KR101719777B1 - 신규 리크테이미아 라모사 m1233 균주 및 이의 용도 - Google Patents

신규 리크테이미아 라모사 m1233 균주 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규 리크테이미아 라모사(Lichtheimia ramosa) M1233 균주와 상기 균주를 이용한 장류 및 상기 균주를 이용한 장류 생산 방법을 제공하는 것으로, 리크테이미아 라모사 M1233는 내건성이 우수하고, 넓은 온도범위에서 우수한 발효능을 나타내므로, 다양한 수분조건에서 활발한 생장을 할 것으로 예상되며, 된장의 단맛과 관련이 있는 환원당의 생성능이 우수하고, 구수한 맛과 관련이 있는 유리아미노산 생성능도 기존 발효균주에 비하여 우수하므로 리크테이미아 라모사 M1233 균주는 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 종균 균주로 활용 가능하다.

Description

신규 리크테이미아 라모사 M1233 균주 및 이의 용도{Novel Lichtheimia ramosa M1233 and use therof}
본 발명은 신규 리크테이미아 라모사(Lichtheimia ramosa) M1233 균주, 상기 균주를 이용한 장류 및 상기 균주를 이용한 장류 생산 방법을 제공하는 것이다.
메주는 우리나라 필수 조미식품인 간장, 된장, 고추장 등을 만드는 중요한 재료이며 메주의 품질에 따라 장류의 맛이 결정된다. 전통 장류의 독특한 풍미와 구수한 맛은 주로 메주 발효와 숙성과정 중에 미생물이 생성하는 효소작용에 기인한 것이다. 메주는 세균, 곰팡이, 효모와 같은 다양한 미생물에 의해 발효되는데, 그 중에서 곰팡이는 콩의 거대분자를 사람이 소화하기 쉬운 소분자로 분해하는 역할 뿐만 아니라, 세포외효소를 생성함으로써 장류의 맛과 향에 관여한다. Kim 2013 (Kim DH. 2013. Studies on mycobiota of traditional korean Meju. Ph.D. Dissertation)의 보고에 의하면 메주로부터 1479균주의 곰팡이가 분리 되었고, 이들은 26 속 101 종으로 동정되었다. 분리빈도가 높은 종은 Aspergillus oryzae, Mucor circinelloides, M. racemosus, Penicillium polonicum, Eurotium repens, Scopulariopsis brevicaulis, P. solitum, E. chevalieri, Lichtheimia ramosa 이다.
현재 국내에서 장류의 산업적 생산은 대부분 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 장류의 대량생산이 주를 이루고 있다.
관련 선행 기술로는 등록특허 제10-1284580호 "팥에 균주로서 아스퍼질러스 오리제를 접종하여 누룩 및 상기 누룩을 이용한 발효주의 제조방법", 제10-1056546호 "콩알메주를 이용하여 한국 전통 풍미를 지닌 장류 및 이의 제조방법" 및 등록특허 제10-0597953호 "이취와 풍미가 개선된 장류의 제조방법"에 관한 것이 공지되어 있다.
상기 선행들은 기존의 Aspergillus oryzae 균주를 이용하여 생산된 개량식 장류이긴 하나, 유리아미노산 생성에 대해서는 공지된 바 없으며, 구수한 맛을 내는 글루타메이트(glutamate)와 글라이신(Glycine) 등의 생산능이 낮아 일본 미소나 나또와 구분되는 우리 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖지 못하는 단점이 있다. 따라서 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 장류를 생산할 수 있는 새로운 균주의 연구가 요구되어 지고 있다.
