KR101687982B1

KR101687982B1 - 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법

Info

Publication number: KR101687982B1
Application number: KR1020150045613A
Authority: KR
Inventors: 정종문; 이승숙
Original assignee: 주식회사 벤스랩
Priority date: 2015-03-31
Filing date: 2015-03-31
Publication date: 2016-12-20
Also published as: KR20160117034A

Abstract

본 발명은 남성 생식기능 개선을 위한 기능성 조성물로서, 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방효과를 갖는 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것으로서, 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

Description

정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법{Composition for improving sexual functionality having effects of increasing of the number of sperm and protection of environmental hormone and manufacturing method thereof}

본 발명은 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것으로 특히, 남성 생식기능 개선을 위한 기능성 조성물로서, 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방효과를 갖는 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

성적으로 흥분된 음경의 발기는 중추신경계, 말초신경계 및 평활근을 포함하는 생리학적 과정의 복잡한 상호 작용으로 인해 발생한다. 특히, 비-아드레날린성, 비-콜린성 신경 및 내피로부터의 일산화질소의 방출은 음경해면체 내의 구아닐 사이클라제를 활성화시키고 세포내 cGMP 수준을 증가시킨다.

세포 내 cGMP의 증가는 세포 내 칼슘 수준을 감소시키고, 이는 주상 평활근 이완을 유발하고, 이는 다시 해면체 부피 확장 및 하위피막 소맥(subtunical venule)의 압축을 유발하여 음경 발기를 유도한다.

또한, 인체 내에서 강력한 혈관 수축제인 안지오텐신(angiotensin)의 합성에 관여되는 ACE(angiotesin converting enzyme)의 활성 감소와 더불어 혈액 내의 일산화질소(nitric oxide)를 증가시켜 혈관의 이완을 촉진시켜 음경 내 혈류량이 증가하여 음경 발기를 유도하기도 한다.

현대적인 생활환경에서 과로, 음주, 스트레스, 환경오염 등은 생체리듬에 혼란을 주어, 고혈압, 당뇨, 비만 등의 성인병 빈도를 증가시킴에 따라, 한창 왕성해야 할 20 내지 30대부터 기력 저하, 노화 및 성기능 부진 등의 현상을 유발하는 경우가 많고, 40세 이상에서는 매우 심각한 수준으로 나타나고 있다.

따라서, 현대사회에는 남성의 발기부전, 무정자증, 불임, 성기능장애 등 각종 남성 성기능 저하로 고통받는 남성이 증가하는 추세에 있다.

환경오염물질 중 인체 내로 들어가 호르몬 작용을 방해하거나 교란시키는 내분비계교란물질(Endocrine Disrupters)로서 작용하는 환경호르몬은 극미량으로도 생식장애나 성전환 등을 유발할 수 있는 물질로 특히 남성의 경우 발기부전, 정자수 및 정액 감소, 정자운동성 감소, 기형정자발생 증가, 생식기 기형, 정소종양 등을 유발하게 된다.

환경 호르몬으로는 다이옥신류, 잔류성 유기염소계, 농약류, 페놀류 등 68종의 화학물질이 등록되어 있으며, 특히 카드뮴은 정소손상 뿐만 아니라 골연화증, 신장기능저하, 신경장애 등을 일으키는 중금으로 인체에 쉽게 흡수되어 불임을 일으키는 가장 중요한 환경호르몬 중의 하나로 인식되고 있다.

최근 포스포디에스테라제 5(PDE5: Phosphodiesterase 5) 저해제인 실데나필(비아그라)이 미합중국 식품의약국(FDA)에 의해 발기부전에 대한 효과적인 경구치료제로 승인되었다. PDE5를 저해함으로써 음경 발기에 중요한 역할을 하는 cGMP 분해를 억제하여 세포 내 cGMP함량을 증가시켜 성적흥분 하에 음경발기를 유도하게 된다. 이 약은 심리적 또는 생물학적 원인의 발기부전을 겪는 남자의 대략 70%에서 성기능을 향상시켰다. 그러나 실데나필의 사용은 다양한 조직에 대한 비선택적인 효과로 인한 두통, 홍조 및 색 혼동을 포함하는 몇 가지 바람직하지 못한 부작용과 관련되어 있으며, 발기부전의 원인이 되는 혈액순환, 내분비 기능 등에 관련된 신체의 장애를 개선시키지 않고, 일시적인 발기 유도에만 초점을 두고 개발되어 사용함에 따라 내성이 생기거나 여러 가지 부작용이 나타날 수 있다.

이 밖에 남성 발기부전에 대한 약물 치료는 아미노산요법, 비타민요법, 성호르몬요법 등 여러 가지 방법이 활용되고 있지만 아직까지 만족할 만한 성과가 없는 실정이며, 정자감소증에 대한 치료법으로는 전신요법, 약물에 의한 내과적 요법 등이 있지만 성공률이 매우 낮다.

남성 성기능 개선치료에 있어서, 우리나라의 경우, 사회 관습적, 윤리적 이유 등으로 한의학에 의존하여 치료하는 경우가 많지만 정확한 작용기전 및 각각의 처방에 대한 기본적인 체계적 연구가 없는 경우가 대부분이다. 성기능 개선 건강식품 역시 성기능 개선에 좋다고 알려진 성분을 대략 혼합하여 유효성분의 적정량, 시너지 효과, 복용기간 등의 과학적 연구를 무시하고 제조 판매하기 때문에 체험적 효과가 미미한 실정이다.

따라서 부작용이 없으면서도 효과가 충분히 나타나는 새로운 경구용 성분의 천연물의 개발이 절실히 요구되고 있다.

본 발명자들은 현대 남성들이 갖는 성생활에 장애를 주는 요소들의 근본적인 개선을 위해 스트레스에 대한 저항력과 기력을 증가시키며, 혈액순환부진을 개선시고, 호르몬 균형을 이루도록 도와주는 식용소재들을 선별하여 발효과정을 거쳐 성기능 향상 효능을 극대화시킨 조성물을 개발하고, 이 조성물을 동물실험으로 확인하고 그 효과를 임상실험을 통하여 입증하고, 더불어 완성된 조성물이 갖는 효과로서 환경호르몬 등에 의해 유발되는 정소조직 손상과 정자수 감소의 예방효과를 과학적인 실험을 통해 입증하여 본 발명을 완성하였다.
대한민국 공개특허공보 공개번호 제2010-0129571호 2010년 12월 9일 공개
동의생리병리학회지. 15권, 6호, pp.637-644 (2001.)

