KR101521465B1 - 무증상적 ｐｃｖｄ의 예방 및 치료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 동물, 바람직하게는 돼지에서 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 돼지 써코바이러스 2형(PCV2) 항원을 포함하는 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다.

무증상적 PCV2 감염, PCV2 항원, 돼지 써코바이러스, 면역원성 조성물, 백신

Description

무증상적 ＰＣＶＤ의 예방 및 치료{Prevention and treatment of sub-clinical PCVD}

서열목록

본 출원은 서면 형식과 컴퓨터 판독형태의 서열목록을 포함하며, 이 목록의 교시와 내용은 본원에 참고인용된다. 또한, 이 서열목록은 WO 06/072065에 포함된 것과 동일하다.

본 발명은 동물, 바람직하게는 돼지의 무증상적 (subclinical) (만성) PCV2 감염의 예방 및 치료를 위해 돼지 써코바이러스 2형 (PCV2: Porcine circovirus type 2) 항원을 포함하는 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다.

돼지 써코바이러스 2형(PCV2)은 소형(17-22 ㎚ 직경)의 다면체형 비-외피 DNA 바이러스인데, 이는 일본쇄 환형 게놈을 보유한다. PCV2는 돼지 써코바이러스 1형(PCV1)과 대략 80% 서열 동일성(sequence identity)을 공유한다. 하지만, 일반적으로 비-병독성인 PCV1과 대조적으로, PCV2에 의한 돼지 감염은 돼지 써코바이러 스 질병(PCVD)(돼지 써코바이러스 관련 질병(PCVAD)이라고도 불림)으로 통칭되는 다수의 질병 증후군과 관련이 있었다(Allan et al., 2006, IPVS Congress). 이유후 전신 소모성 증후군(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)은 일반적으로 PCVD의 주요 임상적 증상으로 간주된다(Harding et al., 1997, Swine Health Prod; 5: 201-203; Kennedy et al., 2000, J Comp Pathol; 122: 9-24). 문헌에 보고된 잠재적 관련성이 있는 병태 몇가지에는 돼지 호흡기 복합질병(PRDC), 돼지 피부병 및 신장병 증후군(PDNS), 생식기 장애, 육아종성 장염 및 잠재적으로 선천적 떨림(CT-AII) 및 출생전후 심근염이 있다(Chae, Veterinary J., 2005: 169: 326-336).

PCVD는 5 내지 22주령 사이의 돼지에 영향을 미친다. PCVD는 임상적으로, 소모(wasting), 피부의 창백함(paleness), 수척(unthriftiness), 호흡 곤란(respiratory distress), 설사, 황달(icterus) 및 황달(jaundice)로 특성화된다. 일부 병든 돼지에서는 모든 증상이 복합적으로 나타나기도 하지만, 다른 감염 돼지에서는 이들 증상 중에서 한두 가지만 나타나기도 한다(Muirhead, 2002, Vet. Rec.; 150: 456). PCV2로 감염된 돼지에 대한 치사율은 50%에 육박할 수 있다. 부검 시에, 현미경적 병소와 육안 병소 역시 다수의 조직과 장기에서 나타났는데, 림프계 장기(lymphoid organ)가 병소의 가장 공통적인 부위이다(Allan and Ellis, 2000; J Vet. Diagn. Invest., 12: 3-14). PCV2 핵산 또는 항원의 양과 현미경적 림프계 병소의 중증도 사이에 강한 상관관계가 관찰되었다(Brunborg, 2004). 또한 혈중에서 핵산 또는 항원의 양과 임상적 증상의 중증도간에 상관관계가 관찰되었 다(Brunborg, 2004; Liu, 2000; Olvera, 2004). PCVD에 걸린 돼지는 ml당 10⁶ 이상의 게놈 등가물의 바이러스 부하량(load)을 갖는 것으로 나타났다.

임상적으로 명백한 PCV2 감염의 질환 증상과는 대조적으로, 무증상적 PCV2 감염은 PCV2로 감염된 동물에 존재하지만 임상적으로 징후가 없는 것으로 사료된다. 일반적으로, 무증상적 감염은 PCVD로 쉽게 전환될 수 있고 회복기 동물은 지속적으로(만성적으로) 감염된 상태로 유지될 수 있기 때문에 이들 PCV2 감염 유형간에 관련성이 있다(도 1 참조).

최근 관찰은 무증상적 PCV2 감염이 빈번한 경우임을 입증하였다. 무증상적 감염의 존재는 실험 및 야생 연구 둘다에 의해 입증되었다. 실험실 연구는 개별 돼지에서 PCV2 감염이 항상 임상적 징후 또는 병소와 관련되는 것이 아님을 보여주었다(Harms et al., 2001, Vet. Pathol., 38:528-539). 추가로, 몇몇 야생 연구는 PCV2 감염된 혈청 양성 무리(herd)의 발병률이 PCVD에 의해 영향받은 무리의 발병률보다 높음을 보여주었다(Olvera et al., 2004, J. Virol. Methods, 117: 75-80). 흔히, PCVD의 급성 발병을 경험한 무리는 어떠한 명백한 임상적 징후 없이 PCV2로 감염된 채로 유지된다. 문헌에 따르면 한 무리 중에 당해 무증상적(지속적) 감염 형태는 또한 "만성" 감염으로 불리운다(Burch D., 2006, Pig International).

무증상적으로 감염된 무리중 PCV2의 경제적 여파는 있다 하더라도 공지되어 있지 않고 지금까지 보고된적이 없다. 특히, 무증상적인 PCV2 감염의 사례가 동물의 성장 수행능 또는 일반적으로 영향받은 동물의 전반적인 건강에 어떠한 영향을 미칠지에 대해 공지되어 있지 않고 지금까지 보고된 바 없다.

DNA 백신을 기초로 한 PCV2 감염의 치료 시도는 미국 특허 6,703,023에 기술되어 있다. WO 03/049703에는 병원성 PCV2 균주의 면역원성 유전자가 PCV-1 골격의 유전자를 대신하는 PCV-1 골격을 함유하는 키메릭 생백신의 생산이 기술되어 있다. WO 99/18214는 PCV2 사백신의 제조 절차와 여러 PCV2 균주를 제공했다. 하지만, 효능 데이터는 보고된 것이 없다. 효과적인 ORF-2 기반의 서브유닛 백신은 WO 06/072065에 보고되어 있다. 이러한 백신은 모두 3주령 이상의 돼지를 백신접종/치료하기 위한 목적으로 사용되었다. 하지만, 이러한 백신이 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물의 예방 또는 치료에 이용되는지에 대해서는 기술된 바가 없다. 더욱이, 이러한 백신은 무증상적으로 감염된 동물 그룹에서 PCV2 감염에 대한 면역성을 부여하기 위해서 및 이들의 성장 수행능을 개선시키기 위한 것으로 기재되지 않았다.

도 1: 상이한 형태의 PCV2 감염.

도 2: 연구 개시 전 및 후에 치사율 및 연구 농장에서 살찌우는데 있어서 하루 평균 체중 증가.

도 3: 연구 기간에 걸친 상대적 체중 차이(IVP-CP) 및 평균 바이러스 부하량(log10)의 발생 과정.

도 4: 처리 그룹 둘다에서 혈청 ml당 바이러스 부하량이 10⁶ 게놈 등가물을 초과하는 동물 %의 비교.

도 5: 처리 그룹 둘다에서 혈청 ml당 바이러스 부하량이 10⁴-10E⁶ 게놈 등가물인 동물 %의 비교.

임상적으로 명백한 PCV2 감염은 상이한 질환 증후군과 관련된다. PCV2 관련 질환 병태에 따라, 급성 PCV2 감염의 임상적 징후는 하기의 결과물중 하나 이상일 수 있다: a) 상당히 증가된 치사율(4 내지 20% 이상), b) 상당히 증가된 발육불량 동물의 빈도수(5 내지 50% 이상) 및 c) 호흡기증상, 설사, 피부의 창백함, 황달, 수척(이환율 4 내지 60%). 추가로, 혈청 또는 조직 ml당 10⁶ 또는 10⁷ 이상의 바이러스 고역가는 급성 PCVD 징후를 갖는 동물 대부분에서 나타나는 특징이다. 당해 급성 PCV2 감염 뿐만 아니라, 무증상적 PCV2 감염은 이환율이 없거나 낮은 이환율을 특징으로 하고 점점 가시화된다. 몇몇 경우에 급성 PCV2 감염의 상황은 무증상적 PCV2 감염으로 전환될 수 있다. 그러나, 무증상적 감염은 또한 사전에 급성 PCV2 감염에 대한 징후 없이 일어날 수 있다.

놀랍게도, 무증상적 PCV2 감염은 건강하게 보이는 돼지의 수행능 파라미터, 특히, 돼지의 성장 수행능에 대해 상당한 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다. 무증상적으로 감염된 동물이 PCVD를 확인 가능하게 해주는 전형적인 임상적 증상을 나타내지 않거나 단지 낮은 이환율을 나타낸다 하더라도 당해 동물은 무증상적 PCV2 감염에 의해 상당한 영향을 받는다. 돼지의 PCV2에 의한 무증상적 감염은 체중 증가를 상당히 손실시킨다(예를 들어, 실시예 3 참조). 이미 언급한 바와 같이, 지금까지 선행기술분야에서는 무증상적 PCV2 감염이 돼지의 건강 특히, 돼지의 성장 수행능에 어떠한 영향을 미친다는 증거가 없었다.

더욱이, 또한 놀랍게도 무증상적 PCV2 감염에 의한 체중 증가의 감소는 무증상적으로 감염된 동물을 PCV2 항원으로 치료/백신접종함에 의해 감소될 수 있음이 밝혀졌다(예를 들어, 실시예 3 참조). 따라서, 무증상적 PCV2 감염이 돼지의 성장 수행능에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌을 뿐만 아니라 당해 부정적 영향이 동물을 PCV2 항원으로 치료/백신접종함에 의해 상당히 감소될 수 있다는 증거가 수득되었다. 다시 말해서, 무증상적 감염 현상이 선행기술분야에 기재되었지만 현재 처음으로 다음과 같은 증거가 수득되었다:

- 때때로 야생에서 관찰되는 무증상적 PCV2 감염은 돼지의 성장 수행능에 상당한 영향을 미친다;

- PCV2 항원을 사용하여 무증상적으로 영향받은 돼지 또는 무리의 백신접종은 당해 무증상적 PCV2 감염의 부정적 영향을 상당히 감소시킬 수 있다.

따라서, 하나의 측면에 따라, 본 발명은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이들의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물 또는 동물 그룹에서 무증상적 PCV2 감염의 예방 및 치료를 위한 방법을 제공한다.

본원에 사용된 "무증상적 PCV2 감염"은 다음을 특징으로 한다: i) 개별 동물의 전체 수명 동안에 혈청 ml당 PCV2의 10⁶ 이하의 게놈 카피수를 유지하는 바이러스 부하량, ii) 그룹 또는 무리 중에서 바이러스 역가가 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 PCV2 양성 동물의 낮은 비율, iii) 그룹 또는 무리 중에서 6주 이상, 바람직하게 8주 이상, 보다 바람직하게 10주 이상, 가장 바람직하게 12주 이상의 바이러스 지속성, iv) PCV2 양성 동물에서 전형적인 임상적 증상의 부재, v) PCV2 양성 동물의 동물 그룹 또는 무리 중에 이환율 부재이거나 단지 낮은 이환율 및/또는 vi) PCV2 양성 동물 그룹 또는 무리 중에 낮은 치사율.

