KR101766274B1 - 초위성체 마커를 이용한 블루베리 품종식별 방법 - Google Patents

초위성체 마커를 이용한 블루베리 품종식별 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 초위성체 프라이머 세트를 이용한 블루베리 품종식별 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 국내에서 수집된 블루베리 31개 품종에 대해 다형성을 보이는 블루베리 품종식별용 초위성체 프라이머 세트를 이용한 블루베리 품종의 식별방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 프라이머 세트를 블루베리 품종식별용 초위성체 마커로 사용함으로써, 블루베리 품종의 진위성 규명, 종자 분쟁의 중재 및 품종보호 출원품종의 대조품종 선정 등과 같은 여러 분야에 크게 기여할 수 있다.

Description

초위성체 마커를 이용한 블루베리 품종식별 방법{A method for identifying blueberry varieties using microsatellites markers}
초위성체 마커를 이용한 블루베리의 품종식별 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 블루베리 품종을 식별하기 위한 초위성체 프라이머 세트, 상기 프라이머 세트를 포함하는 키트, 및 상기 프라이머 세트를 이용한 블루베리 품종의 식별 방법에 관한 것이다.
DNA 마커는 게놈상에서 다형성 여부를 판단할 수 있는 특정 염기서열 단편으로 작물 육종분야에서 형질과 연관된 마커의 개발과 이를 이용한 marker assisted selection (MAS), 유전자 지도 작성, 양적 형질 유전자좌 분석, 순도 검정, 유전적 다양성 분석 및 품종식별 등의 분야에 활용되고 있다.
일반적으로 식물 품종을 식별하는 방법은 크게 재배시험을 통한 형태적 특성 검정과 DNA 분석 방법으로 나뉜다. DNA 분석 방법은 표현형에 근거한 식별방법에 비해 재배환경 및 작물의 생장단계에 영향을 받지 않아 객관적이며 재현성 또한 높다는 장점이 있다. 국제 신품종보호연맹(UPOV)은 DNA 마커를 신품종의 특성조사와 식물 신품종보호권 부여에 활용하기 위한 논의를 진행 중이며, 아직까지 유전자 수준에서 단순한 염기서열 차이를 품종의 구별성으로 인정하고 있지는 않으나, 품종식별을 위한 분자표지의 활용 가능성을 제안하고 있다. 구체적으로 분자표지 종류 중 품종간 다형성 정도, 분석의 재현성, 염색체상의 분포 정도를 고려할 때 SSR(Simple Sequence Repeat), SNP(Single Nucleotide Polymorphism) 방법을 활용하는 것을 제안하고 있다.
블루베리는 2012년 1월 7일부터 품종보호 대상작물로 지정된 작물로서 국내 신품종의 육성이 시급하고, 품종보호 출원 및 등록된 품종의 식별과 품종확인 요구도가 높은 작물 중 하나이다. 2015년 4월 30일 기준으로 국립종자원에 신품종 보호 출원되어 품종보호 등록된 품종수는 11 품종으로 외국으로부터 국내에 출원되는 블루베리 품종수는 증가하고 있다. 블루베리의 품종검정을 위해서는 재배시험을 수행해야 하며 재배시험시 재배 환경의 영향을 받고, 특성검정에 시간이 소요되기에 분자표지를 이용한 육종과 품종식별 방법 개발의 중요성이 증대되고 있다.
따라서 본 발명에서는 국내에서 수집된 블루베리 품종을 대상으로 품종식별에 적합한 초위성체 분자표지의 선발과 이를 이용한 품종식별 체계를 확립하고자 하였다.
본 발명은 블루베리 품종식별용 프라이머 세트를 제공한다.
본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 블루베리 품종식별용 키트를 제공한다.
본 발명은 상기 프라이머 세트를 이용하여 블루베리의 품종을 식별하는 방법을 제공한다.
