KR101704481B1

KR101704481B1 - 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 함유하는슬리밍용 조성물

Info

Publication number: KR101704481B1
Application number: KR1020080065529A
Authority: KR
Inventors: 신동욱; 이상민; 송민정; 박선미; 김신형; 노민수; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2008-07-07
Filing date: 2008-07-07
Publication date: 2017-02-10
Also published as: KR20100005480A

Abstract

본 발명은 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 슬리밍용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 포함함으로써 지방세포 분화를 억제하고, 분화된 지방세포 내의 지질체 수준을 감소시키는 슬리밍용 조성물에 관한 것이다.

흑축*나팔꽃 씨앗*전호*중간엽 줄기세포*지질체*슬리밍용 조성물

Description

흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 함유하는 슬리밍용 조성물{Composition for slimming containing pharbitidis seed extract or anthriscs aemula schisch extract}

본 발명은 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 함유함으로써 인간의 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화를 억제하고, 분화된 지방세포 내의 지질체 수준을 감소시키는 슬리밍용 조성물에 관한 것이다.

지방세포에 대한 연구에 있어서 최근 주목을 받고 있는 것이 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cell)이다. 중간엽 줄기세포는 일반적으로 지방전구세포를 지방세포로 분화시키는 데 사용되는 방법과 거의 유사한 방법을 이용하여 지방세포로 분화시킬 수 있기 때문에, 지방세포 분화 연구에 널리 이용되고 있다 (Xu el al., The use of small interfering RNAs to inhibit adipocyte differentiation in human preadipocytes and fetal-femor-derived mesenchymal cells. Exp. Cell Res. 312: 1856-1864, 2006; Pittenger et al., Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science 284: 143-146, 1999). 이러한 중간엽 줄기세포는 지방세포뿐만 아니라 연골세포, 뼈세포 등의 다른 유형의 세포로도 분화될 수 있다 고 알려져 있으며, 신체의 대부분의 조직에 분포되어 있다 (Meirelles et al., Mesenchymal stem cells reside in virtually all post-natal organs and tissues. J. Cell Sci. 119: 2204-2213, 2006). 따라서, 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화로의 변화 성질을 억제하는 새로운 소재의 발굴이 시급하다.

본 발명의 전호 추출물이 비만억제에 효과가 있음이 알려져 있으나(대한민국 특허공개 제2007-0072023호), 흑축 추출물 또는 전호추출물이 지방세포 분화를 억제하고 슬리밍에 효과가 있음은 알려져 있지 않다

본 발명자들은 안전성과 지방세포 분화 억제 효과가 인정된 슬리밍 원료를 찾기 위하여 다양한 식물 생약 추출물을 대상으로 연구를 거듭한 결과, 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물이 중간엽 줄기세포에서 지방세포로의 분화를 효과적으로 억제하고, 이미 분화된 지방세포 내에서 지질체 수준을 감소시킬 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유함으로써, 지방세포 분화를 억제하고 지방세포 내의 지질체 수준을 감소시키는 슬리밍용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하여 지방세포의 분화를 억제시키는 슬리밍용 조성물을 제공한다.

본 발명의 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물은 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화를 억제할 뿐만 아니라, 분화된 지방세포 내의 지질체 수준을 감소시켜 탄력 있고 매끈한 피부를 만들어 준다. 따라서, 본 발명의 조성물은 화장료 조성물, 건강식품 조성물 또는 약학 조성물로 적용되어 효과적인 슬리밍용 조성물로 사용될 수 있으므로 매우 유용한 발명인 것이다.

본 발명은 흑축(pharbitidis seed) 추출물, 전호(Anthriscs aemula Schisch) 추출물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하여 지방세포 분화를 억제하는 슬리밍용 조성물을 제공한다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명에서 사용된 '슬리밍'은 건강의 관점에서 지방 조직의 감소로 인하여 탄력 있고 매끈한 피부를 만들 수 있음을 의미한다.

본 발명의 흑축(pharbitidis seed)은 나팔꽃(pharbitidis nil Choisy)의 씨앗으로써, 지방유 약 11% 및 수지성 배당체인 파비틴(pharbitin) 2%를 함유하고, 사하작용, 이뇨작용 및 살충작용을 가진다고 알려져 있다(대한약전 V 제2부 651). 또한 해수, 천식 및 변비 개선에 효과적이며, 피부의 불순물을 제거하는 마사지용 화장료 조성물로 사용되고 있다.

본 발명의 전호(Anthriscs aemula Schisch)는 미나리과의 다년생 초본으로 높은 산 습기가 많은 땅에서 자란다. 한의학에서는 기침가래약, 해열진통제로 복통, 감기, 기관지염, 류마치스, 신경쇠약 등에 쓰이는 것으로 오랫동안 알려져 왔으며, 전호 뿌리의 주성분은 약간의 사포닌, 0.2%의 정유, 노다케닌, 노다케니틴이다.

