KR101656235B1 - 신규 스코풀라리옵시스 브레비카울리스 ｍ２４７９ 균주 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신규 스코풀라리옵시스 브레비카울리스(Scopulariopsis brevicaulis; S. brevicaulis) M2479 균주 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 장류로부터 분리 및 동정된 S. brevicaulis M2479 균주는 우수한 단백분해활성으로 인해 산업적 생산에 적합한 생산수율을 얻을 수 있으면서도, 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 장류를 생산할 수 있어, 기존 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 장류 생산방식의 문제점을 해결할 수 있으므로, 상기 S. brevicaulis M2479 균주는 장류 제조를 위한 종균 균주로 유용하게 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 신규 스코풀라리옵시스 브레비카울리스(Scopulariopsis brevicaulis; S. brevicaulis) M2479 균주, 상기 균주를 이용한 장류, 및 상기 균주를 이용한 장류 생산 방법을 제공하는 것이다.
한국의 장류 식품인 청국장, 된장 및 간장은 우리 조상으로부터 수백 년 동안 섭취해온 음식으로서 특별한 부작용이 없는 식품이며, 항산화 효과, 혈전용해 효과, 혈압강하 효과 등을 유발하는 각종 유익한 생리활성 물질들이 포함된 것으로 알려져 있다.
현재 국내에서 장류의 산업적 생산은 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 장류의 대량생산이 주를 이루고 있다.
관련 선행 기술로는 등록특허 제10-1284580호 "팥에 균주로서 아스퍼질러스 오리제를 접종하여 누룩 및 상기 누룩을 이용한 발효주의 제조방법", 제10-1056546호 "콩알메주를 이용하여 한국 전통 풍미를 지닌 장류 및 이의 제조방법" 및 등록특허 제10-0597953호 "이취와 풍미가 개선된 장류의 제조방법"에 관한 것이 공지되어 있다.
그러나, Aspergillus oryzae를 이용하여 생산된 개량식 장류의 경우, 충분한 풍미 특히, 일본 미소나 나또와 구분되는 우리 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖지 못하는 단점이 있다.
따라서 장류의 산업적 생산에 적합한 생산수율을 얻을 수 있으면서도, 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 장류를 생산할 수 있는 새로운 균주의 연구가 요구되어 지고 있다.
이에, 본 발명자들은 기존의 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 장류 생산방식의 문제점을 해결하고자 예의노력한 결과, 장맛이 좋고 잘 발효된 것으로 장류업체 종사자들로부터 확인된 후반기 발효가 진행된 메주에 있는 곰팡이를 분리 및 동정하였으며, 이들 균주들 중에서 S. brevicaulis M2479 균주가 우수한 단백분해 활성을 가지고 있어서 산업적 생산에 적합한 생산수율을 얻을 수 있으며, 콩의 단백질을 분해하여 아미노태질소와 유리아미노산을 효과적으로 생산하여 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 장류를 생산할 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 우수한 전통 풍미를 갖는 장류의 산업적 생산을 위하여, 최종 생산된 장류의 풍미를 개선시킬 수 있으면서도, 장류 생산기간을 단축할 수 있는 종균 균주로 활용가능한 신규한 곰팡이 균주로서 S. brevicaulis M2479 균주, 상기 균주를 이용한 장류, 및 상기 균주를 이용한 장류 생산 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 기탁번호 KACC 93202P로 기탁된 스코풀라리옵시스 브레비카울리스(Scopulariopsis brevicaulis; S. brevicaulis) M2479 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 제조된 콩발효물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 콩발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 프로테아제를 대량으로 생산하는 방법을 제공한다.
아울러, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 유리아미노산을 대량으로 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주는 우수한 단백분해활성으로 인해 산업적 생산에 적합한 생산수율을 얻을 수 있으면서도, 전통 장류가 갖는 풍부한 풍미를 갖는 장류를 생산할 수 있어, 기존 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 장류 생산방식의 문제점을 해결할 수 있다.