본 발명은 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-1 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-2 프라이머 세트; 서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-3 프라이머 세트; 서열번호 7 및 8의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-4 프라이머 세트; 서열번호 9 및 10의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-5 프라이머 세트; 서열번호 11 및 12의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-6 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 14의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-7 프라이머 세트로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트 (이하 'BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 하나 이상의 프라이머 세트'라고도 함)를 포함하는, 블루베리 품종을 식별하기 위한 프라이머 세트를 제공한다.
상기 프라이머 세트는 국내에서 유통되는 블루베리 품종에 대해 높은 다형성을 나타낼 수 있다. 따라서, 상기 프라이머 세트는 블루베리 품종을 식별하기 위해 이용될 수 있다. 상기 프라이머 세트는 예를 들면, 하기 표 2에 기재된 블루베리 품종을 식별하기 위해 이용되는 것일 수 있다.
상기 프라이머 세트는 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 또는 6개 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다. 상기 프라이머 세트는 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트를 모두 포함할 수 있다. 본 발명의 서열번호 1 내지 서열번호 14의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 7쌍의 프라이머 세트를 하기 표 1에 나타내었다. 본 명세서에서 '마커'는 각 프라이머 세트를 통해 얻어진 증폭 산물 또는 각 프라이머 세트 자체를 의미하는 것일 수 있다.
서열번호 SSR 프라이머 서열 형광라벨
1 BLM-1 정방향: TTTTGGGTGCCCTGGTGATT NED
2 역방향: ATCTTCTCCTCCTCCGCCTT 　
3 BLM-2 정방향: GCATTCAATGGGATGCGGTC VIC
4 역방향: TGAGAGGGCCTAGTTTCTGC 　
5 BLM-3 정방향: TCAAGCAAATTGGAACGGAGA NED
6 역방향: CGCTGCAATATGTGTGCTCC 　
7 BLM-4 정방향: TCCTTCAACACAAGCAGCCA FAM
8 역방향: CACGGTGTCGAAGGTTGAA 　
9 BLM-5 정방향: CAAGCAGTCCCTCCGAAAGT PET
10 역방향: TCACCAAAGAGAATCCTGGGC 　
11 BLM-6 정방향: AAGCATGTATTCCCAGGCCC VIC
12 역방향: TCCAAACAGGCTACCGGAAC 　
13 BLM-7 정방향: GCCTTCGGTTTTTGGCATGT FAM
14 역방향: TGGTGAGGCAGCTGAAGAAG 　
상기 프라이머 세트를 구성하는 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트(phosphorothioate) 또는 알킬포스포로티오에이트와 같은 뉴클레오티드 유사체(analogue), 펩티드 핵산(peptide nucleic acid) 또는 삽입 물질(intercalating agent)을 포함할 수 있다. 상기 올리고뉴클레오티드는 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 표지 물질을 더 포함할 수 있다. 상기 형광 표지 물질은 VIC, NED, FAM, PET, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 표지 물질은 상기 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 표지될 수 있다. 또한, 방사성 표지 물질은, 32P 또는 35S 와 같은 방사성 동위원소가 첨가된 PCR 반응액을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭 산물에 혼입될 수 있다.
또한, 본 발명은 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 하나 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 블루베리 품종식별용 키트를 제공한다. 상기 키트는 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 또는 6개 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다. 상기 키트는 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트를 모두 포함할 수 있다.
상기 키트는 DNA 중합 효소, dNTP 및 PCR 완충용액을 더 포함할 수 있다. 또한, PCR 반응 또는 증폭 산물의 확인에 필요한 구성 성분이 상기 키트에 추가로 포함될 수 있다. 상기 PCR 완충용액은 KCl, Tris-HCl 및 MgCl2를 함유할 수 있다. 상기 키트는 안내서를 포함할 수 있다. 안내서는 키트 사용법, 예를 들면, PCR 완충액 제조 방법, 제시되는 반응 조건 등을 설명하는 인쇄물이다. 안내서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함한다. 또한, 안내서는 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함한다.
