KR101584698B1 - Ｌ형 젖산 광학순도가 향상된 락토바실러스 파라카제이 변이주 및 그의 용도 - Google Patents

Ｌ형 젖산 광학순도가 향상된 락토바실러스 파라카제이 변이주 및 그의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 L형 젖산 발효 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 파라카제이 변이주 및 이를 이용한 L형 젖산을 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 을 모주를 이용하여 젖산 발효한 경우와 젖산의 생산성 및 생산수율은 유사하면서도, 광학순도는 98% 이상으로 증가시킬 수 있다. 또한, 본 발명의 변이주를 포함하는 젖산 생산용 조성물은 질소원으로 저가의 옥수수침지액의 사용이 가능하여, 발효원가를 저감시킬 수 있는 이점이 있다.

Description

Ｌ형 젖산 광학순도가 향상된 락토바실러스 파라카제이 변이주 및 그의 용도{Mutants of Lactobacillus paracasei Producing L-Lactic Acid with Improved Optical Purity and Their Uses}
본 발명은 광학순도가 향상된 L형 젖산을 생산하는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 변이주 및 이를 이용한 광학순도가 향상된 L형 젖산 생산방법에 관한 것이다.
젖산(lactic acid)은 대표적인 C3 유기산으로서 다른 유기산보다 자연계에 존재하는 양이 광범위하고 특히 동물의 대사경로에서 많이 생산되며 격렬한 운동 후, 근육에 축적되기도 한다. 또한 미생물에 의하여 생산되는 젖산은 과거부터 현재까지 다양한 종류의 발효식품 제조에 이용되고 있다. 젖산의 용도는 식품에만 제한되지 않고 화장품, 의약품, 화공약품, 금속, 직물 등 다양한 산업분야에서 사용되고 있다.
젖산은 거울이성질체 관계인 L형 및 D형의 형태로 존재하고, 자연계에는 L형의 비율이 높으며, 식음료용 등으로 사용되는 것도 L형 젖산이고, D형의 경우 체내에서의 대사가 용이하지 못하여 식품용으로 적합하지 못하다.
최근 친환경적인 생분해성 바이오플라스틱 소재가 각광받고 있으며, 이중 PLA(폴리락트산, Polylactic acid)의 수요가 증가하고 있고 특히 생체조직과 접촉률이 높은 식품포장재, 유아용 장난감 및 핸드폰 외장재 등 그 용도가 더욱 광범위해지고 있으며 최근 들어 자동차내장재로 사용하기 위하여 그 수요가 더욱 높아지고 있다. PLA 중합체의 높은 강도와 용융점을 위하여 광학순도가 높은 L형 및 D형 젖산 단량체의 생산이 중요한 요인으로 꼽힌다.
이처럼 PLA 중합을 위한 고순도 락타이드(lactide) 합성에 사용되는 L 또는 D형 젖산은 각 이성질체가 서로 혼합되지 않은 광학적으로 순수한(optically pure) L형 또는 D형 젖산이어야만 한다. 젖산을 생산하는 방법에는 화학적 합성법과 미생물에 의한 생물공학적 방법이 있다. 화학 합성법은 발효에 의한 생산보다 용이하게 생산할 수 있는 장점이 있으나 이 방법으로 생산된 젖산은 L형 및 D형 젖산이 섞인 라세믹 혼합물로 존재하고 이를 이용하여 락타이드를 제조하였을 때, 용융점이 낮아 PLA용으로 부적합하다. 반면 발효공정에 의한 젖산 생산은 합성법에 비해 목표량을 수득하기까지 시간이 많이 걸리나 각 이성질체의 젖산을 생산하는 균주만 확보할 수 있다면 D형 젖산 또는 L형 젖산을 선택적으로 생산할 수 있어 락타이드 제조를 위해서는 광학적으로 순수한 젖산을 생산하는 균주에 의한 발효가 필수적이다.
