KR101622524B1

KR101622524B1 - 안정한 펙시가난 제제

Info

Publication number: KR101622524B1
Application number: KR1020157000319A
Authority: KR
Inventors: 나얀 데사이
Original assignee: 디펙시움 파마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2012-06-12
Filing date: 2013-06-10
Publication date: 2016-05-18
Also published as: BR112014030993A2; AU2013274561A1; AU2013274561B2; CN104602762A; HK1210078A1; SG11201408055PA; CN104602762B; CY1118277T1; SMT201600411B; JP5876191B2; HRP20161440T1; KR20150043286A; MX2014015199A; EP2858721A1; DK2858721T3; CA2876668A1; EP2858721B1; PL2858721T3; IL236151A0; RS55286B1

Abstract

본 발명은 펙시가난의 화학적으로 및 물리적으로 안정한 국소 제제 및 그를 제조하는 방법을 제공한다.

Description

안정한 펙시가난 제제 {STABLE PEXIGANAN FORMULATION}

본 발명은 장기 저장에도 불구하고 화학적으로 및 물리적으로 안정한 채로 잔류하는 펙시가난의 국소 제제 및 그를 제조하는 방법을 제공한다.

상처의 치료와 관련한 가장 중요한 우려사항 중 하나는 감염이다. 감염된 상처는 상처 치유 과정을 지연시키고 입원시간을 증가시킨다. 상처 감염은 종종 2차 감염, 절단, 및 심지어는 사망으로 이어진다. 항생제-내성 박테리아의 유행은 상처 감염의 치료상 특히 중대한 문제이다. 사실상, 광범위한 장기 사용을 통해서, 대부분의 항생제는 실제로 내성 박테리아를 발생시킨다.

감염에 걸리기 쉬운 상처의 한 유형은 당뇨병 환자에서 종종 발생하는 만성 상처인 당뇨병성 족부 궤양을 비롯한 당뇨병과 관련된 것들이다. 당뇨병성 합병증으로부터 생기는 상처가 유행하고 있다. 당뇨병은 말초 신경장애를 수반할 수 있으며, 감염된 상처가 전신성 항생제로 치료가능하지 않게 될 가능성을 증가시킬 수 있다. 궤양을 치유하는 데에는 수개월이 소요될 수 있으며, 이는 환자를 골 감염 (골수염) 및/또는 진행성 괴저의 위험성을 포함하여 재-감염 및 새로운 감염의 위험에 처하게 한다. 일반적으로 당뇨병, 및 구체적으로는 당뇨병성 족부 감염은 선진국에서 비-외상성 다리 절단의 제1 원인이며, 족부 궤양은 현재 당뇨병-관련 입원의 가장 빈번한 원인이다. 따라서, 상처 감염은 환자와 건강관리 시스템 양쪽 모두에 큰 부담이다.

전신성 항생제 처치가 종종 상처 감염의 치료에 사용된다. 그러나, 전신 요법은 종종, 일반적으로 훼손된 신장 및 간 기능을 갖는 당뇨병 환자에서 특히 몇몇 부작용의 원인이 된다. 또한, 전신 요법은 종종 상처 부위에서의 혈액 공급 부전에 기인하여 불충분한 조직 침투의 위험을 가져온다. 대부분의 이용가능한 전신성 항생제는 장기 사용을 통해 내성 박테리아를 발생시킨다. 따라서, 상처에로의 항생제 전달을 위한 투여의 경로로서 효과적인 국소 요법이 종종 바람직하다.

펙시가난은 국소 투여용의 광역 스펙트럼 항미생물성 펩티드이다. 펙시가난은 피부 및 연조직에 통상적으로 감염되는 그램-양성 및 그램-음성 유기체에 대하여 항미생물 활성을 보유한다. 펙시가난은 내성의 유발에 대한 가능성이 낮고 그의 작용 메카니즘의 결과로서 기존 치료용 항생제와의 교차-내성이 없다는 이익이 있다. 그러나, 안정한 국소 펙시가난 조성물은 제제화하기가 매우 어렵고 현재로서는 이용가능하지 않다.

펩티드는 그들이 화학적 불안정성을 보이고, 다수의 입체구조를 채용하고 있으며, 자기회합하는 경향이 있고 또한 특히 국소 형태에서 복잡한 물리적 불안정성을 보임에 따라 제제화하는 데에 종종 어려움이 따른다. 효과적이고 상업적인 제약 제제에는 화학적 및 물리적 안정성 양쪽 모두가 중요하다. 불안정한 제제는 효능의 손실 및 불량한 품질과 환자 순응도로 귀결된다. 특히 국소 제제는 장기 저장되는 동안 용기에서 및 그 다음에는 피부에 적용시에 안정한 채로 잔류하여야 한다. 따라서, 상처 감염의 효과적인 치료를 제공하고, 장기 저장기간 내내 화학적으로 및 물리적으로 안정한 채로 잔류하는, 펙시가난의 국소 투여를 위한 투여 형태의 필요성이 상존한다.

본 발명은 국소 투여용의 안정한 펙시가난 제제를 제공함으로써 상기 개관된 문제점을 극복하고 당기술분야를 진보시킨다. 본 발명의 제제는 장기간 내내 증가된 화학적 안정성 및 물리적 안정성 양쪽 모두를 보유한다.

그에 따라, 한 실시양태에서, 본 발명은 펙시가난 또는 그의 산 부가염을 포함하고, 약 12 내지 약 17의 HLB 값을 갖는 제1 친수성 계면활성제 및 약 3.5 내지 약 5.5의 HLB 값을 갖는 제2 소수성 계면활성제를 포함하는 국소 제제이며, 여기서 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 제제의 약 1.5 내지 약 5.0 % w/w를 차지하고, 제1 계면활성제 대 제2 계면활성제의 중량비는 혼합(blended) HLB가 12.5 내지 약 14.5이도록 하는 중량비인 국소 제제를 제공한다.

