KR101523683B1 - 신규한 루테올린-7-o-n-아세틸-d-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법 - Google Patents
신규한 루테올린-7-o-n-아세틸-d-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101523683B1 KR101523683B1 KR1020130091298A KR20130091298A KR101523683B1 KR 101523683 B1 KR101523683 B1 KR 101523683B1 KR 1020130091298 A KR1020130091298 A KR 1020130091298A KR 20130091298 A KR20130091298 A KR 20130091298A KR 101523683 B1 KR101523683 B1 KR 101523683B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- gene
- seq
- uglcnacdh
- coli
- derived
- Prior art date
Links
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 60
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 claims abstract description 35
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N luteolin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N luteolin Natural products OC1=CC(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 235000009498 luteolin Nutrition 0.000 claims abstract description 28
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 240000001436 Antirrhinum majus Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 108010038972 UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 35
- 241000207875 Antirrhinum Species 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 15
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 3
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 7
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 5
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 4
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 4
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 235000011962 puddings Nutrition 0.000 description 4
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 3
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 3
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 2
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 2
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 2
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 240000000851 Vaccinium corymbosum Species 0.000 description 2
- 235000003095 Vaccinium corymbosum Nutrition 0.000 description 2
- 235000017537 Vaccinium myrtillus Nutrition 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 2
- 235000021014 blueberries Nutrition 0.000 description 2
- 235000013736 caramel Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000011437 continuous method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000019685 rice crackers Nutrition 0.000 description 2
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 2
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 2
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethylcyclopentane-1,2-dione Chemical compound CC1CC(C)C(=O)C1=O MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 102000016912 Aldehyde Reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 1
- 244000208874 Althaea officinalis Species 0.000 description 1
- 235000006576 Althaea officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241001290017 Bacillus cytotoxicus NVH 391-98 Species 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 206010007749 Cataract diabetic Diseases 0.000 description 1
- 241001672694 Citrus reticulata Species 0.000 description 1
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 240000000571 Nopalea cochenillifera Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N UDP-N-acetyl-alpha-D-glucosamine Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N 0.000 description 1
- 108030003458 UDP-N-acetylglucosamine 6-dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N UNPD164450 Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(NC(=O)C)C1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 235000014171 carbonated beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 235000011950 custard Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 235000011850 desserts Nutrition 0.000 description 1
- 201000007025 diabetic cataract Diseases 0.000 description 1
- 235000014505 dips Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000019990 fruit wine Nutrition 0.000 description 1
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 235000008960 ketchup Nutrition 0.000 description 1
- 235000021109 kimchi Nutrition 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000020094 liqueur Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 150000002659 luteolin Chemical class 0.000 description 1
- 239000004579 marble Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000001035 marshmallow Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015145 nougat Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 235000020095 red wine Nutrition 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 235000011496 sports drink Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000006098 transglycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000005918 transglycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/06—Benzopyran radicals
- C07H17/065—Benzo[b]pyrans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/94—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with rings other than six-membered or with ring systems containing such rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자와 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp.) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 대사조절된 대장균에 발현시켜 루테올린에서 신규한 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid)을 합성하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자와 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .)에서 유래한 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 대사조절된 대장균에 발현시켜 루테올린에서 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid)을 합성하는 방법에 관한 것이다.
일반적으로 배양방법과 유전자 조작기술이 잘 확립되어 있는 대장균과 같은 미생물에 유용한 유전자를 도입함으로써 천연물을 효소학적으로 변형할 수 있는데, 이러한 방법을 생물전환법(biotransformation)이라 한다. 생물전환법을 이용하면 반응중간에 들어가는 값비싼 보조인자(cofactor)를 절약할 수 있는 장점을 가지고있다.
새로운 의약 후보물질로 많은 관심을 불러일으키고 있는 플라보노이드는 식물이 만들어 내는 많은 이차 대사산물 중 하나이다. 플라보노이드는 항산화 작용, 항암효과, 항염 및 항알러지효과 등과 같은 여러 가지 생리활성을 가지는 것으로 보고되고 있다. 이러한 플라보노이드의 당화(glycosylation)는 용해도가 증가되고, 동시에 흡수성이 높아지는 것으로 알려져 있다. 이처럼 천연물이 특정한 구조적 변형이 일어나면 생리활성이 변하는데, 대표적인 구조적 변형 방법은 하이드록시기(-OH) 그룹에 당(glucose) 한 분자를 전이시켜 주는 역할을 하는 당전이효소(glycosyltransferases)를 이용하는 것이다.