이에, 본 발명자들은 상기 기존의 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 장류 생산방식의 문제점을 해결하고자, 장맛이 좋고 잘 발효된 것으로 장류업체 종사자들로부터 확인된 후반기 발효가 잘 진행된 메주에 있는 곰팡이를 분리 및 동정하였다. 이 균주들 중에서 리크테이미아 라모사 M1233(Lichtheimia ramosa M1233)균주가 기존의 Aspergillus oryzae와 달리 콩의 단백질을 아미노산으로 효과적으로 분해하고 특히 구수한 맛을 내는 글루타메이트와 글라이신을 많이 생산하여 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 장류를 생산할 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 우수한 풍미를 갖는 장류의 산업적 생산을 위하여, 최종 생산된 장류의 풍미를 개선시킬 수 있는 신규한 곰팡이 균주로서 리크테이미아 라모사 M1233균주, 상기 균주를 이용한 장류, 및 상기 균주를 이용한 장류 생산 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 메주에서 분리되어 서열번호 1의 염기서열로 구성된 rDNA ITS 유전자를 포함하는 기탁번호 KACC 93209P로 기탁된 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 제공하는 것이 특징이다.
본 발명의 리크테이미아 라모사 M1233 균주는 최적 생장온도가 24 ~ 40℃인 것이 특징이다.
상기 균주는 콩으로부터 단맛을 내는 환원당 생성능을 갖는 것이 특징이다.
상기 균주는 콩으로부터 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine) 생성능을 갖으며, 콩으로부터 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline)및 트레오닌(threonine) 생성능을 갖는 것이 특징이다.
또한, 본 발명은 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 이용하여 제조된 콩 발효물 및 이의 제조방법을 제공하는 것이 특징이다.
콩 발효물의 제조 방법은 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 콩에 접종한 후 발효시키는 단계를 포함하는 것이 특징이다.
상기 콩 발효물은 단맛을 내는 환원당을 갖는 것이 특징이다.
상기 콩 발효물은 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine)을 갖으며, 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline)및 트레오닌(threonine)을 갖는 것이 특징이다.
상기 콩 발효물은 메주 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장, 춘장 및 간장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것이 특징이다.
리크테이미아 라모사 M1233은 주 재료인 콩으로부터 된장의 구수한 맛과 단맛을 내는 유리아미노산과 환원당을 효과적으로 생산할 수 있어서, 기존 장류 대량생산에 사용되는 Aspergillus oryzae를 이용한 된장에 비하여 전통 풍미를 갖는 풍미가 개선된 장류를 대량으로 생산할 수 있으므로 상기 리크테이미아 라모사 M1233는 장류 제조를 위한 종균 균주로 활용할 수 있다.
도 1은 리크테이미아 라모사 M1233 균주의 형태학적 특성을 보여주는 도면이다.
A: MEA 배지상에서 집락
B: DG18 배지상에서 집락
C: 포자낭과 포자낭경 무리(해부현미경)
D: 포자낭과 포자낭경
E: 포자낭과 포자낭경
F: 포자낭포자
도 2는 리크테이미아 라모사 M1233 균주의 분자적 특징에 근거한 유연 관계도를 보여주는 도면이다.
도 3은 리크테이미아 라모사 M1233 균주 온도생장 특성 및 수분활성도를 보여주는 도면이다.
도 4는 리크테이미아 라모사 M1233 균주로 제조된 콩발효물의 총 유리아미노산 함량을 분석한 결과를 보여주는 도면이다.
도 5는 리크테이미아 라모사 M1233 균주로 제조된 콩 발효물의 각 유리아미노산의 함량을 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 메주에서 분리되어 서열번호 1의 염기서열로 구성된 rDNA ITS 유전자를 포함하는 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 제공한다.
상기 균주는 기탁번호 KACC 93209P 기탁된 균주로써 최적 생장온도가 24 ~ 40℃이며, 건조상태인 DG18 에서도 활발한 생장을 하여서 내건성(drought resistance)을 나타낸다. 따라서, 메주 후기 발효까지 활발한 생장을 할 것으로 보인다. 기존의 Aspergillus oryzae 보다 생장능이 활발하며 저온뿐만이 아니라 고온 발효 시에도 생장이 활발하여 다양한 경우에 이용 가능하다.
상기 균주는 장류의 주재료인 콩으로부터 된장의 구수한 맛과 단맛을 내는 유리아미노산과 환원당을 효과적으로 생산할 수 있다.