본 발명의 하나의 목적은 발기부전 치료제들이 가지고 있는 독성 및 부작용, 효능부족 및 거부감 등의 문제점을 최소화하고, 편리성과 안전성을 극대화하는 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선 조성물 및 이를 함유하는 성기능 개선용 식품을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 혼합, 발효시켜 유효성분을 극대화한 것을 특징으로 하며, 이에 의하여, 혈관확장, 호르몬 균형으로 인한 성기능 향상과 정자수 증가 및 환경호르몬에 의한 정소조직 손상과 정자수 감소예방 효과를 나타내면서 인체에 무해하여 유용하게 이용될 수 있는 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물은, 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물은 각각 마카의 열수추출물, 당귀의 열수추출물, 남가새의 열수추출물 및 구기자의 열수추출물일 수 있다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물의 혼합비는 당귀추출물 10 내지 50중량%, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 구기자추출물 1 내지 30중량% 및 잔량으로서 마카추출물을 포함할 수 있다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물은 유산균으로 발효된 것일 수 있다.

상기 유산균은 류코노스톡 속, 락토바실러스 속, 락토코커스 속, 페디오코커스 속, 비피도박테리움 속, 스트랩토코커스속 유산균 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택된 것일 수 있다.

상기 유산균은 류코노스톡 속의 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 겔리듐(Leuconostoc gelidium), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides sub. mesente roides); 락토코커스 속의 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis), 락토코커스 플란타룸(Lactococcus plantarum); 락토바실러스 속의 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 박토바실러스 불가리커스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus); 스트랩토코커스 속의 스트랩토코커스 써모필러스(Streptocuccus thermophilus); 비피도박테리움 속의 비피도박테리움비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum); 페디오코커스 속의 페디오코커스 펜토사사세스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 매시디락티스(Pediococcus acidilactici); 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어진 것일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 제조방법은, (1) 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 제조하는 추출단계; 및 (2) 상기 추출단계에서 수득되는 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 혼합하되, 당귀추출물 10 내지 50중량%, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 구기자추출물 1 내지 30중량% 및 잔량으로서 마카추출물을 포함하는 혼합물을 수득하는 혼합단계;를 포함함을 특징으로 한다.

상기 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 제조방법은 상기 혼합단계 이후에 상기 혼합단계에서 수득된 혼합물을 유산균으로 발효시키는 발효단계;를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따르면, 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 혼합, 발효시켜 유효성분을 극대화한 것을 특징으로 하며, 이에 의하여, 혈관확장, 호르몬 균형으로 인한 성기능 향상과 정자수 증가 및 환경호르몬에 의한 정소조직 손상과 정자수 감소예방 효과를 나타내면서 인체에 무해하여 유용하게 이용될 수 있는 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 효과가 있다.

또한, 본 발명에 따르면, 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방효과를 제공하고, 그리고 본 발명에 따르면, ACE(Angiotensin converting enzyme) 및 PDE(Phosphodiesterase)를 저해하고 혈청 내 cGMP함량을 증가시켜 혈류량 증가와 음경평활근 이완을 통해 발기를 유발시키며, 성호르몬 증가에 의해 성기능을 향상시킬 수 있으며, 또한 염화카드뮴에 의해 생식기능이 저하되는 것을 예방할 수 있다.

도 1은 본 발명의 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 다양한 농도에서 마우스 정소 세포 TM3의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 TM3에서 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선 조성물에 의한 테스토스테론 농도를 측정한 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물을 투여한 실험쥐의 정자수 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물을 투여한 후 염화카드뮴을 투여하여 환경호르몬에 의한 실험쥐의 정자수 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물을 투여한 실험쥐의 혈청 내 cGMP 농도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 테스토스테론 농도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은 음경해면체의 아질산 함량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 임상실험 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명의 구체적인 실시예를 첨부한 도면을 참조하여 상세히 설명한다.

본 발명에 사용된 주된 조성물들은 다음과 같다.

마카(Lepidium meyenii)는 안데스 산맥의 해발 4000m의 고원지대에서 자생하는 다년생 식물로 다즙한 식물이며, 줄기나 가지 따위가 누워 있으면서 끝은 위를 향하고 있다. 열매는 4 내지 5㎜ 크기로, 5 내지 6월에 수확한다. 마카의 유효성분으로는 베타-시토스테롤, 사포닌, 스티그마스테롤, 탄닌, 알카로이드, 베타-텍티손 등이 있으며, 정자와 난자의 발육을 촉진한다고 알려져 있는 아연이 다량 함유되어 있어 신체 내 내분비 호르몬 활동을 정상화시키거나 자양강장을 통해 성기능 개선 효과를 나타낸다고 한다. 또한 필수아미노산인 아르기닌과 라이신이 풍부하여 정자수 증가와 난자 수정률이 높아져 불임 극복에 기여할 것으로 알려져 있다.

당귀, 특히 참당귀(Angelica gigas)는 미나리과에 속하는 단맛이 나지 않고 약간 쓴맛이 나며, 여러해살이 풀로 한국과 중국, 일본 등에 분포한다. 높이는 1 내지 2m 정도이고, 줄기 전체가 보랏빛을 띠며 향기가 많다. 꽃은 자주색을 띠고 열매는 타원형이고 넓은 날개가 가장자리에 달려있다. 당귀의 뿌리는 보통 당귀라고 하는데 대표적인 성분은 데커신(decursin), 데커시놀(decursinol), 임페라토린(imperatorin), 노다케닌(nodakenin), 노다케네틴(nodakenetin) 등과 같은 쿠마린 계열물질이다. 특히 참당귀의 뿌리 추출물에는 유효성분으로서 데커신과 데커시놀 안젤레이트(decursinol angelate)가 약 90%의 매우 고농도로 들어있으며 여러 가지 생리활성이 보고되어 있다. 이 당귀는 관상동맥의 혈류량을 촉진시키고 활혈 작용이 뛰어나고, 항암효과 및 혈압강하 작용이 강하다. 한방에서 진정제, 강장제와 치질, 빈혈 등의 치료에 쓰이는 것으로 알려져 있다.