구체적으로, S. brevicaulis M2479는 우수한 단백 분해 활성을 가지고, 장류의 주재료인 콩으로부터 아미노태질소 함량과 된장의 구수한 맛을 내는 유리아미노산을 효과적으로 생산할 수 있어서, S. brevicaulis M2479는 기존 장류 대량생산에 사용되는 Aspergillus oryzae를 이용한 개량식 된장에 비하여 풍부한 전통 풍미를 갖는 풍미가 개선된 장류를 대량으로 단축된 생산기간 동안 생산할 수 있으므로, 상기 S. brevicaulis M2479는 장류 제조를 위한 종균 균주로 활용할 수 있다.
도 1은 S. brevicaulis M2479 균주의 형태학적 특성을 보여주는 그림이다.
도 2는 S. brevicaulis M2479 균주의 분자적 특성을 보여주는 그림이다.
도 3은 S. brevicaulis M2479 균주의 온도생장 특성 및 수분활성도를 보여주는 그림이다.
도 4는 S. brevicaulis M2479 균주로 제조된 콩발효물의 총 유리아미노산 함량을 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
도 5는 S. brevicaulis M2479 균주로 제조된 콩발효물의 각 유리아미노산의 함량을 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
도 2는 S. brevicaulis M2479 균주의 분자적 특성을 보여주는 그림이다.
도 3은 S. brevicaulis M2479 균주의 온도생장 특성 및 수분활성도를 보여주는 그림이다.
도 4는 S. brevicaulis M2479 균주로 제조된 콩발효물의 총 유리아미노산 함량을 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
도 5는 S. brevicaulis M2479 균주로 제조된 콩발효물의 각 유리아미노산의 함량을 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 신규 스코풀라리옵시스 브레비카울리스(Scopulariopsis brevicaulis; S. brevicaulis) M2479 균주를 제공한다.
상기 균주는 서열번호 1의 염기서열로 구성된 rDAN ITS를 가지고 있으며, 기탁번호 KACC 93202P로 기탁된 균주이다.
상기 균주는 최적 생장온도가 25 ~ 30℃이며, 건조상태인 20% 슈크로오스(sucrose) 첨가 TSA에서도 활발한 생장을 하여서 내건성(drought resistance)을 나타낸다.
상기 균주는 우수한 프로테아제(Protease) 활성을 가지고 있으며, 함께 장류에서 분리된 동종의 S. brevicaulis 균주들에 비해 현저한 프로테아제 활성을 가지고 있다.
상기 균주는 콩의 단백질을 분해하여, 된장의 구수한 맛을 내는 아미노태질소를 효과적으로 생산할 수 있으며, Aspergillus oryzae에 비하여 아미노태질소 및 환원당이 현저히 우수하다.
상기 균주는 콩의 단백질을 분해하여, 된장의 구수한 맛을 내는 유리아미노산을 효과적으로 생산할 수 있으며, Aspergillus oryzae에 비하여 총아미노산 함량이 현저히 우수하다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 제조된 콩발효물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 콩발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 콩발효물은 메주, 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장, 춘장 및 간장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것이 바람직하다.
상기 콩발효물의 제조는 당업계에 알려진 일반적인 메주 및 장류 제조방법으로 제조할 수 있다.
상기 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 제조된 콩발효물은 높은 아미노태질소 및 환원당을 가지며, 이는 Aspergillus oryzae 균주를 이용하여 제조된 콩발효물에 비해 높다.
상기 균주는 콩의 단백질을 분해하여, 된장의 구수한 맛을 내는 유리아미노산을 효과적으로 생산할 수 있으며, Aspergillus oryzae에 비하여 총 아미노산 함량이 현저히 우수하다.
아울러, 본 발명은 본 발명에 따른 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 프로테아제를 대량으로 생산하는 방법을 제공한다.
