EA028002B1

EA028002B1 - Стабильный состав пексиганана

Info

Publication number: EA028002B1
Application number: EA201492280A
Authority: EA
Inventors: Наян Десаи
Original assignee: Дайпексиум Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2012-06-12
Filing date: 2013-06-10
Publication date: 2017-09-29
Also published as: BR112014030993A2; AU2013274561A1; AU2013274561B2; CN104602762A; HK1210078A1; SG11201408055PA; CN104602762B; CY1118277T1; SMT201600411B; JP5876191B2; HRP20161440T1; KR20150043286A; MX2014015199A; EP2858721A1; DK2858721T3; CA2876668A1; EP2858721B1; PL2858721T3; IL236151A0; RS55286B1

Abstract

Изобретение относится к химически и физически стабильным составам пексиганана для местного применения и способам их получения.

Description

Одной из наиболее важных проблем при лечении ран является инфекция. Инфицирование раны замедляет процесс заживления ран и увеличивает время госпитализации. Раневые инфекции часто приводят к вторичным инфекциям, ампутациям конечностей и даже смерти. Распространенность резистентных к антибиотикам бактерий представляет собой особенно серьезную проблему для лечения раневой инфекции. Действительно, обширное долгосрочное применение большинства антибиотиков привело к появлению резистентных бактерий.

Один из типов раны, подверженной инфекции, связанной с диабетом, в том числе язвы диабетической стопы, представляет собой хронические раны, которые часто возникают у больных сахарным диабетом. Преобладают раны, развивающиеся в результате диабетических осложнений. Диабет может вызвать периферическую нейропатию, а также увеличить вероятность того, что инфицированные раны не будут поддаваться лечению системными антибиотиками. Лечение язв может занять несколько месяцев, при этом у пациента возникнет риск повторного инфицирования и новых инфекций, в том числе риск заражения костей (остеомиелит) и/или прогрессивной гангрены. Диабет, в общем, и инфекция диабетической стопы, в частности, являются главными причинами нетравматических ампутаций ноги в развитых странах мира, и язвы ног сейчас являются наиболее частой причиной, связанной с госпитализацией в случае диабета. Таким образом, инфицирование раны представляет собой тяжелое бремя для пациента и системы здравоохранения.

Лечение системными антибиотиками часто применяется для лечения раневой инфекции. Тем не менее, системная терапия часто приводит к возникновению нескольких побочных эффектов, в частности, у больных диабетом, которые обычно приводят к поражению почек и печени. Кроме того, системная терапия часто приводит к риску недостаточного проникновения в ткани, в связи с нарушением кровоснабжения в месте раны. Большинство имеющихся системных антибиотиков приводят к появлению резистентных бактерий при длительном применении. Таким образом, эффективное местное лечение часто является предпочтительным путем доставки антибиотика в рану.

Пексиганан представляет собой антимикробный пептид для местного введения с широким спектром действия. Он обладает антимикробной активностью против грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, которые обычно поражают кожу и мягкие ткани. Пексиганан обладает преимуществом низкого потенциала индукции резистентности и не вызывает перекрестной резистентности с существующими терапевтическими антибиотиками, благодаря его механизму действия. Тем не менее, возникают сложности при получении стабильной композиции пексиганана для местного применения и в настоящее время они до сих пор не получены.

При получении пептидов часто возникают проблемы, поскольку они проявляют химическую нестабильность, могут принимать несколько конформаций, проявляют тенденцию к самоассоциации, а также показывают физическую нестабильность, особенно в случае форм для местного применения. Химическая и физическая стабильность имеют решающее значение при создании эффективного коммерческого фармацевтического состава. Нестабильные составы приводят к потере активности и низкому качеству и жалобам пациентов. Составы для местного применения, в частности, должны оставаться стабильными в контейнере при хранении в течение долгого срока и при нанесении на кожу. Таким образом, до сих пор существует потребность в лекарственной форме пексиганана для местного применения, которая обеспечивает эффективное лечение раневой инфекции и которая остается химически и физически стабильной в течение длительного срока хранения.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение позволяет решить задачи, поставленные выше, и осуществляет вклад в уровень техники, обеспечивая стабильные составы пексиганана для местного применения. Составы по настоящему изобретению обладают улучшенной химической стабильностью, а также физической стабильностью в течение длительного срока.

Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к составу для местного применения, содержащему пексиганан или его кислотно-аддитивную соль, также содержащему первое гидрофильное поверхностно-активное вещество, имеющее значение ГЛБ между приблизительно 12 и приблизительно 17, и второе гидрофобное поверхностно-активное вещество, имеющее значение ГЛБ между приблизительно 3,5 и 5,5, где первое гидрофильное и второе гидрофобное поверхностноактивные вещества составляют от приблизительно 1,5 до приблизительно 5,0% (мас./мас.) состава, а массовое соотношение первого и второго поверхностно-активных веществ таково, что ГЛБ смеси составляет приблизительно между 12,5 и 14,5.

Предпочтительно значение ГЛБ первого гидрофильного поверхностно-активного вещества составляет от приблизительно 13 до приблизительно 16 и более предпочтительно значение ГЛБ первого гидрофильного поверхностно-активного вещества составляет 14,9. Предпочтительно значение ГЛБ второго гидрофобного поверхностно-активного вещества составляет от приблизительно 3,5 до приблизительно

- 1 028002

5,5, и более предпочтительно значение ГЛБ второго гидрофобного поверхностно-активного вещества составляет 4,7.

Предпочтительно первое гидрофильное и второе гидрофобное поверхностно-активные вещества составляют от приблизительно 2 до приблизительно 4,5% (мас./мас.) состава. Более предпочтительно первое гидрофильное и второе гидрофобное поверхностно-активные вещества составляют около 3,5% (мас./мас.) состава.

Предпочтительно ГЛБ смеси первого гидрофильного и второго гидрофобного поверхностноактивных веществ составляет приблизительно между 12,5 и 14,5. Более предпочтительно ГЛБ смеси первых гидрофильных поверхностно-активных веществ и вторых гидрофобных поверхностно-активных веществ составляет 13,6. Также предпочтительно ГЛБ смеси первого гидрофильного поверхностноактивного вещества и второго гидрофобного поверхностно-активного вещества составляет 14,4.

Предпочтительно первое гидрофильное поверхностно-активное вещество представляет собой Твин 60 и второе гидрофобное поверхностно-активное вещество представляет собой Спан 60.

В другом варианте осуществления стабильный состав для местного применения может содержать 1,05% (мас./мас.) ацетата пексиганана; 20,0% (мас./мас.) пропиленгликоля; 0,1% (мас./мас.) ЭДТА; 7,5% (мас./мас.) стеарилового спирта; 2,0% (мас./мас.) цетилового спирта; 1,0 (% (мас./мас.)) изопропилмиристата; 0,1% (мас./мас.) ВНТ; 0,43% (мас./мас.) Спан 60; 3,07% (мас./мас.) Твин 60; 0,1% (мас./мас.) Твин 80 и натрий-ацетатный буфер (цж.а.Т).