또한, 본 발명은 블루베리로부터 유래된 게놈 DNA를 주형으로 하고 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 하나 이상의 프라이머 세트를 프라이머로 사용하여 핵산을 증폭하는 단계; 및 얻어진 증폭 산물로부터 상기 블루베리의 품종을 결정하는 단계를 포함하는, 블루베리 품종을 식별하는 방법을 제공한다.
상기 게놈 DNA는 상기 블루베리의 잎, 열매, 줄기, 또는 그의 조합으로부터 유래된 것일 수 있다. 상기 게놈 DNA는 식물체로부터 DNA를 채취하는 통상적인 방법을 이용하여 수득될 수 있다. 상기 게놈 DNA는 예를 들면, 페놀 추출 방법을 이용하여 수득될 수 있다.
상기 방법에서, 핵산의 증폭은 PCR을 이용하여 수행될 수 있다. 상기 증폭은 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 상기 블루베리 품종의 식별에 필요한 최소한의 프라이머 세트를 이용하여 수행될 수 있다. 상기 증폭에 사용되는 프라이머는 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 또는 6개 이상일 수 있다. 상기 증폭은 BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트를 모두 이용하여 수행되는 것일 수 있다. PCR 방법에 대해서는 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수 있다. PCR 반응은 당업계에 PCR 반응에 필요한 것으로 알려진 여러 성분을 포함하는 PCR 반응액을 이용하여 수행될 수 있다. 상기 PCR 반응액은 예를 들면, 분석하고자 하는 블루베리로부터 유래된 게놈 DNA, 본 발명의 프라이머 세트, DNA 중합효소(예를 들면, Taq polymerase), dNTP 혼합물, PCR 완충용액 및 물을 포함하는 것일 수 있다.
상기 방법은, 얻어진 증폭 산물을 DNA 칩, 겔 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 겔 전기영동을 통해 검출할 경우, 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다. 형광 측정을 통해 검출할 경우, 형광 물질로 표지된 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행한 후 형광 측정기를 이용하여 형광을 측정할 수 있다. 방사성 측정을 통해 검출할 경우, 방사성 물질을 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 가이거 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)와 같은 방사성 측정기를 이용하여 방사성을 측정할 수 있다.
상기 방법에서, 얻어진 증폭 산물로부터 상기 블루베리의 품종을 결정하는 단계는, 얻어진 증폭 산물을, BLM-1 내지 BLM-7 프라이머 세트 중 하나 이상의 프라이머 세트에 의해 공지된 블루베리 품종의 핵산을 증폭한 결과와 비교함으로써 수행되는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 증폭된 산물로부터 블루베리 품종을 결정하는 단계는 자동 염기서열 분석기를 이용하여 증폭 산물(피크)의 크기를 컴퓨터 프로그램에 의해 확인함으로써 수행되는 것일 수 있다. 예를 들면, 공지된 블루베리 품종에 대하여 본 발명의 프라이머 세트를 통해 증폭된 산물(각 대립유전자에 해당함)의 유무를 미리 하나의 표로 정리한다. 구체적으로, 대립유전자가 존재할 때에는 "1"로 나타내고 대립유전자가 존재하지 않을 때에는 "0"으로 나타낸다. 품종을 식별하고자 하는 블루베리로부터 게놈 DNA를 분리한 후, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 증폭하고 증폭된 산물의 크기를 분석한 다음, 이 분석 결과를 상기 공지된 블루베리 품종의 핵산을 증폭한 결과와 통계 프로그램을 이용하여 비교함으로써 블루베리의 품종을 결정할 수 있다.
본 발명에 따른 블루베리 품종 식별용 프라이머 세트는 여러 블루베리 품종에 대한 식별능이 우수하여, 블루베리 품종의 진위성 규명, 분쟁종자대비시험 및 품종보호 출원품종의 대조품종 선정 등과 같은 여러 분야에 활용될 수 있다.
