KR101564303B1 - 니코틴성 아세틸콜린 수용체 조절제로서의 삼치환된 1,2,4-트리아졸 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 하기 화학식 (I)의 1-아릴-3-아닐린-5-알킬-1,2,4-트리아졸 유도체 및 유사체 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 이들의 제조 방법, 이를 포함하는 약제학적 조성물 및 치료에 있어서 이들의 용도에 관한 것이다:
본 발명은 특히 니코틴성 아세틸콜린 수용체의 강력한 양성 알로스테릭(allosteric) 조절제, 즉 니코틴성 수용체 작용제의 효능을 증가시킬 수 있는 양성 알로스테릭 조절제에 관한 것이다.
본 발명은 특히 니코틴성 아세틸콜린 수용체의 강력한 양성 알로스테릭(allosteric) 조절제, 즉 니코틴성 수용체 작용제의 효능을 증가시킬 수 있는 양성 알로스테릭 조절제에 관한 것이다.
Description
본 발명은 1-아릴-3-아닐린-5-알킬-1,2,4-트리아졸 유도체 및 그의 약제학적으로 허용되는 염, 이들의 제조 방법, 이를 포함하는 약제학적 조성물 및 치료에 있어서 이들의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 특히 니코틴성 아세틸콜린 수용체의 강력한 양성 알로스테릭(allosteric) 조절제, 즉 니코틴성 수용체 작용제의 효능을 증가시킬 수 있는 양성 알로스테릭 조절제에 관한 것이다.
배경 선행기술
EP 1044970호는 뉴로펩티드 Y 수용체 리간드로서 3-알킬아미노-1,2,4-트리아졸을 기술하였다. Makara G.M. 등에 의한 논문 (Organic Letters (2002) Vol.4 (10); 1751-1754)에는 3-알킬아미노-1,2,4-트리아졸의 고체-상 합성이 기술되었고, N-(4-메톡시페닐)-1-메틸-5-(4-메틸페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 [CAS No: 433710-55-5]의 합성이 예시되었으나 성공하지 못했고, 이 화합물의 강력한 치료적 적용, 특히 α7 니코틴 아세틸콜린 수용체의 양성 알로스테릭 조절제로서 그의 용도에 대하여는 기재되어 있지 않다.
문헌 [Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 11 (2001) 3165-3168]에서 Chen Chen 등은 1-알킬-3-아미노-5-아릴-1H-[1,2,4]트리아졸, 특히 N-(2-메톡시페닐)-1-메틸-5-(2,4-디클로로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민의 합성 및 코티코트로핀-방출 인자-1 (CRP1) 길항제로서의 그의 용도를 기술하였다.
WO-2001/44207호에는 CRF 수용체에 대해 친화성을 가지는 유사 화합물이 기술되었다.
WO-2007/118903호에는 신경계, 퇴행성 및 정신과 질환에 유용한 니코틴성 아세틸콜린 수용체의 양성 조절제로서의 3-아닐린-5-아릴-1,2,4-트리아졸이 기술되었다.
발명의 배경
콜린성 수용체는 일반적으로 내인성 신경전달물질 아세틸콜린 (ACh)과 결합함으로써 이온 채널의 개방을 유도한다. 포유동물 중추신경계 중의 ACh 수용체는 각각 무스카린 및 니코틴의 작용제 활성에 기초하여 무스카린성 아형 (mAChR) 및 니코틴성 아형 (nAChR)으로 분류될 수 있다. 니코틴성 아세틸콜린 수용체는 5개의 서브유닛을 함유하는 리간드-개폐형(ligand-gated) 이온 채널이다. nAChR 서브유닛 유전자 패밀리의 구성원은, 이들의 아미노산 서열에 기초하여, 소위 β 서브유닛을 함유하는 제1 군 및 α 서브유닛을 함유하는 제2 군으로 구성된 2개의 군으로 분류되고 있다. 3종의 α 서브유닛인, α7, α8 및 α9는 단독으로 발현되었을 때, 기능성 수용체를 형성하는 것으로 나타났고, 따라서 동종올리고머성 오량체 수용체를 형성할 것으로 추측된다.
적어도 휴지 상태, 활성화 상태 및 수용체가 작용제에 대해 무감각해지는 과정인 "탈감작화" 폐쇄 채널 상태를 포함하는 nAChR의 알로스테릭 전이 상태 모델이 개발되었다. 상이한 nAChR 리간드는 이들이 우선적으로 결합하는 수용체의 배열 상태를 안정화시킬 수 있다. 예를 들어, 작용제 ACh 및 (-)-니코틴은 각각 활성화 및 탈감작화 상태를 안정화시킨다.
니코틴 수용체의 활성 변화는 수많은 질환과 관련되어 있다. 이들 질환 중 일부, 예를 들어 중증근무력증 및 ADNFLE (상염색체 우성 전두엽 간질)는 수용체 수의 감소 또는 탈감작화의 증가로 인해 니코틴 전달의 활성 감소와 연관된다.
또한, 니코틴 수용체의 감소는 알츠하이머병 및 정신분열증과 같은 질환에서 발견되는 인지 장애를 매개한다고 가정되어 왔다.
또한, 담배의 니코틴 효과가 니코틴 수용체에 의해 매개되며, 니코틴의 효과가 탈감작화 상태의 수용체를 안정화시키기 때문에, 니코틴 수용체의 활성이 증가되면 흡연 욕구를 감소시킬 수 있다.
nAChR에 결합하는 화합물이 예를 들어, 학습 장애, 인지 장애, 주의력 결핍 또는 기억 손실과 같이 콜린 기능 감소를 수반하는 수 많은 장애를 치료하고자 제안되었다. α7 니코틴 수용체의 활성 조절은 알츠하이머병, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 불안증, 정신분열병, 조증, 조울증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상 또는 비행 시차 증후군, 니코틴 중독, 통증을 비롯하여 콜린성 시냅시스가 소실된 다른 신경계, 퇴행성 또는 정신과 질환을 포함하는 수많은 질환에 혜택이 있을 것으로 예상된다.
그러나, ACh와 동일한 부위에서 작용하는 니코틴 수용체 작용제를 사용한 치료는, ACh가 수용체 활성을 활성화시킬 뿐 아니라, 탈감작화 및 비경쟁적 차단을 포함하는 과정을 통해 수용체 활성을 차단하기 때문에 문제가 된다. 또한, 장기 활성화는 장시간 지속되는 불활성화를 유도하는 것으로 드러났다. 따라서, ACh의 작용제는 활성을 증가시킬 뿐 아니라 감소시킬 수 있을 것으로 예상된다.
일반적으로, 니코틴 수용체, 및 특히 α7-니코틴 수용체에서 탈감작화는 적용된 작용제의 작용 기간을 제한한다.
본 발명자들은 놀랍게도, 특정의 신규 트리아졸 유도체가 니코틴성 아세틸콜린 수용체 (nAChR)에서 작용제의 효능을 증가시킬 수 있음을 발견하였다. 이러한 작용 형태의 화합물(이후 "양성 알로스테릭 조절제"로 칭함)은 니코틴 전달의 감소와 연관된 증상을 치료하는데 특히 유용할 수 있다. 치료적 환경에서, 상기 화합물은 활성화의 일시적인 프로파일에 영향을 미치지 않으면서 정상적인 뉴런간 소통을 회복시킬 수 있다. 또한, 양성 알로스테릭 조절제는 작용제의 장기 적용시 발생할 수 있는 것과 같은 수용체의 장기간 불활성화를 생성할 것으로 여겨지지는 않는다.
본 발명의 양성 nAChR 조절제는 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 정신과 질환, 지능 손상 장애 또는 질환 또는 염증성 질환 또는 증상의 치료 또는 예방에 유용하다.
본 발명은 양성 알로스테릭 조절제 특성, 특히 α7 니코틴 수용체에서 작용제의 효능을 증가시키는 1-(아릴)-3-아닐린-5-알킬 1,2,4-트리아졸 유도체에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 그의 제조 방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 정신과 질환, 지능 손상 장애 또는 질환 또는 염증성 질환 또는 증상의 치료 또는 예방용 의약을 제조하기 위한 상기 유도체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 화합물은 선행 기술 화합물과 구조적으로 상이하며, α7 니코틴 아세틸콜린 수용체의 양성 알로스테릭 조절제로서의 그의 활성 증가로 약동학적으로 상이하다.
본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다:
상기 식에서,
R1은 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬, C1-3알킬아미노, C3-6사이클로알킬, C3-6사이클로알킬옥시, C3-6사이클로알킬아미노, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 및 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐이고;
R2는 수소, 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
R2 및 R3은 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일 또는 C2-6알켄디일이며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=O)- 또는 R8-O-C(=O)-이고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬이며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬이거나;
R6 및 R7은 각각 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐 또는 피페리디닐을 형성하고;
R8은 수소 또는 C1-4알킬이다.
본 발명은 특히
R1이 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬, C1-3알킬아미노, C3-6사이클로알킬, C3-6사이클로알킬옥시, C3-6사이클로알킬아미노, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 및 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐이고;
R2는 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
R2 및 R3은 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일 또는 C2-6알켄디일이며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=0)- 또는 R8-0-C(=0)-이고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬이며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬이거나;
R6 및 R7은 각각 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐 또는 피페리디닐을 형성하고;
R8은 수소 또는 C1-4알킬인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
본 발명은 특히
R1이 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬 및 C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐이고;
R2는 수소, 할로, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
R2 및 R3은 3,4-위치에서 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일 또는 C2-6알켄디일이며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=0)- 또는 R8-O-C(=O)-이고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬이며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬이거나;
R6 및 R7은 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐을 형성하고;
R8은 수소 또는 C1-4알킬인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
본 발명은 더욱 특히
R1이 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 클로로, 메틸, 에틸, 메톡시메틸 및 에틸아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환된 피리디닐이고;
R2는 수소, 할로, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
R2 및 R3은 3,4 위치에서 래디칼 -OCF2O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일이며;
R5는 하이드록실 또는 R6R7N-C(=O)-이고;
R6은 메틸, 에틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸 또는 (사이클로프로필)메틸이며;
R7은 수소 또는 메틸인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
본 발명은 가장 특히
R1이 비치환된 벤조디옥산-6-일; 1개의 메틸 또는 에틸아미노 그룹에 의해 치환된 피리디닐; 또는 2개의 메틸 그룹에 의해 치환된 피리디닐이고;
R2는 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 플루오로, 트리플루오로메틸 또는 클로로이고;
R4는 수소 또는 플루오로이며;
R2 및 R3은 3,4 위치에서 래디칼 -OCF2O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일이며;
R5는 하이드록실 또는 R6R7N-C(=O)-이고;
R6은 메틸, 에틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸 또는 (사이클로프로필)메틸이며;
R7은 수소 또는 메틸인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
본 발명은 특히
R1이 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬 및 C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐이고;
R2는 할로, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
R2 및 R3은 3,4-위치에서 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-5알칸디일 또는 C2-5알켄디일이며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=0)- 또는 R8-0-C(=0)-이고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬이며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬이거나;
R6 및 R7은 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐이고;
R8은 수소 또는 C1-3알킬인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
본 발명은 더욱 특히
R1이 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 클로로, 메틸, 에틸, 메톡시메틸 및 에틸아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환된 피리디닐이고;
R2는 할로, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-5알칸디일이고;
R5는 하이드록실 또는 R6R7N-C(=O)-이며;
R6은 메틸 또는 에틸이고;
R7은 수소 또는 메틸인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
본 발명은 가장 특히
R1이 비치환된 벤조디옥산-6-일; 1개의 메틸 또는 에틸아미노 그룹에 의해 치환된 피리디닐; 또는 2개의 메틸 그룹에 의해 치환된 피리디닐이고;
R2는 플루오로, 클로로, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 플루오로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 플루오로이며;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-5알칸디일이고;
R5는 하이드록실 또는 R6R7N-C(=O)-이며;
R6은 메틸 또는 에틸이고;
R7은 수소 또는 메틸인
화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물에 관한 것이다.
바람직한 화합물은
- (알파S)-알파-에틸-3-[[3-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E137;
- 3-[(2,2-디플루오로-1,3-벤조디옥솔-5-일)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드 - E200;
- N-사이클로프로필-3-[(2,2-디플루오로-1,3-벤조디옥솔-5-일)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드 - E180;
- (알파S)-알파-에틸-1-(2-메틸-4-피리디닐)-3-[(2,3,4-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E130;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-에틸-3-[(2,3,4-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E127;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-메틸-3-[(2,3,4-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E189;
- 3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드 - E167;
- N-사이클로프로필-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-3-[[3-(트리플루오로메톡시)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드 - E182;
- 3-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드 - E153;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-에틸-3-[(3,4,5-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E188;
- (알파S)-알파-에틸-1-(2-메틸-4-피리디닐)-3-[(3,4,5-트리플루오로페닐)아미노]-H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E187;
- (알파S)-알파-에틸-3-[(3-플루오로-5-메톡시페닐)아미노]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E186;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-에틸-3-[(3-플루오로-5-메톡시페닐)아미노]-H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E190;
- (알파S)-3-[(3-클로로-5-메톡시페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파- 에틸-H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 - E205;
- 3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N,N-디메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 - E234; 및
- 3-[(2,2-디플루오로-1,3-벤조디옥솔-5-일)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N,N-디메틸-H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 - E235의 화합물; 및
이들의 산부가염 및 용매화물이다.
상기 및 이후에 사용되는 하기 용어들은 다음과 같은 의미를 가진다:
C1-3알킬은 단일 그룹으로 또는 그룹의 일부로서 탄소 원자수 1 내지 3의 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소 래디칼, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필 및 1-메틸에틸 등을 의미한다;
C3-6사이클로알킬은 단일 그룹으로 또는 그룹의 일부로서 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실을 의미한다;
C1-6알칸디일은 탄소 원자수 1 내지 6인 2가의 직쇄 및 분지쇄 포화 탄화수소 래디칼, 예컨대 메틸렌, 1,2-에탄디일, 1,3-프로판디일, 1,4-부탄디일, 1,5-펜탄디일 및 이들의 분지형 이성체를 의미한다;
C2-6알켄디일은 탄소 원자수 2 내지 6인 2가의 직쇄 및 분지쇄 불포화 탄화수소 래디칼, 예컨대 1,2-에텐디일, 1,3-프로프-1-엔디일 등을 의미한다;
할로는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도이다.
화학식 (I)의 일부 화합물 및 그의 부가염, 수화물 및 용매화물은 하나 이상의 키랄 중심을 포함할 수 있으며, 따라서 입체이성체로 존재할 수 있다는 것이 인지될 것이다.
상기 또는 하기에서 사용되는 용어 "입체이성체"는 화학식 (I)의 화합물 및 그의 부가염이 가질 수 있는 모든 가능한 입체이성체로 정의된다. 달리 언급되거나 명시되지 않는 한, 화합물의 화학적 표기는 다른 이성체가 실질적으로 없는 것으로, 즉 다른 이성체가 10% 미만, 바람직하게는 5% 미만, 특히 2% 미만, 가장 바람직하게는 1% 미만으로 있는 화학식 (I)의 각 개별 이성체 및 이들의 염, 용매화물 뿐 아니라 모든 가능한 입체이성체의 혼합물을 나타내고, 여기에서 이들 혼합물은 기본 분자 구조의 모든 부분 입체 이성체 및 거울상 이성체를 포함한다.
치료상의 용도를 위해, 화학식 (I)의 화합물의 염은 반대 이온(counterion)이 약제학적으로 허용되는 것이다. 그러나, 약제학적으로 허용되지 않는 산 및 염기의 염이 또한, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 화합물을 제조하거나, 정제하는데 사용될 수 있다. 약제학적으로 허용되거나 그렇지 않은 염 모두가 본 발명의 범위내에 포함된다.