В другом варианте осуществления стабильный состав для местного применения может содержать 1,05% (мас./мас.) ацетата пексиганана; 20,0% (мас./мас.) пропиленгликоля; 0,1% (мас./мас.) ЭДТА; 6,0% (мас./мас.) стеарилового спирта; 2,0% (мас./мас.) цетилового спирта; 3,0 (% (мас./мас.)) изопропилмиристата; 0,1% (мас./мас.) ВНТ; 0,17% (мас./мас.) Спан 60; 3,33% (мас./мас.) Твин 60; 0,1% (мас./мас.) Твин 80 и натрий-ацетатный буфер (цж.а.Т).

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения кожи или раневой инфекции, включающему местное нанесение пациенту, нуждающемуся в этом, на место инфекции эффективного количества составов по настоящему изобретению.

Раскрытие изобретения

Было обнаружено, что могут быть получены составы для местного применения, содержащие пексиганан, которые являются химически и физически стабильными. Дополнительные аспекты настоящего изобретения будут раскрыты ниже в подробном описании вариантов осуществления изобретения.

Для целей настоящего изобретения, следующие термины имеют следующие значения:

Термин активный ингредиент относится к ингредиенту, проявляющему терапевтическую или косметическую активность.

Термин местное нанесение относится к нанесению на кожу, в том числе раны кожи, волосы, уши, слизистые оболочки, ректальному введению, назальному применению, а также нанесению на зубы в полости рта.

Термин стабильный состав относится к любому составу, обладающему достаточной стабильностью, чтобы использоваться в качестве фармацевтического средства. Предпочтительно состав обладает достаточной стабильностью для хранения при соответствующей температуре, предпочтительно между 10 и 30°С в течение соответствующего периода времени, предпочтительно большего чем один месяц, более предпочтительно более трех месяцев, еще более предпочтительно более шести месяцев, а наиболее предпочтительно более одного года. Предпочтительно состав сохраняет стабильность при комнатной температуре, т.е. при 25°С.

Термин физическая стабильность означает, что в эмульсии типа масло-в-воде не происходит разделения между масляной и водной фазами, и не происходит никаких существенных изменений физических свойств продукта.

Термин химическая стабильность означает, что требуемое процентное содержание терапевтического агента сохраняется неизменным и процентное содержание продуктов разложения, образованных химически, путем окисления или гидролиза, находится на приемлемом уровне. В частности, состав в основном считается химически стабильным, если концентрация лекарственного средства снижается не более чем на 10% после длительного хранения при предусмотренной температуре хранения продукта, т.е., важно сохранить концентрацию лекарственного средства на уровне приблизительно 90% для эффективного продукта. Стабильность при длительном хранении может быть показана, например, при ускоренных условиях, таких как по меньшей мере 6 при 40°С, соответствующих длительному хранению при 25°С. Химическая деградация может быть обусловлена несколькими механизмами, в том числе гидролизом, расщеплением дисульфидных связей, рН, температурой, взаимодействием между ингредиентами, окислением и/или деградацией, катализируемой светом.

Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству полипептида, которое является достаточным для оказания значимого эффекта, например, заживления раны, ингибирования пролиферации, профилактики или улучшения состояния бактериального заражения или инфицирования, или увеличения скорости заживления раны, ингибирования пролиферации, профилактики или улучшения состояния такого заражения, и инфекций. Предпочтительно значимый эффект является статистиче- 2 028002 ски значимым по сравнению с контролем. Обработка субъекта полипептидами пексиганана может быть выполнена в таком количестве и в течение такого времени, которые являются достаточными для улучшения состояния бактериальной инфекции или присутствия.

Термин рана, как здесь используется, относится к любому типу травмы, при которой происходит разрыв, разрез, прокол или повреждение кожи любого характера. Рана может представлять собой острое или хроническое состояние. К хроническим ранам относятся таковые, вызванные относительно медленным процессом, который приводит к повреждению тканей. Хронические раны включают, например, пролежни, венозные и диабетические язвы.

Диабетические язвы и инфекции диабетической стопы относятся к видам незаживающих ран у людей с диабетом. Незаживающие раны при диабетической стопе считаются одним из самых значительных осложнений сахарного диабета, представляя собой основную мировую медицинскую, социальную и экономическую проблему, которая в значительной степени влияет на качество жизни пациентов. Как правило, недостаточность циркуляции или другой системной поддержки ткани приводит к ее отторжению и распаду, что приводит к хронической ране. Поэтому незаживающие раны, связанные с недостаточной циркуляцией, плохо функционирующими венами, плохим сужением вен и капилляров конечностей, и неподвижностью, очень часто встречаются у пожилых людей и у людей с сахарным диабетом. Диабетики часто страдают от повреждения нерва ступней и ног, что приводит к развитию небольших ран или раздражений. Учитывая нарушения микроциркуляторного русла и другие побочные эффекты диабета, лечение таких ран требует много времени и специализированного подхода к терапии для надлежащего лечения. В дополнение к незаживающим ранам, может возникнуть инфекция, которая приведет к хроническому абсцессу. После того как инфекция достигает критической точки, инфекция может распространиться локально или стать системной.

Термин субъект, используемый здесь, относится к млекопитающему, предпочтительно человеку, более предпочтительно к субъекту-человеку с хронической раной, например к субъекту с диабетом.

Магаинины представляют собой природные катионные пептиды, обнаруженные у животных. Они обладают широким спектром противомикробной активности посредством их взаимодействия с анионными фосфолипидами микробных клеток, что приводит к нарушению клеточных мембран. Пексиганан (также известный как ΜδΙ 78) представляет собой синтетический катионный пептидный аналог магаинина 2, пептида иммунной защиты, выделенного из кожи лягушки.

Химический состав пексиганана:

Н-О1у-11е-О1у-Туз-РЬе-Теи-Ьу5-Еуз-А1а-Туз-Ьуз-РЬе-О1у-Туз-А1а-Р]1е-Уа1-Ту5Пе-Ееи-Ьуз-Ьуз-ННг [8Е0 ГО N0:1].

Последовательность пексиганана состоит из семи природных аминокислот, шесть из которых имеют Ь-конфигурацию, седьмая (глицин) является оптически неактивной. Пептид выделяют в форме его ацетатной соли с некоторой остаточной водой как натуральный компонент лекарственного вещества.

Молекула синтезируется в виде одного диастереомера со всеми хиральными центрами с заранее определенной стереохимией. Эмпирическая молекулярная формула пексиганана представляет собой ^С122Н210^32°22·

См. патент ϋδ 5912231, полное содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.

Пексиганан обладает противомикробной активностью в отношении грамположительных (например, метициллин-устойчивого золотистого стафилококка (ΜΚδΆ)) и грамотрицательных микроорганизмов, которые обычно инфицируют кожу и мягкие ткани. Он имеет низкий потенциал для развития резистент- 3 028002 ности и перекрестной резистентности с существующими терапевтическими антибиотиками, в связи с его механизмом действия. Активность пексиганана обусловлена лизисом в клетках микробов, таким образом, он выступает как эффективный ингибитор пролиферации бактерий, в том числе бактерий, резистентных к антимикробным средствам. Пексиганан является эффективным при местном лечении ран, где он ингибирует пролиферацию бактерий в ране и действует на бактериальную инфекцию. Предпочтительно пексиганан вводят в форме кислотно-аддитивной соли, в том числе ацетата пексиганана.

Таким образом, лечение пексигананом является эффективным и предпочтительным методом для раневых инфекций. Тем не менее, до сих пор не был разработан стабильный состав для местного применения, подходящий для фармацевтического введения.