바람직하게는, 제1 친수성 계면활성제의 HLB 값은 약 13 내지 약 16이고, 보다 바람직하게는 제1 친수성 계면활성제의 HLB 값은 14.9이다. 바람직하게는, 제2 소수성 계면활성제의 HLB 값은 약 3.5 내지 약 5.5이고, 보다 바람직하게는 제2 소수성 계면활성제의 HLB 값은 4.7이다.

바람직하게는, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 제제의 약 2 % w/w 내지 약 4.5 % w/w를 차지한다. 보다 바람직하게는, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 제제의 약 3.5 % w/w를 차지한다.

바람직하게는, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제의 혼합 HLB는 약 12.5 내지 약 14.5이다. 보다 바람직하게는, 제1 친수성 계면활성제와 제2 소수성 계면활성제의 혼합 HLB는 13.6이다. 또한 바람직하게는, 제1 친수성 계면활성제와 제2 소수성 계면활성제의 혼합 HLB는 14.4이다.

바람직하게는, 제1 친수성 계면활성제는 트윈(Tween) 60이고, 제2 소수성 계면활성제는 스팬(Span) 60이다.

또 다른 실시양태에서, 안정한 국소 제제는 1.05 (% w/w) 펙시가난 아세테이트; 20.0 (% w/w) 프로필렌 글리콜; 0.1 (% w/w) EDTA; 7.5 (% w/w) 스테아릴 알콜; 2.0 (% w/w) 세틸 알콜; 1.0 (% w/w) 이소프로필 미리스테이트; 0.1 (% w/w) BHT; 0.43 (% w/w) 스팬 60; 3.07 (% w/w) 트윈 60; 0.1 (% w/w) 트윈 80 및 (충분량 첨가) 아세트산나트륨 완충제를 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 안정한 국소 제제는 1.05 (% w/w) 펙시가난 아세테이트; 20.0 (% w/w) 프로필렌 글리콜; 0.1 (% w/w) EDTA; 6.0 (% w/w) 스테아릴 알콜; 2.0 (% w/w) 세틸 알콜; 3.0 (% w/w) 이소프로필 미리스테이트; 0.1 (% w/w) BHT; 0.17 (% w/w) 스팬 60; 3.33 (% w/w) 트윈 60; 0.1 (% w/w) 트윈 80 및 (충분량 첨가) 아세트산나트륨 완충제를 포함할 수 있다.

추가 실시양태에서, 본 발명은 피부 또는 상처 감염의 치료를 필요로 하는 환자에게 감염 부위에 유효량의 본 발명의 제제를 국소 적용하는 것을 포함하는, 피부 또는 상처 감염을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명에 이르러 화학적으로 및 물리적으로 안정한 펙시가난을 포함하는 국소 제제가 제조될 수 있음이 발견되었다. 본 발명의 부가적인 측면은 하기 실시양태의 상세한 설명으로부터 보다 자명해질 것이다.

본원 개시의 목적상, 하기 용어는 하기 의미를 갖는다:

용어 "활성 성분"은 치료 또는 화장품 활성을 갖는 성분을 언급한다.

용어 "국소 적용"은 피부 상처, 두발, 귀, 점막, 직장 적용, 비강 적용, 및 구강내 치과 적용을 비롯한, 피부에의 적용을 언급한다.

용어 "안정한 제제"는 의약품으로서의 유용성을 갖도록 충분한 안정성을 보유한 임의 제제를 언급한다. 바람직하게는, 제제는 편리한 온도, 바람직하게는 10℃ 내지 30℃에서, 적당한 기간, 바람직하게는 1개월보다 긴, 보다 바람직하게는 3개월보다 긴, 한층 보다 바람직하게는 6개월보다 긴, 가장 바람직하게는 1년보다 긴 기간 동안 저장을 허용하도록 충분한 안정성을 보유한다. 바람직하게는, 제제는 실온, 즉 25℃에서 시간 경과 내내 안정한 채로 잔류한다.

용어 "물리적 안정성"은 오일-물 에멀젼이 함께 가까이 끌어당기고 있고, 그리하여 오일상과 수상간의 분리를 보이지 않으며, 생성물의 물리적 성질에 있어서 현저한 변화를 보이지 않음을 의미한다.

용어 "화학적 안정성"은 치료제의 바람직한 %가 온전한 채로 잔류하고 산화 또는 가수분해와 같은 화학적 경로에 의하여 생성된 분해 산물의 %가 허용가능한 수준으로 있음을 의미한다. 특히, 생성물의 의도하는 저장 온도에서의 장기 저장 후에 약물 농도가 불과 10% 떨어지면 제제는 일반적으로 화학적으로 안정한 것으로 간주되며, 즉 약물 농도를 유효 생성물에 대하여 약 90%로 유지하는 것이 중요하다. 장기 저장시의 안정성은 예를 들어, 25℃에서의 장기 저장의 지표로서 40℃에서의 적어도 6과 같은 가속 조건을 사용하여 나타낼 수 있다. 화학적 분해는 가수분해, 디술피드 결합의 절단, pH, 온도, 성분간의 상호작용, 산화, 및/또는 광-촉매 분해를 비롯한 몇몇 메카니즘에 의하여 초래될 수 있다.

용어 "치료 유효량"은 의미있는 이익, 예를 들어 상처의 치유, 박테리아 오염 또는 감염의 증식 억제, 예방 또는 개선, 또는 상처 치유 속도의 증가, 그러한 오염 및 감염의 증식 억제, 예방 또는 개선을 보이기에 충분한 폴리펩티드의 양을 언급한다. 바람직하게는, 의미있는 이익은 대조군과 비교하여 통계상 유의성이 있다. 대상체를 펙시가난 폴리펩티드와 접촉시키는 것은 박테리아 감염 또는 존재를 감소시키기에 충분한 양으로 및 그러한 시간 동안 행해질 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "상처"는 피부가 임의 방법으로 파열, 절단, 천공 또는 손상되는 임의 유형의 상해를 언급한다. 상처는 급성 또는 만성일 수 있다. 만성 상처는 조직 손상으로 이어지는 상대적으로 느린 과정에 의해 초래되는 것들이다. 만성 상처는 예를 들어 압박성, 정맥성 및 당뇨병성 궤양을 포함한다.