연구에 의하면 유리아미노산은 된장의 제조과정 및 보관 중에 콩 단백질이 분해되어 생성된 것으로 된장의 구수한 맛과 밀접하게 관련이 있는 것으로 보고되어 있다.
상기 유리아미노산으로 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine)이 있다.
상기 균주는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine)생성능이 우수하며, 특히 글루타메이트의 생성능은 국내에서 장류 생산에 널리 쓰이는 대조균주에 비해 월등히 높았다.
상기 균주는 콩으로부터 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline) 및 트레오닌(threonine) 생성능도 우수하여 장의 풍미에 기여할 것으로 보인다.
또한, 본 발명은 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 이용하여 제조된 콩 발효물 및 이의 제조방법을 제공한다.
상기 콩 발효물은 메주 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장, 춘장 및 간장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것이 바람직하다.
상기 콩 발효물의 제조는 당 업계에 알려진 일반적인 메주 및 장류 제조방법으로 제조할 수 있다.
본 연구를 통하여 분리 동정한 리크테이미아 라모사 M1233은 내건성이 우수하고, 넓은 온도범위에서 우수한 발효능을 나타내므로, 다양한 수분조건에서 활발한 생장을 할 것으로 예상되며, 이러한 경우 메주의 발효 기간 중 후반기 발효 기간에도 우수한 발효능을 나타낼 수 있으므로, 발효공정에서의 생산성이 우수할 것으로 사료된다.
또한, 리크테이미아 라모사 M1233 균주는 실제 장류 생산과정을 고려하여 콩에 대한 발효를 진행한 경우에도 된장의 구수한 맛과 밀접하게 관련이 있는 유리아미노산 생성능이 우수하며 특히 감칠맛을 내는 글루탐산염(Glutamate) 생성능이 기존 발효균주에 비하여 현저하게 우수한 것으로 확인되었다.
따라서, 리크테이미아 라모사 M1233 균주는 우리나라 전통발효식품인 장류의 종균으로서 유리한 우수성을 가지고 있으며, 특히 메주의 산업적 생산과 관련하여 생산효율 측면에서 우수한 생산성을 가지고 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
< 실시예 1> 메주로부터 리크테이미아 라모사 균주의 분리 및 동정
1. 실험방법
장맛이 좋은 것으로 확인된 전국의 323개 맛집 또는 장류생산업체에서 생산된 메주로부터 MEA, DG18 및 DRBC 배지를 이용하여 직접분리법 및 희석평판법에 의해 1479 균주의 곰팡이를 분리하고, 이에 대해 동정을 수행하여 최종적으로 26속 101종의 곰팡이를 분리, 동정하였다.
특히, 장류업체 종사자들이 잘 발효되었다고 하는 메주에서 분리된 균주 중에 364 균주의 곰팡이가 접합균류였고, 16속 18종으로 동정하였다. 그중 16.5%에 해당하는 60 균주가 리크테이미아 라모사 종임을 확인하였다.
60 균주중 구수한 맛과 단맛을 내는 유리아미노산과 환원당의 생산 활성이 우수한 리크테이미아 라모사 M1233을 최종적으로 선발하였다.
이때, 형태적인 동정은 MEA, CYA 배지에서 배양형태를 관찰하였고, MEA 배지에서 자란 균주의 세부 구조를 광학현미경을 관찰하여 동정하였다(도 1).
또한, 분자생물학적인 동정은 rDNA ITS 영역 분석 및 상동성을 조사하여 동정하였다(도 2).
2. 실험결과
분자생물학적인 동정 결과 도 2에 나타나 있듯이, M1233 균주는 리크테이미아 라모사와 같은 그룹을 형성하였다.
분석에 사용된 rDNA ITS 부분 유전자 염기서열은 다음과 같다.