루테올린(luteolin)은 과일과 야채에 존재하는 플라보노이드로 탁월한 산화방지제이자 우수한 자유 라디칼 소거제이다. 또한, 효소적 지질 과산화반응, 비효소적 지질 과산화반응 및 CCl4-유도된 지질 과산화반응 모두를 억제한다. 루테올린은 심혈관계에 대해 유리한 영향을 미치며, 죽상경화증의 전개를 예방할 수도 있다. 특히, 루테올린의 항암 효과는 다양한 인간 종양 세포주에 대해 상당한 항증식성 활성으로부터 자명하게 증명되었다. 또한 루테올린은 소염성, 항바이러스성, 항박테리아성 및 방사선 방호성이 보고된 바 있으며, 효소 알도즈 환원효소(aldose reductase)의 저해제로서 당뇨성 백내장의 전개에 대한 예방적 효과도 보고되었다.
당전이효소는 핵산당(nucleotide sugar)을 당 공여체(donor)로 이용하는데, 본 발명은 새로운 구조의 핵산당을 대장균에서 만들기 위해 대장균의 핵산당 대사경로를 분석하고 핵산당 합성경로에 있는 물질들을 기질로 사용할 수 있는 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine 6-dehydrogenase) 유전자를 대장균에 도입하였다. UGlcNAcDH 유전자는 UDP-N-아세틸글루코사민(acetylglucosamine)을 이용하여 UDP-N-아세틸-글루코사민우론산(glucosaminuronic acid)을 만들며, 이렇게 만들어진 UDP-N-아세틸-글루코사민우론산은 당전이효소에 의해 기질에 당화된다. 본 발명은 기질로 루테올린을 사용하였고, 상기와 같은 반응을 통해 신규 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid)을 합성하였다.
이러한 물질은 자연계에는 존재하지 않으며, 또한 기존의 화학적인 방법을 이용해서 합성하는 것은 거의 불가능하다. 생물전환법(효소학적 합성 방법)은 화학적 합성법으로 물질을 변형하기 어려운 위치 선택성과 키랄 선택성을 가지기 때문에 화학적 합성법에 비하여 여러 가지 장점을 가지고 있다. 따라서, 본 발명의 두 유전자(AmUGT 및 UGlcNAcDH)를 가지고 대장균을 이용한 생물전환법은 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산을 생산할 수 있는 새로운 방법이 될 수 있을 것이다.
한국등록특허 제0716797호에는 '당전이 효소를 이용한 당전이 화합물의 유도체 제조방법 및 이로부터 제조된 유도체'가 개시되어 있고, 한국공개특허 제2001-0085971호에는 '루테올린 및 이의 유도체의 제조방법'이 개시되어 있으나, 본 발명의 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자와 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 대사조절된 대장균에 발현시키고, 상기 형질전환 대장균을 이용하여 루테올린을 기질로 하여 신규한 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산을 합성함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid) 화합물을 제공한다.
또한, 본 발명은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 함유하는 상기 신규 화합물의 제조용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
a) 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;
b) 상기 발현벡터들을 대장균에 형질전환시키는 단계; 및
c) 상기 형질전환 대장균을 배양하면서 루테올린을 기질로 첨가하는 단계를 포함하는 상기 신규 화합물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환되어 상기 신규 화합물을 생산하는 형질전환 대장균을 제공한다.
또한, 본 발명은 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 대장균에 발현시켜 신규한 화합물을 합성하는 것에 관한 것이다. 본 발명을 통하여 알 수 있는 바와 같이 본 발명의 대장균 시스템을 통하여 루테올린을 기질로 하여 신규한 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산을 만들어내었다. 본 발명의 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산은 그 화합물을 구성하고 있는 각각의 구성성분이 가지는 기능성으로 인하여 각종 식품, 의약품 및 화장품 등에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 기질 루테올린으로부터 신규 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산을 합성하는 것을 도식화한 그림이다.
도 2는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 형질전환시킨 대사조절된 대장균을 이용하여 루테올린을 기질로 생물전환을 실시하여 얻은 반응물을 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분석한 결과이다.
도 3은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 형질전환시킨 대사조절된 대장균을 이용하여 루테올린을 기질로 생물전환을 실시하여 얻은 반응물의 질량분석(MS) 결과이다.
도 4는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현 벡터별로 신규 화합물의 생산량을 비교한 결과이다. Product; 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산, Substrate; 루테올린.
도 5는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 pCDFDuet 벡터로 형질전환시킨 대사조절된 대장균에서 단백질 발현 유도 배양 조건에서 온도 및 시간을 달리하여 신규 화합물의 생산량을 비교한 결과이다.
도 6은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 pCDFDuet 벡터로 형질전환시킨 대사조절된 대장균에서 단백질 발현 유도 배양 조건 중 세포 농도별로 신규 화합물의 생산량을 비교한 결과이다. Product; 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산.
도 7은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현 벡터로 형질전환시킨 대사조절된 대장균을 최적화된 조건에서 배양하며, 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물의 생산량을 확인한 결과이다. P; 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산, S; 루테올린.