PLA는 합성소재가 아닌 자연계에서 분해되는 친환경소재로서 각광받고 있으나 기존의 PET계열 플라스틱에 비해 강도 및 내열성이 약하다는 단점이 있고 이는 PLLA와 PDLA의 스테레오컴플렉스(stereocomplex)화를 통하여 강도와 용융점을 개선할 수 있다. 이와 같은 이유로 인하여 순도가 높은 PLLA의 중요성이 강조되고 이러한 PLLA의 중합을 위하여 반드시 광학순도가 100% 수준에 이르는 젖산 단량체가 필요한 것이다. 이는 미생물 발효에 의해서 가능하지만 자연 상태의 야생형 균주로는 광학순도가 95% 이상인 젖산을 생산하기도 어려운 것이고 이에 따라 유산균 및 효모의 유전자 조작을 통한 균주개발이 이루어졌으나 상업적으로 사용한 예는 거의 전무한 실정이다. 락토바실러스 속(Lactobacillus) 등의 유산균이 효모나 대장균 등 다른 속의 미생물보다 젖산의 생산능이 우수하나 유전공학(genetic engineering)을 위한 수단(tool)이 부족하여 대사공학에 의한 균주개발이 그리 용이하지 않을 뿐 아니라, 성공적으로 제조된다 하더라도 형질복귀 등 산업적으로 사용하기에 어려운 점이 있다. 이에 대한 대안으로 변이원(mutagen)인 약제를 처리하여 무작위 돌연변이(random mutagenesis)를 유발하여 변이주를 확보하면 산업적으로 유용한 균주를 획득할 수 있다.
이에 본 발명에서는 젖산 생산성이 우수한 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) KCTC 13169 균주를 변이처리하여 모주보다 L형 광학순도가 우수한 변이주 분리를 시도하였고, 고광학순도의 L형 젖산을 생산하는 균주를 분리하여 산업적 스케일의 락타이드 제조용 젖산을 생산하고자 한다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 PLA 중합을 위한 산업적 스케일의 락타이드 제조용 젖산을 생산하는데 있어, 이의 원료가 되는 고광학순도의 L형 젖산을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) KCTC 13169 균주를 변이처리하여 분리한 변이주가 모주보다 광학순도가 우수한 L형 젖산을 생산한다는 사실을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 L형 젖산 발효 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 파라카제이 변이주를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명의 변이주를 이용하여 L형 젖산을 생산하는 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 방법에 의해 생산된 L형 젖산을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 변이주를 포함하는 젖산 생산용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 L형 젖산 발효 활성을 갖는 락토바실러스 파라카제이 DSL1250(기탁번호 KCTC 18234P) 변이주를 제공한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 변이주를 배양하는 단계를 포함하는 L형 젖산을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명자들은 PLA 중합을 위한 산업적 스케일의 락타이드 제조용 젖산을 생산하는데 있어, 이의 원료가 되는 고광학순도의 L형 젖산을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 락토바실러스 파라카제이 KCTC 13169 균주를 변이처리하여 분리한 변이주가 모주보다 광학순도가 우수한 L형 젖산을 생산한다는 사실을 확인하였다.
따라서 본 발명은 L형 젖산 발효 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 파라카제이 DSL1250 변이주 및 이를 이용하여 L형 젖산을 생산하는 방법에 관한 것이다. 상기 락토바실러스 파라카제이 DSL1250 변이주는 기탁기관 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2012년 12월 17일자로 기탁하고, 기탁번호 KCTC 18234P를 부여받았다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 광학 순도가 98-100%이다. 본 명세서에서 용어 "광학적 순도"는 이성질체의 혼합물을 구성하는 샘플의 선광 중 관찰되는 단일 순수 이성질체의 선광 비율을 말한다. 분자 모양이 거울 대칭이 되는 분자(D 형 및 L 형)를 광학 이성질체라고 하며, 결정구조가 선광을 가지는 경우, 상기 광학 이성질체는 서로 다른 선광을 보인다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 광학 순도가 98.5-100%이다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 광학 순도가 99-100%이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산수율이 94-100%이다. 본 명세서의 용어 "생산수율"은 탄소원 및 에너지원으로 사용된 포도당에 대한 젖산 생산량(중량/중량) 비율을 의미한다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산수율이 96-99%이다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산수율이 97-98.5%이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산성이 2.0-7.0 g/L/h이다. 본 명세서의 용어 "생산성"은 시간 당 생성되는 젖산의 양(g/L)을 의미한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산성이 2.5-6.5 g/L/h이다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산성이 2.7-6.0 g/L/h이다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산성이 2.5-3.5 g/L/h 또는 4.0-6.5이다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 L형 젖산은 생산성이 2.7-3.2 g/L/h 또는 4.5-6.0이다.
