KR101543507B1 - 연속 공정의 미립구의 제조 방법 및 이로부터 제조된 미립구 - Google Patents

Abstract

본 발명은 연속 공정의 미립구의 제조 방법 및 이로부터 제조된 미립구에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 1차 에멀젼과 2차 에멀젼을 동시에 투입하여 순간적으로 미립구를 형성하고 상기 형성된 미립구에 고압을 가한 후 교반기로 투입하는 과정이 연속적으로 이루어질 수 있는 미립구의 제조방법 및 이로부터 제조된 미립구에 관한 것이다. 본 발명의 방법으로 미립구를 제조하게 되면 기존의 미립구 제조방법의 가장 큰 단점이였던 스케일 변수를 현저히 감소시킬 수 있고, 약물 봉입률이 향상되고, 작고 균일한 입자를 얻을 수 있다.

Description

연속 공정의 미립구의 제조 방법 및 이로부터 제조된 미립구{A continuous process for preparing microspheres and microspheres prepared thereby}

본 발명은 연속 공정의 미립구의 제조 방법 및 이로부터 제조된 미립구에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 1차 에멀젼과 2차 에멀젼을 동시에 투입하여 순간적으로 미립구를 형성하고 상기 형성된 미립구에 고압을 가한 후 교반기로 투입하는 과정이 연속적으로 이루어질 수 있는 미립구의 제조방법 및 이로부터 제조된 미립구에 관한 것이다.

미립구 제조기술의 일반적인 제조방법은 용매에 생분해성 고분자 담체를 용해시키고, 수용성 약물을 수상에 용해시킨 후 1차 에멀젼을 형성시킨 다음, 폴리(비닐 알코올)(PVA)이 용해되어 있는 2차 용액에 상기 1차 에멀젼을 투여하여 미립구를 형성시키는 것이 대표적이다. 이러한 방법을 통상적으로 비연속식 공정(discontinuous process)이라 명명한다. 이 비연속식 공정은 2차 용액이 포함되어 있는 하나의 리액터에 1차 에멀젼을 투입하여 미립구를 제조하는 방법으로 대부분의 상업화 가능한 공정이 이러한 비연속식 공정을 따른다.

타케다(Takeda)사가 이중유화법에 관한 비연속식 공정으로 최초로 특허(US 4652441)를 등록하고 대량 생산하여 제품화한 이래로 이와 관련된 다량의 특허가 출원되었다. 그러나, 비연속식 공정은 미립구의 분포도가 1-400 ㎛ 정도로 매우 넓은 분포도를 가지며, 미립구 간의 뭉침이나 구형이 아닌 미립구의 발생 가능성이 높고 상업화를 위해 스케일을 증가시킬 때마다 공정 변수를 제어해야 하는 어려움이 있다.

생분해성 고분자 담체로 가장 대표적인 poly(lactic-co-glycolic acid)(PLGA) 또는 poly(lactic acid)(PLA)는 수불용성 물질로서 유기용매에 용해한 후 수용액에 투입하면 매우 빠르게 석출되는 성질을 가진다. 이러한 성질을 이용하면 수용해성 약물과 에멀젼 후 2차 용액에 투여했을 때 빠르게 입자로 경화되면서 약물을 봉입할 수 있는 장점이 있다. 그러나, 빠르게 입자가 경화되기 때문에 입자 모양이나 크기를 제어하기 힘든 단점이 있다. 특히 제조 스케일 및 부피가 증가했을 때에는 빠른 입자 경화를 제어하기가 더욱 힘들다.

일반적으로 빠른 입자 경화를 제어하기 위해서는 2차 에멀젼의 고속 순환, 호모게나이져, 초음파 등의 방법으로 높은 에너지를 순간적으로 가하는 방법을 사용할 수 있다. 그러나, 제조 스케일이 커지면서 2차 에멀젼의 부피도 비례적으로 커질 경우 균일한 입자를 얻기에 충분한 수준으로 에너지를 증가시키기 어려운 문제가 있다.

아울러, 2차 에멀젼의 제조시, 하나의 리액터에 1차 에멀젼을 투입하여 입자가 형성되는데 여기에서 1차 에멀젼의 투입시간, 온도, 1차 에멀젼과 2차 수용액의 부피비, 고분자 담체의 농도, 1차 에멀젼의 투여 위치, 2차 에멀젼의 순환 여부, 및 용매의 증발시간 등 매우 많은 변수들이 중요하게 작용한다.

따라서, 실험실용 스케일에서 파일럿 또는 생산 스케일로 증가시키는 일은 매우 어려우며 실패의 가장 큰 원인이 되는 경우가 빈번하다. 또한, 비연속식 공정으로 제조된 입자는 넓은 분포도를 가지며, 입자 크기의 분포도 또한 스케일에 따라 변하므로 재현성이 없다.

이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 1차 에멀젼과 2차 에멀젼을 동시에 투입하여 순간적으로 미립구를 형성한 후 고압을 가하는 과정을 연속적으로 수행함으로써 나노사이즈 등 원하는 입자 크기의 미립구를 재현성 있게 제조할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 입도 분포(particle size distribution)가 우수하고 다양하게 입자크기를 제어할 수 있으며 대량 생산에 적합한 미립구의 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 제조 방법으로부터 제조된 미립구를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 미립구를 유효성분으로 포함하는 약물 전달체를 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 이중유화법에 의해 담체용 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제조하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 미립구의 제조 방법을 제공한다.

1) 담체용 고분자와 생리활성 물질을 분산 또는 혼합하여 1차 에멀젼을 형성시키는 단계(단계 1);

2) 상기 1차 에멀젼, 및 계면활성제가 용해된 2차 용액의 각 일정량을 연속적으로 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시키는 단계(단계 2); 및

3) 상기 2차 에멀젼에 압력을 가하는 단계(단계 3).

바람직하기로, 본 발명의 미립구의 제조방법은 상기 단계 3) 이후에 상기 2차 에멀젼을 교반하는 단계(단계 4)를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 미립구 제조방법은 1차 에멀젼과 2차 용액의 각 일정량이 연속적으로 접촉하여 미립구를 순간적으로 형성시킨 후 고압 처리 공정을 거치기 때문에 나노사이즈 등 원하는 입자 크기의 미립구를 재현성 있게 연속공정으로 대량생산할 수 있는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 미립구 제조방법은 교반 과정을 연속 진행시킴으로써 연속 공정에 의한 스케일 변수 최소화의 효과를 더욱 크게 기대할 수 있다.