도 1a 및 1b는 블루베리 31개 품종을 대상으로 본 발명에 따른 블루베리 품종식별용 프라이머 세트를 사용하여 확인된 대립유전자의 유무를 코드화한 결과를 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 블루베리 품종식별용 프라이머 세트에 의해 분석된 각 블루베리 품종의 유전적 유사도를 나타낸다.
본 발명은 하기 실시예에 의하여 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 블루베리 품종식별을 위한 마커의 평가
(1) 블루베리 시료
블루베리 품종식별 가능성 검정을 위해 하기 표 2에 기재된 블루베리 31개 품종을 이용하였다.
번호 품종명 번호 품종명
1 휴론 17 드래퍼
2 대로우 18 오로라
3 탑햇 19 콜린스
4 스파르탄 20 엘리자베스
5 레가시 21 블루타
6 스타 22 저지
7 리버티 23 얼리블루
8 핑크레모네이드 24 블루제이
9 웨이마우스 25 찬들러
10 카멜리아 26 코빌
11 알라파하 27 노스블루
12 레벨 28 블루골드
13 수지블루 29 넬슨
14 버논 30 오닐
15 블루크럽 31 엘리오트
16 테라스블루베리치쿠시스바루 　
(2) 블루베리 게놈 DNA 의 분리
상기 표 2에 기재된 블루베리 품종의 잎을 채취하여 2 ㎖ Eppendorf 튜브에 텅스텐 구슬 2개를 넣고 분쇄기(FRITSCH, Germany)에 돌려 종자를 고르게 마쇄하였다. 이어 NucleoSpin®PlantⅡ (Macherey-Nagel Cat. 740 770.250) 키트를 이용하여 게놈 DNA를 분리하였다. 추출된 게놈 DNA를 2% 아가로스 겔에서 전기영동하여 DNA의 농도를 확인하고, 정량한 후 PCR 분석을 위해 냉동고(-20℃)에서 보관하였다.
(3) 프라이머 세트의 제작
블루베리 품종식별에 효율적인 분자표지를 선발하기 위하여 '휴론', '리버티', '레벨', '수지블루', '드래퍼', '엘리자베스', '알라파하', 및 '카멜리아' 품종으로부터 분리된 DNA와 차세대염기서열분석기법을 통해 신규 개발된 148개의 프라이머 세트를 이용하여 증폭한 다음, 밴드 패턴이 단순, 깨끗하며 다형성을 보이는 14개의 마커를 선발하였다. 이들 14개의 분자표지에 대하여, 형광 발생 물질 VIC, NED, FAM 및 PET 중 하나로 형광 표지된 올리고뉴클레오티드를 제작하여 정방향 프라이머로 이용하였다. 자동 염기서열 분석기(Genetic Analyzer 3130XL, Applied Biosystems)를 통한 분석 결과, 상기 31개의 블루베리 품종에 대하여 재현성이 높고 밴드의 패턴이 깨끗하면서 다형성 정도가 높은 7개의 마커를 선정하였다. 선정된 7쌍의 프라이머 세트를 상기 표 1에 나타내었다.
(4) PCR 증폭 및 전기영동
상기 31개의 블루베리 품종으로부터 분리된 게놈 DNA 및 7쌍의 프라이머 세트를 이용한 PCR 증폭 및 전기영동을 수행하였다.