Химическая нестабильность при долгосрочном хранении является общей проблемой пептидных составов. Со временем, пептиды могут разлагаться посредством ряда механизмов, в том числе деамидирования, окисления, гидролиза, дисульфидного обмена и рацемизации. В отличие от многих терапевтических молекул, пептиды не имеют глобулярной структуры, которая может защищать реакционноспособные группы, и, таким образом, боковые цепи многих пептидов подвергаются воздействию активных форм кислорода. Высокая степень гибкости пептидной цепи может привести к высокой скорости дезамидирования. Самоассоциирующее поведение, наблюдаемое у пептидов, может привести к повышенной химической нестабильности. Высокосамоассоциируемые пептиды могут даже образовывать мицеллы, влияющие на их способность проходить через мембраны.

Природа пептидов также приводит к физической нестабильности в составе. Способность пептидов к самоассоциации приводит к образованию агрегатов, что в конечном итоге приводит к образованию больших агрегатов.

Настоящее изобретение обеспечивает стабильный состав для местного применения, который позволяет преодолеть проблемы, связанные с долгосрочным хранением пептидных составов. Составы по настоящему изобретению включают пексиганан и фармацевтически приемлемые наполнители.

Поскольку описанные здесь композиции применяют местно, композиции могут быть представлены в форме, пригодной для местного введения, без ограничения, включая кремы, лосьоны, бальзамы, гели, мази или растворы, суспензии, эмульсии, аэрозоли или другие формы, пригодные для местного применения. Предпочтительно состав представлен в форме крема или геля.

Любую желаемую дозу пексиганана можно вводить в соответствии со способами по настоящему изобретению. Предпочтительно пексиганан находится в форме кислотно-аддитивной соли, и предпочтительно аддитивная соль является ацетатной формой. Вводимая доза будет, конечно, изменяться в зависимости от известных факторов, таких как фармакодинамические характеристики конкретного соединения, соли, или комбинации; возраста, состояния здоровья или массы субъекта; характера и степени выраженности симптомов; метаболических характеристик лекарственного средства и пациента, вида сопутствующего лечения; частоты обращений; или желаемого эффекта. Предпочтительная концентрация ацетата пексиганана составляет 1-3% (мас./мас.) состава. Более предпочтительно концентрация составляет 1,05% (мас./мас.).

Составы для местного применения, описанные здесь, содержат различные наполнители. Наполнители выбирают как правило, так, чтобы не осаждать пексиганан в используемом процентном содержании, не вызывать каких-либо реакций, плохо влияющих на пексиганан, и способствовать удовлетворительному растворению и диспергированию пексиганана. Наполнители могут включать в себя, без ограничения, хелатирующие агенты, загустители, антиоксиданты, эмульгаторы, растворители, эмоленты, гелеобразующие агенты, смачивающие агенты, антимикробные консерванты, пеногасители и регулирующие рН агенты.

Настоящие составы включают эмульгаторы. Эмульгаторы могут без ограничения могут включать Твин 60, Спан 60, Твин 80, сесквистеарат метилглюкозы, метилглюкозид - ПЭГ-20 сесквистеарат, стеарет-21, полиэтиленгликоль 20 сорбитана моностеарат, полиэтиленгликоль 60 сорбитана моностеарат, полиэтиленгликоль 80 сорбитана моностеарат, стеарет-20, цетет-20, ПЭГ-100 стеарат, стеароил натрия саркозинат, гидрированный лецитин, кокоилглицерил сульфат натрия, стеарил сульфат натрия, стеароил лактилат натрия, ПЭГ-20 глицерил моностеарат, моностеарат сахарозы, полистеараты сахарозы, полиглицерил 10 стеарат, полиглицерил 10 миристат, стеарет 10, ДЭА-олет-3-фосфат, ДЭА-олет-10-фосфат, ППГ-5 цетет 10 фосфатную соль натрия, ППГ-5 цетет 10 фосфатную соль калия, стеарет-2, ПЭГ-5 стерол соевого масла, ПЭГ-10 стерин соевого масла, диэтаноламин цетил фосфат, моностеарат сорбитана, моностеарат диэтиленглоколя, глицерилмоностеарат, стеарет-2 или -100, стеариновую кислоту и их смеси.

Состав по настоящему изобретению содержит по меньшей мере два эмульгатора. Предпочтительно первый эмульгатор представляет собой гидрофильный эмульгатор. Предпочтительно первый гидрофильный эмульгатор представляет собой Твин 60. Предпочтительно второй эмульгатор представляет собой гидрофобный эмульгатор. Предпочтительно второй гидрофобный эмульгатор представляет собой Спан 60.

Гидрофильно-липофильный баланс (ГЛБ) эмульгаторов в масляной фазе также влияет на стабильность. ГЛБ представляет собой меру степени, в которой вещество является гидрофильным или липофильным, определяется путем вычисления значений для различных участков молекулы. Значение ГЛБ 0

- 4 028002 соответствует полностью гидрофобной молекуле, а значение 20 соответствует полностью гидрофильной молекуле.

Как было неожиданно обнаружено, соотношение первого эмульгатора и второго эмульгатора является важным фактором для химической стабильности состава. Было установлено идеальное соотношение эмульгаторов, обеспечивающее значительное улучшение химической стабильности состава при длительном сроке при температурах хранения. При этом регулирование соотношения первого и второго эмульгаторов и, таким образом, регулирование ГЛБ смеси двух эмульгаторов, как понятно, влияет на физическую стабильность, но не должно влиять на химическую стабильность. Тем не менее, за счет изменения соотношения первого гидрофильного эмульгатора и второго гидрофобного эмульгатора было получено значительное улучшение химической стабильности при длительном хранении состава.

Первый гидрофильный эмульгатор имеет значение ГЛБ приблизительно между 12 и 17. Более предпочтительно первый гидрофильный эмульгатор имеет значение ГЛБ приблизительно между 13 и 16. Например, ГЛБ первого гидрофильного эмульгатора может составлять 14,9.

Второй гидрофобный эмульгатор имеет значение ГЛБ приблизительно между 3,5 и 5,5. Более предпочтительно второй гидрофобный эмульгатор имеет значение ГЛБ приблизительно между 3,5 и 5,5. Например, ГЛБ второго гидрофобного эмульгатора может составлять 4,7.

Первое гидрофильное и второе гидрофобное поверхностно-активные вещества вместе могут составлять от приблизительно 1,5 до приблизительно 5,0% (мас./мас.) состава. Предпочтительно, чтобы первое гидрофильное и второе гидрофобное поверхностно-активные вещества составляли от приблизительно 2 до приблизительно 4,5% (мас./мас.) состава. Более предпочтительно первое гидрофильное и второе гидрофобное поверхностно-активные вещества составляют около 3,5% (мас./мас.) состава. Когда первый гидрофильный и второй эмульгатор присутствуют вместе, ГЛБ смеси двух эмульгаторов могут быть измерены. Смешанный ГЛБ рассчитывается на основе средневзвешенного значения отдельных значений ГЛБ, как взвешенный по процентному содержанию состава, состоящего из отдельных эмульгаторов. Предпочтительно ГЛБ смеси первого гидрофильного эмульгатора и второго гидрофобного эмульгатора находится в диапазоне от приблизительно 12,5 и приблизительно 14,5. Также предпочтительно ГЛБ смеси первого гидрофильного поверхностно-активного вещества и второго гидрофобного поверхностноактивного вещества составляет 14,4.

