KR101620077B1

KR101620077B1 - 보리지 추출물을 포함하는 대사질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101620077B1
Application number: KR1020130136877A
Authority: KR
Inventors: 정윤화; 김성수; 이지원; 노유헌; 김도희
Original assignee: 주식회사 파미니티
Priority date: 2013-11-12
Filing date: 2013-11-12
Publication date: 2016-05-12
Also published as: WO2015072674A1; CN105722519A; JP2016537422A; KR20150054439A; JP6220081B2

Abstract

본 발명은 보리지(Borage officinalis) 추출물을 포함하는 대사질환(metabolic disease) 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보리지 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만, 당뇨, 이상지방혈증(dyslipidemia), 지방간 및 인슐린 저항성 증후군(insulin resistance syndrome)으로 구성된 군으로부터 선택되는 대사질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물이다. 본 발명의 조성물은 우수한 지방세포 분화 억제 효과, 복강 지방 감소 효과 및 혈중 지질 개선 효과를 나타낸다.

Description

보리지 추출물을 포함하는 대사질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물{Composition for Improving, Preventing or Treating Metabolic Diseases comprising Extracts from Borage officinalis}

본 발명은 보리지 추출물을 포함하는 대사질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

대사질환이란 만성적인 대사 장애로 인하여 발생하는 당뇨병, 고혈압, 고지혈증, 비만, 관상 또는 동맥경화증과 같은 여러 가지 질환이 동시에 발생하는 질환을 일컫는 것으로서 1988년 Reaven(Reaven GM, Diabetes, 1988, 37:1595-1607)에 의해 처음으로 규명되었다. 대사질환은 인슐린저항성과 고혈압, 이상지질혈증을 특징으로 하고 있으며, 대부분 과체중이나 비만을 동반하고 있다. 대사질환은 또한 심혈관질환의 위험 인자이며, 모든 원인으로 인한 사망과 연관되어 있다고 보고되었다. 제 2형 당뇨병 환자의 경우 제 1형 당뇨병과 달리 대사질환의 유병률이 높다고 보고되고 있으며, 제 2형 당뇨병 환자가 대사질환을 동반할 때 사망률이 증가한다고 알려져 있다(Bonora E, et al. Diabet Med., 2004, 21:52-8; Ford ES, Diabetes Care., 2005, 28:1769-78; Alexander CM, et al. Diabetes, 2003, 52:1210-1214). 또한, 제 2형 당뇨병의 대혈관 및 미세혈관 합병증과 고혈압, 이상지질혈증 등의 대사질환의 구성요소들과의 연관성에 대한 연구들이 발표되어 있다(Mykkanen L, et al. Diabetologia., 1993, 36:553-559; Haffner SM, et al. Diabetes, 1992, 41:715-722).

대사질환의 가장 심각한 문제점은 당뇨병성 망막증, 신증, 신경병증, 고지혈증, 심혈관질환(뇌졸중, 협심증, 심근경색증, 말초혈관질환)과 같은 만성 합병증의 발생이다(Wolf SP, Br Med Bull., 1993, 49:642-652). 이러한 만성 합병증은 대부분 일단 발생 된 이후에는 비가역적인 진행과정을 밟게 되며 아직까지는 이러한 과정을 완전히 차단할 수 있는 방법이 없어서 적절한 치료가 병행되지 않을 경우, 심각한 증상을 초래하여 환자를 죽음에까지 이르게 한다. 그러므로 복합적 증상을 갖는 대사질환의 효과적인 관리 또는 치료를 위해서는 정상 혈당의 유지를 위한 혈당강하 효과와 동시에 신병증, 간병증, 고지혈증 등을 치료하는 효과를 갖는 것이 이상적이나, 아직까지 이러한 치료제는 개발되지 않았으며, 혈당강하제, 혈압강하제, 콜레스테롤 치료제 등을 각각 개별적으로 별도로 복용하고 있다.