남가새(Tribulus alatus)는 우리나라의 제주도와 거제도 그리고 함경북도 명천군의 바닷가 모래땅에 자라는 한해살이풀이다. 줄기는 1m 쯤 자라며 밑에서부터 가지가 많이 갈라져 옆으로 기고, 잎은 마주나며 타원 꼴의 쪽잎이 5 내지 7쌍 붙는다. 여름철에 노란색 꽃이 피고 날카로운 가시가 달린 다각형 열매가 가을에 익는다. 한자로 '백질려' 또는 '자질려'라 하고 열매를 '질려자' 또는 '백석리', '석리', '실리자'라고 한다. 남가새의 열매는 사포닌, 정유, 알칼로이드, 고무질, 칼륨염 등을 포함하고 있어 혈관을 부드럽게 하고 콜레스테롤을 용해시켜 혈액순환이 잘되게 하여 혈압을 낮추고 염증을 없애며 이뇨 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

구기자(Lycium chinense)는 가시가 헛개나무(구(枸))와 비슷하고 줄기는 버드나무(기(杞))와 비슷하여 구기(枸杞)라 부르며, 우리나라를 비롯한 중국, 일본 등지에서 자생하거나 재배되고 있는 생약재로 한방에서는 독성이 없는 상약군으로 취급하고 있다. 구기자의 약성은 약간 달고 차며 간과 신장에 작용하여 시력을 개선하고 근육과 뼈를 강하게 한다. 이 외에도 비특이성 면역증강 작용, 조혈 작용, 콜레스테롤강하 작용, 항지방간 작용, 혈압강하, 혈당강하, 항암 작용, 신장보호 작용 등이 보고되었다. 구기자의 유효성분으로는 베타인(betaine), 제아잔틴(zeaxanthin), 베타-시토스테롤(-sitosterol), 피살리엔(physalien), 콜린(cholin) 등이 있으며, 그 중 가장 대표적인 성분은 콜린대사물질의 하나인 베타인(betaine)으로서 간기능 및 시력을 회복하고 신장을 보호하는 등 다양한 생리활성이 있다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물은 각각 마카, 당귀, 남가새 및 구기자를 열수 또는 20 내지 90% 알코올 추출물일 수 있다. 상기 알코올은 바람직하게는 에탄올일 수 있으나, 본 발명이 이로 제한되는 것으로 의도되는 것이 아님은 이해되어야 한다.

예시적으로 본 발명의 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

마카, 당귀, 남가새, 구기자를 각각 세척 후, 그늘에서 충분히 건조시키고 세절하거나 분쇄한 다음, 무게의 약 1배 내지 30배의 물, 에탄올과 같은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물로 20 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 95℃ 추출온도에서 1시간 내지 2일, 바람직하게는 2시간 내지 5시간 동안, 1회 내지 10회, 바람직하게는 2회 내지 5회 반복적으로 초음파 추출, 진탕 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법, 더욱 바람직하게는 환류냉각추출 방법을 수행하여 추출물을 수득한 후, 이를 여과하여, 감압농축 또는 진공 농축하여 추출농축액을 수득할 수 있으며, 부가적으로 동결 건조 및 열풍건조를 통해 분말형태로 수득 가능하다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물의 혼합비는 임의의 비율로 혼합될 수 있으나, 바람직하게는 당귀추출물 10 내지 50중량%, 바람직하게는 20 내지 40중량%, 보다 바람직하게는 25 내지 35중량%의 범위 이내, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 바람직하게는 10 내지 40중량%, 보다 바람직하게는 20 내지 30중량%의 범위 이내, 구기자추출물 1 내지 30중량%, 바람직하게는 5 내지 25중량%, 보다 바람직하게는 10 내지 20중량%의 범위 이내 및 잔량으로서 마카추출물을 포함할 수 있다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물은 바람직하게는 유산균으로 발효된 것일 수 있다.

발효란 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해시키는 과정으로, 부패반응과 비슷하게 진행되지만 우리 생활에 유용한 물질이 생성되는 것을 발효라고 한다. 이러한 발효과정을 통해 식물추출물의 유효성분이 체내 흡수되는 정도가 높아져 본래의 효과보다 뛰어난 효능을 나타내며, 유산균 자체도 인체 장내 유해세균의 증식을 억제하며 정장작용 등의 인체에 유익한 작용을 한다. 이밖에도 암예방, 혈중 콜레스테롤 억제, 숙취회복 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

상기 유산균은 류코노스톡 속, 락토바실러스 속, 락토코커스 속, 페디오코커스 속, 비피도박테리움 속, 스트랩토코커스속 유산균 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택된 것일 수 있으며, 보다 바람직하게는 상기 유산균은 류코노스톡 속의 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 겔리듐(Leuconostoc gelidium), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides sub . mesente roides); 락토코커스 속의 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 락토코커스 플란타룸(Lactococcus plantarum); 락토바실러스 속의 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 박토바실러스 불가리커스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus); 스트랩토코커스 속의 스트랩토코커스 써모필러스(Streptocuccus thermophilus); 비피도박테리움 속의 비피도박테리움비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum); 페디오코커스 속의 페디오코커스 펜토사사세스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 매시디락티스(Pediococcus acidilactici); 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어진 것일 수 있다. 본 발명의 발효에 사용된 미생물은 가장 바람직하게는 락토바실러스 속(Lactobacillus sp .)이다. 락토바실러스 속 유산균은 당류를 발효하여 에너지를 획득하여 다량의 젖산을 생성하는 세균으로, 형태적으로는 그람양성 무포자 간균으로 다형성을 나타내고, 산소가 적은 환경에서 즐겨 생육한다. 이들은 강한 산성(pH 3 내지 4)에서 내성을 보이는 것이 많고, 유산발효의 형식에는 정상 유산발효(homo fermentative)와 이상 유산발효(hetero fermentative)로 나눠지며, 정상 유산발효는 당류에서 유산만을 생성하는 발효로, 이것을 하는 유산균을 정상 유산균이라고 부르고, 그 대표적인 균종으로는 락토바실러스 페르멘툼(L. fermentum)이나 락토바실러스 브레비스(L. brevis) 등이 있다. 유제품, 고기제품, 빵종, 사과국, 사일레이지에서 사람이나 동물의 구강, 장관, 육, 소의 제1위(rumen)까지 자연계에 널리 분포하고 또한 인간의 복용에도 안전하고, 유산균 발효물은 특유의 풍미가 장점이다. 또한, 유산균 발효에 의해 단백질, 지방 등이 부분 분해되기에 소화 흡수성 향상 및 영양적 우수성을 나타낸다.