상기 또는 하기에 언급되는 약제학적으로 허용되는 산 및 염기 부가염은 화학식 (I)의 화합물이 형성할 수 있는 치료적으로 활성인 비독성 산 및 염기 부가염 형태를 포함하고자 한다. 약제학적으로 허용되는 산 부가염은 염기 형태를 적절한 산으로 처리함으로써 편리하게 수득될 수 있다. 적절한 산은, 예를 들면 할로겐화수소산(예: 염산 또는 브롬화수소산), 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산; 또는 예를 들어 아세트산, 프로판산, 하이드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산(예를 들어, 에탄디오산), 말론산, 숙신산(예를 들어, 부탄디오산), 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 팜산 등과 같은 유기산을 포함한다. 반대로, 상기 염 형태를 적절한 염기로 처리하여 유리 염기 형태로 전환시킬 수 있다.
용어 용매화물은 화학식 (I)의 화합물 및 그의 염이 형성할 수 있는 알콜화물을 가리킨다.
화학식 (I)의 화합물 중 일부는 그의 토토머 형태로도 존재할 수 있다. 이러한 형태는 상기 화학식에 명백하게 나타나 있지 않더라도 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 의도된다.
화합물의 제조
본 발명에 따른 화합물은 일반적으로 당업자들에게 알려진 일련의 단계로 제조될 수 있다. 특히, 본 특허 출원의 화합물은 하나 이상의 다음 제조 방법에 따라 제조될 수 있다. 다음 반응식에서, 달리 제시되지 않으면 모든 변수는 화학식 (I)에 정의된 바와 같이 사용된다. Q는
를 나타내며, 여기에서 R2, R3 및 R4는 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
하기 몇몇 중간체 구조에서, 래디칼 R5의 정의는 HO-CH2 (Ie), 치환된-실릴옥시 (If 및 IV-a) 및 (알킬 또는 아릴)설포닐옥시 (Ig)를 포함하도록 확대된다.
반응식 1
본 발명의 화합물은 반응식 1에 따라, 화학식 (II)의 N-아실 카봄이미도티오산, 메틸 에스테르 유도체를 업계에 공지된 조건하에서 적절한 히드라진 유도체 (III)를 사용하여 화학식 (I)의 1,2,4-트리아졸로 변환시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 변환은 전형적으로 비프로톤 용매 (aprotic solvent), 예컨대 DMF 등 중에서 수행되고, 가장 유리하게는 약한 루이스산(Lewis acid), 특히 염화수은(II) (HgCl2)의 존재하에 수행되며, 실온 내지 150 ℃의 온도를 필요로 한다. 특정 구체예에서, 반응 온도는 70 내지 120 ℃, 가장 바람직하게는 80 ℃이다. 화학식 (II)의 중간체는 E 또는 Z 배열 또는 이들의 혼합 형태뿐 아니라, E 또는 Z 배열 또는 이들의 혼합 형태의 토토머 형태 (II-a)로 발생될 수 있다.
반응식 2
본 발명의 삼치환된 트리아졸 합성에서 공통적인 중간체 (II)는 전형적으로 화학식 (IV)의 카복실산 클로라이드에서 출발하여, 3개의 합성 변환으로 구성된 프로토콜 (반응식 2)로 제조된다. 제 1 단계에서, 아실 클로라이드 (IV)를 1가 양이온 티오시아네이트 (반응식 2에서 M-NCS), 예를 들면 포타슘 티오시아네이트 또는 암모늄 티오시아네이트와 반응시켜 상응하는 아실 이소티오시아네이트를 동일계에서 수득한다. 이러한 반응은 통상 0 내지 70 ℃의 온도, 바람직하게는 실온에서 아세톤을 용매로 사용하여 수행된다.
중간체 아실 이소티오시아네이트는 분리하지 않고 동일한 반응 매질 중에서 적절한 방향족 아민 (V)으로 처리하여 화학식 (VI)의 N-아실 티오우레아를 제공한다. 이러한 변환은 통상 0 내지 70 ℃의 온도, 바람직하게는 실온에서 수행된다.
최종 단계에서, N-아실 티오우레아 (VI)의 S-메틸화로 화학식 (II)의 N-아실 카봄이미도티오산, 메틸 에스테르 유도체가 제공된다. 이러한 변환은 메틸 요오다이드로 수행되고, 강 염기, 바람직하게는 NaH와 같은 강 무기 염기의 존재를 필요로 하며, 비프로톤 용매, 예를 들면 DMF, THF 등 중에서 -70 ℃ 내지 실온 범위의 온도, 바람직하게는 0 ℃로 수행된다. 더욱 바람직하게, 상기 변환은 무기 염기로서 탄산칼륨의 존재하에 용매로서 아세톤중에서 0 내지 60 ℃의 온도, 바람직하게는 실온으로 수행된다.
임의로, 아실 클로라이드 (IV)가 상업적으로 입수가능하지 않은 경우, 상기 아실 클로라이드 (IV)는 상응하는 카복실산 (IX)으로부터 당업계에 공지된 조건으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 아실 클로라이드 (IV)는 카복실산 (IX)을 임의로 촉매로서 DMF의 존재하에, 바람직하게는 0 내지 50 ℃ 범위의 온도에서 과량의 옥살릴 클로라이드로 처리하여 수득할 수 있다. 상기 변환은 또한 디클로로메탄 등과 같은 유기 용매의 존재하에 수행될 수도 있다.
본 발명에 기술된 화합물의 특정 예로, 아실 클로라이드 (IV)는 추가로 이어지는 전체 합성 과정의 반응 조건과 상용적이도록 선 작용기화 및 특정 작용기의 보호를 요한다. 예를 들면, R5가 하이드록실인 경우, 반응식 3에 예시된 합성 순서로 화학식 (IVa)의 하이드록실 보호된 아실 클로라이드를 제조할 수 있다(반응식 3).
반응식 3
제 1 단계에서, 화학식 (VIIa)의 알칸 카복실 에스테르에 있는 하이드록실 부분을 적절한 실릴 보호기로 보호한다. 특히, 상기 및 이하에 기술된 반응 조건에 불활성이기 때문에, 디페닐 tert-부틸 그룹이 사용될 수 있다. 바람직한 구체예에 있어서, 하이드록실 에스테르 (VIIa)를 염기로서 이미다졸의 존재하, 임의로 촉매로서 디메틸아미노 피리딘 (DMAP)의 존재하에 tert-부틸(클로로)디페닐실란으로 처리한다. 바람직한 용매는 DMF 등과 같은 극성 비프로톤 용매이다. 반응 온도는 바람직하게는 0 ℃ 내지 실온 범위의 온도이다. 후속 변환에서, 알킬 카복실산 에스테르를 가수분해하여 상응하는 화학식 (VIIIa)의 카복실산을 제공한다. 이 변환은 금속 수산화물 (M-OH), 예컨대 수산화칼륨 또는 더욱 바람직하게는 수산화리튬을 사용하여 행해질 수 있다. 반응은 수성 환경에서 수행되며, 가장 유리하게는 적어도 하나 또는 더욱 바람직하게는, 2종의 수혼화성 유기 공용매, 예컨대 THF 및 메탄올 등의 존재하에 수행된다. 화학식 (IVa)의 산 클로라이드는 카복실산 (VIIIa)을 임의로 촉매로서 DMF의 존재하에, 바람직하게는 0 내지 50 ℃ 범위의 온도에서 과량의 옥살릴 클로라이드로 처리하여 수득할 수 있다.
상기 변환은 또한 디클로로메탄 등과 같은 유기 용매의 존재하에 수행될 수도 있다.
화학식 (I)의 다수 화합물은 치환체 R5가 관련되는 작용기 변환으로 수득될 수 있다. 반응식 4 내지 8은 상기 작용기 변환의 예를 나타낸다. 반응식 4는 일차 또는 이차 지방족 아민 HNR6R7로의 처리를 포함하여 상응하는 카복실산 에스테르 (Ic)로부터 화학식 (Ib)의 카복실산 아미드를 제조하는 것에 대해 나타낸다. 일 구체예에 있어서, 상기 변환은 에스테르 (Ic)로부터 직접 행해질 수 있다. 바람직한 용매는 저급 알킬 알콜, 예를 들어 메탄올 등과 같은 프로톤 용매이다. 바람직한 반응 온도는 실온 내지 120 ℃이다.
반응식 4
다른 한편으로, 알킬 카복실산 에스테르 (Ic)를 먼저 가수분해하여 상응하는 화학식 (Id)의 카복실산을 제공한다. 이 변환은 금속 수산화물 (M-OH), 예컨대 수산화칼륨 또는 더욱 바람직하게는 수산화리튬을 사용하여 행해질 수 있다. 반응은 수성 환경에서 수행되며, 가장 유리하게는 적어도 하나 또는 더욱 바람직하게는, 2종의 수혼화성 유기 공용매, 예컨대 THF 및 메탄올 등의 존재하에 수행된다. 카복실산 (Id)를 화학식 (Ib)의 아미드로 추가 전환시키는 것은 당업계에 공지된 방법에 따라, 예를 들면 HBTU (O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸 우로늄 헥사플루오로포스페이트), EDCI (N'-(에틸카본이미도일)-N,N-디메틸-1,3-프로판디아민 모노하이드로클로라이드) 또는 EDAC (N'-에틸카본이미도일)-N,N-디메틸-1,3-프로판디아민)과 같은 통상의 아미드 커플링 시약의 존재하에, DCM 등의 비프로톤 용매 또는 더욱 바람직하게는 THF 또는 DMF 등의 극성 비프로톤 용매에서 아민 염기 첨가제, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민의 존재하에 상기 정의된 바와 같은 일차 또는 이차 아민 HNR6R7로 처리하여 행해진다. 특정 조건하에서는, HOBT (1-하이드록시-1H-벤조트리아졸)을 첨가제로 사용하는 것이 유리하다.
예컨대 화학식 (Ie)의 화합물에서와 같이, 화학식 (I)의 화합물에서 R5가 일차 하이드록실 작용기인 경우, 이들 화합물은 반응식 5에 예시된 바와 같이 카복실산 에스테르 (Ic)로부터 출발하여 수득될 수 있다. 이 변환은 염화칼슘의 존재하에 저급 알킬 알콜, 예컨대 메탄올 및 비프로톤 용매, 예컨대 THF로 이루어진 용매 시스템중에서 소듐 보로하이드라이드를 사용하여 용이하게 수행된다. 바람직한 반응 온도는 0 ℃ 내지 실온이다. 다른 한편으로, 에스테르 부분의 반응성이 낮은 경우에는, 더 강한 환원제가 유리하게 사용될 수 있다. 구체적으로, 디에틸 에테르 또는 THF 등과 같은 비프로톤 용매중의 리튬 알루미늄 하이드라이드가 일차 알콜 (Ie)를 제공할 수 있다. 바람직한 반응 온도는 0 ℃ 내지 실온이다.
반응식 5
화학식 (I)의 화합물에서 R5가 하이드록실 작용기이고, 이 하이드록실 그룹이 이차 탄소 원자에 결합되어 있는 경우, 화학식 (Ie')의 화합물은 반응식 6에 예시된 바와 같이, 실릴 보호기를 제거하여 수득할 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 화학식 (If)의 화합물에 있는 디페닐 tert-부틸 그룹은 친핵성 불소 공급원, 예컨대 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (TBAF)에 의해 제거된다. 이 변환은 바람직하게는 THF 등과 같은 비프로톤 용매에서 수행된다. 바람직한 반응 온도는 0 내지 50 ℃, 특히 실온이다.
반응식 6
R5가 할로인 화학식 (I)의 화합물은 반응식 7에 예시된 바와 같이 수득할 수 있다. 제 1 단계에서, (Ie')의 하이드록실 부분을 메틸 설포네이트 그룹으로 작용기화하여 (Ig)를 수득한다. 이러한 전환은 (Ie')를 디클로로메탄 등과 같은 할로겐화 용매에서 아민 염기, 예컨대 트리에틸 아민 등의 존재하, 및 임의로 촉매로서 디메틸아미노 피리딘 (DMAP)의 존재하에 메탄 설포닐 클로라이드로 처리함으로써 수행된다. 바람직한 반응 온도는 0 ℃ 내지 실온이다. 이러한 조건하에서서 상당량의 염소화 화합물 (Ih)가 형성된다. (Ig) 및 (Ih)의 혼합물을 친핵성 불소 공급원, 예컨대 테트라부틸암모늄 플루오라이드로 처리하는 경우, 상기 메탄 설포네이트 (Ig)는 플루오로 알칸 (Ii)으로 전환된다. 바람직한 용매는 THF 등과 같은 비프로톤 용매이다. 바람직한 반응 온도는 0 내지 70 ℃, 더욱 바람직하게는 실온 내지 50 ℃이다.
반응식 7
본 발명의 특정 환경에서, 화학식 (Ie")의 이차 알콜로부터 출발하여 미츠노부(Mitsunobu) 조건하에서 화학식 (Ij)의 5-알킬리덴 1,2,4-트리아졸을 수득할 수 있다. 이차 알콜 (Ie")를 포스핀, 예컨대 트리페닐포스핀 등 및 아조디카복실레이트, 예컨대 디이소프로필 아조디카복실레이트 (DIAD) 등의 존재하에 방향족 카복실산, 예컨대 벤조산 또는 4-니트로벤조산 등으로 처리하여 알킬리덴 (Ij)을 제공한다.
반응식 8
본 발명의 특정 환경에서, 화학식 (I)의 화합물에서 Alk가 분지쇄 C3-5알칸디일 부분을 나타내는 경우, 상기 분지쇄를 화학식 (VIa)의 중간체에 도입하여 화학식 (IIb)의 중간체를 제공할 수 있다 (반응식 9). 활성화 메틸렌 작용기를 가지는 화합물 (VIa)를 아세톤과 같은 비프로톤 용매에서, 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨 등의 존재하에 할로C1-4알칸, 예컨대 요오도메탄으로 처리하여 화학식 (IIb)의 화합물을 제공한다. 바람직한 반응 온도는 0 내지 50 ℃, 특히 실온이다. 상술한 것과 유사하게, 화합물 (IIb)는 반응식 1에 예시된 바와 같이, 화학식 (I)의 화합물로 변환시킬 수 있다.
반응식 9
본 발명의 또 다른 구체예에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 치환체 R1과 관련한 작용기 변환으로 수득될 수 있다. 반응식 10 내지 12는 상기 작용기의 변환예를 나타낸다.
R9가 수소, 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬아미노, C3-6사이클로알킬, C3-6사이클로알킬옥시, C3-6사이클로알킬아미노, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노를 나타내는 화학식 (II)의 알콕시 치환된 피리디닐 1,2,4-트리아졸은 화학식 (Ik)의 클로로 치환된 피리디닐 1,2,4-트리아졸을 상응하는 알콜 용매 HOC1-3알킬, 예를 들면 소듐 메톡사이드가 시약으로 사용되는 경우 메탄올중에서 소듐 알콕사이드, NaOC1-3알킬로 처리한 다음, 압력 튜브 또는 마이크로웨이브 오븐에서 고온, 바람직하게는 100 내지 130 ℃로 가열함으로써 수득될 수 있다 (반응식 10). C3-6사이클로알킬옥시 및 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 치환된 피리디닐 유도체가 유사하게 제조될 수 있다.
반응식 10
R9가 수소, 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬아미노, C3-6사이클로알킬, C3-6사이클로알킬옥시, C3-6사이클로알킬아미노, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노를 나타내는 화학식 (Im)의 아미노 또는 알킬아미노 치환된 피리디닐 1,2,4-트리아졸은 화학식 (Ik)의 클로로 치환된 피리디닐 1,2,4-트리아졸을 알콜 용매, 예를 들면 에탄올 등중에서 C1-3알킬아민으로 처리한 다음, 압력 튜브 또는 마이크로웨이브 오븐에서 고온, 바람직하게는 100 내지 120 ℃로 가열함으로써 수득될 수 있다 (반응식 11). C3-6사이클로알킬아미노 및 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노 치환된 피리디닐 유도체가 유사하게 제조될 수 있다.