본 발명의 흑축 및 전호 추출 방법은 당업계에 통상적으로 알려져 있는 방법을 적의 선정하고 응용할 수 있다. 일반적으로 흑축 또는 전호를 건조 분쇄하고, 에탄올 등의 유기용매를 사용해 추출 기기에서 추출한 후, 동결 건조하여 얻을 수 있다.

중간엽 줄기세포에 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 처리하면 지방세포로의 분화가 억제되고, 이미 분화가 완료된 지방세포에서는 지질체(lipid droplet) 수준이 감소된다. 분화된 지방세포 내의 지질체 수준 감소는 미용 목적의 지방조직 감소 효과로써, 탄력 있고 매끈한 피부를 만들어 준다.

상기 지방세포 분화는 동물, 바람직하게는 포유동물의 지방전구세포 또는 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화이고, 보다 바람직하게는 인간의 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화이며, 가장 바람직하게는 인간의 골수로부터 유래한 중간엽 줄기세포이다.

본 발명의 슬리밍용 조성물은 화장료 조성물, 건강식품 조성물 또는 약학 조성물로 제형화될 수 있다.

본 발명의 슬리밍용 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않지만, 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 바디로션, 바디크림, 바디오일 또는 바디 에센스의 형태로 제형화될 수 있으며, 각 제형의 화장료 조성물은 상기 흑축추출물, 전호추출물 및 이들의 혼합물 이외의 다른 성분들을 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

본 발명의 슬리밍용 건강식품 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않지만, 정제, 과립제, 드링크제, 캬라멜, 다이어트바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 건강식품 조성물은 상기 흑축추출물, 전호추출물 및 이들의 혼합물 이외에 당분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

또한, 본 발명의 슬리밍용 화장료 조성물 및 건강식품 조성물은 흑축 추출물, 전호 추출물 또는 이들의 혼합물을 조성물 총 중량에 대해서 0.0001~30중량%의 양으로 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명의 슬리밍용 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면, 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 상기 활성 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 2000mg/kg/일, 바람직하게는 0.5mg/kg/일 내지 2.5mg/kg/일이다. 그러나 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 맞춰 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하지 않는다.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 상세하게 설명하고자 하지만, 본 발명의 범위가 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 흑축 추출물의 제조

흑축 30g을 건조 분쇄한 후, 덕산화학의 GR급 에탄올 95.0~95.5v/v% 200ml을 용매로 사용하여 50℃, 1500psi에서 20분간 ASE300 가속 용매 추출기(ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACTOR)(디오넥스사)로 유효성분을 기기 추출하였다. 이어서, -70℃에서 모듈 스핀 40(Modul spin 40)(바이오트론사) 기기를 이용하여 24시간 동안 동결 건조시켜 흑축 추출물을 수득하였다.

[실시예 2] 전호 추출물의 제조

전호 30g을 건조 분쇄한 후, 덕산화학의 GR급 에탄올 95.0~95.5v/v% 200 ml 을 용매로 사용하여, 50℃, 1500psi에서 20분간 ASE300 가속 용매 추출기(ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR)(디오넥스사)로 유효성분을 기기 추출하였다. 이어서, -70℃에서 모듈 스핀 40(Modul spin 40)(바이오트론사) 기기를 이용하여 24시간 동안 동결 건조시켜 전호 추출물을 수득하였다.

[시험예 1] 흑축 추출물에 의한 인간 골수 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화 억제 효과

인간 골수 중간엽 줄기세포(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)를 론자사(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하여 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 보다 구체적으로, 인간 골수 중간엽 줄기세포 (human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)를 10% 우혈청 (fetal bovine serum), 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 1% 글루타맥스(glutamax)를 포함하는 낮은 농도의 포도당(1g/L) 배양액(Dulbecco modified eagle's medium(DMEM)) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)에서 배양하였다.

배양 접시 내의 세포 밀도가 100%에 이르게 되면, 지방세포로 분화시키는 조건으로 바꿔주었다. 인간 골수 중간엽 줄기세포의 배양액 (높은 농도의 포도당 (4.5g/L) 배양액)에 인슐린 1㎍/ml, 데사메타손(Dexamethasone, DEXA) 1μM, 이소부틸메틸잔틴(Isobutylmethy lxanthine, IBMX) 0.5mM 및 트로글리타존(Troglitazone, TRO) 2μM을 넣고, 인간 골수 중간엽 줄기세포를 지방세포로 분화시켰다. 실험군의 경우에는 지방세포 분화 유도시 1, 3ppm의 흑축 추출물을 각각 배지에 첨가하였고, 대조군에는 인슐린 1㎍/ml만을 넣어서 배양하였다.