"당뇨병성 궤양" 및 "당뇨병성 족부 감염"은 당뇨병을 보유한 사람과 관련된 비-치유성 상처의 유형을 언급한다. 당뇨병성 족부의 비-치유성 상처는 환자의 생활의 질에 막대한 영향을 미치는 주요한 세계적인 의학적, 사회적 및 경제적 부담을 대표하는, 당뇨병의 가장 중요한 합병증 중 하나로 생각된다. 전형적으로, 조직의 순환 또는 다른 전신성 지원에 있어서 기능부전은 조직이 고장나고 붕괴되게 하여 만성 상처로 이어진다. 비-치유성 상처는 부적당한 순환, 불량하게 기능하는 정맥, 외측단(outer extremities)의 정맥과 모세관의 불량한 수축, 및 부동성과 연관되어 있기 때문에, 비-치유성 상처는 고령자에서 및 당뇨병이 있는 사람들에서 가장 빈번하게 발생한다. 당뇨병 환자는 종종 그들의 다리에 신경 손상으로 고생하는데, 이는 인지 없이 작은 상처 또는 자극이 발생하게 한다. 미세혈관계의 이상 및 당뇨병의 그 밖의 부작용이 주어지면, 이들 상처는 치유에 오랜 시간이 소요되고 적절한 치유를 위해서는 전문치료 접근법을 요한다. 아물지 않는 상처 외에도, 감염은 그래서 만성 농양으로 이어지는 부위를 제어할 수 있다. 일단 감염이 임계점에 이르면, 감염은 국소적으로 확산하거나 또는 전신성이 될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 포유동물 대상체, 바람직하게는 인간 대상체, 보다 바람직하게는 만성 상처를 보유한 인간 대상체, 예를 들어 당뇨병을 앓고 있는 대상체를 언급한다.

마가이닌(Magainin)은 동물에서 발견되는 자연 발생 양이온성 펩티드이다. 그들은 세포막의 붕괴를 초래하게 되는 미생물 세포의 음이온성 인지질과의 그들의 상호작용을 통해 광역 스펙트럼 항미생물 활성을 보유한다. 펙시가난 ("MSI 78"로도 알려져 있음)은 개구리 피부에서 단리된 숙주 방어 펩티드인 마가이닌 2의 합성 양이온성 펩티드 유사체이다. 펙시가난의 화학적 조성은 다음과 같다:

H-Gly-Ile-Gly-Lys-Phe-Leu-Lys-Lys-Ala-Lys-Lys-Phe-Gly-Lys-Ala-Phe-Val-Lys-Ile-Leu-Lys-Lys-NH₂[서열 1]_.

펙시가난의 서열은 7개의 자연 발생 아미노산으로 이루어져 있으며, 그중 6개는 L-배치를 취하고, 7번째 (글리신)는 광학적으로 불활성이다. 펩티드는 약물 물질의 천연 구성성분으로서 약간의 잔류수를 함유한 채로 그의 아세테이트 염 형태로서 단리된다.

분자는 소정 입체화학의 모든 키랄 중심을 갖는 단일 부분입체이성질체로서 합성된다. 펙시가난의 실험 분자식은 C₁₂₂H₂₁₀N₃₂O₂₂이다.

전체 내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 5,912,231 참조.

펙시가난은 피부와 연조직에 통상적으로 감염되는 그램-양성 (예컨대 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스 (MRSA)) 및 그램-음성 유기체에 대한 항미생물 활성을 갖고 있다. 펙시가난은 내성의 유발에 대한 가능성이 낮고 그의 작용 메카니즘의 결과로서 기존 치료용 항생제와의 교차-내성이 없다. 펙시가난은 미생물의 세포에 용해(lysis)를 일으킴으로써 작용하며, 따라서 항미생물제-내성 박테리아를 비롯한 박테리아의 증식의 효과적인 억제제로서 작용한다. 펙시가난은 그것이 상처에서 박테리아의 증식을 억제하고 박테리아 감염을 치료하는 장소인 상처의 국소 치료에 효과적이다. 바람직하게는, 펙시가난은 펙시가난 아세테이트를 포함하여 산 부가염 형태로 투여된다.

따라서, 펙시가난은 상처 감염에 대한 효과적이고 바람직한 치료약이다. 그러나, 제약 투여에 적합한 안정한 국소 제제는 아직은 달성되지 않았다.

장기 저장시의 화학적 불안정성은 펩티드 제제가 안고 있는 공통의 문제이다. 시간이 지남에 따라, 펩티드는 탈아미드화, 산화, 가수분해, 디술피드 상호 교환, 및 라세미화를 비롯한 다수의 메카니즘을 통해 분해될 수 있다. 다수의 치료용 분자와는 달리, 펩티드는 반응기를 격리할 수 있는 구상 구조를 보유하지 않으며, 따라서 다수 펩티드의 측쇄는 활성산소종에 노출된다. 펩티드 쇄의 고도의 가요성은 고속의 탈아미드화를 가져올 수 있다. 펩티드에서 보이는 자기회합 행동은 증가된 화학적 불안정성으로 이어질 수 있다. 고도로 자기회합하는 펩티드는 심지어는 미셀을 형성할 수도 있으며, 이는 그들의 막 통과능에 영향을 주게된다.

펩티드의 성질은 또한 제제에서의 물리적 불안정성의 원인이 된다. 펩티드의 자기회합능은 응집체 형성을 초래하고, 결국에는 응집체의 거대 형성으로 이어진다.

본 발명은 펩티드 제제의 장기 저장과 관련된 이들 문제점을 극복할 수 있는 안정한 국소 제제를 제공한다. 본 발명의 제제는 펙시가난 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한다.