미립구 제조 방법과 관련된 종래 기술로서 다양한 방법들이 개발되어 있다. 이중 가장 대표적인 방법으로 이중유화법을 들 수 있으며 이중유화법의 가장 대표적인 제조 공정이 비연속식 공정이다. 그러나, 종래 방법의 경우 원하는 크기의 입자를 균일한 입자 분포로 생성하는 것이 매우 어려운 기술적 도전으로 인식되고 있다. 예컨대, 대량 생산시 보편적으로 적용되고 있는 비연속식의 이중유화 공정에서는 1 ㎛ 내지 100 ㎛, 때로는 그 이상의 균일하지 않은 입자가 생성된다.

이러한 입자의 불균일성 문제를 해결하기 위해 일반적으로 2차 에멀젼을 계속 순환시켜 에너지를 가하는 방식을 적용하지만 제조 스케일이 커질수록 필요한 에너지가 커져야 하는 점이 문제 극복의 한계로 작용한다. 나노사이즈의 제조와 같이, 매우 큰 에너지를 순간적으로 가해야 하는 경우일수록 더욱 그러하다. 이에 나노사이즈 제조를 위해 계면활성제의 농도를 매우 높이거나, 또는 고분자의 페길화를 통해서 미셀(micelle) 형태로 제조하는 등의 방식들이 시도되고 있으나 이러한 종래 기술들의 경우 한가지 제조 조건의 변화가 다른 제반 변수에 영향을 미치기 때문에 변수 제어가 어려운 대량공정에서 나노사이즈에서 마이크로 사이즈의 미립구까지 다양하게 원하는 입자 크기를 수득할 수 있는 방법으로 활용하기 곤란하다.

그러나, 놀랍게도 본 발명에서는 2차 에멀젼에서 미립구를 순간적으로 형성시킨 후 상기 2차 에멀젼에 압력을 가함으로써 가하는 압력 변화만으로 나노에서 마이크로 사이즈까지 다양한 입자크기를 용이하게 조절할 수 있다.

상기 단계 1은, 담체용 고분자와 생리활성 물질을 분산 또는 혼합하여 1차 에멀젼을 형성시키는 단계로서, 생리활성 물질과 담체용 고분자를 포함하는 1차 에멀젼을 형성시키는 단계이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "생리활성 물질"은 생물이 생을 영위함에 있어서 생체의 기능을 증진시키거나 혹은 억제시키는 물질로서, 생체 내에서 기능 조절에 관여하는 물질의 결핍이나 과도한 분비에 의해 비정상적인 병태를 보일 때 이를 바로잡아주는 역할을 하는 물질을 의미한다.

본 발명에서, 상기 생리활성 물질은 LHRH(luteinizing hormone-release hormone) 동족체, 펩타이드, 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다. 구체적으로, 상기 생리활성 물질로는 LHRH 동족체 중 작용제(agonist)로서 고세렐린, 초산 류프롤라이드, 트립토렐린, 부세렐린, 나파렐린 등을 사용할 수 있고, 길항제로서 세트로렐릭스, 및 알지타이드 등을 사용할 수 있다. 이 외에도 단백질, DNA, 화학 약물(chemical drug) 등 수용성 및 비수용성 약물 모두를 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 상기 생리활성 물질은 단독, 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명에서 생리활성 물질을 용해시키기 위한 용매로는 물을 예로 들 수 있지만 물에 국한되지 않고 약물을 용해시킬 수 있는 모든 용매가 가능하다.

본 발명에서 사용되는 용어 "담체용 고분자"는 생리활성 물질을 전달하기 위해 이를 담지하는 역할을 하는 고분자를 의미한다.

본 발명에서, 상기 담체용 고분자로는 통상의 고분자들이 사용될 수 있다. 바람직하기로, 상기 담체용 고분자는 생분해성 고분자일 수 있다. 구체적으로, 상기 담체용 고분자는 폴리락타이드(polylactide, PLA), 폴리글로콜라이드(polyglycolide, PGA), 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(polylactide-co-glycolide, PLGA) 등의 폴리에스테르(polyester), 폴리오르토에스테르(polyorthoester), 폴리안히드라이드(polyanhydride), 폴리아미노산(polyaminoacid), 폴리아세탈(polyacetal), 폴리시아노아크릴레이트(polycyanoacrylate), 폴리카프로락톤(polycaprolactone), 폴리디옥사논, 폴리알킬렌알킬레이트 등으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 담체용 고분자를 용해시키기 위해 사용하는 용매의 종류에 특별한 제한이 없다. 예시적으로, 본 발명에서, 상기 1차 에멀젼은 상기 담체용 고분자를 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 아세토니트릴, 디메틸설폭시드, 디메틸포름아마이드, 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 용매에 용해시켜 만들 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 단계 2는, 상기 1차 에멀젼, 및 계면활성제가 용해된 2차 용액의 각 일정량을 연속적으로 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시키는 단계로서, 1차 에멀젼과 2차 용액을 각각 일정량씩 연속적으로 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시키는 단계이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "계면활성제"는 2차 에멀젼 중에서 입자의 형성을 용이하게 하는 역할을 하는 2차 용액 중에 용해되어 있는 물질을 의미한다.

통상적으로 이중유화법의 2차 에멀젼에는 입자의 형성을 용이하게 하기 위해 계면활성제가 첨가된다. 가장 대표적으로는 비이온성 계면활성제인 폴리(비닐 알코올)을 예로 들 수 있다. 이에 국한하지 않고 폴리소르베이트, 폴록사머, 폴리에틸렌글리콜 등이 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "2차 용액"은 2차 에멀젼을 형성하기 위하여 1차 에멀젼과 혼합되는 물질을 의미한다.

본 발명에서, 상기 2차 용액을 형성하는, 즉 계면활성제를 용해시키는 용매로는 수성매질을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 물을 예로 들 수 있지만 물에 국한되지 않고 생리활성 물질을 용해시킬 수 있는 모든 용매가 가능하다.