도 2는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 형질전환시킨 대사조절된 대장균을 이용하여 루테올린을 기질로 생물전환을 실시하여 얻은 반응물을 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분석한 결과이다.
도 3은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 형질전환시킨 대사조절된 대장균을 이용하여 루테올린을 기질로 생물전환을 실시하여 얻은 반응물의 질량분석(MS) 결과이다.
도 4는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현 벡터별로 신규 화합물의 생산량을 비교한 결과이다. Product; 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산, Substrate; 루테올린.
도 5는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 pCDFDuet 벡터로 형질전환시킨 대사조절된 대장균에서 단백질 발현 유도 배양 조건에서 온도 및 시간을 달리하여 신규 화합물의 생산량을 비교한 결과이다.
도 6은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 pCDFDuet 벡터로 형질전환시킨 대사조절된 대장균에서 단백질 발현 유도 배양 조건 중 세포 농도별로 신규 화합물의 생산량을 비교한 결과이다. Product; 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산.
도 7은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자와 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현 벡터로 형질전환시킨 대사조절된 대장균을 최적화된 조건에서 배양하며, 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물의 생산량을 확인한 결과이다. P; 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산, S; 루테올린.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid) 화합물을 제공한다.
또한, 본 발명은 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 함유하는 상기 화합물의 제조용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물은 AmUGT 유전자 및 UGlcNAcDH 유전자가 하나의 발현 벡터에 함께 도입될 수도 있고, 별개의 발현 벡터에 각각 도입될 수도 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 금어초 유래 당전이 효소 AmUGT 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어질 수 있다. 또한, 상기 염기 서열의 상동체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 구체적으로, 상기 유전자는 서열번호 1의 염기 서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 이루어질 수 있다. 또한, 상기 염기 서열의 상동체가 본 발명의 범위 내에 포함되는데 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
용어 "벡터"는 세포 내로 전달하는 DNA 단편(들), 핵산 분자를 지칭할 때 사용된다. 벡터는 DNA를 복제시키고, 숙주세포에서 독립적으로 재생산될 수 있다. 용어 "전달체"는 흔히 "벡터"와 호환하여 사용된다. 용어 "발현 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다. 진핵세포에서 이용가능한 프로모터, 인핸서, 종결신호 및 폴리아데닐레이션 신호는 공지되어 있다.
본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터(예: pLλ프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, T7 프로모터, tac 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 리보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 숙주 세포로서 대장균(E. coli)이 이용되는 경우, 대장균 트립토판 생합성 경로의 프로모터 및 오퍼레이터 부위, 그리고 파아지 λ의 좌향 프로모터(pLλ프로모터)가 조절 부위로서 이용될 수 있다.
한편, 본 발명에 이용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드(예: pSC101, ColE1, pBR322, pUC8/9, pHC79, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지(예: λgt4·λB, λ-Charon, λΔz1 및 M13 등) 또는 바이러스(예: SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.
본 발명의 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.
또한, 본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물은 대장균을 추가로 포함하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 포스포글루코뮤타제(phsophoglucomutase)가 결손된 대장균을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은
금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;
상기 발현벡터들을 대장균에 형질전환시키는 단계; 및