보리지(Borage officinalis)는 고대 그리스나 로마시대부터 즐겨 애용한 허브로서 꽃이나 잎을 술에 담그었다가 마시면 모든 슬픔이나 시름을 씻어 주어서 기분을 즐겁고 명랑하게 해준다고 “쾌활초(cuphorosium)”라고 불렸다. 특히, 잎에는 미네랄, 칼슘, 칼륨 등이 많이 함유되어서 이뇨, 진통완화, 발한, 정화, 피부연화 작용 등이 뛰어나다. 최근 연구결과에 따르면, 보리지의 씨는 "감마리노렌산(힘)" 을 많이 함유하고 있어서 월경 전에 신경이 날카로워지는 조급증, 습진이나 피부병에 효과가 있다고 보고되고 있다. 잎과 꽃을 입욕제로 이용하면 피부를 부드럽고 청결하게 하는 것은 물론 심신의 긴장까지 풀어주어 최근에는 보리지 종자에서 기름을 짜내어 마사지 오일, 화장용 크림 등으로 이용하고 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 비만, 당뇨, 이상지방혈증(dyslipidemia), 지방간 및 인슐린 저항성 증후군(insulin resistance syndrome)과 같은 대사질환(metabolic disease)을 개선, 예방 또는 치료할 수 있는 천연물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 보리지(Borage officinalis) 추출물을 처리하는 경우에, 지방세포 분화 감소 효과, 복강 지방 감소 효과 및 혈중 지질 개선 효과를 규명함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 보리지(Borage officinalis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사질환(metabolic disease)의 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 비만, 당뇨, 이상지방혈증, 지방간 및 인슐린 저항성 증후군과 같은 대사질환을 개선, 예방 또는 치료할 수 있는 천연물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 보리지 추출물을 처리하는 경우에, 지방세포 분화 감소 효과, 복강 지방 감소 효과 및 혈중 지질 개선 효과를 규명하였다.

본 발명의 조성물에서 이용되는 보리지 추출물은 보리지에 추출용매를 처리하여 수득하는 경우에는, 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 바람직하게는, 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로서 적합한 것은, (i) 물, (ii) 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), (iii) 아세트산, (iv) DMFO(dimethyl-formamide) 및 (v) DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함한다. 비극성 용매로서 적합한 것은, 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF를 포함한다.

보다 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 추출용매는 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 부틸아세테이트, (h) 1,3-부틸렌글리콜, (i) 헥산 및 (j) 디에틸에테르를 포함한다. 가장 바람직하게는, 본 발명의 추출물은 물, 에탄올 또는 이의 조합을 보리지에 처리하여 수득한 것이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 보리지 추출물은 물, 에탄올 또는 이의 조합으로 추출한 보리지 추출물이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 ‘추출물’은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 보리지 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 보리지 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명에서 이용되는 보리지 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 명세서에서 용어 ‘유효성분으로 포함하는’이란 하기의 보리지 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명은 천연식물재료인 보리지로부터 추출한 조성물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 보리지 추출물이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.

본 발명의 보리지 추출물은 비만, 당뇨, 이상지방혈증, 지방간 및 인슐린 저항성 증후군으로 구성된 군으로부터 선택되는 대사질환을 개선, 예방 또는 치료할 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 이상지방혈증은 고지혈증이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 인슐린 저항성 증후군은 인슐린 저항성에 의한 비만, 고혈압, 동맥경화, 고지혈증, 고인슐린혈증 및 비알코올성 지방간으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 인슐린 저항성 증후군을 포함한다.

본 발명의 보리지 추출물은 지방세포의 분화를 감소시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 지방세포의 분화를 10-60%, 15-55% 또는 20-50% 감소시킨다.

본 발명의 보리지 추출물은 중성지방의 생성을 감소시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 중성지방을 20-60%, 30-50% 또는 35-45% 감소시킨다.

본 발명의 보리지 추출물은 아디포넥틴의 발현을 증가시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 아디포넥틴의 mRNA 발현을 대조군과 비교하여 30-70%, 40-60% 또는 45-55% 증가시킨다.

본 발명의 보리지 추출물은 렙틴의 발현을 감소시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 렙틴의 mRNA 발현을 대조군과 비교하여 30-70%, 40-60% 또는 45-55% 감소시킨다.