지방세포 분화 유도 14일 후, 세포 배양액을 제거하고 인산염 완충용액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 뒤, 10% 포르말린/PBS 용액 0.2ml/cm²을 사용하여 세포를 10분간 고정시켰다. 고정된 세포를 60% 이소프로판올 용액 0.5ml/cm²로 1회 세척하고, 오일레드오(Oil Red O)를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액 0.2ml/cm²로 10분간 지방세포 내의 지질체를 염색하였다. 이어서, 헤마톡실린(hematoxylin)으로 재염색을 하여 세포핵을 쉽게 구분할 수 있도록 한 후, 현미경으로 관찰하였다(도 1).

도 1에서 알 수 있듯이, 인간 골수 중간엽 줄기세포가 지방세포로 분화되는 것을 촉진하는 IDX군 및 IDXT군과는 달리, 본 발명의 흑축 추출물은 인간 골수 중간엽 줄기세포의 세포 사멸을 유의한 수준으로 유도하지 않으면서 인슐린 처리군과 유사한 수준으로 지방세포로의 분화를 억제하였다. 또한, 흑축 추출물의 농도가 진해질수록, 지방세포로의 분화 억제 효과도 증가함을 알 수 있었다.

[시험예 2] 흑축 추출물에 의한 인간 골수 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화 억제 효과의 정량적 측정

지방세포 분화 정도를 측정하기 위해, 상기 시험예 1의 염색된 지방세포를 100% 이소프로판올 용액으로 처리하여 오일레드오를 용출시킨 후, 500nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 즉, 도 2는 도 1에서의 지방세포를 정량화한 값이다. 각 데이터 값은 인슐린 대조군으로 보정하였고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에서 알 수 있듯이, 흑축 추출물을 첨가하지 않은 D군과 비교하여 1ppm, 3ppm의 흑축 추출물을 처리한 실험군에서는 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화가 각각 45%, 46% 감소하였다. 상기 결과로부터, 본 발명의 흑축 추출물이 통계적으로 유의하게 인간의 골수 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화를 억제한다는 것을 확인할 수 있었다.

[시험예 3] 흑축 추출물에 의한 분화된 지방세포 내의 지질체 수준 감소 효과

인간의 골수 중간엽 줄기세포를 상기 시험예 1과 동일한 방식으로 배양하고, 인슐린 1㎍/ml, 데사메타손 1μM, 이소부틸메틸잔틴 0.5mM 및 트로글리타존 2μM로 처리하여 지방세포 분화를 14일 동안 유도하였다. 30~40% 이상의 줄기세포가 지방세포로 분화된 시점에서 1ppm, 3ppm의 흑축 추출물로 7일 동안 처리하였다.

분화된 지방세포 내의 지질체 수준을 정량적으로 측정하기 위해, 오일레드오를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액 0.2ml/cm²로 10분간 지방세포를 염색하고, 염색된 지방세포를 100% 이소프로판올 용액으로 용출시킨 후, 500nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다(도 3).

도 3에서 알 수 있듯이, 흑축 추출물을 처리한 B군 및 C군은 지질체 수준을 감소시켰으며, 특히 3ppm의 흑축 추출물을 처리한 경우에는 지질체 수준이 약 20% 감소되었다. 상기 결과로부터, 본 발명의 흑축 추출물이 분화된 지방세포 내의 지 질체 수준을 낮춤으로써 지방세포 분화를 상대적으로 억제시키는 것을 확인할 수 있었다.

[시험예 4] 전호 추출물에 의한 인간 골수 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화 억제 효과

인간 골수 중간엽 줄기세포(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)를 상기 시험예 1과 동일한 방식으로 배양하고, 인슐린 1㎍/ml, 데사메타손 1μM, 이소부틸메틸잔틴 0.5mM 및 트로글리타존 2μM을 넣어 지방세포로 분화시켰다. 실험군의 경우에는 지방세포 분화 유도시 0.1, 0.3, 1ppm의 전호 추출물을 각각 배지에 첨가하였다.

지방세포 분화 유도 12일 후, 세포 배양액을 제거하고 인산염 완충용액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 뒤, 10% 포르말린/PBS 용액 0.2ml/cm²을 사용하여 세포를 10분간 고정시켰다. 고정된 세포를 60% 이소프로판올 용액 0.5ml/cm²로 1회 세척하고, 오일레드오(Oil Red O)를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액 0.2ml/cm²로 10분간 지방세포 내의 지질체를 염색하였다. 이어서, 헤마톡실린(hematoxylin)으로 재염색을 하여 세포핵을 쉽게 구분할 수 있도록 한 후, 현미경으로 관찰하였다(도 4).