상기 형질전환 대장균을 배양하면서 루테올린을 기질로 첨가하는 단계를 포함하는 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 금어초 유래 당전이 효소 AmUGT 유전자는 서열번호 1의 염기서열로, 상기 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 이루어질 수 있다. 또한, 상기 염기 서열의 상동체가 본 발명의 범위 내에 포함되는데 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 발명의 벡터를 숙주세포 내로 운반하는 방법은, 숙주 세포가 원핵 세포인 경우, CaCl2 방법, 하나한 방법(Hanahan, 1983, J. Mol. Biol. 166:557-580) 및 전기천공 방법 등에 의해 실시될 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 발현벡터들로 형질전환된 대장균은 바람직하게는 포스포글루코뮤타제(phsophoglucomutase)가 결손된 대장균일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따른 방법에서, 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 생산을 위한 상기 형질전환 대장균의 단백질 발현 유도 배양 조건은 15~30℃의 온도, 배양 시간 12~72시간 및 세포농도 OD600=2~10일 수 있고, 바람직하게는 17~19℃의 온도, 배양 시간 45~55시간, 세포 농도는 600nm=4~5, 가장 바람직하게는 18℃의 온도, 48시간 배양 및 세포농도 OD600=5일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한, 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp .) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환되어 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산을 생산하는 대장균을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 대장균은 바람직하게는 포스포글루코뮤타제(phsophoglucomutase)가 결손된 대장균일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 화합물을 포함하는 식품으로서는 제한은 없으나, 아이스크림, 샤베트, 빙과 등의 냉과류; 유음료, 유산균 음료, 청량음료(과즙이 함유된 것을 포함), 탄산음료, 야채/과실 음료, 스포츠음료, 분말음료 등의 음료류; 리큐르 등의 알코올음료; 커피음료, 홍차 음료 등의 차 음료류; 콘소메 스프, 포타지 스프 등의 스프류; 카스타드 푸딩, 밀크 푸딩, 과즙 함유 푸딩 등의 푸딩류, 젤리, 바발로아(babaloa) 및 요구르트 등의 디저트류; 츄잉검이나 풍선검 등의 검류(스틱검, 당코팅된 검볼); 마블 쵸콜렛 등의 코팅된 쵸콜렛 외에 딸기 쵸콜렛, 블루베리 쵸콜렛 및 멜론 쵸콜렛 등의 풍미를 부가한 쵸콜렛 등의 쵸콜렛류; 경질 사탕(hard candy)(봉봉, 버터볼, 마블 등을 포함), 연질 사탕(softcandy)(캬라멜, 누가(nougat), 구미캔디(gummy candy), 마쉬멜로우(marshmallow) 등을 포함), 드로프(drop), 태피(taffy) 등의 캬라멜류; 하드 비스켓, 쿠키, 오카키(okaki, 쌀 크래커), 전병(sembei, 쌀 크래커) 등의 구운 과자류; 절임류, 김치, 세퍼레이트 드레싱, 오일 프리 드레싱, 케첩, 딥, 소스 등의 소스류; 딸기잼, 블루베리잼, 마말레이드, 사과잼, 살구잼, 설탕조림과일(preserves) 등의 잼류; 적포도주 등의 과실주; 시럽에 조린 체리, 살구, 사과, 딸기, 배 등의 가공용 과실; 햄, 소시지, 로스트 포크 등의 육류 가공품; 어육햄, 어육소시지, 어육 필레(fillet), 어묵; 치즈 등의 낙농 제품류; 우동, 냉국수, 소면, 메밀국수, 중국식 메밀국수, 스파게티, 마카로니, 쌀국수(bifun), 당면 및 만두국 등의 면류; 이외 각종 부식 등의 다양한 가공 식품을 들 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 금어초
당전이효소
유전자의
클로닝
및 대장균 발현벡터 제작
금어초 당전이효소 유전자의 분리
금어초의 꽃을 액체질소로 곱게 갈아 총 RNA를 분리했다. 분리한 총 RNA를 사용하여 올리고-dT를 프라이머로 하여 역전사를 실시하여 cDNA를 합성하였다. 총 cDNA를 주형으로 금어초의 게놈에서 얻은 염기 서열을 바탕으로 NdeI과 XhoI 제한효소 자리를 삽입하여 만든 정방향(5'-GCCATATGGAGGACACTATCGTTCTCTACG-3'; 서열번호 3, 밑줄; NdeI 자리) 및 역방향 (5'-GCCTCGAGTTAAGAAACCACCATATCAACA-3'; 서열번호 4, 밑줄; XhoI 자리) 프라이머를 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR, polymerase Chain Reaction)을 실시하였다.
PCR은 Taq 폴리머라제를 위의 cDNA 및 프라이머들과 혼합하여 94℃ 60초, 55℃ 60초, 72℃ 90초의 사이클을 40회 반복하여 수행하였고, PCR 결과 약 1.3kbp에 해당되는 금어초 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자를 증폭하였다. 증폭된 DNA를 대장균 클로닝 벡터인 pGEMT-easy에 옮겨 염기서열을 결정하였다.
AmUGT 유전자를 발현시키기 위한 벡터 제작
클로닝한 금어초 당전이효소 유전자를 발현시키기 위하여 상기 NdeI과 XhoI 제한효소 자리를 삽입하여 만든 AmUGT 당전이효소 유전자의 정방향 및 역방향 프라이머(서열번호 3 및 서열번호 4)와 pfu Taq 폴리머라제를 이용하여 이차 PCR을 수행한 후, PCR 산물을 제한효소로 처리한 후, pACYCDuet, pCDFDuet 및 pETDuet 벡터(Novagen, 독일)에 각각 클로닝하였다.
실시예
2.
UGlcNAcDH
유전자의 합성 및 대장균 발현벡터 제작
UGlcNAcDH 유전자의 합성
바실러스 세레우스 아종 cytotoxis NVH391-98(Bacillus cereus subsp. cytotoxis NVH391-98) 유래 UGlcNAcDH 유전자는 이전에 발표된 논문(Gu et al., 2010, J. Biol. Chem. 285:24825-24833)의 염기서열을 바탕으로 바이오니아(한국)에서 합성하였고, 코돈 최적화를 통해 대장균에서 단백질이 더욱 잘 발현되도록 하였다. 또한 UGlcNAcDH 유전자의 합성시 5' 끝에 EcoRI 자리를 3' 끝에 NotI 자리를 넣어서 합성을 진행하였다.