PCR 반응액은 블루베리 게놈 DNA 20 ng, 10 pmol의 정방향 및 역방향 프라이머 세트, 2.0 ㎕ dNTP 혼합물(2.5 mM), Taq DNA polymerase 1U(GeNet bio, Korea), 2.5 ㎕의 10X PCR 완충용액(50 mM KCl, 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2.0 mM MgCl2)에 증류수를 첨가하여 제조하였고, 전체 부피를 25 ㎕로 조절하였다. PCR(Biometra, Germany) 증폭은 94℃에서 4분 동안 블루베리 게놈 DNA를 충분히 변성시킨 다음, 94℃에서 변성 30초, 55℃에서 어닐링 30초, 72℃에서 신장 45초를 40회 반복 수행하고, 최종 신장을 위하여 72℃에서 신장 10분을 수행하였다. PCR 완료 후, 2% 아가로스 겔에서 전기영동하여 증폭 여부를 확인하였다. 증폭된 시료들은 다음 실험을 위해 4℃ 냉장고에서 보관하였다. 증폭된 시료를 멸균된 증류수 220 ㎕에 적정 농도로 희석한 다음, 희석된 1 내지 3 ㎕의 PCR 산물을 탈이온 포름아마이드(deionized formamide) 10 ㎕, 사이즈 마커 (LIZ500 size standard) 0.25 ㎕와 잘 혼합하여 섞고 94℃에서 2분간 변성시켰다. 변성시킨 증폭 산물을 자동 염기서열 분석기를 통해 전기영동하였다. GeneMapper 컴퓨터 프로그램 (Applied Biosystems)을 이용하여 각 분자표지별 대립유전자의 정확한 크기를 결정하였다.
(5) 본 발명에 따른 마커의 블루베리 품종식별 가능성 검정
본 발명에 따른 마커의 블루베리 품종식별 가능성을 조사하였다. 하기 식 1을 사용하여 PIC(polymorphism information content)값을 산출하였다. 하기 식 1에서 K는 각 대립유전자의 총 밴드수이며 Pi는 마커의 밴드 중에서 i 번째 공통 밴드패턴의 빈도수를 나타낸다 (Anderson et al. 1993).
<식 1>
Figure 112015056376906-pat00001
마커별 어닐링 온도(℃), 증폭 산물의 크기(bp), 대립유전자의 수 및 PIC 값을 하기 표 3에 나타내었다.
연번 마커명 반복염기서열 어닐링 온도
(℃) 		증폭 산물의 크기(bp) 대립유전자의 수 PIC
1 BLM-1 (CT)8 55 142-220 6 0.696
2 BLM-2 (TAAT)6 55 313-349 7 0.714
3 BLM-3 (AT)7 55 164-198 5 0.496
4 BLM-4 (TC)5 55 225-259 4 0.587
5 BLM-5 (CT)5 55 149-154 2 0.499
6 BLM-6 (AC)5 55 164-169 3 0.527
7 BLM-7 (AT)5 55 281-286 3 0.374
　 계 　 　 　 30 3.893
　 평균 　 　 　 4.3 0.556
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 블루베리 품종식별용 프라이머 세트는 서열번호 1과 2(마커명: BLM-1), 서열번호 3과 4(마커명: BLM-2), 서열번호 5과 6(마커명: BLM-3), 서열번호 7와 8(마커명: BLM-4), 서열번호 9과 10(마커명: BLM-5), 서열번호 11과 12(마커명: BLM-6) 및 서열번호 13과 14(마커명: BLM-7)의 7개 마커의 평균 PIC값은 0.556로, 본 발명의 마커를 통해 블루베리 품종의 식별이 충분히 가능함을 확인하였다.
또한, 본 발명에 따른 마커에 대해 대립유전자(밴드) 유무를 판별하여 밴드가 존재할 경우에는 점수 "1"로 코드화하고 밴드가 존재하지 않을 경우에는 "0"으로 코드화하였다.
도 1a 및 1b는 블루베리 31개 품종을 대상으로 본 발명에 따른 블루베리 품종식별용 프라이머 세트를 사용하여 확인된 대립유전자의 유무를 코드화한 결과를 나타낸다.
품종을 식별하고자 하는 블루베리로부터 게놈 DNA를 분리한 후, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 증폭하고 증폭 산물과 도 1의 결과를 비교 분석함으로써 블루베리 품종을 식별할 수 있다.