본 명세서의 용어 "젖산의 생산" 및 "발효"는 탄소원 및 에너지원으로 사용된 포도당이 젖산으로 전환되는 동일한 과정을 서로 공유하고 있기 때문에 실질적으로는 동일한 의미로 취급될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 배양은 35-42℃에서 실시한다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 배양은 36-41℃에서 실시한다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 배양은 38-41℃에서 실시한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 배양은 교반속도 50-200 rpm에서 실시한다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 교반속도 50-170 rpm에서 실시한다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 배양은 50-150에서 실시한다. 본 발명의 어떠한 구현예에 따르면, 본 발명의 배양은 70-120에서 실시한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 방법에 의하여 제조된 젖산을 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 변이주를 포함하는 젖산 생산용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 탄소원, 질소원 및 무기염류로 이루어진 군으로부터 선택되는 최소 1 종의 첨가물을 포함한다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 조성물은 탄소원 및 질소원을 포함한다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 상기 조성물은 탄소원, 질소원 및 무기염류를 모두 포함한다.
본 발명의 조성물의 탄소원으로는 예를 들어, 글루코오스, 수크로오스, 덱스트린, 글리세롤, 녹말 등이 사용될 수 있고, 질소원으로는 펩톤, 육류 추출물, 효모 추출물, 건조된 효모, 대두 케이크, 우레아, 티오우레아, 암모늄염, 나이트레이트 및 기타 유기 또는 무기 질소-함유 화합물이 사용될 수 있으나, 이러한 성분에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 상기 질소원은 옥수수침지액으로, 이는 펩톤 및 효모 추출물 등의 질소원보다 저가인바 발효원가의 절감이 가능하다.
본 발명의 조성물에 포함되는 무기염류로는 마그네슘, 망간, 포타슘, 칼슘, 철 등의 포스페이트, 나이트레이트, 카보네이트, 클로라이드 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
상기 탄소원, 질소원 및 무기염류의 성분 이외에 아미노산, 비타민, 핵산 및 그와 관련된 화합물들이 배지에 추가적으로 첨가될 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 L형 젖산 발효 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 파라카제이 변이주 및 이를 이용하여 L형 젖산을 생산하는 방법을 제공한다.
(b) 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 생산된 L형 젖산을 제공한다.
(c) 본 발명의 방법에 의해 생산된 L형 젖산은 모주를 이용하여 젖산 발효 한 경우와 젖산의 생산성 및 생산수율은 유사하면서도, 광학순도는 98% 이상으로 증가시키는 효과가 있다.
(d) 본 발명의 변이주를 포함하는 젖산 생산용 조성물은 질소원으로 저가의 옥수수침지액의 사용이 가능하여, 발효원가를 저감시킬 수 있는 이점이 있다.
도 1은 1차 스크리닝 분리균주들 간의 젖산농도를 비교한 결과를 나타낸다(24시간 배양, 카이랄 컬럼 사용).
도 2a 및 2b는 5L 발효조에서의 L형 젖산 발효결과를 나타낸다(-■- : DSLA6912, -◆- : DSL1250).
도 3a 및 3b는 5L 발효조에서의 L형 젖산 발효결과를 나타낸다(-■- : DSLA6912, -▲- : DSL1250).
도 4a 및 4b는 5L 발효조에서의 L형 젖산 발효결과를 나타낸다(-■- : DSL1250, -▲- : DSLA6912/pHPS-ldh9).
도 5a 및 5b는 50L 발효조에서의 L형 젖산 발효결과를 나타낸다(-▲-: DSLA6912, -■-: DSL1250).
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.