상기 기준 ii)에 사용된 용어 "PCV2 양성 동물의 낮은 비율"은 동물 그룹 또는 무리 중에서 바이러스 역가가 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 PCV-2 양성 동물이 20% 미만, 바람직하게는 15% 미만, 보다 더 바람직하게는 10% 미만, 보다 더 바람직하게는 8% 미만, 보다 더 바람직하게는 6% 미만, 보다 더 바람직하게는 4% 미만, 가장 바람직하게는 3% 미만임을 의미한다. 다른 말로, 당해 용어 "그룹 또는 무리 중에서 바이러스 역가가 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 PCV2 양성 동물의 낮은 비율"이란 동물 그룹 또는 무리 중에서 PCV2 양성 동물의 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 더 바람직하게는 90% 이상, 보다 더 바람직하게는 92% 이상, 보다 더 바람직하게는 94% 이상, 보다 더 바람직하게는 96% 이상, 가장 바람직하게는 97% 이상이 혈청 ml당 PCV2의 10⁶ 미만의 게놈 카피수의 바이러스 역가를 가짐을 의미한다.

본원에 사용된 용어 "PCV2 양성"은 샘플(1ml 혈청 또는 1mg 조직)중에 검출가능한 양의 PCV2 게놈 등가물(= 바이러스 복제물)을 포함하는 동물을 의미하지만 당해 동물로 제한되지 않는다. 검출가능한 양의 PCV2 게놈 등가물은 PCV2 게놈 등가물이 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 분석에 의해 검출될 수 있음을 의미한다. 2개의 독립적인 샘플이 당해 분석에서 양성의 PCR 결과를 나타내는 경우 샘플은 PCR 양성으로 고려된다.

PCR 분석을 통한 PCV2의 정량 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 실질적으로 PCV2 게놈 등가물의 정량은 문헌[참조: Brunborg et al., 2004; J. Virol Methods 122: 171-178]에 기재된 방법에 의해 수행하였다. PCV2의 증폭을 위해 프라이머 PCV2-84-1265U21 및 PCV2-84-1319L21을 사용하였다/사용한다. 당해 방법은 의심되는 경우에 표준 분석으로서 작용할 것이다.

본원에 사용된 용어 "바이러스 지속성"은 감염된 동물이 당해 시간 동안, 즉 상기된 바와 같은 6주 이상 동안 혈청 ml당 10⁴ 이상의 PCV2 카피수의 바이러스 부하량을 가짐을 의미한다.

본원에 사용된 "PCV2 양성 동물에서 전형적인 임상적 증상의 부재"는 단지 이의 전형적인 임상적 증세에 의한 PCV2 감염의 정확하고 확실한 확인을 가능하게 하는 명백한 임상적 PCV2 감염과 통상 관련된 임의의 명백한 임상적 증상의 부재를 의미한다. 당해 임상적 증상은 PCVD로서 공지된 것들, 특히, 피부의 창백함(paleness), 수척(unthriftiness), 호흡 곤란(respiratory distress), 설사, 황달(icterus) 또는 황달(jaundice)이다.

본원에 사용된 용어 "낮은 이환율"은 이의 임상적 증세에 의해 급성 PCV2 감염을 확인할 수 있게 해주는 임상적 징후의 부재에 대한 지표이다. 따라서 이것은 무증상적 PCV2 감염의 존재에 대한 지표이다. 본원에 사용된 용어 "낮은 이환율"은 일반적 건강 상태가 변화된 동물 %를 언급한다. 본원에 사용된 바와 같은 변화된 일반적 건강 상태는 발육불량 동물(본원에서 동일 연령의 동물 그룹의 평균 체중 보다 25% 미만의 체중을 갖는 동물로서 정의됨), 피부의 창백함, 수척, 호흡 곤란, 설사, 황달(icterus) 또는 황달(jaundice)과 같은 하나 이상의 PCVD 관련 임상적 징후의 존재로서 정의된다. 따라서, 본원에서 사용된 "낮은 이환율"은 동물 그룹 또는 무리중 25% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 보다 바람직하게는 15% 미만, 보다 더 바람직하게는 12% 미만, 보다 더 바람직하게는 10% 미만, 보다 더 바람직하게는 8% 미만, 보다 더 바람직하게는 6% 미만, 가장 바람직하게는 4% 미만이 하나 이상의 임상적 PCVD 증상, 바람직하게는 상기 정의된 바와 같은 발육불량 동물, 피부의 창백함, 수척, 호흡 곤란, 설사, 황달(icterus) 또는 황달(jaundice)을 나타냄을 의미한다.

본원에 사용된 용어 "이환율 부재"란 동물 그룹 또는 무리중 PCV2 양성 동물의 1% 미만이 하나 이상의 PCVD 임상적 증상, 바람직하게는 발육불량 동물, 피부의 창백함, 수척, 호흡 곤란, 설사, 황달(icterus) 또는 황달(jaundice)을 나타냄을 의미한다

본원에 사용된 용어 "낮은 치사율"은 동물 그룹 또는 무리 중에서 PCV2 양성 동물의 20% 미만, 바람직하게는 15% 미만, 보다 바람직하게는 12% 미만, 보다 더 바람직하게는 10% 미만, 보다 더 바람직하게는 8% 미만, 보다 더 바람직하게는 6% 미만, 가장 바람직하게는 4% 미만의 치사율을 의미하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "이의 투여를 필요로 하는" 또는 "이의 투여 치료를 필요로 하는"은 투여/치료가 건강의 예방 또는 PCV2 항원을 투여 받은 동물의 건강에 대한 임의의 기타 양성 약제 효과와 관련됨을 의미한다.

바람직한 양태에 따르면, 기준 i) "전체 수명 동안에 혈청 ml당 10⁶ 이하의 게놈 카피수의 PCV2를 유지하는 개별 동물에서 바이러스 부하량", 기준 ii) "그룹 또는 무리 중에서 바이러스 역가가 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 PCV-2 양성 동물의 낮은 비율" 또는 기준 iii) 상기 언급된 바와 같이 "그룹 또는 무리 중에서 바이러스 지속성이 6주 이상, 바람직하게는 8주 이상, 보다 바람직하게는 10주 이상, 가장 바람직하게는 12주 이상" 중 하나 이상이 적용될 수 있는 경우는 PCV2 감염의 무증상적 사례이다. 가장 바람직하게, PCV2 감염의 무증상적 사례는 상기 언급된 바와 같이 기준 i) 및 ii)가 적용될 수 있는 경우이다.

기준 i) 및/또는 기준 ii)가 기준 iii) "그룹 또는 무리 중에서 바이러스 지속성이 6주 이상, 바람직하게는 8주 이상, 보다 바람직하게는 10주 이상, 가장 바람직하게는 12주 이상"과 조합되는 경우 또는 상기된 바와 같은 기준 iii)를 포함하는 임의의 다른 경우에, 무증상적 감염은 "만성 무증상적 PCV2" 감염인 것으로 간주된다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법을 제공하고 이때, 무증상적 PCV2 감염은 혈청 ml당 10⁶ 이하의 PCV2 게놈 카피수의 개별 동물의 바이러스 부하량을 특징으로 하며, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 무증상적 PCV2 감염은 추가로 동물 그룹 또는 무리 중에 혈청 ml당 PCV2 바이러스 카피수가 10⁶이상, 바람직하게는 10⁷ 이상이고 당해 그룹 또는 무리중 바이러스 지속성이 6주 이상, 바람직하게는 8주 이상, 보다 바람직하게는 10주 이상, 가장 바람직하게는 12주 이상인 동물이 20% 이하로 존재함을 특징으로 한다. 보다 바람직하게, 무증상적 감염은 추가로 상기된 바와 같은 개별 PCV2 양성 동물에서 임의의 임상적 징후가 부재이고 낮은 이환율 또는 이의 부재이고/이거나 상기된 바와 같이 낮은 이환율임을 특징으로 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하는 방법을 제공하고, 이때, 무증상적 PCV2 감염은 임의의 PCV2 항원 투여의 부재하에 전체 수명 동안에 혈청 ml당 PCV2의 게놈 카피수가 10⁶ 이하로 유지되는 개별 동물에서의 바이러스 부하량을 특징으로 하고, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 무증상적 PCV2 감염은 추가로 동물 그룹 또는 무리 중에서 혈청 ml당 PCV2의 바이러스 카피수가 10⁶ 이상, 바람직하게는 10⁷ 이상이고/이거나 당해 그룹 또는 무리 중에 바이러스 지속성이 6주 이상, 바람직하게는 8주 이상, 보다 바람직하게는 10주 이상, 가장 바람직하게는 12주 이상인 20% 이하의 동물이 존재함을 특징으로 한다. 보다 바람직하게, 무증상적 감염은 추가로 상기 정의된 바와 같이 개별 PCV2 양성 동물에서 임의의 임상적 징후의 부재, 상기 정의된 바와 같이 낮은 이환율 또는 이의 부재 및/또는 상기 정의된 바와 같이 낮은 치사율을 특징으로 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법을 제공하고 이때, 무증상적 PCV2 감염은 동물 그룹 또는 무리 중에서 혈청 ml당 PCV2의 바이러스 카피수가 10⁶ 이상, 바람직하게는 10⁷ 이상인 동물이 20% 이하로 존재함을 특징으로 하며, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 무증상적 PCV2 감염은 추가로 바이러스 지속성이 당해 그룹 또는 무리 중에서 6주 이상, 바람직하게는 8주 이상, 보다 바람직하게는 10주 이상, 가장 바람직하게는 12주 이상임을 특징으로 한다. 보다 바람직하게 무증상적 감염은 추가로 상기 정의된 바와 같이 개별 PCV2 양성 동물에서 임의의 임상적 징후의 부재, 상기 정의된 바와 같이 낮은 이환율 또는 이의 부재 및/또는 상기 정의된 바와 같이 낮은 치사율을 특징으로 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이때 무증상적 PCV2 감염은 추가로 PCV2 양성 동물 그룹 또는 무리 중에서 바이러스 지속성이 당해 그룹 또는 무리 중에서 6주 이상, 바람직하게는 8주 이상, 보다 바람직하게는 10주 이상, 가장 바람직하게는 12주 이상임을 특징으로 한다. 바람직하게, 무증상적 PCV2 감염은 추가로 상기 정의된 바와 같이 개별 PCV2 양성 동물에서 임의의 임상적 징후의 부재, 상기 정의된 바와 같은 낮은 이환율 또는 이의 부재 및/또는 상기 정의된 바와 같은 낮은 치사율을 특징으로 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이때 무증상적 PCV2 감염은 상기 정의된 바와 같이 개별 PCV2 양성 동물에서 임의의 임상적 징후의 부재를 특징으로 하며, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 무증상적 PCV2 감염은 추가로 상기 정의된 바와 같이 낮은 이환율 또는 이의 부재 및/또는 상기 정의된 바와 같이 낮은 치사율을 특징으로 한다. 보다 바람직하게, 당해 무증상적 PCV2 감염은 추가로 바이러스 역가가 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 그룹 또는 무리 중에서 전체 수명 동안에 PCV2의 게놈 카피수가 혈청 ml당 10⁶ 이하로 유지되고/되거나 PCV-2 양성 동물의 낮은 비율로 유지되는 개별 동물에서의 바이러스 부하량을 특징으로 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이때 무증상적 PCV2 감염은 동물 그룹 또는 무리 중에 낮은 이환율 또는 이의 부재, 바람직하게는 25% 이하 또는 상기 정의된 것 보다 낮음을 특징으로 하고, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 당해 무증상적 PCV2 감염은 추가로 바이러스 역가가 혈청 ml 당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 그룹 또는 무리 중에서 전체 수명 동안에 혈청 ml당 PCV2의 게놈 카피수가 10⁶ 이하로 유지되고/되거나 PCV2 양성 동물이 낮은 비율로 유지되는 개별 동물에서의 바이러스 부하량을 특징으로 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이때 무증상적 PCV2 감염은 본원에서 정의된 바와 같은 낮은 치사율, 바람직하게는 20% 이하임을 특징으로 하고, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 당해 무증상적 PCV2 감염은 추가로 바이러스 역가가 혈청 ml 당 10⁶ 이상의 게놈 카피수인 그룹 또는 무리 중에서 전체 수명 동안에 혈청 ml당 PCV2의 게놈 카피수가 10⁶ 이하로 유지되고/되거나 PCV2 양성 동물이 낮은 비율로 유지되는 개별 동물에서의 바이러스 부하량을 특징으로 한다.

PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 또는 동물 그룹에 PCV2 항원 유효량의 투여는 살찌우는데 있어서 당해 동물의 증체량을 증진시키고 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁴ 내지 10⁶ 인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키고 바이러스 비강 배출 (nasal shedding)을 감소시키고/시키거나 바이러스혈증 지속기간을 감소시킨다.

따라서 추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 증체량의 손실을 감소시키는 방법을 제공하고, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게 평균 증체량은 백신접종되지 않은 동물과 비교하여 10주 내지 22주령에서 1.5kg 이상으로 증가한다. 본원에 사용된 용어 "살찌우는 동안에"란 당해 동물의 1주 내지 36주령, 바람직하게는 10주 내지 28주령을 의미하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서"란 PCV2로 무증상적으로 감염된 개별 동물을 의미하지만 또한 당해 그룹의 대부분의 동물이 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹을 의미한다. 따라서, "PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서"란 용어는 i) "PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서"로서 및 "PCV2로 무증상적으로 감염된 무리의 동물에서"로서 호칭되어야만 한다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)에서 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁴ 내지 10⁶인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법을 제공하고, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁴ 내지 10⁶인 동물의 수는 PCV2 항원으로 백신접종하여 30% 이하, 바람직하게는 20% 이하, 보다 더 바람직하게는 10% 이하, 가장 바람직하게는 5% 이하로 감소될 수 있는 반면 40% 이상의 무증상적으로 감염된 동물(이의 바이러스 부하량이 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수)의 백신접종되지 않은 대조군 그룹에서는 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁴ 내지 10⁶ 인 PCV2 역가가 나타났다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)내에서 임상적 관련 바이러스 부하량(혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈 카피수)을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법을 제공하고, 이때 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁶ 이상인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수는 PCV2 항원으로 백신접종하여 10% 이하, 바람직하게는 5% 이하, 보다 더 바람직하게는 4% 이하, 보다 더 바람직하게는 3% 이하, 보다 더 바람직하게는 2% 이하, 가장 바람직하게는 0.5% 이하로 감소될 수 있다.

추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 비강 바이러스 배출을 감소시키거나 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공하고 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기된 바와 같이, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물의 백신접종/치료는 백신접종되지 않은 대조군 동물에 비해 바이러스혈증기를 단축시킨다. 바이러스혈증의 지속기간의 평균 단축시간은 동일 종의 백신접종되지 않은 대조군 동물에 비해 17일이다. 따라서, 추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공하고, 당해 방법은 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 이때 당해 치료 또는 예방은 동일종의 치료받지 않은 대조군 그룹의 동물에 비해 5일 이상, 바람직하게는 6일 이상, 보다 더 바람직하게는 7일 이상, 보다 더 바람직하게는 8일 이상, 보다 더 바람직하게는 9일 이상, 보다 더 바람직하게는 10일 이상, 보다 더 바람직하게는 12일 이상, 보다 더 바람직하게는 14일 이상, 가장 바람직하게는 16일 이상 바이러스혈증기를 단축시킨다.

본 명세서에 사용된 "항원"이란 용어는 전술한 면역학적 반응을 유도하는 아미노산 서열을 의미한다. 본 명세서에 사용된 항원은 임의의 PCV2 단백질의 전장의 서열, 이의 유사체 또는 이의 면역원성 단편을 포함한다. "면역원성 단편"이란 용어는 하나 이상의 에피토프를 포함하여 전술한 면역 반응을 유도하는 단백질의 단편을 의미한다. 이러한 단편은 당업계에 공지된 임의의 수의 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 확인할 수 있다[예컨대, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66(Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey]. 예를 들어, 선형 에피토프는 예를 들어 단백질 분자의 부분에 해당하는 다수의 펩타이드를 고체 지지체에서 동시에 합성하는 단계, 및 이 펩타이드들이 지지체에 부착되어 있는 동안 항체와 펩타이드를 반응시키는 단계를 통해 측정할 수 있다. 이러한 기술은 당업계에 공지되어 있고 문헌[미국 특허 4,708,871; Geysen et al.(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 3998-4002; Geysen et al.(1986) Molec. Immunol. 23: 709-715]에 기술되어 있다. 이와 마찬가지로, 입체형태 에피토프는 x선 결정학 및 2차원 핵자기 공명 등에 의해 아미노산의 공간적 입체형태를 측정함으로써 쉽게 확인할 수 있다[예컨대, Epitope Mapping Protocols, 상기 문헌 참조].

또한, 합성 항원은 예컨대 폴리에피토프, 인접 에피토프 및 다른 재조합 또는 합성 유래의 항원의 정의에도 포함된다[예컨대 Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23: 2777-2781; Bergmann et al.(1996), J.Immunol. 157: 3242-3249; Suhrbier, A.(1997), Immunol. and Cell Biol. 75: 402-408; Gardner et al., (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, June 28-July 3, 1998].

"면역 반응"은 당해 조성물 또는 백신에 대한 세포 및/또는 항체 매개의 면역반응을 숙주에서 발생시키는 것을 의미하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 보통, "면역 반응"은 당해의 조성물이나 백신에 포함된 항원 또는 항원들에 특이적으로 지향성인 항체, B 세포, 헬퍼 T 세포, 억제인자 T 세포 및/또는 세포독성 T 세포의 생산 또는 활성화와 같은 효과 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. 숙주는 새로운 감염에 대한 저항성이 증강되고/되거나 질환의 임상 중증도가 감소되도록 치료적 또는 보호적 면역(기억) 반응을 나타내는 것이 바람직하다. 이러한 보호는 PCV2 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 수 또는 중증도의 감소 또는 결여, 바이러스혈증의 개시 지연, 바이러스 지속성 저하, 바이러스 총 부하량의 감소 및/또는 바이러스 배출 감소에 의해 입증될 것이다.

본 명세서에 사용된 용어 "면역원성 조성물" 또는 "백신"(이 두 용어는 동의어로 사용된다)은 PCV2 항원을 함유하는 모든 약제학적 조성물을 의미하며, 이 조성물은 피검체의 PCV2 감염과 관련된 질환 또는 병태를 예방하거나 치료하는데 사용될 수 있다. 바람직한 면역원성 조성물은 PCV2에 대한 면역반응을 유도, 자극 또는 증강시킬 수 있다. 따라서, 이 용어는 이하에 기술된 바와 같은 서브유닛 면역원성 조성물 뿐만 아니라 완전 사멸, 약독화 및/또는 불활성화된 PCV2를 함유하는 조성물도 포함한다.

따라서 또 다른 측면에 따라, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 당해 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 이때, 면역원성 조성물은 완전히 사멸되거나 약독화되고/되거나 불활성화된 PCV2를 함유하는 서브유닛 면역원성 조성물이다.

본 명세서에 사용된 "서브유닛 면역원성 조성물"이란 용어는 PCV2 유래의 적어도 하나의 면역원성 폴리펩타이드 또는 항원(그러나, 모든 항원은 아니다) 또는 PCV2 유래의 항원과 상동성인 적어도 하나의 면역원성 폴리펩타이드 또는 항원을 함유하는 조성물을 의미한다. 이러한 조성물은 온전한 PCV2가 실질적으로 없는 것이다. 즉, "서브 유닛 면역원성 조성물"은 PCV2로부터 적어도 부분적으로 정제되거나 또는 분별된(바람직하게는 실질적으로 정제된) 면역원성 폴리펩타이드, 또는 이의 재조합 유사체로 제조된다. 서브유닛 면역원성 조성물은 PCV2 유래의 다른 항원 또는 폴리펩타이드가 실질적으로 없는, 또는 분별된 형태의 당해의 서브유닛 항원 또는 항원들을 포함할 수 있다. 바람직한 면역원성 서브유닛 조성물은 이하에 기술되는 PCV2 ORF-2 단백질을 포함한다. 특히, 본원에 전문이 참고인용되는 WO 06/072065에 제공된 모든 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 서브유닛 조성물이 가장 바람직하다.

추가의 측면에 따르면, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 PCV2의 ORF-2에 의해 발현된 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 포함하는 것이 가장 바람직하다. 당해 조성물을 제조하기 위해 본 발명에 사용되고 본 발명에서 제공되는 방법들에 사용된 PCV2 ORF-2 DNA 및 단백질은 PCV2 분리물 중에서 고도로 보존적인 도메인으로서, 임의의 PCV2 ORF-2는 여기에 사용된 PCV ORF-2 DNA 및/또는 폴리펩타이드의 근원으로서 효과적일 것이다. 바람직한 PCV2 ORF-2 단백질은 본 명세서 및 WO 06/072065에서 서열번호 11로 표시된 것이다. 또 다른 바람직한 PCV ORF-2 폴리펩타이드는 본 명세서 및 WO 06/072065에서 서열번호 5로서 제공된 것이다. 하지만, 당업자라면 이러한 서열이 면역원성 조성물을 유용하게 하는 항원 특성은 그대로 보유하면서 서열 상동성이 6 내지 10% 만큼 달라질 수 있다는 것을 잘 알고 있을 것이다. 면역 조성물의 항원 특성은 예컨대 WO 06/072065의 실시예 4에서 제시한 바와 같은 시험감염(challenge) 실험으로 추정될 수 있다. 더욱이, 변형 항원은 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 PCV2 ORF-2 단백질과 비교했을 때 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 더욱 바람직하게는 90%의 보호 면역성을 부여할 때 변형 항원의 항원 특성이 그대로 유지된다.

따라서, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 당해 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 이때 상기 PCV2 항원은 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 PCV2 ORF-2 단백질과 비교했을 때 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 더욱 바람직하게는 90%의 보호 면역성을 나타내는 PCV2 ORF-2 단백질의 항원이다. 상기 PCV2 ORF-2 서열은 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 11 또는 서열번호 5의 서열을 보유하는 것이 바람직하다.