* rDNA ITS 부분 유전자 염기서열 -서열번호 1
AAGGATCATTACTGAGAGGTCTAAAAAACCACTAGTTGGGGGTCTCTTCCCCTCTAGTAGTTCCTCACAGTTTTGTGCAAAGTCGGGTCAACTTGGTTGGCTCTGCCTTGTGCTGTAGATCTGGTTGTTGGCATAGAGACCCTCCTTTTAGGAGACTTGTGCCACTACTAAGATCTAGGCTGCTTGAAAAGAGACGTATGGACCCTTCTTTCAGGAGACCTATGTCTCGAGTCAAAGCAAGCAAGGCAAGCCTTTGGGGCTCTAGTATTAACTATCCCCAAAGGTGTTTATTCTTCTCGTGTAAACCATGATGTACGAAAAAGTTAGTTGTTAACTTAAAAACAACTCTTGGCAATGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCGTAGCAAAGTGCGATAATTATTGCGACTTGCATTCATAGCGAATCATCGAGTTCTCGAACGCATCTTGCGCCTAGTAGTCAATCTACTAGGCACAGTTGTTTCAGTATCTGCAACTACCAATCAGTTCAACTTGGTTCTTTGAACCTAAGCGAGCTGGAAATGGGCTTGTGTTGATGGCATTCAGTTGCTGTCATGGCCTTAAATACATTTAGTCCTAGGCAATTGGCTTTAGTCATTTGCCGGATGTAGACTCTAGAGTGCCTGAGGAGCAACGACTTGGTTAGTGAGTTCATAATTCCAAGTCAATCAGTCTCTTCTTGAACTAGGTCTTAATCTTTATGGACTAGTGAGAGGATCTAACTTGGGTCTTCTCTTAAAACAAACTCACATCTAGATCTGAAATCAACTGAGATCACCCGCTGAACTTAA
이에 본 발명자들은 상기와 같이 형태적, 분자적 특징을 종합하여 상기 M1233균주를 리크테이미아 라모사로 동정하였으며, 기탁기관인 국립농업과학원 농업유전자원센터(Korean Agricultural Culture Collection, KACC)에 2014년 6월 10일에 기탁하였다 (기탁번호 KACC 93209P).
< 실시예 2> 리크테이미아 라모사 M1233 균주의 온도생장특성 및 수분활성도 조사
<2-1> 적정 배양온도 조사
1. 실험방법
Malt extract agar (MEA: 25g malt extract agar (Oxoid CM0059), 500 mL distilled water)에 리크테이미아 라모사를 접종하고, 5-7일 동안 25℃ 배양실(incubation room)에서 배양하였다. 포자가 형성되면 포자를 긁어 모아 반 고체 배지 (semi solid medium)(0.2% agar, 0.05% Tween 80)에 현탁 접종하고 강하게 vortexing한 후, 5 ul씩 3점 접종을 실시하였다. 이후 0, 4, 10, 15, 20, 25, 30, 37, 45, 50℃ incubator에서 각각 7 일간 배양한 후, 3점의 길이를 측정하여 평균을 구하였다.
2. 실험결과
도 3에 나타낸 바와 같이, 리크테이미아 라모사는 생장능이 12℃에서부터 생장이 점차 증가하여 36~40℃에서 가장 활발한 생장능을 나타내다가 50℃까지 점차 감소하였다. 따라서, 리크테이미아 라모사는 24 ~ 40℃에서 활발한 생장능을 나타내었다(도 3).
<2-2> 수분활성도 조사
1. 실험방법
상기 실시예 2의 <2-1>과 같은 방법으로 균주와 포자현탁액을 준비하였다. 내건성 선택배지로는 dichloran 18% glycerol agar (DG18: 15.75g dichloran-glycerol (DG18) agar base (Oxoid 0729), 110g glycerol, 1 vial chloramphenicol (Oxoid SR0078E), 500 ml distilled water)를 사용하였으며, 포자현탁액 5 ul씩 1점 접종을 실시하였다. 균주는 25℃ 배양실(incubation room)에서 7일 동안 배양한 후, 1 점의 길이를 측정하고, 25℃ 생장 측정치와 비교하여 판단하였다.