본 발명에서, 상기 단계 2)는 액체 이송 펌프에 의해 상기 1차 에멀젼 및 상기 2차 용액의 각 일정량을 연속적으로 2차 에멀젼이 형성되는 반응기까지 이송시켜 상기 1차 에멀젼 및 상기 2차 용액를 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시킴으로써 수행될 수 있다.

본 발명에서, 상기 반응기는 내부에 메쉬망을 장착하여 상기 1차 에멀젼 및 상기 2차 용액이 메쉬망을 통과한 후 2차 에멀젼을 형성하도록 한 것일 수 있다.

본 발명에서, 상기 메쉬망의 입도는 0.1 ㎛ 내지 10 ㎜, 바람직하기로 1 ㎛ 내지 50 ㎛일 수 있다.

상기 단계 3은, 상기 2차 에멀젼에 압력을 가하는 단계로서, 2차 에멀젼에 일정 압력을 가하여 미립구의 입자 크기, 입도 분포 등을 제어하는 단계이다.

본 발명에서, 상기 압력은 0 psi 내지 30,000 psi, 바람직하기로 500 psi 내지 30,000 psi일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 500 psi 내지 25,000 psi일 수 있다.

본 발명에서, 상기 단계 3)은 고압균질기 또는 고압펌프 등 고압을 가할 수 있는 장치를 이용하여 압력을 가함으로써 수행될 수 있다.

일반적으로 미립구 제조 공정에서 고압처리 공정은 에멀젼 형성시 고압균질을 통해 균질혼합의 효율을 높이기 위한 목적으로 사용된다. 특히 고압균질기가 이러한 목적을 달성하기 위하여 대표적으로 사용되고 있으나 실제 고압균질기는 미립구의 상업적 생산에 적용되고 있지 않을 뿐 아니라 고압균질 과정을 적용하여 미립구를 생산하기도 쉽지 않다. 통상의 고압균질기 사용 방식으로 미립자를 형성하려면 1차 에멀젼을 2차 용액과 혼합하여 2차 에멀젼을 형성한 후 고압균질기의 주입부에 주입하여 순차적으로 고압셀을 통과시켜야 한다. 고압균질기가 고압셀을 통과시키는 속도는 평균 70 mL/min 정도로 속도에 따라 시간이 소요되고, 제조 스케일이 커질수록 장시간이 소요된다. 그 동안 주입부의 2차 에멀젼에서는 1차 에멀젼의 용매가 빠져나가면서 폴리머는 경화하게 되고 불균일한 폴리머 응집(aggregation)이 일어나고 상분리되어 입자 형성이 불가능해진다. 특히 PLGA와 같은 소수성 폴리머와 2차 용매로 물을 사용할 경우 경화의 속도는 급격히 빨라져 입자 형성이 되지 않을 뿐 아니라 응집체가 고압셀을 막는 현상도 발생한다.

본 발명은 통상의 고압처리 공정과는 달리 (i) 2차 에멀젼을 순간 형성시킨 후 (ii) 1차 에멀젼의 용매가 증발하기 전에 고압처리 공정을 거치게 함으로써 고압공정 중 폴리머가 경화되거나 에멀젼이 상분리되어 미립자가 형성되지 않는 현상을 막을 수 있다.

본 발명에 따른 연속 공정에 의하면 2차 에멀젼 및 미립구의 순간 형성 단계는 무한 반복되어 대량생산 공정에 용이하게 적용될 수 있다. 즉, 본 발명은 메쉬망을 예컨대, 고압균질기 주입부와 같이 1차 에멀젼과 2차 용액이 만나서 반응하는 부위(반응부)에 설치하여 메쉬망에 1차 에멀젼이 점적되는 순간 고압균질기 내부의 펌프가 1차 에멀젼과 2차 용액을 펌핑하여 메쉬망을 통과하면서 미립자가 순간적으로 형성되도록 할 수 있다(도 1a). 또는, 메쉬망 대신 균질기를 부착하여 1차 에멀젼과 2차 용액이 만나는 속도를 조절함으로써 순간적으로 미립자가 형성되도록 할 수도 있다(도 1b).

종래 기술 중에도 연속 공정의 개념을 채택한 것이 있으나 단순히 입자를 형성하고 교반기로 이동시키는 과정을 연속화 하였을 뿐이며, 본 발명과 같이 나노 크기까지의 미립구를 재현성 있게 수득할 수 있는 것은 없다.

상기 단계 4는, 상기 2차 에멀젼을 교반하는 단계로서, 2차 에멀젼을 일정 속도로 교반하여 균일한 입도 분포의 미립구의 형성을 촉진하는 단계이다.

본 발명에서, 상기 단계 4)는 상기 2차 에멀젼을 2차 에멀젼이 형성되는 반응기로부터 연속적으로 교반기로 투입시켜 교반기 내에서 교반함으로써 수행될 수 있다.

본 발명에서, 상기 2차 에멀젼을 교반기로 투입시키는 속도는 반응기로 1차 에멀젼 및 2차 용액이 공급되는 속도와 동일하게 제어되는 것이 바람직하다.

본 발명에서, 상기 2차 에멀젼을 교반기로 투입하는 수단은 고압펌프 또는 액체 이송 펌프일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 담체용 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 미립구를 유효성분으로 포함하는 약물 전달체를 제공한다.

본 발명에서, 상기 약물 전달체는 주사제의 형태일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 이중유화법에 의해 담체용 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제조하기 위한 장치로서, 하기를 포함하는 미립구 제조 장치를 제공한다.

a) 담체용 고분자와 생리활성 물질이 분산 또는 혼합되어 있는 1차 에멀젼이 담기는 제1용기;

b) 계면 활성제가 용해되어 있는 2차 용액이 담기는 제2용기;

c) 상기 제1용기의 1차 에멀젼, 및 제2용기의 2차 용액이 연속적으로 투입되어 2차 에멀젼이 형성되는 반응부;

d) 상기 2차 에멀젼에 압력을 가하는 압력부; 및

e) 상기 압력부를 통과한 용액을 교반하는 교반기.

본 발명에서, 상기 압력부는 고압균질기 또는 고압펌프를 포함할 수 있다.