Дополнительные эмульгаторы, такие как третий или четвертый, или более эмульгаторы, могут быть использованы в дополнение к первому эмульгатору и второму эмульгатору.

Настоящие составы могут включать хелатирующие агенты. Предпочтительные хелатирующие агенты без ограничения включают, например, этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), динатрийэдетат и производные ЭДТА, лимонную кислоту и их смеси.

Настоящие составы могут включать загустители для повышения вязкости и/или консистенции. Предпочтительные загустители могут без ограничения включать стеариловый спирт, цетиловый спирт, парафин, цетеарет-20, цетеарет-30, цетеариловый спирт, цетет 20, цетостеариловый спирт, цетиловый спирт, цетилстеариловый спирт и их смеси.

Настоящие составы могут включать растворители.

Предпочтительные растворители без ограничения включают пропиленгликоль, воду, изопропиловый спирт, жидкий вазелин, простой эфир, петролейный эфир, спирты (например, этанол и высшие спирты), силиконы, ароматические углеводороды (например, толуол), алканы (например, пентан, гексан и гептан), кетоны (например, ацетон и метилэтилкетон), хлорированные углеводороды (например, хлороформ, четыреххлористый углерод, метиленхлорид и этилендихлорид), ацетаты (например, этилацетат), сложные эфиры и масла (например, изопропилмиристат, диизопропиладипат и минеральное масло) и их смеси. Растворитель может также проявлять антимикробные свойства.

Настоящие составы могут включать консерванты.

Предпочтительные консерванты могут без ограничения включать феноксиэтанол, парабены (такие как метилпарабен и пропилпарабен), пропиленгликоль, сорбаты, производные мочевины (например, диазолидинил мочевина) и их смеси.

Настоящие составы могут включать эмоленты.

Предпочтительные эмоленты без ограничения включают каприловые/каприновые триглицериды, касторовое масло, масло какао, диизопропиладипат, глицерин, моноолеат глицерина, моностеарат глицерина, стеарат глицерина, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, ланолин, ланолиновый спирт, гидрированный ланолин, жидкие парафины, линолевую кислоту, минеральное масло, олеиновую кислоту, белый вазелин, полиэтиленгликоль, полиоксиэтилированные гликолевые эфиры жирных спиртов, полиоксипропилен-15 стеариловый эфир, пропиленгликоль стеарат, сквалан, кремнийорганические соединения, стеариловый спирт, мочевины и их смеси.

Настоящие составы могут включать антиоксиданты.

Предпочтительные антиоксиданты без ограничения включают бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), бутилированный гидроксианизол (ВНА), пропилгаллат, коэнзим 010. масло розмарина, зеленый чай, ликопин, экстракт виноградных косточек, экстракт сосновой коры, витамин С, натуральный бетакаротин, синтетический бета-каротин, гамма-оризанол (сложные эфиры феруловой кислоты), селен, лю- 5 028002 теин, а также их смеси.

Настоящие составы могут включать буферные агенты. Предпочтительные буферные агенты без ограничения включают ацетатные буферы, такие как натрий-ацетатный, цитратные буферы, фосфатные буферы, буферы молочной кислоты, боратные буферы и их смеси. рН настоящих составов предпочтительно составляет от 4,0 до 6,0. Более предпочтительно, чтобы рН настоящего состава составлял 5,0.

В качестве примера состав может содержать ацетат пексиганана, пропиленгликоль, ЭДТА, стеариловый спирт, цетиловый спирт, изопропилмиристат, ВНТ, 0,43% (мас./мас.) Спан 60, 3,07% (мас./мас.) Твин 60, Твин 80 и натрий-ацетатный буфер. Например, состав может представлять собой:

Ингредиент	% мас./мас.
Ацетат пексиганана	1,05
Пропиленгликоль	20, 00
ЭДТА	0, 10
Стеариловый спирт	7,50
Цетиловый спирт	2,00
Изопропилмиристат	1,00
ВНТ	0, 10
Спан 60	0,43
Твин 60	3, 07
Твин 80	0, 10
Натрий-ацетатный буфер (63,4 мМ)	д.з.а.ά.

Также состав может представлять собой:

Ингредиент	% мас./мас.
Ацетат пексиганана	1,05
Пропиленгликоль	20, 00
ЭДТА	0, 10
Стеариловый спирт	6, 00
Цетиловый спирт	2,00
Изопропилмиристат	3, 00
ВНТ	0, 10
Спан 60	0,43
Твин 60	3, 07
Твин 80	0, 10
Натрий-ацетатный буфер (63,4 мМ)	д.з.а.ά.

- 6 028002

Также состав может представлять собой:

Ингредиент	% мас./мас.
Ацетат пексиганана	1,05
Пропиленгликоль	20, 00
ЭДТА	0, 10
Стеариловый спирт	6, 00
Цетиловый спирт	2,00
Изопропилмиристат	3, 00
ВНТ	0, 10
Спаи 60	0, 17
Твин 60	3,33
Твин 80	0, 10
Разбавленная хлористоводородная кислота	До рН 5,0
10% гидроксид натрия	До рН 5,0
Натрий-ацетатный буфер (26,54 мМ)	д.5.а.6.

Ингредиент	% мас./мас.
Ацетат пексиганана	1,05
Пропиленгликоль	20, 00
ЭДТА	0, 10
Стеариловый спирт	7,50
Цетиловый спирт	2,00
Изопропилмиристат	1,00
ВНТ	0, 10
Спан 60	0,43
Твин 60	3, 07
Твин 80	0, 10
Пропилпарабен	0, 08
Метилпарабен	0, 03
Разбавленная хлористоводородная кислота	До рН 5,0
10% гидроксид натрия	До рН 5,0
Натрий-ацетатный буфер (63,4 мМ)	д. з.а.б.

- 7 028002

Также состав может представлять собой:

Ингредиент	% мас./мас.
Ацетат пексиганана	1,05
Пропиленгликоль	5, 00
ЭДТА	0, 10
Стеариловый спирт	7,50
Цетиловый спирт	2, 00 -
Изопропилмиристат	1,00
ВНТ	0, 10
Спан 60	0,43
Твин 60	3, 07
Твин 80	0, 10
Разбавленная
хлористоводородная	До рН 5, 0
кислота
10% гидроксид натрия	До рН 5,0
Натрий-ацетатный буфер (63,4 мМ)	д. з.а.ά.

Также состав может представлять собой:

Ингредиент	% мас./мас.
Ацетат пексиганана	1,05
Пропиленгликоль	10, 00
ЭДТА	0, 10
Стеариловый спирт	6, 00
Цетиловый спирт	2,00
Изопропилмиристат	3, 00
ВНТ	0, 10
Спан 60	0, 17
Твин 60	3,33
Твин 80	0, 10
Разбавленная хлористоводородная кислота	До рН 5,0
10% гидроксид натрия	До рН 5,0
Натрий-ацетатный буфер (63,4 мМ)	д.з.а.ά.

Способы введения состава для местного применения должны быть известны специалистам в данной области техники. Настоящее изобретение относится к способу лечения кожи или раневой инфекции, включающему местное нанесение пациенту, нуждающемуся в этом, в месте инфекции, эффективного количества составов по настоящему изобретению.