2. 실험결과
건조 상태인 DG18에서 생장이 활발하여 내건성을 나타내었다(도 3). 따라서, 메주 후기발효까지 활발한 생장을 할 것이라 생각된다.
대조군인 Aspergillus oryzae보다 생장능이 활발하며 저온뿐만 아니라 고온 발효 시에도 생장이 활발하여 다양한 경우에 이용이 가능하다.
< 실시예 3> 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 이용한 콩발효물 제조 및 성분 분석
<3-1> 콩발효물 제조
1. 실험방법
리크테이미아 라모사 M1233 단일 균주를 접종하여 콩알메주를 제조하였다. 실험재료는 국내산 콩(대두: Glycine max, 서경들)을 구매하였으며 소금은 국내 천일염을 사용하였다. 연구의 중요한 재료인 대두콩을 세척하고 24시간 동안 25℃의 증류수에 수침하여 불린 후, 수분을 제거한 후에 사용하였다. 삼각플라스크(1L)에 불린 대두콩 400g과 증류수 100ml를 넣어 121℃에서 35분간 가압 멸균하였다. 그리고 증자한 콩은 무균조건(Clean bench)에서 냉각한 후, 선발한 균주의 포자액을 대두량의 1% (v/w)인 4Ⅹ106CFU/ml를 접종하고 96시간 동안 25℃ 배양실(incubation room)에서 배양 하였고, 이때 모든 작업은 가능한 한 무균적으로 하였다. 그 후 18% (v/w) 소금물 200ml에 콩알메주를 침지시켜 stomacher(Bag Mixer?400)를 이용하여 물리적으로 파쇄하였고, 유리병에 잘 눌러 담은 다음 표면에 천일염 40g을 골고루 눌러 25℃ 조건에서 40일 동안 숙성시켜 실험에 사용하였다.
<3-2> 환원당 측정
1. 실험방법
된장 5g에 증류수 50ml를 100ml 비이커에 넣어 교반하여 균질화시킨 후 30℃에서 4시간 진탕 후 4,200rpm에서 20분간 원심 분리하여 얻은 상징액을 시료로 사용하였으며, 0℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
환원당 함량은 DNS법을 이용하여 측정하였다. 시료 0.3ml를 취하여 1ml의 DNS(dinitrosalicylic acid) 시약을 가한 후 5분간 중탕하고 상온 냉각한 후 550nm에서 흡광도를 구하고 glucose 표준곡선을 이용하여 환산하였다.
2. 실험결과
표 1에 나타낸 바와 같이, 리크테이미아 라모사 M1233로 만든 콩 발효물는 환원당이 0.315 % 였고, 대조구인 Aspergillus oryzae C1은 환원당이 0.163% 였다. 리크테이미아 라모사 M1233로 만든 콩발효물은 대조구에 비하여 환원당 비율이 약 2배가량 높았다.
종래 연구에 의하면 환원당의 함량은 된장의 단맛 성분과 밀접하게 관련이 있는 것으로 보고되어 있다. 그러므로 리크테이미아 라모사 M1233은 단맛이 우수한 장류를 제조할 수 있도록 한다.
Isolates Origin no. Fungal species 환원당(%)
분리균 M1233 Lichthemia ramosa 0.315
대조구 C1 Aspergillus oryzae 0.163
<3-3> H NMR 분석
1. 실험방법
콩 발효물의 대사산물(metabolite)을 알아보기 위해, H-NMR spectroscopy 분석을 실시하였다. 콩 발효물을 동결 건조시켜 분말형태로 만들고, 분말 0.1g을 99.9% deuterium oxide(600ul, D2O)와 5mM sodium-2,2-dimethyl-2-silapentane -5-sulfonate (DDS, 97%)에 용해시켰다. 용해물을 600-MHz NMR 튜브(tube)에 옮겼으며, 600-MHz NMR spectrometer(Avance-600, Bruker)을 사용하여 1H-NMR 스펙트럼(spectrum) 결과를 얻을 수 있었다. 각각 대사산물의 동정과 농도는 Chenomx NMR suite program(ver. 6.1, Chenomx, Canada)를 이용하였다.