본 발명에 따라 연속 공정으로 미립구를 제조하는 장치의 일 구현예를 도 1a에 도식화하였으며, 또 다른 구현예를 도 1b에 도식화하였다.

도 1a는 2차 용액이 공급되는 동시에 1차 에멀젼이 2차 용액으로 점적되어 메쉬망을 통과한 후 미립구를 형성하는 미립구의 제조 장치를 간략히 나타낸 것이다.

도 1a에 따르면, 본 발명의 미립구의 제조 장치는 담체용 고분자와 생리활성 물질이 분산 또는 혼합되어 있는 1차 에멀젼이 담기는 제1용기(1), 계면 활성제가 용해되어 있는 2차 용액이 담기는 제2용기(2), 상기 제1용기의 1차 에멀젼, 및 제2용기의 2차 용액이 연속적으로 투입되어 2차 에멀젼이 형성되는 반응부(3), 상기 2차 에멀젼에 압력을 가하는 압력부(4) 및 상기 압력부(4)를 통과한 용액을 교반하는 교반기(5)를 포함한다. 이때 압력부(4)는 내부에 고압셀이 장치된 고압균질기를 포함할 수 있다. 또한, 1차 에멀젼 및 2차 용액을 반응부로 이송하기 위하여 각각 펌프(7, 8)를 이용한다.

이때, 2차 용액이 유속 0.001 mL/min 내지 100 mL/min, 바람직하게는 1 mL/min 내지 50 mL/min, 더욱 바람직하게는 2 mL/min 내지 30 mL/min으로 공급될 때, 1차 에멀젼이 반응부(3)에서 점적된다. 점적 부피는 약 0.01 ㎕ 내지 100 ml, 바람직하게는 0.1 ㎕ 내지 1 mL, 더욱 바람직하게는 20 ㎕ 내지 100 ㎕가 될 수 있다. 점적부피가 0.01 ㎕보다 적을 경우에는 점적량이 너무 적어 제조부피가 매우 커지는 단점이 있다.

반드시 요구되는 것은 아니지만, 입자 형성이 용이하도록 반응부(3) 내부에 메쉬망(6)이 장착될 수 있다. 이때 메쉬망의 입도는 0.1 ㎛ 내지 10 mm가 바람직하다. 메쉬망의 입도는 입자의 모양 및 크기를 결정하는 변수 중 하나로서 0.1 ㎛ 이하는 액상이 통과하기 어렵다. 메쉬망의 개수에 따라서도 입자의 크기가 조절 가능한데 메쉬망의 개수는 1 개 내지 10 개가 바람직하고 메쉬망의 개수는 10개 이상이 되면 액상이 통과하기 힘들기는 하지만 특별히 개수에 제한을 두지는 않는다. 메쉬망의 재질도 입자의 모양을 결정하는 중요한 요소 중 하나이다. 신속한 경화를 위해서는 메쉬망의 재질이 친수성을 가지는 스테인리스 스틸(stainless steel)인 것이 바람직하고, 구형의 모양을 적절히 형성하기 위해서는 테플론(teflon)이나 나일론(nylon)인 것이 바람직하다. 그러나, 특별히 메쉬망의 재질에 제한을 두지는 않는다.

고압균질기의 압력은 0 psi 내지 30,000 psi일 수 있다. 이는 현재 상업적으로 가능한 고압균질기의 기기적 한계로 30,000 psi를 명시한 것일 뿐이므로 실제 본 발명에 적용가능한 압력의 값에 제한을 두지는 않는다. 고압균질기의 압력에 따라, 입자의 크기는 나노 크기(~ 500 nm)에서 마이크로 크기(20 ~ 30 um)까지 다양하게 조절 가능하다. 구형의 입자를 얻기 위해 압력은 더욱 바람직하게는 0 psi 내지 25,000 psi 로 설정될 수 있다.

제조설비에 따라, 고압균질기 내에서 1차 에멀젼을 2차 용액으로 점적한 후 고압셀 처리 공정을 거치도록 하지 않고, 고압균질기 외부의 별도 반응기에서 점적 및 2차 에멀젼 형성을 거친 다음 고압균질기로 상기 2차 에멀젼을 이동시킬 수도 있다. 이 경우 메쉬망은 고압균질기 외부에 설치된 별도 반응기 내에 설치될 수 있다.

상기 2차 에멀젼을 교반기로 투입하는 수단은 고압펌프 또는 액체 이송 펌프인 방법.

도 1b는 본 발명에 따른 미립구의 제조 장치의 또 다른 일 구현예를 간략히 나타낸 것이다.

도 1b에 따르면, 본 발명의 미립구의 제조 장치는 담체용 고분자와 생리활성 물질이 분산 또는 혼합되어 있는 1차 에멀젼이 담기는 제1용기(10), 계면 활성제가 용해되어 있는 2차 용액이 담기는 제2용기(20), 상기 제1용기의 1차 에멀젼, 및 제2용기의 2차 용액이 연속적으로 투입되어 2차 에멀젼이 형성되는 반응부(30), 상기 2차 에멀젼에 압력을 가하는 압력부(40), 및 상기 압력부를 통과한 용액을 교반하는 교반기(50)를 포함한다. 반응부(30) 내에는 균질기(60)가 장착되어 있다. 또한, 1차 에멀젼 및 2차 용액을 반응부로 이송하기 위하여 각각 액체 수송 펌프(70, 80)를 이용할 수 있으나 관련 기술 분야에서 액체 수송을 목적으로 통상 사용되는 수단이라면 어느 것이든 당업자의 판단에 의해 적절히 선택, 사용할 수 있다. 상기 압력부(40)는 고압펌프(90)를 포함할 수 있으며 이 경우 고압펌프(90)는 용액에 압력을 가하는 동시에 이를 교반기로 이동시킨다.

즉, 도 1b에서는, 2차 용액이 액체 수송 펌프(80)를 이용해서 균질기(60)가 부착된 반응부(30)로 공급되고 1차 에멀젼이 액체 수송 펌프(70)에 의해 균질기(60)가 부착된 반응부(30)로 공급되면, 균질기(60)가 순간적으로 미립구를 형성한다. 형성된 미립구는 고압펌프(90)가 가하는 압력에 의해 일정속도로 교반기(50)로 이동된다.