UGlcNAcDH 유전자를 발현시키기 위한 벡터 제작
합성한 UGlcNAcDH 유전자를 발현시키기 위하여 EcoRI과 NotI 제한효소로 합성한 DNA를 처리하고, AmUGT 유전자가 삽입되어 있는 pACYCDuet, pCDFDuet 및 pETDuet 벡터에 삽입하였다.
실시예
3.
AmUGT
유전자 및
UGlcNAcDH
유전자 형질전환 대장균 제조 및 생물전환방법을 이용한 새로운 물질 생산
포스포글루코뮤타제(phsophoglucomutase)가 결손된 것을 특징으로 하는 대장균 BL21(△pgm)에 상기 AmUGT 유전자와 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 형질전환하였다. AmUGT 유전자와 UGlcNAcDH 유전자를 발현하는 형질전환 대장균을 50㎍/㎖ 클로람페니콜(pACYCDuet 벡터), 50㎍/㎖ 스펙티노마이신(pCDFDuet 벡터) 및 50㎍/㎖ 엠피실린(pETDuet 벡터)의 항생제를 첨가한 LB 배지에 종균배양 하였다. 밤샘 배양한 종균배양 대장균 균주를 새로운 LB 배지에 접종하고, 600nm에서 흡광도 값 0.8까지 되게 배양하였다. 배양된 대장균에 IPTG를 최종농도 1mM로 첨가해 주고, 18℃에서 20시간 동안 단백질을 발현시킨다. 배양된 대장균은 원심분리를 하여 상등액은 버리고, 회수된 대장균은 50㎍/㎖ 클로람페니콜(pACYCDuet 벡터), 50㎍/㎖ 스펙티노마이신(pCDFDuet 벡터), 50㎍/㎖ 엠피실린(pETDuet 벡터) 및 2% 글루코스가 첨가된 M9 배지에 흡광도 600nm에서 값이 5.0가 되게 맞추어 주었다. 여기에 최종 농도가 100μM이 되게 기질인 루테올린을 첨가해주고 30℃에서 24시간 동안 진탕 배양하였다. 상등액은 끊임법(boiling)을 이용하여 추출하였다. 반응물은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석에 이용하였다.
그 결과, 루테올린으로부터 새로운 화합물의 생성이 확인되었고(도 2), 이 물질의 분자량을 질량분석으로 확인해본 결과 502.3-Da 크기의 물질임이 확인되었다(도 3).
실시예
4: 대장균 발현벡터별 루테올린-7
-O-N
-아세틸-D-
글루코사민우론산
생산량 비교
루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid)의 생산 조건의 최적화를 위해 UGlcNAcDH 유전자의 발현을 위한 대장균 발현벡터별 생산량의 차이를 비교해보았다. 사용된 발현벡터의 종류는 pACYCDuet, pCDFDuet 및 pETDuet 벡터이다. 상기 실시예 3에서의 방법과 동일하게 새로운 화합물의 생성을 확인하였다. 각각의 벡터별 반응물을 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분석하였다.
그 결과, 동량의 루테올린을 기질로 넣어주었을 때, pCDFDuet 벡터를 사용한 대장균주에서 신규 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산의 생성량이 가장 높았다(도 4).
실시예
5. 형질전환 대장균의 단백질 발현 유도 배양 조건 최적화를 통한 신규 화합물의 생산량 비교
최적의 발현벡터를 사용하여 AmUGT 유전자 및 UGlcNAcDH 유전자를 발현하는 대장균 BL21(△pgm)은 항생제를 첨가한 LB 배지에 종균배양 하였다. 밤샘 배양한 종균배양 대장균 균주를 새로운 LB 배지에 접종하였다. 대장균은 흡광도 600nm에서 값이 0.8까지 되게 배양하였고, 배양된 대장균에 IPTG를 1mM로 첨가해 주고, 18℃, 25℃ 및 30℃에서 1일(24시간) 및 2일(48시간) 동안 단백질을 발현시켰다. 배양된 대장균은 원심분리를 하여 상등액을 버리고, 회수된 대장균은 항생제 및 2% 글루코스가 첨가된 M9 배지에 흡광도 600nm에서 값이 2.5가 되게 맞추어 주었다. 여기에 최종 농도가 100μM이 되도록 기질인 루테올린을 첨가해주고 30℃에서 24시간 동안 진탕 배양한 후, 상등액은 끊임법을 이용하여 추출하였다. 반응물은 고성능 액체 크로마토그래피 분석에 이용하였다.