2. 실험결과
리크테이미아 라모사 M1233로 제조된 콩 발효물의 유리아미노산을 분석한 결과 도 4에 나타난 바와 같이, 리크테이미아 라모사 M1233로 제조된 콩 발효물은 대조구에 비하여 총 유리 아미노산(Total Amino Acid) 함량이 높이 측정되었다. 유리 아미노산은 된장의 제조과정 및 보관 중에 콩 단배질이 분해되어 생성된 것으로 된장의 구수한 맛과 밀접한 관련이 있다.
도 5에 나타난 바와 같이, 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine) 함량이 대조구에 비해 높은 함량을 나타내었으며, 특히 글루타메이트는 현재 국내에서 장류 생산에 널리 쓰이는 대조균주에 비해 월등히 높은 함량을 나타내어 장의 풍미에 기여할 것으로 보인다.
도 5에 나타난 바와 같이. 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline) 및 트레오닌(threonine)도 대조구에 비해 높은 함량을 나타내어 장의 풍미에 기여할 것으로 보인다.
국립농업과학원 농업유전자원센터 KACC93209P 20140725
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Novel Lichtheimia ramosa M1233 and use therof <130> P2014-0156 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 817 <212> DNA <213> Lichtheimia ramosa M1233 <400> 1 aaggatcatt actgagaggt ctaaaaaacc actagttggg ggtctcttcc cctctagtag 60 ttcctcacag ttttgtgcaa agtcgggtca acttggttgg ctctgccttg tgctgtagat 120 ctggttgttg gcatagagac cctcctttta ggagacttgt gccactacta agatctaggc 180 tgcttgaaaa gagacgtatg gacccttctt tcaggagacc tatgtctcga gtcaaagcaa 240 gcaaggcaag cctttggggc tctagtatta actatcccca aaggtgttta ttcttctcgt 300 gtaaaccatg atgtacgaaa aagttagttg ttaacttaaa aacaactctt ggcaatggat 360 ctcttggttc tcgcatcgat gaagagcgta gcaaagtgcg ataattattg cgacttgcat 420 tcatagcgaa tcatcgagtt ctcgaacgca tcttgcgcct agtagtcaat ctactaggca 480 cagttgtttc agtatctgca actaccaatc agttcaactt ggttctttga acctaagcga 540 gctggaaatg ggcttgtgtt gatggcattc agttgctgtc atggccttaa atacatttag 600 tcctaggcaa ttggctttag tcatttgccg gatgtagact ctagagtgcc tgaggagcaa 660 cgacttggtt agtgagttca taattccaag tcaatcagtc tcttcttgaa ctaggtctta 720 atctttatgg actagtgaga ggatctaact tgggtcttct cttaaaacaa actcacatct 780 agatctgaaa tcaactgaga tcacccgctg aacttaa 817

Claims (15)

  1. 메주에서 분리되어 서열번호 1의 염기서열로 구성된 rDNA ITS 유전자를 포함하여, 환원당 생성능 및 유리 아미노산 생성능을 갖으면서 내건성도 갖는 것이 특징인,
    기탁번호 KACC 93209P로 기탁된 리크테이미아 라모사(Lichtheimia ramosa ;L. ramosa) M1233 균주.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 균주는 최적 생장온도가 24 ~ 40℃인 것을 특징으로 하는 리크테이미아 라모사 M1233 균주.
  3. 삭제
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 균주는 콩으로부터 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine) 생성능을 갖는 것을 특징으로 하는 리크테이미아 라모사 M1233 균주.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 균주는 콩으로부터 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline)및 트레오닌(threonine) 생성능을 갖는 것을 특징으로 하는 리크테이미아 라모사 M1233 균주.