일부 형태에서, PCV2 ORF-2 단백질의 면역원성 부분은 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물에서 항원 성분으로서 사용된다. 본 명세서에 사용된 "면역원성 부분"이란 용어는 PCV2 ORF-2 단백질 및/또는 폴리뉴클레오타이드 각각의 절두형 및/또는 치환형, 또는 단편을 의미한다. 이러한 절두형 및/또는 치환형, 또는 단편은 전장의 ORF-2 폴리펩타이드로부터 적어도 6개의 연속적 아미노산을 포함하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 전장의 PCV ORF-2 폴리펩타이드로부터 적어도 5개, 바람직하게는 8개, 더욱 바람직하게는 10개, 더욱 바람직하게는 적어도 15개, 더욱 더 바람직하게는 적어도 19개의 연속적 아미노산을 보유하는 것이다. 이러한 관점에서 바람직한 2개의 서열은 본 명세서와 WO 06/072065에서 서열번호 9 및 서열번호 10으로 제공한 것이다. 또한, 이러한 서열들이 더 큰 단편이나 절두형의 일부분일 수 있다는 것은 당연하다.

위에서 언급한 바와 같이, 더욱 바람직한 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드는 서열번호 3 또는 서열번호 4의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 모든 폴리펩타이드이다. 하지만, 이 서열이 서열 상동성이 6 내지 20%만큼 상이할 수 있으면서 항원 특성을 그대로 보유하여 면역원성 조성물에 유용하게 사용될 수 있다는 것을 당업자라면 잘 알고 있을 것이다. 일부 형태로서, 이 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드의 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 조성물의 항원 성분으로서 사용된다. 이러한 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 서열번호 3 또는 서열번호 4와 같은 전장의 PCV2 ORF-2 뉴클레오타이드 서열로부터 적어도 18개의 연속적 뉴클레오타이드를 포함하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 서열번호 3 또는 4와 같은 전장의 PCV2 ORF-2 뉴클레오타이드 서열의 적어도 30개, 더욱 바람직하게는 적어도 45개, 더욱 더 바람직하게는 적어도 57개의 연속적 뉴클레오타이드를 보유하는 것이다.

당업계에 공지된 바와 같은, "서열 동일성"은 2개 이상의 폴리펩타이드 서열 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열, 즉 참고 서열 및 이 참고 서열과 비교할 주어진 서열 간에 관계를 의미한다. 서열 동일성은 주어진 서열과 참고 서열을 이 서열들의 줄 간에 정합도(match)로 측정되는 서열 유사성이 최고가 되도록 최적으로 정렬한 후 두 서열을 비교하여 결정한다. 이러한 정렬 시에, 서열 동일성은 위치마다 확인하며, 예컨대 특정 위치에서 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기가 동일하다면 그 위치의 서열은 "동일한" 것이다. 그 다음, 이러한 위치의 총 수를 참고 서열의 총 뉴클레오타이드 또는 잔기의 수로 나누면 서열 동일성%가 수득된다. 서열 동일성은 공지의 방법, 예컨대 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, New York (1988), Biocomputing: Informatics and Genome Projects. Smith, D, W., ed., Academic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin. H. G., eds.. Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987): Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York (1991); 및 Carillo, H., and Lipman, D., SlAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988), 이 교시들은 본원에 참고 인용되었다]에 기술된 방법 등, 이에 국한되지 않는 방법으로 쉽게 계산할 수 있다. 서열 동일성을 측정하는 바람직한 방법은 검사된 서열 간에 최대 정합성을 제공하도록 설계되는 것이다. 서열 동일성을 측정하는 방법은 주어진 서열 간에 서열 동일성을 측정하는 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 명문화된다. 이러한 프로그램의 예에는 GCG 프로그램 패키지(Devereux, J., et al.. Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN 및 FASTA(Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)를 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다. BLASTX 프로그램은 NCBI 및 다른 소스로부터 공개적으로 이용가능하다(BLAST Manual, Altschul, S. F. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990), 이 교시들은 본 발명에 참고인용된다). 이 프로그램들은 주어진 서열과 참고 서열 간에 서열 동일성을 최고 수준으로 만들기 위하여 디폴트 갭 가중치를 이용해서 서열을 최적으로 정렬한다. 일 예로서, 참고 뉴클레오타이드 서열과 "서열 동일성"이 예컨대, 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 뉴클레오타이드 서열을 보유하는 폴리뉴클레오타이드란, 주어진 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열이 참고 서열과 동일하되, 단 주어진 폴리뉴클레오타이드 서열이 참고 뉴클레오타이드 서열의 100개 뉴클레오타이드마다 15개 이하, 바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5개 이하의 점 돌연변이를 포함할 수 있다는 것을 의미한다. 다른 말로 하면, 참고 뉴클레오타이드 서열에 비해 뉴클레오타이드 서열의 동일성이 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 폴리뉴클레오타이드에서, 참고 서열의 뉴클레오타이드 중의 15% 이하, 바람직하게는 10%, 더욱 바람직하게는 5%가 다른 뉴클레오타이드로 치환되거나 결실될 수 있고, 또는 참고 서열의 총 뉴클레오타이드 중 15% 이하, 바람직하게는 10%, 더욱 바람직하게는 5%의 뉴클레오타이드 수가 참고 서열에 삽입될 수 있다. 이러한 참고 서열의 돌연변이는 참고 뉴클레오타이드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 일어나거나 또는 이러한 말단 위치 사이에 모든 위치, 참고 서열의 뉴클레오타이드들 중에서 개별적으로 산재하거나 또는 참고 서열 내에서 하나 이상의 연속적 그룹으로서 산발적으로 일어날 수 있다. 이와 유사하게, 참고 아미노산 서열과 서열 상동성이 예컨대 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 폴리펩타이드란, 폴리펩타이드의 주어진 아미노산 서열이 참고서열과 동일하되, 단 주어진 폴리펩타이드 서열이 참고 아미노산 서열의 100개 아미노산마다 15개 이하, 바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5개 이하의 아미노산 변경을 포함할 수 있다는 것을 의미한다. 다른 말로 하면, 참고 아미노산 서열과 서열 동일성이 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 폴리뉴펩타이드 서열을 수득하기 위해, 참고 서열의 아미노산 잔기 중의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 5% 이하가 다른 아미노산으로 치환되거나 결실될 수 있고, 또는 참고 서열의 총 아미노산 수 중 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 5% 이하의 아미노산 수가 참고 서열에 삽입될 수 있다. 이러한 참고 서열의 변경은 참고 아미노산 서열의 아미노 또는 카르복시 말단에서 일어나거나 또는 이러한 말단 위치 사이에 모든 위치, 참고 서열의 잔기들 중에서 개별적으로 산재하거나 또는 참고 서열 내에서 하나 이상의 연속적 그룹으로서 산발적으로 일어날 수 있다. 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환에 의해 달라지는 것이 바람직하다. 하지만, 보존적 치환은 서열 동일성을 결정할 때 정합성에 포함되지 않는다.

본 명세서에 사용된 "서열 상동성"은 두 서열의 관계성을 측정하는 방법을 의미한다. 서열 상동성을 측정하기 위해, 2개 이상의 서열은 최적으로 정렬하고, 필요하다면 갭을 도입시킨다. 하지만, "서열 동일성"과는 반대로, 보존적 아미노산 치환은 서열 상동성을 측정할 때 정합성으로 계산된다. 다른 말로 하면, 참고 서열과 서열 상동성이 95%인 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 수득하기 위해서, 참고 서열의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드 중 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%가 정합성이거나 다른 아미노산 또는 뉴클레오타이드로의 보존적 치환을 포함해야 하고, 또는 참고 서열에 존재하는, 보존적 치환을 제외한 총 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드 중 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 5% 이하의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 수가 참고 서열에 삽입될 수 있다. 상동 서열은 적어도 50개, 더욱 바람직하게는 적어도 100개, 더욱 바람직하게는 적어도 250개, 더욱 더 바람직하게는 적어도 500개의 일련의 뉴클레오타이드를 포함하는 것이 바람직하다.

"보존적 치환"은 전체 기능성이 유의적으로 변화하지 않도록 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드가 크기, 소수성 등을 비롯한 성질이나 특성이 유사한 다른 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드로 치환하는 것을 의미한다.

"분리된"은 자연 상태로부터 "사람의 수작업에 의해" 변경된 것으로 의미하며, 즉 자연에서 일어난다면 최초 환경으로부터 변화 또는 제거되거나, 변화 및 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 생물체에 자연적으로 존재하는 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 "분리된" 것이 아니지만, 자연 상태의 공존 물질로부터 분리된 동일 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 본 명세서에 이용된 바와 같은 "분리된" 것이다.

따라서, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 ORF-2 단백질을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 이때 상기 PCV2 ORF-2 단백질은 전술한 것 중 어느 하나이다. 바람직하게는 상기 PCV2 ORF-2 단백질은

i) 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는 폴리펩타이드;

ii) 상기 i)의 폴리펩타이드와 적어도 80% 상동성인 임의의 폴리펩타이드;

iii) 상기 i) 및/또는 ii)의 폴리펩타이드의 임의의 면역원성 부분;

iv) 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열에 포함된 적어도 5개, 바람직하게는 8개, 더욱 바람직하게는 10개의 연속적 아미노산을 포함하는 상기 iii)의 면역원성 부분;

v) 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열을 포함하는 DNA에 의해 암호화된 폴리펩타이드;

vi) 상기 v)의 폴리뉴클레오타이드와 적어도 80% 상동성인 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 임의의 폴리펩타이드;

vii) 상기 v) 및/또는 vi)의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 폴리펩타이드의 임의의 면역원성 부분;

viii) 상기 면역원성 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열에 포함된 적어도 30개의 연속적 뉴클레오타이드를 포함하는, 상기 vii)의 면역원성 부분인 것이 바람직하다.

상기 임의의 면역원성 부분은 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열에 의해 암호화된 PCV2 ORF-2 단백질의 면역원성 특성을 보유하는 것이 바람직하다.

추가의 관점에 따르면, PCV2 ORF-2 단백질은 원하는 면역반응의 유도, 즉 PCV2 감염과 관련있거나 그 감염으로 초래되는 하나 이상의 임상 증상을 예방하거나 감소시키거나, 또는 그 증상의 빈도를 저하시키거나 또는 그 증상의 중증도를 경감시키는데 효과적인 항원 내포 수준으로 면역원성 조성물에 제공된다. PCV2 ORF-2 단백질의 내포 수준은 최종 면역원성 조성물 1ml당 적어도 0.2㎍ 항원(㎍/ml), 더욱 바람직하게는 약 0.2 내지 약 400㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.3 내지 약 200㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.35 내지 약 100㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.4 내지 약 50㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.45 내지 약 30㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.6 내지 약 15㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.75 내지 약 8㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.0 내지 약 6㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.3 내지 약 3.0㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.4 내지 약 2.5㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.5 내지 약 2.0㎍/ml, 가장 바람직하게는 약 1.6㎍/ml인 것이 바람직하다.

추가의 관점에 따르면, PCV ORF-2 항원 내포 수준은 최종 항원 조성물 용량당 전술한 바와 같은 PCV2 ORF-2 단백질 적어도 0.2㎍(㎍/용량), 더욱 바람직하게는 약 0.2 내지 약 400㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.3 내지 약 200㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.35 내지 약 100㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.4 내지 약 50㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.45 내지 약 30㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.6 내지 약 15㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.75 내지 약 8㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.0 내지 약 6㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.3 내지 약 3.0㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.4 내지 약 2.5㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.5 내지 약 2.0㎍/용량, 가장 바람직하게는 1.6㎍/용량이다.