상기 고압펌프(90)의 압력이 가하는 순간적 에너지에 의해 2차 에멀젼 형성 시 크고 불균일하게 형성된 입자가 매우 작고 균일하게 성형된다. 고압펌프(90)가 가하는 순간적 에너지가 높을수록 강한 펄스에 의해 입자가 분해되면서 입자가 작게 형성된다. 즉, 본 발명에서 고압펌프(90)는 단순한 액체 이송의 수단이 아니라 순간적인 에너지에 의해 입자를 매우 작고 균일하게 형성시키는 효과가 있다.

고압펌프의 압력이 낮을수록 용액이 교반기로 이동하는 속도는 느려진다. 본 발명의 일 구현예에서 고압펌프의 압력을 25,000psi로 설정한 경우 용액은 70 mL/min으로 이동하였다. 압력이 낮을수록 용액의 이동속도가 느려져 제조시간은 증가하고, 압력이 높을수록 용액의 이동속도가 빨라져 제조시간은 증가한다.

2차 용액이 액체 수송 펌프에 의해 이동되는 속도와 1차 에멀젼이 이동되는 속도는 적절히 조절되어야 하며 형성된 미립구가 교반기로 이동하는 속도와 2차 용액이 공급되는 속도가 비슷해야 반응부(30)에 항상 일정한 부피의 2차 에멀젼이 형성된다. 미립구의 교반기로의 이동속도는 약 1 mL/min 내지 100 mL/min, 바람직하게는 20 mL/min 내지 70 mL/min이나, 반드시 큰 제한을 두지 않는다. 제조 스케일이 커질수록 시간단축을 위해 이동속도를 빠르게 설정할 수 있다. 일정한 용기에 일정한 부피를 유지하면서 지속적으로 미립구를 형성하게 되면 특정 크기의 미립자를 수득함에 있어 제조부피의 변화에 따른 변수는 오직 시간만이 존재하게 된다. 제조 시간은 제조 스케일에 따라 비례적으로 증가한다.

본 발명은 일정한 량의 미립구가 연속적으로 생성되는 미립구의 제조 방법을 제공할 수 있다. 본 발명은 통상적인 비연속식 공정으로 입자를 제조하는 것에 대비해 제조부피가 커짐에도 불구하고 작고 균일한 입자 제조가 가능하고 제조부피가 커진다고 용기를 바꾸거나 제조 조건을 변화시킬 필요가 없다. 일정한 부피로 2차 에멀젼이 지속적으로 만들어지고 이동하는 과정을 통해 항상 입자 형성 조건이 일정하게 유지된다는 장점이 있다.

이와 같이 입자 형성 조건을 일정하게 유지하면서 오직 시간만을 비례적으로 증가시켜 제조부피를 제한없이 늘릴 수 있으므로, 제조부피가 늘어날수록 원하는 조건에 부응하는 미립구의 절대량을 더욱 많이 확보할 수 있다. 즉 제조부피가 늘어날수록 입자의 균일도가 향상되는 효과가 있다.

또한, 본 발명에 따르면 입자 형성 과정 중 가해지는 압력을 조절하여 나노 또는 마이크로 등 입자의 크기를 원하는 수준으로 압력에 의해 용이하게 조절 가능하다는 장점이 있으며, 메쉬망의 재질, 개수, 메쉬망의 입자크기에 따라 입자의 모양과 봉입률을 결정할 수 있다.

또한, 비연속식 공정에서는 고함량 봉입을 위해서 고점도의 1차 에멀젼을 2차 용액에 투입하게 되는데 고점도의 1차 에멀젼은 투여시 전단력이 매우 높아 투여의 어려움이 있고, 0.2 ㎛ 멸균 필터도 불가능하다. 그러나, 본 발명은 순간적으로 미립구를 형성하기 때문에 고점도의 1차 에멀젼이 필요 없고 0.2 ㎛ 멸균 필터가 가능한 농도에서도 고함량의 봉입이 가능하다.

도 1은 미립구를 형성하기 위한 본 발명의 연속 공정을 위한 장치를 간략히 도식화한 것이다. 이때 도 1a는 1차 에멀젼이 점적될 때 2차 용액이 액체 이송 펌프를 이용하여 일정 속도로 주입되고, 메쉬망를 통과하면서 2차 에멀젼이 형성되고 이것이 압력부인 고압균질기를 통과하면서 균질화된 입자 형성이 이루어지고, 교반기로 지속적으로 투입되는 제조 장치를 도식화한 것이다. 또한, 도 1b는 2차 용액이 액체 수송 펌프를 통해 균질기가 장치된 반응부로 공급되고 1차 에멀젼이 액체 수송 펌프를 이용해서 균질기가 장치된 반응부로 공급되면 균질기가 순간적으로 미립구를 형성하고, 형성된 미립구가 고압펌프를 거쳐 교반기로 이동되는 제조장치를 도식화한 것이다.
도 2는 실시예 4 및 5에 따라 제조된 미립구의 표면을 SEM(scanning electron microscope) 사진이다. 이때, 도 2a는 1g 제조 스케일을 가지는 실시예 4에 따라 제조된 미립구, 도 2b는 10g 제조 스케일을 가지는 실시예 5에 따라 제조된 미립구를 나타낸다.

이하, 실시예를 통해 본 발명의 구성 및 효과를 보다 더 구체적으로 설명하고자 하나, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐 본 발명의 범위가 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1 내지 3은 도 1a의 공정에 따라 미립구를 제조하였고, 실시예 4, 5는 도 1b의 공정에 따라 미립구를 제조하였다.

실시예 1: 5,000 psi 의 고압균질기 압력을 이용한 초산 류프롤라이드 함유 미립구 제조 방법

초산 류프롤라이드 180mg을 증류수 300㎕에 용해시키고, PLGA(Resomer RG502H) 720mg을 메틸렌클로라이드 3 mL에 용해시켰다. 이 고분자 용액과 초산 류프롤라이드 용액을 균질기로 혼합하여 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 10 mL 주사기에 넣고 주사기 펌프에 장착한 후 0.6 mL/min으로 1차 에멀젼을 고압균질기 주입부로 점적하였다. 2차 용액으로서, 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 증류수 용액도 고압균질기의 펌프가 액체를 이동시키는 속도와 비슷한 속도로 지속적으로 주입시켰다. 고압균질기의 압력은 5,000psi이었으며 이때 평균 유속은 약 70 mL/min이었다. 고압균질기의 고압펌프를 통해 지속적으로 형성된 미립구를 교반기로 투입하였고 평균 100 ~ 150 rpm으로 상온에서 교반시켰다. 4시간 동안 교반 후 제조된 미립구를 증류수로 수회 세척한 후 동결건조하였다.