반응식 11
R10이 수소, 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시 또는 C1-3알킬아미노를 나타내는 화학식 (In)의 모노- 또는 디-C1-3알킬 치환된 피리디닐 1,2,4-트리아졸은 화학식 (Io)의 클로로 또는 디클로로 치환된 피리디닐 1,2,4-트리아졸을 촉매량의 Fe(acac)3의 존재하에 85% THF 및 15% NMP로 이루어진 용매 시스템에서 과량 (3 내지 15 당량)의 그리냐드 (Grignard) 시약 C1-3알킬-MgBr로 처리하여 수득할 수 있다. 상기 변환은 -10 내지 50 ℃, 가장 바람직하게는 0 ℃ 내지 25 ℃의 온도 범위에서 수행될 수 있다 (반응식 12). 당업자들이라면 각각 상응하는 2-클로로 또는 2,6-디클로로 전구체 (Io)로부터 출발하여 상기 방법에 의해 화학식 (In)의 2-C1-3알킬 및 2,6-디 C1-3알킬 피리디닐 화합물 모두가 수득될 수 있음을 알 수 있을 것이다. C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬에 의해 치환된 피리디닐 유도체가 유사하게 제조될 수 있다.
반응식 12
약리학
본 발명의 화합물은 α7 니코틴 수용체의 양성 알로스테릭 조절제인 것으로 밝혀졌다. α7 니코틴 수용체 (α7 nAChR)는 5-HT3, GABAA 및 글리신 수용체 패밀리를 포함하는 시스-루프, 이온성 리간드-개폐형(ionotropic ligand-gated) 이온 채널의 슈퍼패밀리에 속한다. 이는 아세틸콜린 및 그것의 분해 산물인 콜린에 의하여 활성화되며, α7 nAChR의 주요 특성은 지속적인 작용제의 존재하에서 신속히 탈감작한다는 것이다. 이는 뇌에서 두번째로 풍부한 니코틴 수용체 아형이며, 많은 신경 전달 물질 방출의 중요한 조절제이다. 이것은 해마 및 전방 전두엽피질과 같이 주의력 및 인지 과정과 관련된 몇몇 뇌 구조에서 불연속적으로 분포되어 있으며, 인간에서 다양한 정신과 및 신경계 질환에 연루된다.
α7 유전자의 코어 프로모터 영역에서 다형태 및 15ql3-14 상 α7 자리와 정신분열증 마커(감각 개폐 결함) 간 강한 결합의 형태로 정신분열증과 연관되었다는 유전적 증거가 입증되었다.
병리적 증거는 자폐증에서 결합핵 및 뇌실곁핵, 파킨슨병, 알츠하이머병 및 정신분열증 뇌의 해마, 전두엽 및 띠다발 피질에서 α-Btx-결합 및 α7 면역반응성 상실로 제시된다.
정상에 비해 정신분열증의 두드러진 흡연 습관과 같은 약리학적 증거는 α7 니코틴성 전달 결핍을 보충하기 위한 환자의 자기-약물화 시도로서 해석된다. 전뇌 콜린 활성이 낮은 경우(예를 들어, 2 단계 수면), 정신분열증에서 정상 감각 개폐의 일시적인 복원 및 니코틴 투여에 따라 동물 모델 및 인간에서 감각 개폐(예비-펄스 억제 PPI) 결함의 일시적 정상화는 α7 니코틴 수용체의 일시적 활성화 후 탈감작 결과인 것으로 해석되고 있다.
따라서, α7 nAChR를 활성화하는 것이 수많은 CNS (정신 및 신경계) 질환에 대하여 치료적으로 유익한 효과를 가진다고 가정하기 위한 타당한 근거가 있다.
앞서 언급한 바와 같이, α7 nAChR는 천연 전달 물질 아세틸콜린 및 니코틴과 같은 외인성 리간드의 지속적인 존재하에서 빠르게 탈감작된다. 탈감작화된 상태에서, 수용체는 리간드에 결합된 채로 남아있으나, 기능적으로 불활성이다. 이는 매우 강력한 분해 (아세틸콜린에스테라제) 및 제거 (콜린 전달체) 메카니즘을 위한 물질이기 때문에, 아세틸콜린 및 콜린과 같은 천연 전달 물질에 매우 큰 문제는 아니다. 이러한 전달물질 분해/제거 메카니즘은 생리적으로 유용한 범위에서 활성화가능한 α7 nAChR과 탈감작된 α7 nAChR 간에 균형을 유지할 것이다. 그러나, 자연 분해 및 제거 메카니즘을 위한 물질이 아닌 합성 작용제는 과-자극, 및 α7 nAChR 발현 또는 기능 결함이 관여하는 장애에서 바람직하지 않은 지속적 탈감작화 상태쪽으로 α7 nAChR 군의 평형화를 이동시킬 가능성이 있을 것으로 생각된다. 작용제는 본래 다른 니코틴 수용체 아형의 비-특이적 활성화로 유해 반응을 일으킬 가능성이 있는 상이한 니코틴 수용체 아형에 걸쳐 고도로 보존된 ACh 결합 포켓을 표적으로 해야 한다. 따라서, 이와 같은 가능한 잠재성을 피하기 위하여, α7 아고니즘(agonism)에 대한 대안적인 치료 전략은 양성 알로스테릭 조절제 (PAM)로 천연 작용제에 대한 수용체 반응성을 증진시키는 것이다. PAM은 작용제 결합 부위와 다른 부위에 결합하는 제제로 정의되며, 이에 따라, 작용제 또는 탈감작성을 가질 것으로 예상되지 않으나, 천연 전달 물질에 대한 α7 nAChR의 반응성을 증진시킨다. 이러한 전략의 가치는 주어진 양의 전달 물질에 대하여, PAM 부재 에서 가능한 전달 물질의 수준과 비교하여 PAM 존재하에서 α7 nAChR 반응 규모가 증가한다는 것이다. 따라서, α7 nAChR 단백질이 결핍된 장애의 경우, PAM으로 유도된 α7 니코틴성 전달 물질의 증가는 유익할 수 있다. PAM이 천연 전달 물질의 존재에 좌우됨에 따라, 과-자극 가능성은 천연 전달 물질을 위한 분해/제거 메카니즘으로 제한된다.
본 발명의 화합물은 전세포 전압-고정 기록에 따라 결정된 경우, 정성적인 역학적 특성에 따라 타입 1 내지 4로 분류된다. 이러한 분류는 작용제 적용으로 유도되는 신호에 전술한 바와 같은 α7 PAM 화합물이 미치는 효과에 기초한다. 특히, 상기 작용제는 1 mM 농도의 콜린이다. 바람직한 실험 환경에서, 상기 α7 PAM 화합물 및 콜린은 후술하는 바와 같이 세포에 동시에 적용된다. 탈감작화는 전세포 전압-고정 전기생리학 측정시 작용제 적용동안 활성화를 통한 수용체의 폐쇄로 정의되며, 작용제에 의한 초기 활성화 후 외향 전류의 감소로 관찰된다.
PAM 타입 1 내지 4의 정의는 다음과 같다:
타입 0 화합물은 1 mM 콜린으로 유도된 전류의 효과 크기를 최소로 증가시킨다.
타입 1 화합물은 1 mM 콜린으로 유도된 전류의 효과 크기를 증가시키나, 수용체의 동역학을 최소로 변경시킨다. 특히, 길항제에 의해 유도된 탈감작 속도 및 정도는 영향을 받지 않는다. 따라서, 1 mM 콜린에 대한 화합물-조절 반응은 α7 PAM 화합물 부재시 1 mM 콜린 반응의 선형 스케일링에 가깝다.
타입 2 화합물은 탈감작 속도 및/또는 정도를 감소시키면서 1 mM 콜린으로 유도된 전류의 효과 크기를 증가시킨다.
타입 3 화합물은 1 mM 콜린으로 유도된 전류의 효과 크기를 증가시킨다. 10 μM 까지의 고농도로 시험된 경우, 상기 화합물은, 특히 1 mM 콜린을 250 밀리초 적용하였을 때 탈감작을 완전히 억제하였다.
타입 4 화합물은 수용체의 초기 탈감작에 이어 작용제 적용동안 수용체가 재개방되도록 한다. α7 PAM 화합물의 저효능 농도에서, 탈감작에 이은 길항제-유도된 활성화는 초기 내향 전류 최대치로서 화합물-유도된 재개방으로부터 분리될 수 있다. α7 PAM 화합물의 고효능 농도에서, 재개방은 탈감작으로 인해 폐쇄보다 빨리 일어나 초기 내향 전류 최대치가 사라진다.
따라서, 본 발명의 목적은 유일한 활성 물질로서 양성 알로스테릭 조절제를 투여하여, 아세틸콜린 또는 콜린과 같은 내인성 니코틴 수용체 작용제의 활성을 조절하거나, 니코틴 수용체 작용제와 함께 양성 알로스테릭 조절제를 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 이러한 면의 특정 형태에서, 치료 방법은 본 원에 기술된 바와 같은 α7 니코틴 수용체의 양성 알로스테릭 조절제 및 α7 니코틴 수용체 작용제 또는 부분 작용제로 처리하는 것을 포함한다. α7 니코틴 수용체 작용제의 활성을 갖는 적합한 화합물의 예로 다음을 들 수 있다:
- 1,4-디아자비사이클로[3.2.2]노난-4-카복실산, 4-브로모페닐 에스테르, 모노-하이드로클로라이드 (SSR180711A);
- (-)-스피로[1-아자비사이클로[2.2.2.]옥탄-3,5'-옥사졸리딘]-2'-온;
- 3-[(2,4-디메톡시)벤질리덴]-아나바세인 디하이드로클로라이드 (GTS-21);
- [N-[(3R)-1-아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일]-4-클로로벤즈아미드 하이드로클로라이드] PNU-282987;
- 니코틴;
- 바레니클린;
- MEM3454;
- AZD-0328; 및
- MEM63908.
본 발명의 양성 nAChR 조절제는 α7 니코틴 수용체 활성의 조절이 유익한 정신과 질환, 지능 손상 장애 또는 질환 또는 증상의 치료 또는 예방에 유익하다. 본 발명의 방법의 특정 면은 알츠하이머병, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 불안증, 정신분열병, 조증, 조울증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 또는 비행 시차 증후군, 니코딘 중독, 통증을 비롯하여 콜린성 시냅시스가 소실된 다른 신경계, 퇴행성 또는 정신과 질환을 포함하는, α7 니코틴 수용체 활성의 조절이 수많은 질환에 혜택이 있을 것으로 예상되는 학습 장애, 인지 장애, 주의력 결핍 또는 기억 손실을 치료하기 위한 방법이다.
콜린성 염증 경로에 의해 사이토카인 합성을 저해하는데는 니코틴성 아세틸콜린 수용체 α7 서브유닛이 필수적이기 때문에, 본 발명의 화합물은 또한 항염증 의약으로서 치료적으로 사용될 수 있다. 화합물로 치료될 수 있는 증상의 예로는 내독소혈증, 내독소 쇼크, 패혈증, 류마티스성 관절염, 천식, 다발 경화증, 건선, 두드러기, 염증성 장 질환, 염증성 담즙 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 수술후 장폐색증, 췌장염, 심부전, 급성 폐손상 및 동종이식 거부반응을 들 수 있다.
본 발명의 화합물은 정신분열병에서의 인지기능, 알츠하이머병에서의 인지기능, 경도 인지 장애, 파킨슨병, 주의력결핍 과다행동장애, 궤양성 대장염, 췌장염, 관절염, 패혈증, 수술후 장폐색증 및 급성 폐손상과 같은 증상에 치료적으로 사용될 수 있다.
상술된 약리학적 특성에 비추어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 임의의 하위 그룹, 이의 약제학적으로 허용되는 부가염, 4급 아민 및 입체화학적 이성체는 의약으로 사용될 수 있다. 특히, 본 발명의 화합물은 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 지능 손상 장애 또는 질환 또는 증상, 정신과 질환의 치료 또는 예방용 의약을 제조하는데 사용될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물의 유용성을 고려하여, 정신분열병, 조증, 조울증, 불안증, 알츠하이머병, 학습 장애, 인지 장애, 주의력 결핍, 기억 손실, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코딘 중독 및 통증을 비롯하여 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 질환으로 고통받는 인간을 포함한 온혈 동물을 치료하는 방법 또는 인간을 포함한 온혈 동물이 이로 인해 고통받는 것을 예방하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 인간을 포함한 온혈 동물에 화학식 (I)의 화합물, 이의 모든 입체 화학적 이성체, 이의 약제학적으로 허용되는 부가염, 용매화물 또는 4급 아민의 유효량을 투여, 즉 전신 또는 국소 투여, 바람직하게는 경구 투여하는 것을 포함한다.
당업계의 숙련자들은 본 발명의 PAM의 치료적 유효량이 α7 니코틴 수용체의 활성을 조절하기에 충분한 양이며, 이러한 양은 특히 질환의 타입, 치료 제제 중 화합물의 농도 및 환자의 상태에 따라서 달라질 수 있음을 인지할 것이다. 일반적으로, 정신분열병, 조증 및 조울증, 불안증, 알츠하이머병, 학습 장애, 인지 장애, 주의력 결핍, 기억 손실, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코딘 중독 및 통증을 비롯하여 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 질환을 치료하기 위한 치료제로서 투여될 PAM의 양은 주치의에 의해 사례에 맞게 결정될 것이다.
일반적으로, 적합한 투여량은 치료 부위에서 PAM의 농도가 0.5 nM 내지 200 μM, 및 더욱 일반적으로 5 nM 내지 50 μM의 범위가 되도록 하는 것이다. 이러한 치료 농도를 얻기 위하여, 치료가 필요한 환자는 0.01 mg/kg 내지 2.50 mg/kg(체중), 특히 0.1 mg/kg 내지 0.50 mg/kg(체중)으로 투여될 것이다. 치료 효과를 달성하기 위하여 요구되는 본 발명에 따른 화합물(본 원에서 활성 성분으로 언급되기도 함)의 양은 또한, 물론 개별적으로 특정 화합물, 투여 경로, 수용자의 연령 및 증상 및 치료될 특정 장애 또는 질환에 따라 달라질 것이다. 치료 방법은 또한 1일 1 내지 4회 섭취 요법으로 활성 성분을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 치료 방법에서 본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 투여 전에 제제화된다. 본 원에서 하기에 기술된 바와 같이, 적합한 약제는 주지되었고 용이하게 이용가능한 성분을 사용하는 공지 방법으로 제조된다.
본 발명은 또한 정신분열병, 조증 및 조울증, 불안증, 알츠하이머병, 학습 장애, 인지 장애, 주의력 결핍, 기억 손실, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다 활동 장애, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코딘 중독 및 통증을 비롯하여 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 화학식 (I)의 화합물의 치료적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함한다.