본 발명의 보리지 추출물은 복강 지방을 감소시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 복강지방의 생성을 대조군과 비교하여, 30-70%, 40-60% 또는 45-55% 감소시킨다.

상기 복강 지방은 내장지방과 동일한 의미로, 조직(예컨대, 위, 간, 장, 신장 등)의 사이 및 복부 내 위치한 지방을 의미한다. 복강 지방은 피부 아래의 피하지방(subcutaneous fat) 및 골격근에 위치하는 근간지방(intramuscular fat)과 차이를 갖는다. 허벅지 및 엉덩이와 같은 하체에 위치하는 지방은 피하이고, 조직과 일정한 간격을 두지 않는 반면, 복강 지방은 대개 내장 및 반유동성의 특징을 갖는다. 복강 지방은 장간막(mesenteric), 부고환 백색 지방 조직(epididymal white adipose tissue; EWAT) 및 신장 주변 지방 조직(perirenal depot)의 지방 저장소(adipose depot)로 구성된다. 복강 지방은 지방 조직으로 간주되는 반면, 피하 지방은 지방 조직으로 간주되지 않는다.

본 발명의 보리지 추출물은 혈중 총 콜레스테롤, 혈중 중성지방, 혈중 유리 지방산 및 혈당을 감소시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 대조군과 비교하여 각각 10-50%, 20-40% 또는 25-35%, 45-85%, 55-75% 또는 60-70%, 30-70%, 40-60% 또는 45-55%, 및 10-60%, 12-55% 또는 14-50% 감소시킨다.

본 발명의 보리지 추출물은 혈압 상승을 감소시킨다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 보리지 추출물은 2-20%, 3-18% 또는 5-15% 감소시킨다.

본 발명의 조성물은 식품 조성물, 기능성 식품 조성물 또는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명의 조성물은 식품 조성물로 제공될 수 있다. 본 발명의 보리지 추출물을 유효성분 포함하는 비만, 당뇨, 이상지방혈증, 지방간 및 인슐린 저항성 증후군으로 구성된 군으로부터 선택되는 대사질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 보리지 추출물 뿐 만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 보리지 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

본 발명의 보리지 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만, 당뇨, 이상지방혈증, 지방간 및 인슐린 저항성 증후군으로 구성된 군으로부터 선택되는 대사질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 기능성 식품 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물이 기능성 식품 조성물로 제조되는 경우, 식품 제조 시 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분으로서 보리지 추출물 이외에 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로 포함시킬 수 있다. 예를 들어, 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등); 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등); 올리고당; 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등); 및 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)을 포함한다. 향미제로서 천연 향미제(예컨대, 타우마린, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 보리지 추출물; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다. 본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 상술한 보리지 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.0001-1000 ㎎/day/kg 범위 내이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명은 보리지(Borage officinalis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만, 당뇨, 이상지방혈증(dyslipidemia), 지방간 및 인슐린 저항성 증후군(insulin resistance syndrome)으로 구성된 군으로부터 선택되는 대사질환(metabolic disease)의 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

(b) 본 발명의 조성물은 우수한 지방세포 분화 억제 효과, 복강 지방 감소 효과 및 혈중 지질 개선 효과를 나타낸다.

도 1은 보리지 추출물을 지방세포에 처리한 후 24시간, 48시간 및 72시간에 세포 생존율을 분석한 결과를 보여준다.
도 2는 보리지 추출물을 처리한 지방세포의 처리한 후 중성지방(Triacylglycerol) 함량을 분석한 결과를 보여준다.
도 3은 보리지 추출물을 처리한 지방세포의 처리한 후 아디포넥틴(adiponectin)의 mRNA 발현 정도를 분석한 결과를 보여준다.
도 4는 보리지 추출물을 처리한 지방세포의 처리한 후 렙틴(leptin)의 mRNA 발현 정도를 분석한 결과를 보여준다.
도 5는 만 19세 이상 60세 미만의 남녀 50명을 대상으로 25명씩 2군으로 나누어 위약(placebo) 또는 보리지 추출물을 섭취 전/후의 허리둘레를 나타낸다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 보리지 추출물의 제조

보리지의 잎, 꽃, 씨앗을 혼합하여 분쇄한 뒤, 10배 부피량의 정제수를 혼합하여 이들의 혼합용매로부터 80℃ 추출온도에서 6시간 5회 반복 열수추출하였다. 본 추출물을 여과하여 진공 농축한 후 1:2로 보리지와 덱스트린을 혼합한 후, 분무건조하여 보리지 추출물을 수득하였다.