Хотя настоящее изобретение было подробно описано со ссылками на конкретные примеры, следует понимать, что могут быть выполнены различные модификации без отступления от сущности изобретения, что должно быть понятно для специалиста в данной области.

- 8 028002

Примеры

Следующие составы были исследованы в примерах, приведенных ниже. Композиции состава.

Состав 3216-6 имеет ГЛБ смеси 9,07(^9,1). Состав 3216-10 имеет ГЛБ смеси 13,6. Состав 3216-72 имеет ГЛБ смеси 14,4.

Пример 1. Химическая стабильность в течение 6 и 11 месяцев.

Составы 3216-6, 3216-10 и 3216-72 исследовали на химическую стабильность. Стабильность определяли с помощью ВЭЖХ исследования. Параметры хроматографирования были следующие:

Колонка: На1о® С18 2,7 мкм, 4,6x150 мм.

Объем впрыска: 20 мкл.

Температура колонки: 70°С.

Скорость потока: 1,4 мл/мин.

Определение: 214 нм.

Время пробега: 27 мин.

Подвижная фаза: 5% ацетонитрил: 5% изопропанол: 90% вода: 0,1% трифторуксусная кислота.

Мобильная фаза В: 70% ацетонитрил: 20% изопропанол: 10% вода: 0,1% трифторуксусная кислота.

Измеряли разложение лекарственного средства. Ниже приведены данные по химической стабильности за 11 месяцев и 18 месяцев. Показаны данные химической стабильности всех трех при 25°С, т.е. при комнатной температуре. Как упоминалось выше, исследование при 40°С в течение более короткого времени подтверждает стабильность при 25°С в течение более длительного периода времени. Исследование композиции при 40°С в течение 6 месяцев считается показателем стабильности этого же состава при 25°С в течение двух лет.

Результаты показывают, что пексиганан более химически стабилен в составах 3216-10 и 3216-72, чем в составе 3216-6. Как будет показано ниже, концентрация в составе 3216-6 снизилась с 102,4% от заявленной при 1=0 (начальная точка) до 87% за 6 месяцев. Для коммерческого препарата существуют требования о сохранении концентрации лекарственного средства более 90% значения, чтобы он считался стабильным. Такой результат достигается в составах 3216-10 и 3216-72.

Кроме того, при 40°С, наблюдалось большая деградация лекарственного вещества в составе 3216-6, чем в составах 3216-10 и 3216-72. Например, в одиннадцать месяцев, общее количество продуктов разложения, наблюдаемое в составе 3216-6 при 40°С почти в два раза больше, чем в составе 3216-10 при 40°С. Это показывает существенное различие химической стабильности.

Результаты, приведенные ниже, показывают, что составы 3216-10 и 3216-72 были намного более химически стабильны при температуре хранения при более длительном сроке, чем состав 3216-6. Различие составов 3216-10 и 3216-72 по сравнению с 3216-06 заключается в соотношении эмульгаторов.

- 9 028002

Химическая стабильность ацетата пексиганана в 1% кремах: 11месяцев

Партия # (состав #)	Т хранения (°С)	Анализ и разложение	0	1	6	11
3216-6	25	% ЬС	102,4		102,8	100,3
3216-10	40 25	Общее количество продуктов разложения % ЬС Общее количество продуктов разложения % ЬС Общее	102,4 102,2	100, 1	1,55 87,3 10,39 102,8 1,53	2, 06 70, 9 20,47 101,1 2, 65
		количество продуктов разложения
	40	% ЬС		99, 8	93, 6	85, 6
		Общее количество продуктов разложения			5,76	11, 62
3216-72	25	% ЬС	102,4		102,1	100,4
		Общее количество продуктов разложения			1, 6	1,74
	40	% ЬС		99, 2	94,3	84,5
		Общее количество продуктов разложения			6,2	12,43

Для использования в качестве значения 1=0 вместо фактических исходных значений продуктов разложения.

- 10 028002

Стабильность результатов для крема ацетата пексиганана 1,05% (мас./мас.) в течение 6 месяцев

Состав	Условие	% мас/иас.	%ЬС	Время удерживания ацетата пексиганана	Неопреде- ленное время удерживания	Неопреде- ленное относительное время удерживания	% Площадь ацетата пексиганана^	Общее количество продуктов разложения, % площадь
3216-6	5°С	1.09	103.4	12.251	8.647	0.71	0.38	1.35
9.840	0,80	0.74
11.538	0.94	0.24
3216-6	25°С	1.08	102.8	12.261	8.642	0.70	0.38	1.55
9.830	0.80	0.73
11.542	0.94	0.24
14.240	1.16	0.20
3216-6	40°С	0.92	87.3	12.271	8.659	0.71	0.45	10.39
9.509	0.77	0.35
9.839	0.80	0.76
10.605	0.86	1.42
10.853	0.88	0.24
11.027	0.90	0.95
11.166	0.91	0.23
11.231	0.92	0.36
11.546	0.94	0.39
11.798	0.96	0.26
12.646	1.03	0.48
14.185	1.16	0.26
14.866	1.21	2.61
17.318	1.41	1.63
3216-10	5°С	1.09	103.6	12.255	8.657	0.71	0.38	1.58

					9.843	0.80	0.74
11.544	0.94	0.25
14.205	1.16	0.22
3216-10	25°С	1.08	102.8	12.244	8.640	0.71	0.37	1.53
9.833	0.80	0.74
11.536	0.94	0.22
14.172	1.16	0.20
3216-10	40°С	0.98	93.6	12.296	8.655	0.70	0.37	5.76
9.848	0.80	0.79
10.616	0.86	0.49
11.035	0.90	0.84
11.179	0.91	0.21
11.242	0.91	0.26
11.558	0.94	0.33
11.818	0.96	0.35
12.689	1.03	0.30
13.977	1.14	0.20
14.254	1.16	0.36
14.947	1.22	0.80
17.447	1.42	0.45
3216-72	5°С	1.09	103.6	12.273	8.663	0.71	0.36	2.03
9.853	0.80	0.75
11.555	0.94	0.24
14.227	1.16	0.20
14.655	1.19	0.26
18.007	1.47	0.22
3216-13 (А)	25°С	1.07	102.1	12.269	8.674	0.71	0.38	1.60
9.854	0.80	0.77

- 11 028002

					11.550	0.94	0.22
14.241	1.16	0.23
3216-13 (А)	40°С	0.99	94.3	12.280	8.661	0.71	0.42	6.20
9.511	0.77	0.20
9.851	0.80	0.76
10.620	0.86	0.68
10.862	0.88	0.23
11.036	0.90	0.84
11.242	0.92	0.29
11.553	0.94	0.30
11.808	0.96	0.31
12.668	1.03	0.25
13.957	1.14	0.21
14.226	1.16	0.23
14.932	1.22	0.91
17.434	1.42	0.57

¹Пики >0,2% площади лекарственного вещества получены ККТ и % площади по сравнению с пиком ацетата пексиганана.