본 발명에 따른 면역원성 조성물에 사용된 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드는 PCV2 ORF2의 분리 및 정제, 표준 단백질 합성 및 재조합 방법론을 비롯한 모든 방식에서 유도될 수 있다. PCV2 ORF-2 폴리펩타이드를 수득하는 바람직한 방법은 WO 06/072065(그 교시와 내용은 전문이 참고인용되고 있다)에 제공되어 있다. 간략히 설명하면, 민감성 세포를 PCV2 ORF-2 DNA 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 벡터로 감염시키고, 이 재조합 바이러스로 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드를 발현시킨 뒤, 발현된 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드를 상청액으로부터 여과하여 회수하고, 임의의 통상의 방법, 바람직하게는 2원성 에틸렌이민으로 불활성화시킨 뒤, 불활성화 과정을 정지시키기 위해 중화시킨다.

본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을, 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터, 바람직하게는 재조합 배큘로바이러스의 적어도 일부를 포함하는 조성물을 의미한다. 더욱이, 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을, 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터, 바람직하게는 재조합 배큘로바이러스의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물 상청액의 일부를 포함할 수 있다.

따라서, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 당해 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 PCV2 항원이 재조합 PCV2 ORF-2, 바람직하게는 배큘로바이러스에 의해 발현된 PCV2 ORF-2인 방법을 제공한다. 이러한 재조합체 또는 배큘로바이러스는 전술한 바와 같은 서열을 보유하는 PCV2 ORF-2를 발현하는 것이 바람직하다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부, 바람직하게는 재조합 배큘로바이러스의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하되, 이 성분들의 약 90%가 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI를 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다. BEI는 배큘로바이러스를 불활성화시키기에 효과적인 농도로 존재하고, 바람직하게는 2 내지 약 8mM BEI의 양, 더욱 바람직하게는 약 5mM BEI의 양으로 존재하는 것이 바람직하다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI를 포함하며, v) 상기 불활성화제에 의해 매개된 불활성화를 정지시키는 중화제를 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다. 불활성화제가 BEI이면, 이 조성물은 소듐 티오설페이트를 BEI와 등량으로 포함하는 것이 바람직하다.

당해 폴리펩타이드는 PCV2 감염에 민감한 동물에게 투여할 수 있는 조성물에 포함된다. 바람직한 양태로, 당해 조성물은 추가로 당업자에게 공지된 부가 성분을 포함할 수도 있다(예컨대, Remington's Pharmaceutical Sciences(1990). 18th ed. Mack Publ., Easton). 또한, 이 조성물은 1종 이상의 수의학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된, "수의학적으로 허용되는 담체"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 보강제 (adjuvant), 안정제, 희석제, 보존제, 항세균제 및 항진균제, 등장제, 흡수지연제 등을 포함한다. 바람직한 양태에서, 면역원성 조성물은 여기에 제공된 PCV2 ORF-2 단백질을, 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, 이는 보강제, 바람직하게는 카르보폴(Carbopol) 및 생리식염수와 혼합된다.

당업자는 본 명세서에 사용된 조성물이 공지된 주사가능한 생리학적으로 허용되는 멸균 용액을 포함할 수 있다는 것을 알고 있을 것이다. 비경구 주사 또는 주입을 위한 즉석제조 용액의 제조 시에는 등장성 수용액, 예컨대 식염수 또는 대응하는 혈장 단백질 용액을 쉽게 이용할 수 있다. 또한, 본 발명의 면역원성 조성물 및 백신 조성물은 희석제, 등장제, 안정제 또는 보강제를 포함할 수 있다. 희석제는 물, 식염수, 덱스트로스, 에탄올, 글리세롤 등을 포함할 수 있다. 등장제는 염화나트륨, 덱스트로스, 만니톨, 소르비톨 및 락토스 등을 포함할 수 있다. 안정제는 알부민 및 에틸렌디아민테트라아세트산의 알칼리염 등을 포함한다.

본 명세서에 사용된 "보강제"는 수산화알루미늄 및 인산알루미늄, 사포닌, 예컨대 Quil A, QS-21(Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), 유중수형 에멀젼, 수중유형 에멀젼, 수중유중수형 에멀젼을 포함할 수 있다. 에멀젼은 특히 경질 액체 파라핀 오일(유럽 약전 타입); 알켄의 올리고머화, 특히 이소부텐 또는 데센의 올리고머화에 의해 수득되는 스쿠알란 또는 스쿠알렌 오일과 같은 이소프레노이드 오일; 선형 알킬기를 함유하는 산 또는 알콜의 에스테르, 구체적으로 식물 오일, 에틸 올레에이트, 프로필렌 글리콜 디-(카프릴레이트/카프레이트), 글리세릴 트리-(카프릴레이트/카프레이트) 또는 프로필렌 글리콜 디올레에이트; 분지형 지방산 또는 알콜의 에스테르, 특히 이소스테아르산 에스테르를 주성분으로 할 수 있다. 오일은 유화제와 함께 사용되어 에멀젼을 형성한다. 유화제는 비이온성 계면활성제, 특히 소르비탄의 에스테르, 만나이드의 에스테르(예: 안하이드로만니톨 올레에이트), 글리콜의 에스테르, 폴리글리세롤의 에스테르, 프로필렌 글리콜의 에스테르 및 올레산, 이소스테아르산, 리시놀레산 또는 하이드록시스테아르산의 에스테르(이것은 경우에 따라 에톡시화된다), 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 공중합체 블록, 특히 플루로닉(Pluronic) 제품, 특히 L121인 것이 바람직하다[Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants(Ed. Stewart-Tull, D. E. S.). JohnWiley and Sons, NY, p51-94(1995) 및 Todd et al., Vaccine 15: 564-570(1997)].

예를 들어, 문헌["Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach" edited by M. Powell and M. Newman, Plenum Press, 1995]의 147쪽에 기술된 SPT 에멀젼 및 동 문헌의 183쪽에 기술된 에멀젼 MF59를 사용하는 것이 가능하다.

또 다른 보강제의 예는 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체 및 말레산 무수물과 알케닐 유도체의 공중합체 중에서 선택되는 화합물이다. 유리한 보강제 화합물은 특히 폴리알콜이나 당의 폴리알케닐 에테르와 가교된 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체이다. 이 화합물들은 카르보머(carbomer)(Phameuropa Vol. 8, No. 2, June 1996)란 용어로 공지되어 있다. 당업자는 또한 하이드록시 기가 적어도 3개, 바람직하게는 8개 이하이고 이 적어도 3개의 하이드록시의 수소 원자가 탄소원자 2개 이상의 불포화 지방족 라디칼로 치환되어 있는, 폴리하이드록시화된 화합물과 가교된 상기 아크릴계 중합체를 기술하는 미국 특허 2,909,462를 참고할 수 있다. 바람직한 라디칼은 탄소원자 2 내지 4개인 것이며, 그 예로는 비닐, 알릴 및 다른 에틸렌계 불포화 기가 있다. 불포화 라디칼은 자체에 다른 치환체, 예컨대 메틸을 포함할 수 있다. 상표명 Carbopol(BF Goodrich, Ohio, USA)로 시판되는 제품이 특히 적당하다. 이것은 알릴 슈크로스 또는 알릴 펜타에리트리톨과 가교되어 있다. 이들 중에서, Carbopol 974P, 934P 및 971P를 예로 들 수 있다. 가장 바람직한 것은 Carbopol의 사용, 특히 Carbopol 971P의 사용이며, 바람직하게는 약 500㎍ 내지 약 5mg/용량의 양, 더욱 더 바람직하게는 약 750㎍ 내지 약 2.5mg/용량의 양, 가장 바람직하게는 약 1mg/용량의 양으로 사용하는 것이다.

또 다른 적당한 보강제는 RIBI 보강제 시스템(Ribi Inc.), 블록 공중합체(CytRx, Atlanta GA), SAF-M(Chiron, Emeryville CA), 모노포스포릴 지질 A, Avridine 지질-아민 보강제, 이.콜라이(재조합제 또는 기타) 유래의 열불안정성 장독소, 콜레라 독소, IMS 1314 또는 뮤라밀 디펩타이드 등을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.

보강제는 바람직하게는 약 100㎍ 내지 약 10mg/용량의 양으로 첨가한다. 더욱 더 바람직하게는 보강제는 약 100㎍ 내지 약 10mg/용량의 양으로 첨가한다. 더욱 더 바람직하게는 보강제는 약 500㎍ 내지 약 5mg/용량의 양으로 첨가한다. 더욱 더 바람직하게는 보강제는 약 750㎍ 내지 약 2.5mg/용량의 양으로 첨가한다. 가장 바람직하게는 보강제는 약 1mg/용량의 양으로 첨가한다.

또한, 조성물은 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 "약제학적으로 허용되는 담체"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 보강제, 안정제, 희석제, 보존제, 항세균제 및 항진균제, 등장제, 흡수지연제 등을 포함한다. 가장 바람직하게는, 여기에 제공된 조성물은 시험관내 배양된 세포의 상청액으로부터 회수된 PCV2 ORF-2 단백질을 포함하고, 여기서 세포는 PCV2 ORF-2 DNA를 함유하여 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 재조합 바이러스 벡터로 감염되었고, 상기 세포 배양물은 바이러스 벡터를 불활성화시키기 위한 약 2 내지 약 8mM의 BEI, 바람직하게는 약 5mM BEI, 및 동등 농도의 중화제, 바람직하게는 최종 농도가 약 2 내지 약 8mM, 바람직하게는 약 5mM인 소듐 티오설페이트 용액으로 처리되었다.

또한 본 발명은 PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 또는 동물 그룹(무리)내에서 평균 증체량을 증가시키기 위한, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키기 위한, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키기 위한, 비강 바이러스 배출을 감소시키기 위한, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키기 위한, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키기 위한 또는 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키기 위한 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이고, 이때, 당해 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI를 포함하며, v) 상기 불활성화제에 의해 매개된 불활성화를 정지시키는 중화제를 포함하고, vi) 전술한 양의 적당한 보강제, 바람직하게는 Carbopol 971을 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물에 관한 것이다.

또 다른 관점에 따르면, 이 면역원성 조성물은 추가로 약제학적으로 허용되는 염, 바람직하게는 인산염을 생리학적으로 허용되는 농도로 포함한다. 이러한 면역원성 조성물의 pH는 약 6.5와 7.5 사이를 의미하는 생리적 pH로 조정되는 것이 바람직하다.

본 발명에 사용된 면역원성 조성물은 또한 1ml 당 i) 전술한 PCV2 ORF-2 단백질 1.6㎍ 이상, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 배큘로바이러스의 적어도 일부, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 약 2 내지 8mM의 BEI, v) BEI와 동등한 양의 소듐 티오설페이트, vi) 약 1mg의 Carbopol 971 및 vii) 생리학적으로 허용되는 농도의 인산염을 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미하고, 이 면역원성 조성물의 pH는 약 6.5 내지 7.5로 조정된다.

면역원성 조성물은 추가로 1종 이상의 다른 면역조절제, 예컨대 인터루킨, 인터페론 또는 다른 사이토카인을 포함할 수도 있다. 또한, 면역원성 조성물은 젠타미신(Gentamicin) 및 머티올레이트(Merthiolate)를 포함할 수도 있다. 본 발명의 상황에서 유용한 보강제 및 첨가제의 양과 농도는 당업자라면 쉽게 결정할 수 있지만, 본 발명은 약 50㎍ 내지 약 2000㎍의 보강제를 함유하는 조성물, 바람직하게는 백신조성물의 1ml 용량당 약 250㎍을 포함하는 조성물을 고찰한다. 또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 약 1㎍/ml 내지 약 60㎍/ml의 항생제, 더욱 바람직하게는 약 30㎍/ml의 항생제를 포함하는 조성물을 의미한다.