상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물의 발효물을 수득하기 위해서는, 바람직하게는 당귀추출물 10 내지 50중량%, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 구기자추출물 1 내지 30중량% 및 잔량으로서 마카추출물을 포함하는 혼합물을 고체발효 시 원료의 습도가 50 내지 70% 되도록 물 첨가 후, 20 내지 40분간 멸균하여 시료를 준비하고, 액체발효 시 1 : 10 내지 1 : 30중량/용적%(%w/v)의 비율로 물 첨가 후, 20 내지 40분 멸균하여 준비한다. 발효에 사용할 락토바실러스 속은 24 내지 48시간 배양 후, 고체발효 시 균사체 3 내지 10중량/용적% 첨가, 액체발효 시 2 내지 10중량/용적%으로 첨가하여 10 내지 30℃에서 4 내지 9일간 발효를 수행한다. 상기 발효물을 10 내지 30분간 멸균한 뒤 이를 건조시켜 분말형태로 수득 가능하다.

본 발명은 상기한 바와 같이 마카, 당귀, 남가새, 구기자 추출물의 복합발효물을 제조하는 제조방법을 제공한다.

즉, 본 발명에 따른 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 제조방법은, (1) 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 제조하는 추출단계; 및 (2) 상기 추출단계에서 수득되는 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 혼합하되, 당귀추출물 10 내지 50중량%, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 구기자추출물 1 내지 30중량% 및 잔량으로서 마카추출물을 포함하도록 혼합하여 혼합물을 수득하는 혼합단계;를 포함함을 특징으로 하며, 상기 혼합단계 이후에 상기 혼합단계에서 수득된 혼합물을 유산균으로 발효시키는 발효단계;를 더 포함할 수 있다.

여기에서 사용되는 상기 유산균은 류코노스톡 속, 락토바실러스 속, 락토코커스 속, 페디오코커스 속, 비피도박테리움 속, 스트랩토코커스속 유산균 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 류코노스톡 속의 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 겔리듐(Leuconostoc gelidium), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides sub . mesente roides); 락토코커스 속의 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 락토코커스 플란타룸(Lactococcus plantarum); 락토바실러스 속의 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 박토바실러스 불가리커스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus); 스트랩토코커스 속의 스트랩토코커스 써모필러스(Streptocuccus thermophilus); 비피도박테리움 속의 비피도박테리움비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum); 페디오코커스 속의 페디오코커스 펜토사사세스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 매시디락티스(Pediococcus acidilactici); 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어진 것일 수 있다.

상기한 바와 같은 본 발명에 따르면, 마카추출물(주요 지표물질: 마카미데스(macamides)), 당귀추출물(주요 지표물질: 데커신(decursin)), 남가새추출물(주요 지표물질: 프로토디오신(protodioscin)), 구기자추출물(주요 지표물질: 베타인(betaine))을 유효성분로 함유한다.

또한, 본 발명은 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방에 효과적인 성기능 개선용 조성물을 제공한다.

또한, 상기 원료들은 오랫동안 식품으로 사용되어 오던 것으로서 이들로부터 추출된 본 발명의 조성물 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.

상기 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물은 성기능 개선용 식품으로 제공될 수 있으며, 이는 상기한 바의 성기능 개선용 조성물을 유효성분으로 포함하는 분말, 과립, 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제로 이루어진 것을 특징으로 하는 성기능 개선용 식품으로 제공될 수 있으며, 보다 바람직하게는 이들 식품에는 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류, 꿀 제품류가 포함될 수 있다.

상기와 같은 방법으로 얻어진 조성물의 ACE 억제효능, PDE 억제효능, 정소세포에 대한 세포독성 및 테스토스테론 농도변화를 측정하였으며, 또한 남성 성기능 향상 및 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방효과를 조사하기 위하여 동물실험을 실시한 결과, 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방에 탁월한 효과를 나타냄을 확인하였다.

본 발명의 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하예방에 효과적인 기능성 식품조성물 총 중량에 대하여 상기 성기능 개선용 조성물을 0.1 내지 100중량%로 포함한다.

본 발명의 조성물을 포함하는 기능성식품조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물을 포함하는 기능성식품조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀루로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀루로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 꿀, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 대상자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.5 내지 3g 으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 조성물은 독성 및 부작용이 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하예방을 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류, 꿀제품류 등이 있으며, 환제, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100을 기준으로 0.02 내지 5g 비율로 가할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 시험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 추출물의 제조

본 발명에 사용한 마카, 당귀, 남가새, 구기자는 원료보급회사로부터 구입하였다. 마카추출물을 제조하기 위해 마카 1㎏을 건조 후 마쇄하여 얻은 분말 300g을 집기병에 담은 후, 70% 에탄올(잔량은 물) 1800㎖를 넣고 50℃에서 2시간으로 2회 반복하여 추출한 후, 여과지(Whatman No.1, England)로 감압여과한 다음, 여과추출물은 진공회전농축기로 40℃에서 감압 농축 후 건조하여 추출물을 수득하였다. 당귀추출물을 제조하기 위해 당귀 1㎏을 건조 후 마쇄하여 얻은 분말 200g을 집기병에 담은 후, 70% 에탄올(잔량은 물) 1000㎖를 넣고 50℃에서 3시간으로 3회 반복하여 추출한 후, 여과지(Whatman No.1, England)로 감압여과한 다음, 여과추출물은 진공회전농축기로 40℃에서 감압 농축 후 건조하여 추출물을 수득하였다. 남가새와 구기자에 대하여도 상기 당귀의 추출과 동일하게 수행하였다.

실시예 2. 지표물질 분석

상기 실시예 1에서 수득한 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물, 구기자추출물을 고성능 액체크로마토그래피-다이오드 어레이 검출기(HPLC-DAD)를 이용하여 각각의 유효성분인 마카미데스(마카), 데커신(당귀), 프로토디오신(남가새), 베타인(구기자) 함량을 분석하였고, 4종 지표물질의 함량에 근거하여 최적배합비를 실시예 3과 같이 설정하였다. 지표물질의 분석방법 및 함량은 표 1과 같다. 하기 표 1에서 ACN은 아크릴로니트릴의 약어이다.

실시예 3. 발효

상기 실시예 1의 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물, 구기자추출물을 고형분 함량 무게 기준으로 각각 30g, 30g, 25g, 15g의 배합비로 배합하여 원료의 습도가 50%되도록 물을 첨가한 후 121℃에서 20분간 멸균한다. 프랑스 소재 디프코사(Difco)의 MRS 브로스(MRS broth: 발명자 de Man, Rogosa 및 Sharpe의 약자로 명명됨 ; 1) 젤라틴의 췌장 소화물(pancreatic digest of gelatin) 10.0g, 2) 소고기 육즙(beef extract) 8.0g, 3) 덱스트로스(dextrose) 20.0g, 4) 인산이칼륨(dipotassium phosphate) 2.0g, 5) 폴리소르베이트 80(polysorbate 80) 1.0g, 6) 아세트산나트륨(sodium acetate) 5.0g, 7) 시트르산암모늄(ammonium citrate) 2.0g, 8) 황산마그네슘(magnesium sulfate) 0.2g, 9) 황산망간(manganese sulfate) 0.05g을 포함)에서 30℃, 28시간 배양한 후, 원심분리하여 얻은 락토바실러스 속 펠릿(pellet) 6g을 멸균한 혼합물에 접종하여 30℃에서 7일간 발효시켰다. 이 발효물을 121℃에서 20분간 멸균한 후, 건조하여 성기능 개선용 조성물(이하 각 실험에서 'MP119GD'라고 칭함)을 제조하였다.