  6. 제 1항, 제 2항, 제 4항 및 제 5항 중 선택된 어느 한 항의 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 이용하여 발효시킨, 콩 발효물.
  7. 제 6항에 있어서,
    콩 발효물은 단맛을 내는 환원당을 갖는 것을 특징으로 하는 콩 발효물.
  8. 제 6항에 있어서,
    콩 발효물은 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine)을 갖는 것을 특징으로 하는 콩 발효물.
  9. 제 6항에 있어서,
    콩 발효물은 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline)및 트레오닌(threonine)을 갖는 것을 특징으로 하는 콩 발효물.
  10. 제 6항에 있어서,
    콩 발효물은 메주 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장, 춘장 및 간장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것을 특징으로 하는 콩 발효물.
  11. 제 1항, 제 2항, 제 4항 및 제 5항 중 선택된 어느 한 항의 리크테이미아 라모사 M1233 균주를 콩에 접종한 후 발효시키는 단계를 포함하는, 콩 발효물의 제조 방법.
  12. 제 11항에 있어서,
    콩 발효물은 단맛을 내는 환원당을 갖는 것을 특징으로 하는
    콩 발효물의 제조 방법.
  13. 제 11항에 있어서,
    콩 발효물은 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate), 글라이신(glycine) 및 타이로신(tyrosine)을 갖는 것을 특징으로 하는
    콩 발효물의 제조 방법.
  14. 제 11항에 있어서,
    콩 발효물은 단맛을 내는 알라닌(Alanine), 라이신(lysine), 프롤린(proline) 및 트레오닌(threonine)을 갖는 것을 특징으로 하는
    콩 발효물의 제조 방법.
  15. 제 11항에 있어서,
    상기 콩 발효물은 메주 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장, 춘장 및 간장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것을 특징으로 하는
    콩 발효물의 제조 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108118002A (zh) * 2018-01-22 2018-06-05 天龙黄鹤楼酒业咸宁有限公司 一种分枝横梗霉及其应用

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108707556B (zh) * 2018-06-11 2019-10-18 华南农业大学 一种横梗霉菌菌株及其在生产纤维素酶中的应用
CN110973348A (zh) * 2019-11-11 2020-04-10 华南农业大学 一种混合菌种发酵豆渣的方法
KR102525961B1 (ko) * 2020-12-16 2023-04-27 대한민국 리크테이미아 라모사 83-1를 이용한 약주용 발효제, 이의 제조방법 및 사용
KR102525960B1 (ko) * 2020-12-16 2023-04-27 대한민국 리크테이미아 라모사 3t-4를 이용한 약주용 발효제, 이의 제조방법 및 사용
CN113980817B (zh) * 2021-08-26 2023-06-23 北京市科学技术研究院资源环境研究所 一种分枝横梗霉及其用途
CN116836813B (zh) * 2023-06-26 2024-01-30 江苏农林职业技术学院 一种生防菌横梗霉及其应用
CN117143744B (zh) * 2023-08-29 2024-03-26 四川轻化工大学 一种分枝横梗霉及其在制备黄水酯化液中的应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101489999B1 (ko) * 2012-10-31 2015-02-04 씨제이제일제당 (주) 전통 메주에서 분리한 신규한 균주인 아스퍼질러스 오리재 cj 1354 균주와 이를 이용한 쌀 고추장 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 쌀 고추장

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
[박사학위논문] 김대호. 한국 전통메주의 곰팡이 상에 관한 연구. 강원대학교 대학원 산림환경보호학과. 2013. 8.*
NCBI GenBank No. JN315007.1*
The Journal of Microbiology (2012) Vol. 50, No. 3, pp. 386-393

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108118002A (zh) * 2018-01-22 2018-06-05 天龙黄鹤楼酒业咸宁有限公司 一种分枝横梗霉及其应用
CN108118002B (zh) * 2018-01-22 2021-04-09 天龙黄鹤楼酒业咸宁有限公司 一种分枝横梗霉及其应用

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