실시예 2: 1,000 psi 의 고압균질기 압력을 이용한 초산 류프롤라이드 함유 미립구 제조

초산 류프롤라이드 180mg을 증류수 300㎕에 용해시키고, PLGA(Resomer RG502H) 720mg을 메틸렌클로라이드 3 mL에 용해시켰다. 이 고분자 용액과 초산 류프롤라이드 용액을 균질기로 혼합하여 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 10 mL 주사기에 넣고 주사기 펌프에 장착한 후 0.6 mL/min으로 1차 에멀젼을 고압균질기 주입부로 점적하였다. 2차 용액으로서, 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 증류수 용액도 고압균질기의 펌프가 액체를 이동시키는 속도와 비슷한 속도로 지속적으로 주입시켰다. 고압균질기의 압력은 1,000psi이었으며 이때 평균 유속은 약 20 ~ 30 mL/min이었다. 고압균질기의 고압펌프를 통해 지속적으로 형성된 미립구를 교반기로 투입하였고 평균 100 ~ 150 rpm으로 상온에서 교반시켰다. 4시간 동안 교반 후 제조된 미립구를 증류수로 수회 세척한 후 동결건조하였다.

실시예 3: 0 psi 의 고압균질기 압력을 이용한 초산 류프롤라이드 함유 미립구 제조

초산 류프롤라이드 180mg을 증류수 300㎕에 용해시키고, PLGA(Resomer RG502H) 720mg을 메틸렌클로라이드 3 mL에 용해시켰다. 이 고분자 용액과 초산 류프롤라이드 용액을 균질기로 혼합하여 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 10 mL 주사기에 넣고 주사기 펌프에 장착한 후 0.6 mL/min으로 1차 에멀젼을 고압균질기 주입부로 점적하였다. 2차 용액으로서, 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 증류수 용액도 고압균질기의 펌프가 액체를 이동시키는 속도와 비슷한 속도로 지속적으로 주입시켰다. 고압균질기의 압력은 0psi이었으며 이때 평균 유속은 약 20 ~ 30 mL/min이었다. 고압균질기의 고압펌프를 통해 지속적으로 형성된 미립구를 교반기로 투입시켰고 평균 100 ~ 150 rpm으로 상온에서 교반시켰다. 4시간 동안 교반 후 제조된 미립구를 증류수로 수회 세척한 후 동결건조하였다.

실시예 4: 1g 제조 스케일의 초산 류프롤라이드 함유 미립구 제조 방법

초산 류프롤라이드 125mg을 증류수 300 ㎕에 용해시키고, PLGA(Resomer RG502H) 840mg을 메틸렌클로라이드 3 mL에 용해시켰다. 류프롤라이드 용액과 PLGA 고분자 용액을 균질기로 균질화시켜 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 액체 이송펌프를 이용하여 유속 3.3 mL/min으로 이동시켜 반응기의 주입부로 투입하였다. 2차 용액으로서, 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 증류수 용액도 유속 70 mL/min으로 액체 이송 펌프를 이용하여 반응기의 주입부로 투입하였다. 반응기의 주입부에는 미리 장착된 균질기가 평균 20,000 rpm으로 1차 에멀젼과 2차 용액을 균질화시켜 2차 에멀젼을 형성하였다. 상기 형성된 2차 에멀젼을 이송관을 통해 교반기로 이동시켰다. 상기 이송관 내에는 25,000psi로 설정된 고압펌프가 설치되어 상기 2차 에멀젼을 평균 70 mL/min 속도로 교반기에 투입하였다. 교반기의 투입속도는 미립구 형성 시 2차 용액의 투입속도와 동일 또는 유사한 수준으로 조절하였다. 교반기에 투입된 미립구는 평균 100 ~ 150 rpm으로 상온에서 4시간 동안 교반 후 증류수로 수회 세척하고 동결 건조하였다.

실시예 5: 10g 제조 스케일의 초산 류프롤라이드 함유 미립구 제조 방법

초산 류프롤라이드 1.25 g을 증류수 3 mL에 용해하고, PLGA(Resomer RG502H) 8.4 g을 메틸렌클로라이드 30 mL에 용해하였다. 류프롤라이드 용액과 PLGA 고분자 용액을 균질기로 균질화시켜 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 액체 이송펌프를 이용하여 유속 3.3 mL/min으로 이동시켜 반응기의 주입부로 투입하였다. 2차 용액으로서, 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 증류수 용액도 유속 70 mL/min으로 액체 이송 펌프를 이용하여 반응기의 주입부로 투입하였다. 반응기의 주입부에는 미리 장착된 균질기가 평균 20,000 rpm으로 1차 에멀젼과 2차 용액을 균질화시켜 2차 에멀젼을 형성하였다. 상기 형성된 2차 에멀젼을 이송관을 통해 교반기로 이동시켰다. 상기 이송관 내에는 25,000psi로 설정된 고압펌프가 설치되어 상기 2차 에멀젼을 평균 70 mL/min 속도로 교반기에 투입하였다. 교반기의 투입속도는 미립구 형성 시 2차 용액의 투입속도와 동일 또는 유사한 수준으로 조절하였다. 교반기에 투입된 미립구는 평균 100 ~ 150 rpm으로 상온에서 4시간 동안 교반 후 증류수로 수회 세척하고 동결 건조하였다.

비교예 1: 종래 이중유화법을 이용한 초산 류프롤라이드 함유 미립구의 제조

초산 류프롤라이드 50mg을 증류수 100㎕에 용해한 다음 PLGA(Lakeshore 7525DLPLG2A) 450mg을 메틸렌클로라이드 1 mL에 용해한 고분자 용액에 혼합하여 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 미리 제조된 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 200 mL 증류수 용액에 호모게나이저로 분산시켰다. 2차 에멀젼을 형성한 후 2시간 동안 교반시키고 용매를 제거하였다. 고형화된 미립구를 증류수로 수회 세척한 후 동결건조하였다.