실험예 1. ACE(angiotesin converting enzyme) 저해효과 측정

ACE 저해 활성 측정은 쿠쉬만(Cushman) 등의 방법을 응용하여 측정하였다. 먼저 효소원을 준비하기 위하여 토끼 폐 아세톤 분말(rabbit lung acetone powder) 10g을 50mM 인산칼륨 완충제(potassium phosphate buffer: pH 8.3) 100㎖에 충분히 섞어준 후에 40,000g에서 40분간 원심분리하여 얻은 상등액을 효소원으로 사용하였다. ACE 저해활성 측정은 먼저 분석 혼합물(assay mixture) 0.25㎖(100mM 인산칼륨 완충제(potassium phosphate buffer: pH 8.3), 300mM NaCl, 5mM hippuryl-his-leu), 효소 0.15㎖(8mU), 상기 성기능 개선용 조성물 0.1㎖를 30분간 37℃에서 반응시켰다. 1N HCl 0.25㎖를 첨가하여 반응을 정지시키고 에틸아세테이트 1.5㎖을 넣어준 후 와류(vortexing)시켜 에틸아세테이트 층을 분리시켰다. 분리한 에틸아세테이트층을 건조시킨 후 증류수에 용해하여 229㎚에서 흡광도를 측정하여 ACE 저해율을 계산(ACE 저해율은 1-[(A시료-A대조군/B시료-B대조군)]*100으로 계산)하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 상기 저해율의 계산에서, A시료는 측정 시료와 효소원을 모두 포함하는 샘플의 흡광도, A대조군은 측정 시료는 포함하되, 효소원은 포함하지 않는 샘플의 흡광도, B시료는 측정 시료는 포함하지 않고, 효소원 만을 포함하는 샘플의 흡광도, 그리고 B대조군은 측정 시료와 효소원들 모두를 포함하지 않는 샘플의 흡광도를 나타낸다.

상기 실험 결과, 성기능 개선 조성물의 첨가 농도가 높아질수록 ACE 저해율이 증가되는 것을 확인할 수 있었다. ACE가 50% 저해되는 성기능 개선용 조성물의 농도인 IC50(Inhibitory Concentration)값은 225.68ppm이며, 효과적으로 ACE를 저해하고 있음이 확인되었다. 이 결과를 통해 성기능 개선용 조성물이 발기유지에 도움을 줄 것으로 사료되며, 더불어 혈행개선으로 인한 혈압강하 효능을 보일 것으로 사료된다.

농도 (ppm)	마카 추출물	당귀 추출물	남가새 추출물	구기자 추출물	발효전 조성물	발효후 조성물
50	5.0	4.5	5.1	6.0	8.7	13.0
100	15.5	12.0	16.4	13.5	22.0	32.5
250	35.0	30.8	34.6	31.8	45.0	65.2
500	70.3	65.5	72.2	66.9	75.4	88.9
1000	79.9	78.7	80.2	72.8	88.9	100

실험예 2. 인산디에스테르가수분해효소5(PDE5: Phosphodiesterase5) 억제능 측정

5-GMP를 5-뉴클레오티드분해효소(5-nucleotidase)로 처리한 다음, 바이오몰그린(BIOMOL GREEN) 시약을 처리하여 620㎚에서 흡광도를 측정하여 표준곡선을 얻고, 3,5-cGMP를 기질로 하여 PDE와 성기능 개선용 조성물을 첨가하여 반응시킨 다음 5-뉴클레오티드분해효소로 처리하고 바이오몰그린 시약을 처리하여 620㎚에서 흡광도를 측정, 생성된 5-GMP의 양을 대조군과 비교하여 PDE 저해율을 계산하여 표 3에 나타내었다.

농도 (ppm)	마카 추출물	당귀 추출물	남가새 추출물	구기자 추출물	발효전 조성물	발효후 조성물
40	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0
100	1.9	2.8	3.0	2.2	3.3	4.5
200	10.0	11.8	15.5	14.9	15.0	19.0
400	33.0	40.6	45.9	46.7	56.0	66.0

실험예 3. 마우스 정소세포 TM3에 대한 세포독성 확인

성기능 개선용 조성물에 대하여 세포독성을 알아보기 위해 수컷 마우스의 정소세포인 레이딕(Leydig) 세포(TM3, 한국세포주은행)를 사용하여 슬래도우스키(Sladowski) 등의 방법으로 MTT 분석을 실시하였다. TM3세포 90㎕(2 x 10⁵cells)에 성기능개선 조성물 10㎕를 처리한 후 37℃에서 5시간 배양한 다음 MTT 용액(5㎎/㎖) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 3시간 배양하였다. 그 후 상층액을 제거한 뒤 디메틸설폭사이드(DMSO)를 웰(well) 당 200㎕씩 넣고 20분간 반응시킨 다음 595㎚에서 흡광도를 측정하여 생존율을 계산하였다. 생존율(%)은 [(대조군의 흡광도-실험군의 흡광도)/대조군의 흡광도] x 100의 식으로부터 구하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.

실험 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 성기능 개선용 조성물은 1000ppm까지 세포독성이 없는 것으로 나타났다.

실험예 4. TM3 세포에서 테스토스테론 농도 측정

TM3 세포에서 테스토스테론 농도를 효소면역분석킷트(Enzyme Immunoassay Kit ; 미합중국 소재 어세이디자인사(Assay Designs)를 사용하여 측정하였다. 세포 90㎕(2 x 10⁵cells)에 성기능 개선용 조성물 10㎕를 처리한 후 37℃에서 48시간 배양하였다. 배양이 끝난 후 상층액 100㎕를 염소 항-생쥐 면역글로블린 G(goat anti-mouse IgG) 함유 미세적정판(microtiter plate)에 옮긴 다음 테스토스테론 효소면역분석 항체(testosterone EIA antibody)를 첨가하여 1시간 배양하고 콘쥬게이트(conjugate)를 첨가하여 1시간 배양 후, 세척용액(washing solution)으로 세척하였다. 세척 후, pNpp 기질 용액을 첨가하여 1시간 반응 후, 정지용액(stop solution)으로 반응을 중지시키고, 405㎚에서 흡광도를 측정하여 계산한 값을 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, 성기능 개선용 조성물 농도별 처리군 5, 10, 50ppm까지는 테스토스테론 농도 변화가 없었지만, 100, 200, 400, 1000ppm에서 각각 12.20, 12.58, 13.20, 13.80pg/㎖로 대조군과 비교했을 때 최대 22.12% 증가한 것을 확인할 수 있었다. 이 결과를 통해 성기능 개선용 조성물은 정소에서 테스토스테론 분비를 촉진시키는 것을 확인 할 수 있다.