Результаты стабильности для крема ацетата пексиганана 1,05% (мас./мас.) за 11 месяцев

Состав	Условие	% мас./мас.	%ЬС	Время удерживания ацетата пексиганана	Неопределенное время удерживания	Неопределенное относительное время удерживания	% Площадь ацетата пексиганана'	Общее количество продуктов разложения, % площадь
3216-6	25°С	1.05	100.3	13.155	8.956	0.68	0.36	2.06
10.157	0.77	0.75
11.392	0.87	0.21
11.532	0.88	0.32
11.922	0.91	0.21
16.992	1.29	0.22
3216-6	40°С	0.74	70.9	13.150	8.836	0.67	0.38	20.47
8.963	0.68	0.63
9.879	0.75	0.75
10.148	0.77	1.09
10.533	0.80	0.30
10.965	0.83	5.58
11.240	0.85	0.91
11.382	0.87	1.63
11.570	0.88	2.01
11.916	0.91	0.24
12.163	0.92	0.94
14.478	1.10	0.23
15.129	1.15	0.21
15.689	1.19	0.55
17.036	1.30	5.01
3216-10	25°С	1.06	101.1	13.152	8.967	0.68	0.38	2.65
10.160	0.77	0.79
10.890	0.83	0.36
11.399	0.87	0.46
11.542	0.88	0.43
11.941	0.91	0.24

- 12 028002

Состав	Условие	% мас./мас.	%ЬС	Время удерживания ацетата пексиганана	Неопределенное время удерживания	Неопределенное относительное время удерживания	% Площадь ацетата пексиганана”!	Общее количество продуктов разложения, % площадь
3216-10	40°С	0.90	85.6	13.174	8.852	0.67	0.24	11.62
8.980	0.68	0.48
9.918	0.75	0.49
10.175	0.77	0.98
10.609	0.81	0.28
10.875	0.83	0.28
10.993	0.83	1.78
11.258	0.85	0.69
11.400	0.87	1.59
11.586	0.88	1.65
11.936	0.91	0.39
12.303	0.93	0.67
17.067	1.30	2.11
3216-13 (А)	25°С	1.05	100.4	13.072	8.967	0.69	0.38	1.74
10.171	0.78	0.78
11.403	0.87	0.33
17.011	1.30	0.24
3216-13 (А)	40°С	0.89	84.5	13.125	8.820	0.67	0.29	12.43
8.956	0.68	0.49
9.898	0.75	0.58
10.165	0.77	1.01
10.569	0.81	0.36
10.865	0.83	0.49
10.987	0.84	2.32
11.246	0.86	0.79
11.395	0.87	1.24
11.579	0.88	1.58
11.916	0.91	0.38
12.278	0.94	0.55
17.059	1.30	2.35

¹Пики >0,2% площади лекарственного вещества получены НИТ и % площади по сравнению с пиком ацетата пексиганана.

Пример 2. Химическая стабильность в течение 18 месяцев при 40°С.

Химическую стабильность 3216-6, 3216-10 и 3216-72 исследования при 40°С в течение 18 месяцев, что соответствует длительному хранению композиций при 25°С. Полученные результаты показывают, что различие между составом 3216-6 по сравнению с составами 3216-10 и 3216-72 при 40°С приводит к значительному различию количества продуктов разложения. Другими словами, различие в количестве продуктов разложения между составом 3216-6 и составами 3216-10 и 3216-72 при 18 месяцах больше, чем различие между этими составами, полученное при 11 месяцах (как показано выше в примере 1).

Пример 3. Физическая стабильность.

Для исследования физической стабильности составов оценивали внешний вид, рН (чистый), вязкость при комнатной температуре и проводили количественное определение активного фармацевтического ингредиента.

Образцы исследовали в течение 1, 2 и 3 месяцев при 5, 25 и 40°С. Исследование при 40°С дает хорошее представление о стабильности продукта при длительном хранении при 25°С. Следует отметить, что исследование при 40°С в течение короткого времени, например 6 месяцев, считается показателем стабильности при 25°С (т.е. при комнатной температуре) в течение более длительного периода времени (двадцать четыре месяца); т.е. оно представляет собой исследование в ускоренных условиях.

Цикл замораживания/оттаивания состоял из хранения в течение трех или четырех календарных дней при -20°С, затем в течение трех или четырех календарных дней при комнатной температуре; в общей сложности выполнили три циклов.

Измеряли внешний вид, рН и вязкость. Что касается внешнего вида, предпочтительным являлся белый или почти белый однородный крем, без очевидного разделения на отдельные фазы. Что касается рН, соответствующее значение местного рН может включать в себя значения рН приблизительно между 4,5 и приблизительно 8.

Что касается вязкости, проводили исследование крема при комнатной температуре. Измеряли значения вязкости 13 г образцов на реометре со шпинделем # 29 при 30 об/мин при комнатной температуре в течение 2 мин. Идеальные значения вязкости находятся в диапазоне 5000-40000 сП и предпочтительно находятся между 10000 и 20000 сП.

Полученные результаты, демонстрирующие показатели физической стабильности, были следующими:

- 13 028002

Крем ацетата пексиганана 1,05%: состав №: 3216-6

Условия хранения	Интервал времени (месяц)	Внешний вид	рН (чистый)	Вязкость¹ (сПз)
Ν/Α	Т=0	Соответствует	5, 02	10460
Г/Т	3 Цикла	Соответствует	5, 01	9300
5°С	1	Соответствует	5, 06	7133
2	Соответствует	5, 00	11360
6	Соответствует	5, Об	6000
25°С	1	Соответствует	5, 06	13200
2	Соответствует	5, 00	13900
6	Соответствует	5, 04	12660
11	Соответствует	ΝΤ	ΝΤ
18	Соответствует	5, 04	14660
40°С	1	Соответствует	5, 10	16660
2	Соответствует	5, 01	16900
6	Соответствует	5, 05	17760
11	Соответствует	ΝΤ	ΝΤ

¹Параметры вязкости получали следующим образом: камера 13К, шпиндель # 29, 30 об/мин, 13 г образца, при комнатной температуре в течение 2 мин.

Соответствует = от белого до почти белого однородного крема.

ΝΤ = не исследовали (не представлен для исследования).

Крем ацетата пексиганана 1,05%: состав №: 3216-10

Условия хранения	Интервал времени (месяц)	Внешний вид	рН (чистый)	Вязкость¹ (сПз)
Ν/Α	Т=0	Соответствует	4,82	17030
Г/Т	3 Цикла	Соответствует	4,88	10930
5°С	1	Соответствует	4,89	18300
2	Соответствует	4,83	16360
3	ΝΤ	ΝΤ	ΝΤ
б	Соответствует	4,76	9100
25°С	1	Соответствует	4,89	12430
2	Соответствует	4,82	12100
3	ΝΤ	ΝΤ	ΝΤ
б	Соответствует	4,76	10160
11	Соответствует	ΝΤ	ΝΤ
18	Соответствует	4,78	8266
40°С	1	Соответствует	4,89	19700
2	Соответствует	4,83	21330
3	ΝΤ	ΝΤ	ΝΤ
б	Соответствует	4,77	20200
11	Соответствует	ΝΤ	ΝΤ

параметры вязкости получали следующим образом: камера 13К, шпиндель # 29, 30 об/мин, 13 г образца, при комнатной температуре в течение 2 мин.