비교예 2: 종래 이중유화법을 초산 류프롤라이드 함유 미립구의 제조

초산 류프롤라이드 100mg을 증류수 100㎕에 용해한 다음 PLGA(Lakeshore 7525DLPLG2A) 900mg을 메틸렌클로라이드 1 mL에 용해한 고분자 용액에 혼합하여 1차 에멀젼을 제조하였다. 제조된 1차 에멀젼을 미리 제조된 1% 폴리비닐알코올(분자량 30,000-50,000)을 함유하는 350 mL 증류수 용액에 호모게나이저로 분산시켰다. 2차 에멀젼을 형성한 후 2시간 동안 교반시키고 용매를 제거하였다. 고형화된 미립구를 증류수로 수회 세척한 후 동결건조하였다.

하기 표 1에 본 발명의 실시예 1 내지 5 및 비교예 1 내지 2에 따라 제조하였을 때 전체 제조 부피 및 입자 제조시간을 나타내었다.

구분	PLGA 농도 (mg/mL)	API 첨가량 (중량%)	제조 스케일 (g)	2차 용액에 포함되는 계면활성제	2차 용액의 부피 (mL)	압력 (psi)	입자 제조 시간 (min)
실시예 1	240	10	1	폴리(비닐 알코올)	400	5,000(고압균질기)	10
실시예 2	240	10	1	폴리(비닐 알코올)	400	1,000(고압균질기)	10
실시예 3	240	10	1	폴리(비닐 알코올)	500	0	10
실시예 4	280	10	1	폴리(비닐 알코올)	150	25,000(고압펌프)	2
실시예 5	280	10	10	폴리(비닐 알코올)	1500	25,000(고압펌프)	15
비교예 1	450	10	0.5	폴리(비닐 알코올)	200	-	5
비교예 2	900	10	1	폴리(비닐 알코올)	350	-	5

실험예 1: 미립구의 초산 류프롤라이드 봉입량 측정

약물의 봉입률은 미립구 일정량을 디메틸설폭시드(DMSO)에 완전히 용해시킨 후 실린지 필터로 여과하여 검액으로 사용하고, HPLC를 이용하여 미립구 내에 봉입되어 있는 약물의 함량을 측정하였다. 이때 HPLC 분석을 위해 C18 컬럼(150 mm L. × 4.6 mm I.D. 5㎛)과 Gemini-NX C18 컬럼(4.0 mm L. × 3.0 mm I.D.)을 사용하였다. 시료의 용매 및 이동상은 포타슘카보네이트와 25% 아세토니트릴(ACN) 수용액(pH 7.0)이며, UV 220nm에서 검출하였다.

제조된 미립구 중 약물의 함량을 측정하여 그 봉입량을 하기 표 2에 나타내었다.

구분	약물 봉입량(약물중량/전체입자중량%)
실시예 1	12
실시예 2	12
실시예 3	12
실시예 4	10
실시예 5	10
비교예 1	9.9
비교예 2	4.5

상기 표 2를 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 대부분의 미립구 제형의 약물 봉입량이 10-12% 중량으로, 높은 고분자 담체 농도를 가지는 비교예 1과 비교했을 때 봉입량이 현저히 개선된 것을 알 수 있었다. 고분자 담체 농도는 봉입량을 결정하는 중요한 요소인데 기존의 미립구 제조 방법으로는 봉입량 10%에 도달하기 위해서 고분자 담체 농도를 800 ~ 900 mg/mL로 고농도로 제조해야 한다. 그러나, 고농도의 고분자 담체 용액은 점도가 높아 1차 에멀젼 형성 후 2차 용액에 투입시 매우 높은 전단력을 가진다. 또한 점도가 높으면 멸균 필터가 불가능한 단점이 있다. 본 발명은 저 농도의 고분자 담체 농도인 약 240 ~ 320 mg/mL에서도 봉입량을 10 ~ 12 %로 증가시킬 수 있는 장점이 있다.

실험예 2: 초산 류프롤라이드 함유 미립구의 입자 크기 측정

미립구의 입자 크기는 동결건조된 입자를 수상에 재분산하여 습식 입도분석기(Particle size Analyzer, Mastersize 2000S, Malvern, USA)를 이용하여 측정하였다.

그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

구분	입자분포도			평균 입자크기(㎛)
	D(0.1)	D(0.5)	D(0.9)
실시예 1	1.6	3.8	16.5	7.46
실시예 2	1.4	5.1	47.8	15
실시예 3	3.7	24.7	79.7	34.9
실시예 4	8.1	31.3	76	42.9
실시예 5	4.8	20.8	61.3	28.2

상기 표 3의 결과를 통해, 고압균질기 압력이 높아질수록 입자 크기는 작아지는 것을 알 수 있다(실시예 1, 2, 3).

또한, 제조 부피가 커질수록 오히려 입자크기가 균일해짐을 알 수 있었다(실시예 4 및 5). 이는 미립구 제조의 시간이 길어질수록 시작과 완료 부분에서 생기는 입자의 불균일성이 줄어들기 때문이라 여겨진다.

실험예 3: 초산 류프롤라이드 함유 미립구의 표면형태 측정

실시예 4와 5의 방법으로 제조된 미립구의 표면을 주사전자현미경(SEM)을 사용하여 관찰하고, 그 측정결과를 도 2a 및 도 2b에 나타내었다.