실험예 5. 실험쥐를 사용하여 성기능 향상 및 정자수 증가효능 확인

실험동물로는 웅성 흰쥐(ICR계 마우스, 구입 시 7주령)를 각 군당 10마리씩 사용하였으며, 대조군과 성기능 개선용 조성물군으로 나누었다.

실내온도 22±1℃, 습도 55±5%, 명암주기 12시간의 일정한 환경에서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하고, 증류수를 투여한 대조군과 성기능 개선용 조성물을 30㎎/생쥐/일 투여한 실험군에 각각 1일 1회 7일간 경구투여하였다. 마지막 경구투여 후, 마우스를 희생시켜 정소, 부정소, 정낭을 분리하여 각각의 무게를 측정하고, 분리한 부정소를 2㎖ 생리식염수에서 균질화(homogenization)한 다음, 37℃에서 20분간 방치시킨 후 혼합액을 1/5 희석하여 현미경 상에서 정자 수를 측정하였다.

정소, 부정소, 정낭의 무게를 표 4에 표시하였고, 정자수를 도 3에 나타내었다.

	대조군	발효전 조성물	발효후 조성물
정소무게()	211.5	222.2	234.2
부정소무게()	91.1	93.1	96.8
정낭무게()	240.1	245.5	258.2

실험예 6. 염화카드뮴을 투여한 실험쥐를 이용한 환경호르몬 예방효과

실험동물로는 웅성 흰쥐(ICR계 마우스, 구입 시 7주령)를 각 군당 10마리씩 사용하였으며, 대조군, 발효전 조성물과 성기능 개선용 조성물군으로 나누었다.

실내온도 22±1℃, 습도 55±5%, 명암주기 12시간의 일정한 환경에서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하고, 증류수를 투여한 대조군과 성기능 개선용 조성물을 30㎎/생쥐/일 투여한 실험군에 각각 1일 1회 7일간 경구투여 하였다. 마지막 경구투여 후, 염화카드뮴을 0.06㎎/생쥐로 1회 복강 내 주사하였고, 24시간 후, 마우스를 희생시켜 정소, 부정소, 정낭을 분리하여 각각의 무게를 측정하고, 분리한 부정소를 2㎖ 생리식염수에서 균질화한 다음, 37℃에서 20분간 방치시킨 후 혼합액을 1/5 희석하여 현미경 상에서 정자 수를 측정하였다.

정소, 부정소, 정낭의 무게를 표 5에 표시하였고, 정자수를 도 4에 나타내었다.

	대조군	발효전 조성물	발효후 조성물
정소무게()	210.9	215.1	230.2
부정소무게()	89.1	97.9	98.7
정낭무게()	205.4	250.9	259.9

실험예 7. 실험쥐의 혈청 내 cGMP 및 테스토스테론 농도 측정

실험동물로는 웅성 흰쥐(ICR계 마우스, 구입 시 7주령)를 각 군당 10마리씩 사용하였으며, 대조군, 발효전조성물과 성기능 개선용 조성물군으로 나누었다.

실내온도 22±1℃, 습도 55±5%, 명암주기 12시간의 일정한 환경에서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하고, 정상군과 염화카드뮴군으로 나누었다. 정상군은 증류수를 투여한 대조군과 성기능 개선용 조성물을 30㎎/생쥐/일 투여한 실험군에 각각 1일 1회 7일간 경구 투여하였다. 염화카드뮴군은 증류수를 투여한 대조군과 성기능 개선용 조성물을 30㎎/생쥐/일 투여한 실험군에 각각 1일 1회 7일간 경구투여하였으며, 마지막 경구투여 후, 염화카드뮴을 0.06㎎/생쥐로 1회 복강 내 주사하였다. 24시간 후, 마우스를 희생시켜 혈액 1㎖을 분리하여 상온에서 10분간 정치시킨 다음 혈청을 분리하였다.

분리한 혈청에서 cGMP농도를 효소 면역분석 킷트(미합중국 소재 어세이디자인사)를 사용하여 측정하였다. 혈청 100㎕를 염소 항-생쥐 면역글로블린 G(goat anti-mouse IgG) 함유 미세적정판에 옮긴 다음 cGMP 효소면역분석 항체와 콘쥬게이트를 첨가하여 2시간 배양 후, 세척용액으로 세척하였다. 세척 후, pNpp 기질 용액을 첨가하여 1시간 반응 후, 정지용액을 첨가하여 반응을 중지시키고 405㎚에서 흡광도 측정 후 cGMP 양을 계산하여 도 5에 나타내었다.

테스토스테론 농도를 측정하기 위하여, 분리한 혈청에서 효소 면역분석 킷트를 사용하여 측정하였다. 혈청 100㎕를 염소 항-생쥐 면역글로블린 G(goat anti-mouse IgG) 함유 미세적정판에 옮긴 다음 테스토스테론 효소면역분석 항체를 첨가하여 1시간 배양하고 콘쥬게이트를 첨가하여 1시간 배양 후, 세척용액으로 세척하였다. 세척 후 pNpp 기질 용액을 첨가하여 1시간 반응 후, 정지용액을 첨가하여 반응을 중지시키고 405㎚에서 흡광도를 측정하여 계산한 값을 도 6에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, 성기능 개선용 조성물을 섭취한 군의 cGMP농도가 대조군보다 약 36.1% 높게 나타났다. 염화카드뮴을 투여하여 환경호르몬에 노출시킨 군에서 역시 성기능 개선용 조성물을 섭취함으로써 염화카드뮴에 의한 cGMP 감소를 억제시키는 것을 확인하였다. 상기의 실험예 2를 통해 cGMP의 분해에 관여하는 PDE의 활성을 억제시킴으로서 cGMP의 농도가 증가되었음을 생각할 수 있다.