실시예 2: 보리지 추출물의 활성 분석

본 발명의 조성물의 지방세포 분화 억제 및 세포내 비만관련 지질, 지단백질 및 호르몬의 측정을 통한 내장지방 감소 효과를 확인하였다.

전지방세포 3T3-L1 세포의 분화 억제 효과

전지방세포(preadipocyte)인 3T3-L1 세포는 지방세포의 대사과정을 연구하는데 널리 이용되고 있으며 본 발명에서도 세포 배양과정에서 조성물을 처리한 후, 세포의 분화가 적을수록 항비만 효과가 큰 것으로 나타냈다. 3T3-L1 세포를 배양액을 이용하여 5%로 이산화탄소가 공급되는 배양기에서 37℃로 배양하였다. 세포 배양액은 10% FBS(fetal bovine serum)과 항생제(antibiotics)가 포함된 Dulbecco’s Modified Eagle’s Media(DMEM)을 사용하였다. 2-3일 간격으로 배양된 세포 표면을 인산완충염용액(phosphate buffered saline, PBS)으로 세척한 후 0.5% 트립신(trypsin)을 넣고 처리하여 세포를 탈착시켜 계대 배양하였다. 세포는 분화유도물질인 인슐린(5 ㎍/㎖), 덱사메타손(dexamethasone; DEX, 0.25 μM) 및 MTX(1-methyl-3-methylxanthine, 0.5 mM)이 함유된 분화유도 배양액으로 교환하여 1-3일 동안 배양하여 지방세포로 분화를 유도하였다. 배양 3일 후 인슐린만 함유하는 배지로 2-3일 동안 배양한 후 인슐린을 제거한 배양액으로 교체하였다. 중성지방으로 유입되는 포도당 측정 실험이나 포도당 산화 실험시에는 10-12일째에 저농도(5 mM) 포도당을 함유한 배양액으로 배양하고 분화유도 후에 보리지 추출물을 처리하였다. 처리된 세포는 24hr, 48hr 및 72hr 후에 96웰에 붙어 있는 세포를 MTT 분석방법을 이용하여 세포 수를 측정한다. 다음, 보리지 추출물 처리 후 10일 동안 분화시킨 3T3-L1 세포에서 중성지방(triacylglycerol), 아디포넥틴(adiponectin) 및 렙틴(leptin)의 양을 각각 측정하였다.

결과는 평균과 표준편차로 나타내었으며 유의성 검증을 위해 통계처리는 Student's t-test를 이용하였으며, p<0.05 시에 유의한 것으로 간주하여 표시하였다. 결과를 도 1 내지 도 4에 나타내었다.

측정 결과, 도 1에서 확인할 수 있듯이 보리지 추출물을 처리한 경우, 24hr, 48hr 및 72hr에서 대조군에 비해 각각 약 21%, 35% 및 42% 세포수가 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 수준으로 감소하였다.

본 추출물 처리로 인한 중성지방의 변화는 도 2에서 확인할 수 있듯이, 보리지 추출물을 48시간 처리한 경우 대조군 대비 지방세포 내 중성지방의 양이 약 38% 가량 유의한 감소를 나타내었다. 또한 본 추출물을 처리 후 아디포넥틴의 mRNA 발현 양을 비교한 결과, 도 3에서 보듯이 아디포넥틴의 mRNA양에 있어서 보리지 추출물을 48시간 처리한 경우 대조군 대비 약 1.51배 정도의 mRNA 발현양 증가를 확인하였다.

본 추출물을 48시간 처리한 후 렙틴의 mRNA 발현양을 비교한 결과에서는 도 4에서 확인할 수 있듯이, 렙틴 mRNA의 양에 있어서 보리지 추출물을 처리한 경우 대조군 대비 약 0.49배의 감소 효과를 확인하였다.