구체적으로, 상기 방법은
1) S. brevicaulis M2479 균주를 배양하는 단계; 및
2) 단계 1)에서 배양된 배양액에서 프로테아제를 분리 및 정제하는 단계를 포함할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<
실시예
1> 메주로부터
S.
brevicaulis
균주의 분리 및 동정
장맛이 좋은 것으로 확인된 전국의 323개 종가집 또는 식당에서 생산된 메주로부터 MEA, DG18 및 DRBC 배지를 이용하여 직접분리법 및 희석평판법에 의해 1479 균주의 곰팡이를 분리하고, 이에 대해 동정을 수행하여 최종적으로 26속 101종의 곰팡이를 분리·동정하였다.
또한, 분리·동정한 101종의 곰팡이 중에서, 장류업체 종사자들이 잘 발효되었다고 하는 메주의 발효 후반기에 샘플로부터 형태적인 동정 및 분자생물학적인 동정을 이용하여 공통적으로 발생되는 곰팡이가 75종의 스코풀라리옵시스 브레비카울리스(Scopulariopsis brevicaulis; S. brevicaulis) 종임을 확인하였다. 이때, 형태적인 동정은 MEA, CYA 배지에서 배양형태 관찰하였고, MEA 배지에서 자란 균주의 세부 구조를 광학현미경을 관찰하여 동정하였으며(도 1), 분자생물학적인 동정은 rDNA ITS 영역 분석 및 상동성 조사하여 동정하였다(도 2).
분석에 사용된 rDNA ITS 서열은 다음과 같다.
TGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAAGTTACTCTTCAAAACCCA
TTGTGAACCTTACCTCTTGCCGCGCGTTGCCTCGGCGGGGAGGCGGGGTCTGGGTCGGCGCGCCCCTCACCGGGCCGCCG
TCCCCGTCCCCGTCCCCGCCGGCCGCGCCAAACTCTAAATTTGAAAAAGCGTACTGCACGTTCTGATTCAAAACAAAAAA
CAAGTCAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAAT
TGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGGCAGCAATCTGCCGGGCATGCCTGTCCGAGCGT
CATTTCTTCCCTCGAGCGCGGCTAGCCCTACGGGGCCTGCCGTCGCCCGGTGTTGGGGCTCTACGGGTGGGGCTCGTCCC
CCCCGCAGTCCCCGAAATGTAGTGGCGGTCCAGCCGCGGCGCCCCCTGCGTAGTAGATCCTACATCTCGCATCGGGTCCC
GGCGAAGGCCAGCCGTCGAACCTTTTATTTCATGGTTGACCTCGAT(서열번호: 1)
이에 본 발명자들은 기탁기관인 한국농업미생물자원센터(Korean Agricultural Culture Collection, KACC)에 2014년 06월 10일에 기탁하였다 (기탁번호 KACC 93202P).
<
실시예
2>
S.
brevicaulis
의 온도생장특성 및 수분활성도 조사
<2-1> 적정 배양온도 조사
TSA 배지(tripticase soy agar 배지, 15g tripticase soy agar (Difco 211825), 7.5g agar, 500 ml distilled water)에 S. brevicaulis를 접종하고, 5-7일 동안 25℃ 인큐베이션 룸(incubation room)에서 배양하였다. 포자가 형성되면 포자를 긁어 모아 반고체 배지(semi solid medium)(0.2% agar, 0.05% Tween 80)에 현탁 접종하고 강하게 볼텍싱(vortexing)한 후, 5 ul씩 3점 접종을 실시하였다. 이후, 0, 4, 10, 15, 20, 25, 30, 37, 45, 50℃ 인큐베이터(incubator)에서 각각 7 일간 배양한 후, 3 점의 길이를 측정하여 평균을 구하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, S. brevicaulis는 생장능이 4℃에서부터 점차 증가하여 30℃에서 정점을 찍은 다음 45℃까지 점차 감소하였다. 따라서, S. brevicaulis는 25 ~ 30℃에서 가장 활발한 생장능을 나타내었다(도 3).