본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 또한 i) 바람직하게는 전술한 농도인, 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부, iii) 세포 배양물의 일부, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI, v) 상기 불활성화제에 의해 매개된 불활성화를 정지시키는 중화제, 바람직하게는 BEI와 동등한 양의 소듐 티오설페이트를 포함하고, vi) 전술한 양의 적당한 보강제, 바람직하게는 Carbopol 971, vii) 약제학적으로 허용되는 농도의 식염수 완충액, 바람직하게는 인산염, 및 viii) 항미생물성 활성제를 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 인겔백(Ingelvac®) 써코플렉스(CircoFLEX™)(Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc., St Joseph, MO, USA), 써코백(CircoVac®)(Merial SAS, Lyon, France), 써코벤트(CircoVent)(Intervet Inc., Millsboro, DE, USA) 또는 수백신(Suvaxyn) PCV-2 One Dose®(Fort Dodge Animal Health, Kansas City, KA, USA)를 의미한다. 따라서, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원을 당해 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 이때, PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물은 Ingelvac® CircoFLEX^TM, CircoVac®, CircoVent 및/또는 Suvaxyn PCV-2 One Dose®이고, 바람직하게는 Ingelvac® CircoFLEX^TM이다.

본원에 사용된 용어 "유효량의 PCV2 항원"은 유효량의 PCV2 항원이 투여된 동물에서 면역 반응을 유발하거나 유발할 수 있는 PCV2 항원의 양을 의미하지만 이에 제한되지 않는다.

효과적인 양은 백신의 성분 및 투여 계획에 따라 달라진다. 통상적으로, 불활성화된 바이러스 또는 변형된 생 바이러스 제제가 조합 백신에 사용될 때, 백신의 양은 약 10^2.0 내지 약 10^9.0 TCID₅₀/용량, 바람직하게는 약 10^3.0 내지 약 10^8.0 TCID₅₀/용량, 더욱 바람직하게는 약 10^4.0 내지 약 10^8.0 TCID₅₀/용량을 함유하는 양으로 사용된다. 특히, 변형된 생 PCV2가 백신에 사용될 때, 민감한 동물에게 투여하도록 권장되는 용량은 바람직하게는 약 10^3.0 TCID₅₀ (조직 배양물 감염 용량 50% 종말점)/용량 내지 약 10^6.0 TCID₅₀/용량, 더욱 바람직하게는 약 10^4.0 TCID₅₀/용량 내지 약 10^5.0 TCID₅₀/용량이다. 일반적으로, 항원의 양은 0.2 내지 5000 마이크로그램이고, 10^2.0 내지 10^9.0 TCID₅₀, 바람직하게는 10^3.0 내지 10^6.0 TCID₅₀, 더욱 바람직하게는 10^4.0 내지 10^5.0 TCID₅₀ (정제된 항원이 사용될 때)이다.

서브유닛 백신은 보통 용량당 적어도 0.2㎍ 항원의 항원 내포 수준으로 투여되고, 바람직하게는 약 0.2 내지 약 400㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.3 내지 약 200㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.35 내지 약 100㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.4 내지 약 50㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.45 내지 약 30㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.6 내지 약 16㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.75 내지 약 8㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.0 내지 약 6㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.3 내지 약 3.0㎍/용량으로 투여된다.

모계 유래의 면역성은 PCV2 감염 및 PCV2 감염과 관련된 임상 질환에 대하여 어느 정도의 예방성을 부여하는 것으로 밝혀져 있다. 이러한 예방성은 역가 의존적인 것으로, 역가가 높으면 일반적으로 예방성이고, 역가가 낮으면 예방성이 아닌 것으로 밝혀져 있다(McKeown et al., 2005; Clin. Diagn. Lab. Immunol.; 12: 1347-1351). 이유 돼지에서의 평균 항체 반감기는 19.0일인 것으로 추정되었고, 한 집단에서 PCV2 수동 항체 붕괴의 창은 비교적 광범하다(Opriessnig et al. 2004, J. Swine Health Prod. 12: 186-191). 모계 유래의 항체의 존재는 예측할 수는 없지만 바이러스 감염에 대한 어느 정도의 보호 효과를 부여할 수 있을 뿐만 아니라 면역화의 효능을 손상시키는 것으로 알려져 있다. 놀랍게도 항-PCV2 항체의 존재, 특히 1:1000 이하의 항-PCV2 항체 역가가 PCV2 치료 효능에 양향을 주지 않는 것으로 밝혀졌다.

따라서, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 당해 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 백신접종시에 동물은 항-PCV2 항체를 갖고, 바람직하게는 당해 동물은 백신접종시에 1:100 이하, 바람직하게는 1:100 초과, 더욱 바람직하게는 1:250 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:500 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:640 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:750 초과, 가장 바람직하게는 1:1000 초과의 검출가능한 항-PCV2 항체 역가를 갖는다. 바람직하게, 항-PCV2 항체 역가는 특이적 항-PCV2 면역 분석에서, 바람직하게는 실시예 2에 기재된 분석에서 검출가능하고 정량가능하다.

항-PCV2 항체를 검출 및 정량하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, PCV2 항체의 검출 및 정량은 문헌[Magar et al., 2000, Can.J.Vet Res.: 64: 184-186 또는 Magar et al., 2000, J.Comp.Pathol.; 123: 258-269]에 기술된 간접 면역형광법으로 수행할 수 있다. 항-PCV2 항체를 정량하는 추가 분석법은 문헌[Opriessnig et al., 2006, 37th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians]에도 기술되어 있다. 더욱이, 실시예 2는 당업자가 사용할 수 있는 간접 면역형광법을 기술한다. 논쟁의 여지가 있는 결과인 경우 및 의심의 여지가 있는 모든 질문에서, 본 명세서에서 언급한 항-PCV2 역가는 실시예 2에 기술된 분석법으로 추정될 수 있고 추정되는 값을 의미한다.

따라서, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 어린 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 명세서에 사용된, "어린 동물"이란 용어는 1 내지 22일령의 동물을 의미한다. 바람직하게는, 어린 동물이란 용어는 1 내지 20일령의 동물을 의미한다. 더욱 바람직하게는, 어린 동물이란 용어는 1 내지 15일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 14일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 12일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 10일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 8일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 7일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 6일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 5일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 4일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 3일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 또는 2일령의 동물, 가장 바람직하게는 1일령의 동물을 의미한다.

야생에서 PCV2의 편재성 때문에, 어린 새끼돼지의 대부분은 PCV2에 대한 혈청양성이다. 또 다른 관점에 따르면, 상기 백신접종/치료일에 어린 동물은 검출가능한 항-PCV2 항체 역가가 1:100 이하, 바람직하게는 1:100 이상, 더욱 바람직하게는 1:250 이상, 더욱 더 바람직하게는 1:500 이상, 더욱 더 바람직하게는 1:640 이상, 더욱 더 바람직하게는 1:750 이상, 가장 바람직하게는 1:1000 이상인 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 피내, 기관내 또는 질내로 투여 또는 적용될 수 있다. 이러한 조성물은 바람직하게는 근육내 또는 비내, 가장 바람직하게는 근육내로 투여 또는 적용될 수 있다. 동물 신체의 경우, 전술한 바와 같은 약제학적 조성물은 정맥내를 통해 또는 목표 조직 내로의 직접 주사를 통해 적용하는 것이 유익한 것으로 입증되었다. 전신 적용 시에는, 정맥내, 혈관내, 근육내, 비내, 동맥내, 복강내, 경구 또는 경막내 경로가 바람직하다. 더욱 국소적인 적용은 피하, 피내, 피부내, 심장내, 소엽내, 골수내, 폐내로 또는 치료할 조직(결합조직, 뼈조직, 근육조직, 신경조직, 상피조직)내 또는 부근으로 직접 실시할 수도 있다. 원하는 치료 기간 및 효과에 따라서, 본 발명의 조성물은 예컨대 1일 기준으로 수일 동안, 수주 동안, 수개월 동안 다른 투여량으로 1회 또는 수회, 또한 간헐적으로 투여될 수 있다.

바람직하게, 전술한 면역원성 조성물의 1회 용량은 치료를 필요로 하는 피검체에게 근육내로 투여된다. 추가의 측면에 따라, PCV2 항원 또는 본원에 기재된 바와 같은 임의의 당해 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물은 병에 담겨지거나 용량당 1ml 내지 5ml로, 바람직하게는 용량당 1ml로 투여된다. 따라서, 추가의 측면에 따라, 본 발명은 또한 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 또는 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 위해, 본원에 기재된 바와 같은 PCV-2 항원을 포함하는 1ml 내지 5ml, 바람직하게는 1ml의 면역원성 조성물을 제공하고, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명은 또한 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 그룹(무리)중에 평균 증체량을 증가시키는 방법, 혈청 ml당 10⁴ 내지 10⁶의 게놈 카피수의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 10⁶ 이상의 게놈의 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키는 방법, 비강 바이러스 배출을 감소시키는 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 바이러스혈증의 지속기간을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법에 관한 것이고, 이 모두는 1 내지 5ml, 바람직하게는 1ml의 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 관점에 따르면, 전술한 면역원성 조성물의 적어도 1회 용량의 1회 이상의 추가 투여가 치료를 필요로 하는 피검체에게 제공되고, 여기서 제2 투여 또는 임의의 추가 투여는 1차 투여 또는 모든 이전 투여 후에 적어도 14일이 지난 후 제공한다. 바람직하게는, 면역원성 조성물은 면역 자극제와 함께 투여한다. 이러한 면역 자극제는 적어도 2회 제공하는 것이 바람직하다. 바람직하게는 적어도 3일째, 더욱 바람직하게는 적어도 5일째, 더욱 바람직하게는 적어도 7일째에 면역자극제의 1차와 2차 투여 사이 또는 임의의 추가 투여 사이에 제공한다. 바람직하게는 면역자극제는 본 명세서에 제공된 면역원성 조성물의 1차 투여 후 적어도 10일, 바람직하게는 15일, 더욱 바람직하게는 20일, 더욱 더 바람직하게는 적어도 22일이 지나서 제공되는 것이 좋다. 바람직한 면역자극제는 예컨대 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 바람직하게는 불완전 프로인트 보조제로 유화된 KLH(KLH/ICFA)이다. 하지만, 여기서는 당업자에게 잘 알려진 임의의 다른 면역자극제도 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 사용된 "면역자극제"란 용어는 바람직하게는 특정 병원체에 대한 면역반응과 같이 특정 면역반응을 개시 또는 증가시킴이 없이, 면역반응을 자극할 수 있는 임의의 제제 또는 조성물을 의미한다. 또한, 면역자극제는 적당한 용량으로 투여해야 한다.

본 발명은 또한 동물 또는 동물 그룹(무리)에서 만성 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 또는 동물 그룹(무리)에서 평균 증체량을 증가시키기 위한, 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁴ 내지 10⁶ 인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키기 위한, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 게놈이 10⁶ 이상인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키기 위한, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 비강 바이러스 배출 및 바이러스혈증 지속기간을 감소시키기 위한, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키는 방법을 위한, 및 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키는 방법을 위한 약물의 제조에 있어서, PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물 또는 PCV2 항원의 용도에 관한 것이다. 바람직하게, PCV2 항원은 재조합 항원, 바람직하게 PCV2 ORF-2, 보다 더 바람직하게는 Ingelvac® CircoFLEX^TM이다.