실시예 1: 야생주에 변이약제를 처리하여 변이주를 제조하는 방법
본 발명에서 락토바실러스 파라카제이 변이주를 제조하기 위한 방법으로 변이약제 NMNG(N-methyl-N'-nitrosoguanidine)를 사용하였다. 보다 상세하게 우선 락토바실러스 파라카세이 야생주 균주를 OD600=8-10까지 37℃, 150 rpm 조건에서 배양한 후, 원심분리하여 집균한 것을 0.85% 생리식염수로 2회 수세하였다. 이를 포타슘 포스페이트 완충용액(pH 6.0)으로 다시 1회 세척하고, 3 ml의 동일 완충용액에 현탁한 것을 NMNG가 최종 400 μg/ml의 농도가 되도록 첨가하여 30-45분간 37℃ , 150 rpm 조건에서 배양한 후, 포타슘 포스페이트 완충용액으로 3회 수세하여 최종 3ml 동일 완충용액에 현탁시켰다. 이후 0.85% 생리식염수에 삼단희석법으로 희석하여 10-5, 10-6, 10-7 농도로 현탁한 것을 MRS(deMan Rogosa Sharpe)평판배지에 도말하여 37℃ 인큐베이터에서 48시간 이상 배양하여 콜로니의 형성을 관찰하였다.
실시예 2: 변이주 1차 스크리닝
본 발명에서 L형 젖산 생산능이 우수한 변이주를 분리하기 위하여 MRS 평판배지에 형성된 변이주 중에서 106개의 콜로니를 화염멸균된 이쑤시개로 취하여 12%의 포도당과 2.5%의 젖산이 함유된 MRS 평판배지에 계대하여 48시간 내 집락이 형성된 31개의 변이주를 선발하였다(표 1). 이들을 MRS 배지에 접종, 18시간 동안 종배양한 뒤, 이를 표 2의 조성으로 이루어진 배양 배지에 접종하여 24시간 배양한 후, 분리주의 생육과 젖산의 농도를 관찰하였다.
Figure 112015041927182-pat00001
Figure 112015041927182-pat00002
실시예 3: 변이처리 선별주 2차 스크리닝
실시예 2에서 선발한 31주의 분리균주 가운데 젖산 생산성이 우수한 18주를 1차 분리주로 선발하였다. 이들 선발균주의 광학순도를 확인하기 위하여 MRS 배지에서 18시간 이상 배양한 각 분리주의 종배양액 20 ml을 표 3의 조성으로 이루어진 배지가 180 ml 들어있는 삼각플라스크에 접종하여 37℃, 150 rpm조건에서 24시간 배양하였다.
Figure 112015041927182-pat00003
L형 젖산 양 분석
2차 스크리닝 결과, 선발된 18주의 변이주 배양액을 카이랄 컬럼(chiral column, MCI-GEL CRS10W, Mitsubishi)을 이용하여 HPLC 상에서 L형 젖산의 양을 분석하였다. 분석조건은 2 mM 황산구리용액을 이동상으로 25℃에서 0.4 ml/min의 유속으로 흘려 254 nm에서 분석하였다.
L형 젖산의 광학순도 분석
L형 젖산의 광학순도는 아래 분석식 1에 의해 정량하였다.
분석식 1
100*(L형 젖산)-(D형 젖산)/(L형 젖산)+(D형 젖산)
실시예 4: 변이처리 선별주 3차 스크리닝 및 최종 분리주 선발
실시예 3에서 선발한 18주의 분리균주 가운데 24시간동안 배양하여 L형 젖산의 함량이 높은 균주 3주를 확인하였고, 이들을 다시 상기 표 3의 조성으로 이루어진 배지에서 48시간 배양하였다.
L형 젖산의 양 및 광학순도 분석
DL형 젖산 분석 키트(메가자임, 아일랜드)를 사용하여 L형 및 D형 젖산을 정량하고 광학순도를 계산하였다. 결과는 표 4와 같이 L50의 광학순도가 99.4%에 이르는 수준임을 확인할 수 있었는바, L50을 최종 분리주로 선발하였다.