<2-2> 수분활성도 조사
상기 실시예 <2-1>과 같은 방법으로 균주와 포자현탁액을 준비하였다. 내건성 선택배지로는 20% 슈큐로오스(sucrose)를 첨가한 TSA를 사용하였으며, 포자현탁액 5 ul씩 1점 접종을 실시하였다. 균주는 25℃ 인큐베이션 룸(incubation room)에서 7일 동안 배양한 후, 1 점의 길이를 측정하고, 25℃ 생장 측정치와 비교하여 판단하였다.
그 결과, 건조상태인 20% 슈큐로오스(sucrose) 첨가 TSA에서도 활발한 생장을 하여서 내건성을 나타내었다. 따라서, 메주 후기 발효까지 활발한 생장을 할 수 있음을 알 수 있었다.
<
실시예
3>
S.
brevicaulis
의 프로테아제(
protease
)
분비능
조사
메주로부터 분리한 S. brevicaulis 75 균주 중 62 균주의 반고체 배지(semi solid medium) 포자현탁액을 제조하여 사용하였다. 프로테아제(protease) 효소활성 스크리닝은 고체배지상에서 실시하였다. 구체적으로, 프로테아제 분비능은 Water agar(10g agar, 500 ml distilled water)에 1% 탈지유(skim milk)를 첨가한 식물 아가(plant agar)에 균을 5 ul씩 3점 접종하여, 25℃ 인큐베이션 룸(incubation room)에서 5 일간 배양한 후, 클리어 존(clear zone)을 관찰하였다.
그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이, S. brevicaulis의 효소활성 스크리닝 결과 S. brevicaulis M2479가 다른 균주들에 비하여 현저하게 우수한 프로테아제 활성을 갖는 것을 확인하였다.
| M No. | 프로테아제 | M No. | 로테아제 | M No. | 로테아제 | M No. | 로테아제 |
| 104 | + | 621 | ++ | 2466 | ++ | 2485 | + |
| 110 | ++ | 626 | ++ | 2467 | + | 2486 | ++ |
| 114 | + | 683 | ++ | 2469 | ++ | 2487 | ++ |
| 156 | ++ | 814 | + | 2470 | + | 2488 | ++ |
| 164 | + | 1174 | + | 2471 | + | 2492 | + |
| 472 | ++ | 1178 | + | 2472 | ++ | 2493 | + |
| 481 | + | 1179 | ++ | 2473 | ++ | 2494 | + |
| 485 | + | 1180 | + | 2474 | + | 2496 | ++ |
| 492 | - | 1181 | ++ | 2475 | + | 2498 | + |
| 499 | + | 1183 | ++ | 2477 | ++ | 2499 | + |
| 526* | +++ | 1184 | + | 2478 | + | 2501 | ++ |
| 544 | + | 1185 | - | 2479 | +++ | 2502 | + |
| 548 | + | 1186 | ++ | 2480 | + | 2503 | + |
| 564 | ++ | 1187 | + | 2482 | + | 2504 | + |
| 586 | + | 1188 | + | 2483 | + | ||
| 613 | ++ | 1189 | - | 2484 | ++ |
-, no reaction; + <1 mm; 1 mm≤++<3mm; 3mm≤+++<6mm; 6≤++++<10; +++++≥10;
* 삶은 대두에서의 효소활성 측정결과 S. brevicaulis M2479의 48%에 미침.