그 결과, 단백질 발현 유도 배양 조건에서 25℃ 및 30℃의 온도 조건보다 18℃ 온도 조건에서 신규 화합물의 생산량이 좋았으며, 1일(24시간) 배양 시간보다 2일(48시간) 동안 단백질 발현을 유도한 조건에서 신규 화합물인 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산의 생산량이 더 좋은 것으로 확인되었다(도 5).
실시예
6. 세포 농도 조건 최적화를 통한 신규 화합물의 생산량 비교
AmUGT 유전자와 UGlcNAcDH 유전자를 가지고 있는 대장균 BL21(△pgm)을 항생제를 첨가한 LB 배지에 종균배양 하였다. 밤샘 배양한 종균배양 대장균 균주를 새로운 LB 배지에 접종하고, 대장균은 흡광도 600nm에서 0.8까지 되도록 배양하였다. 배양된 대장균에 IPTG를 1mM로 첨가해 주고, 18℃ 온도에서 1일(24시간)동안 단백질을 발현시켰다. 배양된 대장균은 원심분리를 하여 상등액을 버리고, 회수된 대장균은 항생제 및 2% 글루코스가 첨가된 M9 배지에 흡광도 600nm에서 값이 각 1.0, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 7.0 및 10이 되게 맞추어 주었다. 여기에 최종 농도가 100μM이 되도록 기질인 루테올린을 첨가해주고 30℃에서 24시간 동안 진탕 배양하였다. 상등액은 끊임법을 이용하여 추출하고, 반응물은 고성능 액체 크로마토그래피 분석에 이용하였다.
그 결과, 세포 농도가 흡광도 600nm에서 값이 5가 될때까지 세포 농도 의존적으로 신규 화합물의 생산량이 증가되었고, 흡광도 600nm에서 값이 5를 넘어서는 경우부터는 신규 화합물의 생산량이 다시 감소되는 것을 확인하였다(도 6).
이상의 결과들을 통해, UGlcNAcDH 유전자 발현을 위한 벡터는 pCDFDuet을 사용하고, 당전이효소 AmUGT 유전자 및 UGlcNAcDH 유전자를 가지고있는 대장균 BL21(△pgm)을 흡광도 600nm에서 값이 4~5가 되도록 세포농도를 맞추고, 18℃ 온도에서 2일(48시간) 동안 배양하는 단백질 발현 유도 조건에서, 신규한 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산 화합물의 생산이 최적화됨을 확인하였다.
<110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp
<120> Novel compound Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid and
method for producing the same
<130> PN13210
<160> 4
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 1374
<212> DNA
<213> Antirrhinum majus
<400> 1
atggaggaca ctatcgttct ctacgcttca gcagagcacc ttaactccat gctactactc 60
ggcaaactca tcaacaaaca ccaccccaca atctccgtcg ccattatcag caccgcccca 120
aacgccgccg ctagttccgt cgccgacgtg gcggccatat cttatcagca actcaaaccg 180
gccactctcc cttcggatct aaccaaaaac ccaatcgagc tcttcttcga aatcccacgt 240
ctacataatc ctaacttgct cgaagcgctg gaagaactgt cactaaaatc aaaagtaagg 300
gcatttgtga tagatttctt ttgcaatccc gcatttgagg tttcgactag cttgaacata 360
cccacttact tctatgtcag cagcggcgcg tttgggctat gcgggttctt gcattttccg 420
acaatcgacg aaactgtcga aaaagacatc ggtgaactga acgatatctt ggagatcccg 480
ggttgccccc cggttttgtc ctcggatttt ccgaaaggta tgttctttcg caagagtaac 540
acttacaagc attttttaga cacggcgaaa aacatgagga gagcgaaagg gatcgtggtg 600
aacgccttcg acgcgatgga gttccgagct aaagaagccc tcgtcaacaa tctgtgcgta 660
cccaattcgc caactccccc agttttctta gtcggcccat tggtcggagc aagcacaact 720
acgaaaacca caaacgaaca gcacgaatgc ttgaaatggc tggacgtgca gccagacaga 780
agcgtgatct tcttatgttt cggtaggagg ggtttgttct ccgcagacca attgaaggaa 840
atcgcaattg gtctggagaa cagcggccac aggttcctgt ggtccgtgcg ttgcccacca 900
agtaagccta actcttataa cactgatccg gacctggacg agctcctgcc cgaggggttt 960
ttgtccagga ccgagacccg gggtttcgtg atcaagtcgt gggcgcctca gaaggaggtg 1020
ctgagccatg gcgcggttgg agggttcgtg acgcactgtg ggaggagttc gatattggaa 1080
gcggtgtcgt ttggggtgcc gatgatcggg tggccgatat acgcggagca gaggatgaat 1140
agggtgttca tggtggagga gatgaaggtg gcgttgcagt tggatgaggt ggaggaaggg 1200
ttcgtggcgg cggtggaatt ggagaagaga gtgaaggagt tgatggattc gaagaatggg 1260
agagcggtta ggcagagagt gaaggagatg aaagtggcgg ctgaggtggc ggttgaaaag 1320
ggtggttcgt cagttgtggc gttgcaacgc tttgttgata tggtggtttc ttaa 1374
<210> 2
<211> 1287
<212> DNA
<213> Bacillus cereus subsp.