상기 최종 분리주는 16S rRNA 시퀀싱을 통해 균주를 동정하였다. 동정 결과, 상기 최종 분리주의 16S rRNA(서열목록 제1서열) 서열이 종래의 락토바실러스 파라카제이 MH49와 99.9%의 높은 상동성을 보였는바 락토바실러스 파라카제이로 동정하였다. 이를 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) DSL1250으로 명명하고, 기탁기관 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2012년 12월 17일자로 기탁하고, 기탁번호 KCTC 18234P를 부여받았다
Figure 112015041927182-pat00004
실시예 5: 균주 DSLA1250 및 기존 균주들 간 젖산 발효능 비교를 위한 플라스크(flask) 배양
본 발명에서 분리한 DSL1250과 기존 L형 젖산 생산균주의 젖산 생산성을 비교하기 위하여 플라스크 배양을 실시하였다. 본 배양 접종을 위한 종배양은 MRS(deMan Rogosa Sharpe) 평판배지 상에서 48시간 자란 콜로니 한 백금이를 30 ml MRS 배지가 든 100 ml 삼각플라스크에 접종하여 37℃, 150 rpm 조건에서 16-20시간 배양하였다. 표 3의 조성으로 이루어진 배지 180 ml가 들어있는 500 ml 삼각플라스크에 접종하여 37℃, 150 rpm조건에서 48시간 배양하였다.
Figure 112015041927182-pat00005
실시예 6: L형 젖산발효 5L 발효조(jar fermenter) 스케일 업(배양온도 37℃)
광학순도가 높은 L형 젖산을 발효조 규모 생산으로 스케일 업(scale up)하기 위하여 표 6의 조성으로 이루어진 배지를 제조하였다. 종배양액을 본 발효의 10%가 되도록 접종하였고 배양액의 pH는 암모니아수로 6.0을 유지시켰다. 발효온도는 37℃로, 교반속도는 100 rpm으로 설정하였으며, 혐기발효조건을 유지하기 위하여 공기(air)는 공급하지 않았다. 또한 별도의 언급이 없는 한 종배양액은 메인 배양액의 10 (v/v)%가 되도록 접종하였다. DSL 1250 및 DSLA 6912의 5L 발효결과는 도 2 및 표 7에 나타내었다.
Figure 112015041927182-pat00006
Figure 112015041927182-pat00007
실시예 7: L형 젖산발효 5L 발효조 배양(배양온도 40℃)
락토바실러스 파라카제이 균주는 37℃가 최적의 배양온도로 알려져 있으나 40℃의 온도에서도 생육이 가능하다. 5L 발효조 배양온도를 40℃로 설정하여 배양하여 도 3과 같은 젖산발효결과를 확인하였다.
Figure 112015041927182-pat00008
실시예 8: DSL1250 5L 발효조 젖산 생산성
변이주 DSL1250(기탁번호 KCTC 18234P)의 5L 발효조에서의 발효 초반[추가당(포도당)공급 전] 생육과 젖산 생산성은 표 9과 같으며, 따라서 배양 20시간 내 100 g/L 이상의 젖산을 생산함을 확인할 수 있었다. 이 수준은 기존 사용균주인 DSLA 6912와 비슷한 발효 성적이나, L형 젖산의 광학순도를 비교해보았을 때, DSL1250의 우수함을 확인할 수 있었다(표 10). 배양조건은 표 3의 배지에서 pH 6.0, 배양온도 40℃, 100 rpm 및 무통기 조건으로 배양하였다.
Figure 112015041927182-pat00009
Figure 112015041927182-pat00010
실시예 9: L-ldh 유전자 과발현 균주(락토바실러스 파라카제이 DSLA6912/pHPS-ldh9)와 DSL1250 균주 광학순도 비교
락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 유래 L-락트산탈수소효소(L-lactate dehydrogenase) 유전자(ldhL)를 과발현시킨 재조합 락토바실러스 파라카제이 균주와 락토바실러스 파라카제이 DSL1250 균주의 L형 젖산 생산성을 비교하기 위하여 표 6의 배지에서 배양하였다. 배양온도 40℃, 교반속도 100 rpm, 무통기조건 및 pH는 암모니아수로 6.0을 유지하였다. 락토바실러스 파라카제이 DSLA6912/pHPS-ldh9 및 DSL1250 균주의 젖산발효에 의한 L형 젖산의 광학순도는 표 11과 같다.