대립유전자의 유무를 NTSYS-pc(version 2.21m)(Rohlf, 2000) 컴퓨터 프로그램에 입력하고 Jaccard's 방법(Sneath and Sokal, 1973)에 준하여 유전적 유사도 값을 계산하였다. 계산된 유전적 유사도를 이용하여 UPGMA(Unweighted Pair-group Method with Arithmetical Average)(Sneath and Sokal, 1973)에 의해 집괴 분석하여 계통도(dendrogram)를 작성하고 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2는 본 발명에 따른 블루베리 품종식별용 프라이머 세트에 의해 분석된 각 블루베리 품종의 유전적 유사도를 나타낸다. 이를 통해, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 모든 품종의 구별이 가능함을 확인할 수 있었다.
<110> Korea seed and variety service <120> A method for identifying blueberry varieties using microsatellites markers <130> PN110140 <160> 14 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-1 F <400> 1 ttttgggtgc cctggtgatt 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-1 R <400> 2 atcttctcct cctccgcctt 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-2 F <400> 3 gcattcaatg ggatgcggtc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-2 R <400> 4 tgagagggcc tagtttctgc 20 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-3 F <400> 5 tcaagcaaat tggaacggag a 21 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-3 R <400> 6 cgctgcaata tgtgtgctcc 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-4 F <400> 7 tccttcaaca caagcagcca 20 <210> 8 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-4 R <400> 8 cacggtgtcg aaggttgaa 19 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-5 F <400> 9 caagcagtcc ctccgaaagt 20 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-5 R <400> 10 tcaccaaaga gaatcctggg c 21 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-6 F <400> 11 aagcatgtat tcccaggccc 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-6 R <400> 12 tccaaacagg ctaccggaac 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-7 F <400> 13 gccttcggtt tttggcatgt 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BLM-7 R <400> 14 tggtgaggca gctgaagaag 20

Claims (7)

  1. 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-1 프라이머 세트;
    서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-2 프라이머 세트;
    서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-3 프라이머 세트;
    서열번호 7 및 8의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-4 프라이머 세트;
    서열번호 9 및 10의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-5 프라이머 세트;
    서열번호 11 및 12의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-6 프라이머 세트; 및 서열번호 13 및 14의 올리고뉴클레오티드로 이루어지는 BLM-7 프라이머 세트를 포함하고, 하기의 표에 열거된 블루베리 품종 가운데 하나 이상을 식별하는 프라이머 세트
    [표]
    Figure 112017030135701-pat00005
    .
  2. 삭제
  3. 청구항 1의 블루베리 품종식별용 프라이머 세트를 포함하고, 하기의 표에 열거된 블루베리 품종 가운데 하나 이상을 식별하는, 품종식별용 키트
    [표]
    Figure 112017030135701-pat00006
    .
  4. 블루베리로부터 유래된 게놈 DNA를 주형으로 하고 청구항 1의 블루베리 품종식별용 프라이머 세트를 프라이머로 사용하여 핵산을 증폭하는 단계; 및
    얻어진 증폭 산물로부터 하기의 표에 열거된 블루베리 품종 가운데 상기 블루베리의 품종을 결정하는 단계를 포함하는, 블루베리 품종을 식별하는 방법
    [표]
    Figure 112017030135701-pat00007
    .
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 게놈 DNA는 상기 블루베리의 잎, 열매, 줄기, 또는 그의 조합으로부터 유래되는 것인, 블루베리 품종을 식별하는 방법.
  6. 청구항 4에 있어서, 얻어진 증폭 산물을 DNA 칩, 겔 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 검출하는 단계를 포함하는 것인, 블루베리 품종을 식별하는 방법.
  7. 청구항 4에 있어서, 상기 블루베리의 품종을 결정하는 단계는, 상기 얻어진 증폭 산물을, 청구항 1의 블루베리 품종식별용 프라이머 세트에 의해 하기의 표에 열거된 블루베리 품종의 핵산을 증폭한 결과와 비교함으로써 수행되는 것인, 블루베리 품종을 식별하는 방법
    [표]
    Figure 112017030135701-pat00008
    .
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