본원 기재의 조성물은 국소 투여됨에 따라, 그 조성물은 크림, 로션, 고약, 겔, 연고 또는 용액, 현탁액, 에멀젼, 스프레이 또는 국소 투여에 적합한 기타 형태를 포함하여 (그들에 제한되지 않음), 국소 투여에 적합한 형태로 제공될 수 있다. 바람직하게는, 제제는 크림 또는 겔의 형태로 제공된다.

펙시가난의 임의 적합한 투여량은 본 발명의 방법을 통해 투여될 수 있다. 바람직하게는, 펙시가난은 산 부가염 형태이고 바람직하게는 부가염 형태는 아세테이트 형태이다. 투여되는 투여량은 물론 공지의 요인, 예컨대 특정 화합물, 염 또는 조합의 약역학적 특징; 대상체의 연령, 건강 또는 체중; 증상의 성격과 정도; 약물 및 환자의 대사 특징, 병용요법의 종류; 치료 빈도; 또는 목적하는 효과에 따라 변동될 것이다. 펙시가난 아세테이트의 바람직한 농도는 제제의 1 내지 3 % w/w이다. 보다 바람직하게는, 농도는 1.05 % w/w이다.

본원 기재의 국소 제제는 다양한 부형제를 함유한다. 선택된 부형제는 일반적으로 펙시가난을 사용된 %에서 침전시키지 않아야 하고, 펙시가난에 유해한 어떠한 반응도 일으키지 않아야 하며, 펙시가난의 만족스러운 가용화와 분산에 도움을 주어야 한다. 부형제는 제한없이 킬레이트화제, 경화제, 항산화제, 유화제, 용매, 연화제, 겔화제, 습윤제, 항미생물성 보존제, 소포제, 및 pH 조정제를 포함할 수 있다.

본 제제는 유화제를 포함한다. 유화제는 트윈 60, 스팬 60, 트윈 80, 메틸 글루코스 세스퀴스테아레이트, PEG-20 메틸 글루코시드 세스퀴스테아레이트, 스테아레트(Steareth)-21, 폴리에틸렌 글리콜 20 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜 60 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜 80 소르비탄 모노스테아레이트, 스테아레트-20, 세테트(Ceteth)-20, PEG-100 스테아레이트, 소듐 스테아로일 사르코시네이트, 수소화 레시틴, 소듐 코코일글리세릴 술페이트, 소듐 스테아릴 술페이트, 소듐 스테아로일 락틸레이트, PEG-20 글리세릴 모노스테아레이트, 수크로스 모노스테아레이트, 수크로스 폴리스테아레이트, 폴리글리세릴 10 스테아레이트, 폴리글리세릴 10 미리스테이트, 스테아레트 10, DEA 올레트 3 포스페이트, DEA 올레트 10 포스페이트, PPG-5 세테트 10 포스페이트 나트륨 염, PPG-5 세테트 10 포스페이트 칼륨 염, 스테아레트-2, PEG-5 대두 스테롤 오일, PEG-10 대두 스테롤 오일, 디에탄올아민 세틸 포스페이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 디에틸렌글리콜 모노스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 스테아레트-2 또는 -100, 스테아르산, 및 그들의 혼합물을 포함할 수 있으며 그들에 제한되지 않는다.

본 발명의 제제는 적어도 두 유화제를 포함한다. 바람직하게는, 제1 유화제는 친수성 유화제이다. 바람직하게는, 당해 제1 친수성 유화제는 트윈 60이다. 바람직하게는, 제2 유화제는 소수성 유화제이다. 바람직하게는, 당해 제2 소수성 유화제는 스팬 60이다.

유화제:오일상의 친수성-친유성 밸런스 (HLB) 역시도 안정성에 영향을 미친다. HLB는 분자의 상이한 영역에 대한 값을 계산함으로써 측정되는, 물질이 친수성 또는 친유성인 정도의 척도이다. 0의 HLB 값은 완전히 소수성인 분자에 해당하고, 20의 값은 완전히 친수성인 분자에 해당한다.

제1 유화제와 제2 유화제의 비율이 예기치 않게도 제제의 화학적 안정성에 중요한 것으로 밝혀졌다. 유화제의 이상적인 비율은 저장 온도에서의 제제의 장기 화학적 안정성에 있어서 현저한 향상을 제공한 것으로 밝혀졌다. 제1 및 제2 유화제의 비율을 조정하고, 따라서 두 유화제의 혼합 HLB를 조정하는 것이 물리적 안정성에 영향을 미치는 것으로 이해되었지만, 화학적 안정성에 어떤 효과가 있을 거라고는 예상하지 못했었다. 그러나, 제1 친수성 유화제:제2 소수성 유화제의 비율을 변경함으로써, 제제는 장기 저장시에 대폭 증진된 화학적 안정성을 보유하는 것으로 밝혀졌다.

제1 친수성 유화제는 약 12 내지 약 17의 HLB 값을 갖는다. 보다 바람직하게는, 제1 친수성 유화제는 약 13 내지 약 16의 HLB 값을 갖는다. 예를 들어, 제1 친수성 유화제의 HLB는 14.9일 수 있다.

제2 소수성 유화제는 약 3.5 내지 약 5.5의 HLB 값을 갖는다. 보다 바람직하게는, 제2 소수성 유화제는 약 3.5 내지 약 5.5의 HLB 값을 갖는다. 예를 들어, 제2 소수성 유화제의 HLB는 4.7일 수 있다.

제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 함께 제제의 약 1.5 내지 약 5.0 % w/w를 차지할 수 있다. 바람직하게는, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 제제의 약 2 내지 약 4.5 % w/w를 차지한다. 보다 바람직하게는, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 제제의 약 3.5 % w/w를 차지한다. 제1 친수성 및 제2 유화제가 함께 존재할 경우, 두 유화제의 혼합 HLB가 측정될 수 있다. 혼합 HLB는 개별 유화제를 포함하여 이루어진 제제의 %에 의하여 가중하여, 개별 HLB 값의 가중 평균을 취함으로써 계산된다. 바람직하게는 제1 친수성 유화제와 제2 소수성 유화제의 혼합 HLB는 약 12.5 내지 약 14.5이다. 또한 바람직하게는, 제1 친수성 계면활성제와 제2 소수성 계면활성제의 혼합 HLB는 14.4이다.