<400> 2
gaattcgatg gaaaaagaga aaggtgaaga aaaaatgaac gattctcgca aaatcactgt 60
tatcggattg ggctatgttg gcctgccgct ggcgatccat tttgcggaac ggggctataa 120
cgtcgtcggc ttagataagg acaaacgcaa aattgaacgc attgaaaaag gagattctta 180
cataccagac gtttcctcga acgttttaaa agatttggta caaaacaaac agttggtagt 240
ttatacacct cataccggga tagaagagtt tcagaatagt gaatatgtga tcgtgacggt 300
cccgacgcca atcaataaac agaaagaacc tgatttatcg gctctcattg cagcgtcaca 360
ctatataaaa cagaatcttc aggcaggaca gaccttcatt tttgaaagtt ccacatatcc 420
gggtacactt gaagaggtca tcattccgat tattgcccaa tcaggtaagg aagttggaaa 480
agattattat attggctaca gccctgagcg tattgatccg gccaatcaac agtacacagt 540
tcagaccatt ccaaaagtga tttcgggtca aacagagaga tgtaagcagc aagtccagaa 600
attgtatagc accatttttg acaccgtcgt tccagtgagt tccccaaaag tagcagagat 660
gtgtaaactg ttcgaaaata tacagcgtct ggttaacata tccctggtaa atgagttaaa 720
catcctttgc gaaaagctgg ggattgactt tcgggaggct cttgaagccg cggccaccaa 780
accattcggt tttacgccat actggccggg cccaggtata gggggacatt gtattccggt 840
tgatccctta tactttcagt ggaaagcccg tcagctaggg caatcatcac agctgatcga 900
agtggctcac atgattaatg agaagatgcc gcaacaaatc gtaacgcagg tgaaggagct 960
gagtgctccc ccagggactg tcttcctgat cggcattgcg tacaaaaaag acgtgaatga 1020
tttacgagag tctcctgcac tcccgattat cgagctgctc gtgaacgagg gttataaagt 1080
gcaatatcac gatccctaca ttagctctgc gaaaatcggt gacaaaatat acgattctat 1140
cccccttaaa aagaaaaccc tggaaaaggc agattgcatt ctaattgtaa cggaccatag 1200
caatatagac tggaatatat gcaagggaat gaagcatgta atcgatactc gcggtgtatt 1260
gaagaaggtt agcgcataag cggccgc 1287
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
gccatatgga ggacactatc gttctctacg 30
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 4
gcctcgagtt aagaaaccac catatcaaca 30
Claims (13)
- 하기 화학식 1의 루테올린-7-O-N-아세틸-D-글루코사민우론산(Luteolin-7-O-N-acetyl-D-glucosaminuronic acid) 화합물.
[화학식 1]
- 서열번호 1의 염기서열을 가지는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp.) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 함유하는 제1항의 화합물 제조용 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제2항에 있어서, 상기 조성물은 대장균을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항의 화합물 제조용 조성물.
- a) 서열번호 1의 염기서열을 가지는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp.) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;
b) 상기 발현벡터들을 대장균에 형질전환시키는 단계; 및
c) 상기 형질전환 대장균을 배양하면서 루테올린을 기질로 첨가하는 단계를 포함하는 제1항의 화합물의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 제6항에 있어서, 상기 대장균은 포스포글루코뮤타제(phsophoglucomutase)가 결손된 대장균인 것을 특징으로 하는 제1항의 화합물의 제조방법.
- 제6항에 있어서, 상기 c)단계의 형질전환 대장균의 단백질 발현 유도 배양 조건은 온도는 17~19℃, 배양 기간은 45~55시간, 세포 농도는 600nm에서 흡광도가 4~5인 것을 특징으로 하는 제1항의 화합물의 제조방법.
- 서열번호 1의 염기서열을 가지는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT(Antirrhinum majus UDP-dependent glycosyltransferase) 유전자 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 바실러스 세레우스 아종(Bacillus cereus subsp.) 유래 UGlcNAcDH(UDP-N-acetylglucosamine dehydrogenase) 유전자를 포함하는 발현벡터; 또는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 금어초 유래 당전이효소 AmUGT 유전자를 포함하는 발현벡터 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 바실러스 세레우스 아종 유래 UGlcNAcDH 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환되어 제1항의 화합물을 생산하는 대장균.