활성 성분은 단독으로 투여될 수 있지만, 약제학적 조성물로서 제공되는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명은 추가로 본 발명의 화합물을 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 담체 또는 희석제는 조성물의 다른 성분과 상용성을 나타내고 수용자에게 유해하지 않다는 점에서 "허용가능"하여야 한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 제약 업야에 잘 알려져 있는 방법, 예를 들면, 문헌 [참조: Gennaro et al. Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed., Mack Publishing Company, 1990, 특히 Part 8: Pharmaceutical preparations and their Manufacture)]에 기술된 바와 같은 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 활성 성분으로서 치료적 유효량의 특정 화합물은 염기 또는 부가염 형태로, 투여에 필요한 제제의 형태에 따라 각종 다양한 형태를 취할 수 있는 약제학적으로 허용가능한 담체와 친밀히 혼합된다. 이들 약제학적 조성물은 바람직하게는 경구 투여, 경피 투여 또는 비경구 투여 등의 전신 투여; 또는 흡입, 비강내 스프레이, 점안제 또는 크림, 겔, 샴푸 등을 통해서와 같은 국소 투여에 적절한 단위 제형인 것이 바람직하다. 예를 들면, 조성물을 경구 제형으로 제조함에 있어서, 예를 들면, 현탁제, 시럽, 엘릭시르 및 용액 등의 경구 액체 제제의 경우에는 물, 글리콜, 오일, 알콜 등; 또는 분제, 환약, 캡슐 및 정제의 경우에는 전분, 당, 카올린, 윤활제, 결합제, 붕괴제 등의 고체 담체와 같은 통상의 약제학적 매질 중 임의의 것을 사용할 수 있다. 투여의 용이성으로 인해, 정제 및 캡슐이 가장 유리한 경구 복용 단위형을 나타내고, 이 경우에는 고체 약제학적 담체가 명백히 사용된다. 비경구 조성물의 경우에, 담체는 예를 들면 용해성을 돕기 위해 다른 성분이 포함될 수도 있으나, 보통은 적어도 대부분을 멸균수로 포함할 것이다. 예를 들면, 담체가 식염수, 글루코스 용액, 또는 식염수와 글루코스 용액의 혼합물을 포함하도록 주사 용액이 제조될 수 있다. 주사용 현탁제도 제조될 수 있으며, 이 경우에는 적당한 액체 담체, 현탁화제 등이 사용될 수 있다. 경피 투여에 적합한 조성물에 있어서, 담체는 임의로 소정 특성을 지니는 적절한 첨가제와 소량의 비율로 혼합된 침투촉진제 및/또는 적당한 습윤제를 포함하고, 이때 첨가제는 피부에 심각한 유해 효과를 끼치지 않는 것이다. 상기 첨가제는 피부에의 투여를 용이하게 하고/하거나 원하는 조성물을 제조하는데 도움이 될 수 있다. 이들 조성물은 다양한 방법, 예를 들면 경피 패치, 스팟 온(spot-on) 또는 연고로서 투여될 수 있다.
투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 상술한 약제학적 조성물을 복용 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서 및 청구항에서 사용되는 복용 단위 형태는 단위 용량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위이며, 각각의 단위는 필요한 약제학적 담체와 함께 원하는 치료 효과를 산출하도록 계산된 소정량의 활성 성분을 함유한다. 이러한 복용 단위 형태의 예로는 정제 (분할정 또는 코팅정을 포함), 캡슐, 환약, 분말 패킷, 웨이퍼, 주사 용액 또는 주사용 현탁제, 티스푼형 (teaspoonful), 테이블스푼형 (tablespoonful) 등, 및 이들의 분리된 다중회분 (segregated multiples)이 있다.
본 발명의 화합물은 경구, 경피 또는 비경구 투여와 같은 전신 투여; 또는 흡입, 비강내 스프레이, 점안제 또는 크림, 겔, 샴푸 등을 통해서와 같은 국소 투여에 사용될 수 있다. 상기 화합물은 바람직하게 경구로 투여된다. 정확한 투여 용량 및 빈도는 당업계에 잘 알려진 바와 같이 사용되는 화학식 (I)의 특정 화합물, 치료될 특정 증상, 치료될 증상의 중증도, 연령, 체중, 성별, 질병의 범위 및 특정 환자의 전신적인 신체 상태 및 개개인이 취할 수 있는 기타 약제에 따라 달라진다. 또한, 상기 일일 유효량이 치료되는 대상의 반응 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 가감될 수 있음이 명백하다.
부형제를 함유한 조성물의 설명 (%). 투여 방식에 따라, 약제학적 조성물은 0.05 내지 99 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 70 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 50 중량%의 활성 성분 및 1 내지 99.95 중량%, 바람직하게는 30 내지 99.9 중량%, 더욱 바람직하게는 50 내지 99.9 중량%의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 것이며, 이때 모든 비율은 조성물의 총 중량에 대한 것이다.
화학식 (I)의 화합물은 또한 다른 통상의 α7 니코틴 수용체 작용제, 이를 테면 1,4-디아자비사이클로[3.2.2]노난-4-카복실산, 4-브로모페닐 에스테르, 모노하이드로클로라이드 (SSR180711A), (-)-스피로[1-아자비사이클로[2.2.2.]옥탄-3,5'-옥사졸리딘]-2'-온, 3-[(2,4-디메톡시)벤질리덴]아나바세인 디하이드로클로라이드 (GTS-21); [N-[(3R)-1-아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일]-4-클로로벤즈아미드 하이드로클로라이드] PNU-282987; 니코틴; 바레니클린; MEM3454; AZD-0328; 및 MEM63908와 배합되어 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물 및 α7 니코틴 수용체 작용제의 배합물에 관한 것이다. 상기 배합물은 약제로 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 α7 니코틴 수용체의 조절이 유익한 질환을 치료하는데 동시, 분리 또는 순차적으로 이용하기 위한 배합 제제로서, (a) 화학식 (I)의 화합물 및 (b) α7 니코틴 수용체 작용제를 포함하는 산물에 관한 것이다. 상이한 약물이 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 단일 제제로 배합될 수 있다.
실험 부분
본 발명의 화합물을 제조하기 위한 다수의 방법이 하기 실시예에서 설명된다. 달리 언급이 없으면, 모든 출발 물질은 상업적 공급처로부터 입수한 것이며, 추가의 정제없이 사용되었다.
하기에서, 용어 "THF"는 테트라하이드로푸란을 의미하고, "DMF"는 N,N-디메틸포름아미드를 의미하며, "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 의미하고, "DCM"은 디클로로메탄을 의미하며; "DIPE"는 디이소프로필에테르를 의미하고; "DMSO"는 디메틸설폭사이드를 의미하며; "DMAP"는 4-(디메틸아미노)피리딘을 의미하고; "min"은 분을 의미하며; "sat."는 포화를 의미하고; "MeOH"는 메탄올을 의미하며; "EtOH"는 에탄올을 의미하고; "Et2O"는 디에틸 에테르를 의미하며; "acac"는 아세틸 아세토네이트를 의미하고; "TBAF"는 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 의미하며; "DIAD"는 디이소프로필 디아조디카복실레이트를 의미하고; "NH4OAc"는 암모늄 아세테이트를 의미하며; "r.t."는 실온을 의미한다.
마이크로웨이브 이용 반응은 단일 모드 반응기: Initia-tor™ Sixty EXP 마이크로웨이브 반응기 (Biotage AB) 또는 다중 모드 반응기: Micro-SYNTH Labstation (Milestone, Inc.)에서 수행되었다.
이하, 실시예로 본 발명을 설명하고자 하나, 본 발명의 범위를 제한하지는 않는다.
제조예 1
(3S)-3-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]부탄산 메틸 에스테르 (D1)
tert-부틸(클로로)디페닐실란 (15.282 g, 55.6 mmol)을 DMF (250 mL) 중의 (S)-3-하이드록시부탄산 메틸 에스테르 (5.473 g, 46.3 mmol) 및 1H-이미다졸 (6.939 g, 102 mmol) 및 DMAP (0.566 g, 4.63 mmol)의 빙냉각 교반 용액에 적가하였다. 10 분 후, 탁한 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc에 취한 후, H2O (3 x), 1N HCl 및 포화 NaHCO3 용액으로 연속 세척하였다. 유기상을 건조시키고(Na2SO4), 여과한 뒤, 농축하여 점성의 무색 오일을 수득하였다. 수율: 중간체 D1 10.614 g (64%).
제조예 2
(3S)-3-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]부탄산 (D2)
MeOH/H2O (80 mL/80 mL) 중의 수산화리튬 (2.1 g, 89.3 mmol)의 용액을 실온에서 THF (80 mL) 중의 중간체 D1 (10.6 g, 29.8 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 그 다음에, 용매를 감압하에 제거하고, 잔사를 H20/Et0Ac로 분배하였다. 층을 분리하여 수성상을 EtOAc로 추출하고 (x 3), 진한 HCl로 pH 1로 조정한 뒤, EtOAc로 다시 추출하였다 (x 3). 유기 추출물을 합해 건조시키고(Na2SO4), 여과한 뒤, 감압하에 농축하여 맑은 황색 점성 오일을 수득하였다. 수율: 중간체 D2 11 g (99.9%).
제조예 3
(3S)-3-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]부타노일 클로라이드 (D3)
옥살릴 클로라이드 (4.1 mL, 48 mmol; conc. 1.5 g/mL)를 실온에서 DCM (300 mL) 중의 중간체 D2 (11 g, 32 mmol) 및 DMF (1 mL)의 교반 용액에 90 분동안 적가하였다. 반응 혼합물을 갑압하에 증발시키고, 톨루엔과 공증발시켜 (x 3) 조 중간체 D3을 황색 오일로 수득하였다. 이 물질을 다음 반응 단계에 추가의 정제없이 사용하였다.
제조예 4
(3S)-3-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]-N-[[[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]티옥소메틸]부탄아미드 (D4)
중간체 D3 (5.4 g, 14.9 mmol)을 실온에서 아세톤 (150 mL) 중의 암모늄 티오시아네이트 (1.1 g, 14.9 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 2 시간 후, 4-플루오로-(3-트리플루오로메틸)아닐린 (2.7 g, 14.9 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔사를 H2O/DCM으로 분배하였다. 층을 분리하여 수성상을 DCM으로 추출하였다 (x 2). 유기 추출물을 합해 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시킨 다음, 여과하였다. 용매를 증발시켜 조 물질을 어두운 오렌지색의 점성 오일로서 8.8 g 수득하였다 (104.9%). 이 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage; 4OM 칼럼; 용리제: EtOAc/헵탄에 의해 0/100 - 40/60로 구배 용출)로 정제하였다. 수율: 점성의 황색 오일로서 중간체 D4 3.7 g (44.4%).
제조예 5
4-[[[(3,4-디플루오로페닐)아미노]티옥소메틸]아미노]-4-옥소부탄산 에틸 에스테르 (D5)
CH3CN (42 ml) 중의 티오시안산, 암모늄 염 (5 g, 0.065 mol)의 혼합물을 실온에서 15 분동안 교반하였다. 4-클로로-4-옥소부탄산 에틸 에스테르 (0.061 mol)를 적가하고, 60 ℃에서 30 분동안 교반하였다. 혼합물을 0 ℃로 냉각한 후, 3,4-디플루오로아닐린 (6 mL, 0.061 mol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 빙수로 퀀치하고, 0 ℃에서 15 분동안 교반하였다. 혼합물을 소결 펀넬을 통해 여과하고, 건조시킨 뒤, 톨루엔과 공비시켜 남아 있는 물을 제거하였다. 수율: 중간체 D5 16.40 g (85%, 황색 고체).
유사한 방식으로 하기 중간체들을 수득하였다
중간체 D6
중간체 D7
중간체 D8
제조예 9
N-[(3S)-3-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]-1-옥소부틸]-N'-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]카밤이미도티온산 메틸 에스테르 (D9)
K2CO3 (1 g, 7.3 mmol)를 실온에서 아세톤 (70 mL) 중의 중간체 D4 (제조예 4에 따라 제조됨) (3.7 g, 6.6 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 50 분 후, CH3I (0.5 mL, 7.9 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 145 분동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 생성된 잔사를 H2O/DCM으로 분배하였다. 층을 분리하여 수성상을 DCM으로 추출하였다 (x 2). 유기 추출물을 합해 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시킨 다음, 여과하고, 용매를 증발시켜 조 생성물을 점성의 황색 오일로 수득하였다. 수율: 중간체 D9 3.8 g (99.4%).
유사한 방식으로 하기 중간체들을 수득하였다 :
중간체 D1O
중간체 D11
중간체 D12
중간체 D13
중간체 D17
제조예 14
5-[(2S)-2-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]프로필]-N-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (D14)
염화수은(II) (1.8 g, 6.5 mmol)을 실온에서 DMF (65 mL) 중의 중간체 D9 (제조예 9에 따라 제조됨) (3.8 g, 6.5 mmol) 및 4-히드라지노-2-메틸피리딘 (0.8 g, 6.5 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80 ℃에서 140 분동안 가열하였다. 냉각 반응 혼합물을 얼음에 붓고, 침전 생성물을 여과로 수집하여 황색 반고체를 수득하였다. 수율: 중간체 D14 4.2 g (101.2%).
제조예 15
3-[[[[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]티옥소메틸]아미노]-3-옥소프로판산 에틸 에스테르 (D15)
3-클로로-3-옥소프로판산 에틸 에스테르 (5 g; 33.2 mmol)를 실온에서 CH3CN (110 ml) 중의 티오시안산, 암모늄 염 (1 :1) (2.781 g; 36.5 mmol)의 교반 용액에 천천히 첨가하였다. 2 시간 후, 4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)벤젠아민 (4.27 ml; 33.2 mmol)을 첨가하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 생성된 잔사를 H2O/DCM으로 분배하고, 상을 분리하였다. 수성상을 DCM으로 추출하고 (x 2), 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시키고, 여과하였다. 수율: 중간체 D 15 3.656 g.
제조예 16
3-[[(1Z)-[[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노](메틸티오)메틸렌]아미노]-2-메틸-3-옥소프로판산 에틸 에스테르 (D16)
K2CO3 (0.831 g; 6.01 mmol)를 실온에서 아세톤 (50 ml) 중의 중간체 D15 (1.765 g; 5.01 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 40 분 후, CH3I (0.624 ml; 10.0 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔사를 H2O/DCM으로 분배하였다. 수성상을 DCM으로 추출하고, 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하여 오렌지색 오일을 수득하였다. LCMS로 4개의 상이한 생성물을 확인하고, Biotage 시스템 (4OM 칼럼) [용리제: DCM - 10% MeOH/DCM 구배 용출]을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 분리하였다. 세번째 분획이 목적하는 화합물을 함유하였다. 수율: 중간체 D16 401 mg.
제조예 D18
5-[(2S)-2-[[(1,1-디메틸에틸)디페닐실릴]옥시]부틸]-N-[3-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (D18)
염화수은(II) (5.2 g; 19.1 mmol)을 실온에서 DMF (180 mL) 중의 중간체 D17 (제조예 9에 따라 제조됨) (11.5 g, 19.1 mmol) 및 4-히드라지노-2-메틸피리딘 (3.1 g, 19.1 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 5 분 후, 반응 혼합물을 80 ℃에서 120 분동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 용매를 감압하에 제거하였다. 잔사를 H2O/EtOAc로 분배하였다. 수성상을 EtOAc로 추출하고 (x2), 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하여 황색 오일을 수득하였다. 수율: 중간체 D18 (41%). 중간체 D18 (29 g; 수개의 배치 모음)을 1.5 리터 EtOAc에 용해시켰다. 수중 Na2S 용액 (20 ml)을 첨가하고, 혼합물을 2 시간동안 격렬히 교반하였다. 검은색 불용성 침전이 형성되었다 (HgS). 반응 혼합물을 디칼라이트 상에서 여과하고, Na2S 용액으로 재처리하였다. 유기층을 분리하여 염수로 세척하였다. 유기층을 MgSO4에서 건조시키고, 여과한 뒤, 실리카겔 S-티올 (50 ℃에서 2x 2 시간)로 처리하였다. 혼합물을 디칼라이트 상에서 여과하고, 증발시켰다. 증발이 거의 끝나가는 동안 생성물이 결정화되었다. Et2O를 첨가하고, 침전을 여과하였다. 생성물을 진공 오븐에서 50 ℃로 건조시켰다. 수율: 중간체 D18 25.70 g.