제1 유화제와 제2 유화제 외에도, 추가 유화제, 예컨대 제3 또는 제4, 또는 그 이상의 유화제가 사용될 수 있다.

본 제제는 킬레이트화제를 포함할 수 있다. 바람직한 킬레이트화제는 예를 들어 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 디소듐 에데테이트 및 EDTA 유도체, 시트르산, 및 그들의 혼합물을 포함하며 그들에 제한되지 않는다.

본 제제는 점도의 증가 및/또는 점조도(consistency)의 증가에 사용되는 바와 같이 경화제를 포함할 수 있다. 바람직한 경화제는 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 왁스, 세테아레트-20, 세테아레트-30, 세테아릴 알콜, 세테트 20, 세토스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 세틸 스테아릴 알콜, 및 그들의 혼합물을 포함할 수 있으며 그들에 제한되지 않는다.

본 제제는 용매를 포함할 수 있다. 바람직한 용매는 프로필렌 글리콜, 물, 이소프로필 알콜, 액체 바셀린, 에테르, 석유 에테르, 알콜 (예를 들어, 에탄올 및 고급 알콜), 실리콘, 방향족화합물 (예를 들어, 톨루엔), 알칸 (예를 들어, 펜탄, 헥산 및 헵탄), 케톤 (예를 들어, 아세톤 및 메틸 에틸 케톤), 염소화 탄화수소 (예를 들어, 클로로포름, 사염화탄소, 메틸렌 클로라이드 및 에틸렌 디클로라이드), 아세테이트 (예를 들어, 에틸 아세테이트), 에스테르 및 오일 (예를 들어, 이소프로필 미리스테이트, 디이소프로필 아디페이트 및 미네럴 오일) 및 그들의 혼합물을 포함하며 그들에 제한되지 않는다. 용매는 또한 항미생물성을 보유할 수 있다.

본 제제는 보존제를 포함할 수 있다. 바람직한 보존제는 페녹시에탄올, 파라벤 (예컨대 메틸파라벤 및 프로필파라벤), 프로필렌 글리콜, 소르베이트, 우레아 유도체 (예컨대 디아졸린디닐 우레아), 및 그들의 혼합물을 포함할 수 있으며 그들에 제한되지 않는다.

본 제제는 연화제를 포함할 수 있다. 바람직한 연화제는 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 피마자유, 코코아 버터, 디이소프로필 아디페이트, 글리세린, 글리세릴 모노올리에이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 스테아레이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 라놀린, 라놀린 알콜, 수소화 라놀린, 액체 파라핀, 리놀레산, 미네럴 오일, 올레산, 백색 바셀린, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 글리콜 지방 알콜 에테르, 폴리옥시프로필렌 15-스테아릴 에테르, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 스쿠알란, 실리콘 화합물, 스테아릴 알콜, 우레아 및 그들의 혼합물을 포함하며 그들에 제한되지 않는다.

본 제제는 항산화제를 포함할 수 있다. 바람직한 항산화제는 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 프로필 갈레이트, 조효소 Q10, 로즈마리 오일, 녹차, 라이코펜, 포도씨 추출물, 소나무 껍질 추출물, 비타민 C, 천연 베타-카로틴, 합성 베타-카로틴, 감마-오리자놀 (페룰산의 에스테르), 셀레늄, 루테인, 및 그들의 혼합물을 포함하며 그들에 제한되지 않는다.

본 제제는 완충제를 포함할 수 있다. 바람직한 완충제는 아세테이트 완충제, 예컨대 아세트산나트륨, 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 락트산 완충제, 보레이트 완충제, 및 그들의 혼합물을 포함하며 그들에 제한되지 않는다. 본 제제의 pH는 바람직하게는 4.0 내지 6.0이다. 보다 바람직하게는, 본 제제의 pH는 5.0이다.

예로서, 제제는 펙시가난 아세테이트, 프로필렌 글리콜, EDTA, 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 이소프로필 미리스테이트, BHT, 0.43 (% w/w) 스팬 60, 3.07 (% w/w) 트윈 60, 트윈 80, 및 아세트산나트륨 완충제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제제는 다음일 수 있다:

추가 제제는 다음일 수 있다:

추가 제제는 다음일 수 있다:

추가 제제는 다음일 수 있다:

추가 제제는 다음일 수 있다:

추가 제제는 다음일 수 있다:

국소 제제를 투여하는 방법은 당업자에게 알려져 있다. 본 발명은 피부 또는 상처 감염의 치료를 필요로 하는 환자에게 감염 부위에 유효량의 본 발명의 제제를 국소 적용하는 것을 포함하는, 피부 또는 상처 감염을 치료하는 방법을 제공한다.

비록 본 발명이 특정 실시예를 참조로 상세히 기재되지만, 본 발명의 취지로부터 일탈함이 없이 다양한 변형이 행해질 수 있으며 당업자에게 쉽사리 알려진다는 것이 이해된다.

실시예

하기 제제를 이하에 서술된 실시예에서 시험하였다:

실시예 1: 6개월차 및 11개월차에서의 화학적 안정성

제제 3216-6, 3216-10 및 3216-72를 화학적 안정성에 대하여 시험하였다. 안정성은 HPLC 시험을 이용하여 측정하였다. 사용된 크로마토그래피 파라미터는 다음과 같았다:

칼럼: 헤일로(Halo)^® C18 2.7 ㎛, 4.6 x 150 mm

주입 부피: 20 ㎕

칼럼 온도: 70℃

유량: 1.4 mL/min

검출: 214 nm

실행 시간: 27 min

이동상 A: 5% 아세토니트릴:5% 이소프로판올:90% 물:0.1% 트리플루오로아세트산

이동상 B: 70% 아세토니트릴:20% 이소프로판올:10% 물:0.1% 트리플루오로아세트산

약물의 분해를 측정하였다. 11개월 데이터 및 18개월 화학적 안정성 데이터를 이하에 요약하였다. 25℃, 즉 실온에서의 3개 전체의 화학적 안정성을 나타내었다. 전술한 바와 같이, 보다 단기간 동안 40℃를 시험하는 것은 보다 장기간 동안 25℃에서의 안정성을 표시하는 것이다. 6개월 동안 40℃에서 제제를 시험하는 것은 2년 동안 25℃에서의 동일 제제의 안정성을 표시하는 것으로 생각된다.