도 4에서 알 수 있듯이, 인간 골수 중간엽 줄기세포가 지방세포로 분화되는 것을 촉진하는 IDX군 및 IDXT군과는 달리, 본 발명의 전호 추출물은 인간 골수 중 간엽 줄기세포의 세포 사멸을 유의한 수준으로 유도하지 않으면서 지방세포로의 분화를 억제하였다. 또한, 전호 추출물의 농도가 0.1ppm, 0.3ppm, 1ppm으로 증가할수록, 지방세포로의 분화 억제 효과도 증가함을 알 수 있었다.

[시험예 5] 전호 추출물에 의한 인간 골수 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화 억제 효과의 정량적 측정

지방세포 분화 정도를 측정하기 위해, 상기 시험예 4의 염색된 지방세포를 100% 이소프로판올 용액으로 처리하여 오일레드오를 용출시킨 후, 500nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 즉, 도 5는 도 4에서의 지방세포를 정량화한 값이다. 각 데이터 값은 인슐린 대조군으로 보정하였고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5에서 알 수 있듯이, 전호 추출물을 첨가하지 않은 E군과 비교하여 0.1ppm, 0.3ppm, 1ppm의 전호 추출물을 처리한 실험군에서는 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화가 각각 33%, 48%, 68% 감소하였다. 상기 결과로부터, 본 발명의 전호 추출물이 통계적으로 유의하게 인간의 골수 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화를 억제한다는 것을 확인할 수 있었다.

[시험예 6] 전호 추출물에 의한 분화된 지방세포 내의 지질체 수준 감소 효과

인간의 골수 중간엽 줄기세포를 상기 시험예 1과 동일한 방식으로 배양하고, 인슐린 1㎍/ml, 데사메타손 1μM, 이소부틸메틸잔틴 0.5mM 및 트로글리타존 2μM로 처리하여 지방세포 분화를 15일 동안 유도하였다. 40~50% 이상의 줄기세포가 지방 세포로 분화된 시점에서 0.1, 0.3, 1ppm의 전호 추출물로 7일 동안 처리하였다.

분화된 지방세포 내의 지질체 수준을 정량적으로 측정하기 위해, 오일레드오를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액 0.2ml/cm²로 10분간 지방세포를 염색하고, 염색된 지방세포를 100% 이소프로판올 용액으로 용출시킨 후, 500nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다 (도 6).

도 6에서 알 수 있듯이, 전호 추출물은 0.1, 0.3, 1ppm의 농도에서 중간엽줄기세포의 지방세포 내의 지질체 수준을 각각 28%, 34%, 40% 감소시켰다. 상기 결과로부터, 본 발명의 전호 추출물이 분화된 지방세포 내의 지질체 수준을 낮춤으로써 지방세포 분화를 상대적으로 억제시키는 것을 확인할 수 있었다.

도 1은 흑축 추출물에 의한 중간엽 줄기세포 내의 지방세포 분화 억제 효과를 나타내는 현미경 사진이다.

도 2는 흑축 추출물에 의한 중간엽 줄기세포 내의 지방세포 분화 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

도 3은 흑축 추출물에 의한 분화된 지방세포 내의 지질체 수준 감소 효과를 나타내는 그래프이다.

도 4는 전호 추출물에 의한 중간엽 줄기세포 내의 지방세포 분화 억제 효과를 나타내는 현미경 사진이다.

도 5는 전호 추출물에 의한 중간엽 줄기세포 내의 지방세포 분화 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

도 6은 전호 추출물에 의한 분화된 지방세포 내의 지질체 수준 감소 효과를 나타내는 그래프이다.

Claims

전호 추출물을 유효성분으로 함유하는 슬리밍용 화장료 조성물로서,

상기 조성물은 인간 중간엽 줄기세포가 지방세포로 분화되는 것을 억제함으로써 슬리밍 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는, 슬리밍용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 흑축 추출물을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 슬리밍용 화장료 조성물.
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제1항에 있어서, 상기 인간 중간엽 줄기세포가 인간 골수의 중간엽 줄기세포인 것을 특징으로 하는 슬리밍용 화장료 조성물.
전호 추출물을 유효성분으로 함유하는 슬리밍용 건강식품 조성물로서,

상기 조성물은 인간 중간엽 줄기세포가 지방세포로 분화되는 것을 억제함으로써 슬리밍 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는, 슬리밍용 건강식품 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물은 흑축 추출물을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 슬리밍용 건강식품 조성물.
삭제
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제7항에 있어서, 상기 인간 중간엽 줄기세포가 인간 골수의 중간엽 줄기세포인 것을 특징으로 하는 슬리밍용 건강식품 조성물.