제조예 D19
3-[[[[2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]티옥소메틸]아미노]-3-옥소프로판산 메틸 에스테르 (D19)
MeCN (50 ml) 중의 3-클로로-3-옥소프로판산 메틸 에스테르 (7.5 g)를 실온에서 MeCN (400 ml) 중의 암모늄 티오시아네이트 (4.6 g)의 교반 용액에 천천히 첨가하였다. 1.5 시간 후, 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각하고, MeCN (50 ml) 중의 2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)아닐린 (9.8 g)의 용액을 천천히 첨가하였다. 5 내지 10 분 후, 생성된 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1 시간 후에 용매를 감압하에 제거한 다음, 생성된 잔사를 H2O/DCM으로 분배하고, 상을 분리하였다. 수성상을 DCM으로 추출하고 (x 2), 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시켰다 (Na2SO4). 여과 및 농축하여 조 물질을 호박색 오일로 수득하였다. 수율: 중간체 D19 17.1 g (60%).
제조예 D20
3-[[(1Z)-[[2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노](메틸티오)메틸렌]아미노]-3-옥소프로판산 메틸 에스테르
THF (450 ml)중의 중간체 D19 (17.1 g)의 빙냉각 용액을 N2 분위기하에 교반하였다. NaOtBu (1 eq)를 첨가하고, 30 분 후에 THF 중의 요오도메탄 (3.15 ml) 용액을 적가하였다. 30 분 후에, NaOtBu (1 eq)를 추가하고, 내용물을 ~0 ℃에서 교반하였다. 45 분 후 반응이 완료되면, NH4Cl의 포화 용액을 첨가하고, 반응물을 EtOAc로 희석하였다. 상을 분리하여 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (x 2). 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시켰다 (Na2SO4). 여과 및 감압하에 농축하여 조 물질을 호박색 오일로 수득하였다. 수율: 중간체 D20 17.2 g (59%).
제조예 D21
1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-3-[[2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트산 메틸 에스테르 (D21)
염화수은(II) (7 g)을 실온에서 DMF (200 ml) 중의 중간체 D20 (9.1 g) 및 2,6-디메틸-4-히드라지노피리딘·HCl (4.48 g)의 교반 용액에 첨가하였다. 실온에서 5 분 후, 생성된 반응 혼합물을 70 ℃에서 밤새 교반하였다 (반응 40% 완료). 내용물을 r.t.로 냉각하고, 용매를 감압하에 제거하였다. 생성된 잔사를 H2O 및 EtOAc로 분배하고, 상을 분리하였다. 수성상을 EtOAc로 추출하고 (x 2), 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시켰다 (Na2SO4). 여과 및 농축하여 황색 오일을 얻고, 이를 EtOAc에 취한 후, H2O 중의 황화나트륨 (4 g)의 용액을 첨가하였다 (검은색 침전 형성). 생성된 반응 혼합물을 실온에서 수 시간동안 격렬히 교반한 후, 디칼라이트를 통해 여과하였다. 상을 분리하여 수성상을 EtOAc로 추출하고 (x 2), 유기 추출물을 합해 H2O 및 염수로 차례로 세척한 다음, 건조시켰다 (Na2SO4). 내용물을 여과한 뒤, 농축시키고, 생성된 오일을 DCM에 취한 다음, Si-티올 (기능성 실리카겔)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 수 시간동안 격렬히 교반한 후, 여과한 뒤, 증발시켜 호박색 오일을 얻고, Biotage 시스템 [용리제 20% EtOAc:80% 헵탄 - 100% EtOAc, 구배 용출 (대부분의 불순물이 용출)에 이어 10% MeOH/DCM]을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 생성물을 끈적한 황색 오일로 수득하였다. 황색 오일을 DIPE에서 밤새 교반한 후, 내용물을 여과하여 담황색 분말을 수득하였다. 수율: 중간체 D21 814 mg (6%).
실시예 1
3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판산 (E1)
LiOH·H2O (0.00277 mol)를 r.t에서 THF (9 ml), MeOH (3 ml) 및 H2O (3 ml) 중의 화합물 E114 (제조예 14에 따라 제조됨) (0.00158 mol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간동안 교반하고, 용매를 감압하에 증발시켰다. HCl (2M, 20 ml)을 첨가하고, 생성된 침전을 여과한 다음, 건조시켰다. 수율: 화합물 E1 0.570 g (90%, 회색 고체).
실시예 2
3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-일)-N-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 (E2)
화합물 E114 (제조예 14에 따라 제조됨) (0.00019 mol)를 THF (1.9 ml; 0.0038 mol) 중의 CH3NH2, 2.0M에 용해시키고, 용액을 12 시간동안 환류시켰다. 약 3 시간 정도마다 THF (1 ml) 및 MeOH 중의 CH3NH2, 2.0M (1.9 ml; 0.0038 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 냉각하고, 용매를 감압하에 증발시켰다. 갈색 고체 잔사를 실리카겔 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다 (용리제: DCM/(MeOH/NH3) 100/0 - 90/10). 생성물 분획을 모아 용매를 증발시켰다. 수율: 화합물 E2 0.013 g (16%).
실시예 3
3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-일)-N,N-디메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 (E3)
화합물 E1(실시예 1에 따라 제조됨) (0.00062 mol)을 DMF (5 ml)에 용해시켰다. 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 (0.00186 mol), (3-디메틸아미노프로필)에틸카보디이미드·하이드로클로라이드 (1:1) (0.00186 mol) 및 N-에틸-N-(1-메틸에틸)-2-프로판아민 (0.00248 mol)을 첨가한 뒤, 이어서 디메틸아민·하이드로클로라이드 (1:1) (0.00124 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 혼합물을 CHCl3로 추출하였다. 유기층을 분리하여 1M HCl 용액으로 세척한 뒤, 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 여과하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 황색 고체 잔사를 얻고, (GeneVac®에서) 1 시간 더 건조시켰다. 잔사를 디에틸 에테르로 연마하고, 여과한 다음, 건조시켰다. 수율: 화합물 E3 0.245 g (92%).
실시예 4
1-(2-메톡시-3-피리디닐)-N,N-디메틸-3-[[3-(트리플루오로메톡시)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 (E4)
화합물 E76 (실시예 3에 따라 제조됨) (0.20 g; 0.0004 mol), MeOH (1 ml) 중의 NaOCH3 및 MeOH (4 ml)의 혼합물을 마이크로웨이브에서 100 ℃로 30 분동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔사를 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (Shandon Hyperprep® C18 BDS (염기 탈활성화 실리카) 8 μm, 250 g, LD. 5 cm)로 정제하였다. 2 이동상 구배를 적용하였다 (상 A: 수중 0.25% NH4HCO3 용액; 상 B: CH3CN). 목적하는 분획을 모아, 증발시키고, 건조시켰다. 수율: 화합물 E4 38 mg (21%).
실시예 5
N,N-디메틸-1-(2-메틸-3-피리디닐)-3-[[3-(트리플루오로메톡시)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 (E5)
화합물 E76 (실시예 3에 따라 제조됨) (0.20 g; 0.0004 mol), Fe(acac)3 (0.031 g; 0.0001 mol), THF (5 ml) 및 1-메틸-2-피롤리디논 (1.5 ml)의 혼합물을 실온에서 교반하고, MeOH (5 ml) 및 Et2O, 2M (2 ml) 중의 CH3MgBr을 첨가하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, DCM 및 H2O에 용해시킨 다음, 디칼라이트 상에서 여과하였다. 여액을 MgSO4에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 증발시킨 후, 생성물을 DIPE/H2O에 용해시켰다. 유기층을 분리하여 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 여액을 증발시키고, 잔사를 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (Shandon Hyperprep® C18 BDS (염기 탈활성화 실리카) 8 μm, 250 g, LD. 5 cm)로 정제하였다. 2 이동상 구배를 적용하였다 (상 A: 수중 0.25% NH4HCO3 용액; 상 B: CH3CN). 목적하는 분획을 모아, 증발시키고, 건조시켰다. 수율: 화합물 E5 81 mg (47%).
실시예 6
N,N-디메틸-1-[2-(메틸아미노)-3-피리디닐]-3-[[3-(트리플루오로메톡시)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드 (E6)
화합물 E76 (실시예 3에 따라 제조됨) (0.20 g, 0.00044 mol), CH3NH2 (2 g) 및 EtOH (20 ml)의 혼합물을 160 ℃에서 16 시간동안 교반하였다. 이어서, 용매를 증발시키고, 잔사를 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (Shandon Hyperprep® C18 BDS (염기 탈활성화 실리카) 8 μm, 250 g, LD. 5 cm)로 정제하였다. 3 이동상 구배를 적용하였다 (상 A: 수중 0.25% NH4HCO3 용액; 상 B: MeOH; 상 C: CH3CN). 순수한 분획을 모아 용매를 증발시켰다. 목적하는 화합물을 건조시켰다. 수율: 화합물 E6 0.091 g (수율: 46%).
실시예 7
3-[[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판올 (E7)
N2 분위기하에서, LiAlH4 (10.5 mmol)를 Et2O (80 ml) 중의 화합물 E113 (제조예 14에 따라 제조됨) (6.98 mmol)의 빙냉각 교반 용액에 조금씩 첨가하였다. 5 분 후, 혼합물을 실온으로 가온한 후, 밤새 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각하고, Et2O (20.9 mmol)를 추가하였다. 5 분 후, 반응 혼합물을 r.t.로 가온하고, 냉각 반응 혼합물에 LiAlH4 (3 당량; 21.0 mmol)를 추가한 다음, 혼합물을 1 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각하고, 10% NaOH로 주의하여 퀀칭하였다. 그 후, 혼합물을 실온으로 가온하고, 규조토 패드를 통해 여과하였다. 여액을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합해 염수로 세척하여, 건조시키고 (Na2SO4), 여과한 뒤, 농축하여 0.634 g의 황색 고체를 수득하였다 (수율 = 23%). 생성물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (Shandon Hyperprep® C18 BDS (염기 탈활성화 실리카) 8 μm, 250 g, LD. 5 cm)로 정제하였다. 3 이동상 구배를 적용하였다 (상 A: 수중 0.5% NH4OAc 용액 90% + 10% CH3CN; 상 B: MeOH; 상 C: CH3CN). 목적하는 분획을 모아 용매를 증발시키고, 백색 고체를 수득하였다. H2O를 첨가하고, 혼합물을 포화 NaHCO3로 중화시켰다. 그 다음에, 내용물을 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 합해 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시킨 다음, 여과한 뒤, 농축하여 백색 고체를 수득하였다. 수율: 화합물 E7 0.084 g (3%).
실시예 8 및 9
5-(3-플루오로프로필)-N-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (E8) 및 5-(3-클로로프로필)-N-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (E9)
메탄 설포닐클로라이드 (0.986 mol)를 DCM (5 ml) 중의 화합물 E7 (실시예 7에 따라 제조됨) (0.493 mmol), N-에틸-N-(1-메틸에틸)-2-프로판아민 (0.986 mmol) 및 DMAP (0.049 mmol)의 빙냉각 교반 현탁액에 적가하였다. 5 분 후, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물에 NH4Cl 포화 용액을 첨가한 다음, 이어서 H2O를 첨가하였다. 상을 분리하였다. 수성상을 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시키고 (Na2SO4), 여과한 뒤, 용매를 증발시켜 오렌지색 오일을 수득하였다. 이 오일을 THF (5 ml)에 취하고, 0 ℃로 냉각하였다. TBAF (THF 중 1.0M) (2.50 mmol)를 첨가하고, 5 내지 10 분 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 그 다음, 혼합물을 밤새 교반하였다. TBAF (THF 중 1.0M) (2.50 mmol)를 추가하고, 반응 혼합물을 50 ℃에서 2 시간동안 가열하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔사를 H2O 및 DCM으로 분배하였다. 층을 분리하였다. 수성상을 DCM으로 추출하고, 유기 추출물을 합해 세척하고, 건조 (Na2SO4)시킨 다음, 여과한 뒤, 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 이 오일을 먼저 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage; 4OM 칼럼; 용리제: DCM/MeOH 구배 용출 100/0 - 90/10)로 정제하였다. 얻은 물질을 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (Shandon Hyperprep® C18 BDS (염기 탈활성화 실리카) 8 μm, 250 g, LD. 5 cm)로 추가로 정제하였다. 2 이동상 구배를 적용하였다 (상 A: 수중 0.25% NH4HCO3 용액; 상 B: CH3CN). 목적하는 분획을 모아 후처리하였다. 수율: 화합물 E8 13 mg 및 화합물 E9 36 mg (각각 6.6% 및 17.7%).
실시예 10
3-[[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-알파-메틸-1-(2-메틸-4-피리디닐)-,(알파S)-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 (E1O)
TBAF (16.3 ml; 16.3 mmol; THF 중 1.0M)를 THF (60 ml) 중의 중간체 D14 (제조예 D.14에 따라 제조됨) (4.1 g; 6.5 mmol)의 빙냉각 교반 현탁액에 첨가하였다. 5 분 후, 생성된 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 170 분 후에, NH4Cl 포화 용액을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합해 염수로 세척하여 건조시키고 (Na2SO4), 여과한 뒤, 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 이 물질을 먼저 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage; 4OM 칼럼; 용리제: DCM/MeOH 구배 용출 100/0 - 90/10)로 정제하였다. 목적하는 분획을 모아 용매를 증발시키고,황색 오일성 고체를 수득하였다. 이 물질을 MeOH/DCM에 취하였다. 이 혼합물을 여과한 뒤, 여액을 감압하에 농축하여 1.251 g의 황색 오일성 고체를 수득하였다. 생성물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (Shandon Hyperprep® C18 BDS (염기 탈활성화 실리카) 8 μm, 250 g, LD. 5 cm)로 추가로 정제하였다. 2 이동상 구배를 적용하였다 (상 A: 수중 0.25% NH4HCO3 용액; 상 B: CH3CN). 목적하는 분획을 모아 (용매 증발 후) 크림색 분말을 수득하였다. 수율: 화합물 E1O 357 mg (13.9%).
실시예 11
N-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-5-[(1E)-1-프로페닐]-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (E11)
DIAD (0.3 ml; 1.5 mmol)를 THF (6 ml) 중의 화합물 E10 (실시예 10에 따라 제조됨) (121 mg; 0.3 mmol), p-니트로벤조산 (230.2 mg; 1.4 mmol) 및 트리페닐포스핀 (401.4 mg; 1.5 mmol)의 빙냉각 교반 용액에 적가하였다 (N2 분위기하). 반응 혼합물을 1 시간에 걸쳐 실온으로 가온하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하여 황색 오일을 수득하였다. 이 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage; 4OM 칼럼; 용리제: DCM/MeOH 구배 용출 100/0 - 90/10)로 정제하였다. 목적하는 분획을 모아 담황색 오일성 고체를 수득하였다. 이 물질을 DIPE에서 수시간동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 여과한 뒤, 침전 고체를 DIPE 및 DCM으로 세척하여 미세 크림색 분말을 수득하였다. 수율: 화합물 E11 92 mg(79.7%).