<
실시예
4>
S.
brevicaulis
M2479
가 삶은 대두에서 분비한 프로테아제
효소량
측정
<4-1>
조효소액
추출
S. brevicaulis 62 균주의 고체배지상 프로테아제 활성 스크리닝 관찰 후, 프로테아제 결과가 좋은 S. brevicaulis M2479으로 콩알메주를 제조하여 효소활성을 정량분석하였다.
구체적으로, 100ml 삼각플라스크에 원료 대두 20g와 증류수 30ml를 121℃에서 35분간 증자하고, 무균조건(Clean bench)에서 냉각한 후, 선발한 균주의 포자액을 대두량의 1% (v/w)인 2Ⅹ106 CFU/ml를 접종하고 25℃ 인큐베이션 룸(incubation room)에서 14일간 배양하였다. 곰팡이를 배양한 삶은 콩 5g를 증류수 50ml에 현탁하여 30℃에서 4시간 진탕 후 4,200rpm에서 20분간 원심 분리하여 얻은 상징액을 조효소액으로 하였으며, 0℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
<4-2> 프로테아제 측정
0.6% 카제인(casein)(0.06M NaH2PO4 buffer, pH 7.0) 1.5ml에 pH 7.0 0.06M NaH2PO4 buffer 1ml을 가해서 40℃에서 5분간 예열하였다. 여기에 조효소액 0.5ml을 첨가하여 40℃에서 60분간 반응시킨 후, 0.4M 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid; TCA) 5ml를 넣어 반응을 중지시켰다. 실온에서 30분간 방치한 다음 여과지(No.4 Whatman)에 여과한 여액 1ml에 0.4M NaCO6 용액 5ml와 5배 희석된 폴린 시약(Folin reagent) 용액 1ml를 넣어 40℃에서 30분간 발색시켰다. 대조구는 TCA용액을 가하기 직전에 효소액을 첨가해서 위와 같은 방법으로 발색시켰다. 생성된 색을 25℃에서 유지하다가 660nm에서 흡광도를 측정하였다. 티로신(Tyrosine) 10.0mg을 취해, 1N HCl 1ml을 가해서 전액을 100ml으로 하였다. 이 용액을 원액으로 10, 40, 70, 100ug/ml 검액 1ml에 0.4M NaCO6 용액 5ml와 5배 희석된 폴린 시약(Folin reagent) 용액 1ml를 넣어 40℃에서 30분간 발색시켰다. 생성된 색을 25℃에서 유지하다가 660nm에서 흡광도를 측정하여 검량선을 작성하였다. 시료 1g이 60분 동안 티로신(tyrosine) 1ug을 유리시키는 양을 환산하여 1 유닛(unit)으로 나타내었다.
그 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, S. brevicaulis M2479의 경우 224.968 유닛(unit)인 반면, 대조구인 Aspergillus oryzae의 경우 55.515 유닛(unit)에 불과하였다. 따라서, 삶은 대두에서 S. brevicaulis M2479는 종래 메주의 산업적 생산에 종균으로 사용되던 대조구에 비하여 높은 프로테아제 활성을 갖는 것을 확인하였다.
| Isolates | Origin no. | Fungal species | Protease enzyme(unit) |
| 분리균 | M2479 | S. brevicaulis | 224.968 |
| 대조구 | CF1001 | Aspergillus oryzae | 55.515 |
<
실시예
5>
S.
brevicaulis
M2479S
균주를 이용한
콩발효물
제조 및 성분 분석
<5-1>
콩발효물
제조
S. brecicalulis M2479 단일 균주를 접종하여 콩알메주를 제조하였다. 실험재료는 국내산 콩(대두: Glycine max, 서경들)을 구매하였으며 소금은 국내 천일염을 사용하였다. 연구의 중요한 재료인 대두콩을 세척하고 24시간 동안 25℃의 증류수에 수침하여 불린 후, 수분을 제거한 후에 사용하였다. 삼각플라스크(1L)에 불린 대두콩 400g과 증류수 100ml를 넣어 121℃에서 35분간 가압멸균하였다. 그리고 증자한 콩은 무균조건(Clean bench)에서 냉각한 후, 선발한 균주의 포자액을 대두량의 1% (v/w)인 4Ⅹ106 CFU/ml를 접종하고 96시간 동안 25℃ 인큐베이션 룸(incubation room)에서 배양하였고, 이때 모든 작업은 가능한 무균적으로 하였다. 그 후 18% (v/w) 소금물 200ml에 콩알메주를 침지시켜 stomaker(Bag Mixer®400)를 이용하여 물리적으로 파쇄하였고, 유리병에 잘 눌러 담은 다음 표면에 천일염40g 을 골고루 눌러 25℃ 조건에서 40일 동안 숙성시켜 실험에 사용하였다.