- 제11항에 있어서, 상기 대장균은 포스포글루코뮤타제(phsophoglucomutase)가 결손된 것을 특징으로 하는 대장균.
- 제1항의 화합물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130091298A KR101523683B1 (ko) | 2013-08-01 | 2013-08-01 | 신규한 루테올린-7-o-n-아세틸-d-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130091298A KR101523683B1 (ko) | 2013-08-01 | 2013-08-01 | 신규한 루테올린-7-o-n-아세틸-d-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20150015670A KR20150015670A (ko) | 2015-02-11 |
| KR101523683B1 true KR101523683B1 (ko) | 2015-05-28 |
Family
ID=52572861
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020130091298A KR101523683B1 (ko) | 2013-08-01 | 2013-08-01 | 신규한 루테올린-7-o-n-아세틸-d-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101523683B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114807159B (zh) * | 2021-12-23 | 2023-09-29 | 西藏自治区农牧科学院农业研究所 | 一种与耐旱性相关的c-糖基黄酮代谢基因及其用途 |
-
2013
- 2013-08-01 KR KR1020130091298A patent/KR101523683B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| C. W. BENINGER et al, Biochemical Systematics and Ecology, 2005, 33, pp. 103-111 * |
| C. W. BENINGER et al, Biochemical Systematics and Ecology, 2005, 33, pp. 103-111* |
| XIAOGANG GU et al, The Journal of Biological Chemistry, 2010, 285, 32, pp. 24825-24833 * |
| XIAOGANG GU et al, The Journal of Biological Chemistry, 2010, 285, 32, pp. 24825-24833* |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20150015670A (ko) | 2015-02-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20190226000A1 (en) | Diterpene production in yarrowia | |
| KR102378988B1 (ko) | 무칼로리 감미제 | |
| EP3283614B1 (en) | Production of non-caloric sweeteners using engineered whole-cell catalysts | |
| JP2021045155A (ja) | ステビオール配糖体の微生物による生成 | |
| CN110191643B (zh) | 甜菊醇糖苷的生物合成生产及其工艺 | |
| MX2014014080A (es) | Glucosidos de esteviol de alta pureza. | |
| US20200283816A1 (en) | Steviol glycoside transport | |
| US20220042060A1 (en) | Biosynthesis production of steviol glycosides and processes therefore | |
| EP3359654B1 (en) | Kaurenoic acid hydroxylases | |
| US20240067938A1 (en) | Geranylgeranyl pyrophosphate synthases | |
| US11976312B2 (en) | Enzymatic method for preparing Rebaudioside C | |
| KR101523683B1 (ko) | 신규한 루테올린-7-o-n-아세틸-d-글루코사민우론산 화합물 및 이의 제조방법 | |
| EP1512747B1 (en) | Gene encoding glutathione synthetase from Candida utilis | |
| WO2002055708A1 (en) | POLYPEPTIDE HAVING α-ISOMALTOSYLGLUCOSACCHARIDE SYNTHASE ACTIVITY | |
| KR101522962B1 (ko) | 신규한 퀘세틴-3-o-n-아세틸-자일로사민 화합물 및 이의 제조방법 | |
| KR101179238B1 (ko) | 신규한 케르세틴 3-0-4＂-디옥시-4＂-포르아미도-ｌ-아라비노스 화합물 및 그 합성방법 | |
| KR101522961B1 (ko) | 신규한 퀘세틴-3-o-n-아세틸-퀴노보사민 화합물 및 이의 제조방법 | |
| JP5943587B2 (ja) | ジンゲロール配糖体、その製造方法およびその用途 | |
| BR112019011525A2 (pt) | ácido caurenoico hidroxilases | |
| KR101581185B1 (ko) | 대장균에서 페튜니아 유래 당전이효소 PeF3GalGT 유전자를 이용한 퀘세틴-3-O-갈락토사이드의 대량생산 방법 | |
| JP7441178B2 (ja) | シクロイソマルトテトラオース、シクロイソマルトテトラオース生成酵素とそれらの製造方法並びに用途 | |
| KR102122482B1 (ko) | 신규한 α-글루코실 레바우디오사이드 A 및 이의 제조방법 | |
| WO2012161250A1 (ja) | α－グルコシダーゼ、その製造方法およびその用途、並びにジンゲロール配糖体、その製造方法およびその用途 | |
| KR101392988B1 (ko) | 대사조정된 대장균 및 이를 이용한 퀘세틴 3,7-디-ｏ-람노사이드의 합성 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180521 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190520 Year of fee payment: 5 |
|
| R401 | Registration of restoration |