실시예 12
1-(3-클로로-4-피리디닐)-N-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]-5-(3-메톡시프로필)-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (E12)
메탄 설포닐 클로라이드 (0.050 ml; 0.646 mmol)를 DCM (2.5 ml) 중의 E14 (실시예 7에 따라 제조됨) (0.111 g; 0.258 mmol), N,N-디에틸에탄아민 (0.090 ml; 0.646 mmol) 및 DMAP (0.003 g; 0.026 mmol)의 빙냉각 교반 현탁액에 적가하였다. 5 내지 10 분 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2.5 시간 후, LCMS로 메실레이트를 확인하고, 출발 물질이 존재하지 않는 것을 확인하였다. 반응 혼합물에 NH4Cl 포화 용액을 첨가한 다음, 이어서 물을 첨가하였다. 수성상을 DCM으로 추출하고, 유기 추출물을 합해 염수로 세척하여 건조시키고 (Na2SO4), 여과한 뒤, 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 오일을 NaOMe (5 ml)에 취하고, 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. NaOMe (5 ml)를 추가하고, 반응 혼합물을 50 ℃에서 2 시간동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각하고, NH4Cl 포화 용액을 첨가한 다음에 물을 첨가하고, 상을 분리하였다. 수성상을 DCM으로 추출하고, 유기 추출물을 합해 염수로 세척한 다음, 건조시키고 (Na2SO4), 여과한 뒤, 농축하여 담황색 오일을 수득하였다. 잔사를 Biotage 시스템 [용리제 DCM - 10% MeOH/DCM] 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 관련 분획을 합해 황색 오일을 얻고, RP 크로마토그래피로 정제하여 크림색 고체를 수득하였다. 수율: 화합물 E12 22 mg (100%).
실시예 137
(알파S)-알파-에틸-3-[[3-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올 (E137)
TBAF (57.4 ml; 57.4 mmol; THF 중 1.0M)를 THF (200 ml) 중의 중간체 D18 (제조예 D.18에 따라 제조됨) (12.6 g; 19.1 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 24 시간동안 교반하였다. NH4Cl 포화 용액을 첨가하고, 혼합물을 5 내지 10 분동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다 (x 3). 유기 추출물을 합해 물로 대부분의 TBAF가 사라질 때까지 세척 (x 5)한 후, 염수로 세척하여 건조시키고 (Na2SO4), 여과한 뒤, 감압하에 농축하여 호박색 오일을 수득하였다. 이 물질을 Flashmaster 및 Biotage 시스템 [용리제: DCM - 5% CH3OH/DCM, 구배 용출 100/0 - 90/10]을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제한 후, 관련 분획을 모아 크림색 분말을 수득하였다. 수율: 화합물 E137 1.3 g (16.1%).
실시예 257
N-사이클로프로필-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-3-[[2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드 (E257)
사이클로프로필아민 (5 ml)을 MeOH (5 ml) 중의 중간체 D21 (D21에 따라 제조됨) (1.41 mmol)의 교반 현탁액에 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 40 ℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 담황색/크림색 분말을 수득하였다. 이 물질을 MeCN으로 결정화시킨 다음 (생성물은 80 ℃에서 용해), 내용물을 여과한 뒤, 건조시켜 솜털같은 백색 분말을 수득하였다. 수율: 화합물 E257 527 mg (83%).
표 1 및 2에 상기 실시예에 따라 제조된 화학식 (I)의 화합물이 열거되어 있다.
표에서, S-enantiomer는 S-거울상 이성체를 가리키고, R-enantiomer는 R-거울상 이성체를 가리키며, RS-mixture는 RS-혼합물을 가리키고, enantiomer는 거울상 이성체를 가리키며, Ex.는 실시예를 가리킨다.
분석 부분
LCMS
LCMS 일반 방법 A
하기 각 방법에 특정된 칼럼, 다이오드 어레이 검출기 (DAD), 칼럼 오븐 (달리 언급이 없으면 40 ℃로 설정), 오토샘플러 및 탈기 장치를 갖춘 쿼터너리 (quaternary) 펌프를 구비한 Alliance HT 2790 (Waters) 시스템을 이용하여 HPLC 측정을 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 MS 분광계에 분배하였다. MS 검출기에 전기 분무 이온화 공급원을 설치하였다. 질량 스펙트럼은 0.1 초의 체류 시간을 이용하여, 1 초에 100 내지 1000회 스캔하여 얻었다. 캐필러리 니들 (capillary needle) 전압은 3 kV였고, 공급원 온도는 140 ℃로 유지하였다. 질소를 네뷸라이저 가스(nebulizer gas)로 사용하였다. Waters-Micromass MassLynx-Openlynx 데이터 시스템을 이용하여 데이터를 수집하였다.
LCMS 일반 방법 B
하기 각 방법에 특정된 칼럼, Gilson 215 오토샘플러를 갖춘 다이오드 어레이 검출기 (DAD) 및 펌프를 구비한 Agilent 1100 모듈을 이용하여 HPLC 측정을 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 MS 분광계에 분배하였다. 이온화는 화합물 종류에 따라 전기 분무 또는 APCI (대기압 화학 이온화)였다. 전형적인 전기 분무 조건은 3.5 kV의 캐필러리 니들 전압 및 25V의 콘 전압을 사용하고, 공급원 온도는 120 내지 150 ℃로 유지하였다 (정확한 온도는 화합물 별로 결정됨). 전형적인 APCI 조건은 17 μA의 코로나 방전 전류, 25 V의 콘 전압 및 350 ℃의 탈용매화 온도를 사용하였고, 공급원 온도는 140 내지 160 ℃로 유지하였다 (정확한 온도는 화합물 별로 결정됨). 질량 스펙트럼은 예를 들어 0.1 초의 체류 시간을 이용하여, 1 초에 100 내지 650회 또는 경우에 따라 1000회 스캔하여 얻었다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다.
LCMS 일반 방법 C
하기 각 방법에 특정된 칼럼 및 Gilson 215 오토샘플러를 갖춘 Waters 다이오드 어레이 검출기 (DAD)를 구비한 Waters 1512 펌프를 이용하여 HPLC 측정을 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 MS 분광계에 분배하였다. 이온화는 화합물 종류에 따라 전기 분무 또는 APCI (대기압 화학 이온화)였다. 전형적인 전기 분무 조건은 3.5 kV의 캐필러리 니들 전압 및 25V의 콘 전압을 사용하였다. 공급원 온도는 120 내지 150 ℃로 유지하였다 (정확한 온도는 화합물 별로 결정됨).
전형적인 APCI 조건은 17 μA의 코로나 방전 전류, 25 V의 콘 전압 및 350 ℃의 탈용매화 온도를 사용하였고, 공급원 온도는 140 내지 160 ℃로 유지하였다 (정확한 온도는 화합물 별로 결정됨). 질량 스펙트럼은 예를 들어 0.1 초의 체류 시간을 이용하여, 1 초에 100 내지 650회 또는 경우에 따라 1000회 스캔하여 얻었다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다.
LCMS 일반 방법 D
LC 측정을 하기 각 방법에 특정된 칼럼, 다이오드 어레이 검출기 (DAD), 칼럼 히터 (55 ℃로 설정), 샘플 오거나이저 (organizer) 및 바이너리 펌프를 구비한 Acquity UPLC (Waters) 시스템을 이용하여 LC 측정을 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 MS 분광계에 분배하였다. MS 검출기에 전기 분무 이온화 공급원을 설치하였다. 0.02 초의 체류 시간을 이용하여, 0.18 초에 100 내지 1000회 스캔하여 질량 스펙트럼을 얻었다. 캐필러리 니들 전압은 3.5 kV이었고, 공급원 온도는 140 ℃로 유지하였다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다. Waters-Micromass MassLynx-Openlynx 데이터 시스템을 이용하여 데이터를 수집하였다.
LCMS 일반 방법 E
하기 각 방법에 특정된 칼럼, 다이오드 어레이 검출기 (DAD), 칼럼 오븐, 오토샘플러 및 탈기 장치를 갖춘 펌프 (쿼터너리 또는 바이너리)를 구비한 HP 1100 (Agilent Technologies) 시스템을 이용하여 HPLC 측정을 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 MS 분광계에 분배하였다. MS 검출기에 전기 분무 이온화 공급원 또는 ESCI 듀얼 이온화 공급원 (대기압 화학 이온화와 조합된 전기 분무)을 설치하였다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다. 공급원 온도는 140 ℃로 유지하였다. MassLynx-Openlynx 소프트웨어로 데이터를 수집하였다.
LCMS 일반 방법 F
하기 각 방법에 특정된 칼럼, 다이오드 어레이 검출기 (DAD), 4 칼럼 오븐, 탈기 장치를 갖춘 바이너리 펌프 및 샘플러 오거나이저를 구비한 Acquity UPLC (Waters) 시스템을 이용하여 UPLC (초고성능 액체 크로마토그래피) 측정을 수행하였다. 칼럼 유량을 MS 검출기에 분배없이 사용하였다. MS 검출기에 ESCI 듀얼 이온화 공급원 (대기압 화학 이온화와 조합된 전기 분무)을 설치하였다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다. 공급원 온도는 140 ℃로 유지하였다. MassLynx-Openlynx 소프트웨어로 데이터를 수집하였다.
LCMS 일반 방법 G
하기 각 방법에 특정된 칼럼, 다이오드 어레이 검출기 (DAD), 칼럼 히터 (55 ℃로 설정), 샘플 오거나이저 및 바이너리 펌프를 구비한 Acquity UPLC (Waters) 시스템을 이용하여 LC 측정을 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 MS 분광계에 분배하였다. MS 검출기에 전기 분무 이온화 공급원을 설치하였다. 0.02 초의 체류 시간을 이용하여, 0.18 초에 100 내지 1000회 스캔하여 질량 스펙트럼을 얻었다. 캐필러리 니들 전압은 3.5 kV이었고, 공급원 온도는 140 ℃로 유지하였다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다. Waters-Micromass MassLynx-Openlynx 데이터 시스템을 이용하여 데이터를 수집하였다.
LCMS - 방법 1
일반 방법 A 외에, 역상 HPLC를 Xterra MS C18 칼럼 (3.5 ㎛, 4.6 × 100 mm) 상에서 1.6 ml/분의 유속으로 행하였다. 3개의 이동상 (이동상 A: 95% 25 mM 암모늄아세테이트 + 5% 아세토니트릴; 이동상 B: 아세토니트릴; 이동상 C: 메탄올)을 사용하여, 100% A - 1% A, 49% B 및 50% C로 6.5 분에서 1% A 및 99% B로 1 분의 구배 조건을 행하고, 이 조건을 1 분간 유지한 후, 100% A로 1.5 분간 평형화시켰다. 10 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 2
일반 방법 A 외에, 칼럼 히터를 60 ℃로 설정하였다. 역상 HPLC를 Xterra MS C18 칼럼 (3.5 ㎛, 4.6 × 100 mm) 상에서 1.6 ml/분의 유속으로 행하였다. 3개의 이동상 (이동상 A: 95% 25 mM 암모늄 아세테이트 + 5% CH3CN; 이동상 B: CH3CN; 이동상 C: MeOH)을 사용하여, 100% A - 50% B 및 50% C로 6.5 분에서 100% B로 0.5 분의 구배 조건을 행하고, 이 조건을 1 분간 유지한 후, 100% A로 1.5 분간 평형화시켰다. 10 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 3
일반 방법 A 외에, 칼럼 히터를 45 ℃로 설정하였다. 역상 HPLC를 Xterra MS C18 칼럼 (3.5 ㎛, 4.6 × 100 mm) 상에서 1.6 ml/분의 유속으로 행하였다. 3개의 이동상 (이동상 A: 95/5 H2O/메탄올중 0.1% 포름산; 이동상 B: 아세토니트릴; 이동상 C: 메탄올)을 사용하여, 100% A - 1% A, 49% B 및 50% C로 7 분의 구배 조건을 행하고, 이 조건을 1 분간 유지하였다. 10 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해 10 V이었다.
LCMS - 방법 4
일반 방법 B 외에, 역상 HPLC를 Phenomenex Luna 5μ C18 (2) 칼럼 (4.6 x 100 mm; + 가드 캐트리지) 상에서 2 ml/분의 유속으로 행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 물과 0.1% 포름산; 이동상 B: CH3CN과 0.1%(V/V) 포름산)을 사용하여, 95% A - 95% B의 구배 조건을 2 ml/분의 유속으로 3.5 분 행하고, 2 분간 유지하였다. 전형적으로, 주입 부피는 2 μl 부터 7 μl 까지를 사용하였다.
LCMS - 방법 5
일반 방법 C 외에, 역상 HPLC를 Waters Xterra MS 5μ C18 칼럼 (4.6 × 100 mm; + 가드 캐트리지) 상에서 2 ml/분의 유속으로 행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 10 mM 중탄산암모늄; 이동상 B: CH3CN)을 사용하여, 95% A - 95% B의 구배 조건을 2 ml/분의 유속으로 3.5 분 행하고, 2 분간 유지하였다. 전형적으로, 주입 부피는 2 μl 부터 7 μl 까지를 사용하였다.
LCMS - 방법 6
일반 방법 A 외에, 칼럼 히터를 45 ℃로 설정하였다. 역상 HPLC를 Atlantis C18 칼럼 (3.5 μm, 4.6 × 100 mm) 상에서 1.6 ml/분의 유속으로 행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 70% MeOH + 30% H2O; 이동상 B: 95/5 H2O/메탄올중 0.1% 포름산)을 사용하여, 100% B - 5% B + 95% A로 9 분의 구배 조건을 행하고, 이 조건을 3 분간 유지하였다. 10 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 7
일반 방법 D 외에, 역상 UPLC (초고성능 액체 크로마토그래피)를 브릿지 에틸실록산/실리카 하이브리드 (BEH) C18 칼럼 (1.7 μm, 2.1 × 50 mm; Waters Acquity) 상에서 0.8 ml/분의 유속으로 행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 95/5 H2O/메탄올중 0.1% 포름산; 이동상 B: MeOH)을 사용하여, 95% A 및 5% B - 5% A 및 95% B로 1.3 분의 구배 조건을 행하고, 0.2 분간 유지하였다. 0.5 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 8
일반 방법 A 외에, 역상 HPLC를 Atlantis C18 칼럼 (3.5 μm, 4.6 × 100 mm) 상에서 1.6 ml/분의 유속으로 행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 70% MeOH + 30% H2O; 이동상 B: 95/5 H2O/메탄올중 0.1% 포름산)을 사용하여, 100% B - 5% B + 95% A로 12 분의 구배 조건을 행하였다. 10 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 9
일반 방법 A 외에, 역상 HPLC를 Chromolith (4.6 × 25 mm) 상에서 3 ml/분의 유속으로 행하였다. 3개의 이동상 (이동상 A: 95% 25 mM 암모늄 아세테이트 + 5% CH3CN; 이동상 B: CH3CN; 이동상 C: MeOH)을 사용하여, 96% A, 2% B 및 2% C - 49% B 및 49% C로 0.9 분에서 100% B로 0.3 분의 구배 조건을 행하고, 0.2 분간 유지하였다. 2 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 10
일반 방법 A 외에, 칼럼 히터를 60 ℃로 설정하였다. 역상 HPLC를 Xterra MS C18 칼럼 (3.5 μm, 4.6 × 100 mm) 상에서 1.6 ml/분의 유속으로 행하였다. 3개의 이동상 (이동상 A: 95% 25 mM 암모늄아세테이트 + 5% 아세토니트릴; 이동상 B: 아세토니트릴; 이동상 C: 메탄올)을 사용하여, 100% A - 50% B 및 50% C로 6.5 분에서 100% B로 0.5 분의 구배 조건을 행하고, 이 조건을 1 분간 유지한 후, 100% A로 1.5 분간 평형화시켰다. 10 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
LCMS - 방법 11
일반 방법 E 외에, 역상 HPLC를 Waters 제품인 Sunfire-C18 칼럼 (2.5 μm, 2.1 × 30 mm) 상에서 1.0 ml/분의 유속으로 60 ℃에서 행하였다. 사용한 구배 조건은 다음과 같다: 95% A (0.5 g/1 암모늄 아세테이트 용액 + 5% 아세토니트릴), 2.5% B (아세토니트릴), 2.5% C (메탄올) - 50% B, 50% C, 6.5 분, 7.0 분까지 유지 및 7.3 분에서 9.0 분까지 초기 조건으로 평형화. 주입량은 2 μl이었다. 고분해능 질량 스펙트럼 (비행시간, TOF 검출기)은 0.3 초의 체류시간을 이용하여 0.5 초에 100 내지 750회 스캔하여 얻었다. 캐필러리 니들 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 2.5 kV이고, 음 이온화 모드에 대해서는 2.9 kV이었다. 양 이온화 모드 및 음 이온화 모드에 대한 콘 전압은 양쪽 다 20 V이었다. 류신-엔케팔린이 록 질량 보정 (lock mass calibration)에 표준 물질로 사용되었다.