<5-2>
아미노태질소
(
NH
2
-N) 함량 측정
된장 5g에 증류수 50ml를 100ml 비이커에 넣어 교반하여 균질화시킨 후 30℃에서 4시간 진탕 후 4,200rpm에서 20분간 원심 분리하여 얻은 상징액을 시료로 사용하였으며, 0℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
된장 숙성 중 아미노태 질소 함량은 Formol 적정법을 이용하여 측정하였다. 시료 2ml씩 취하여 2개의 실험관에 취하였다. 한쪽에 중성 폴르말린(formalin) 용액 4ml와 물 4ml를 가하고, 다른 쪽은 공시험으로써 증류수 8ml를 가하였다. 양쪽에 0.1N NaOH 용액으로 적정하여 pH 8.4가 될 때까지의 양을 적정하여 아미노태질소 함량을 측정하였다.
<5-3> 환원당 측정
된장 5 g에 증류수 50ml를 100ml 비이커에 넣어 교반하여 균질화시킨 후 30℃에서 4시간 진탕 후 4,200rpm에서 20분간 원심 분리하여 얻은 상징액을 시료로 사용하였으며, 0℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
환원당 함량은 DNS법을 이용하여 측정하였다. 시료 0.3ml를 취하여 1ml의 DNS(dinitrosalicylic acid) 시약을 가한 후 5분간 중탕하고 상온 냉각한 후 550nm에서 흡광도를 구하고 글루코즈(glucose) 표준곡선을 이용하여 환산하였다.
그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, S. brevicaulis M2479는 대조구에 비하여 아미노태질소 및 환원당이 높게 측정되었다.
종래 연구에 의하면, 아미노태질소는 된장의 제조과정 및 보관 중에 콩 단백질이 분해되어 생성된 유리아미노산(유리아미노기로 존재하는 질소)으로 된장의 구수한 맛과 밀접하게 관련이 있는 것으로 보고되었다. 장류의 주재료인 콩의 구성성분은 단백질, 탄수화물 및 지방이며, 실험결과, S. brevicaulis M2479는 콩의 단백질을 분해하여, 된장의 구수한 맛을 내는 아미노태질소를 효과적으로 생산할 수 있으므로, S. brevicaulis M2479는 장류 제조에 있어서 우수한 발효특성을 가지는 것으로 평가되며, 이러한 우수한 발효특성을 가지는 S. brevicaulis M2479는 장류 제조를 위한 우수한 종균으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
| Isolates | Origin no. | Fungal species | 아미노질소(mg%) | 환원당(%) |
| 분리균 | M2479 | S. brevicaulis | 489.90 | 0.185 |
| 대조구 | CF1001 | Aspergillus oryzae | 420.26 | 0.145 |
<5-4>
콩발효물의
1
H-
NMR
분석
콩 발효물의 대사산물(metabolite)을 알아보기 위해, 1H-NMR 핵자기공명 분광기(Nuclear Magnetic Resonance 600) 분석을 실시하였다. 콩발효물을 동결건조시켜 분말형태로 만들고, 분말 0.1g을 99.9% deuterium oxide(600ul, D2O)와 5mM sodium-2,2-dimethyl-2-silapentane-5-sulfonate (DDS, 97%)에 용해시켰다. 용해물을 600-MHz NMR 튜브(tube)에 옮겼으며, 600-MHz NMR spectrometer(Avance-600, Bruker)을 사용하여 1H-NMR 스펙트럼(spectrum) 결과를 얻을 수 있었다. 각각 대사산물의 동정과 농도는 Chenomx NMR suite program(ver. 6.1, Chenomx, Canada)를 이용하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, S. brevicaulis M2479는 대조구에 비하여 총 유리 아미노산 함량이 높이 측정되었다. 또한, 도 5에 나타난 바와 같이, 감칠맛을 내는 글루타메이트(glutamate) 및 트립신(tyrpsine)의 함량은 대조구에 비해서 높았으며, 단맛 성분인 알라닌(alanine), 라이신(lysine) 및 세린(serine)도 대조구에 비해 높은 함량을 나타내어 장의 풍미에 기여할 것으로 보인다. 특히, 기존의 보고와 본 실험의 결과를 비교하여 볼 때 글루타메이트(glutamate)는 공통적으로 많은 함량 나타내는 성분으로 대조구에 비해 월등히 높음 함량을 나타내는 것을 알 수 있다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION)