또한, 도 6에 나타난 바와 같이, 성기능 개선용 조성물을 섭취한 군의 테스토스테론농도가 대조군보다 약 15.9% 높게 나타났다. 염화카드뮴을 투여하여 환경호르몬에 노출시킨 군에서는 대조군이 염화카드뮴을 투여하지 않은 군보다 약 40.1% 감소한 테스토스테론 농도를 보였지만 성기능 개선용 조성물을 섭취한 후 염화카드뮴을 투여한 군은 염화카드뮴을 투여하지 않은 군의 테스토스테론 농도와 비슷하게 유지되는 것을 확인하였다. 이 결과를 통해 성기능 개선용 조성물을 섭취하는 것이 환경호르몬에 의한 성기능 저하 예방에 효과적이라는 것을 알 수 있었다.

실험예 8. 알코올로 유도된 발기부전 모델의 음경해면체 중 아질산 함량 변화

아질산은 혈관내피세포 뿐만 아니라 신경세포 말단과 평활근에서도 생성이 되기 때문에 혈압조절 등 역할을 하는 것으로 보고되었으며, 세포내로 진입하여 구아노신 삼인산(guanosine triphosphate)에 의해 생성된 cGMP가 평활근을 이완하는 작용을 한다. 일산화질소(NO)는 발기를 유지시키는 음경발기의 주요한 신호전달물질이며, 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase)에 의해 조절된다. 실험동물로는 웅성 흰쥐(Sprague-Dawley rat, 구입 시 6주령)를 각 군당 10마리씩 사용하였으며, 대조군, 발효전 조성물과 성기능 개선용 조성물군으로 나누었다. 실내온도 22±1℃, 습도 55±5%, 명암주기 12시간의 일정한 환경에서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하고, 25% 알코올이 혼합된 음용수를 30일간 섭취시켜 만성 알코올중독에 의한 발기부전을 유발시켰다. 대조군, 발효전조성물과 성기능 개선용 조성물을 300㎎/쥐/일 투여한 실험군에 각각 1일 1회 30일간 알코올 투여가 개시된 시작일로부터 경구 투여하였고, 음경해면체 조직을 채취하여 일산화질소 함량을 측정하였다. 96 웰 플레이트(well plate)에 음경해면체 조직상등액 100㎕에 그리이스(Griess) 시약 100㎕를 첨가하고 20분 동안 상온에서 반응시켰으며, 540㎚에서 흡광도를 측정하여 일산화질소 함량을 정량하였다. 표준물질로서 아질산나트륨을 사용하였다.

상기 실험결과, 성기능 개선용 조성물을 경구투여한 후, 발기부전 모델에서 음경해면체중 일산화질소 양이 대조군(10M)에 비해 1.5배 증가한 것으로 나타났다(도 7).

실험예 9. 동물실험을 통한 단회 경구투여 독성시험

본 발명의 정자수 증가와 환경호르몬 예방효과를 갖는 성기능 개선용 조성물에 대한 독성 여부를 알아보기 위하여 실험동물을 사용하여 단회 경구투여 독성시험을 실시하였다.

실험동물로는 웅성 흰쥐(SD계 랫드, 구입 시 4주령)를 대조군 5마리, 성기능 개선용 조성물군 10마리를 사용하였으며, 자성 흰쥐(SD계 랫드, 구입 시 4주령)를 대조군 5마리, 성기능 개선용 조성물군 10마리를 사용하였다. 실내온도 22±1℃, 습도 55±5%, 명암주기 12시간의 일정한 환경에서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하였다. 각 군의 대조군에는 증류수 1㎖을 경구투여하고, 성기능 개선용 조성물군에는 성기능 개선용 조성물을 3g/㎏ 농도로 증류수 1㎖에 녹여 경구투여하였다. 경구투여 후, 2주간 생존여부, 몸무게, 털의 윤기, 곤두선 상태, 배변상태 및 전체적인 움직임 등 종합적인 건강상태를 확인하였다.

상기 실험결과, 성기능 개선용 조성물을 경구투여한 실험군 20마리 모두 생존하였고, 건강상태가 양호하였으며 특이사항은 발견되지 않았다(표 6).

군		성별	몸무게(g)			건강상태
군		성별	초기	1주후	2주후	건강상태
대조군	1	웅성	121.9	172.5	235.4	양호
	2	웅성	131.5	187.5	244.8	양호
	3	웅성	120.3	167.3	235.6	양호
	4	웅성	132.5	190.5	260.3	양호
	5	웅성	128.7	186.8	236.1	양호
발효전 조성물	1	웅성	123.1	175.4	243.9	양호
	2	웅성	129.5	193.8	257.6	양호
	3	웅성	127.5	188.9	243.8	양호
	4	웅성	121.5	166.9	212.3	양호
	5	웅성	122.5	184.0	237.0	양호
성기능 개선 조성물	1	웅성	129.8	165.8	229.5	양호
	2	웅성	127.5	185.9	245.2	양호
	3	웅성	127.8	188.5	238.6	양호
	4	웅성	135.2	196.4	255.6	양호
	5	웅성	120.8	175.9	230.9	양호
대조군	1	자성	99.7	129.8	164.5	양호
	2	자성	102.9	122.8	160.2	양호
	3	자성	99.0	133.8	176.9	양호
	4	자성	95.9	138.8	164.5	양호
	5	자성	99.8	137.1	166.8	양호
발효전 조성물	1	자성	95.1	138.5	162.8	양호
	2	자성	95.8	140.3	172.3	양호
	3	자성	99.8	134.7	176.4	양호
	4	자성	104.2	145.9	188.5	양호
	5	자성	98.2	140.3	175.6	양호
성기능 개선 조성물	1	자성	98.4	142.5	162.4	양호
	2	자성	100.5	146.8	180.3	양호
	3	자성	100.2	146.2	188.5	양호
	4	자성	97.8	133.9	178.0	양호
	5	자성	98.6	138.0	158.6	양호

실험예 9. 성기능 향상효과의 임상실험

성기능 개선용 조성물의 성기능 향상효과를 실험하기 위하여 일반인 성인 남성 지원자를 20명 모집하여 15명에게 1차 개발 조성물, 발효전 조성물 및 성기능 개선용 조성물을 500㎎ 하드캅셀에 충진하여 1일 2회, 1회당 2캅셀(1g) 씩 아침, 저녁으로 섭취토록 하고, 대조군 5명에게는 위약(덱스트린)을 500㎎ 하드캅셀에 충진하여 같은 방법으로 섭취토록 하였다. 30일 후, 자각증상을 평가하기 위하여 설문조사를 수행하였다.