실시예 4와 비교하였을 때, 실시예 5는 제조 스케일이 10배 증가하였으나, 입자크기는 오히려 균일하고 작은 것으로 관찰되었다. 통상적인 비연속식 공정에서는 제조 스케일을 10배 증가시키게 되면 그에 비례해서 2차 에멀젼의 형성시 분산을 위한 에너지를 증가시켜야 한다. 그 에너지의 형태는 균질기의 rpm을 증가시키거나, 초음파를 사용하거나, 인라인 균질기로 전체 용액을 순환시키면서 균질화하는 방법 등이 될 수 있다. 제조 스케일에 비례해서 제조부피도 동일하게 증가시켜야 하는데, 그 이유는 1차 에멀젼 대비 2차 용액의 부피가 봉입량에 상당한 영향을 끼치기 때문이다. 적어도 같은 봉입량을 유지하기 위해서는 1차 에멀젼의 제조 스케일이 커질수록 2차 용액의 부피도 비례적으로 증가시켜야 한다. 이러한 이유로 제조 부피도 제조 스케일과 더불어 동시에 증가하고 분산을 위해 높은 에너지를 가해야 동일한 크기의 입자를 얻을 수 있다. 본 발명은 제조 스케일과 제조부피에 상관없이 일정한 부피와 일정한 량의 미립자가 지속적으로 제조되는 방법으로 제조 스케일이 커질수록 오히려 균일하게 입자가 생성되는 장점을 가지고 있다. 또한, 제조 스케일이 커져도 별도의 물리적 조건을 변경할 필요가 없다.

Claims (19)

1. 이중유화법에 의해 생분해성 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제조하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 미립구의 제조 방법:
   생분해성 고분자와 생리활성 물질을 분산 또는 혼합하여 1차 에멀젼을 형성시키는 단계(단계 1);
   상기 1차 에멀젼, 및 폴리(비닐 알코올), 폴리소르베이트, 폴록사머 및 폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 계면활성제가 용해된 2차 용액의 각 일정량을 연속적으로 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시키는 단계(단계 2); 및
   상기 2차 에멀젼에 500 psi 내지 30,000 psi의 압력을 가하는 단계(단계 3).
   
2. 제1항에 있어서, 상기 단계 3) 이후에 상기 2차 에멀젼을 교반하는 단계(단계 4)를 추가로 포함하는 방법.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 단계 2)는 액체이송펌프에 의해 상기 1차 에멀젼 및 상기 2차 용액의 각 일정량을 연속적으로 2차 에멀젼이 형성되는 반응기까지 이송시켜 상기 1차 에멀젼 및 상기 2차 용액를 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시킴으로써 수행되는 방법.
   
4. 제3항에 있어서, 상기 반응기는 내부에 메쉬망을 장착하여 상기 1차 에멀젼 및 상기 2차 용액이 메쉬망을 통과한 후 2차 에멀젼을 형성하도록 한 것인 방법.
   
5. 제4항에 있어서, 상기 메쉬망의 입도는 1 ~ 50 ㎛인 방법.
   
6. 삭제
7. 이중유화법에 의해 생분해성 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제조하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 미립구의 제조 방법:
   생분해성 고분자와 생리활성 물질을 분산 또는 혼합하여 1차 에멀젼을 형성시키는 단계(단계 1);
   상기 1차 에멀젼, 및 폴리(비닐 알코올), 폴리소르베이트, 폴록사머 및 폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 계면활성제가 용해된 2차 용액의 각 일정량을 연속적으로 혼합하여 2차 에멀젼을 형성시키는 단계(단계 2); 및
   상기 2차 에멀젼에 고압균질기 또는 고압펌프 중 어느 하나를 이용하여 압력을 가하는 단계(단계 3).
   
8. 제2항에 있어서, 상기 단계 4)는 상기 2차 에멀젼을 2차 에멀젼이 형성되는 반응기로부터 연속적으로 교반기로 투입시켜 교반기 내에서 교반함으로써 수행되는 방법.
   
9. 제8항에 있어서, 상기 2차 에멀젼을 교반기로 투입시키는 속도는 반응기로 1차 에멀젼 및 2차 용액이 공급되는 속도와 동일한 것을 특징으로 하는 방법.
   
10. 제8항에 있어서, 상기 2차 에멀젼을 교반기로 투입하는 수단은 고압펌프 또는 액체 이송 펌프인 방법.
    
11. 제1항에 있어서, 상기 생리활성 물질은 LHRH(luteinizing hormone-release hormone) 동족체, 펩타이드, 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 방법.
    
12. 제11항에 있어서, 상기 생리활성 물질은 고세렐린, 초산 류프롤라이드, 트립토렐린, 부세렐린, 나파렐린, 세트로렐릭스, 및 알지타이드로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 방법.
    
13. 삭제
14. 제1항에 있어서, 상기 생분해성 고분자는 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 및 폴리(락타이드-코-글리코라이드), 폴리오르토에스테르, 폴리안하이드라이드, 폴리아미노산, 폴리하이드록시부티르산, 폴리카프로락톤, 폴리알킬카보네이트, 지질, 지방산, 왁스, 알부민, 젤라틴, 콜라겐, 피브린산, 알긴산,키틴, 키토산, 덱스트란, 히알루론산 및 전분으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
    
15. 삭제
16. 삭제
17. 삭제
18. 이중유화법에 의해 생분해성 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제조하기 위한 장치로서, 하기를 포함하는 미립구 제조 장치:
    생분해성 고분자와 생리활성 물질이 분산 또는 혼합되어 있는 1차 에멀젼이 담기는 제1용기;
    폴리(비닐 알코올), 폴리소르베이트, 폴록사머 및 폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 계면 활성제가 용해되어 있는 2차 용액이 담기는 제2용기;
    상기 제1용기의 1차 에멀젼, 및 제2용기의 2차 용액이 연속적으로 투입되어 2차 에멀젼이 형성되는 반응부;
    상기 2차 에멀젼에 500 psi 내지 30,000 psi의 압력을 가하는 압력부; 및
    상기 압력부를 통과한 용액을 교반하는 교반기.
    
19. 이중유화법에 의해 생분해성 고분자 내에 생리활성 물질이 봉입된 미립구를 제조하기 위한 장치로서, 하기를 포함하는 미립구 제조 장치:
    생분해성 고분자와 생리활성 물질이 분산 또는 혼합되어 있는 1차 에멀젼이 담기는 제1용기;
    폴리(비닐 알코올), 폴리소르베이트, 폴록사머 및 폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 계면 활성제가 용해되어 있는 2차 용액이 담기는 제2용기;
    상기 제1용기의 1차 에멀젼, 및 제2용기의 2차 용액이 연속적으로 투입되어 2차 에멀젼이 형성되는 반응부;
    고압균질기 또는 고압펌프 중 어느 하나를 포함하는, 상기 2차 에멀젼에 압력을 가하는 압력부; 및
    상기 압력부를 통과한 용액을 교반하는 교반기.

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