<120> Novel Scopulariopsis brevicaulis M 2479 and use therof
<130> p2014-0065
<160> 1
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 606
<212> RNA
<213> rDNA ITS of Scopulariopsis brevicaulis M2479
<400> 1
tgaggaagta aaagtcgtaa caaggtctcc gttggtgaac cagcggaggg atcattaccg 60
aagttactct tcaaaaccca ttgtgaacct tacctcttgc cgcgcgttgc ctcggcgggg 120
aggcggggtc tgggtcggcg cgcccctcac cgggccgccg tccccgtccc cgtccccgcc 180
ggccgcgcca aactctaaat ttgaaaaagc gtactgcacg ttctgattca aaacaaaaaa 240
caagtcaaaa cttttaacaa cggatctctt ggttctggca tcgatgaaga acgcagcgaa 300
atgcgataag taatgtgaat tgcagaattc agtgaatcat cgaatctttg aacgcacatt 360
gcgcccggca gcaatctgcc gggcatgcct gtccgagcgt catttcttcc ctcgagcgcg 420
gctagcccta cggggcctgc cgtcgcccgg tgttggggct ctacgggtgg ggctcgtccc 480
ccccgcagtc cccgaaatgt agtggcggtc cagccgcggc gccccctgcg tagtagatcc 540
tacatctcgc atcgggtccc ggcgaaggcc agccgtcgaa ccttttattt catggttgac 600
ctcgat 606
Claims (15)
- 서열번호 1로 표현되는 염기서열로 이루어진 rDNA ITS를 갖으면서 기탁번호 KACC 93202P로 기탁되되, 내건성(drought resistance)을 나타내는 것이 특징인,
스코풀라리옵시스 브레비카울리스(Scopulariopsis brevicaulis S. brevicaulis) M2479 균주.
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 균주는 최적 생장온도가 25 ~ 30℃인 것을 특징으로 하는 S. brevicaulis M2479 균주.
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 균주는 프로테아제(Protease) 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 S. brevicaulis M2479 균주.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항, 제3항 및 제5항 중 어느 한항의 S. brevicaulis M2479 균주를 이용하여 발효시켜 아미노태질소 생성능을 갖는 콩발효물.
- 삭제
- 제 9항에 있어서, 상기 콩발효물은 메주, 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장 및 춘장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것을 특징으로 하는 콩발효물.
- 제1항, 제3항 및 제5항 중 어느 한항의 S. brevicaulis M2479 균주를 콩에 접종한 후 발효시키는 단계를 포함하여 아미노태질소 생성능을 갖는, 콩발효물의 제조 방법.
- 삭제
- 제 12항에 있어서, 상기 콩발효물은 메주, 또는 된장, 청국장, 막장, 고추장 및 춘장으로 구성된 군으로부터 선택된 장류인 것을 특징으로 하는 콩발효물의 제조 방법.
- 삭제
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|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|
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-
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| [연구보고서] 최광수 외. 전통발효식품의 과학화 연구; 전통간장의 대량생산을 위한 기반 연구. 과학기술처. 1995.* |
| Kor. J. Mycol. 1995, Vol. 23, No. 2, pp.161-175. |
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