참여한 실험 대상자는 하기 표 7에 표시하였으며, 각 대상자의 대조군, 1차 개발 조성물, 발효전 조성물 및 성기능 개선용 조성물군 여부를 공개하지 않는 이중맹검법(double blind test)으로 실시하였다.

* (1차 개발조성물은 마카, 홍삼, 남가새 혼합 발효 추출물임)

	연령(세)	직업	체중(kg)	음주 및 흡연여부
대조군	55	자영업	66	음주(), 흡연()
	48	교수	77	음주(), 흡연()
	50	회사원	65	음주(), 흡연()
	33	회사원	70	음주(), 흡연()
	43	회사원	75	음주(), 흡연()
1차 개발 조성물	52	교수	72	음주(), 흡연()
	33	회사원	70	음주(), 흡연()
	53	자영업	68	음주(), 흡연()
	42	회사원	72	음주(), 흡연()
	44	회사원	80	음주(), 흡연()
발효전 조성물	49	회사원	73	음주(), 흡연()
	43	회사원	75	음주(), 흡연()
	40	회사원	74	음주(), 흡연()
	37	회사원	67	음주(), 흡연()
	39	자영업	68	음주(), 흡연()
성기능 개선용 조성물	48	회사원	79	음주(), 흡연()
	42	회사원	77	음주(), 흡연()
	50	회사원	72	음주(), 흡연()
	44	회사원	69	음주(), 흡연()
	35	교사	80	음주(), 흡연()

임상실험 후, 설문 조사를 통해 발기능, 강직도, 성적욕구, 만족도, 성감증대, 지속시간 및 부작용의 7개 도메인으로 나누어 점수를 1(효과없음)에서 5(효과높음)로 표시하여 각각 비교하였다. 설문조사 결과, 발기능에서 대조군과 비교하여 성기능 개선용 조성물군에서 41.9% 높은 점수를 받았으며, 강직도는 53.3%, 성적욕구는 37.9%, 만족도 55.6%, 성감증대 36.2%, 지속시간 30.3% 증가로 모든 도메인에서 대조군보다 높은 평가를 받았다(도 8).

또한 메스꺼움, 현기증 및 두통 등과 같은 부작용에 대해서는 실험대상자 20명 모두 전혀 느끼지 못했다고 대답하였다.

이상 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 성기능 향상 및 정자수 증가와 환경호르몬에 의한 남성 생식기능 저하 예방효과를 갖는 마카, 당귀, 남가새의 추출복합발효물을 포함하는 성기능 개선용 조성물을 제공한다. 성기능 개선용 조성물은 ACE 및 PDE를 저해하고 혈청내 cGMP함량을 증가시켜 혈류량 증가와 음경평활근 이완을 통해 발기를 유발시키며, 성호르몬 증가에 의해 성기능을 향상시킬 수 있는 것으로 확인되었다. 동물실험을 통해 생식관련 장기의 무게 증가와 정자수 증가가 확인되었으며, 또한 염화카드뮴에 의해 생식기능이 저하되는 것을 예방할 수 있는 것으로 나타났다. 임상실험을 실시한 결과 강직도, 성적욕구, 만족도, 성감증대 및 지속시간 도메인에서 모두 우수한 점수를 받아 성기능을 효과적으로 개선할 수 있는 조성물로 작용할 수 있음을 확인하였다.

이상에서 본 발명은 기재된 구체예에 대해서만 상세히 설명되었지만 본 발명의 기술사상 범위 내에서 다양한 변형 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속함은 당연한 것이다.

(도면 부호 없음)

Claims

유산균으로 발효된 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물이 각각 마카의 열수추출물 또는 20 내지 90% 알코올 추출물, 당귀의 열수추출물 또는 20 내지 90% 알코올 추출물, 남가새의 열수추출물 또는 20 내지 90% 알코올 추출물 및 구기자의 열수추출물 또는 20 내지 90% 알코올 추출물임을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물의 혼합물의 혼합비가 당귀추출물 10 내지 50중량%, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 구기자추출물 1 내지 30중량% 및 잔량으로서 마카추출물을 포함함을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서,
상기 유산균이 류코노스톡 속, 락토바실러스 속, 락토코커스 속, 페디오코커스 속, 비피도박테리움 속, 스트랩토코커스속 유산균 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택된 것임을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물.
제 5 항에 있어서,
상기 유산균이 류코노스톡 속의 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 겔리듐(Leuconostoc gelidium), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides sub. mesente roides); 락토코커스 속의 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis), 락토코커스 플란타룸(Lactococcus plantarum); 락토바실러스 속의 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 박토바실러스 불가리커스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus); 스트랩토코커스 속의 스트랩토코커스 써모필러스(Streptocuccus thermophilus); 비피도박테리움 속의 비피도박테리움비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum); 페디오코커스 속의 페디오코커스 펜토사사세스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 매시디락티스(Pediococcus acidilactici); 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어진 것임을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물.
(1) 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 제조하는 추출단계;
(2) 상기 추출단계에서 수득되는 마카추출물, 당귀추출물, 남가새추출물 및 구기자추출물을 혼합하되, 당귀추출물 10 내지 50중량%, 남가새추출물 5 내지 45중량%, 구기자추출물 1 내지 30중량% 및 잔량으로서 마카추출물을 포함하도록 혼합하여 혼합물을 수득하는 혼합단계; 및
(3) 상기 혼합단계에서 수득된 혼합물을 유산균으로 발효시키는 발효단계;
를 포함함을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 제조방법.
삭제
제 7 항에 있어서,
상기 유산균이 류코노스톡 속, 락토바실러스 속, 락토코커스 속, 페디오코커스 속, 비피도박테리움 속, 스트랩토코커스속 유산균 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택된 것임을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 제조방법.
제 9 항에 있어서,
상기 유산균이 류코노스톡 속의 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 겔리듐(Leuconostoc gelidium), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides sub. mesente roides); 락토코커스 속의 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis), 락토코커스 플란타룸(Lactococcus plantarum); 락토바실러스 속의 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 박토바실러스 불가리커스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus); 스트랩토코커스 속의 스트랩토코커스 써모필러스(Streptocuccus thermophilus); 비피도박테리움 속의 비피도박테리움비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum); 페디오코커스 속의 페디오코커스 펜토사사세스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 매시디락티스(Pediococcus acidilactici); 및 이들 중 2 이상의 혼합물로 이루어진 것임을 특징으로 하는 정자수 증가 효과를 갖는 성기능 개선용 조성물의 제조방법.