결과는 펙시가난이 3216-6 제제에서보다는 3216-10 및 3216-72 제제에서 보다 화학적으로 안정하다는 것을 보여주었다. 이하에 나타낸 바와 같이, 3216-6중의 약물 농도는 t=0 (초기점)에서의 라벨 클레임(label claim)의 102.4%로부터 6개월차에서의 87%로 강하하였다. 시판 제제는 안정한 것으로 생각될 90% 마크를 상회하는 약물 농도를 유지하는 것이 대단히 바람직하다. 이는 제제 3216-10 및 3216-72에 의하여 달성된다.

추가로, 40℃에서, 3216-10 및 3216-72에서보다는 3216-6에서 약물 물질의 보다 많은 분해가 관찰되었다. 예를 들어, 11개월차에서, 40℃에서의 제제 3216-6에서 보인 총 분해물은 40℃에서의 제제 3216-10에서 보인 개수의 거의 두배이었다. 이는 화학적 안정성에 있어서 유의미한 차이이다.

이하에서 보이고 있는 결과는 제제 3216-6에 비하여 제제 3216-10 및 3216-72가 저장 온도에서 보다 장기간 동안 훨씬 더 화학적으로 안정할 것임을 나타내었다. 제제 3216-10과 3216-72 대 3216-6간의 차이는 유화제의 비율에 있다.

실시예 2: 40℃에서 18개월차에서의 화학적 안정성

3216-6, 3216-10 및 3216-72의 화학적 안정성을 40℃에서 18개월 동안 시험하였으며, 이는 25℃에서의 제제의 장기 저장을 예측해 주는 것이다. 40℃에서 3216-10 및 3216-72 제제와 비교한 3216-6 제제와의 차이는 분해물의 개수에 있어서의 유의미한 차이를 나타냄을 보여주는 결과가 나타났다. 환언하면, 18개월차에서 3216-6 제제 대 3216-10 및 3216-72 제제간 분해물의 개수에 있어서의 차이는 11개월차에서의 이들 동일 제제간에 보인 차이 (상기 실시예 1에 나타냄)보다 더 컸다.

실시예 3: 물리적 안정성

제제의 물리적 안정성을 외관, pH (순수), 실온에서의 점도에 대하여 시험하였으며, 활성 제약 성분의 검정을 수행하였다.

샘플을 1, 2 및 3개월차에 5℃, 25℃ 및40℃에서 시험하였다. 40℃에서의 시험은 25℃에서 장기 저장될 생성물의 안정성의 좋은 판단 재료가 된다. 6개월과 같은 단기간 동안 40℃에서의 시험은 보다 장기간 (24개월) 동안 25℃ (즉, 실온)에서의 안정성을 나타내 주는 것으로 간주됨이 주목되며; 즉, 그것은 가속 시험 조건을 제공한다.

동결/해동 사이클은 -20℃에서 3 또는 4 역일(calendar day) 동안의 저장, 뒤이어 실온에서 3 또는 4 역일 동안의 저장으로 이루어졌으며; 총 3 사이클이 수행되었다.

외관, pH 및 점도를 측정하였다. 외관에 관하여는, 별개의 상으로의 명백한 분리가 없는 백색 또는 회백색의 매끄러운듯한 크림이 바람직하였다. pH에 관하여는, 적합한 국소 pH는 약 4.5 내지 약 8의 pH를 포함할 수 있다.

점도에 관하여는, 실온에서의 크림의 측정을 수행하였다. #29 스핀들이 장착된 혈류계상에서 30 rpm으로 (실온에서 2분 동안 주행된) 13그램 샘플의 점도 값을 측정하였다. 이상적인 점도는 5000 내지 40000 센티포아즈 범위를 포함하고, 바람직하게는 10000 내지 20000 센티포아즈이다.

이들 물리적 안정성 파라미터를 보여주는 결과는 다음과 같았다:

실시예 4: 응력 시험

장기 저장 내내 생성물이 함께 유지하는 가능성을 평가하는 데 일조하기 위하여 원심분리 응력 시험을 수행하였다. 제제를 이하에 나타낸 바와 같이 원심분리기에서 응력 시험하였다. 두 유화제 스팬 60과 트윈 60의 비율을 제외하고는 모든 측면에서 제제 3216-10은 제제 3216-6과 동일하였다. 3216-6에서 % w/w 비율은 2:1.5인 반면에, 3216-10에서 당해 비율은 0.43:3.07로 변화되었다. 두 유화제의 총량은 3.5 % w/w로 동일하게 유지하였다. 그러나, 둘의 비율의 조정은 보다 우수한 안정성을 가져왔다. 제제 3216-10은 상분리를 나타내는 데 요구되는 시간에 의하여 증명되는 바와 같이 응력 시험에서 그의 물리적 완전성을 보다 양호하게 유지할 수 있었다. 25℃에서의 원심분리 시험에서, 3216-6은 5000g에서 10분 후에 분리를 보인 반면에, 3216-10은 유사 응력 조건하에서 분리를 나타내는 데에 60분이 소요되었다. 40℃ (가속 조건)에서 행해진 유사 시험에서, 3216-6은 60분 후에 분리된 반면에, 3216-10으로는 그러한 분리가 관찰되지 않았다.

실시예 5: 펙시가난 제제의 제조

단계 1: 정제수, 아세트산나트륨 삼수화물과 빙초산을 혼합하여 아세트산나트륨 완충제를 제조하였다.

