nM의 독소루비신 또는 1 μM의 독소루비신을 처리한 다음, 48 시간 동안 추가 배양하였다. 48 시간 후, 배양 배지를 제거하고, 100 ㎕의 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카복시메톡시페닐)-2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸리움 염(MTS, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium salt) 용액을 첨가하여 1 내지 3 시간 동안 반응한 후, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성 대조군으로는, 항암제 및 가시여뀌 추출물을 모두 첨가하지 않은 배지에서 상기 방법과 동일한 방법으로 배양한 A549 세포를 대상으로 하였으며, 음성 대조군의 흡광도 측정값을 기준으로 하고, 이에 대한 상대 생장기수(relative proliferation index)를 측정하였다. 양성 대조군으로는 가시여뀌 추출물을 첨가하지 않고, 항암제만을 처리한 배양 배지에서 상기 방법과 동일한 방법으로 A549 세포를 배양하였다.

그 결과, 도 5에서 나타난 바와 같이, 항암제를 처리한 배지 모두에서 암세포의 생존률이 감소하는 것을 확인하였으며, 이러한 감소는 가시여뀌 추출물의 처리 유무와 관계없이 나타나, 가시여뀌 메탄올 추출물이 항암제의 항암활성을 억제하지 않는 것을 확인하였다(도 5).

< 제조예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.1 g

유당 1.5 g

탈크 0.5 g

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.1 g

락토오스 7.9 g

결정성 셀룰로오스 1.5 g

마그네슘 스테아레이트 0.5 g

상기의 성분들을 혼합한 후 직타법(direct tableting method)으로 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.1 g

옥수수전분 5 g

카르복시 셀룰로오스 4.9 g

상기의 성분들을 혼합하여 분말을 제조한 후, 상기 분말을 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라 경질 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 주사제의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.1 g

주사용 멸균 증류수 적량

pH 조절제 적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.

<1-5> 액제의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.1 g

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합하였다. 그 다음 정제수를 가하여 전체 100 로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.

< 제조예 2> 건강식품의 제조

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이를 혼합한 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙( gravies )의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-4> 유제품( dairy products )의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 가시여뀌 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및, 본 발명의 가시여뀌 추출물을 하기의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

본 발명의 가시여뀌 추출물(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

<2-6> 건강보조식품의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 100 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

< 제조예 3> 건강 음료의 제조

본 발명의 가시여뀌 추출물 100 ㎎

구연산 100 ㎎

올리고당 100 ㎎

매실농축액 2 ㎎

타우린 100 ㎎

정제수를 가하여 전체 500 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

가시여뀌(Persicaria fauriei) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 가시여뀌 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것을 특징으로 하는 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
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제1항에 있어서, 상기 항암제는 액티노마이신 D(actinomycin D), 블레오마이신 설페이트(bleomycin sulfate), 다우노마이신(daunomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 아이다루비신(idarubicin), 미토마이신(mitomycin), 미토마이신-C(mitomycin-C) 및 미트라마이신(mitramycin) 중에서 선택된 하나 이상의 항종양 항생제(antitumor antibiotics); 이리노테칸(irinotecan), 캠프토테신(camptothecin), 노보비오신(novobiocin), 에피루비신(epirubicin), 닥티노마이신(dactinomycin), 암사크린(amsacrine), 테니포시드(teniposide) 및 에토포시드(etoposide) 중에서 선택된 하나 이상의 위상이성질화효소 억제제(topoisomerase inhibitor); 또는 파클리탁셀(paclitaxel) 및 도세탁셀(docetaxel) 중에서 선택된 하나 이상의 택산(taxane)계 약물인 것을 특징으로 하는 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
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가시여뀌 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성의 예방 및 개선용 건강기능식품.
제9항에 있어서, 상기 가시여뀌 추출물은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것을 특징으로 하는 항암제에 의해 유도되는 조혈 독성의 예방 및 개선용 건강기능식품.
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