실시예 3: 보리지 추출물의 내장비만 감소 효과 확인

C57BL/6J 마우스들을 대상으로 본 발명의 조성물을 섭취하게 하여 섭취 전후 내장지방 감소효과를 확인하여 내장지방 감소 효과를 확인하였다.

C57BL/6J 마우스 30마리(암컷, 10주령)에게 고지방/고당분 식품(Oriental Yeast Co. 제품)을 임의로 8 주 동안 부여하여 식이성 비만으로 유도하였다. 그 후 마우스들을 15마리씩 두 군으로 나누고, 정상식품(Oriental Yeast Co.)을 기본식으로 사용하여 비처리군(대조군) 및 제조된 보리지 추출물로 보축식이를 공급한 군으로 연구를 진행하였다. 두 군 모두에서, 마우스들이 4주 동안 자유 취식하도록 하였고, 4주 이후에 하룻밤 동안 절식시킨 후, 에테르 럼푼/케타민 마취하에 개복하여 복부대동맥으로부터 방혈시켜 마우스를 도살하였다. 다음, 자궁 주변 지방 및 신장 주변 지방을 적출하여 측량하였다. 이 두 부분의 지방 중량을 합하여 복강 내 지방량으로서 기록하고 그 결과를 표 1에 나타내었다.

결과에 따르면, 보리지 추출물을 한달 동안 지속적으로 섭취한 마우스에서 전체적인 체중의 감소뿐 아니라 복강내 지방량이 현저히 줄어든 것을 확인할 수 있었다. 따라서 고지방/고당분 식품의 섭취에 의해서 축적된 내장지방이 보리지 추출물을 함유하는 식품의 섭취에 의해 감소한다는 것을 보여주었다.

(n=15,평균±SD)	취식량 (g/day/mouse)	복강내 지방량/체중(%)
대조군	3.13±0.48	1.53±0.21
보리지 추출물 섭취군	3.04±0.64	0.79±0.09 *

실시예 4: 보리지 추출물의 당뇨병 예방 효과 확인

유전성 비만을 나타내고 2형 당뇨병이 진행되는 동물 모델인 KK-Ay 마우스를 이용하여 보리지 추출물의 당뇨병 예방 효과와 지질 대사 개선 효능을 확인하였다.

당뇨병 마우스(암컷, 8주령)를 8마리씩 두 군으로 나누고, 정상 식품을 기본식으로 사용하여, 대조군(비처리군)과 보리지 추출물 처리군을 만들었다. 모든 군에서 당뇨병 마우스들은 4주 동안 자유 취식하도록 하였다. 보리지 추출물은 최종 농도 0.3%로 정상 식품에 첨가하여 연구에 사용하였다.

급식기간동안, 마우스의 몸무게와 마우스의 꼬리 정맥으로부터 소량의 혈액을 매주 채취하고, 간이 혈당시험기기를 이용하여 혈당을 측정하여 표 2에 나타내었다.

급식기간 종료 후, 마우스들은 하룻밤 절식 시킨 후 럼푼/케타민 마취 하에 개복하여 복부 대동맥으로부터 채혈하고 간을 적출하여 측량하였다. 또한 이 혈액으로부터 혈청 중 총 콜레스테롤(Total-Cholesterol; T-CHO), 트리글리세라이드(Triglyceride; TG), 유리 지방산(Non-esterified Fatty Acid; NEFA), GOT(Glutamic Oxaloacetic Transaminase), GPT(Glutamic Pyruvate Transaminase), LAP(Liver Activator Protein), 콜린에스터라제(Cholinesterase; ChoE), 총 단백질 (TP-S) 및 알부민 (ALB-S)을 중앙대학교 병원 임상병리학과에 의뢰하여 분석하였다.