단계 2: 주 제조 용기에서 프로필렌 글리콜, 폴리소르베이트 60과 아세트산나트륨 완충제의 대략 85%를 합하였다. 혼합물을 프로펠러 혼합하면서 65 내지 70℃로 가열하였다. 그 온도를 유지시켰다.

단계 3: 제2 용기에서는 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 소르비탄 모노스테아레이트, 이소프로필 미리스테이트와 BHT를 합한 다음, 혼합하면서 65 내지 70℃로 가열하여 모든 고체 물질이 용융되도록 보장하였다. 그 온도를 유지시켰다.

단계 4: 제3 용기에서는 아세트산나트륨 완충제의 나머지, 폴리소르베이트 80, 디소듐 에데테이트와 펙시가난 아세테이트를 합한 다음, 투명 용액이 수득될 때까지 혼합하면서 35 내지 45℃로 가열하였다. 그 온도를 유지시켰다.

단계 5: 균질화하면서, 단계 3으로부터의 오일상을 단계 2로부터의 수성상에 서서히 첨가하였다.

단계 6: 가열을 중단하였다. 균질화를 계속하였다. 빙조를 사용하여 에멀젼을 55℃로 냉각하였다.

단계 7: 균질화를 중단하고 에멀젼을 빙조로부터 제거하였다.

단계 8: 프로펠러 혼합을 개시하였다. 단계 4로부터의 약물상을 단계 7에서의 에멀젼에 첨가하였다.

단계 9: 연속적인 프로펠러 혼합하에, 배치를 실온으로 냉각하였다.

단계 10: pH를 기록하였다. 필요에 따라, 10% HCl 또는 10% NaOH를 사용하여 pH를 5.0±0.2로 조정하였다. 매끄럽고 균질할 때까지 생성물을 혼합하였다.

실시예 6: 펙시가난 아세테이트 활성 성분의 제조 및 정제

활성 성분인 펙시가난 아세테이트는 동결건조 분말로서 제공되었다.

문헌 [Merrifield, Solid Phase Peptide Synthesis. I. The Synthesis of a Tetrapeptide. J. Am . Chem . Soc . 1963 85 (14): 2149-2154]에 기재된 일반 절차를 약간의 변형을 가하여 이용하여 펙시가난 아세테이트의 펩티드-수지 전구체를 제조하였다. 각 아미노산의 α-아미노 기는 염기-감수성 Fmoc 기로 보호하였고, 반면에 측쇄 작용기는 산-불안정 기로 보호하였다. 제조 공정을 위한 출발 수지 지지체로서 Fmoc-Rink Amide 수지 (치환: 대략 0.7 meq/g)를 사용하여 합성을 수행하였다. 하기 일반 사이클을 사용하여 펩티드 쇄 조립에 표준 Fmoc 화학을 이용하였다:

- DMF중 피페리딘의 20% (v/v) 용액을 사용하여 첨가된 출발 수지 또는 최종 아미노산의 N-말단 Fmoc 기의 제거;

- DMF로의 세척;

- HOBt의 존재하에 DIC를 사용하여 후속 아미노산의 커플링; 및

- DMF로의 세척.

Fmoc 기의 제거 및 DMF로의 세척 후, 수지의 작은 샘플을 제거한 다음, 잔류 수지-결합 아민 기를 측정하는 색상 시험인 닌히드린 공정내 관리 시험(in-process control test)에 투입하였다. 시험은 유리 아민 기의 존재 확인에 양성이었다.

당해 사이클은 적당한 아미노산 유도체, 즉 Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH 및 Fmoc-Gly-OH를 가지고 반복하였다. 닌히드린 시험을 이용한 공정내 모니터링을 커플링 단계의 평가로서 각 합성 사이클의 말기에 수행하였다. 음성 시험 결과는 유리 아민의 부재를 표시하였다 (완전 커플링). 시험이 미반응 아민 (불완전 커플링)을 표시하는 양성인 것으로 나타났으면, 커플링 반응이 연장될 수 있거나, 보호된 아미노산 유도체의 재-커플링이 수행될 수 있거나 또는 DIEA의 존재하에 아세트산 무수물을 사용하여 아세틸화 (캡핑)가 수행될 수 있다.

수지를 IPA로 세척하고 질소 스트림하에서 건조시켜 펙시가난 아세테이트의 보호된 펩티드-수지 전구체를 수득하였다. 생성물을 수지로부터 탈리한 다음, 부수적으로 대략 2.5시간 동안 주위온도에서 TFA와 물의 혼합물 (TFA:H₂O, 대략 95:5, v/v)로 펩티드-수지 전구체의 서브로트(sublot)를 처리함으로써 탈보호시켰다. 이어서 수지를 여과제거하고, 부가적인 TFA로 세척한 다음, 합한 여액을 회전 증발에 의하여 농축하였다. 농축 여액을 MTBE에 첨가함으로서 조(crude) 생성물을 침전시키고, 여과에 의하여 단리하고, 필터상에서 MTBE로 세척한 다음, 진공 오븐중 주위온도에서 일정 중량이 되도록 건조하였다.

선행 단계로부터의 조 펙시가난을 C₁₈ 역상 실리카 상에서 2-단계 정제용 RP-HPLC 절차에 의하여 정제하였고, 정제하는 동안 분획의 순도는 분석용 HPLC에 의하여 평가하였다. 공정의 제1 단계에서, 조 생성물의 서브로트는 묽은 수성 아세트산 (대략 10%, v/v)에 별개로 재-용해시키고, 용액을 여과한 다음, 메탄올로 세척하여 0.1 M 수성 트리에틸암모늄 포스페이트, pH 2.3 (TEAP)으로 평형시켜 놓은 정제용 HPLC 칼럼에 적용하였다. 230 nm에서 자외선 (UV)에 의하여 모니터링하면서 TEAP 완충제중의 아세토니트릴의 구배를 이용하여 생성물을 용리하였다. 생성되는 분획을 공정내 HPLC 방법에 의하여 분석한 다음, 순도가 공정내 관리를 위한 요건에 부합하도록 하는 방식으로 합하였다. 공정내 관리 기준 미만의 순도를 갖는 분획은 상기 절차를 통해 재순환시키거나 또는 폐기될 수 있다.