LCMS - 방법 12
일반 방법 F 외에, 역상 UPLC를 Waters 제품인 BEH-C18 칼럼 (1.7 μm, 2.1 × 50 mm) 상에서 0.8 ml/분의 유속으로 60 ℃에서 MS 검출기에 분배없이 행하였다. 사용한 구배 조건은 다음과 같다: 95% A (0.5 g/1 암모늄 아세테이트 용액 + 5% 아세토니트릴), 5% B (아세토니트릴/메탄올, 1/1 혼합물) - 20% A, 80% B로 4.9 분에서 100% B로 5.3 분, 5.8 분까지 유지 및 6.0 분에서 7.0 분까지 초기 조건으로 평형화. 주입량은 0.5 μl이었다. 저분해능 질량 스펙트럼 (single quadrupole, SQD 검출기)은 0.08 초의 내부-채널 지연을 이용하여 0.1 초에 100 내지 1000회 스캔하여 얻었다. 캐필러리 니들 전압은 3 kV이었다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 20 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 30 V이었다.
LCMS - 방법 13
일반 방법 D 외에, 역상 UPLC (초고성능 액체 크로마토그래피)를 브릿지 에틸실록산/실리카 하이브리드 (BEH) C18 칼럼 (1.7 μm, 2.1 × 50 mm; Waters Acquity) 상에서 0.8 ml/분의 유속으로 행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 95/5 H2O/메탄올중 25 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴)을 사용하여, 95% A 및 5% B - 5% A 및 95% B로 1.3 분의 구배 조건을 행하고, 0.3 분간 유지하였다. 0.5 ㎕의 주입량을 사용하였다. 콘 전압은 양 이온화 모드에 대해서는 10 V이고, 음 이온화 모드에 대해서는 20 V이었다.
융점
다수의 화합물에 대해, Mettler-Toledo사 제품인 DSC823e로 융점을 결정하였다. 융점은 30 ℃/분의 온도 구배로 측정되었으며, 값은 피크 값이다.
표 3:
분석 데이터 - 체류 시간 (Rt, 분), (MH)+ 피크, LCMS 방법 및 융점 (m.p.는 융점을 의미한다).
표 4:
분석 데이터 - 체류 시간 (Rt, 분), (MH)- 피크, LCMS 방법 및 융점 (m.p.는 융점을 의미한다).
선광도
일부 화합물에 대해서, Perkin Elmer 341 편광계를 사용하여 선광도를 측정하였다 (결과는 표 5에 나타냄). [α]D 20은 20 ℃의 온도에서 589 nm 또는 365 nm의 파장 광으로 측정된 선광도를 가리킨다. 셀 경로길이는 1 dm이었다. 실제 값 외에, 선광도를 측정하기 위하여 사용되는 용액의 농도가 언급된다. 화합물 E282번 및 E283번을 제외한 모든 측정은 메탄올에서 수행되었다. 화합물 E282번 및 E283번을 측정하는데는 DMF가 용매로 사용되었다.
표 5:
선광도
NMR
다수의 화합물에 있어서, 1H NMR 스펙트럼이 각각 360 MHz 및 400 MHz에서 작동하는 표준 펄스열을 갖춘 Bruker DPX-360 또는 Bruker DPX-400 분광계에서 DMSO-d6을 용매로 사용하여 기록되었다. 화학적 시프트(δ)는 표준으로 사용된 테트라메틸실란 (TMS)에 대해서 백만분율 (ppm) 값으로 주어졌다.
SFC-MS
일부 화합물에 대해, 이산화탄소 (CO2) 전달 및 변경용 듀얼 펌프 제어 모듈 (FCM-1200), 온도를 1 내지 150 ℃ 범위에서 조절하고 여섯개의 상이한 칼럼에 대한 칼럼 섹션 밸브 (Valco, VICI, Houston, TX, USA)를 갖춘 칼럼 가열 (TCM2100)용 열 제어 모듈을 구비한 분석용 SFC 시스템(Berger Instruments (Newark, DE, USA) 사 제품)을 사용하여 SFC-MS (초임계 유체 크로마토그래피-질량 분석)가 측정되었다. 포토다이오드 어레이 (photodiode array) 검출기 (Agilent 1100, Waldbronn, Germany)에 고압 플로우 셀 (high-pressure flow cell) (400 bar 이하)을 장착하고, CTC LC Mini PAL 오토 샘플러 (Leap Technologies, Carrboro, NC, USA)를 설치하였다. 직교 Z-전기 분무 인터페이스가 있는 ZQ 질량 분석기 (Waters, Milford, MA, USA)를 SFC-시스템에 결합하였다. 장비 제어, 데이터 수집 및 처리는 SFC ProNTo 소프트웨어 및 Masslynx 소프트웨어로 구성된 통합 플랫폼으로 수행하였다.
E24번 화합물은 4개의 상이한 칼럼 (Chiralcel OJ-H, Chiralpak AD-H, Chiralcel OD-H, Chiral-pak AS-H; 500 × 4.6 mm; Daicel Chemical Industries Ltd) 및 3개의 상이한 용매 (MeOH, EtOH, 2-프로판올; 용매는 0.2% 2-프로필아민을 함유함)로 스크리닝한 경우, 100% 거울상 이성체 과량인 것으로 확인되었다. SFC-MS는 상기 언급된 칼럼중 하나를 3 ml/분의 유속으로 사용하여 수행하였다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 상기 언급된 용매중 하나)을 10% B - 40% B로 18.75 분의 조건으로 실행하였다. 이어, 40% B - 50% B로 2 분의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E1O, E17, E19, E20, E18, E22, E126, E208, E207, E144, E198, E197, E199 및 E189번 화합물의 SFC-MS 측정에 대해서는 E24번 화합물과 동일한 SFC-MS 조건을 이용하였다. 이들 모든 화합물은 스크리닝 조건하에서 100% 거울상 이성체 과량인 것으로 확인되었다.
E30번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 97.48%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 EtOH)을 10% B - 40% B로 18.75 분간의 조건으로 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분간의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E30번 화합물과 동일한 SFC-MS 조건을 E137번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 동일한 조건을 또한 E139번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 93.57%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E172번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 97.73%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E173번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 97.29%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E145번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.01%인 것으로 확인되었다.
E129번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 96.83%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 MeOH)을 사용하여, 10% B - 40% B로 18.75 분간의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분간의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E21번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 99.40%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 MeOH)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분간의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E21번 화합물과 동일한 SFC-MS 조건을 E25번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.76%인 것으로 확인되었다.
E26번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 99.36%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 EtOH)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분간의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E28번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 97.52%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 메탄올)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E28번 화합물과 동일한 SFC-MS 조건을 E133번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 98.34%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E187번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 97.87%인 것으로 확인되었다.
E27번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 98.69%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 EtOH)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E27번 화합물과 동일한 SFC-MS 조건을 E128번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.30%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E132번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 97.11%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E138번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 96.77%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E148번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.25%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E149번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.11%인 것으로 확인되었다.
E29번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 97.89%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 2-프로판올)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E131번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 99.60%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 MeOH)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 의 조건을 실행하였다. 이어서, 40% B - 50% B로 2 분의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E131번 화합물과 동일한 SFC-MS 조건을 E146번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.55%인 것으로 확인되었다. 동일한 조건을 또한 E142번 화합물의 SFC-MS 측정에 이용하였다. 이들 조건하에서 거울상 이성체 순도는 99.09%인 것으로 확인되었다.
E282번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 100%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 메탄올)을 이용하였다. 먼저, 15% B를 17.16 분간 유지하였다. 이어서, 15% B - 50% B로 7 분의 구배를 적용하고, 1.34 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다. 이 측정을 라세미 혼합물에 대한 측정과 비교하였다.
E196번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 93.73%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 에탄올)을 이용하였다. 먼저, 15% B를 18 분간 유지하였다. 이어서, 15% B - 50% B로 3.5 분의 구배를 적용하고, 3.1 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
E195번 화합물은 Chiralcel OJ-H 칼럼 (500 × 4.6 mm) (Daicel Chemical Industries Ltd) 상에서 3 ml/분의 유속으로 SFC-MS를 수행한 경우, 거울상 이성체 순도가 99.51%인 것으로 확인되었다. 두개의 이동상 (이동상 A: CO2; 이동상 B: 0.2% 2-프로필아민을 함유하는 에탄올)을 사용하여 10% B - 40% B로 18.75 분간의 조건을 실행하였다 이어서, 40% B - 50% B로 2 분의 구배를 적용하고, 3.6 분간 유지하였다. 칼럼 온도는 50 ℃로 설정하였다.
D. 약리학적 실시예
실시예 D.1 a: Ca
2+
유출 이미지화 (FLIPR) (프로토콜 A)
일반적으로 포유동물 세포 및 랫트 GH4C1 세포에서, 특히 코딩 영역이 프로모터의 다운스트림에 위치하고 인간 α7 야생형 서열 (hα7-wt nAChR)을 암호화하는 cDNA 클론의 안정한 발현으로, 포유 동물 세포의 표면에 기능성 α7 nAChR이 나타나게 된다. 이 기술은 α7 야생형 단백질의 기능을 평가하는 강력한 수단이 된다. α7 니코틴 수용체의 양이온 투과성이 칼슘에 우선적이라는 점을 감안하여, GH4C1 세포주에서 안정하게 발현된 hα7-wt nAChR을 통한 Ca2+ 유출 형광 이미지화를 본 발명에 따른 화합물의 조절제 활성을 분석하기 위한 첫번째 수단으로 사용하였다.
재료
a) 분석 완충액
2.5 mM 프로베네시드 (Sigma-Aldrich NV, Belgium), 0.1% 소 혈청 알부민 (Sigma-Aldrich NV, Belgium), 5 mM의 최종 농도로 CaCl2, 10 mM HEPES (Invitrogen, Belgium)로 보충된 행크스 완충 식염수 (HBSS, Invitrogen, Belgium).
b) 칼슘-민감성 염료 - Fluo-4AM
Fluo-4AM (Molecular Probes, USA)를 10% 플루론산(Pluronic acid) (Molecular Probes, USA)를 함유하는 DMSO 중에 용해시켜 분취 원액을 제공하고, 이후 사용시 까지 -20 ℃에서 보관하였다. 실험 당일, Fluo-4AM 원액을 해동시키고, DMEM/F12 (Invitrogen, Belgium) 중에 희석하여 4 μM의 최종 농도로 하였다.
c) 96-웰 플레이트
BD Biocoat 폴리-D-라이신 96-웰 블랙/투명 플레이트 (BD Biosciences, Belgium).
d) 칼슘 유출 측정
형광분석 이미지화 플레이트 판독기(Fluorimetric Imaging Plate Reader: FLIPR, Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, USA)를 사용하여 세포 내 유리-칼슘 유출 신호를 측정하였다.
방법
hα7-wt nAChR-발현 세포 단층을 형광 칼슘 지시자를 로딩하기 전, 특정 구체예에 있어서, 최대 90분 동안 fluo-3 또는 fluo-4AM을 로딩하기 전, 보다 더욱 특정한 구체예에 있어서, 최대 90분 동안 fluo-4AM을 로딩하기 전 및 바람직한 구체예에서 최대 60분 동안 fluo-4AM을 로딩하기 전에, 다중-웰 플레이트, 특히 폴리-D-라이신으로 코팅된 투명 바닥의 흑색면 96 웰 플레이트에서 24 시간 동안 증식시켰다.
FLIPR에서 세포 형광을 지속적으로 모니터하면서 α7 니코틴 수용체 작용제와 함께 로딩 세포에 시험 화합물을 적용하여 PAM 활성을 실시간으로 검출하였다. 작용제 단독에 의한 응답보다 큰 피크 형광 응답을 제공하는 화합물은 α7 nAChR PAM의 것으로 여겨진다. 특정 구체예에 있어서, α7 니코틴 수용체 작용제는 콜린, 더욱 특정한 구체예에 있어서 100 μM의 준최대(sub-maximal) 농도로 적용되는 콜린이다. 본 발명의 추가 설정으로, 시험 화합물을 α7 니코틴 수용체 작용제에 앞서 적용하는데, 특정 구체예에 있어서 작용제 최대 20분 전, 더욱 특정한 구체예에 있어서 작용제 최대 10분 전 및 보다 더욱 특정한 구체예에 있어서 작용제 10분 전에 적용한다.
콜린 또는 분석 완충액이 단독으로 제공된 웰에서 형광 피크 차로부터 각 플레이트 상에서의 콜린에 대한 대조 반응을 계산하였다. 본 발명의 화합물을 0.1 μM 내지 50 μM의 농도 범위로 시험하였다. 최대 효과를 갖는 농도, 전형적으로 0.1 μM 내지 50 μM에서 시험되는 경우, 효능이 적어도 500%일 때 화합물이 유용한 활성을 지니는 것으로 간주된다 (PAM 부재 하에 100 μM 콜린 효능을 100%로 하였다). 화합물은 또한 인간 야생형 α7 수용체를 안정적으로 과발현하는 GH4C1 세포에서 전 세포 팻취 클램프 전기생리학으로 측정된 경우 콜린에 대한 반응에 강력한 효과를 나타낸다.
실시예 D.1 b: Ca
2+
유출 이미지화 (FDSS) (프로토콜 B)
재료
a) 분석 완충액
0.1% 소 혈청 알부민 (Sigma-Aldrich NV, Belgium), 5 mM의 최종 농도로 CaCl2, 10 mM HEPES (Invitrogen, Belgium)로 보충된 행크스 완충 식염수 (HBSS, Invitrogen, Belgium).
b) 칼슘-민감성 염료 - Fluo-4AM
Fluo-4AM (Molecular Probes, USA)를 10% 플루론산 (Molecular Probes, USA)를 함유하는 DMSO 중에 용해시켜 원액을 제공하고, 2 μM의 최종 농도가 제공되도록 5 mM 프로베네시드 (Sigma-Aldrich NV, Belgium)로 보충된 분석 완충액에서 희석시켰다.
c) 384-웰 플레이트
PDL 예비-코팅된 블랙 384 웰 플레이트 블랙/투명 플레이트 (Corning, Incorporated, USA).
d) 칼슘 유출 측정
기능성 약물 스크리닝 시스템 (FDSS, Hamamatsu)을 사용하여 세포내 유리-칼슘 유출 신호를 측정하였다.
방법
hα7-wt nAChR-발현 세포 단층을 형광 칼슘 지시자를 로딩하기 전, 특정 구체예에 있어서 최대 120분 동안 fluo-4AM을 로딩하기 전에 다중 웰 플레이트, 특히 폴리-D-라이신으로 코팅된 투명 바닥의 흑색면 384 웰 플레이트에서 24 시간동안 증식시켰다.
FDSS에서 세포 형광을 지속적으로 모니터하면서 α7 니코틴 수용체 작용제와 함께 로딩 세포에 시험 화합물을 적용하여 PAM 활성을 실시간으로 검출하였다. 작용제 단독에 의한 반응보다 큰 피크 형광 반응을 제공하는 화합물은 α7 nAChR PAM의 것으로 여겨진다. 특정 구체예에 있어서, α7 니코틴 수용체 작용제는 콜린, 더욱 특정한 구체예에 있어서 100 μM의 준최대 농도로 적용되는 콜린이다. 본 발명의 추가 설정으로, 시험 화합물은 α7 니코틴 수용체 작용제에 앞서 적용되며, 특정 구체예에 있어서 작용제 최대 10분 전에 적용된다.