표 2는 마우스의 4주 동안 체중변화를 확인한 결과이다. 대조군에 비하여 보리지 추출물을 처리한 실험군의 경우 마우스들의 평균 체중은 크게 증가하지 않으면서 보리지 추출물 섭취 3주 후부터 4 g 이상의 현저한 감소가 확인되었다. 혈당을 나타낸 데이터에서는 보리지 추출물 섭취를 시작한 후 2주 후부터 대조군과 대비하여 현저한 혈당 감소를 보이기 시작하였다. 이는 시간이 지나면서 4주차에 서는 보리지 추출물을 4주 동안 섭취하였을 때, 대조군에 비하여 약 200 ㎎/㎗이상의 혈당 감소 효과를 나타내었다. 이는 추출물이 혈당상승을 효과적으로 저해한다는 것을 의미한다.

-	마우스 체중(g)		혈당치(㎎/㎗)
-	대조군	보리지 추출물섭취군	대조군	보리지 추출물섭취군
개시일	28.3±1.2	29.1±1.7	162±18	159±14
1주	36.1±1.8	35.3±1.1	401±86	332±72
2주	41.3±1.1	37.0±1.6	418±79	321±69 *
3주	44.0±1.4	39.9±0.8*	462±81	304±61 *
4주	46.7±0.9	41.1±1.2*	467±95	268±49 *

표 3은 간 중량 및 혈액 시험 데이터를 나타낸 결과이다. 결과에 의하면 우선 간 중량, GOT 및 GPT 등 독성과 관련되어 대조군과 보리지 추출물을 섭취한 분을 비교하면 통계적 차이를 보이지 않았다. 이는 보리지 추출물이 간독성을 전혀 갖지 않는 다는 것을 보여주는 결과이다. 한편, 보리지 추출물을 섭취한 당뇨병 마우스에서 T-CHO, TG 및 NEFA 모두에서 대조군과 비교하여 각각 약 29%, 65%, 49%의 통계학적으로 뚜렷한 감소를 확인하였다. 이는 보리지 추출물이 지질 대사 개선 작용을 통해서 고지질 혈증을 감소 시켜줄 수 있다는 것을 의미한다.

-	대조군	보리지 추출물섭취군
간 중량(g/100g 체중)	4.19±0.82	4.01±0.62
T-CHO(㎎/㎗)	172±18	121±11*
TG(㎎/㎗)	137±48	48±17*
NEFA(μEq/L)	3733±704	1905±575*
GOT(lU/L)	104±27	91±18
GPT(lU/L)	35.7±14.7	31.1±12.5
LAP(lU/L)	61.3±9.3	59.3±5.3
ChoE(lU/L)	158±18	159±15
TP-S(g/㎗)	4.83±0.36	5.03±0.42
ALB-S(g/㎗)	3.01±0.35	2.88±0.53

상기 결과들로부터, 보리지 추출물은 혈당 상승 저해와 체중 감소 뿐 아니라 지질 대사 개선작용을 모두 갖고 있다는 것을 보여준다.

실시예 5: 보리지 추출물의 고혈압 예방 효과

노화에 따라 고혈압이 유발되는 고혈압 동물 모델인 자발성 고혈압 랫트 (Spontaneously Hypertensive Rat; SHR)를 사용하여 보리지 추출물의 항고혈압 효능을 확인하였다.

SHR(수컷, 6주령)들을 각 군당 10마리씩 두 군으로 나누고, 정상적인 기본식이를 섭취하는 대조군과 보리지 추출물을 함유하는 식품을 섭취하는 군으로 나누어 실험을 진행하였다. 고혈압을 유발하기 위하여 대조군은 3 ㎖/㎏/일 프로필렌 글리콜을 처리하고 보리지 추출물군은 30 ㎎/3 ㎖/㎏/일의 투약량으로 프로필렌 글리콜에 보리지 추출물을 혼합하여 섭취시켰다. 모두 4주간 혈압 저하 효능을 경구 투여를 통해서 확인했다. 나머지 취식과 물은 자유롭게 섭취하도록 하였다.