Figure 112015041927182-pat00011
실시예 10: 50L 발효조 스케일 업
L형 젖산발효를 50L 규모로 스케일 업 하였다. 배지조건은 5L 발효조건과 유사하게 표 6의 배지를 사용하였고 배양온도 40℃, 교반속도 80 rpm, 무통기조건 및 pH는 암모니아수로 6.0을 유지하였다. 또한 추가당은 65% 포도당을 150 ml씩 2회, 펄스(pulse) 방식으로 공급하였다. 락토바실러스 파라카제이 DSLA6912 및 DSL1250 균주의 젖산발효에 의한 L형 젖산의 광학순도는 표 12와 같다.
Figure 112015041927182-pat00012
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
한국생명공학연구원 KCTC18234P 20121217
<110> DAESANG CORPORATION <120> Mutants of Lactobacillus paracasei Producing L-Lactic Acid with Improved Optical Purity and Their Uses <130> PN120572D <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1447 <212> RNA <213> Lactobacillus paracasei DSL 1250 <400> 1 cctatcatgc agtcgaacga gttctcgttg atgatcggtg cttgcaccga gattcaacat 60 ggaacgagtg gcggacgggt gagtaacacg tgggtaacct gcccttaagt gggggataac 120 atttggaaac agatgctaat accgcataga tccaagaacc gcatggttct tggctgaaag 180 atggcgtaag ctatcgcttt tggatggacc cgcggcgtat tagctagttg gtgaggtaat 240 ggctcaccaa ggcgatgata cgtagccgaa ctgagaggtt gatcggccac attgggactg 300 agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tggacgcaag 360 tctgatggag caacgccgcg tgagtgaaga aggctttcgg gtcgtaaaac tctgttgttg 420 gagaagaatg gtcggcagag taactgttgt cggcgtgacg gtatccaacc agaaagccac 480 ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttat ccggatttat 540 tgggcgtaaa gcgagcgcag gcggtttttt aagtctgatg tgaaagccct cggcttaacc 600 gaggaagcgc atcggaaact gggaaacttg agtgcagaag aggacagtgg aactccatgt 660 gtagcggtga aatgcgtaga tatatggaag aacaccagtg gcgaaggcgg ctgtctggtc 720 tgtaactgac gctgaggctc gaaagcatgg gtagcgaaca ggattagata ccctggtagt 780 ccatgccgta aacgatgaat gctaggtgtt ggagggtttc cgcccttcag tgccgcagct 840 aacgcattaa gcattccgcc tggggagtac gaccgcaagg ttgaaactca aaggaattga 900 cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta 960 ccaggtcttg acatcttttg atcacctgag agatcaggtt tccccttcgg gggcaaaatg 1020 acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 1080 gagcgcaacc cttatgacta gttgccagca tttagttggg cactctagta agactgccgg 1140 tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct 1200 acacacgtgc tacaatggat ggtacaacga gttgcgagac cgcgaggtca agctaatctc 1260 ttaaagccat tctcagttcg gactgtaggc tgcaactcgc ctacacgaag tcggaatcgc 1320 tagtaatcgc ggatcagcac gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc 1380 gtcacaccat gagagtttgt aacacccgaa gccggtggcg taaccctttt agggagcgag 1440 cctctaa 1447

Claims (6)

  1. 광학 순도가 98-99.8%인 L형 젖산의 생산능을 갖는 락토바실러스 파라카제이 DSL1250(기탁번호 KCTC 18234P) 변이주.
  2. 제 1 항의 변이주를 배양하는 단계를 포함하는 L형 젖산의 제조방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 L형 젖산은 생산수율이 97-98.5%인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 2 항에 있어서, 상기 L형 젖산은 생산성이 2.0-7.0 g/L/h인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 2 항에 있어서, 상기 배양은 35-42℃에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항의 변이주를 포함하는 젖산 생산용 조성물.
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Journal of Bioscience and Bioengineering. 2012.05.10., VOL. 114, No. 2, pp. 155-159.

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