본원에 사용된 "동물"은 돼지(swine), 돼지(pig) 또는 새끼돼지를 의미한다. 따라서, 또 다른 측면에 따라, 본 발명은 돼지에서 무증상적 PCV2 감염을 예방하고 치료하기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물 또는 동물 그룹(무리)에서 평균 증체량을 증가시키기 위한 방법, 혈청 ml당 게놈 카피수가 10⁴ 내지 10⁶ 인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키기 위한 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 혈청 ml당 게놈이 10⁶ 이상인 바이러스 부하량을 갖는 동물의 수를 감소시키기 위한 방법, PCV2로 무증상적으로 감염된 동물에서 비강 바이러스 배출 및 바이러스혈증 지속기간을 감소시키기 위한 방법, 무증상적으로 감염된 무리 중에서 이환율을 감소시키기 위한 방법, 및 무증상적으로 감염된 무리 중에서 치사율을 감소시키기 위한 방법을 제공하고, 이때, 이 모두는 치료학적 유효량의 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 조성물을 이의 투여를 필요로 하는 돼지에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게, PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물은 상기된 것들 중 임의의 하나이고 가장 바람직하게 PCV2 항원은 Ingelvac® CircoFLEX^TM이다.

이하 실시예는 본 발명에 따른 바람직한 재료와 절차를 설명한다. 본 발명의 실시 또는 검사 시에는 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 동등한 모든 방법과 재료가 사용될 수 있지만, 바람직한 방법, 장치 및 재료가 이하에 설명된다. 하지만, 이러한 실시예들은 단지 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 전반적인 범위를 제한하려는 것으로 간주되어서는 안된다.

실시예 1

PCV2 ORF-2 항원의 제조

액체 질소 저장된 1차 SF+ 세포 배양물은 멸균 스피너 플라스크에서 Excell 420 배지(JRH Biosciences, Inc., Lenexa, KS)에 현탁시켜 일정한 교반 하에 증식시켰다. 배양물은 Excell 420 무혈청 배지 25 내지 150ml가 담긴 100ml 내지 250ml 스피너 플라스크에서 증식시켰다. 세포가 1.0 내지 8.0 x 10⁶ 세포/ml의 세포 밀도까지 증식되었을 때, 새로운 용기에 0.5 내지 1.5 x 10⁶ 세포/ml의 접종 밀도로 분할시켰다. 이후 확장 배양물은 스피너 플라스크에서 36리터 규모 이하로 또는 스테인리스 스틸 생물반응기에서 300리터 이하로 25 내지 29℃에서 2 내지 7일 동안 증식시켰다.

접종 후에, 플라스크는 27℃에서 4시간 동안 항온배양했다. 이어서, 각 플라스크에는 PCV2 ORF-2 유전자(서열번호 4)를 함유하는 재조합 배큘로바이러스를 접종했다. PCV2 ORF-2 유전자를 함유하는 재조합 배큘로바이러스는 WO 06/072065에 기술된 바와 같이 작제했다. 배큘로바이러스가 접종된 후, 플라스크는 그 다음 27±2℃에서 7일 동안 항온배양하고, 이 배양 동안 100rpm으로 교반했다. 이 플라스크에는 공기가 흐르도록 통기성 캡을 사용했다.

항온배양 후, 수득되는 상청액을 수거하고, 여과하여 세포 파편을 제거하고 불활성화시켰다. 상청액은 37±2℃로 승온시켜 불활성화시키고 이 상청액에 2원 에틸렌이민(BEI)을 5mM의 최종 농도로 첨가한다. 그 다음, 샘플을 72 내지 96시간 동안 연속해서 교반했다. 임의의 잔류 BEI를 중화시키기 위해 1.0M 소듐티오설페이트 용액을 5mM의 최종 최소 농도로 첨가했다. 불활성화 후, 인산염 완충액과 카르보폴로 완충화된 PCV2 ORF-2를 약 0.5 내지 2.5mg/용량으로 첨가했다. 최종 용량은 약 16㎍의 PCV2 ORF-2 항원을 포함하고 있었다.

실시예 2

항 PCV -2 면역분석법

WO 02/07721에 기술된 PK15(예: ATCC CCL-33) 또는 VIDO R1 세포는 96웰 플레이트에 접종했다(웰당 약 20,000 내지 60,000 세포). 단층이 약 65 내지 85% 융합성일 때 세포를 PCV2 분리물로 감염시켰다. 감염된 세포는 48시간 동안 항온배양했다. 배지는 제거하고 웰은 PBS로 2회 세척했다. 세척 완충액은 제거하고 세포는 저온의 50/50 메탄올/아세톤 고정제(약 100㎕/웰)로 약 -20℃에서 약 15분 동안 처리했다. 고정제를 제거하고, 플레이트를 공기 건조했다. 돼지 혈청 샘플은 PBS에 연속 희석물로 제조하고 플레이트에 첨가한 뒤, 항체가 혈청 샘플에 존재한다면 36.5±1℃에서 약 1시간 동안 결합하도록 항온배양했다. 또한, 항-PCV2 양성 및 음성 대조 샘플(양성 대조 및 음성 대조 샘플)의 연속 희석물도 동시에 항온배양했다. 그 다음, 플레이트를 PBS로 3회 세척했다. PBS는 제거했다. 그 다음, 플레이트는 PBS에 1:100으로 희석한 시판 염소 항-돼지 FITC 접합체로 염색하고, 36.5±1℃에서 약 1시간 동안 항온배양했고, 이로써 감염된 세포에 결합된 항체를 검출했다. 항온배양이 완료된 후, 항온배양기에서 마이크로플레이트를 꺼내고, 접합체를 분리한 후, 플레이트를 PBS로 2회 세척했다. 플레이트를 UV 검경으로 판독하고, 각 웰을 양성 또는 음성으로 기록했다. 양성 대조 샘플과 음성 대조 샘플을 검사 시스템의 모니터에 사용했다. 대조군이 예상 범위 이내이면, 검사 결과는 검사 방법 파라미터와 관련하여 용인되는 결과이다. 혈청 항체 역가는 특이적인 IFA 반응성을 최고 희석율과 희석물당 양성 웰 수를 사용하여 계산했고, 또는 적당한 리드-뮌히(Reed-Muench) 식을 이용하여 50% 종말점을 계산했다.

실시예 3

만성 PCV2 감염 치료에서 PCV2 ORF -2 ( Ingelvac ® CircoFLEX ^TM )의 효능

연구 목적 및 디자인

5개의 연속 주 그룹(각각은 대략 300 마리의 동물을 포함한다) 기원의 통상의 새끼돼지를 본 연구에 포함시켰다. 동물들을 초기 체중과 한배새끼 할당에 대해 균등하게 2개의 처리 그룹으로 분배하였다. 이유 일자에 한개 그룹(n=775)을 최소 방출 항원 함량을 함유하는 Ingelvac® CircoFLEX로 백신접종하고 새깨돼지(n=773)의 다른 그룹에는 대조군 생성물(생리식염수)를 투여하였다. 백신 및 대조군 생성물(CP)은 새깨돼지가 대략 21일령인 경우 우측 경부 영역에 근육내로 1회 1ml의 용량으로 투여하였다.

모든 연구 동물의 개별 생체중을 수집하였다. PCV2 관련 증상에 대한 임상적 관찰을 수행하고 정상적인 일반 건강으로부터의 이탈을 개별 동물을 기준으로 기록하였다.

혈청 샘플 및 비강 배출은 PCV2의 존재에 대해 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)으로 정량적으로 분석하였다. 또한, 백신접종시에 모든 연구 동물로부터 및 미리 선별된 연구 동물의 동일 5%로부터 PCV2 항체 역가는 실시예 2에 기재된 바와 같이 간접 형광 항체 역가(IFAT)로 분석하였다.

연구 부위의 만성(무증상적) 상태의 확인:

농장에서 PCVD의 제1 진단은 연구 수행하기 4개월 전에 수행하였다. 14.1%의 치사율 및 살찌우는 설비에서 발육불량 동물의 존재를 확인하였다. 성장 수행능은 다소 낮았다(644 g/일). PCV2 감염의 존재는 조직학적 검사로 확인하였다. 폐 샘플은 간질성 폐렴을 보여주었고 PCV-2는 병소 중에서 IHC로 확인하였다.

도 1의 경우, 살찌우는데 있어서 치사율은 14.1%에서 8.1%로 상당히 감소하였고 이는 급성 PCVD 감염이 무증상적 감염으로 전환되었음을 시사한다.

연구 동물의 무증상적 감염의 확인

농장에서 무증상적 감염으로의 전환은 연구 동안에 수득된 결과로 확인하였다. 당해 연구 동물은 우세한 무증상적 바이러스 부하량, 낮은 치사율(10% 이하) 및 낮은 이환율(10% 이하)을 특징으로 한다.

결과

바이러스혈증

바이러스혈증 동물의 최고 비율은 연구 14주 시점에서 관찰되었고 CP-처리된 그룹에서 바이러스혈증 동물은 55.5%이고 백신접종된 그룹에서 바이러스혈증 동물은 대략 10%이다. 도 4 및 5에 나타낸 바와 같이, 처리 그룹 둘다에서 대다수의 동물은 단지 무증상적 바이러스 부하량(ml당 10⁴-10⁶ 게놈 등가물로서 정의됨)을 가졌다. 임상적 관련 PCV2 부하량(ml당 10⁶ 초과의 게놈 등가물)을 갖는 동물의 최고 비율은 CP-처리된 동물에서 2.52%였고 백신접종된 동물에서는 0.87%였다.

치사율

바이러스혈증 개시 전 후 치사율은 다소 낮았다. 바이러스혈증 개시 전에, 치사율은 백신접종된 동물에서 1.55% 였고 CP-처리된 동물에서는 2.19%였다. 바이러스혈증 개시 후 치사율의 증가는 CP-처리된 동물에 관찰된(1.55%에서 3.02%로) 반면 백신접종된 동물에서 치사율은 바이러스혈증 개시 전과 비교하여 약간 감소하였다(2.19%에서 1.98%로). 바이러스혈증 개시 전 후에 2개 처리 그룹간의 치사율의 차이는 통계학적 유의성에 도달하지 않았다.

임상적 징후

바이러스혈증 개시 전에 단지 소수의 임상적 징후가 2개 처리 그룹에서 검출되었고 분석된 파라미터 각각에 대한 발병률은 1% 이하였다. 바이러스혈증의 개시는 PRRSV와 마이코플라스마 하이오뉴모니애(Mycoplasma hyopneumoniae )의 동시 감염을 수반하였다. 그러나, PCV2 또는 기타 다른 동시 감염성 병원체도 심각한 임상적 징후를 유발하지 않았다. 따라서, 기침 및/또는 호흡곤란과 같은 호흡 증상을 갖는 동물의 비율은 CP-처리된 그룹에서 단지 3.9% 및 0.7%였고 백신접종된 그룹에서는 3.0% 및 0.4%였다. 기타 임상적 발견 빈도수는 항상 1% 이하였고 처리 그룹간에 차이가 없었다.