- 14 028002

Крем ацетата пексиганана 1,05%: состав №: 3216-72

Условия хранения	Интервал времени (месяц)	Внешний вид	РН (чистый)	Вязкость¹ (сПз)
Ν/Α	Т=0	Соответствует	4, 99	19660
Е/Т	3 Цикла	Соответствует	5, 09	11230
5°С	1	Соответствует	5, 04	15930
2	Соответствует	4, 99	16160
3	ΝΤ	ΝΤ	ΝΤ
б	Соответствует	4, 93	10400
25°С	1	Соответствует	5, Об	14030
2	Соответствует	4, 99	14400
3	ΝΤ	ΝΤ	ΝΤ
6	Соответствует	4, 93	12160
11	Соответствует	ΝΤ	ΝΤ
40°С	1	Соответствует	5, Об	18100
2	Соответствует	5, 01	18860
3	ΝΤ	ΝΤ	ΝΤ
б	Соответствует	4, 95	20300
11	Соответствует	ΝΤ	ΝΤ

¹Параметры вязкости получали следующим образом: камера 13К, шпиндель № 29, 30 об/мин, 13 г образца, при комнатной температуре в течение 2 мин.

Пример 4. Стресс-исследование.

Проводили стресс-исследование центрифугированием для оценки вероятности сохранения целостности продукта при длительном хранении. Составы исследовали в условиях стресса в центрифуге, как показано ниже. Состав 3216-10 был идентичен составу 3216-6 во всех аспектах, за исключением соотношения двух эмульгаторов, Спан 60 и Твин 60. В 3216-6 соотношение (мас./мас.%) составило 2:1,5, тогда как в 3216-10 это соотношение было изменено до 0,43:3,07. Общая сумма двух эмульгаторов сохранялась той же при 3,5% (мас./мас.) Тем не менее, изменение соотношения этих двух эмульгаторов привело к достижению превосходной стабильности. Состав 3216-10 лучше сохранял физическую целостность в стресс-исследовании, что было подтверждено значением времени, потребовавшимся для разделения фаз. В исследовании центрифугированием при 25°С в 3216-6 наблюдали разделение через 10 мин при 5000д, тогда как для 3216-10 для разделения потребовалось 60 мин в аналогичных условиях стресса. В аналогичном исследовании? выполненном при 40°С (ускоренные условия), в 3216-6 разделение наблюдалось спустя 60 мин, тогда как в 3216-10 разделения не наблюдали.

Стресс-исследование крема ацетата пексиганана

№ состава	Условия	Первоначальный рН	рН	Внешний вид	Вязкость, сП	Точка разделения фаз при исследовании центрифугированием²
25°С	40°С
3216-6	5°С	5, 07	5, 06	Соответствует	6480	Признаки разделения при 500Од, 10 мин	Признаки разделения при 500Од, 60 мин
25°С	5, 02	Соответствует	10980
40°С	5, 09	Соответствует	10420
50°С	5, 04	Соответствует	12780
-20°С/40°С	4,93	Соответствует	10580
3216-10	5°С	5, 08	5, 11	Соответствует	9880	Признаки разделения при 500Од, 60 мин	Разделение не наблюдается
25°С	5, 07	Соответствует	17400
40°С	5, 12	Соответствует	17160
50°С	5, 1	Соответствует	17840
-20°С/40°С циклов	4,94	Соответствует	16040

- 15 028002 'Однородный от белого до почти белого вязкий крем.

Пример 5. Получение состава пексиганана.

Стадия 1. Готовили натрий-ацетатный буфер путем смешивания очищенной воды, тригидрата ацетата натрия и ледяной уксусной кислоты.

Стадия 2. В основном производственном сосуде смешивали пропиленгликоль, полисорбат 60 и приблизительно 85% натрий-ацетатного буфера. Смесь нагревали до 65-70°С при лопастном перемешивании. Поддерживали температуру.

Стадия 3. Во втором сосуде смешивали стеариловый спирт, цетиловый спирт, моностеарат сорбита, изопропилмиристат и ВНТ и нагревали до 65-70°С при перемешивании до расплавления всех твердых веществ. Поддерживали температуру.

Стадия 4. В третьем сосуде смешивали оставшуюся часть натрий-ацетатного буфера, полисорбат 80, динатрий-эдетат и ацетат пексиганана и нагревали до 35-45°С при перемешивании до получения прозрачного раствора. Поддерживали температуру.

Стадия 5. Масляную фазу со стадии 3 медленно добавляли к водной фазе со стадии 2 при гомогенизации.

Стадия 6. Прекращали нагревание. Продолжали гомогенизацию. Эмульсию охлаждали до 55°С на ледяной бане.

Стадия 7. Прекращали гомогенизацию и удаляли эмульсию с ледяной бани.

Стадия 8. Начинали лопастное перемешивание. Фазу лекарственного средства со стадии 4 добавляли к эмульсии со стадии 7.

Стадия 9. При непрерывном лопастном перемешивании массу охлаждали до комнатной температуры.

Стадия 10. Регистрировали рН. При необходимости рН доводили до 5,0±0,2, используя 10% НС1 или 10% раствор №ЮН. Продукт смешивали до однородного и гомогенного состояния.

Пример 6. Получение и очистка активного ингредиента ацетата пексиганана.

Активный ингредиент, пексиганан ацетат, получали в форме лиофилизированного порошка.

Предшественник ацетата пексиганана, пептид-смолу, получали в соответствии с общей процедурой, описанной в МетйеМ (δοϊίά РЬаке Рерййе 8уи!Ье515. I. Тйе 8уШЬе515 οί а Тейарерййе. ί. Ат. СЬет. §ос. 1963 85 (14): 2149-2154), с незначительными изменениями, α-аминогруппу каждой аминокислоты защищали Ртос группой, чувствительной к основанию, а функциональные группы боковых цепей защищали кислотно-лабильными группами. Синтез проводили с использованием Ртос-Кшк амидной смолы (замещение: приблизительно 0,7 мэкв/г) в качестве исходной смолы-подложки в процессе получения. Стандартную Ртос-химию использовали для сборки пептидной цепи со следующим общим циклом:

удаление Ν-концевой Ртос-группы из исходной смолы или последней добавленной аминокислоты 20% (об./об.) раствором пиперидина в ΌΜΡ;

промывание ΌΜΡ;

присоединение следующей аминокислоты с использованием О1С в присутствии НОВ!; промывание ΌΜΡ.

После удаления Ртос-группы и промывки ΌΜΡ, забрали маленький образец смолы и для контроля процесса выполняли нингидриновый тест, цветовой тест для измерения остаточных связанных со смолой аминных групп. Тест был положительным в случае наличия свободной аминной группы.

Этот цикл повторяли с соответствующими производными аминокислот, т.е. Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-Уа1-ОН, Ртос-РЬе-ОН, Ртос-А1а-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-О1у-ОН, Ртос-РЬе-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-А1а-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-РЬе-ОН, Ртос-Ьу5(Вос)-ОН, Ртос-О1у-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-О1у-ОН.

Для мониторинга выполняли нингидриновый тест в конце каждого цикла синтеза для оценки стадии присоединения. Отрицательный результат указывает на отсутствие свободных аминов (полное присоединение). Если тест оказался положительным, это указывает на непрореагировавший амин (неполное присоединение), реакция присоединения может быть продолжена повторным присоединением защищенного производного аминокислоты или может быть выполнено ацетилирование (блокировка) уксусным ангидридом в присутствии ΌΙΕΑ.