정제의 제2 단계에서, 제1 정제 단계로부터의 반-정제 펩티드의 풀(pool)을 희석한 다음, 0.1% 수성 TFA로 평형시켜 놓은 정제용 칼럼에 로딩하였다. 230 nm에서 UV에 의하여 모니터링하면서 0.1% 수성 TFA중 아세토니트릴의 구배를 이용하여 생성물을 용리하였다. 생성되는 분획을 공정내 HPLC 방법에 의하여 분석한 다음, 순도가 공정내 관리를 위한 요건에 부합하도록 하는 방식으로 합하였다. 공정내 관리 기준 미만의 순도를 갖는 분획은 상기 절차를 통해 재순환시키거나 또는 폐기될 수 있다.

2 단계 정제 실행으로부터의 풀링 분획을 별개로 동결건조하여 정제 생성물의 TFA 염의 서브로트를 수득하였으며, 공정의 후속 단계에서 아세테이트 염으로의 전환에 앞서 냉장 보관하였다.

선행 정제 단계로부터의 생성물의 정제 TFA 염을 도웩스(Dowex) 1 X 2-100 수지를 사용하여 이온 교환 절차에 의하여 아세테이트 염으로 전환시켰다. 묽은 수성 아세트산 (대략 10%, v/v)중 풀링 서브로트의 용액을 과량의 도웩스 1 X 2-100 (아세테이트형)으로 충진한 칼럼에 통과시키고, 이를 후속하여 부가적인 수성 아세트산으로 세척하여 생성물을 완전히 회수하였다.

반대-이온 교환 단계로부터의 풀링 용리액을 여과한 다음 동결건조하여 건고시켜 펙시가난의 아세테이트 염을 수득하였다.

본 발명은 제한으로서가 아니라 실례로서 설명하였다. 사용되고 있는 숫자와 전문용어로 묘사된 특정 실시양태는 제한이라기 보다는 설명상의 단어의 성격으로 의도되었다는 것을 이해하여야 한다. 전술한 단락에서 기재된 성분/치료제의 임의 조합은 첨부 특허청구범위에 의하여 포함되는 것으로 간주됨을 추가로 이해하여야 한다. 주입 장치의 모든 구체적 실시양태는 첨부 특허청구범위에 의하여 포함되는 것으로 간주됨을 추가로 이해하여야 한다. 상기 교시내용에 비추어 본 발명의 다수 변형 및 변화가 가능하다. 따라서 자명한 변형은 첨부 특허청구범위 안에 포함되는 것으로 간주됨을 이해하여야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> DIPEXIUM PHARMACEUTICALS, INC. DESAI, Nayan <120> STABLE PEXIGANAN FORMULATION <130> 106871.64279WO <140> PCT/US2013/044957 <141> 2013-06-10 <150> US 13/494,295 <151> 2012-06-12 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pexiganan <400> 1 Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe 1 5 10 15 Val Lys Ile Leu Lys Lys 20

Claims

펙시가난 또는 그의 산 부가염을 포함하고, 12 내지 17의 HLB 값을 갖는 제1 친수성 계면활성제 및 3.5 내지 5.5의 HLB 값을 갖는 제2 소수성 계면활성제를 포함하는 국소 제제이며, 여기서 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제는 제제의 1.5 % w/w 내지 5.0 % w/w를 차지하고, 제1 계면활성제 대 제2 계면활성제의 중량비는 혼합 HLB가 12.5 내지 14.5이도록 하는 중량비이며, 제1 친수성 계면활성제가 트윈(Tween) 60이고, 제2 소수성 계면활성제가 스팬(Span) 60인 국소 제제.
제1항에 있어서, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제가 제제의 2 % w/w 내지 4.5 % w/w를 차지하는 것인 국소 제제.
제1항에 있어서, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제가 제제의 3.5 % w/w를 차지하는 것인 국소 제제.
제1항에 있어서, 제1 친수성 및 제2 소수성 계면활성제의 혼합 HLB가 13.6인 국소 제제.
제1항에 있어서, 피부 또는 상처 감염을 치료하기 위한 국소 제제.
제1항에 있어서, 제1 친수성 계면활성제의 HLB 값이 13 내지 16인 국소 제제.
제1항에 있어서, 제1 친수성 계면활성제의 HLB 값이 14.9인 국소 제제.
제1항에 있어서, 제2 소수성 계면활성제의 HLB 값이 4.7인 국소 제제.
(i) 1.05 (% w/w) 펙시가난 아세테이트
(ii) 20.0 (% w/w) 프로필렌 글리콜
(iii) 0.1 (% w/w) EDTA
(iv) 7.5 (% w/w) 스테아릴 알콜
(v) 2.0 (% w/w) 세틸 알콜
(vi) 1.0 (% w/w) 이소프로필 미리스테이트
(vii) 0.1 (% w/w) BHT
(viii) 0.43 (% w/w) 스팬 60
(ix) 3.07 (% w/w) 트윈 60
(x) 0.1 (% w/w) 트윈 80 및
(xi) (충분량 첨가) 아세트산나트륨 완충제
를 포함하는 안정한 국소 제제.
(i) 1.05 (% w/w) 펙시가난 아세테이트
(ii) 20.0 (% w/w) 프로필렌 글리콜
(iii) 0.1 (% w/w) EDTA
(iv) 6.0 (% w/w) 스테아릴 알콜
(v) 2.0 (% w/w) 세틸 알콜
(vi) 3.0 (% w/w) 이소프로필 미리스테이트
(vii) 0.1 (% w/w) BHT
(viii) 0.17 (% w/w) 스팬 60
(ix) 3.33 (% w/w) 트윈 60
(x) 0.1 (% w/w) 트윈 80 및
(xi) (충분량 첨가) 아세트산나트륨 완충제
를 포함하는 안정한 국소 제제.
삭제
삭제
삭제