처리 개시일 바로 전날 및 처리 후 7일, 14일, 21일 및 28일에 비관혈식 자동혈압 측정장치를 사용하여 꼬리 동맥에서 혈압을 측정하였다. 혈압 측정은 각 시료 투여 전에 수행하였다. 혈압 데이터를 표 4에 나타내었다. 투여 개시 전, 혈압은 115 mmHg로 각 군은 모두 정상 수치에 해당되었다. 대조군의 경우 처리 후 7일에 혈압이 상승되기 시작하여 고혈압이 나타나기 시작하였다. 하지만 보리지 추출물을 처리한 경우 대조군과 달리 혈압 상승을 억제하는 것이 관찰되었으며 14일, 21일 및 28일 째는 대조군과 현저한 차이를 나타내기 시작해서 투여 후 28일에는 약 12% 정도 혈압 저하가 관찰 되었다.

-	대조군	보리지 추출물섭취군
투여 전	115±3.1	118±2.7
1주	137±2.8	126±2.1*
2주	148±5.1	131±3.6*
3주	168±4.2	143±6.8*
4주	167±3.8	147±5.1*

실시예 6: 인체시험을 통한 체중 조절 및 비만 개선 효능

남녀에게 본 발명의 조성물을 섭취하게 하여 섭취 전후 체중 변화 및 체지방 측정을 통해서 체중 조절 및 비만 개선 효과를 확인하였다.

연구 대상 및 기간

본 검사에 동의한 만 19세 이상 60세 미만의 남녀 50명(남성 22명, 여성 28명)을 위약을 섭취한 대조군(placebo)과 본 추출물의 혼합물(8:2 혼합비)을 섭취한 실험군으로 각 25명씩 임의로 분류하여 4주간 위약 또는 실험약을 일일 400 mg 씩 섭취하도록 하였다. 피험자는 체질량지수(Body-Mass Index; BMI)가 23 이상인 사람 또는 복부둘레 남자 90㎝, 여자 80㎝ 이상인 사람을 선정하였다. 섭취 전과 후에 신장, 체중, 체질량지수, 허리둘레, 혈압, 맥박, 신체조성(체지방율 및 제지방량-임피던스법) 및 혈액검사를 통해서 HDL-콜레스테롤, 중성지방 및 총 콜레스테롤 등을 측정하여 보리지 조성물의 섭취로 대사성 질환 위험 인자 증후군의 예방 및 개선 효능 평가를 실시하였다.

체질량 지수( Body - Mass Index )

본 발명의 보리지 추출물 섭취군과 위약군(Placebo)의 BMI(체질량지수) 결과는 표 5에 나타내었으며, 결과값은 평균과 표준편차로 기입하였고, 통계처리는 Student's t-test를 이용하였고, p<0.05 시에 유의한 것으로 간주하여 표시하였다.

시험 결과, 대조군의 BMI가 섭취 전후 크게 차이가 없는 반면, 본 조성물 섭취군은 섭취 전에 비해 BMI가 약 2.4 ㎏/㎡로 유의한 감소를 나타내었다. 이로써 본 발명의 조성물이 비만 혹은 과체중을 조절 혹은 개선시킬 수 있음을 체질량지수의 감소를 통해서 나타내었다.

BMI(kg/m²)	섭취 전	섭취 후	P 값
실험군 (보리지추출물)	28.1 ± 0.56	25.73 ± 0.51	0.000 *
위약군(Placebo)	28.9 ± 0.73	27.83 ± 0.62	0.91

허리둘레

본 발명의 보리지 추출물 섭취군과 위약군(Placebo)의 허리둘레를 도 5에 나타내었으며, 결과 값은 평균과 표준편차로 기입하였고, 통계처리는 Student's t-test를 이용하였으며, p<0.05 시에 유의한 것으로 간주하여 표시하였다.

시험 결과, 대조군의 허리둘레가 섭취 전/후 크게 차이가 없는 반면, 보리지 추출물의 섭취군은 섭취 전에 비해 허리둘레가 약 3.98 ㎝ 가량 유의한 감소가 관찰되었다. 이로써 본 발명의 조성물이 복부 지방 증가를 예방하고 개선시킬 수 있음을 허리둘레 감소를 통해서 타나내었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

보리지(Borage officinalis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 당뇨의 개선 또는 예방용 조성물.
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보리지(Borage officinalis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 당뇨의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
보리지(Borage officinalis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 당뇨 개선용 식품 조성물.