Смолу промывали 1РА и сушили в потоке азота, получая защищенную пептид-смолу, предшественник ацетата пексиганана. Продукт отделяли от смолы и одновременно удаляли защитные группы обработкой партий пептид-смолы предшественника смесью ТРА и воды (ТРА:Н₂О, приблизительно 95:5, об./об.) в течение приблизительно 2,5 ч при температуре окружающей среды. Затем смолу удаляли фильтрованием, промывали дополнительным количеством ТРА и объединенные фильтраты концентрировали на роторном испарителе. Неочищенный продукт осаждали добавлением концентрированных фильтратов в МТВЕ, выделяли фильтрованием, промывали на фильтре с МТВЕ и сушили до постоянной массы в вакуумной печи при комнатной температуре.

Сырой пексиганан с предыдущей стадии очищали двухступенчатой препаративной ОФ-ВЭЖХ на С₁₈ обращенно-фазовом силикагеле, при этом чистоту фракций оценивали аналитической ВЭЖХ. На

- 16 028002 первой стадии процесса партии сырого продукта по отдельности повторно растворяли в разбавленном водном растворе уксусной кислоты (около 10% об./об.), раствор фильтровали и наносили на препаративную колонку ВЭЖХ, которую промывали метанолом и уравновешивали 0,1 М водным триэтиламмоний фосфатом, рН 2,3 (ТЕАР). Продукт элюировали с градиентом ацетонитрила в ТЕАР буфере с ультрафиолетовым мониторингом (УФ) при 230 нм. Полученные фракции анализировали методом ВЭЖХ в процессе и объединяли таким образом, чтобы получить чистоту, требуемую в процессе производства. Фракции с чистотой меньшей контрольных критериев процесса производства могут быть переработаны по описанной выше методике или выброшены.

На втором этапе очистки пул полуочищенных пептидов с первого этапа очистки разводили и наносили на препаративную колонку, уравновешенную 0,1% водным раствором ТРА. Продукт элюировали с градиентом ацетонитрила в 0,1% водной ТРА с УФ-контролем при 230 нм. Полученные фракции анализировали методом ВЭЖХ в процессе и объединяли таким образом, чтобы получить чистоту, требуемую в процессе контролей. Фракции с чистотой, меньшей контрольных критериев процесса производства, могут быть переработаны по описанной выше методике или выброшены.

Объединенные фракции после двухстадийной очистки лиофилизировали по отдельности, получая партии ТРА соли очищенного продукта, которые хранили в холодильнике перед превращением в ацетатную соль на следующей стадии процесса.

Очищенную ТРА соль продукта с предыдущей стадии очистки превращают в ацетатную соль с помощью ионообменной методики на Эо\ус\ 1X2-100 смоле. Раствор объединенных партий в разбавленной водной уксусной кислоте (приблизительно 10%, об./об.) пропускают через колонку, заполненную с избытком Эо\ус\ 1X2-100 (ацетатная форма), которую затем промывают дополнительным количеством водного раствора уксусной кислоты, выделяя продукт полностью.

Объединенные элюенты со стадии противоионного обмена фильтровали и лиофилизировали до сухости с получением ацетатной соли пексиганана.

Описание настоящего изобретения следует рассматривать с целью иллюстрации, а не каких-либо ограничений. Следует понимать, что конкретные варианты осуществления, показанные на чертежах, и терминология, которая была использована, служат для описания, а не каких-либо ограничений. Следует также понимать, что любая комбинация ингредиентов/терапевтических средств, описанных выше, входят в объем притязаний в соответствии с прилагаемой формулой изобретения. Следует также понимать, что все конкретные варианты осуществления инъекционного устройства входят в объем притязаний в соответствии с прилагаемой формулой изобретения. Различные модификации и вариации настоящего изобретения могут быть выполнены на основании представленного описания. Поэтому следует понимать, что очевидные модификации входят в объем притязаний в соответствии с прилагаемой формулой изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Состав для местного применения, содержащий пексиганан или его кислотно-аддитивную соль, включающий первое гидрофильное поверхностно-активное вещество, имеющее значение гидрофильнолипофильного баланса (ГЛБ) между 12 и 17, и второе гидрофобное поверхностно-активное вещество, имеющее значение ГЛБ между 3,5 и 5,5, при этом общее количество первого гидрофильного и второго гидрофобного поверхностно-активных веществ составляют от 1,5 до 5,0% (мас./мас.) состава, а соотношение массы первого и второго поверхностно-активных веществ таково, что ГЛБ смеси составляет между 12,5 и 14,5.
2. Состав для местного применения по п.1, отличающийся тем, что значение ГЛБ первого гидрофильного поверхностно-активного вещества составляет от 13 до 16.
3. Состав для местного применения по п.1, отличающийся тем, что значение ГЛБ первого гидрофильного поверхностно-активного вещества составляет 14,9.
4. Состав для местного применения по п.1, отличающийся тем, что значение ГЛБ второго гидрофильного поверхностно-активного вещества составляет 4,7.
5. Состав для местного применения по п.1, отличающийся тем, что общее количество первого гидрофильного и второго гидрофобного поверхностно-активных веществ составляет от 2 до 4,5% (мас./мас.) состава.
6. Состав для местного применения по п.1, отличающийся тем, что общее количество первого гидрофильного и второго гидрофобного поверхностно-активных веществ составляет около 3,5% (мас./мас.) состава.
7. Состав для местного применения по п.1, отличающийся тем, что ГЛБ смеси из первого гидрофильного и второго гидрофобного поверхностно-активных веществ составляет 13,6.
8. Состав для местного применения по п.1, в котором первое гидрофильное поверхностно-активное вещество представляет собой полиэтиленгликоль сорбитан моностеарат (Твин 60) и второе гидрофобное поверхностно-активное вещество представляет собой сорбитан стеарат (Спан 60).
9. Стабильный состав для местного применения, содержащий:

- 17 028002 (ί) 1,05% (мас./мас.) ацетата пексиганана, (ίί) 20,0% (мас./мас.) пропиленгликоля, (ίίί) 0,1% (мас./мас.) этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), (ΐν) 7,5% (мас./мас.) стеарилового спирта, (ν) 2,0% (мас./мас.) цетилового спирта, (νΐ) 1,0% (мас./мас.) изопропилмиристата, (νίί) 0,1% (мас./мас.) бутилированного гидрокситолуола (ВНТ), (νίίί) 0,43% (мас./мас.) Спан 60, (ΐχ) 3,07% (мас./мас.) Твин 60, (х) 0,1% (мас./мас.) полиэтиленгликоля сорбитан моноолеата (Твин 80) и (χΐ) (ц.к.а.Д.) натрий-ацетатный буфер.
10. Стабильный состав для местного применения, содержащий:

(ί) 1,05% (мас./мас.) ацетата пексиганана, (ίί) 20,0% (мас./мас.) пропиленгликоля, (ίίί) 0,1% (мас./мас.) ЭДТА, (ίν) 6,0% (мас./мас.) стеарилового спирта, (ν) 2,0% (мас./мас.) цетилового спирта, (νί) 3,0% (мас./мас.) изопропилмиристата, (νίί) 0,1% (мас./мас.) ВНТ, (νίίί) 0,17% (мас./мас.) Спан 60, (ίχ) 3,33% (мас./мас.) Твин 60, (х) 0,1% (мас./мас.) Твин 80 и (χί) (ц.к.а.Д.) натрий-ацетатный буфер.
11. Способ лечения кожи или раневой инфекции, включающий местное нанесение пациенту, нуждающемуся в этом, на место инфекции эффективного количества состава для местного применения по п.1.