발육불량 동물의 빈도수

'발육불량 동물'의 빈도수의 유의적 차이는 백신접종된 그룹과 위약 처리된 그룹간에 각각의 임의의 체중 측정 시점에서 관찰할 수 없었다. PCV2 바이러스혈증의 완전한 개시 후, '발육불량 동물'의 빈도수는 일반적으로 2개의 처리 그룹에서 낮았다 (3.3-4.7%).

성장 수행능에 대한 무증상적 감염의 영향

연구 17주 때까지의 증체량은 CP-처리된 그룹에서 보다 백신접종된 그룹에서 2.36kg 더 높았고 연구 19주때까지는 2.39kg 더 높았다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 체중 차이는 바이러스혈증 개시 시점(연구 12주)에서 약간 상승하기 시작했다. 연구 17주째에, 당해 차이는 이미 2.36kg에 달하였다. 보다 높은 증체량으로 인해, 이유에서 도살때까지의 평균 시간은 CP-처리된 동물에서 보다는 백신접종된 그룹에서 1.9일 더 짧았다.

혈액에서 바이러스혈증의 지속기간

2개 처리 그룹에서 바이러스혈증의 전체 평균 및 중간 지속기간을 비교하는 경우, 바이러스혈증의 상당히 더 오랜(p = 0.0003) 지속기간이 CP-처리된 동물에서 검출되었다. IVP 그룹은 5.8일의 평균 지속기간을 가졌고 CP 그룹은 21.8일의 평균 지속기간을 나타냈다. 이것은 IVP 그룹에서 바이러스혈증 지속기간을 73%까지 감소시킨 것에 상응한다.

결론

당해 연구는 연구 수행 직전에 무증상적 감염으로 급성에서 만성 상태로 전환된 농장에서 수행하였다. 연구 동안에 연구 동물의 바이러스 부하량은 당해 추정을 확인시켜 주었다. 매우 소수의 연구 동물(<2,19 %)은 10⁶/ml의 게놈 카피수의 "임상적 컷-오프" 초과의 혈청 중 바이러스 부하량을 가졌다.

당해 백신접종은 백신접종된 그룹에서 감염된 동물의 %를 상당히 저하시키는데 성공하였다. 따라서, 백신접종은 비감염된 동물(백신접종된 그룹)과 무증상적으로 감염된 동물(위약 그룹)의 비교를 가능하게 하였다. 백신접종된 동물은 무증상적으로 감염된 동물보다 우수한 성장 수행능을 입증하였다. 연구 17주째에 당해 차이는 이미 2.36kg에 도달하였다. 백신접종된 동물은 백신접종되지 않은 그룹과 비교하여 바이러스혈증의 지속기간이 16일 이상 더 짧았다.

감염된 동물이 명백히 건강한 상태로 있다 하더라도, PCV2 무증상적 감염은 성장 수행능에 대해 관련된 음성적 영향을 줄 수 있는 것으로 결론지을 수 있다.

<110> Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. <120> Prevention and treatment of sub-clinical PCVD <130> P01-2179 <150> EP 07102250.3 <151> 2007-02-13 <160> 11 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This is a modified Kozak's sequence. <400> 1 ccgccatg 8 <210> 2 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This is a recombinant Eco R1 sequence. <400> 2 gaattc 6 <210> 3 <211> 713 <212> DNA <213> Porcine circovirus <400> 3 cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga 180 aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713 <210> 4 <211> 713 <212> DNA <213> Porcine circovirus <400> 4 ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg 180 ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg tggacatgat gagatttaat attgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttga accctaagaa ttc 713 <210> 5 <211> 233 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 5 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 1 5 10 15 Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30 Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45 Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60 Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80 Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110 Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125 Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175 Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190 Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205 Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230 <210> 6 <211> 233 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 6 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 1 5 10 15 Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30 Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45 Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60 Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80 Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110 Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125 Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175 Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190 Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205 Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro 225 230 <210> 7 <211> 756 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This sequence is from porcine circovirus type 2, open reading frame 2, together with a portion from the pGEM T-easy vector. <400> 7 gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga 60 caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc 120 cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc 180 ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240 agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300 tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360 cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420 gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480 cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540 tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600 gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660 atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720 ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756 <210> 8 <211> 10387 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This is the porcine circovirus type 2, ORF-2construct, which includes baculovirus and pGEM T-easy coding sequences. <400> 8 aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60 gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120 ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180 gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240 ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300 gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360 gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420 ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480 cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540 aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600 tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660 tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720 gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780 ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840 cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900 ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960 tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020 tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080 actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140 tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200 gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260 gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320 cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380 cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440 tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500 ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560 cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620 tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680 tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740 ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800 tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860 atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920 cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980 cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040 ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100 cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160 tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220 atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280 gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340 aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400 acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460 atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520 tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580 atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640 tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700 agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760 aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820 ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880 aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940 aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000 aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060 aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120 gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180 atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240 ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300 aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360 catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420 aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480 tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa 3540 aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600 tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660 tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720 aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780 acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt 3840 ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900 ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960 atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020 gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080 aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140 cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200 gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260 cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320 ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380 tgagatttaa tattgacgac 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gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280 ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340 atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400 gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460 ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520 atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580 aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640 tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700 cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 5760 tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820 gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880 tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940 tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000 ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060 attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120 gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180 acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240 ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300 ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360 ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420 accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 6480 tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540 gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600 ggcggcggtg ccgccggtat aatttgttct ggtttagttt gttcgcgcac gattgtgggc 6660 accggcgcag gcgccgctgg ctgcacaacg gaaggtcgtc tgcttcgagg cagcgcttgg 6720 ggtggtggca attcaatatt ataattggaa tacaaatcgt aaaaatctgc tataagcatt 6780 gtaatttcgc tatcgtttac cgtgccgata tttaacaacc gctcaatgta agcaattgta 6840 ttgtaaagag attgtctcaa gctcgccgca cgccgataac aagccttttc atttttacta 6900 cagcattgta gtggcgagac acttcgctgt cgtcgacgta catgtatgct ttgttgtcaa 6960 aaacgtcgtt ggcaagcttt aaaatattta aaagaacatc tctgttcagc accactgtgt 7020 tgtcgtaaat gttgtttttg ataatttgcg cttccgcagt atcgacacgt tcaaaaaatt 7080 gatgcgcatc aattttgttg ttcctattat tgaataaata agattgtaca gattcatatc 7140 tacgattcgt catggccacc acaaatgcta cgctgcaaac gctggtacaa ttttacgaaa 7200 actgcaaaaa cgtcaaaact cggtataaaa taatcaacgg gcgctttggc aaaatatcta 7260 ttttatcgca caagcccact agcaaattgt atttgcagaa aacaatttcg gcgcacaatt 7320 ttaacgctga cgaaataaaa gttcaccagt taatgagcga ccacccaaat tttataaaaa 7380 tctattttaa tcacggttcc atcaacaacc aagtgatcgt gatggactac attgactgtc 7440 ccgatttatt tgaaacacta caaattaaag gcgagctttc gtaccaactt gttagcaata 7500 ttattagaca gctgtgtgaa gcgctcaacg atttgcacaa gcacaatttc atacacaacg 7560 acataaaact cgaaaatgtc ttatatttcg aagcacttga tcgcgtgtat gtttgcgatt 7620 acggattgtg caaacacgaa aactcactta gcgtgcacga cggcacgttg gagtatttta 7680 gtccggaaaa aattcgacac acaactatgc acgtttcgtt tgactggtac gcggcgtgtt 7740 aacatacaag ttgctaacgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 7800 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 7860 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 7920 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 7980 tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 8040 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 8100 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 8160 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 8220 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 8280 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 8340 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 8400 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 8460 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 8520 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 8580 gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 8640 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 8700 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 8760 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 8820 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 8880 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 8940 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 9000 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat 9060 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg 9120 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg 9180 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat 9240 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc 9300 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt 9360 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc 9420 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga 9480 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc 9540 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa 9600 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta 9660 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg 9720 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg 9780 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat 9840 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt 9900 tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa 9960 aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct 10020 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag 10080 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc 10140 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg 10200 cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga 10260 agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc 10320 aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc 10380 cagtgcc 10387 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 9 Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser 1 5 10 15 His Leu Gly Gln 20 <210> 10 <211> 19 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 10 Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr 1 5 10 15 Thr Leu Ser <210> 11 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> This is an amino acid sequence for porcine circovirus type 2, open reading frame 2. <400> 11 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 1 5 10 15 Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30 Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45 Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr 50 55 60 Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80 Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Lys Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110 Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125 Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175 Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190 Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp 195 200 205 Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

Claims (26)

1. 돼지 써코바이러스 2형 (PCV2: Porcine circovirus type 2)의 ORF2 단백질을 포함하는, 돼지에서 무증상적(sub-clinical) PCV2 감염을 치료하기 위한 면역원성 조성물로서, 상기 돼지에게 투여되는 치료학적 유효량의 상기 조성물이 성장 장애를 감소시키거나, 바이러스 비강 배출 및/또는 바이러스 혈증의 지속기간을 감소시키고, 상기 무증상적 PCV2 감염이, 무증상적으로 감염된 돼지에서의 바이러스 부하량이 혈청 ml 당 PCV2의 10⁶ 미만의 게놈 카피수이고 상기 돼지의 혈청 1ml 또는 조직 1mg의 샘플이 검출 가능한 양의 PCV2 게놈 등가물을 포함함을 특징으로 하는, 면역원성 조성물.
2. 제1항에 있어서, 무증상적 PCV2 감염으로 인한 상기 성장 장애가 감소되는, 면역원성 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, PCV2로 무증상적으로 감염된 돼지에서 상기 바이러스 비강 배출 및/또는 상기 바이러스 혈증의 지속기간이 감소되는, 면역원성 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, PCV2의 상기 ORF2 단백질이 PCV2의 재조합 배큘로바이러스 발현된 ORF2 단백질인, 면역원성 조성물.
5. 돼지 써코바이러스 2형 (PCV2: Porcine circovirus type 2)의 ORF2 단백질을 포함하는 면역원성 조성물을 돼지에게 투여함을 포함하는, 돼지에서 무증상적 PCV2 감염을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 무증상적 PCV2 감염이, 무증상적으로 감염된 돼지에서의 바이러스 부하량이 혈청 ml 당 PCV2의 10⁶ 미만의 게놈 카피수이고 상기 돼지의 혈청 1ml 또는 조직 1mg의 샘플이 검출 가능한 양의 PCV2 게놈 등가물을 포함함을 특징으로 하고, 상기 돼지에게 투여되는 치료학적 유효량의 상기 면역원성 조성물이 성장 장애를 감소시키거나, 바이러스 비강 배출 및/또는 바이러스 혈증의 지속기간을 감소시키는, 방법.
6. 제5항에 있어서, 무증상적 PCV2 감염으로 인한 상기 성장 장애가 감소되는,방법.
7. 제5항 또는 제6항에 있어서, PCV2로 무증상적으로 감염된 돼지에서 상기 바이러스 비강 배출 및/또는 상기 바이러스 혈증의 지속기간이 감소되는, 방법.
8. 제5항 또는 제6항에 있어서, PCV2의 상기 ORF2 단백질이 PCV2의 재조합 배큘로바이러스 발현된 ORF2 단백질인, 방법.
9. 제3항에 있어서, PCV2의 ORF2 단백질이 PCV2의 재조합 배큘로바이러스 발현된 ORF2 단백질인, 면역원성 조성물.
10. 제7항에 있어서, PCV2의 ORF2 단백질이 PCV2의 재조합 배큘로바이러스 발현된 ORF2 단백질인, 방법.
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