콜린 또는 분석 완충액이 단독으로 제공된 웰에서 형광 피크 차로부터 각 플레이트 상에서의 콜린에 대한 대조 반응을 계산하였다. 본 발명의 화합물을 0.01 μM 내지 30 μM의 농도 범위로 시험하였다. 30 μM의 농도에서 시험되는 경우, 콜린 신호를 적어도 500% 강화시킬 때, 화합물이 유용한 활성을 지니는 것으로 간주된다 (PAM 부재 하에 100 μM 콜린의 효능을 100%로 하였다). 화합물은 또한 인간 야생형 α7 수용체를 안정적으로 과발현하는 GH4C1 세포에서 전 세포 팻취 클램프 전기생리학으로 측정된 경우 콜린에 대한 반응에 강력한 효과를 나타낸다.
실시예 D.2: 팻취-클램프(Patch-clamp) 전류 기록
포유동물 세포로부터의 팻취-클램프 기록은 리간드-개폐 이온 채널의 서브유닛인 것으로 판단되는 막-결합 단백질의 기능을 평가하는 유력한 수단을 제공한다. 내인성 또는 외인성 리간드에 의한 단백질의 활성화로 전기화학 구배에 따라 이온이 흐르는 수용체와 관련된 기공 개방이 유도된다. hα7-wt nAChR-발현 GH4C1 재조합 세포주의 경우, 상기 수용체의 칼슘에 대한 우선적인 투과성으로 ACh, 콜린 및 다른 니코틴성 리간드에 의한 활성화시 세포로 칼슘이 흘러 칼슘 전류가 발생하게 된다. 작용제의 존재하에서 이러한 수용체가 빠르게 탈감작되기 때문에, 용액을 매우 빠르게 교환시켜(<100 ms) 작용제 적용과 동시에 수용체 반응의 부분적 또는 전체적 탈감작화를 방지할 수 있는 적용 시스템을 사용하는 것이 중요하다. 따라서, 니코틴 효능의 증진을 평가하기 위한 편리한 두번째 기술은 신속-적용 시스템과 결합된 hα7-wt nAChR-발현 GH4C1 세포로부터의 팻취-클램프 기록이다.
재료
a) 분석 완충액
외부 기록 용액은 152 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1 mM 칼슘, 10 mM HEPES; pH 7.3으로 이루어졌다. 내부 기록 용액은 140 mM CsCl, 10 mM HEPES, 10 mM EGTA, 1 mM MgCl2, pH 7.3으로 이루어졌다.
b) 팻취-클램프 증폭기 (Multiclamp 700A, Axon Instruments, CA, USA)를 사용하여 팻취-클램프 기록을 수행하였다. hα7-wt nAChR-발현 GH4C1 세포는 내부 기록 용액으로 채워지는 경우 보로실리케이트 유리 전극의 팁 저항이 1.5 내지 3 MΩ인 전 세포 배열(Hamill et al, 1981)의 팻취-클램프이다. 막 저항 >500 MΩ, 더욱 바람직하게 1GΩ 및 적어도 60% 직렬 저항 보상과 함께 직렬 저항 <15 MΩ으로 세포에서 기록하였다. 막 전위를 -70 mV에서 클램핑하였다.
c) 작용제
ACh, 콜린은 Sigma-Aldrich NV, Belgium에서 구입하였다.
d) 화합물 적용
hα7-wt nAChR-발현 GH4C1 세포에 대조군, 작용제 및 PAM 화합물을 적용하는데 용액의 급속 교환 (교환 분할 시간 <100 ms)을 위해 16-채널 Dynflow DF-16 미세 유체 공학 시스템 (Cellectricon. Sweden)이 이용되었다.
방법
hα7-wt nAChR-발현 GH4C1 세포를 Dynaflow 관류 챔버에서 외부 기록 용액에 플레이팅하고, 최대 20분 동안 정착시켰다. 개개의 세포를 전-세포 패칭하고, 지속적인 흐름의 외부 기록 용액 관류 스트림 (12 ㎕/분)에서 팻취 피펫을 사용하여 챔버 바닥으로부터 서서히 들어올렸다. 세포 막 전류를 지속적으로 모니터하면서 시험 화합물을 로딩 세포에 예비-적용한 다음, α7 니코틴 수용체 작용제 적용으로 PAM 활성을 실시간으로 검출하였다. 작용제 단독에 의한 응답보다 큰 전류 응답을 제공하는 화합물은 α7 nAChR PAM의 것으로 판단된다. 특정 구체예에 있어서, α7 니코틴 수용체 작용제는 비-선택적 니코틴 작용제에 의하여 활성화되며, 더욱 특정한 구체예에 있어서 작용제는 콜린이고, 보다 더욱 특정한 구체예에 있어서, 1 mM의 준최대 농도로 적용되는 콜린이다. 본 발명의 추가 설정으로, 시험 화합물이 α7 니코틴 수용체 작용제에 앞서 적용되며, 더욱 특정한 구체예에 있어서 작용제 최대 30초 전 및 더욱 특정한 구체예에 있어서 작용제 최대 5초 전에 적용된다. 250 ms 동안 준최대 콜린 적용에 대해서, 각 세포에서 유도된 전류의 곡선 아래 면적으로부터 대조 반응을 산출하였다. 곡선 아래 면적은 시간에 대한 순 전류 통합이며, 채널을 통한 총 이온 유출의 공통 제시이다. 양성 알로스테릭 조절제에 의해 유도되는 작용제의 효능 증가는 작용제 반응의 "곡선 아래 면적"(AUC)의 강화 퍼센트로서 산출된다. 본 발명의 화합물에 의해 유도되는 대조군의 AUC보다 큰 상승 작용은 화합물이 유용한 치료 활성을 가지는 것으로 예상됨을 제시한다. EC50 값 (효능), 최대 효과 (효과%) 및 Hill 기울기를 GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)를 사용하여 데이터를 로지스틱 방정식 (logistic equation)에 피팅시켜 평가하였다.
PAM 타입에 대해서는 상기 언급되었다.
EC50 (또는 pEC50)은 꼭대기 고점과 함께 명확한 시그모이드 곡선이 얻어졌을 때 최대 효과의 절반에 대한 농도로서 결정되었다. 화합물 활성이 최대 농도에서 꼭대기 고점에 도달하지 않은 경우 EC50 (또는 pEC50)은 최대 농도보다 낮은 것으로 하였다 (표 6에서 "< 5"로 나타냄).
표 6: 다수의 화합물에 대한 효능 (pEC50) (실시예 D.2에 따름) 및 효과 % (실시예 D.1b에 따름).
E. 조성물 실시예
하기 실시예를 통해 사용되는 "활성 성분"은 화학식 (I)의 최종 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 및 입체화학적 이성체에 대한 것이다.
본 발명의 제제를 제조하기 위한 대표적인 실시예는 다음과 같다:
1. 정제
활성 성분 5 내지 50 mg
인산이칼슘 20 mg
락토스 30 mg
활석 1O mg
마그네슘 스테아레이트 5 mg
감자 전분 200 mg이 되도록 첨가
본 실시예에서, 활성 성분은 본 발명에 따른 동일량의 임의 화합물, 특히 동일량의 예시된 임의 화합물로 대체될 수 있다.
2. 현탁액
수성 현탁액을 각각의 1 밀리리터가 1 내지 5 mg의 활성 화합물, 50 mg의 소듐 카복시메틸 셀룰로즈, 1 mg의 소듐 벤조에이트, 500 mg의 소르비톨 및 1 ml가 되도록 하는 양의 물을 함유하도록 경구 투여용으로 제조하였다.
3. 주사제
본 발명의 활성 성분 1.5 중량%를 수중 10 부피% 프로필렌 글리콜에거 교반하여 비경구 조성물을 제조하였다.
4. 연고
활성 성분 5 내지 1000 mg
스테아릴 알콜 3 g
라놀린 5 g
화이트 페트롤륨 (white petroleum) 15 g
물 100 mg이 되도록 첨가
본 실시예에서, 활성 성분은 본 발명에 따른 동일량의 임의 화합물, 특히 동일량의 예시된 임의 화합물로 대체될 수 있다.
적절한 변경은 본 발명의 범위를 벗어나는 것으로 간주되지 않는다. 따라서, 기술된 발명이 당업자들에 의해 다양한 방식으로 변경될 수 있음은 당연하다.
Claims (9)
- 하기 화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 부가염, 수화물 또는 용매화물:
상기 식에서,
R1은 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬, C1-3알킬아미노, C3-6사이클로알킬, C3-6사이클로알킬옥시, C3-6사이클로알킬아미노, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 및 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐이고;
R2는 수소, 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시 또는 트리플루오로메톡시이며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸이고;
R4는 수소 또는 할로이며;
R2 및 R3은 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일 또는 C2-6알켄디일이며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=O)- 또는 R8-O-C(=O)-이고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬이며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬이거나;
R6 및 R7은 각각 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐 또는 피페리디닐을 형성하고;
R8은 수소 또는 C1-4알킬이다. - 제 1 항에 있어서,
R1은 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬, C1-3알킬아미노, C3-6사이클로알킬, C3-6사이클로알킬옥시, C3-6사이클로알킬아미노, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬, (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬옥시 및 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐을 나타내고;
R2는 할로, C1-3알킬, C1-3알킬옥시 또는 트리플루오로메톡시를 나타내며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;
R4는 수소 또는 할로를 나타내며;
R2 및 R3은 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일 또는 C2-6알켄디일을 나타내며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=0)- 또는 R8-O-C(=O)-를 나타내고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬을 나타내며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬을 나타내거나;
R6 및 R7은 각각 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐 또는 피페리디닐을 형성하고;
R8은 수소 또는 C1-4알킬을 나타내는
화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 부가염 또는 수화물 또는 용매화물. - 제 1 항에 있어서,
R1은 비치환된 페닐; 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 할로, 트리플루오로메톡시, C1-3알킬, C1-3알킬옥시, C1-3알킬옥시C1-3알킬 및 C1-3알킬아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 피리디닐을 나타내고;
R2는 수소, 할로, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시를 나타내며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;
R4는 수소 또는 할로를 나타내며;
R2 및 R3은 3,4-위치에서 래디칼 -OCF2-O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일 또는 C2-6알켄디일을 나타내며;
R5는 수소, 하이드록시, C1-3알킬옥시, 할로, R6R7N-C(=0)- 또는 R8-O-C(=O)-를 나타내고;
R6은 C1-3알킬, C3-6사이클로알킬 또는 (C3-6사이클로알킬)C1-3알킬을 나타내며;
R7은 수소 또는 C1-3알킬을 나타내거나;
R6 및 R7은 하이드록실에 의해 임의로 치환된 피롤리디닐을 형성하고;
R8은 수소 또는 C1-4알킬을 나타내는
화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 부가염 또는 수화물 또는 용매화물. - 제 1 항에 있어서,
R1은 비치환된 벤조디옥산-6-일; 비치환된 피리디닐; 또는 클로로, 메틸, 에틸, 메톡시메틸 및 에틸아미노로 구성된 그룹중에서 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환된 피리디닐을 나타내고;
R2는 수소, 할로, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메톡시를 나타내며;
R3은 수소, 할로 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;
R4는 수소 또는 할로를 나타내며;
R2 및 R3은 3,4 위치에서 래디칼 -OCF2O-를 형성할 수 있고;
Alk는 직쇄 또는 분지쇄 C1-6알칸디일을 나타내며;
R5는 하이드록시 또는 R6R7N-C(=O)-를 나타내고;
R6은 메틸, 에틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸 또는 (사이클로프로필)메틸을 나타내며;
R7은 수소 또는 메틸을 나타내는
화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 부가염 또는 수화물 또는 용매화물. - 제 1 항에 있어서,
- (알파S)-알파-에틸-3-[[3-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]아미노]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- 3-[(2,2-디플루오로-1,3-벤조디옥솔-5-일)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N- 에틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드;
- N-사이클로프로필-3-[(2,2-디플루오로-1,3-벤조디옥솔-5-일)아미노]-1-(2, 6-디메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드;
- (알파S)-알파-에틸-1-(2-메틸-4-피리디닐)-3-[(2,3,4-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-에틸-3-[(2,3,4-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-메틸-3-[(2,3,4-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- 3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N-에틸-1H-1, 2,4-트리아졸-5-아세트아미드;
- N-사이클로프로필-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-3-[[3-(트리플루오로메톡시)페닐]아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드;
- 3-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-아세트아미드;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-에틸-3-[(3,4,5-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- (알파S)-알파-에틸-1-(2-메틸-4-피리디닐)-3-[(3,4,5-트리플루오로페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- (알파S)-알파-에틸-3-[(3-플루오로-5-메톡시페닐)아미노]-1-(2-메틸-4-피리디닐)-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- (알파S)-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-알파-에틸-3-[(3-플루오로-5-메톡시페닐)아미노]-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- (알파S)-3-[(3-클로로-5-메톡시페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)- 알파-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-에탄올;
- 3-[(3,4-디플루오로페닐)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N,N-디메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드; 및
- 3-[(2,2-디플루오로-1,3-벤조디옥솔-5-일)아미노]-1-(2,6-디메틸-4-피리디닐)-N,N-디메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-프로판아미드; 및
이들의 산부가염 및 용매화물중에서 선택되는 화합물. - 정신과 질환, 지능 손상 장애 또는 질환, 또는 염증성 질환 또는 장애를
예방 또는 치료하기 위한,
제 1 항 내지 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 약제로서,
상기 정신과 질환이 알츠하이머병, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 불안증, 정신분열병, 조증, 조울증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코틴 중독 및 통증으로부터 선택되는 약제. - 약제학적으로 허용되는 담체 및 활성 성분으로서 치료적 유효량의 제 1 항 내지 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는,
정신과 질환, 지능 손상 장애 또는 질환, 또는 염증성 질환 또는 장애를
예방 또는 치료하기 위한 약제학적 조성물로서,
상기 정신과 질환이 알츠하이머병, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 불안증, 정신분열병, 조증, 조울증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코틴 중독 및 통증으로부터 선택되는 약제학적 조성물. - 약제학적으로 허용되는 담체 및 활성 성분으로서 치료적 유효량의 제 1 항 내지 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는,
정신과 질환, 지능 손상 장애 또는 질환, 또는 염증성 질환 또는 장애를
예방 또는 치료하기 위한 약제학적 조성물의 제조 방법으로서,
약제학적으로 허용되는 담체를 치료적 유효량의 상기 화합물과 혼합하는 것을 특징으로 하고,
상기 정신과 질환이 알츠하이머병, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 불안증, 정신분열병, 조증, 조울증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코틴 중독 및 통증으로부터 선택되는 것인 제조 방법. - 알츠하이머병, 레비소체 치매, 주의력 결핍 과다활동 장애, 불안증, 정신분열병, 조증, 조울증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 뚜렛 증후군, 뇌외상, 비행 시차 증후군, 니코틴 중독 및 통증에서 선택되는
신경계, 퇴행성 또는 정신과 질환을 예방하거나 치료하는데
동시, 분리 또는 순차적으로 사용하기 위한 배합 제제로서,
(a) 제 1 항 내지 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 및
(b) - 1,4-디아자비사이클로[3.2.2]노난-4-카복실산, 4-브로모페닐 에스테르, 모노하이드로클로라이드 (SSR180711A);
- (-)-스피로[1-아자비사이클로[2.2.2.]옥탄-3,5'-옥사졸리딘]-2'-온;
- 3-[(2,4-디메톡시)벤질리덴]아나바세인 디하이드로클로라이드 (GTS -21);
- [N-[(3R)-1-아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일]-4-클로로벤즈아미드 하이드로클로라이드] PNU-282987;
- 니코틴; 및
- 바레니클린
중에서 선택되는 α7 니코틴 수용체 작용제를 포함하는 산물.
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